Herba Cistanche سے Phenylethanol Glycosides Hypoxic Tumor Microenvironment کو بہتر بناتے ہیں اور HIF-1 سگنلنگ پاتھ وے کے ذریعے آکسالیپلاٹن کے اثرات کو بڑھاتے ہیں۔

رابطہ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ای میل:audrey.hu@wecistanche.com

لائمی وین، جنپنگ ہو، جیاوی ژانگ اور جیانہوا یانگ

خلاصہ

جگر کا کینسر مہلک ٹیومر کی سب سے عام قسموں میں سے ایک ہے اور اس کی خصوصیت زیادہ مہلک پن، تیزی سے بڑھنا، زیادہ بیماری اور اموات ہوتی ہے۔ Oxaliplatin (OXA) کو قابل برداشت زہریلا کے ساتھ اعلی درجے کے جگر کے کینسر کے خلاف نمایاں کارکردگی کی اطلاع دی گئی ہے۔ ٹھوس ٹیومر میں، ہائپوکسک مائیکرو ماحولیات اپیتھیلیل-میسینچیمل ٹرانزیشن (EMT) کو فروغ دیتا ہے، جو جگر کے کینسر کی دوائیوں کے خلاف مزاحمت کو پلاٹینم کی دوائیوں تک پہنچا سکتا ہے۔ ہرباCistanche (Cistanche tubulosa) روایتی چینی ادویات میں کثرت سے استعمال ہوتا رہا ہے اور ہربا سے فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈزCistanche(CPhGs) اہم فعال اجزاء ہیں۔ موجودہ مطالعہ کا مقصد CPhGs کے قابل عملیت، apoptosis، ہجرت اور جگر کے کینسر کے خلیوں کے حملے پر اثرات کی تحقیقات کرنا ہے۔ HepG2 جگر کے کینسر کے خلیوں کو کنٹرول، DMSO، CoCl2، OXA، OXA پلس CoCl2 اور CPhGs کے علاوہ OXA پلس CoCl2 گروپس میں تقسیم کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، ہائپوکسیا-انڈیکیبل فیکٹر 1 (HIF-1)، lysyl oxidase-like 2 (LOXL2)، اور EMT سے متعلقہ جینز، اور پروٹین کے اظہار کی سطح کا تعین کرنے کے لیے ریورس ٹرانسکرپشن-مقداراتی PCR اور ویسٹرن بلاٹ تجزیہ کیا گیا۔ ‑کیڈیرن اور ٹوئسٹ)، جگر کے کینسر پر CPhGs کے اثرات کی تحقیقات کے لیے۔ نتائج نے ظاہر کیا کہ CPhGs جگر کے کینسر پر OXA کے اثرات کو بڑھا سکتے ہیں، اور جگر کے کینسر کے خلیات کی منتقلی، حملے اور apoptotic شرح کو روک سکتے ہیں۔ مزید برآں، CPhGs کے علاج نے مؤثر طریقے سے HIF-1، LOXL2، اور Twist کی کمی کو کم کیا، اور E-cadherin کو اپ گریجولیشن کیا۔ موجودہ نتائج نے اشارہ کیا کہ CPhGs نے OXA کی حساسیت میں نمایاں اضافہ اور جگر میں ہائپوکسیا سے متاثرہ EMT کو دبانے کا باعث بنا۔

cistanche فائدہ: مخالفجگر کا کینسر

تعارف

Liver cancer is a malignant tumor that usually involves the digestive system, and consists of primary and secondary types. Primary liver cancer is divided into hepatocellular carcinoma and intrahepatic cholangiocarcinoma (1,2). Notably, liver cancer is associated with a high incidence and mortality rate worldwide (3). According to the World Health Organization, it is predicted that there will be >1،000،000 2030 تک جگر کے کینسر سے ہونے والی اموات، اور نئے تصدیق شدہ کیسز میں سے، سرزمین چین میں ان کی شرح 46.6 فیصد ہوگی۔

Oxaliplatin (OXA) کو طبی ترتیبات میں قابل برداشت زہریلا کے ساتھ جگر کے کینسر کی نشوونما پر روکنے والے اثرات کے بارے میں بتایا گیا ہے۔ اس کے باوجود، پلاٹینم پر مبنی دوائی تھراپی کی مجموعی کارکردگی میں ٹیومر سیل مزاحمت (4) کی وجہ سے رکاوٹ ہے۔ یہ اچھی طرح سے تسلیم کیا جاتا ہے کہ جگر کا کینسر دیگر اقسام کے کینسر کے مقابلے کیموتھراپی کے لیے کم حساسیت کا مظاہرہ کرتا ہے۔ جگر کے کینسر کی ملٹی ڈرگ مزاحمت نے متعدد علاج کے ایجنٹوں (5) کے خلاف اس کی مزاحمت میں اہم کردار ادا کیا ہے۔ ایک پچھلی تحقیق میں، Xie اور Zhong (6) نے رپورٹ کیا کہ HepG2 خلیات نے ہائپوکسک حالات میں ایڈریامائسن، 5‑فلوروراسل، اور سسپلٹین کے لیے کمزور حساسیت کا مظاہرہ کیا۔ اس حقیقت کے باوجود کہ پلاٹینم پر مبنی کیموتھراپی ایجنٹ کینسر کے علاج کے اہم اختیارات ہیں، مریضوں میں ان ادویات کے خلاف مزاحمت موجود ہے۔ مزید برآں، جگر کے کینسر کے مریضوں کی تشخیص ناقص رہتی ہے (7,8)۔ آج تک، منشیات کے خلاف مزاحمت کی تحقیقات اور جگر کے کینسر کے مریضوں میں منشیات کی حساسیت کو بہتر بنانے کے لیے وسیع پیمانے پر کوششیں کی گئی ہیں۔

ہائپوکسک حالات کے تحت، کینسر کے خلیوں میں ریواسکولرائزیشن واقع ہوتی ہے، جو اپیٹیلیل-میسینچیمل ٹرانزیشن (EMT) اور ویسکولر مِمکری (VM) کا باعث بن سکتی ہے۔ EMT اور VM بعد میں یلغار اور دور میٹاسٹیسیس کو فروغ دے سکتے ہیں۔ مزید برآں، EMT کے بارے میں قیاس کیا گیا ہے کہ وہ کینسر کے بڑھنے کے لیے محرک قوت کا کردار ادا کرے گا (9)۔ اس کے علاوہ، ہائپوکسیا سے متاثر ہونے والے عوامل (HIFs) نیووسل کی تشکیل، توانائی کے تحول، سیلولر پھیلاؤ، حملے، اور میٹاسٹیسیس (10) میں ملوث ہیں۔

Lysyl oxidase (LOX) ‑like 2 (LOXL2) پروٹین LOX خاندان کا ایک رکن ہے اور اس کا قریبی تعلق کولیجن اور elastin کے covalent cross-linking سے ہے، جس کے نتیجے میں fibrosis ہو سکتا ہے اور یہ ایکسٹرا سیلولر میٹرکس کی سالمیت کے لیے اہم ہے۔ 11)۔ پچھلے مطالعہ میں، LOXL2 کو کینسر کے خلیات کے میٹاسٹیسیس سے قریبی تعلق سمجھا جاتا تھا (12). مزید برآں، LOXL2 کو متعدد قسم کے مہلک کینسر کے روگجنن اور بڑھوتری کو ماڈیول کرنے کے لیے دکھایا گیا ہے جو ماورائے اور انٹرا سیلولر راستوں کے ذریعے ہوتے ہیں، جو کہ خراب تشخیص (13,14) کی تشخیص کے لیے اہم اشارے تھے۔Herba Cistancheایک ٹانک جڑی بوٹی ہے جو عام طور پر صحرائی علاقوں میں تقسیم کی جاتی ہے، جو روایتی چینی ادویات میں اکثر استعمال ہوتی رہی ہے (15,16)۔Cistanche tubulosa(C. tubulosa)ایک قدرتی جڑی بوٹیوں کی دوا ہے جو عام طور پر سنکیانگ خود مختار علاقے میں لگائی جاتی ہے۔ Herba Cistanche (CPhGs) سے phenylethanoid glycosides Herba Cistanche کے اہم فعال اجزاء میں سے ایک کے طور پر کام کرتے ہیں۔ پہلے، Hu et al (17) نے اشارہ کیا کہ CPhGs H22 ٹیومر والے چوہوں میں جگر کی چوٹ کو کم کر سکتا ہے اور کینسر کے خلیوں کی نشوونما کو روک سکتا ہے۔ یہ تجویز کیا گیا تھا کہ بنیادی طریقہ کار سیرم - فیٹوپروٹین میں کمی سے متعلق ہو سکتا ہے اور چوہوں میں قوت مدافعت کو بڑھا سکتا ہے۔

موجودہ مطالعہ میں، CoCl2 کا استعمال کرتے ہوئے HepG2 جگر کے کینسر کے خلیوں کا ایک ہائپوکسک ماڈل تیار کیا گیا تھا۔ اس بنیاد پر، موجودہ مطالعہ کا مقصد ہائپوکسک حالات کے تحت CPhGs کی موجودگی میں کینسر کے خلیوں کے پھیلاؤ، اپوپٹوسس، ہجرت اور کینسر کے خلیات کے حملے پر OXA کے اثرات کی تحقیقات کرنا ہے۔ اس کے علاوہ، HIF-1، LOXL2، E-cadherin، اور Twist کے mRNA اور پروٹین کے اظہار کی سطحوں کا پتہ چلا۔ مزید برآں، جگر کے کینسر کے روگجنن پر CPhGs کے اثرات کے عین مطابق میکانزم کی چھان بین کی گئی۔

cistanche extract کا فائدہ: جگر کے کینسر کا علاج

مواد اور طریقے

سیل لائن. جگر کے کینسر کی سیل لائن HepG2، جیسا کہ STR طریقہ استعمال کرتے ہوئے شناخت کیا گیا ہے، کلینیکل ریسرچ انسٹی ٹیوشن، سنکیانگ میڈیکل یونیورسٹی (Urumqi، China) کے پہلے منسلک ہسپتال نے فراہم کیا تھا۔ خلیوں کو ہائی-گلوکوز DMEM (HyClone؛ Cytiva) میں کلچر کیا گیا تھا جس میں 10 فیصد فیٹل بوائین سیرم (FBS؛ Hyclone؛ Cytiva) 37˚C پر ایک انکیوبیٹر میں 5 فیصد CO2 ہوتا ہے۔

Preparation of CPhGs. C. tubulosa extraction (CPhGs) was obtained from Hetian Dichen Biotech Co., Ltd.. The content of CPhGs was >80 فیصد، جس میں ایکناکوسائیڈ اور ورباسکوز کا مواد بالترتیب 44.5 اور 16.1 فیصد تھا۔ C. tubulosa (Schrenk) Wight کے تنوں کو اکتوبر 2016 میں سنکیانگ، چین سے اکٹھا کیا گیا تھا۔ اس پلانٹ کی شناخت ڈاکٹر جنپنگ ہو نے کی تھی۔ یہ تمام واؤچر نمونے (نمبر 201610) پلانٹ ہربیریم، اسکول آف فارمیسی، سنکیانگ میڈیکل یونیورسٹی، سنکیانگ، چین میں جمع کرائے گئے ہیں۔

تجرباتی نمونہ. HepG2 خلیات (5x104/ml) کا علاج CPhGs (5, 25, 50, 100, 200, اور 500 µg/ml) کے مختلف ارتکاز کے ساتھ 48 گھنٹے کے لیے 37˚C پر کیا گیا (بیائی کے بعد 24 گھنٹے) CPhGs‑L/M/H خوراک کی اسکریننگ کے لیے۔ HepG2 خلیات (5x104/ml) کو مندرجہ ذیل گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا: i) کنٹرول گروپ، ہائی گلوکوز DMEM میں مہذب؛ ii) DMSO گروپ، 0.1 فیصد DMSO (v/v) میں مہذب؛ iii) CoCl2 گروپ (ہائپوکسیا ماڈل گروپ)، 100 µM CoCl2 پر مشتمل سیرم سے پاک DMEM میں ثقافت؛ iv) OXA

گروپ (مثبت کنٹرول گروپ)، 5 µM OXA (Beijing Solar Science & Technology Co., Ltd.) میں مہذب؛ v) OXA پلس CoCl2 گروپ، 100 µM CoCl2 کے ساتھ مل کر 5 µM OXA میں مہذب؛ vi

سیل وابستگی پرکھ۔ سیل کی قابل عملیت کا تعین سیل کاؤنٹنگ کٹ-8 (CCK-8) پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے مینوفیکچرر کی ہدایات (بیجنگ سولر سائنس اینڈ ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ) کے مطابق کیا گیا تھا اور جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے (18)۔ سیل (20x103 سیل/کنویں) کو 96‑کنویں پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، بیج بونے کے بعد ~ 24 گھنٹے، ہر گروپ میں علاج کی شرائط کے مطابق 48 گھنٹے تک خلیوں کا علاج کیا گیا۔ اس کے بعد میڈیم کو 100 µl ہائی-گلوکوز DMEM سے تبدیل کیا گیا، اس کے بعد 10 µl CCK-8 ریجنٹ کا اضافہ کیا گیا۔ خلیوں کو 37˚C پر 1 گھنٹہ کے لئے انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ آپٹیکل کثافت کو 450 nm پر ملٹی ڈیٹیکشن مائکروپلیٹ ریڈر (تھرمو فشر سائنٹیفک، انکارپوریشن) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ ہر حالت کے لیے چھ نقلیں تیار کی گئیں۔

اپوپٹوٹک شرح کا تعین۔ اپوپٹوٹک ریٹ کا تعین ایک Annexin V/PI اپوپٹوٹک ڈیٹیکشن کٹ (بیجنگ سولر سائنس اینڈ ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ HepG2 خلیات (5x105) کو 5 فیصد CO2 میں 37˚C پر 6‑کنویں کی پلیٹوں میں ٹیکہ لگایا گیا تھا۔ اس کے بعد، ~ 24 گھنٹے علاج کے بعد، خلیوں کو 4 گھنٹے کے لیے سیرم فری DMEM میں کلچر کیا گیا۔ اس کے بعد خلیات کو 0.25 فیصد ٹرپسنائزڈ (گبکو؛ تھرمو فشر سائنٹیفک، انکارپوریٹڈ) کا استعمال کرتے ہوئے ہضم کیا گیا، جس کے بعد پری ٹھنڈا پی بی ایس کے ساتھ کم از کم تین واش کیے گئے۔ 4˚C پر 5 منٹ کے لیے 167.7 xg پر سینٹرفیوگریشن پر، خلیات کو 1X بائنڈنگ بفر کے ساتھ دوبارہ معطل کیا گیا اور ارتکاز کو 1~5x106/ml میں ایڈجسٹ کیا گیا، اور پھر 5 µl Annexin V‑FITC اور 5 µl5 منٹ کے لیے داغ دیا گیا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر. اس کے بعد خلیات BD LSRFortessa فلو سائٹو میٹر (BD بایوسینسز) اور FlowJo کا استعمال کرتے ہوئے فلو سائٹومیٹری سے گزرے۔

10.6.2 سافٹ ویئر (Tree Star, Inc.)

زخم کی شفا یابی پرکھ. سیل کی منتقلی پر CPhGs کے روکنے والے اثرات کی جانچ زخم کی شفا یابی پرکھ (19) کے ذریعہ کی گئی۔ 100 فیصد confluent monolayer حاصل کرنے تک خلیات کو 6‑کنویں پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا۔ اس کے بعد، خلیوں کو 200‑µl پائپیٹ ٹپ کا استعمال کرتے ہوئے زخمی کیا گیا، پی بی ایس سے دھویا گیا، اور سیرم فری میڈیم میں علاج کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ منشیات کے علاج کے بعد، زخم کی شفا یابی کی رفتار بالترتیب 0، 12، 24 اور 48 گھنٹے پر ناپی گئی۔ x10 کی میگنیفیکیشن کے تحت فلوروسینٹ مائکروسکوپ (Nikon Ti‑S، Japan) کا استعمال کرتے ہوئے زخم کی تصاویر حاصل کی گئیں۔ زخم کی بندش کو ہر دور میں زخم کے فاصلے سے ماپا جاتا تھا اور 0 h پر ابتدائی زخم کے فاصلے کے فیصد کے طور پر ظاہر کیا جاتا تھا۔

Transwell assays. سیل یلغار کا اندازہ Transwell assays کے ذریعے کیا گیا۔ سیلز (1x105 سیل/ml) کو FBS کے بغیر 200 µl ہائی-گلوکوز DMEM میں معطل کر دیا گیا تھا۔ اس کے بعد خلیوں کو پولی تھیلین ٹیریفتھلیٹ فلٹر جھلی (تاکنا سائز، 8.0 µm) سے ڈھکے میٹریجل لیپت اوپری کنوؤں پر سیڈ کیا گیا تھا۔ نچلے چیمبر میں کل 500 μl ہائی-گلوکوز DMEM جس میں 10 فیصد FBS رکھا گیا تھا۔ 37˚C پر 48 گھنٹے کے بعد فلٹر کی اوپری سطح پر موجود خلیوں کو ہٹانے کے لیے روئی کے جھاڑیوں کا استعمال کیا گیا۔ جھلی کے ذریعے حملہ کرنے والے خلیوں کو 30 منٹ کے لئے 4 فیصد پیرافارمیلڈہائڈ کے ساتھ طے کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، خلیوں کو کمرے کے درجہ حرارت پر 15 منٹ تک 0.1 فیصد کرسٹل وایلیٹ سے داغ دیا گیا۔ حملہ آور خلیوں کا مشاہدہ فلوروسینٹ مائیکروسکوپ (Nikon Ti‑S) کے تحت x100 کے اضافہ پر کیا گیا۔

ریورس ٹرانسکرپشن - مقداری PCR (RT-qPCR)۔ ٹوٹل RNA HepG2 خلیات سے TRIzol® reagent (Invitrogen؛ Thermo Fisher Scientific, Inc.) کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا اور مینوفیکچرر کے پروٹوکول کے مطابق PrimeScript RT ریجنٹ کٹ (Takara Bio, Inc.) کا استعمال کرتے ہوئے cDNA کی ترکیب کی گئی تھی۔ qPCR کو مینوفیکچرر کے پروٹوکول کے مطابق TB green™ Premix Ex Taq™ (Takara Bio, Inc.) کا استعمال کرتے ہوئے 7500 ریئل ٹائم پی سی آر سسٹم (اپلائیڈ بایو سسٹم؛ تھرمو فشر سائنٹیفک، انکارپوریشن) پر انجام دیا گیا۔ کیو پی سی آر کے لیے استعمال ہونے والے پرائمر ٹیبل I میں درج ہیں۔ پی سی آر کے حالات 30 سیکنڈ کے لیے 95˚C پر ڈینیچریشن پر مشتمل ہیں، اس کے بعد 5 سیکنڈ کے لیے 95˚C پر ڈینیچریشن کے 40 چکر اور 30 ​​سیکنڈ کے لیے 60˚C پر اینیلنگ شامل ہیں۔ آخر میں، ایمپلیفیکیشن کے نتائج کا تجزیہ 2‑ΔΔCq طریقہ (20) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔

مغربی دھبے کا تجزیہ۔ RIPA lysis بفر (تھرمو فشر سائنٹیفک، انکارپوریٹڈ) میں پروٹیز اور فاسفیٹیس انحیبیٹرز پر مشتمل ہوموجنائزیشن کے ذریعے 48 گھنٹے تک علاج کیے جانے والے خلیوں سے پروٹین نکالے گئے تھے۔ BCA طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے سیل پروٹین کے مواد کا تعین کیا گیا تھا۔ اس کے بعد پروٹین (40 µg) کو SDS-PAGE کے ذریعے 10 فیصد جیل پر الگ کیا گیا اور PVDF جھلی میں منتقل کر دیا گیا۔ جھلی کو 5 فیصد نان فیٹ دودھ میں 1 گھنٹے کے لیے 4˚C پر روک دیا گیا تھا، اور درج ذیل بنیادی اینٹی باڈیز کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا: ‑ایکٹین (1:5،000؛ بلی نمبر. bs‑0061R؛ BIOSS)، HIF ‑1 (1:1،000؛ بلی نمبر ab179483؛ Abcam)، LOXL2 (1:500؛ بلی نمبر ab179810؛ Abcam)، E-cadherin (1:1,000 ; بلی نمبر bs‑10009R; BIOSS) اور Twist1 (1:500; cat. no. bs‑2441R; BIOSS) رات بھر 4˚C پر۔ اس کے بعد اس جھلی کو بکری مخالف خرگوش IgG H&L سیکنڈری اینٹی باڈیز (1:2,000؛ بلی نمبر ab205718؛ Abcam) کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت پر 4 گھنٹے تک سینک دیا گیا۔ TBS‑0.05 فیصد Tween‑20 کے ساتھ دھونے کے بعد، انہینسڈ کیمیلومینیسینس سسٹم (Amersham؛ Cytiva) کا استعمال کرتے ہوئے دھبوں کو دیکھا گیا۔ امیج جے 2 ایکس سافٹ ویئر (ورژن 2.1.4.7؛ رااک سافٹ ویئر انکارپوریشن) کا استعمال کرتے ہوئے کثافت میٹرک تجزیہ کے ذریعہ بینڈوں کی نسبتہ شدت کو نیم مقدار میں طے کیا گیا تھا اور نتائج کے کثافت والے پلاٹوں کو ‑ایکٹین کی شدت پر معمول بنایا گیا تھا۔

شماریاتی تجزیہ. SPSS 19۔{1}} سافٹ ویئر (SPSS, Inc.) ڈیٹا کے تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ڈیٹا کو اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر پیش کیا جاتا ہے اور اس کا تجزیہ یک طرفہ ANOVA کے ذریعے کیا جاتا ہے جس کے بعد Tukey کا پوسٹ ہاک ٹیسٹ ہوتا ہے۔ پی<0.05 was="">شماریاتی لحاظ سے اہم فرق کی نشاندہی کرنے کے لیے سمجھا جاتا ہے۔ تمام تجربات کم از کم سہ رخی میں کیے گئے تھے۔

نتائج

سیل کی عملداری پر CPhGs کے اثرات۔ HepG2 خلیوں کا علاج CPhGs (5, 25, 50, 100, 200, اور 500 µg/ml) کی مختلف تعداد کے ساتھ 48 گھنٹے (بوائی کے بعد 24 گھنٹے) کے لیے کیا گیا۔ جیسا کہ تصویر 1 میں دکھایا گیا ہے، کنٹرول گروپ (P<0.05). these="" findings="" indicated="" that="" cphgs="" could="" modulate="" cell="" viability="" in="" a="" dose‑dependent="">

CPhGs جگر کے کینسر پر OXA کے اثرات کو بڑھاتے ہیں۔ OXA-modulated HepG2 سیل کی عملداری پر CPhGs کے اثرات کا بعد میں اندازہ کیا گیا (تصویر 2)۔ ~48 گھنٹے کے بعد، CPhGs اور OXA کے امتزاج نے OXA پلس کے مقابلے میں HepG2 خلیات کی عملداری میں نمایاں کمی کی۔CoCl2 گروپ۔ خاص طور پر، CPhGs‑M plus OXA plus CoCl2 اور CPhGs‑H پلس OXA پلس CoCl2 نے OXA پلس CoCl2 گروپ (P<0.05 and=""><0.01,>

CPhGs منتقلی اور جگر کے کینسر کے خلیات کے حملے کو روکتے ہیں۔ CPhGs اور OXA کے ساتھ علاج کے بعد جگر کے کینسر کے خلیات کی ناگوار صلاحیت اور نقل مکانی کی صلاحیت کا مزید مطالعہ کرنے کے لیے، زخم کی شفا یابی اور ٹرانس ویل اسیسز کیے گئے۔ زخم بھرنے والے پرکھ نے اشارہ کیا کہ، DMSO گروپ کے مقابلے میں، CoCl2، OXA اور CPhGs (200 یا 500 µg/ml) کے ساتھ علاج کے بعد HepG2 خلیوں کی منتقلی کم ہوئی<0.05; fig.="" 3a="" and="" b).="" for="" the="" transwell="" assay,="" the="" invasive="" ability="" of="" cells="" was="" markedly="" inhibited="" in="" the="" co-treatment="" groups="" (cphgs="" +="" oxa="" +="" cocl2)="" compared="" with="" that="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group=""><0.01; fig.="" 3c="" and="" d).="" conversely,="" in="" the="" co‑treatment="" groups="" (cphgs="" +="" oxa="" +="" cocl2),="" the="" invasive="" potential="" and="" migratory="" ability="" of="" cells="" was="" markedly="">

اپوپٹوسس پر CPhGs اور OXA کے اثرات۔ CPhGs اور OXA کے امتزاج کے ساتھ علاج کے بعد

48 گھنٹے، HepG2 خلیات کو Annexin V‑FITC اور PI کے ساتھ داغ دیا گیا تھا، اس کے بعد سیلولر اپوپٹوس کا تعین کرنے کے لیے فلو سائٹومیٹری۔ جیسا کہ تصویر میں دکھایا گیا ہے۔ CPhGs اور OXA کے ساتھ علاج کیے جانے والے زیادہ تر خلیات Q4 خطے میں مقامی تھے، جس نے اشارہ کیا کہ CPhGs اور OXA کے امتزاج نے ابتدائی مرحلے میں apoptosis کی حوصلہ افزائی کی۔ OXA plus CoCl2 گروپ کے مقابلے میں، OXA، CoCl2 اور CPhGs (P<0.01; fig.="" 4b).="" these="" findings="" indicated="" that="" the="" combination="" of="" oxa="" and="" cphgs="" may="" contribute="" to="" the="" apoptosis="" of="" hepg2="">

mRNA expression levels of HIF‑1α, LOXL2, E‑cadherin and Twist following CPhGs and OXA co‑incubation. There were no statistical differences in the mRNA expression levels of HIF‑1α, LOXL2, E‑cadherin and Twist between the control and DMSO groups (P>0.05; تصویر 5A‑D)۔ اس کے برعکس، CoCl2 نے DMSO کے مقابلے LOXL2، HIF-1 اور Twist کے mRNA اظہار کی سطح میں نمایاں اضافہ کیا۔گروپ (پی<0.01; fig.="" 5a,="" b="" and="" d).="" compared="" with="" those="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group,="" the="" mrna="" expression="" levels="" of="" loxl2,="" hif‑1α="" and="" twist="" were="" significantly="" enhanced="" in="" the="" cphgs‑h="" +="" oxa="" +="" cocl2="" groups=""><0.01; fig.="" 5a,="" b="" and="" d).="" by="" contrast,="" cocl2="" induced="" a="" significant="" downregulation="" in="" the="" mrna="" expression="" levels="" of="" e‑cadherin="" compared="" with="" those="" in="" the="" dmso="" group=""><0.01; fig.="" 5c).="" all="" concentrations="" of="" cphgs="" combined="" with="" oxa="" and="" cocl2="" were="" able="" to="" upregulate="" the="" mrna="" expression="" levels="" of="" e‑cadherin="" compared="" with="" those="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group=""><0.01; fig.="" 5c).="" these="" results="" indicated="" that="" the="" combination="" of="" cphgs="" and="" oxa="" effectively="" inhibited="" the="" emt="" under="" hypoxic="">

CPhGs اور OXA کو انکیوبیشن کے بعد HIF-1، LOXL2، E-cadherin، اور Twist کے پروٹین کے اظہار کی سطح۔ ویسٹرن بلوٹنگ کے نتائج سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ HIF-1، LOXL2، اور Twist کے پروٹین ایکسپریشن لیول کو DMSO گروپ کے مقابلے میں ہائپوکسک حالات میں اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا۔ اس کے برعکس،

E-cadherin کے پروٹین ایکسپریشن کی سطح کو ہائپوکسک حالات (P<0.01; fig.="" 6a="" and="" b).="" notably,="" the="" protein="" expression="" levels="" of="" hif‑1α,="" loxl2,="" and="" twist="" were="" significantly="" decreased="" in="" the="" cphgs‑m="" +="" oxa="" +="" cocl2="" or="" cphgs‑h="" +="" oxa="" +="" cocl2="" groups="" compared="" with="" those="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group=""><0.01; fig.="" 6a="" and="" b).="" compared="" with="" dmso="" group,="" cocl2="" treatment="" significantly="" decreased="" the="" expression="" level="" of="" e‑cadherin.="" in="" the="" cphgs="" groups,="" the="" protein="" expression="" levels="" of="" e‑cadherin="" were="" significantly="" increased="" compared="" with="" those="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group=""><0.01; fig.="" 6b).="" these="" findings="" indicated="" that="" cphgs="" treatment="" could="" effectively="" inhibit="" the="" downregulation="" of="" e‑cadherin,="" and="" the="" upregulation="" of="" hif‑1α,="" loxl2="" and="" twist="" induced="" by="">

بحث

ہائپوکسیا کینسر مائکرو ماحولیات میں ایک عام خصوصیت ہے؛ یہ بنیادی طور پر اس حقیقت کے ساتھ منسلک ہے کہ پھیلاؤکینسر کے خلیات غیر معمولی نوویسلز کی عروقی تشکیل کے مقابلے میں زیادہ تیزی سے ہوتے ہیں۔ اس کے علاوہ، دیگر حیاتیاتی عمل، بشمول پھیلاؤ، میٹاسٹیسیس، اور منشیات کی حساسیت ہائپوکسیا (21) سے متاثر ہوتی ہے۔ ٹیومر ہائپوکسک مائیکرو ماحولیات کینسر کے روگجنن اور بڑھنے کے لئے اہم ہے، اور یہ جگر کے کینسر کی منشیات کے خلاف مزاحمت اور عروقی بنانے میں بھی اہم ہے (22)۔

موجودہ مطالعے میں، HepG2 خلیوں کا علاج CPhGs کی مختلف تعداد کے ساتھ کیا گیا، جن میں سے CPhGs (200 µg/ml) سیل کی عملداری میں نمایاں طور پر کمی کا باعث بن سکتے ہیں۔ خاص طور پر، CPhGs خوراک پر منحصر انداز میں سیلولر عملداری کو ماڈیول کر سکتے ہیں۔ ہائپوکسک حالات میں، OXA اور CPhGs (50 یا 100 µg/ml) کے امتزاج نے اکیلے OXA علاج کے مقابلے میں HepG2 خلیات کی عملداری کو نمایاں طور پر روک دیا۔ اسی طرح کا خوراک پر منحصر رجحان جگر کے کینسر کے خلیوں کی منتقلی اور حملے کے اسیس میں دیکھا گیا۔ فی الحال، جگر کی بیماری (23-26) کے روگجنن میں کینسر سیل اپوپٹوسس کے کردار کی تحقیقات کے لیے وسیع مطالعہ کیے گئے ہیں۔ apoptosis (27-29) کو فروغ دے کر جگر کے کینسر کے علاج کے لیے کئی حکمت عملی تیار کی گئی ہے۔ لہذا، مداخلت

HepG2 سیل apoptosis جگر کے کینسر کی روک تھام اور علاج کے لیے ایک امید افزا امیدوار کے طور پر کام کر سکتا ہے۔ CPhGs‑M/‑H اور OXA کے امتزاج کے ساتھ علاج کے بعد HepG2 خلیوں کے apoptosis میں نمایاں طور پر اضافہ ہوا ہے اس کے مقابلے میں صرف OXA کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیوں میں۔ لہذا، یہ اشارہ کیا گیا تھا کہ CPhGs OXA کے اینٹی ٹیومر اثرات کو نمایاں طور پر بڑھا سکتے ہیں۔

HIF-1 E-cadherin، N-cadherin اور Vimentin کے اظہار کی سطحوں کے ساتھ ساتھ کچھ نقلی عوامل، جیسے Snail1/2، Zeb1 اور Twist1 کو اپ گریڈ کر سکتا ہے۔ اس کے بعد، یہ سیلولر قطبیت میں کمی، خلیے کے خلیے کے جنکشن کے ڈھیلے ہونے، سائٹوسکیلیٹل پروٹین میں ردوبدل، اور کینسر کے خلیوں کی منتقلی اور حملے کا باعث بن سکتا ہے، جس کے نتیجے میں کینسر کے خلیات بیسیلر جھلی کے ذریعے گردشی نظام میں منتقل ہو سکتے ہیں۔ اور بعد میں میٹاسٹیسیس (30)۔ موجودہ مطالعہ میں، CoCl2 کا استعمال ہائپوکسیا کے ایک ماڈل کو دلانے کے لیے کیا گیا تھا، جس نے HepG2 خلیوں کی عملداری میں اضافے کے ساتھ ساتھ خلیے کی منتقلی اور حملے کو متحرک کیا۔ مزید برآں، HIF-1 کے mRNA اور پروٹین کے اظہار کی سطح میں نمایاں اضافہ ہوا، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ CoCl2 نے ایک نسل کی حوصلہ افزائی کی۔

ہائپوکسک مائکرو ماحولیات۔ CPhGs اور OXA کے امتزاج کے ساتھ علاج نے نمایاں طور پر ہائپوکسیا کی وجہ سے HIF-1 کے mRNA اور پروٹین کے اظہار کی سطح کو روکا۔ ان نتائج نے تجویز کیا کہ CPhGs جگر کے کینسر کے مائیکرو ماحولیات کو خوراک پر منحصر انداز میں کم کر سکتے ہیں۔

E-cadherin ایک Ca2 پلس - منحصر آسنجن مالیکیول ہے، جس کا سیل سیل چپکنے، ٹشو ڈھانچے کی سالمیت کو برقرار رکھنے اور سگنلنگ ٹرانسمیشن میں کلیدی کردار ہوتا ہے۔ تنزلی یا آسنجن فنکشن کے نقصان کی صورتوں میں، کینسر کے خلیے بے قابو پھیلاؤ اور تفریق کا مظاہرہ کر سکتے ہیں، جو کینسر کے خلیوں کے بڑھتے ہوئے حملے اور اس کے نتیجے میں میٹاسٹیسیس (31) کو فروغ دے سکتے ہیں۔ اس کے علاوہ، E-cadherin کینسر کے خلیات کے EMT کو روکنے کے لیے بہت اہم ہے، جو کہ ایک سے زیادہ اپکلا کی خرابی کی تفریق، حملے، میٹاسٹیسیس اور تشخیص کے ساتھ گہرا تعلق ہے۔ EMT-انڈیوسنگ ٹرانسکرپشن فیکٹرز (EMT-TFs)، جیسے Twist، Snail اور Zeb، EMT کے لیے بہت اہم ہیں۔ ہائپوکسیا کے بارے میں بتایا گیا ہے کہ وہ سگنلنگ پاتھ ویز کو چالو کرتے ہیں جو EMT-TF اظہار کو دلاتے ہیں۔ خاص طور پر، یہ ان عوامل (32) کی نقل کی ایکٹیویشن کے ذریعے براہ راست EMT کو فروغ دے سکتا ہے۔ موڑ ایک انتہائی محفوظ ہیلکس-رنگ-ہیلکس ہے۔

نقل کا عنصر جس کی حالیہ برسوں میں نئی ​​شناخت ہوئی ہے۔ کینسر کے خلیات (33) کی متعدد اقسام میں ہائی ٹوئسٹ اظہار کا پتہ چلا ہے۔ لہذا، یہ ضروری ہے کہ موڑ کے اظہار اور کینسر کے خلیوں کی منتقلی یا میتصتصاس کے درمیان تعلق کی تحقیقات کی جائے، نیز میٹاسٹیسیس کی طبی روک تھام اور علاج (34)۔ موجودہ مطالعہ میں، یہ انکشاف ہوا ہے کہ ہائپوکسیا کی موجودگی میں E-cadherin کے mRNA اور پروٹین کے اظہار کی سطح کو کم کیا گیا تھا، جبکہ mRNA اور Twist کے پروٹین اظہار کی سطح کو بلند کیا گیا تھا۔ یہ نتائج یلغار اور ہجرت کے جائزوں کے نتائج سے مطابقت رکھتے تھے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ ہائپوکسیا EMT کی موجودگی میں معاون ثابت ہو سکتا ہے۔ OXA کے ساتھ علاج کے بعد، E-cadherin کے پروٹین کے اظہار کی سطح کو کم کر دیا گیا تھا۔ اس نے اشارہ کیا کہ OXA نے جگر کے کینسر کے خلیوں کی نشوونما کو روکنے میں ناقص کارکردگی کا مظاہرہ کیا، جبکہ یہ EMT کو فروغ دے سکتا ہے۔ تاہم، CPhGs کے ساتھ مل کر، OXA کے لیے HepG2 خلیات کی حساسیت نے ہائپوکسیا کی موجودگی میں نمایاں بہتری کی نمائش کی۔ مزید برآں، CPhGs اور OXA کے ساتھ cotreatment سیلولر قابل عمل ہونے، منتقلی، اور HepG2 خلیوں کے حملے کو روک سکتا ہے۔ موجودہ مطالعہ صرف پتہ چلا ہے

موڑ اور E-cadherin اظہار؛ لہذا، مستقبل کے مطالعے کا مقصد زیادہ EMT سے متعلقہ مارکروں پر توجہ مرکوز کرنا ہے، تاکہ جگر کے کینسر میں ہائپوکسیا سے متاثرہ EMT پر CPhGs کے روکنے والے اثر کا جائزہ لیا جا سکے۔

HIF-1 کو LOXL2 کے اظہار کو فروغ دینے، اور جگر کے کینسر کے خلیوں کی منتقلی اور حملے کو بڑھانے کے لیے بتایا گیا ہے، جو جگر کے کینسر کی خراب تشخیص (30) سے قریبی تعلق رکھتے ہیں۔ پچھلے مطالعہ میں، ملحقہ جگر کے کینسر کے ؤتکوں میں LOXL2 کے اظہار کی سطح کینسر کے ؤتکوں (35) کے مقابلے میں نمایاں طور پر بڑھ گئی تھی۔ اس کے علاوہ، اس کا جگر کے کینسر کے حملے اور میٹاسٹیسیس سے گہرا تعلق تھا۔ چھوٹی مداخلت کرنے والے آر این اے کے ذریعہ LOXL2 جین کو خاموش کرنے سے HepG2 اور SMCC-7721 خلیوں کے پھیلاؤ کو روکا گیا، جس کے نتیجے میں کینسر کے خلیوں کی سیل سائیکل گرفتاری ہوئی اور apoptosis میں اضافہ ہوا (36)۔ شاو ایٹ ال (35) نے جگر کے کینسر کے نمونوں میں LOXL2، اور کلینکوپیتھولوجیکل عوامل، VM اور 201 ایسے کیسوں میں تشخیص کی جن کے علاج کے لیے سرجری ہوئی تھی۔ یہ قیاس کیا گیا تھا کہ LOXL2 نے جگر کے کینسر کے روگجنن اور بڑھنے میں اہم کردار ادا کیا، جو منشیات کی نشوونما کے لیے ایک ہدف کے طور پر کام کر سکتا ہے۔ مزید برآں، پینگ ایٹ ال (37) نے یہ ظاہر کیا کہ LOXL2 Snail/E-cadherin اور Src kinase/Focal adhesion kinase سگنلنگ پاتھ ویز کو چالو کر سکتا ہے، جو گیسٹرک کینسر کے خلیوں کے EMT کے روگجنن اور بڑھنے میں حصہ ڈال سکتا ہے۔ موجودہ مطالعہ میں، ہائپوکسک حالات میں، LOXL2 کے mRNA اور پروٹین کے اظہار کی سطح میں اضافہ کیا گیا تھا، جبکہ OXA کے ساتھ علاج کے بعد اس کے اظہار کو کم کیا گیا تھا۔ مزید برآں، CPhGs اور OXA کے امتزاج کے ساتھ علاج کے نتیجے میں LOXL2 اظہار کی واضح کمی واقع ہوئی، جو جگر کے کینسر پر OXA کے اینٹیٹیمر اثرات کو مؤثر طریقے سے مدد دے سکتی ہے۔

موجودہ مطالعہ کی کچھ حدود ہیں۔ موجودہ مطالعہ میں دو اور جگر کے کینسر سیل لائنوں کا استعمال کیا جانا چاہئے تھا، بشمول SMCC-7721 سیل لائن، لیکن ان کا استعمال نہیں کیا جا سکا کیونکہ ان سیل لائنوں کو خریدنا ممکن نہیں تھا کیونکہ ان کی غلط شناخت کی گئی تھی اور وہ HeLa سیلز سے اخذ کی گئی تھیں۔ اس کے علاوہ، موجودہ مطالعہ نے خلیات میں CPhGs کے مختلف ارتکاز کے اینٹی آکسیڈینٹ اثرات کا تجزیہ نہیں کیا۔

آخر میں، CPhGs HIF-1 سگنلنگ پاتھ وے کو ماڈیول کرنے کے ذریعے جگر کے کینسر کے خلیوں کے ہائپوکسک ٹیومر مائیکرو ماحولیات کو تبدیل کر سکتے ہیں۔ اس کے علاوہ، CPhGs اور OXA کے امتزاج کے ساتھ علاج کے جواب میں OXA کے لیے جگر کے کینسر کے خلیات کی حساسیت میں نمایاں اضافہ ہوا۔ یہ نتائج کیموتھراپی کے لیے جگر کے کینسر کی حساسیت کو بہتر بنانے کے لیے علاج کی ایک نئی حکمت عملی فراہم کر سکتے ہیں۔

اعترافات

قابل اطلاق نہیں۔

فنڈنگ

موجودہ مطالعہ کو سنکیانگ کی لیبارٹری آف نیچرل ڈرگ ایکٹو اجزاء اور ڈرگ ریلیز ٹیکنالوجی (گرانٹ نمبر XJDX1713)، سنکیانگ اویگور خودمختار علاقے میں سائنسی اور تکنیکی اختراع کے رہنما کے لیے ریزرو امیدوار پروجیکٹ (گرانٹ نمبر 14XS) کی حمایت حاصل تھی۔ چین کی نیشنل نیچرل سائنس فاؤنڈیشن (گرانٹ نمبر 81860735) اور بیتھون چیریٹیبل

فاؤنڈیشن 'Bethune·Quest-دواسازی کی سائنسی تحقیقی صلاحیت کی تعمیر' (گرانٹ نمبر B-19-H-20200622)۔

ڈیٹا اور مواد کی دستیابی

موجودہ مطالعہ کے دوران استعمال شدہ اور/یا تجزیہ کیے گئے ڈیٹاسیٹس متعلقہ مصنف سے معقول درخواست پر دستیاب ہیں۔

مصنفین کی شراکتیں۔

LMW اور JWZ نے تجربات کیے، مخطوطہ تیار کیا اور تمام خام ڈیٹا کی صداقت کی تصدیق کی۔ JPH اور JHY نے موجودہ مطالعہ کو ڈیزائن کیا۔ تمام مصنفین نے حتمی مخطوطہ کو پڑھا اور منظور کیا۔

اخلاقیات کی منظوری اور شرکت کے لیے رضامندی۔

قابل اطلاق نہیں۔

اشاعت کے لیے مریض کی رضامندی۔

قابل اطلاق نہیں۔

مسابقتی مفادات

مصنفین اعلان کرتے ہیں کہ ان کی کوئی مسابقتی دلچسپی نہیں ہے۔

حوالہ جات

1. ہیپاٹو سیلولر کارسنوما۔ Nat Rev Dis Primers 2: 16019، 2016۔

2. Gingold JA، Zhu D، Lee DF، Kaseb A اور Chen J: پرائمری جگر کے کینسر میں جینومک پروفائلنگ اور میٹابولک ہومیوسٹاسس۔ رجحانات Mol Med 24: 395-411، 2018۔

3. McGuire S: ورلڈ کینسر رپورٹ 2014. جنیوا، سوئٹزرلینڈ: عالمی ادارہ صحت، کینسر پر تحقیق کے لیے بین الاقوامی ایجنسی، ڈبلیو ایچ او پریس، 2015۔ ایڈوی نیوٹر 7: 418-419، 2016۔

4. غلامرضا کے، جدیدی-نیاراغ ایف، جہرومی اے ایس، زندی کے، اور حجت-فرسنگی ایم: موجودہ ٹارگٹڈ تھراپی ایجنٹوں کے خلاف ٹیومر سیل کے خلاف مزاحمت کا طریقہ کار۔ ٹیومر بائیول 37: 10021-10039، 2016۔

5. ڈونگ ایکس اور مپر آر جے: ملٹی ڈرگ مزاحم ٹیومر کے علاج کے لیے نینو میڈیسنل حکمت عملی: موجودہ پیشرفت۔ نینو میڈیسن (لونڈ) 5: 597-615، 2010۔

6. Xie Y اور Zhong DW: AEG-1 PI3K/AKT/HIF‑1alpha/MDR‑1 پاتھ وے کو ریگولیٹ کرنے کے ذریعے ہائپوکسیا سے متاثرہ ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کیمورسٹینس سے وابستہ ہے۔ EXCL J 15: 745-757، 2016۔

7. Xiong H, Ni Z, He J, Jiang S, Li X, He J, Gong W, Zheng L, Chen S, Li B, et al: LncRNA HULC Sirt1 کو مستحکم کرنے کے ذریعے آٹوفجی کو متحرک کرتا ہے اور HCC خلیوں کی کیمیائی حساسیت کو کم کرتا ہے۔ آنکوجین 36: 3528-3540، 2017۔

8. Gade TPF, Tucker E, Nakazawa MS, Hunt SJ, Wong W, Krock B, Weber CN, Nadolski GJ, Clark TWI, Soulen MC, et al: اسکیمیا ہیپاٹو سیلولر کارسنوما میں خاموشی اور آٹوفجی انحصار کو اکساتا ہے۔ ریڈیولوجی 283: 702-710، 2017۔

9. سیگل آر ایل، ملر کے ڈی اور جیمل اے: کینسر کے اعداد و شمار، 2017۔ CA کینسر جے کلین 67: 7-30، 2017۔

10. ڈونگ ایل کیو، شین بی کیو، اور ما وائی: ہیپاٹو سیلولر کارسنوما میں ہائپوکسیا مائیکرو ماحولیات کی تحقیقی پیشرفت۔ Zhong Guo Pu Wai Ji Chu Yu Lin Chuang Za Zhi 25: 1254-1258، 2018 (چینی زبان میں)۔

11. Moon HJ، Finney J، Ronnebaum T، اور Mure M: Human lysyl oxidase-like 2. Bioorg Chem 57: 231-241, 2014۔

12. فریرا ایس، سرائیوا این، ریجو پی اور فرنینڈس AS: LOXL2 روکنے والے اور چھاتی کے کینسر کی ترقی۔ اینٹی آکسیڈینٹس (بیسل) 10: 312، 2021۔

13. Philp CJ, Siebeke I, Clements D, Miller S, Habgood A, John AE, Navaratnam V, Hubbard RB, Jenkins G, and Johnson SR: ایکسٹرا سیلولر میٹرکس کراس لنکنگ فبروبلاسٹ کی نشوونما کو بڑھاتا ہے اور پھیپھڑوں کے فائبروسس میں میٹرکس پروٹولیسس سے بچاتا ہے۔ Am J Respir Cell Mol Biol 58: 594‑603، 2018۔

14. Galván JA, Zlobec I, Wartenberg M, Lugli A, Gloor B, Perren A, and Karamitopoulou E: E-cadherin repressors SNAIL, ZEB1 اور ZEB2 کا ٹیومر اور سٹرومل خلیوں کے ذریعے اظہار ٹیومر کے ابھرتے ہوئے فینوٹائپ کو متاثر کرتا ہے اور ہیٹروگلین کی تجویز کرتا ہے۔ لبلبے کے کینسر میں خلیات۔ Br J کینسر 112: 1944-1950، 2015۔

15. Gu C، Yang X اور Huang L: Cistanches herba: A neuropharmacology review. فرنٹ فارماکول 7: 289، 2016۔

16. Fu Z، Fan X، Wang X، اور Gao X: Cistanches Herba: اس کی کیمسٹری، فارماکولوجی، اور فارماکوکینیٹکس پراپرٹی کا ایک جائزہ۔ J Ethnopharmacol 219: 233-247، 2018۔

17. Hu Q, You SP, Liu T, Wang B, Liu X, اور Jiang Y: cistanche کے اینٹی لیور کینسر اثر پر تحقیقات۔ Carcinog Teratog Mutagen 30: 194-199، 2018۔

18. Mao J, Tian Y, Wang C, Jiang K, Li R, Yao Y, Zhang R, Sun D, ​​Liang R, Gao Z, et al: CBX2 ہیپاٹو سیلولر کارسنوما میں YAP کے فاسفوریلیشن کے ذریعے پھیلاؤ اور اپوپٹوسس کو منظم کرتا ہے۔ جے کینسر 10: 2706-2719، 2019۔

19. کن Y، Liu HJ، Li M، Zhai DH، Tang YH، Yang L، Qiao KL، Yang JH، Zhong WL، Zhang Q، et al: Salidroside ہائپوکسک ٹیومر مائیکرو ماحولیات کو بہتر بناتا ہے اور پلاٹینم ادویات کی منشیات کی مزاحمت کو معکوس کرتا ہے۔ HIF-1 سگنلنگ پاتھ وے۔ EBioMedicine 38: 25-36، 2018۔

20. Livak KJ اور Schmittgen TD: ریئل ٹائم مقداری PCR اور 2(‑Delta Delta C(T)) طریقہ استعمال کرتے ہوئے متعلقہ جین کے اظہار کے ڈیٹا کا تجزیہ۔ طریقہ 25: 402-408، 2001۔

21. Vaupel P: ٹیومر مائکرو ماحولیاتی فزیالوجی اور تابکاری آنکولوجی پر اس کے اثرات۔ Semin Radiat Oncol 14: 198-206، 2004۔

22. چن سی اور لو ٹی: ہیپاٹو سیلولر کارسنوما میں ہائپوکسیا سے متاثر ہونے والے عوامل۔ Oncotarget 8: 46691-46703، 2017۔

23. Schwabe RF اور Luedde T: جگر میں اپوپٹوس اور نیکروپٹوسس: زندگی اور موت کا معاملہ۔ Nat Rev Gastroenterol Hepatol 15: 738-752، 2018۔

24. کنڈا ٹی، ماتسوکا ایس، یامازاکی ایم، شیباٹا ٹی، نیری کے، تاکاہاشی ایچ، کانیکو ٹی، فوجیساوا ایم، ہیگوچی ٹی، ناکمورا ایچ، ایٹ ال: اپوپٹوس اور غیر الکوحل فیٹی جگر کے امراض۔ ورلڈ جے گیسٹرو اینٹرول 24: 2661-2672، 2018۔

25. پٹلا ایس، کریملن وائی اور شوشن-برماٹز V: مائٹوکونڈریل VDAC1 پر مبنی پیپٹائڈ کے ساتھ چوہوں میں جگر کے کینسر اور متعلقہ پیتھالوجیز کو نشانہ بنانا۔ نوپلاسیا 20: 594-609، 2018۔

26. Jing ZT، Liu W، Xue CR، Wu SX، Chen WN، Lin XJ، اور Lin X: AKT ایکٹیویٹر SC79 ہیپاٹوسیٹس کو TNF-ثالثی اپوپٹوسس سے بچاتا ہے اور d‑Gal/LPS کی حوصلہ افزائی جگر کی چوٹ کو کم کرتا ہے۔ Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 316: G387‑G396، 2019۔