3. بحث

پلمبگین ایک پودے سے ماخوذ ثانوی میٹابولائٹ ہے اور کئی حیاتیاتی افعال کو ظاہر کرتا ہے، بشمول اینٹی سوزش، اینٹی کینسر، اینٹی الرجک، اور اینٹی بیکٹیریل سرگرمیاں [8,9]۔ تاہم، یہ معلوم نہیں ہوسکا کہ آیا پلمبگین کا ہائپر پیگمنٹیشن اور میلانوما سے منسلک میلانوجینیسیس پر روکنے والا اثر تھا۔ اس مطالعہ میں، ہم نے یہ ظاہر کیا کہ پلمبگین B16F10 میلانوما خلیوں میں میلانوجینیسس کو مضبوطی سے دباتا ہے، اور یہ کام پلمبگین کی سوزش، اینٹی الرجک، اینٹی بیکٹیریل، اور اینٹی میلانوجینیسیس سرگرمیوں پر مبنی جلد کی دیکھ بھال کرنے والے کاسمیٹکس تیار کرنے کا موقع فراہم کر سکتا ہے۔

متعلقہ مطالعات کے مطابق، cistanche ایک عام جڑی بوٹی ہے جسے "معجزہ جڑی بوٹی جو زندگی کو طول دیتی ہے" کے نام سے جانا جاتا ہے۔ اس کا بنیادی جزو cistanoside ہے، جس کے مختلف اثرات ہیں جیسے کہ اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی انفلامیٹری، اور مدافعتی افعال کو فروغ دینا۔ cistanche اور جلد کی سفیدی کے درمیان طریقہ کار cistanche glycosides کے اینٹی آکسیڈینٹ اثر میں مضمر ہے۔ انسانی جلد میں میلانین ٹائروسینیز کے ذریعے اتپریرک ٹائروسین کے آکسیڈیشن سے پیدا ہوتا ہے، اور آکسیڈیشن کے رد عمل میں آکسیجن کی شرکت کی ضرورت ہوتی ہے، لہٰذا جسم میں آکسیجن سے پاک ریڈیکلز میلانین کی پیداوار کو متاثر کرنے والا ایک اہم عنصر بن جاتا ہے۔ Cistanche میں cistanoside ہوتا ہے، جو کہ ایک اینٹی آکسیڈینٹ ہے اور جسم میں آزاد ریڈیکلز کی پیداوار کو کم کر سکتا ہے، اس طرح میلانین کی پیداوار کو روکتا ہے۔

سفید کرنے کے لیے رو کانگ رونگ فوائد پر کلک کریں۔

مزید معلومات کے لیے:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

چونکہ melanogenesis کی اپ گریجولیشن اکثر مہلک میلانوما میں دیکھی جاتی ہے جس میں خون میں ٹائروسینیز کی سطح کے ساتھ ساتھ ٹیومر کے ٹشوز بھی زیادہ ظاہر ہوتے ہیں، یہ ظاہر ہے کہ میلانوجینیسیس مہلک میلانوماس کی کیموتھریپی کے لیے ممکنہ ہدف ہے [1]۔ موجودہ مطالعے میں، ہم نے پایا کہ پلمبگین میلانوجینیسیس (شکل 6) سے وابستہ ٹرانسکرپشنی مشینری سے آزاد ٹائروسینیز سرگرمی کو براہ راست دباتا ہے۔ لہذا، ہمارے نتائج بتاتے ہیں کہ پلمبگین مہلک میلانوما کے انتظام کے لیے حفاظتی اور علاج کی حکمت عملی کا ممکنہ جزو ہو سکتا ہے۔ درحقیقت، میلانوما تھراپی پر پلمبگین کے اینٹی میلانوما، کیموسینسیٹائزنگ، اور ریڈیو سینسیٹائزنگ اثرات کی اطلاع دی گئی ہے [17-21]۔

پلمبگین کے انسداد کینسر اور سوزش کے اثرات سے متعلق پچھلے مطالعات میں، تقریباً 5–10 µM پلمبگین (اس مطالعے میں استعمال ہونے والے ارتکاز سے زیادہ) کو وٹرو ماڈلز میں استعمال کیا گیا ہے [17,22 23]۔ لہذا، ہم نے پھیلاؤ والے خلیوں میں پلمبگین کے زہریلے اثر کی چھان بین کی، بشمول نارمل keratinocytes (HaCaT) اور لینس اپیتھیلیل سیل (B3)، جنہیں جلد کی دیکھ بھال کرنے والے کاسمیٹکس سے نقصان پہنچ سکتا ہے۔ ہمارے نتائج نے ثابت کیا کہ کم ارتکاز، تقریباً 0.5–1 µM پلمبگین، عام کیریٹینوسائٹس اور لینس اپیتھیلیل سیلز کے لیے زہریلے نہیں ہیں، لیکن ٹائروسینیز کی سرگرمی اور میلانین کی ترکیب کو کم کرنے کے لیے کافی موثر ہیں۔ اس کے علاوہ، ہم نے یہ بھی پایا کہ پلمبگین 1 mM arbutin یا 0.2 mM کوجک ایسڈ سے زیادہ مؤثر طریقے سے میلانوجینیسیس کو دباتا ہے، جو کہ جلد کو سفید کرنے کے لیے مشہور ہے۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ پلمبگین جلد کو سفید کرنے والی کاسمیٹکس تیار کرنے کے جزو کے طور پر استعمال کے لیے محفوظ ہے۔

موجودہ مطالعہ میں، ہم نے L-DOPA آکسیڈیشن پر مبنی سیلولر اور سیل فری ٹائروسینیز ایکٹیویٹی اسسیس کا استعمال کرتے ہوئے ٹائروسینیز انزائم ری ایکشن پر پلمبگین کے روکنے والے اثرات کا مطالعہ کیا۔ اس کے باوجود، ہم نے ایک عین مطابق سالماتی طریقہ کار تجویز نہیں کیا کہ کس طرح پلمبگین ٹائروسینیز کی سرگرمی کو روکتا ہے۔ اس طریقہ کار کی مزید تفتیش کی جانی چاہیے کہ آیا پلمبگین براہ راست ٹائروسینیز کے ساتھ تعامل کرتا ہے اور اس کی آکسیڈیز سرگرمی کو روکتا ہے یا اس کے بالواسطہ اثرات ہیں جو ٹائروسینیز کی سرگرمی میں کمی کا باعث بنتے ہیں۔

4. مواد اور طریقے

4.1 ریجنٹس اور اینٹی باڈیز

Plumbagin, -MSH (M4135), arbutin (A4256), kojic acid (K3125), L-DOPA (333786)، اور tyrosinase (T3824) مشروم سے پاک کیے گئے Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) سے خریدے گئے تھے۔ MITF (#12590)، p-AKTS473 (#4060)، p-AKTT308 (#13038)، p-CREB (#9198)، p-ERK1/2 (#4370)، ERK1/2 (#9102) کے خلاف اینٹی باڈیز، H2AX (#9718)، PARP (#5625)، اور کیسپیس-3 (#9665) سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی (Danvers, MA, USA) سے خریدے گئے تھے۔ Tyrosinase (sc-7833)، اور -tubulin (sc-9104) Santa Cruz Biotechnology (Dallas, TX, USA) سے خریدے گئے تھے۔

4.2 سیل کلچر اور سیل وائبلٹی پرکھ

4.3 امیونوبلوٹنگ

4.4 انٹرا سیلولر اور ایکسٹرا سیلولر میلانین مواد کی پیمائش

میلانین کے مواد کا تعین کیا گیا تھا اور معمولی ترمیم کے ساتھ پہلے بیان کردہ طریقہ کا استعمال کرتے ہوئے مقدار درست کی گئی تھی [2,24]۔ میلانین مواد کے تجزیہ کے لیے، B16F10 خلیات کو فینول ریڈ فری DMEM میں کلچر کیا گیا جس میں 10 فیصد فیٹل بووائن سیرم تھا۔ B16F10 خلیوں کو 3 یا 4 دن تک پلمبگین کی عدم موجودگی یا موجودگی میں -MSH علاج کے ساتھ کلچر کیا گیا تھا۔ مہذب خلیوں یا میڈیا کی کٹائی کی گئی اور چھرے 1N NaOH میں تحلیل کیے گئے جس میں 10 فیصد DMSO 80 ◦C پر 1 گھنٹے کے لیے تھا۔ میلانین کے مواد کو 475 nm (OD475) پر جاذب ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا، اور میلانین کے مواد کو پھر سیلولر پروٹین کی حراستی میں معمول بنایا گیا تھا۔

4.5 RNA تنہائی اور مقداری RT-PCR

4.6 سیلولر ٹائروسینیز ایکٹیویٹی پرکھ

سیلولر ٹائروسینیز کی سرگرمی کا تعین ترمیم کے ساتھ پہلے بیان کردہ طریقہ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا [25,26]۔ کلچرڈ B16F10 سیلز کو پلمبگین کی غیر موجودگی یا موجودگی میں -MSH کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا، اور سیلز کو پھر دھویا گیا تھا اور PBS کے ساتھ لیس کیا گیا تھا جس میں 1 فیصد سوڈیم ڈیوکسیکولیٹ اور 0.5 فیصد ٹریٹن ایکس تھا{{8} } پروٹین کے ارتکاز کا تعین کرنے کے بعد، 50 µg پروٹین کو 2.0 mM L-DOPA اور 0.1 M PBS (pH 6.8) کے ساتھ 1 h کے لیے 37 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ L-DOPA کے آکسیکرن کو جاذب ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے 475 nm (OD475) پر ماپا گیا۔ سرگرمی کو درج ذیل فارمولے کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا: ٹائروسینیز سرگرمی ( فیصد )=(نمونہ کا OD475/ OD475 کنٹرول) × 100۔

4.7 سیل فری ٹائروسینیز ایکٹیویٹی پرکھ

4.8 ڈی پی پی ایچ ریڈیکل اسکیوینگنگ ایکٹیویٹی پرکھ

4.9 شماریاتی تجزیہ

5. نتائج 

اس مطالعے کے اہم نتائج یہ ہیں کہ پلمبگین (i) ٹائروسینیز کی سرگرمی کو روک کر ایم ایس ایچ کی حوصلہ افزائی میلانین کی ترکیب کو دباتا ہے۔ (ii) MITF سے منسلک ٹرانسکرپشنی مشینری اور سگنل کی نقل و حمل کے جھرنوں کو متاثر نہیں کرتا جس میں AKT اور ERK1/2 ایکٹیویشن میلانوجینیسیس سے وابستہ ہے۔ اور (iii) عام keratinocytes (HaCaT) اور لینس کے اپکلا (B3) خلیوں میں زہریلا پن کا سبب نہیں بنتا جب اس کا ارتکاز 5 µM سے کم ہو۔ ایک ساتھ مل کر، پلمبگین CREB-MITF ٹرانسکرپشنی محور سے آزاد ٹائروسینیز کی سرگرمی کو روک کر -MSH-حوصلہ افزائی میلانین ترکیب کو منسوخ کرتا ہے۔ لہذا، یہ نتائج جلد کو سفید کرنے والے کاسمیٹکس کی تیاری میں استعمال کرکے ہائپر پگمنٹیشن کو کم کرنے کے لیے ایک امید افزا اور محفوظ قدرتی پروڈکٹ پلمبگین تجویز کرتے ہیں۔

مخففات

حوالہ جات

1. ریلی، PA میلانوجینیسیس اور میلانوما۔ پگمنٹ سیل ریس۔ 2003، 16، 548–552۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

2. بی اے، جے ایس؛ ہان، ایم؛ Yao, C.; چنگ، جے ایچ چیٹوسن ERK کو چالو کرنے کے ذریعے B16F10 ماؤس میلانوما خلیوں میں IBMX-حوصلہ افزائی میلانوجینیسیس کو روکتا ہے۔ کیم بائول تعامل 2016، 245، 66–71۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

3. D'Mello, SA; فنلے، جی جے؛ بگولی، BC؛ Askarian-Amiri، ME melanogenesis میں سگنلنگ پاتھ ویز۔ انٹر جے مول سائنس 2016. [کراس ریف] [پب میڈ]

4. کم، ایچ جے؛ Yonezawa, T.; ترویا، ٹی. وو، جے ٹی؛ چا، بی وائی نوبیلیٹن، ایک پولی ایتھوکسی فلاوونائڈ، انسانی میلانوسائٹس میں اینڈوتھیلین-1 کے علاوہ ایس سی ایف کی حوصلہ افزائی پگمنٹیشن کو کم کرتا ہے۔ فوٹو کیم۔ فوٹو بائیول۔ 2015، 91، 379–386۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

5. کانگ، ایس جے؛ چوئی، بی آر؛ لی، ای کے؛ کم، ایس ایچ؛ Yi, HY; پارک، HR؛ گانا، CH؛ لی، وائی جے؛ Ku, SK B16F10 میلانوما خلیوں میں میلانوجینیسیس پر خشک انار کے ارتکاز پاؤڈر کا روک تھام کا اثر؛ p38 اور PKA سگنلنگ پاتھ ویز کی شمولیت۔ انٹر جے مول سائنس 2015، 16، 24219–24242۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

6. کم، جے ڈبلیو؛ کم، HI؛ کم، جے ایچ؛ کوون، او سی؛ بیٹا، ES؛ لی، سی ایس؛ پارک، گینوڈرمینونڈیول کے وائی جے ایفیکٹس، میڈیسنل مشروم گانوڈرما لوسیڈم سے ایک نیا میلانوجینیسیس روکنا۔ انٹر جے مول سائنس 2016، 17، 1798۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

7. تساؤ، وائی ٹی؛ ہوانگ، YF؛ Kuo, CY; لن، وائی سی؛ چیانگ، ڈبلیو سی؛ وانگ، ڈبلیو کے؛ Hsu, CW; لی، CH Hinokitiol B16F10 ماؤس میلانوما خلیوں میں AKT/mTOR سگنلنگ کے ذریعے میلانوجینیسیس کو روکتا ہے۔ انٹر جے مول سائنس 2016، 17، 248۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

8. پادھیے، ایس. ڈنڈاوتے، پی. یوسفی، ایم. احمد، اے. سرکار، پلمبگین اور اس کے اینالاگ کی دواؤں کی خصوصیات پر FH تناظر۔ میڈ. Res. Rev. 2012, 32, 1131–1158. [کراس ریف] [پب میڈ]

9. گپتا، ایس سی؛ کم، جے ایچ؛ پرساد، ایس. اگروال، بی بی ریگولیشن آف بقا، پھیلاؤ، یلغار، انجیوجینیسیس، اور ٹیومر سیلز کے میٹاسٹیسیس نیوٹراسیوٹیکلز کے ذریعے سوزش کے راستوں کی ماڈیولیشن کے ذریعے۔ کینسر میٹاسٹیسیس Rev. 2010, 29, 405–434. [کراس ریف] [پب میڈ]

10. جیکسن، جے کے؛ ہیگو، ٹی. ہنٹر، ڈبلیو ایل؛ برٹ، HM Topoisomerase inhibitors بطور اینٹی آرتھرٹک ایجنٹ۔ انفلفلم۔ Res. 2008، 57، 126–134۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

11. احمد، الف. بنرجی، ایس. وانگ، زیڈ؛ کانگ، ڈی. سرکار، انسانی چھاتی کے کینسر کے خلیات کی FH Plumbagin-حوصلہ افزائی اپوپٹوس NF-κB اور Bcl-2 کے غیر فعال ہونے سے ثالثی کی جاتی ہے۔ جے سیل بائیو کیم۔ 2008، 105، 1461–1471۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

12. عزیز، MH؛ Dreckschmidt, NE; ورما، اے کے پلمبگین، ایک دواؤں سے ماخوذ نیفتھوکوئنون، ہارمون ریفریکٹری پروسٹیٹ کینسر کی نشوونما اور حملے کا ایک نیا روکنے والا ہے۔ کینسر ریس 2008، 68، 9024–9032۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

13۔ تھسنی، کے اے۔ راکیش، ایس. روزینی، جی؛ رتیش کمار، ٹی۔ سرینواس، جی؛ پریا، ایس. ایسٹروجن پر منحصر سیل سگنلنگ اور بی آر سی اے میں اپوپٹوس1- نے پلمبگین اور دیگر کیموتھراپیٹک ایجنٹوں کے جواب میں بی جی 1 ڈمبگرنتی کینسر کے خلیات کو بلاک کردیا۔ این۔ اونکول۔ 2008، 19، 696–705۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

14. Gomathinayagam, R.; سومیا لکشمی، ایس. مردہ اللہ، ف. کمار، آر. اکبرشاہ، ایم اے؛ دامودرن، سی. پلمبگین کا اینٹی کینسر میکانزم، ایک قدرتی مرکب، غیر چھوٹے سیل پھیپھڑوں کے کینسر کے خلیوں پر۔ اینٹی کینسر ریس. 2008، 28، 785–792۔ [پب میڈ]

15. وانگ، سی سی؛ چیانگ، YM؛ سنگ، ایس سی؛ Hsu, YL; چانگ، جے کے؛ Kuo، PL Plumbagin انسانی میلانوما A375.S2 خلیات میں ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں/c-Jun N-terminal kinase pathways کے ذریعے سیل سائیکل گرفتاری اور apoptosis کو اکساتا ہے۔ کینسر لیٹ. 2008، 259، 82-98۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

16. Shih, YW; لی، وائی سی؛ وو، پی ایف؛ لی، وائی بی؛ چیانگ، ٹی اے پلمبگین میٹرکس میٹالوپروٹینیز-2 اور یوروکینیز-پلاسمینوجن ایکٹیویٹر کی پیداوار کو کم کرکے جگر کے کینسر کے HepG2 خلیات کے حملے اور منتقلی کو روکتا ہے۔ ہیپاٹول۔ Res. 2009، 39، 998-1009۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

17. انوف، اے آر؛ رام چندرن، آر. کرشناسامی، آر. گاندھی، پی ایس؛ پیریاسمی، S. SK-MEL 28 میلانوما سیل لائنوں پر Plumbago rosea اور اس کے پیوریفائیڈ اجزاء پلمبگین کے انسداد افزائشی اثرات۔ فارماکگن۔ Res. 2014، 6، 312–319۔

18. گوڑا، آر. شرما، اے. رابرٹسن، میلانوما ٹیومر کی نشوونما پر celecoxib اور plumbagin کے GP Synergistic inhibitory اثرات۔ کینسر لیٹ. 2017، 385، 243–250۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

19. لی، جے؛ شین، Q. پینگ، آر. چن، آر. جیانگ، پی. لی، وائی۔ ژانگ، ایل. Lu, J. Plumbagin انسانی میلانوما A375 خلیوں میں ڈیتھ ریسیپٹر کے اپ-ریگولیشن کے ذریعے TRAIL-ثالثی اپوپٹوس کو بڑھاتا ہے۔ J. Huazhong Univ سائنس ٹیکنالوجی. میڈ. سائنس 2010، 30، 458–463۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

20. نیر، ایس. نائر، آر آر؛ سری نواس، پی. سرینواس، جی؛ پلائی، ایم آر گریوا کینسر کے خلیوں میں پلمبگین کے ریڈیو حساسیت کے اثرات اپوپٹوٹک پاتھ وے کی ماڈیولیشن کے ذریعے ہوتے ہیں۔ مول کارسنوگ۔ 2008، 47، 22–33۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

21. پرساد، VS؛ دیوی، پنجاب یونیورسٹی؛ راؤ، بی ایس؛ کامتھ، R. وٹرو میں اگنے والے ماؤس میلانوما خلیوں پر پلمبگین کا ریڈیو حساسیت کا اثر۔ بھارتی J. Exp. بائول 1996، 34، 857–858۔ [پب میڈ]

22. لی، وائی سی؛ وہ، ایس ایم؛ وہ، زیڈ ایکس؛ لی، ایم؛ یانگ، وائی؛ پینگ، جے ایکس؛ ژانگ، ایکس۔ چو، کے. چاؤ، Q. ڈوان، ڈبلیو. ET رحمہ اللہ تعالی. Plumbagin انسانی غیر چھوٹے سیل پھیپھڑوں کے کینسر کے خلیات میں PI3K/Akt/mTOR راستے کی روک تھام کے ذریعے apoptotic اور autophagic سیل کی موت کو اکساتا ہے۔ کینسر لیٹ. 2014، 344، 239–259۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

23. چیکر، آر. شرما، ڈی. سندور، ایس کے؛ خانم، ایس. پوڈوول، ٹی بی پلمبگین کے سوزش کے اثرات لیمفوسائٹس میں NF-κB ایکٹیویشن کی روک تھام کے ذریعے ثالثی کرتے ہیں۔ انٹر امیونو فارماکول۔ 2009، 9، 949–958۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

24. کم، بی. لی، ایس ایچ؛ چوئی، کے وائی؛ کم، HS N-Nicotinoyl tyramine، ایک ناول niacinamide derivative، MITF جین اظہار کو دبا کر میلانوجینیسیس کو روکتا ہے۔ یور جے فارماکول۔ 2015، 764، 1–8۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

25. لی، ایچ وائی؛ جنگ، ای جے؛ Bae, SY; جیون، جے ای؛ پارک، HJ؛ شن، جے؛ Lee, SK Gauguin D کی اینٹی میلانوجینک سرگرمی، سمندری سپنج فورباس ایس پی سے ایک انتہائی آکسیجنڈ ​​ڈائٹرپینائڈ، ٹائروسینیز اظہار اور انحطاط کو ماڈیول کرنے کے ذریعے۔ مارچ منشیات 2016، 14، 212۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

26. وانڈر، اے جے؛ ہیرس، H. ٹائروسینیز کی ٹائروسین ہائیڈروکسیلیس اور DOPA آکسیڈیز سرگرمیوں کے لیے نئے اسیسز۔ یور جے بائیو کیم۔ 1991، 198، 317–326۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

مزید معلومات کے لیے: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501