Cistanche Tubulosa سے Phenylethanol Glycosides کے روک تھام کے اثرات

رابطہ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ای میل:audrey.hu@wecistanche.com

شو پنگ یو، وغیرہ

خلاصہ

پس منظر:Cistanchetubulosaایک روایتی چینی جڑی بوٹیوں کی دوا ہے جو بڑے پیمانے پر استثنیٰ کو منظم کرنے کے لیے استعمال ہوتی ہے۔Phenylethanoildglycosidesاس پلانٹ سے (CPhGs) بنیادی طور پر موثر مواد ہیں۔ اس مطالعے کا مقصد چوہوں میں BSA-حوصلہ افزائی ہیپاٹک فائبروسس پر CPhGs کے بچاؤ اور علاج کے اثرات اور ہیپاٹک سٹیلیٹ سیلز پر مشتمل متعلقہ مالیکیولر میکانزم کا جائزہ لینا تھا۔ بیجیرانگن (BJRG)، ایک اور روایتی چینی جڑی بوٹیوں کی دوا، کو مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔

طریقے:Vivo تجربات میں، 75 SD چوہوں کو تصادفی طور پر 6 گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا: نارمل (آست پانی سے علاج شدہ)، ماڈل (BSA-علاج شدہ)، مثبت دوا (BSA-علاج شدہ پلس BJRG 600 mg/kg/day)، اور BSA-علاج علاوہ CPhGs (125، 250، اور 500 mg/kg/day) گروپس۔ جگر اور تلی کے اشاریے، اسپارٹیٹ امینوٹرانسفریز (AST) کے سیرم کی سطح، الانائن امینوٹرانسفریز (ALT)، ہیکساڈیسینوک ایسڈ (HA)، لیمینین (LN)، قسم III پروکولجن (PCIII)، قسم IVcollagen (IV-C)، ہائیڈروکسائپرولین (Hyp) )، اور ٹرانسفارمنگ گروتھ فیکٹر 1 (TGF- 1) کو چوہوں کے جگر میں ماپا گیا۔ H&E اور میسن کے ٹرائیکروم سٹیننگ کا استعمال کرتے ہوئے ہر گروپ کے لیے جگر کے فبروسس کے لیے ہسٹوپیتھولوجیکل گریڈز کا اندازہ لگایا گیا۔ TGF- 1، کولیجن I (Col-I)، اور کولیجن III (Col-III) کے اظہار کا تعین ایک امیونو ہسٹو کیمیکل سٹیننگ طریقہ سے کیا گیا تھا۔ NF-κB p65 اور Col-I کی مقداری ریئل ٹائم پی سی آر تجزیوں کے ذریعے اظہار کی سطح کا تعین کرکے ان اثرات کا مزید جائزہ وٹرو میں کیا گیا۔ کول-I پروٹین ایکسپریشن کا مغربی بلوٹنگ کے ذریعہ بھی معائنہ کیا گیا۔

نتائج: CPhGs کے تمام خوراک گروپس (125، 250، اور 500 mg/kg/day) نے جگر اور تلی کے انڈیکس کو نمایاں طور پر کم کیا، ALT، AST، HA، LN میں کمی واقع ہوئی۔ ، PCIII، IV-C سیرم کی سطح، TGF- 1 مواد (P < 0۔{14}}1،="" p="">< 0.01،="" اور="" p=""><0.01)، اور="" hyp="" مواد="" cphgs="" نے="" جگر="" کے="" خلیوں="" کی="" سوجن="" کو="" بھی="" واضح="" طور="" پر="" کم="" کیا="" اور="" مؤثر="" طریقے="" سے="" ہیپاٹوسیٹ="" نیکروسس="" اور="" سوزشی="" خلیوں="" کی="" دراندازی="" کو="" روکا۔="" امیونو="" ہسٹو="" کیمیکل="" نتائج="" سے="" پتہ="" چلتا="" ہے="" کہ="" cphgs="" نے="" tgf-="" 1="" (p=""><0.01، p=""><0.01، اور="" p=""><0.01)، col-i،="" اور="" col-iii="" کے="" اظہار="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" کیا="" ہے۔="" hsc-t6="" پر="" cphgs="" (100,="" 75,="" 50,="" اور="" 25="" ug/ml)="" کے="" وٹرو="" اثرات="" سے="" پتہ="" چلتا="" ہے="" کہ="" cphgs="" نے="" nf-κb="" p65="" اور="" col-i="" کے="" mrna="" اظہار="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" کیا،="" اور="" cphgs="" نے="" col-i="" پروٹین="" کے="" اظہار="" کو="" بھی="" کم="">

نتیجہ:CPhGs کا ایک اہم اینٹی ہیپاٹک فائبروسس اثر ہوتا ہے، اور اسے ہیپاٹک فائبروسس کے علاج کے لیے ہیپاٹو پروٹیکٹو ایجنٹ کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:ہیپاٹک فائبروسس،Cistanche tubulosa،Phenylethanoildگلائکوسائیڈکیموکین بی ایس اے، روک تھام اور تھراپی

PhenylethanoildglycosideمیںCistanchetubulosa

پس منظر

ہیپاٹک فائبروسس جگر کی شدید چوٹ کے لیے زخم بھرنے والا ردعمل ہے جو مختلف عوامل کی وجہ سے کرونیکیپاٹائٹس کے روگجنن میں ہوتا ہے۔ یہ عوامل وائرل انفیکشن، الکحل کی زیادتی، کولیسٹیسیس، اور میٹابولک اور آٹومیمون بیماریاں ہیں [1–3]۔ ایکسٹرا سیلولر میٹرکس (ECM) کا پروگریسو اکٹھا ہونا اور دوبارہ تشکیل دینے میں کمی جگر کے عام فن تعمیر میں خلل ڈالتی ہے، جس کے نتیجے میں ہیپاٹک فائبروسس ہوتا ہے [4]۔ ہیپاٹک فائبروسس جگر کی دائمی بیماری میں اہم ہے اور اکثر ناقابل واپسی سروسس اور سرطان پیدا کرتا ہے۔ فی الحال، ہیپاٹک فائبروسس کے علاج کے لیے کوئی طریقہ یا موثر دوائیں موجود نہیں ہیں۔ لہذا، یہ فوری طور پر ایک اینٹی ہیپاٹک فائبروسس دوا تلاش کرنے کی ضرورت ہے جو جگر کی چوٹ کو فبروسس اور کینسر کے بڑھنے کو کم کرے۔

Cistanchetubulosaڈبلیو (Orobanchaceae خاندان کا) ایک طفیلی پودا ہے جو چین میں سنکیانگ کے جنوبی علاقے میں بڑے پیمانے پر اگایا جاتا ہے [5]۔ لوگ عام طور پر اس کا استعمال گردوں کو متحرک کرنے، خون کی پرورش، آنتوں کو آرام دینے اور جوانی میں تاخیر کے لیے کرتے ہیں۔ یہ سرکاری طور پر چینی فارماکوپیا [6] میں درج ہے۔Cistanchetubulosaمختلف قسم کے فعال اجزاء پر مشتمل ہے۔ یہ شامل ہیںPhenylethanoildglycosides(CPhGs)، iridoids، اور polysaccharides۔ میں بہت سے فعال اجزاء میں سے ایکCistanchetubulosa، CPhGshave نے vivo اور in vitro study [7] دونوں میں قائل کرنے والے اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی تھکاوٹ، نیوروپروٹیکٹو، اور اینٹی سوزش اثرات کی نمائش کی۔ حالیہ برسوں میں، یہ اطلاع دی گئی ہے کہ CPhGs کے ہیپاٹوپروٹیکٹو اثرات ہوتے ہیں۔ ان اثرات کے زیر اثر ممکنہ میکانزم آزاد ریڈیکلز کی صفائی، جگر کی جھلیوں کا تحفظ، امیونوریگولیشن، اپوپٹوسس کی روک تھام، HBsAg اور HBeAg کے اظہار کی روک تھام، اور HBV DNA نقل کی روک تھام اور دیگر [8-11] ہیں۔ تاہم، ادب میں کچھ مطالعہ GPhCs کے اینٹی ہیپاٹک فائبروسس اثر پر توجہ دیتے ہیں۔ لہذا، اس مطالعے کا مقصد چوہوں میں بوائین سیرم البومین (BSA) کی حوصلہ افزائی ہیپاٹک فائبروسس کے اموڈل کا استعمال کرکے GPhCs کے اینٹی ہیپاٹک فائبروسس اثر کی تحقیقات کرنا ہے۔ HSC-T6 خلیوں میں متعلقہ مالیکیولر میکانزم کی چھان بین کی گئی۔

طریقے

کیمیکل اور ری ایجنٹس

ایک Hydroxyproline کٹ (Alkaline hydrolysis) (Lot:20140616) Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (China) سے خریدی گئی تھی۔ Rat TGF- 1 sandwichELISA kits (Lot: 238240615) Lianke Biotech Co., Ltd. (China) سے خریدی گئی تھیں۔ Rabbit Anti-CollagenI اینٹی باڈی (Lot: 140619)، Rabbit Anti-Collagen III antibody (Lot: 980788 W)، اور Rabbit Anti-TGF- 1 اینٹی باڈی (Lot: 140619) بیجنگ BiosynthesisBiotechnology Co., LTD (LTD) نے فراہم کی تھی۔ چین)۔ نارمل شیپ سیرم (ورکنگ فلوئڈ) (لاٹ: WP141214)، PV-6000 (لاٹ: WK141225)، اور DAB کٹ (لاٹ: K136621D) کے ساتھ منسلک Zhongshan Golden Bridge BiotechCo., Ltd. (China) سے خریدا گیا تھا۔ بنیادی اینٹی باڈیز کی کھوج 2. اینٹی باڈی سلوشن (Alk-Phos. Conjugated، Anti-rabbit) اور 2. اینٹی باڈی سلوشن (Alk-Phos. Conjugated، anti-mouse) (لاٹ: 272387) Invitrogen Company (USA) سے خریدی گئی .

بووائن سیرم البومین (BSA) (لاٹ: SLBG8239V) سگما (USA) سے خریدا گیا تھا۔ استعمال سے پہلے، BSA کو عام نمکین میں 18 g/L پر تیار کیا جاتا تھا، بیکٹیریا کو فلٹریشن کے ذریعے ہٹا دیا جاتا تھا، اور BSA کو 4 ڈگری پر ذخیرہ کیا جاتا تھا۔ بھیڑوں کے بالوں سے 1 جی لپڈ پر مشتمل فرینڈ کا نامکمل معاون (لاٹ: AF0220LA14، Shanghai yuan ye Bio-Technology Co., Ltd. (چین)) کو 2 جی مائع پیرافین کے ساتھ ملایا گیا تھا (لاٹ: 20130815، Tianjinical Co. لمیٹڈ. 600 ملی گرام/کلو گرام کی حراستی میں آست پانی۔

Phenylethanoild glycosideمیںCistancheروک تھام کے اثرات ہیں

پلانٹ مواد

Cistanche tubulosa(Orobanchaceae family) چین کے سنکیانگ کے علاقے منفینگ سے خریدا گیا تھا۔ اس مواد کی توثیق محقق جون ژاؤ، کلیدی لیبارٹری برائے اویغور طب، سنکیانگ کے انسٹی ٹیوٹ آف میٹیریا میڈیکا نے کی۔ واؤچر کے نمونے سنکیانگ کے انسٹی ٹیوٹ آف میٹیریا میڈیکا میں جمع کیے گئے تھے۔

CPhGs کی تیاری

کے خشک اور کٹے ہوئے rhizomesCistanchetubulosa(60 کلوگرام) 70 فیصد ایتھنول کے ساتھ مسلسل تین بار ریفلوکس کے نیچے سے نکالا گیا تھا، اور سالوینٹ کو تھیتھنول کا عرق حاصل کرنے کے لیے ہٹا دیا گیا تھا۔ ایتھنول کے عرق کو حاصل کرنے کے لیے AB-8 رال کا استعمال کرکے صاف کیا گیا۔phenylethanoidglycosides(CPhGs)۔ جانوروں کے مطالعے میں مختلف خوراک کے گروپس کے لیے استعمال ہونے والے CPhGs کے اسٹاک سلوشنز (500 mg/kg، 250 mg/kg، اور 125 mg/kg، بالترتیب) 0.5 فیصد (5 g/L) کاربوکسی میتھائل سیلولوز میں تحلیل کیے گئے تھے۔ سوڈیم نمک)۔

CPhGs کی مقدار

CPhGs میں دو اجزاء (echinacoside andacteoside) کے مشمولات کا تعین HPLC کے ذریعہ پہلے سے اطلاع شدہ طریقہ (Zhang et al. 2004)[12] کے ذریعے کیا گیا تھا۔ HPLC کو UV ڈیٹیکٹر سے لیس Shimadzu LC-10AHPLC کا استعمال کرکے انجام دیا گیا۔ HPLC کالم Phenomenex Gemini ODS کالم (250 × 4.6 mm, 5 μm) تھا۔ isocratic موبائل فیز میتھانول-acetonitrile-1 فیصد ایسٹک ایسڈ (15:10:75, v/v/v) پر مشتمل تھا۔ اخراج 40 منٹ کے لیے تھا اور بہاؤ کی شرح 0.6 mL/min رکھی گئی تھی۔ کالم کا درجہ حرارت 30 ڈگری پر مستقل رکھا گیا تھا۔ UV کا پتہ لگانا 334 nm پر تھا۔

جانور اور HSC-T6 سیل لائن

[گریڈ SPF] صحت مند بالغ مرد Sprague-Dawley (SD) چوہے (180–220 g) سنکیانگ میڈیکل یونیورسٹی اینیمل سینٹر، لائسنس نمبر: SCXK (نیا)2011–0004 سے خریدے گئے تھے۔ چوہوں کو مخصوص پیتھوجین فری (ایس پی ایف) چاؤ کھلایا گیا تھا۔ جانوروں کے تجربات سے متعلق تمام طریقہ کار کو سنکیانگ میڈیکل یونیورسٹی کے پہلے منسلک ہسپتال کی اینیمل ایتھکس کمیٹی نے منظور کیا تھا۔ چوہوں کو کنٹرول شدہ ماحولیاتی حالات میں پنجروں میں رکھا گیا تھا (25 ڈگری اور 12 گھنٹے روشنی/تاریک چکر) اور انہیں معیاری چوہوں کے گولے کھانے اور نلکے کے پانی تک مفت رسائی حاصل تھی۔ علاج سے پہلے چوہوں کے عادی تھے۔

ایک لافانی چوہا ہیپاٹک سٹیلیٹ سیل لائن، HSC-T6، ووہان پروسیل جین بائیوٹیکنالوجی کمپنی، LTD سے حاصل کیا گیا تھا۔ (ووہان، چین)۔ HSC-T6 خلیات Dulbecco's Modified Eagles Medium (High Glucose) (DMEM، بیجنگ، چین) میں 10 فیصد فیٹلبوائن سیرم (Gibco، جنوبی امریکہ)، 100 IU/ml penicillin، اور 100 ug/ml streptomycin (China) کے ساتھ مکمل کیے گئے تھے۔ ) 5 فیصد CO2 کے ساتھ 37 ڈگری پر آلودہ انکیوبیٹر میں۔

BSA سے متاثرہ جگر کی چوٹ اور علاج

75 SD چوہوں کو تصادفی طور پر چھ گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا: نارمل (آست پانی سے علاج شدہ)، ماڈل (BSA ٹریٹڈ)، مثبت دوا (BSA-علاج شدہ پلس BJRG 600 mg/kg/day) ، اور BSA سے علاج شدہ پلس CPhGs (125, 250, 500 mg/kg/day) گروپس۔ BSA سے علاج شدہ پلس CPhGs (125, 250, 500 mg/kg/day) گروپوں میں ہر گروپ میں 13 چوہے تھے، اور دوسرے گروپ میں ہر گروپ میں 12 چوہے تھے۔ بی ایس اے کی حوصلہ افزائی لیورینجوری ماڈل کو بنیادی حساسیت میں تقسیم کیا گیا ہے جس کے بعد مدافعتی حملہ ہوتا ہے) [13]۔ معمولی گروپ کے علاوہ، دوسرے گروپوں کو 0.5 ملی لیٹر (9 ملی گرام/ملی لیٹر) بی ایس اے ایف رینڈ کے نامکمل معاون کے ساتھ ایک سے زیادہ ذیلی انجیکشن لگائے گئے تھے، دن 1، دن 15، دن 22، دن 29، اور دن 36 کو بنیادی حساسیت کے لیے۔ پانچویں انجیکشن کے سات دن بعد، خون ratretinal vein plexus کے ذریعے حاصل کیا گیا اور سیرم البومین اینٹی باڈیز کے لیے ٹیسٹ کیا گیا۔ چوہے کے سیرم میں بی ایس اے اینٹی باڈی کا پتہ ڈبل ایگر ڈفیوژن طریقہ سے ہوا۔ حملے کا انجکشن 0.4 ملی لیٹر بی ایس اے کو نارمل سلائن میں ڈال کر BSA اینٹی باڈی پازیٹو چوہوں میں ہفتے میں دو بار دس بار کاڈل رگ کے ذریعے لگایا گیا تھا۔ انجیکشن کا ارتکاز اور اوقات 5۔{36}}, 5.50, 600, 6.50,700, 7.50, 8.50, 9.00, 9.50 اور 10.00 g/L دن 46 میں تھے۔ ، دن 50، دن 53، دن 57، دن 60، دن 64، دن 67، دن 71، دن 74 اور دن 78، بالترتیب۔ عام گروپ میں، BSA کی بجائے امیونولوجیکل پرائمری (حساسیت) اور ثانوی (حملہ) انجیکشن کے لیے نارمل نمکین کا استعمال کیا جاتا تھا، اور دیگر حالات وہی تھے جو ماڈل گروپ میں تھے۔

عام گروپ کو زبانی طور پر 10 ملی لیٹر/کلوگرام/دن کی خوراک کے ساتھ ڈسٹل واٹر دیا جاتا تھا۔ ماڈل گروپ کو زبانی طور پر 10 ملی لیٹر/کلوگرام/دن 0.5 فیصد CMC-Na سلوشن دیا گیا۔ BSA سے علاج شدہ پلس CPhGs (125,250، اور 500 mg/kg/day) گروپوں کو بالترتیب 125, 250, اور 500 mg/kg/day CPhGs دیے گئے۔ چوہوں کی روزانہ خوراک آخری انجیکشن کے بعد دو ہفتوں تک جاری رہی۔

تجرباتی مدت کے بعد، چوہوں کو 10 فیصد کلورل ہائیڈریٹ سے پہلے 12 گھنٹے کے لیے روزہ رکھا گیا اور پھر فوری طور پر ان کا استعمال کیا گیا۔ فوری طور پر استعمال ہونے والے ہر رتینڈ سے سیرم کے نمونے جمع کیے گئے۔ جگر کو دو مقاصد کے لیے کاٹا گیا تھا: (1) ہائپ کٹسنڈ کے لیے مائع نائٹروجن میں تحفظ (2) ہسٹولوجیکل اور امیونو ہسٹو کیمیکل امتحانات کے لیے 10 فیصد فارملڈہائیڈ میں فکسیشن۔ جانوروں کے مطالعے کی پوری مدت 93 دن تھی۔

Phenylethanoild glycosideمیںCistancheروک تھام کے اثرات ہیں

جگر اور تلی کے اشاریے۔

جگر اور تلی کو لیپروٹومی کے ذریعے الگ کیا گیا اور 4 ڈگری نارمل نمکین سے دھویا گیا۔ فلٹر پیپر سے زیادہ پانی جذب کرنے کے بعد، متعلقہ اشاریوں کا حساب لگانے کے لیے جگر اور تلی کا وزن کیا گیا: رشتہ دار اعضاء کا وزن=عضو کا وزن (g)/انفرادی باڈی ماس (g) × 100 فیصد [14]۔

جگر فبروسس کے مارکر کا تجزیہ

BSA سے متاثرہ جگر کی چوٹ کے خلاف CPhGs کے حفاظتی اثر کا اندازہ ALT اور AST (مائنڈ رے آٹومیٹک بائیو کیمیکل اینالائزر، A086A0182) کی پیمائش کرکے کیا گیا۔ جگر کے فبروسس کی نشوونما اور علاج کے اثرات کا تعین HA، LN، PC III، اور IV-C (کیمیلومینیسینس تجزیہ کار، TaiGeKeXin، MP2808) کی جانچ کرکے کیا گیا۔

ہائپ مواد اور TGF- 1 تجزیہ

جگر کے ٹشو میں Hyp کی سطح کا تعین کٹ کی ہدایات کے مطابق سپیکٹرو فوٹومیٹرک طریقہ سے کیا گیا تھا۔ Hyp کی سطح کو Hyp (ug)/پروٹین (mg) کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ Hyp (ug/mg)=(ماپا ہوا OD) - خالی OD)/(معیاری OD خالی OD) × 5 (ug/ml) × 10/ٹشو گیلے وزن (ml/mg)۔ TGF- 1 کے جگر کے ارتکاز کا پتہ کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق ELISA کٹس کے استعمال سے پایا گیا۔ فائبروسس پر CPhGs کے روکنے والے اثر کی تصدیق TGF- 1 کے اظہار کی سطح سے ہوئی۔

ہسٹوپیتھولوجیکل معائنہ

بائیں لاب کے اسی حصے میں موجود جگر کے ٹشو کو 10 فیصد فارملڈہائیڈ محلول میں نکال کر فکس کیا گیا۔ ہلکی مائکروسکوپ کے تحت ہسٹوپیتھولوجیکل تبدیلیوں کا مشاہدہ کرنے کے لیے ٹشوز کو روایتی H&E اور Masson'strichrome سٹیننگ سے داغ دیا گیا تھا۔ جگر کے ٹشوز میں کولیجن ٹائپ I، کولیجن ٹائپ III، اور TGF- 1 کے اظہار کا تجزیہ امیونو ہسٹو کیمیکل سٹیننگ [15] کے ذریعے کیا گیا۔

نیم مقداری امیونو ہسٹو کیمسٹری رپورٹ شدہ طریقوں کے مطابق انجام دی گئی تھی [16، 17]۔ TGF- 1 مثبت خلیوں کے لیے درج ذیل درجہ بندی کا استعمال کیا گیا: "-" تقریباً کوئی اظہار نہیں کرتا، 20=l؛ " پلس " انفرادی طور پر lesionarea میں جمع مثبت خلیات کی نشاندہی کرتا ہے، 21=2; "پلس پلس" گھاووں کے علاقے کے ارد گرد جمع ہونے والے چھوٹے گروپوں میں مثبت خلیات کی نشاندہی کرتا ہے، 22=4؛ " جمع جمع پلس " ظاہر کرتا ہے منتشر مثبت خلیات، جیسا کہ 23=8۔ نتائج درجہ بندی کے انضمام کی نمائندگی کرتے ہیں۔ کولیجن کی قسم Iand کولیجن کی قسم III کروموجینک ڈگری اور اسکوپ کو شماریاتی تجزیہ کے لیے CRI میں تبدیل کیا گیا تھا (کرومجینک ڈگری × کروموجینک رینج)۔ کروموجینک ڈگری کو کمزور "پلس"، اعتدال پسند "پلس پلس"، اور مضبوط "پلس پلس پلس" میں تقسیم کیا گیا ہے۔ کروموجینک رینج کو "پلس" میں تقسیم کیا گیا ہے، اس کی کروموجینک رینج < منظر="" 1/4؛="" "پلس="" پلس"،="" اس="" کی="" وژن="" کی="" کروموجینک="" رینج/4-2/4;="" "پلس="" پلس="" پلس"،="" اس="" کی="" وژن="" کی="" کروموجینک="" رینج="" 2/4-3/4؛="" "پلس="" پلس="" پلس="" پلس"،="" اس="" کی="" کروموجینک="" رینج=""> 3/4۔ بلائنڈ اسکورنگ دو لوگوں نے کی تھی جہاں "جمع" ہے 1؛ "جمع جمع" 2 ہے، "جمع جمع جمع" 3 ہے، اور "جمع جمع جمع پلس" 4 ہے۔ تین خوردبین مشاہداتی فیلڈز (میگنیفیکیشن × 200) کو ہر حصے کے لیے تصادفی طور پر منتخب کیا گیا تھا، جس میں نمونوں کی اوسط سطح بطور استعمال ہوتی ہے۔ نیم مقداری سطح

سیل کے تجربات

HSC-T6 سیلز کو ایک 96-کنویں پلیٹ میں چڑھایا گیا تھا۔ ابتدائی طور پر، سیلز کو DMEM کے ساتھ کلچر کیا گیا تھا جس میں 48 گھنٹے کے لیے 10 فیصد FBS تھا۔ اس کے بعد میڈیم کو DMEM کے ساتھ FBS کے بغیر تبدیل کر دیا گیا تاکہ خلیوں کو 12 گھنٹے تک بھوکا رکھا جا سکے۔ اس کے بعد خلیوں کو DMEM کے ساتھ کلچر کیا گیا جس میں 24 گھنٹے کے لیے 5.0 ng/mLTGF- 1 (FBS کے بغیر) شامل تھے۔ آخر میں، CPhGs کی مختلف تعداد (100ug/ml، 50ug/ml، اور 25ug/ml)، ایکٹیوسائیڈ (6 ug/ml، 3 ug/ml، اور 1.5 ug/ml)، andechinacoside (500ug/ml، 250ug/ml، اور 125ug/ml) کو پلیٹ میں چوکور کنوؤں میں نکالا گیا اور 48 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔

ریئل ٹائم پی سی آر تجزیہ

NF-κB، p65، اور collagenI کے mRNA اظہار کی سطح کا تعین ریئل ٹائم PCR کے ذریعے کیا گیا تھا۔ HSC-T6 خلیوں میں mRNA اظہار کا تعین کرنے کے لیے، خلیات (4 × 105 خلیات) کو چھ کنویں پلیٹوں میں 3 mL DMEM کے ساتھ 10 فیصد FBS کے ساتھ سیڈ کیا گیا اور رات بھر 37 ڈگری اور 5 فیصد CO2 پر انکیوبیٹ کیا گیا، جس کے بعد سیل کلچر میڈیا کو سیرم فری DMEM میں تبدیل کیا گیا تھا۔ اگلا، CPhGs (100 ug/ml، 50 ug/ml، اور 25 ug/ml)، acteoside (6 ug/ml، 3 ug/ml، اور 1.5 ug/ml)، اور echinacoside (500 ug/ml، 250 ug /ml، اور 125ug/ml) کو کنوؤں میں شامل کیا گیا۔ CPhGs یا monomeric کمپوزیشن کے ساتھ انکیوبیشن کے 48 گھنٹے کے بعد، کل RNA کو TRIzol reagent (Invitrogen, USA) کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا اور 15 سیکنڈ تک کلوروفارم کے ساتھ بھرپور طریقے سے مشتعل کیا گیا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 3 منٹ تک بیٹھنے کے بعد، لیسیٹ کو 12،000 × g پر 15 منٹ کے لیے 4 ڈگری پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ آبی مرحلے میں آر این اے کو آئسوپروپینول کے ساتھ تیز کیا گیا تھا، اور اوپری پانی کے مرحلے کو ایک نئی مائکرو سینٹرفیوج ٹیوب میں منتقل کیا گیا تھا۔ RNA کو 0.75 فیصد ایتھنول شامل کرکے تیز کیا گیا تھا، جس کے بعد مائیکرو سینٹرفیوج ٹیوب 12، 000 × g پر 4 ڈگری پر 5 منٹ سے زیادہ نہیں تھی۔ سپرنٹنٹ کو ہٹا دیا گیا تھا اور آر این اے کو کمرے کے درجہ حرارت پر 5-10 منٹ تک خشک کیا گیا تھا۔ پرائمرز کے مخصوص سیٹ (سنگون، شنگھائی، چین) جو چوہے کے ایکٹین کو بڑھانے کے لیے استعمال کیے گئے تھے [GenBank: NM_031144.3]، Collagen I [GenBank: NM_ 053304.1]، اور NF- κB p65[GenBank: NM_199267.2] جین بیچ پرائمر 3 کا استعمال کرتے ہوئے ڈیزائن کیے گئے تھے۔ فارورڈ (FW) اور ریورس (RV) پرائمر درج ذیل تھے: کولیجن I (FW: GGA GAGAGC ATG ACC GAT GG، RV: GGG ACT TCT TGAGGT TGC CA)، NF-κB p65 (FW: CAT ACG CTG ACCCTA GCC TG، RV: TTT CTT CAA TCC GGT GGCGA)، -ایکٹین (FW: TAA GGC CAA CCG TGA AAA GATG، RV: AGAGCTA سی اے جی جی جی اے سی اے اے سی اے سی اے)۔ اندرونی کنٹرول کے طور پر ہاؤس کیپنگ جین - ایکٹین کے mRNA پر نتائج کو معمول پر لایا گیا تھا اور اسے متعلقہ mRNA کی سطح کے طور پر پیش کیا گیا تھا۔

8 μL IQ SYBR GreenSupermix، 1 μL 10 pM پرائمر جوڑی، 8.5 μL ڈسٹل واٹر، اور 2.5 μL cDNA کے ساتھ رد عمل کا مظاہرہ کیا گیا۔ ہر پولیمریز چین کا رد عمل درج ذیل شرائط کے تحت انجام دیا گیا: 3 منٹ کے لیے 95 ڈگری، پھر 95 ڈگری پر 10 سیکنڈ کے 40 چکر، 55 ڈگری پر 30 سیکنڈ، اور توسیع کے لیے 55 ڈگری - 95 ڈگری پر 10 سیکنڈ، اس کے بعد سنگل فلوروسینس پیمائش۔ حتمی نتائج کو متعلقہ اقدار (2-ΔΔCt) کے ساتھ بیان کیا گیا تھا۔ حساب اور تجزیہ iQ5 ریئل ٹائم پی سی آر ڈیٹیکشن سسٹم کے ذریعے کیا گیا۔

مغربی دھبے کا تجزیہ

Collagen I (Abcam, Cambridge, UK, Art No: ab34710)پروٹین ایکسپریشن لیول کا تعین ویسٹرن بلاٹنگ [with-actin (Lot: 60008-1-lg; Proteintech, China) کے ذریعے ایک ہاؤس کیپنگ کنٹرول کے طور پر کیا گیا تھا۔ پورے خلیے کے نچوڑ کو ریڈیو امیونوپریسیپیٹیشن پرکھ (آر آئی پی اے) (تھرمو سائنٹیفک، یو ایس اے) بفر کے ساتھ 1 فیصد ہالٹ پروٹیز انحیبیٹر کاک ٹیل (تھرمو سائنٹیفک، یو ایس اے) اور 1 فیصد ہالٹ فاسفیٹیس انحیبیٹر کاک ٹیل (تھرمو سائنٹیفک، یو ایس اے) کے ساتھ تیار کیا گیا تھا۔ بریڈ فورڈ طریقہ [18] کے ذریعہ پروٹین کی حراستی کی پیمائش اور مقدار درست کی گئی۔ پروٹین (10–50 ug) کو 10 فیصد SDS-PAGE جیل پر الگ کیا گیا تھا اور PVDF جھلیوں (ملی پور، USA) میں منتقل کیا گیا تھا۔ 5 فیصد BSA کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت پر جھلیوں کو 1 گھنٹہ کے لیے بلاک کر دیا گیا تھا، اور بنیادی اینٹی باڈیز (اینٹی کولا جین I۔ اینٹی باڈی، 1:200 dilution یا mouse mAb of -actin,1:5000 dilution) کو راتوں رات 4 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ متعلقہ Alk-Phos. conjugated ثانوی اینٹی باڈیز کمرے کے درجہ حرارت پر incubated تھے. آخر میں، جھلیوں کو 1 × Tris – HClsaline کے ساتھ 0.1 فیصد ٹوین 20 کے ساتھ تین بار دھویا گیا، اور GEL DOC XR امیجنگ سسٹم (Bio-Rad) کے ذریعہ سگنلز کو اسکین اور تصور کیا گیا۔ ڈینسٹومیٹرک تجزیہ دلچسپی کے پروٹینوں پر کیا گیا اور GEL DOCImage Studio سافٹ ویئر (Bio-Rad) کے ذریعہ ایکٹین میں معمول بنایا گیا۔ ایکٹین کو اندرونی کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔

شماریاتی تجزیہ

Shapiro-Wilk نارملٹی ٹیسٹ اور لیوین کے مختلف حالتوں کی ہم آہنگی ٹیسٹ کا اطلاق تغیر کی نارملٹی اور یکسانیت کی تصدیق کے لیے کیا گیا تھا۔ تغیرات کا تجزیہ (ANOVA) جس کے بعد Tukey کے پوسٹ ہاک ٹیسٹ کا استعمال اعداد و شمار کے فرق کی شناخت کے لیے کیا گیا جو کہ عام طور پر تقسیم کیے گئے ڈیٹا میں نہیں ہے۔ Kruskal-Wallis نان پیرامیٹرک ٹیسٹ کو ڈیٹا کا تجزیہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا جو عام طور پر تقسیم یا یکساں نہیں ہے۔ نتائج کا اظہار اوسط ± SD کے طور پر کیا گیا تھا۔ اہمیت P < 0="" پر="" سیٹ="" کی="" گئی="" تھی۔{6}}5۔="" تمام="" ڈیٹا="" کا="" تجزیہ="" spss="" 16.0="" سافٹ="" ویئر="" (سنکیانگ="" میڈیکل="" یونیورسٹی)="" کے="" ذریعے="" کیا="">

نتائج

میں CPhGsCPhGs کا مقداری تعینCistanchetubulosaدو پر مشتمل ہےPhenylethanoildglycosides, echinacoside، اور acteoside، اور CPhGs میں ان کے مواد کو HPLC تجزیہ (تصویر 1) کے ذریعے بالترتیب 42.71 ± 0.42 فیصد اور 14.27 ± 0.18 فیصد مقرر کیا گیا تھا۔

جگر اور تلی کے اشاریے۔

جیسا کہ جدول 1 دکھایا گیا تھا، ماڈل گروپ کے جگر اور تلی کے اشاریے نمایاں طور پر بلند ہوئے تھے [P < 0۔{3}}1,p=""><0.05]۔ مختلف="" خوراک="" کے="" گروپوں="" میں="" مثبت="" دوائی="" bjrg="" اور="" cphgs="" کے="" جگر="" اور="" تلی="" کے="" اشاریے="" ماڈل="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" ہوئے="" تھے="" پلیور="0.005;" pspleen="0.017," pspleen="0.027," pspleen="0.024,PSpleen=0.070," بالترتیب]۔="" جگر="" اور="" تلی="" انڈی="" سیز="" ماڈل="" گروپ="" کے="" مقابلے="" کم="">

ALT، AST سرگرمیوں، اور جگر کے فبروسس مارکرز پر CPhGs کے اثرات

موجودہ مطالعہ میں، ماڈل گروپ میں ہیپاٹک اینزائمز AST اور ALT کے سیرم کی سطح میں نمایاں اضافہ ہوا، جو BSA کی حوصلہ افزائی جگر کے فبروسس چوہوں میں ہیپاٹو سیلولر نقصان کو ظاہر کرتا ہے۔ تاہم، تجربات نے ظاہر کیا کہ BJRG (600 mg/kg) اور CPhGs (125، 250، اور 500 ملی گرام/کلوگرام) کے ساتھ علاج میں نمایاں کمی آئی اسسٹ PALT=0.255، بالترتیب] ہیپاٹک فائبروسریٹس میں سطح۔ (ٹیبل 2)۔

ماڈل چوہوں میں HA, LN, PC اور IV-C کی سطحوں میں نمایاں اضافہ ہوا [PHA < 0۔{3}}01,="" pln="">< 0۔{39}="" }01،="" ppciii="0۔{45}}02،" piv-c=""><0.001، بالترتیب]۔="" ماڈل="" گروپ="" کے="" ساتھ="" مقابلے="" میں،="" ha="" [pha="0.009،" pha="0.007،PHA=0.009،" pha="0.023،" بالترتیب]،="" ln="" کی="" سطحیں="" [pln="0.011," pln="0.004," p="" ln="0.026," p="" ln="0.069," بالترتیب],="" pc="" iii[p="" pciii="" {{26="" }}.006،="" p="" pciii="0.067،" p="" pciii="0.136،" p="" pciii="0.296،" بالترتیب]،="" اور="" iv-c="" [p="" iv-c=""><0.001، p="" iv-c=""><0.001, p="" iv-c=""><0.001, p="" iv-c=""><0.001, بالترتیب]="" چوہوں="" میں="" bjrg="" (600="" mg/kg)="" اور="" cphgs="" کے="" مختلف="" خوراک="" گروپوں="" (125,="" 250,="" اور="" 500="" mg/kg)="" میں="" نمایاں="" کمی="" واقع="" ہوئی="" )="" (ٹیبل="">

ہائپ مواد اور TGF- 1

جگر کے بافتوں میں Hyplevels کی پیمائش کرکے کولیجن کے مواد کا بھی پتہ چلا۔ جیسا کہ جدول 4 میں دکھایا گیا ہے، ماڈل گروپ میں اوسط Hyp کی سطح عام گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھی، لیکن BJRG گروپ اور مختلف CPhGs خوراک گروپوں میں اس میں نمایاں کمی واقع ہوئی تھی۔

چوہوں میں ماڈل گروپ کے TGF{{0}} کی جگر کی حراستی میں نمایاں اضافہ ہوا [P < 0۔{8}}01]۔ماڈل="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں،="" مثبت="" دوائیوں="" کی="" tgf-="" 1="" سطحوں="" اور="" مختلف="" cphgs="" کے="" خوراک="" کے="" گروپوں="" میں="" واضح="" طور="" پر="" کمی="" آئی="" [p="" tgf-="" 1="">< 0.001,="" p="" tgf-="" 1=""><0.001,p tgf{{10="" }}=""><0.001، ptgf-="" 1=""><0.001، بالترتیب]۔="" نتائج="" کا="" خلاصہ="" جدول="" 4="" میں="" دیا="" گیا="">

ہسٹوپیتھولوجیکل معائنہ

H&E اور میسن کے ٹرائکروم کے ساتھ داغے ہوئے جگر کے ٹشو کے عام حصوں کے مشاہدات میں الگ ہیپاٹکلوبیلس اور ہیپاٹک سائنوسائڈز کی نمائش ہوتی ہے۔ ماڈل چوہوں میں جگر کے بافتوں کا ڈھانچہ خراب ہو گیا تھا، اور جگر کے ٹشو اور ہیپاٹک سینوسائڈز کی جگہ کنیکٹیو ٹشوز کی ایک بڑی مقدار لے لی گئی تھی۔ تاہم، ماڈل گروپ کے مقابلے علاج کے گروپ میں زیادہ نارمل سائٹو آرکیٹیکچر اور کم کنیکٹیو ٹشوز کا پتہ چلا۔

H&E سٹیننگ

عام گروپ میں، غیر معمولی پورٹل علاقوں اور ہیپاٹک سینوسائڈز کے بغیر ہیپاٹک لوبول کی ساختی سالمیت کا مشاہدہ کیا گیا۔ جگر کی ڈوریوں کو ایک منظم انداز میں ترتیب دیا گیا تھا، جس کا بنیادی حصہ گول اور صاف تھا۔ نیوکلی سیل کے بیچ میں واقع ہے، پرچر سائٹوپلازم کے ساتھ۔ صرف پورٹل ایریا میں تھوڑی مقدار میں ریشے دار ٹشو ہوتے ہیں (تصویر 2a)۔

ماڈل گروپ میں، لوبولر ڈھانچہ کو شدید نقصان پہنچا۔ جگر کے خلیات نے ہلکے پانی والے انحطاط کو ظاہر کیا، زیادہ تر غبارے کا انحطاط اور/یا فیٹی انحطاط۔ سوزشی خلیوں کی دراندازی کی تشکیل، وسیع ریشے دار ٹشو ہائپرپلاسیا، ریشے دار سیپٹم کی بڑی تعداد کی تشکیل، سپلٹ لابیولز، اور جگر کے خلیات کا نمایاں پھیلاؤ بھی دیکھا گیا۔ ہیپاٹک فائبروسس (تصویر 2 بی)۔

ماڈل گروپ کے مقابلے میں، مختلف CPhGs میں سوزش کے خلیوں کی دراندازی میں کمی تھی۔ یہ بھی دیکھا گیا کہ جگر کے خلیوں کی کم نیکروسس اور فیٹی انحطاط کے ساتھ ساتھ فائبروسس کا خاتمہ بھی۔ CPhG نے چوہوں میں BSA-inducedhepatic fibrosis کی پیتھالوجی کو نمایاں طور پر کم کیا، جگر کے خلیوں کی سوجن کو کم کیا، اور مؤثر طریقے سے ہیپاٹوسیٹ نیکروسس اور سوزش کے خلیوں کی دراندازی کو روکا، یہ تجویز کرتا ہے کہ CPhGsexert BSA-حوصلہ افزائی ہیپاٹک فائبروسس پر حفاظتی اثر ڈالتا ہے۔ (تصویر 2c–f)۔

میسن کا ٹرائیکروم سٹیننگ

عام گروپ میں، جگر کے ٹشو نارمل تھے۔ ہیپاٹک پورٹل ایریا میں بلیو کولیجن ریشوں کی ایک چھوٹی سی تعداد ظاہر ہوئی، اور جگر کے ٹشو کو عام طور پر ساختہ کیا گیا تھا (تصویر 3a)۔ عام گروپ کے جگر کے ٹشو کے مقابلے میں، ریشے دار ٹشو مرکزی لیفلیٹ کے ذریعے پھیلتے ہیں اور جگر کے پیرینچیما میں پھیل جاتے ہیں۔ کولیجن کے ریشے پھیلے ہوئے اور جڑے ہوئے اور پورے لوبول کو لپیٹے ہوئے اور مرکزی رگ کو گھیر لیا۔ ان اثرات کے ساتھ ہیپاٹوسائٹ فائبروسس،لوبولر سٹرکچرل ڈیمیج، پیری پورٹل فائبروسس، اور سیوڈولوبل فارمیشن (تصویر 3b) نے اس بات کا ثبوت فراہم کیا کہ ماڈل قائم کیا گیا تھا۔

ماڈل گروپ کے مقابلے میں، مثبت منشیات کے کنٹرول گروپ میں کولیجن ریشے پردیی پورٹل ایریا (تصویر 3c) سے ہلکے سے باہر کی طرف بڑھے ہوئے تھے۔ ماڈل گروپ کے ساتھ موازنہ کرتے ہوئے، مختلف CPhGs خوراک گروپوں میں کولیجن ریشوں کو نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا، فائبر کے پھیلاؤ کو روک دیا گیا تھا، اور جگر کے پیرینچیما کے اندر اففبروس ٹشو کے پھیلاؤ کو نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا۔ ان نتائج نے تجویز کیا کہ CPhGs نے بی ایس اے کی حوصلہ افزائی ہیپاٹک فائبروسس (تصویر 3d–f) سے درجہ بندی کی ہے۔

امیونو ہسٹو کیمیکل داغ

اہم بات یہ ہے کہ کولیجن ٹائپ I اور کولیجن ٹائپ III کا اظہار ہیپاٹک فائبروسس کی نشوونما میں اہم کردار ادا کرتا ہے، اور جگر کے بافتوں میں ان کی تخلیق اور جمع ہونا اینٹی ہیپاٹک فائبروسس افادیت کے ایک اہم تعین کے طور پر کام کر سکتا ہے۔ نتائج کا خلاصہ جدول 5 میں دیا گیا ہے۔

کولیجن قسم I

عام گروپ نے بنیادی طور پر خون کی نالیوں اور پورٹل ایریا میں کولیجن ٹائپ I کا اظہار کیا۔ ماڈل گروپ نے پورٹل ایریاز میں کولیجن ٹائپ I ویسکولر فائبروسس کا بہت زیادہ اظہار کیا۔ Disse کی جگہ میں، کولیجن قسم I کے داغ کو ایک لکیر کے طور پر یا ایک پیچیدہ تقسیم کے طور پر دیکھا گیا۔ سیوڈولوبیول بنانے کے لیے کولیجن نے فائبروسپٹا کو گھیر لیا۔ ان تجربات میں، BJRJ (600 mg/kg) اور CPhGs (125, 250, اور 500 mg/kg) [PCol I= 0.002, PCol I {{6} کے مختلف خوراک گروپس کے لیے کم ریشہ دار سیپٹا تشکیل دیا گیا تھا۔ }}.001، PCol I=0.023، اور PCol I=0.044، بالترتیب]۔ نیم مقداری نتائج نے انکشاف کیا کہ ان کے کولیجن قسم I کا اظہار ماڈل گروپ (تصویر 4) کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھا۔

کولیجن کی قسم III

کولیجن کی قسم III کا عام گروپ میں کمزوری سے اظہار کیا گیا تھا، اور پورٹل اور ہیپاٹک رگوں کے آس پاس کے پردیی علاقوں میں مسلسل ریشوں کی بجائے تھوڑی مقدار میں باریک پیلے رنگ کی نمائش ہوتی ہے (تصویر 5a)۔ ماڈل گروپ میں، کولیجن ریشوں نے چوڑی اور موٹی ڈوریوں کی نمائش کی، جو مضبوط اظہار کی نشاندہی کرتے ہیں، جو بنیادی طور پر پورٹل اور ریشے دار ٹشو والے علاقوں میں واقع ہیں (تصویر 5b)۔

BJRJ (600 mg/kg) کے کولیجن فائبر اور CPhGs کے مختلف خوراک گروپس (125، 250، اور 500 mg/kg) تنت دار تھے اور مرکزی رگ اور پورٹل علاقوں کے ارد گرد تقسیم کیے گئے تھے۔ ماڈل گروپ کے مقابلے میں، کولیجن کے ریشے نمایاں طور پر کم ہو گئے تھے، داغ دھبے پیلے اور پتلے تھے، اور امیونو ہسٹو کیمیکل سٹیننگ کمزور مثبت تھا (تصویر 5c–f)۔ یہ نیم مقداری نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ مثبت اور مختلف خوراک کے گروپس [PCol III=0.015، PCol III=0.001، PColIII=0.010، اور PCol III میں مثبت طور پر ظاہر کردہ خلیات=0.037، بالترتیب] ماڈل گروپ میں شامل لوگوں سے مختلف تھے۔

TGF- 1

عام چوہے کے جگر کے خلیوں میں TGIF- 1 کا بہت کم اظہار تھا۔ اظہار مختصر تعداد میں بیچوالا خلیوں تک محدود تھا (تصویر 6a)۔ ماڈل گروپ میں، TGF- 1 اظہار پورٹل ایریا، فبروس اسپیسز، ہیپاٹک سٹیلیٹ سیلز، انفلامیٹری سیلز، سائنوسائیڈل وال اور سائٹوپلازم میں وسیع پیمانے پر تقسیم کیا گیا تھا۔ ایک خاص پورٹل ایریا نے بھورے پیلے داغ کے ساتھ ایک مضبوط مثبت اظہار دکھایا (تصویر 6b)

پورٹل ایریا اور BJRJ (600 mg/kg) اور CPhGs (125، 250، اور 500 mg/kg) کے مختلف خوراک گروپس کے ریشے دار سیپٹا میں اظہار کی ایک چھوٹی سی مقدار تھی۔ ماڈل گروپ کے مقابلے میں ان گروپوں میں مثبت داغ کی حد کو نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا۔ ریشے دار سیپٹا اور سوزش خلیوں کے سائٹوپلازم میں بیچوالا خلیوں میں داغ کم ہو گیا تھا (تصویر 6c–f)۔ نیم مقداری نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ BJRJ اور CPhGs کے مختلف خوراک گروپس [P TGF- 1=0.001, P TGF- 1 <0.001, p="" tgf-="" 1="0.009," ptgf-="" 1="0۔" 004،="" بالترتیب]="" ماڈل="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں="" اہم="">

جیسا کہ پہلے مضمون میں ذکر کیا گیا ہے، TGF- 1 جگر کے فبروسس کے پیتھوفیسولوجی میں ایک اہم سائٹوکائن ہے، جو ایکسٹرا سیلولر میٹرکس کی پیداوار کو متحرک کرتی ہے [19]۔ ہم نے دکھایا کہ ماڈل گروپ میں TGF- 1 کی سطح جگر کے فبروسس کی شدت کے مطابق بڑھی ہے۔ جگر میں TGF- 1 کے اظہار کی سطح سیرمTGF- 1 سطحوں کے ساتھ مطابقت رکھتی تھی۔ اس سے ظاہر ہوتا ہے کہ CPhGs ECM کی ترکیب اور انحطاط میں حصہ لے کر TGF- 1 اظہار کی وجہ سے جگر کے فبروسس کو نمایاں طور پر کم کر سکتے ہیں۔

کولیجن ٹائپ I، کولیجن ٹائپ III، اور TGF- 1 کا اظہار ہیپاٹک فائبروسس کے پیتھولوجیکل عمل کا پتہ لگا سکتا ہے۔ علاج کے گروپوں میں ان کے اظہار کی سطح میں نمایاں کمی واقع ہوئی ہے اور یہ واضح کیا گیا ہے کہ CPhGs کولیگنیز کی سرگرمی کو بہتر بنا سکتے ہیں، جگر کے ECM کی ترکیب اور انحطاط کے متحرک توازن کو برقرار رکھتے ہیں، اس طرح جگر کے فبروسس کی تشکیل میں تاخیر اور روک تھام ہوتی ہے۔

HSC-T6 خلیوں میں منشیات کی مداخلت کے بعد NF-κB p65 اور کولیجن I کا اظہار۔

ہیپاٹک فائبروسس کے سگنلز کو نمایاں کرنے کے لیے، جگر میں دو اہم ریگولیٹری جینز کا تعین RT-PCR پرکھ کے ذریعے کیا گیا تھا۔ اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ کنٹرول گروپ کے thHSC-T6 خلیوں میں NF κB اور کولیجن ٹائپ I mRNA کی کم سطح تھی۔ اس کے برعکس، TGF- 1 نے HSC-T6 خلیوں کو NF-κB (P < 0="" 01)="" اور="" col-i="" (p=""><0.01) mrna="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" اپ="" گریڈ="" کرنے="" کے="" لیے="" آمادہ="" کیا،="" جس="" کی="" سطح="" اس="" سے="" زیادہ="" ہے۔="" وہ="" لوگ="" جو="" کنٹرول="" گروپ="" میں="" ہیں۔="" cphgs="" کے="" مختلف="" ارتکاز="" کی="" موجودگی="" میں،="" 100="" ug/ml="" کے="" لیے="" nf-κb="" p65="" [p="" nf-κb="0.001" کے="" نتائج،="" 75="" ug/ml="" کے="" لیے="" p="" nf-κb="0.002" ,="" p="" nf-κb="0.007" برائے="" 50="" ug/ml،="" اور="" p="" nf-κb="0.012" برائے="" 25="" ug/ml،="" بالترتیب]="" اور="" col-i="" [p="" col-i="" {{32="" }}.006،="" p="" col-i="0.009،" p="" col-i="0.014،" p="" col-i="0.019،" بالترتیب]="" نے="" ان="" mrnas="" کے="" کم="" اظہار="" کو="" دکھایا="" (="" تصویر="">

HSC-T6 خلیوں میں منشیات کی مداخلت کے بعد کولیجن I کی سطح کا مغربی بلٹ تجزیہ

شکل 8 مختلف تجرباتی گروپوں کے HSC-T6 خلیوں میں کولیجن I پروٹین کے اظہار کی سطح کو ظاہر کرتا ہے۔ CPhGs (100 ug/ml، 75 ug/ml، 50 ug/ml، 100 ug/ml، 75 ug/ml، CPhGs کے مختلف خوراک گروپوں میں کولیجن I پروٹین اظہار کی سطح نمایاں طور پر کم ہوئی تھی۔ اور 25 ug/ml) TGF- 1 گروپ کے مقابلے میں۔

بحث

CPhGs ایک phenylethanoid glycoside ہے جسے Cistanche کے rhizome سے الگ تھلگ اور پاک کیا جاتا ہے، جو روایتی چینی جڑی بوٹیوں کی دوا کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔ حالیہ برسوں میں، CPhGshad کو جگر کی چوٹوں کو روکنے کی طاقتور صلاحیت کے حامل دکھایا گیا ہے [20]۔ لہذا، ہمارا مقصد یہ تحقیق کرنا ہے کہ آیا CPhGs کے چوہوں میں BSA سے حوصلہ افزائی ہیپاٹک فائبروسس کے ہیپاٹائٹس فبروسس پر روکنے والے اثرات ہیں۔ BJRG عام طور پر چین میں ہیپاٹک فائبروسس کے لیے علاج کی دوا کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔ اسے کچھوے کے خول سے بنایا جاتا ہے۔ Radix PaeoniaRubra، Cordyceps Sinensis، Radix isatidis، وغیرہ کیوئ اور خون کو بھرنے، تھکاوٹ کو دور کرنے، نوڈس کو نرم کرنے کے اثرات ہیں۔ اس کے علاوہ، پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ اس میں ابتدائی جگر کے فبروسس کو روکنے، چربی ذخیرہ کرنے والے خلیوں کے پھیلاؤ کو روکنے، اور کولیجن کی ترکیب کو کم کرنے کا واضح کام ہے [21]۔ لہذا، BJRG اس مطالعہ میں ایک مثبت دوا کے طور پر استعمال کیا گیا تھا.

بی ایس اے انجیکشن کے ذریعہ چوہوں میں ہیپاٹک فائبروسس کی پیتھولوجیکل تبدیلیاں ہیومن پورٹل سروسس [22] کی طرح ہیں۔ CPhGs کی خوراک پر انحصار کرتے ہوئے جگر کے فبروسس کی ڈگری کو کم کیا اور HSC کی تبدیلی کو myofibroblast جیسے خلیوں میں روکا، سیرم ALT، AST، HA، LN، CIV، TGF- 1، اور جگر کے انڈیکس کی بلند سطحوں کو کم کیا، اور واضح طور پر کولیجن کے اظہار کو دبایا گیا۔ I، کولیجن III، اور TGF- 1 جگر کے بافتوں میں۔

ہیپاٹک فائبروسس کے مراحل HA، LN، اور IV-C کے انرم لیولز کے ساتھ منسلک ہوتے ہیں، جو کہ بطور مارکر ہیپاٹک فائبروسس کی ڈگری کا پتہ لگانے میں کردار ادا کر سکتے ہیں [23]۔ یہ اطلاع دی گئی ہے کہ HA ایکسٹرا سیلولر میٹرکس کا بڑا وسیلہ ہے۔ IV-C تہہ خانے کی جھلی کے لازمی عنصر کے طور پر کافی مقدار میں ترکیب کیا جائے گا اور جگر سرروسس کے ابتدائی مراحل میں بہت زیادہ جمع کیا جائے گا۔ LN اور IV-C کے سیرم کی سطح تہہ خانے کی جھلی کے ٹرن اوور کی شرح کے اشاریہ جات ہیں اور پورٹل ایریا اور سائنوسائیڈل کیپلیریوں میں فائبروسس کی ڈگری کو ظاہر کرتے ہیں [24]۔ پی سی III ہیپاٹک فائبروسس اور ابتدائی سروسس کی تشخیص میں ایک مارکر ہے، لیکن اس کی حساسیت اور خاصیت زیادہ نہیں ہے، اور بہت سے حوالوں میں آففبروسس کے مختلف مراحل کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں ہے [24، 25]۔ اس مطالعہ نے اسی طرح کا نتیجہ حاصل کیا.

اس کے علاوہ، ایچ اینڈ ای اور میسن کے ٹرائیکروم سٹینڈ سیکشن مشاہدات جگر کے نارمل ٹشوز کو الگ الگ ہیپاٹک لابیولز اور ہیپاٹک سینوسائڈز کے ساتھ ظاہر کرتے ہیں۔ ماڈل گروپ میں جگر کے ٹشو کا ڈھانچہ خراب ہو گیا تھا، اور جگر کے ٹشو اور ہیپاٹک سائنوسائڈ کو کنیکٹیو ٹشو کی بڑی مقدار سے تبدیل کر دیا گیا تھا۔ تاہم، ماڈل گروپ کے مقابلے میں علاج کے گروپوں میں نمایاں بہتری دیکھی گئی۔

اہم بات یہ ہے کہ کولیجن ٹائپ I اور کولیجن ٹائپ III ایکسپریشن ہیپاٹک فائبروسس کی نشوونما میں اہم کردار ادا کرتے ہیں، جس کا بلاک ہونا ہیپاٹک فائبروسس کو روک سکتا ہے اور اس کا علاج کر سکتا ہے۔ لہذا، کولیجن ٹائپ I اور کولیجن ٹائپ III کے جگر کے بافتوں میں نسل اور جمع ہونا اینٹی ہیپاٹک فائبروسس کی افادیت کے ایک اہم عامل کے طور پر کام کر سکتا ہے۔ TGF- 1 جگر کی چوٹ میں ایک اہم پروفبروجینک سائٹوکائن بھی ہے اور یہ متعدد فارماسولوجیکل افعال کے ساتھ حیاتیاتی طور پر فعال ہے[26]۔ ٹشو ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھنے کے لیے ان اعمال کے درمیان توازن کی ضرورت ہے۔ TGF 1 کا غیر معمولی اظہار جگر کی بیماریوں کے روگجنن میں شامل ہے [27, 28]۔ یہ معلوم ہے کہ TGF- 1 ایک اہم سائٹوکائن ہے جو جگر کے فبروسس کے ابتدائی مراحل میں شامل ہے۔ آکسیڈیٹیو تناؤ TGF- 1 کو متحرک کرتا ہے، جس کے نتیجے میں مؤخر الذکر ECM کی پیداوار اور جمع [29] کو متحرک کرتا ہے۔ لہذا، اینٹی ہیپاٹک فائبروسس دوائی تیار کرنے کی ایک موثر حکمت عملی اینٹی ٹی جی ایف- 1 ایجنٹوں کی شناخت کرنا ہے۔ امیونو ہسٹو کیمیکل تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ کولیجن قسم I، کولیجن قسم III، اور TGF- 1 کے تاثرات ہیپاٹک فائبروسس کے پیتھولوجیکل عمل کا پتہ لگا سکتے ہیں۔ علاج کے گروپوں میں کولیجنٹائپ I، کولیجن ٹائپ III، اور TGF- 1 کے تاثرات کم ہو گئے ہیں، جو خاص طور پر اعلی خوراک CPhGs ٹریٹمنٹ گروپ میں نمایاں طور پر کم تھے، اور تجویز کیا کہ CPhGs ایک موثر کولیجن ٹائپ I، کولیجن ٹائپ III ہے۔ ، اور TGF- 1 روکنے والا۔ ممکنہ طور پر، CPhGscan کولیجنیز کی سرگرمی کو بہتر بناتا ہے، ECM کی ترکیب اور انحطاط کے متحرک توازن کو برقرار رکھتا ہے، اس طرح جگر کے فبروسس کی تشکیل میں تاخیر اور روک تھام کرتا ہے۔

CPhGs نہ صرف چوہوں میں BSA کی حوصلہ افزائی ہیپاٹک فائبروسس کو بہتر بنا سکتے ہیں بلکہ یہ وٹرو میں HSC کے ایکٹیویشن کو روکنے سے بھی وابستہ ہو سکتے ہیں۔ HSC ایکٹیویشن فبروجنیسیس کے اہم مرحلے کی نمائندگی کرنے کے لیے سوچا جاتا ہے۔ اس مطالعہ میں، نتائج نے واضح کیا کہ 25 سے 100 ug/ml تک CPhGs کی انتظامیہ نے HSC میں NF-κB p65، کولیجن I mRNA اظہار، اور کولیجن I پروٹین اظہار میں کمی کو نمایاں طور پر کم کیا۔

NF-κB انفیکشن یا محرک [30] کے خلاف مدافعتی ردعمل کو ماڈیول کرنے میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے۔ جگر کے خلیوں میں NF-κB کی تعمیر کے نتیجے میں سوزش والی سائٹوکائنز / ثالثوں کی بھرتی ہوسکتی ہے، اس طرح فبروسس کی ترقی [31، 32] کی حوصلہ افزائی ہوتی ہے۔ مزید یہ کہ کولیجن ایک حساس انڈیکس بھی ہے جو فائبروسس کی سطح کو ظاہر کرتا ہے اور ریشے دار جگر میں کل پروٹین کا تقریباً 50 فیصد ہوتا ہے [33]۔ نتیجے کے طور پر، ہم نے فرض کیا کہ ہیپاٹک فائبروسس کے خلاف مالیکیولر میکانزم NF-κB اظہار کی CPhGs کی ثالثی سے غیر فعال ہونے سے منسلک ہے، جس میں فائدہ BSA-lesioned livertisue میں امیونوٹوکسائٹی اور سوزش کے تناؤ کو کم کرنے کے ہم آہنگی کے کرداروں میں حصہ ڈالتا ہے، اور اس کے نتیجے میں بی ایس اے کے نقصان دہ جگر کے ٹشوز کو مزید درست کرنے میں مدد ملتی ہے۔

نتائج

آخر میں، ہمارے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ CPhGs چوہوں میں BSA کی طرف سے حوصلہ افزائی ہیپاٹک فائبروسس کی حد کو نمایاں طور پر کم کرتے ہیں۔ اس کا طریقہ کار کم از کم جزوی طور پر ECM کی ساخت پر CPhGs کے روکنے والے اثر اور ECM کے تنزلی کے محرک، اور/یا کولیجن ٹائپ آئی، کولیجن ٹائپ III، اور TGF کے اظہار کی براہ راست روک تھام کے سبب ہو سکتا ہے۔ }}۔ پہلے، ہم نے توقع کی تھی کہ CPhGs کو صحت کی دیکھ بھال کی مصنوعات میں یا انسانی جگر کے فبروسس کی روک تھام کے لیے طبی ادویات میں استعمال کیا جا سکتا ہے۔ CPhGs کی افادیت کو ایک طاقتور اینٹی ہیپاٹک فبروسس دوا کے طور پر قائم کرنے کے لیے مستقبل کے مطالعے کی ضرورت ہے۔

مخففات

CPhGs: cistanche سے anol glycosides؛

BSA: بوائین سیرم البومین؛

HSC-T6: ہیپاٹک سٹیلیٹ سیل؛

Hyp: Hydroxyproline;

BJRG: کمپاؤنڈ بیجیرانگن گولیاں؛

TGF- 1: تبدیلی کی ترقی کا عنصر 1؛

ALT: Alanineaminotransferase؛

AST: Aspartate aminotransferase؛

HA: Hyaluronic ایسڈ؛

LN: Laminin؛ پی سی III: قسم III پروکولجن؛

IV-C: قسم IV کولیجن؛

NF-κB: نیوکلیئر فیکٹر کپا-لائٹ چین-فعال بی خلیوں کا اضافہ کرنے والا؛

RT-PCR: Reversetranscriptase-polymerase سلسلہ رد عمل؛

SDS-PAGE: Sodium dodecyl سلفیٹ-polyacrylamide جیل الیکٹروفورسس۔

مسابقتی مفادات

مصنفین اعلان کرتے ہیں کہ ان کی کوئی مسابقتی دلچسپی نہیں ہے۔

مصنفین کی شراکتیں۔

TL, JZ, SPY, LM, MT, اور SLZ نے تجربات کو تصور کیا اور ڈیزائن کیا۔ SPY, TL، اور JZ نے ڈیٹا کا تجزیہ کیا۔ SPY اور JZ نے مخطوطہ لکھا۔ TL، LM اور JZ نے مخطوطہ کا جائزہ لیا۔ تمام مصنفین نے حتمی مخطوطہ کو پڑھا اور اس کی منظوری دی۔

اعتراف

اس تحقیق کو نیشنل نیچرل سائنس فاؤنڈیشن آف چائنا (81260624) نے سپورٹ کیا۔ مصنفین اس مقالے کی تحریر کے لیے تجویز کردہ بہتری کے لیے پروفیسر تاؤ لیو کا تہہ دل سے شکریہ ادا کرنا چاہیں گے۔

مصنف کی تفصیلات

1شعبہ برائے زہریلا، سکول آف پبلک ہیلتھ، سنکیانگ میڈیکل یونیورسٹی، نمبر 393 Xinyi روڈ، Urumqi 830011Sinjiang Uyghur Autonomous Region، China۔ 2 کلیدی لیبارٹری برائے ایغور میڈیسن، انسٹی ٹیوٹ آف میٹیریا میڈیکا آف سنکیانگ، ارومچی 830004، چین۔ 3 نہیں 140 Xinhua South Road, Tianshan District, Urumqi 830000Sinjiang Uyghur Autonomous Region, China۔

چیک کرنے کے لیے یہاں کلک کریں۔Cistanchetubulosaمصنوعات

حوالہ جات
1. Cohen-Naftaly M, Friedman SL. دائمی جگر کی بیماری والے مریضوں میں ناول اینٹی فبروٹک علاج کی موجودہ حیثیت۔ The Adv Gastroenterol. 2011؛ ​​4(6):391–417۔
2. پوچے جے ای، سائمن وائی، فریڈمین ایس ایل۔ ہیپاٹک سٹیلیٹ سیلز اور لیور فبروسس۔ Compr Physiol. 2013؛3(4):1473–92۔
3. Hernandez-Gea V, Friedman SL. جگر فبروسس کا روگجنن۔ انو ریو پاتھول۔ 2011؛ ​​6:425–56۔
4. سہراب پور اے اے، محمدنجد ایم، ملک زادہ آر۔ ریویو آرٹیکل: دی ریورسیبلٹی آف سائروسس۔ Aliment Pharmacol Ther. 2012؛36(9):824–32۔
5. ریوین پی ایچ، ژانگ ایل بی، وینٹینیٹ او چائنیز اکیڈمی آف سائنسز۔ 23 ویں ایڈیشن چین: فلورا آف چائنا کی ادارتی کمیٹی؛ 2013. صفحہ 1-16۔
6. چینی فارماکوپیا کمیشن برائے سینیٹری منسٹری آف دی عوامی جمہوریہ چین۔ چینی فارماکوپیا، حصہ 1۔ چین: کیمیکل انڈسٹری پبلشنگ ہاؤس؛ 2010. صفحہ 126.
7. یان جی ایچ، تیان جے ایچ، لانگ بی ڈبلیو، لی این کی تحقیقی پیشرفتphenylethanoidglycosidesسےCistanchetubulosa. سینٹرل ساؤتھ فارم۔ 2012؛ 10:692–5۔
8. Li J, Huang D, He L. Leigongteng کے glycoside (Radix et Rhizoma Tripterygii) کے ذریعے پیدا ہونے والے چوہوں میں تولیدی زہریلے پن پر Rou Cong Rong (Herba Cistanches Deserticolae) کا اثر۔ J Tradit Chin Med. 2014؛34(3):324–32۔
9. Xing Y، Liao J، Tang Y، Zhang P، Tan C، Ni H، et al. ACE، اور Tamarix hohenackeri Bunge سے پلیٹلیٹ ایگریگیشن روکنے والے (میزبان پلانٹہرباسیستانچس) سنکیانگ میں بڑھتی ہوئی. فارماکگن میگ۔ 2014؛10(38):111–7۔
10. Jia Y، Guan Q، Jiang Y، Salh B، Guo Y، Tu P، et al. چوہوں میں ڈیکسٹران سلفیٹ سوڈیم سے متاثرہ کولائٹس کی اصلاحCistanchetubulosa. Phytother Res. 2014؛28(1):110–9۔
11. وونگ ایچ ایس، کو کے ایم۔ Herba Cistanches H9c2 cardiomyocytes میں mitochondrial سانس سے پیدا ہونے والی رد عمل آکسیجن پرجاتیوں کے ذریعے سیلولر glutathione redox سائیکلنگ کو متحرک کرتا ہے۔ فارم بائیول۔ 2013؛51(1):64–73۔
12. ژانگ ایس جے، لیو ایل، یو جے وائی۔ ARP: ایک RP-HPLC طریقہ جو کہ ہربی سیستانچس میں echinacoside اور acteoside کے بیک وقت تعین کرتا ہے۔ چن فارم جے 2004؛ 39(10): 740-741۔
13. Zhu QG، Fang BW، Zhu QN، Wu HS، Fu QL. مدافعتی جگر فبروسس جانوروں کے ماڈل کا مطالعہ جو بوائین سیرم البومین کے ذریعہ حوصلہ افزائی کرتا ہے۔ چن جے پاتھول۔ 1993؛ 22:121-2۔
14. کن ڈی ایم، وین زیڈ پی، نی وائی آر، یاو جی ایم۔ CCl4-کی حوصلہ افزائی ہیپاٹک فائبروسس پر Cichorium glandulosum نچوڑ کا اثر۔ ایران ریڈ کریسنٹ میڈ جے 2013؛ 15، e10908۔
15. Niu HM، Zeng DQ، Long CL، Peng YH، Wang YH، Luo JF، et al. Dodonaea viscosa سے Clerodane diterpenoids اور prenylated flavonoids۔ J Asian Nat Prod Res. 2010؛12(1):7–14۔
16. لی ڈبلیو ڈبلیو، سونگ ایکس ڈبلیو، وانگ ایچ ڈبلیو، شین بی ایس، وانگ کیو سی۔ NF-κB کا باہمی تعلق اور دائمی ہیپاٹائٹس بی کے مریضوں میں جگر کے فبروسس کے پیتھولوجیکل اسٹیجنگ۔ چن جے امیونول۔ 2013؛29(3):251–4۔
17. Zhang GL، Shi XF، Ran CQ، Xu M، Zhu ZJ. چوہوں میں جگر کے فبروسس کے خلاف Panax notoginseng کے کل saponins کے اثرات۔ Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiary. 2007؛ 29:2212–4۔
18. Rossi O، Maggiore L، Necci F، Koberling O، MacLennan CA، et al. میمبرین اینٹیجنز (GMMA) کے لیے عام ماڈیولز کے پروٹین کی مقدار کے لیے مقداری امینو ایسڈ تجزیہ کے ساتھ رنگی میٹرک اسیس کا موازنہ۔ مول بائیو ٹیکنالوجی۔ 2015؛57(1):84–93۔
19. ڈانگ ایس ایس، لی وائی پی۔ جگر فبروسس کے روگجنن میں ترقی کے عنصر کو تبدیل کرنے کے کردار کو سمجھنے میں پیشرفت- 1۔ شیجی ہوارین ژاؤہوا زازی۔ 2010؛ 18:1631–6۔
20. ژاؤ جے، لیو ٹی، ما ایل، یان ایم، ژاؤ وائی، گو زیڈ، وغیرہ۔ ایکٹیوسائیڈ کا حفاظتی اثر امیونولوجیکل جگر کی چوٹ پر بیکیلس کالمیٹ گیورین پلس لیپوپولیساکرائڈ کے ذریعہ پیدا ہوا۔ پلانٹا میڈ۔ 2009؛75(14):1463–9۔
21. یانگ ایف آر، فینگ بی ڈبلیو، لو جے ایس۔ ویوو اور وٹرو میں ہیپاٹک فائبروسس پر فوفانگ بیجیا روانگن گولیوں کے اثرات۔ ورلڈ جے گیسٹرو انٹرول۔ 2013؛ 19(32):5326–33۔

22. لیو پی، فینگ بی ڈبلیو، لیو سی۔ چوہوں میں امیونولوجیکل انڈسڈ لیور فبروجنیسیس میں گروتھ فیکٹر 1 اور اس کے رسیپٹر کو تبدیل کرنے کا کردار اور ان پر کورڈی سیپس پولی سیکرائیڈ کا اثر۔ چن جے ہیپاٹول۔ 1998؛ 6:232–3۔

23. Xu GG، Luo CY، Wu SM، Wang CL. ہیپاٹک کے سٹیجنگ کے درمیان تعلقفائبروسس اور سیرم بائیو کیمسٹری کی سطح۔ HBPD INT. 2002؛ 1:246-8۔آپ وغیرہ۔ DARU جرنل آف فارماسیوٹیکل سائنسز (2015) 23:52 صفحہ 12 کا 13

24. لیو جے، وانگ جے وائی، لو وائی۔ جگر کے فبروسس کی تشخیص میں سیرم فبروسس مارکر۔ ٹھوڑیجے انٹرن میڈ۔ 2006؛ 145:475-7۔

25. لی سی زیڈ، وان ایم بی، زینگ ایم ڈی، ماو وائی ایم، فین زیڈ پی، کاو اے پی، وغیرہ۔ جگر کے فبروسس کی تشخیص میں غیر حملہ آور پیرامیٹرز کے امتزاج کا ایک ابتدائی مطالعہ۔ چن جے ہیپاٹول۔ 2001؛ 9:261–3۔

26. چن وائی ایل، لی زیڈ وائی۔ TGF- 1، PDGF-BB، CTGF، اور دائمی ہیپاٹائٹس بی کے درمیان فائبروسس کے ساتھ تعلق۔ چن جے مشکل کامپل کیس۔ 2010؛ 9:19-20۔

27. Sferra R، Vetuschi A، Catitti V، Ammanniti S، Pompili S، Melideo D، et al. بوسویلیا سیرٹا اور سالویا ملٹیورہزا نچوڑ TGF-beta1 ڈاؤن ریگولیشن کے ذریعہ چوہوں میں DMN سے متاثرہ ہیپاٹک فائبروسس کو کم کرتے ہیں۔ Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2012؛16(11):1484–98۔
28. Liu L، Li XM، Chen L، Feng Q، Xu LL، Hu YY، et al. چوہوں میں کاربن ٹیٹراکلورائڈ کی وجہ سے جگر کے فائبروسس میں TGF- 1/Smad راستے پر Gypenosides کا اثر۔ انٹرن جے انٹیگر میڈ۔ 2013؛ 1:1-6۔
29. Zhang BJ, Xu D, Guo Y, Ping J, Chen LB, Wang H. ایک سے زیادہ ہیپاٹوٹوکسک عوامل کی وجہ سے چوہے کے جگر کے فبروسس کے خلاف بربیرین کے اینٹی آکسیڈینٹ میکانزم کے ذریعے تحفظ۔ Clin Exp Pharmacol Physiol. 2008؛35(3):303–9۔
30. ٹورناٹور ایل، تھوٹاکورا اے کے، بینیٹ جے، مورٹی ایم، فرانزوسو جی۔ نیوکلیئر فیکٹر کپا بی سگنلنگ پاتھ وے: میٹابولزم کو سوزش کے ساتھ مربوط کرنا۔ رجحانات سیل بائیول۔ 2012؛22(11):557–66۔
31. Luedde T، Schwabe RF. NF-κB جگر سے جڑنے والی چوٹ، فبروسس، اور ہیپاٹو سیلولر کارسنوما میں۔ Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2011؛ ​​8(2):108–18۔
32. Petrasek J، Csak T، Szabo G. جگر کی بیماری میں ٹول نما رسیپٹرز۔ ایڈو کلین کیم۔ 2013؛59:155–201۔
33. وانگ وائی، چینگ ایم، ژانگ بی، این آئی ایف، جیانگ ایچ۔ بلو بیری کے جوس کی غذائی ضمیمہ میٹالوتھیونین کے جگر کے اظہار کو بڑھاتی ہے اور چوہوں میں جگر کے فبروسس کو کم کرتی ہے۔ پی ایل او ایس ون۔ 2013؛ 8، e58659۔