اینٹی آکسیڈینٹ سپیکٹرم-اثر تعلقات پر مبنی Cistanches Herba کے معیار کے نشانات

خلاصہ: مقصد: کے معیار کے نشانات (Q-markers) کے لیے تحقیق کا طریقہ قائم کرناCistanches Herba(CH) کی بنیاد پراینٹی آکسیڈینٹ سپیکٹرم اثر رشتہاس کے فارماسولوجیکل مادوں اور کوالٹی کنٹرول کے مطالعہ کے لیے ایک بنیاد فراہم کرتا ہے۔ طریقے: الٹرا ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (UPLC) کا استعمال CH کے 10 بیچوں کے لیے فنگر پرنٹ پروفائلز قائم کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ H2O2 کا استعمال کرتے ہوئے ایک سیل آکسیڈیٹیو نقصان کا ماڈل قائم کیا گیا تھا، اور CH کی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت کا تعین ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں کے نصف زیادہ سے زیادہ روکنے والے ارتکاز کے ساتھ ساتھ اس کی سطحوں کی بنیاد پر کیا گیا تھا۔سپر آکسائیڈسمیوٹیساورcatalaseکے طور پرفارماسولوجیکل اشارے. سپیکٹرم-اثر تعلقات کو پرنسپل جزو تجزیہ، پیئرسن ارتباط تجزیہ، اور جزوی کم از کم مربع ریگریشن تجزیہ کے ذریعے بنایا گیا تھا۔ دیفعال اجزاءکے تابع تھےفارماسولوجیکل توثیق. 

نتائج:CH کے لیے فنگر پرنٹ پروفائلز UPLC کا استعمال کرتے ہوئے قائم کیے گئے تھے، جس میں 17 عام چوٹیوں کی نشاندہی کی گئی تھی۔ سپیکٹرم-اثر ارتباط کے تجزیہ کی بنیاد پر، نو اجزاء کا انتخاب کیا گیا تھا۔ فارماسولوجیکل توثیق کے نتائج نے اشارہ کیا کہ جینیپوسیڈک ایسڈ، 8-ایپیلوگینک ایسڈ،echinacoside,ایکٹیوسائیڈ, isoacteoside، اورtubuloside Aحراستی پر منحصر انداز میں اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کی نمائش کی۔

نتیجہ: اس مطالعہ نے اسپیکٹرم-اثر تعلقات کی بنیاد پر CH کے لیے Q-مارکر کی کھوج کی، اس کے فارماسولوجیکل مادہ کی بنیاد اور معیار کے معیار میں بہتری کے حوالے سے معلومات فراہم کی۔

مطلوبہ الفاظ:Cistanches ہرba; کیو مارکر؛سپیکٹرم اثر رشتہ; اینٹی آکسیڈینٹ

Cistanche deserticola ایک خشک مانسل تنا ہے جس میں Cistanche deserticola YCMa یا Cistanche tubulosa (Schenk) Wight کے کھردری پتے ہیں، یہ پودا Cistanche deserticola خاندان orbaceae سے تعلق رکھتا ہے۔ یہ فطرت میں گرم، ذائقہ میں میٹھا اور نمکین ہے۔ یہ گردے اور بڑی آنت کے میریڈیئنز میں واپس آجاتا ہے۔ اس میں گردے یانگ کی پرورش، جوہر اور خون کو بھرنے، آنتوں کو گیلا کرنے اور جلاب کے اثرات ہوتے ہیں، اور یہ گردے کو ٹونیفائی کرنے اور جوہر کو بھرنے کے لیے ایک اہم دوا ہے [2-3]۔ گردے جوہر کو ذخیرہ کرتے ہیں، اور جوہر اور خون ایک ہی ذریعہ سے آتے ہیں۔ اگر جوہر اور خون کی کمی ہو تو اس سے انسانی جسم کی مجموعی زندگی کی سرگرمیاں متاثر ہوں گی۔ جوہر پیدا کرنے والا میرو ہڈیوں میں محفوظ ہوتا ہے، اور دماغ میرو سمندر ہے۔ اگر گردے کا جوہر ناکافی ہو تو ہڈیاں اپنی غذائیت سے محروم ہو جائیں گی اور دماغ کی کمی ہو جائے گی، جس کے نتیجے میں ہڈیوں کی تنزلی کی تبدیلیاں جیسے ڈھیلی ساخت، دانتوں کا گرنا، یادداشت کی کمی، ڈیمنشیا، اور مدافعتی فعل میں کمی [4-6]۔ Cistanche deserticola میں phenylethanoid glycosides، iridoids، lignans اور دیگر ساختی اجزاء شامل ہیں، بشمول echinacoside، verbascoside، verbascoside، genipinic acid، اور 8-epistryanic acid۔ ، tubulin A، وغیرہ [7]. "Pharmacopoeia of the People's Republic of China" کے 2020 ایڈیشن میں Cistanche deserticola کا موجودہ کوالٹی کنٹرول صرف echinacoside اور verbascoside کے مواد کو متعین کرتا ہے، جو روایتی چینی ادویات کی کثیر اجزاء اور کثیر ہدفی کارروائی کی خصوصیات کی مکمل عکاسی نہیں کر سکتا۔ ، جو اس کے کوالٹی کنٹرول اور تشخیص کے لیے سازگار نہیں ہے۔

روایتی چینی ادویات کی کوالٹی کنٹرول کی سطح کو بہتر بنانے اور روایتی چینی ادویات کے معیار کی جانچ کو بہتر بنانے کے لیے ماہر تعلیم لیو چانگ شیاؤ نے روایتی چینی ادویات کے معیار کے نشان (Q-marker) کا نیا تصور پیش کیا [8]۔ ان میں، "تاثریت" Q-marker کے "پانچ اصولوں" میں بنیادی عنصر ہے [9] اور یہ روایتی چینی ادویات کے معیار کی جانچ کا بنیادی عنصر بھی ہے۔

معیار کے معیارات اور ادویات کی افادیت کے درمیان خراب ارتباط کی موجودہ تحقیقی حیثیت کے پیش نظر، روایتی چینی ادویات کے Q-markers کی تلاش اور مزید سائنسی اور معقول معیار کے معیارات قائم کرنا روایتی چینی ادویات کے معیار کو بہتر بنانے کے لیے بہت اہمیت کا حامل ہے۔ سپیکٹرم-اثر تعلق روایتی چینی ادویات کے فنگر پرنٹ کرومیٹوگرافک چوٹیوں کو مخصوص فارماکوڈینامک ڈیٹا کے ساتھ جوڑتا ہے تاکہ روایتی چینی ادویات کے موثر مادوں کو تلاش کیا جا سکے، اس طرح روایتی چینی ادویات کے موروثی معیار کی عکاسی ہوتی ہے [10]۔ اسپیکٹرل ایفیشنسی ریاضیاتی ماڈل کا قیام روایتی چینی ادویات کے QMarker کو "مکمل نظریہ" کے نقطہ نظر سے واضح کر سکتا ہے، جو روایتی چینی ادویات کے بعد کے معیار کے کنٹرول، معیار کے معیارات کی تشکیل، اور فعال اجزاء کی اسکریننگ کے لیے مزید حوالہ فراہم کرتا ہے۔ یہ مطالعہ روایتی چینی ادویات کے سپیکٹرم-اثر تعلق کا مطالعہ کرنے کے لیے ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں (ROS IC50) کی نصف روک تھام کی شرح کے ساتھ مل کر فنگر پرنٹس کا استعمال کرتا ہے، سوپر آکسائیڈ ڈسموٹیز (SOD) اور کیٹالیس (CAT) کے مواد کا استعمال کرتا ہے، اور پرنسپل اجزاء کے تجزیہ کا استعمال کرتا ہے۔ Cistanche deserticola کے Q-marker کا جامع تجزیہ کرنے کے لیے اس کے کوالٹی کنٹرول کے لیے بنیاد فراہم کرنے کے لیے (PCA) )، Pearson correlation analysis (PCC) اور جزوی کم از کم اسکوائر ریگریشن تجزیہ (PLS)۔

1 مواد

1.1 نمونہ

Cistanche deserticola کی کاشت یوٹیان کاؤنٹی، سنکیانگ، اور اندرونی منگولیا میں Cistanche deserticola Good Agriculture Practice (GAP) کے پودے لگانے کے اڈے سے کی گئی تھی۔ اس کی شناخت تیانجن فارماسیوٹیکل ریسرچ انسٹی ٹیوٹ کمپنی لمیٹڈ کے محقق ژانگ ٹائیجن نے Cistanche tubulosa (Schenk) Wight اور Cistanche deserticola کے طور پر کی۔

YC Ma، تفصیلی معلومات جدول 1 میں دکھائی گئی ہیں۔

1.2 ٹیسٹ دوائی

Echinaceaside (بیچ نمبر: 111670-201907، purity: 91.8%) اور verbascoside (بیچ نمبر: 111530-201914، پاکیزگی: 95.2%) دونوں چائنا انسٹی ٹیوٹ آف فوڈ اینڈ ڈرگ کنٹرول سے خریدے گئے تھے۔ isorescoside (بیچ نمبر: 61303-13 -7)، salidroside (بیچ نمبر: 10338-51-9)، 8-epistrychnoic acid (بیچ نمبر: 82509-41-9)، genipinic acid (بیچ نمبر: Z24A10X95926) , tuberose B (بیچ نمبر: 112516-04-08)، 2-acetyl eugenol glycoside (Bach number: 94492-24-7) Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd. سے خریدا گیا تھا، اس سے زیادہ یا اس کے برابر پاکیزگی 98% Cistanche glycoside A (بیچ نمبر: MUST -20062806، طہارت: 98.51%)، floridin A (بیچ نمبر: MUST19110102، طہارت: 98.57%) Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd. سے خریدا گیا تھا۔ chromatographically خالص acetonitrile اور formic acid Tianjin Concord Technology Co., Ltd. کمپنی سے خریدے گئے تھے۔ پیوریفائیڈ واٹر (Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd.) وٹامن ای (VE، V8010، بیجنگ سولاربیو کمپنی)؛ dimethyl سلفوکسائیڈ (DMSO, D{{24}ML, Sigma Company of United States); CellTiter 96® AQeous سنگل سلوشن سیل کے پھیلاؤ کا پتہ لگانے والی کٹ (G3580, Promega Company of United States); CAT کا پتہ لگانا کٹ (S0051)، SOD ایکٹیویٹی ڈیٹیکشن کٹ (S0101M)، اور ROS ڈیٹیکشن کٹ (S0033S) شنگھائی بائیونٹیان بائیو ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ سے خریدی گئی تھی۔

1.3 آلات

واٹرس ایچ کلاس-PDA انتہائی اعلی کارکردگی مائع کرومیٹوگراف (واٹر کمپنی، USA)؛ سارٹوریئس بی ٹی 25 ایس الیکٹرانک بیلنس (سارٹوریئس کمپنی، جرمنی)؛ H1650 تیز رفتار ڈیسک ٹاپ سینٹری فیوج (Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.)؛ سپیکٹرا میکس M5

مائیکرو پلیٹ ریڈر (میگو مالیکیولر انسٹرومنٹ کمپنی لمیٹڈ)؛ WYS-41XDY حیاتیاتی مائیکروسکوپ (Tianjin Micro-Instrument Optical Instrument Co., Ltd.)۔

1.4 خلیات

اس تجربے میں انسانی برانن گردے کے خلیات HEK 293 خلیات استعمال کیے گئے اور چینی اکیڈمی آف سائنسز کے سیل بینک سے خریدے گئے۔

2 طریقے

2.1 فنگر پرنٹ میپ کا قیام

2.1.1 ٹیسٹ سلوشن کی تیاری: Cistanche deserticola میڈیسنیل مواد کا 2 گرام وزن، پانی کی مقدار کا 10 گنا، حرارت اور ریفلکس 3 بار، ہر بار 1 گھنٹہ، 1 پر سینٹری فیوج۔{16}} ×105r·min-1 15 منٹ کے لیے (سینٹری فیوگل رداس 300 ملی میٹر ہے)، سپرنٹنٹس کو یکجا کریں اور 100 mg·mL-1 کے بڑے پیمانے پر ارتکاز کے ساتھ اسٹاک سلوشن بنانے کے لیے توجہ مرکوز کریں، اسے 10 بار پتلا کریں، اور اسے حاصل کرنے کے لیے اسے 0.22 µm مائکرو پورس فلٹر جھلی کے ذریعے فلٹر کریں۔

2.1.2 مخلوط حوالہ حل کی تیاری

ایپسٹریچنک ایسڈ، سیلڈرو سائیڈ، ایچائناسائیڈ، سیستانچے گلائکوسائیڈ اے، جینیپینک ایسڈ، ورباسکوسائیڈ، اینتھوسیانوسائیڈ اے، اسورباسکوسائیڈ، اور 2'-ایسٹیل یوجینول لیں۔ Glycoside اور angioside B حوالہ جات کو مناسب مقدار میں ناپا گیا اور درست وزن کیا گیا۔ تحلیل کرنے کے لیے 50% میتھانول محلول شامل کریں اور 20 µg·mL–1 کی بڑے پیمانے پر ارتکاز کے ساتھ ایک مخلوط حوالہ جات کا محلول تیار کریں۔

2.1.3 کرومیٹوگرافک حالات

ACQUITY UPLC®BEH C18 کالم (100 ملی میٹر × 2.1 ملی میٹر، 1.7 µm)؛ موبائل مرحلہ acetonitrile (A) ~ 0.1% فارمک ایسڈ محلول (B)، گریڈینٹ ایلیوشن پروگرام (0 ~ 6 منٹ، 5% ~ 8% A؛ 6~10 منٹ، 8%~15%A 10~13 منٹ، 15%~19%A، 13~20 منٹ، 19%~25%A) پتہ لگانے کی طول موج 237 این ایم ہے؛ بہاؤ کی شرح 0.4 mL·min -1 ہے؛ کالم کا درجہ حرارت 40 ڈگری ہے؛ انجیکشن کا حجم 3 µL ہے۔

2.1.4 حوالہ چوٹی کا انتخاب

Cistanche deserticola کے الٹرا پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (UPLC) کرومیٹوگرام میں، سب سے بڑے چوٹی کے رقبے کے تناسب، معتدل برقرار رکھنے کا وقت، اور اچھی علیحدگی والی چوٹی کو فنگر پرنٹ اسپیکٹرم کی حوالہ چوٹی کے طور پر منتخب کیا گیا تھا۔ 2.1.5 میتھڈولوجیکل انویسٹی گیشن پریسجن ٹیسٹ: T1 نمونہ لیں اور 2.1.1 کے تحت طریقہ کے مطابق ٹیسٹ سلوشن تیار کریں۔ نمونے کو مسلسل 6 بار انجیکشن کریں اور فنگر پرنٹ ریکارڈ کریں۔ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ ہر چوٹی کا رشتہ دار چوٹی کا علاقہ RSD ہے 0.10%~4.61%۔ , رشتہ دار برقرار رکھنے کے وقت کا RSD 0.08%~1.32% ہے، جو اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ آلے میں اچھی درستگی ہے۔

ریپیٹیبلٹی ٹیسٹ: T1 نمونہ لیں اور 2.1.1 کے تحت طریقہ کار کے مطابق متوازی طور پر ٹیسٹ سلوشن کے 6 نمونے تیار کریں، اور نمونے کو مسلسل انجیکشن لگائیں۔ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ ہر کرومیٹوگرافک چوٹی کا رشتہ دار چوٹی کا رقبہ RSD 1.35%~4.80% ہے، اور رشتہ دار برقرار رکھنے کا وقت RSD 0.10%~1.80% ہے، جو فنگر پرنٹ کی ضروریات کو پورا کرتا ہے اور ظاہر کرتا ہے کہ دہرانے کی صلاحیت آلہ اچھا ہے.

استحکام ٹیسٹ: T1 نمونہ لیں اور 2.1.1 کے تحت طریقہ کار کے مطابق ٹیسٹ سلوشن تیار کریں، 0، 2، 4، 8، اور 12 گھنٹے میں ٹیسٹنگ کے لیے نمونے لگائیں، اور فنگر پرنٹ ریکارڈ کریں۔ ہر کرومیٹوگرافک چوٹی کے رشتہ دار چوٹی کے علاقے کا حساب کیا گیا RSD ہے 0.53%~4.82%، اور متعلقہ برقرار رکھنے کے وقت کا RSD ہے 0.09%~2.17%، جو کہ ضروریات کو پورا کرتا ہے۔ فنگر پرنٹ اور اشارہ کرتا ہے کہ ٹیسٹ پروڈکٹ 12 گھنٹے کے اندر مستحکم ہے۔

2.2 Cistanche deserticola کے اینٹی آکسیڈینٹ اثر پر تحقیق

2.2.1 Cistanche deserticola مادر شراب کی تیاری:مادر شراب کو آئٹم 2.1.1 کے نیچے لیں، فلٹر کریں اور جراثیم سے پاک کریں، اور استعمال سے پہلے اسے کلچر میڈیم سے مطلوبہ ارتکاز تک پتلا کریں۔

2.2.2 Cistanche deserticola کے اثرات اور HEK 293 خلیات کی عملداری پر مثبت کنٹرول VE

نارمل گروپ (سیل معطلی)، Cistanche deserticola ایڈمنسٹریشن گروپ (25, 50, 100, 200, 400 µg·mL–1)، VE گروپ (20, 40, 60, 80, 100 µmol·L–1) مرتب کریں، ہر ایک 24 گھنٹے کے لئے ہر حراستی اور ثقافت پر 6 ڈپلیکیٹ کنویں سیٹ کریں۔ سیل کی قابل عملیت کا پتہ لگانے کے لیے ہر کنویں میں 20 µL CellTiter 96® AQueous سنگل سلوشن ری ایجنٹ شامل کریں۔ 2 گھنٹے تک کاشت جاری رکھیں۔ 490 nm پر ہر کنویں کی جاذبیت (OD) قدر کا پتہ لگانے کے لیے مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کریں۔ فارمولہ (1) کے مطابق سیل کی بقا کی شرح کا حساب لگائیں۔ بقا کی شرح (%)=(OD تجرباتی گروپ/OD خالی گروپ) × 100% (1)

2.2.3 HEK 293 خلیات میں H2O2 کے ذریعے حوصلہ افزائی ROS پر Cistanche deserticola کا اثر

خلیوں کو نارمل گروپ (سیل معطلی) اور Cistanche deserticola ایڈمنسٹریشن گروپ (6.25, 12.5, 25, 50, 100 µg·mL–1 Cistanche deserticola اور 60 µm·L–1 H2O2) میں تقسیم کیا گیا تھا، اور 24 گھنٹے کے لیے کلچر کیا گیا تھا۔ بعد کے آپریشنز کے لیے ROS ڈیٹیکشن کٹ کے مراحل پر عمل کریں، براہ راست ایک خوردبین کے ذریعے سیل کے داغ کا مشاہدہ کریں، اور ہر گروپ کی فلوروسینس کی شدت کا پتہ لگانے کے لیے مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کریں۔ پیرامیٹر کی ترتیبات میں 488 nm کی ایک جوش طول موج اور 525 nm کی اخراج طول موج کا استعمال کیا گیا۔ تجربہ تین بار دہرایا گیا۔

2.2.4 HEK 293 سیلز کے H2O2-حوصلہ افزائی SOD پر Cistanche deserticola کا اثر

خلیوں کو عام گروپ (سیل معطلی) اور ماڈل گروپ میں تقسیم کریں۔

(60 µm·L–1 H2O2)، VE گروپ (60 µm·L–1 VE اور 60 µm·L–1 H2O2)، Cistanche deserticola انتظامیہ گروپ (100 µg·mL–1 Cistanche deserticola اور 60 µm·L–1 H2O2 )، کلچر کے 24 گھنٹے کے بعد خلیات کو جمع کریں، خلیات کو لیس کرنے کے لیے SOD نمونے کی تیاری کا محلول شامل کریں، 5 منٹ کے لیے 4 ڈگری، 12000 r·min-1 پر سینٹری فیوج کریں (سینٹری فیوگل رداس 300 ملی میٹر ہے)، سپرنٹنٹ لیں۔ جیسا کہ نمونہ ٹیسٹ کیا جانا ہے، ایس او ڈی کا پتہ لگانے والی کٹ کی پیروی کریں ذیل کے مراحل پر عمل کریں۔ تجربہ تین بار دہرایا گیا۔

2.2.5 HEK 293 خلیوں میں H2O2-کی حوصلہ افزائی CAT پر Cistanche deserticola کا اثر

2.2.4 اور گروپ ایڈمنسٹریشن کے تحت طریقہ کار پر عمل کریں، لیسز سلوشن شامل کریں، 4 ڈگری پر سینٹری فیوج، 12000 r·min-1 10 منٹ کے لیے (سینٹری فیوج کا رداس 300 ملی میٹر ہے)، سپرنٹنٹ لیں، اور اس کے مراحل پر عمل کریں۔ CAT کا پتہ لگانے والی کٹ۔ فالو اپ آپریشنز۔ تجربہ تین بار دہرایا گیا۔

2.2.6 شماریاتی تجزیہ

SPSS 26۔{1}} سافٹ ویئر شماریاتی تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ڈیٹا کے ہر گروپ کی نمائندگی (±±() کے ذریعہ کی گئی تھی۔ تغیرات کا یک طرفہ تجزیہ اس ڈیٹا پر کیا گیا جو عام تقسیم کے مطابق تھا۔ اگر تغیرات برابر تھے، تو کم سے کم اہم فرق کا طریقہ استعمال کیا گیا تھا۔ اگر تغیرات ناہموار تھے، گراف پیڈ پرزم 8 کا استعمال کیا گیا تھا، اور پی<0.05 was considered as a statistically significant difference.

2.3 Cistanche deserticola antioxidant کا سپیکٹرم اثر ارتباط کا تجزیہ

2.3.1 PCA Cistanche deserticola کے 10 بیچوں کی مشترکہ چوٹیوں کے چوٹی کے علاقے جنہوں نے فنگر پرنٹس قائم کیے ہیں، کو Z ویلیو کے لحاظ سے معیاری بنایا گیا، اور 10 × 17 آرڈر ڈیٹا میٹرکس میں بنایا گیا، جسے SPSS 26.0 سافٹ ویئر میں درآمد کیا گیا تھا۔ پی سی اے کے لیے۔

2.3.2 PCC استعمال کریں SPSS 26۔

اہمیت کی جانچ P کے ساتھ دو طرفہ ٹیسٹ (T) کا استعمال کرتی ہے۔<0.05 as the standard for statistically significant differences.

2.3.3 PLS Cistanche deserticola کے معیاری چوٹی کے علاقے اور اینٹی آکسیڈینٹ کے تجرباتی نتائج کو SIMCA-P 14.1 سافٹ ویئر میں درآمد کریں، چوٹی کے علاقے کو X متغیر کے طور پر سیٹ کریں، اور PLS کو انجام دینے کے لیے فارماکوڈینامک انڈیکس کو Y متغیر کے طور پر سیٹ کریں۔

2.4 Cistanche deserticola Q مارکر اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کی تصدیق

2.4.1 فعال جزو مادر شراب کی تیاری

مناسب مقدار میں جینپینک ایسڈ، 8-ایپسٹریچنک ایسڈ، ایکائناسائڈ، ورباسکوسائیڈ، آئسوریباسکوسائیڈ، اور اینتھوسیانوسائیڈ اے کا درست وزن کریں، اور کنٹرول کے لیے DMSO کو 10 mmol·L–1 میں تحلیل کرنے کے لیے شامل کریں۔ مصنوعات کا حل.

2.4.2 HEK 293 cytotoxicity پر فعال اجزاء کا اثر

HEK 293 خلیوں کو 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کرنے کے بعد، آئٹم 2.4.1 (0.781, 1.563, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100 µL·100 μL) کے تحت فعال اجزاء کے 100 µL حل ہر کنویں میں مختلف ارتکاز شامل کیے گئے، اور محرک جاری رکھا گیا۔ سیل ٹائٹر 96® ایکوئس سنگل سلوشن ریجنٹ کو 24 گھنٹے بعد سیل میں شامل کیا گیا تاکہ سیل کی قابل عملیت کا پتہ لگایا جا سکے۔

2.4.3 H2O2-کی حوصلہ افزائی HEK 293 خلیوں پر فعال اجزاء کا اینٹی آکسیڈینٹ اثر

سیلز کو اس طرح گروپ کیا گیا تھا: نارمل گروپ، ماڈل گروپ، VE گروپ کو 2.2.4 کی طرح گروپ کیا گیا تھا، تجرباتی گروپ (0.781، 1.563، 3.125 µm·L–1 فعال جزو اور 60 µm·L–1 H2O2)، 24 گھنٹے کے لیے مہذب۔ بالترتیب 2.2.3، 2.2.4 اور 2.2.5 کے تحت طریقوں کے مطابق انٹرا سیلولر ROS لیول، SOD اور CAT انزائم کے مواد کا تعین کریں۔

Wecistanche کی معاون سروس

ای میل:wallence.suen@wecistanche.com

واٹس ایپ٪ 2ftel٪3a٪7b٪7b0٪7d٪7d

مزید تفصیلات کے لیے خریداری کریں:

https://www.xjcistanche.com٪2014-شاپ