Rosinidin چوہوں میں Lipopolysaccharide-حوصلہ افزائی میموری کی خرابی کو کم کرتا ہے: عمل کے ممکنہ طریقہ کار میں اینٹی آکسیڈینٹ اور سوزش کے اثرات شامل ہیں

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید جاننے کے لیے

خلاصہ:تحقیقات کا مقصد چوہوں میں لیپوپولیساکرائڈ (LPS) کی حوصلہ افزائی سیکھنے اور یادداشت کی خرابی میں rosinidin کے سازگار اثرات کا جائزہ لینا تھا۔ بالغ وِسٹار چوہوں (150–200 گرام) کو یکساں طور پر چار مختلف گروپوں میں الگ کیا گیا تھا اور ذیل میں سلوک کیا گیا تھا: گروپ 1 (نارمل) اور گروپ 2 (ایل پی ایس کنٹرول) کو 0.5 فیصد ایس سی ایم سی (گاڑی) کے 3 ایم ایل کے ساتھ زبانی طور پر دیا گیا تھا۔ ); گروپ 3 اور گروپ 4 ٹیسٹ گروپ تھے اور زبانی طور پر rosinidin کم خوراک (10 ملی گرام/کلوگرام) اور زیادہ خوراک 20 ملی گرام/کلو گرام کے ساتھ دی جاتی تھی۔ روزانہ، 1 گھنٹے کے بعد کی پیشکش کا ذکر کیا گیا علاج، گروپ 1 کے جانوروں کو نارمل نمکین (ip) کے ساتھ انجکشن لگایا جاتا تھا، اور گروپ 2-4 کا علاج 1 mg/kg/day LPS کے ساتھ کیا جاتا تھا۔ اس علاج کے شیڈول کو روزانہ 7 دن تک پیروی کیا جاتا تھا۔ علاج کے دوران، شیڈول چوہوں کا اچانک لوکوموٹر سرگرمی، یادداشت اور سیکھنے کی صلاحیتوں کا جائزہ لیا گیا۔ بائیو کیمیکل تشخیص acetylcholine esterase (AChE)، endogenous antioxidants (GSH، SOD، GPx، اور catalase)، آکسیڈیٹیو اسٹریس مارکر MDA، neuroinflammatory مارکر (IL-6، IL-1، TNF- سے کیا گیا تھا۔ ، اور NF-κB)، اور BDNF۔ ایل پی ایس کی حوصلہ افزائی سے جانوروں میں اچانک لوکوموٹر کی سرگرمی اور یادداشت کی خرابی کم ہوگئی۔ مزید برآں، LPS نے GST، SOD، GPx، اور catalase کی سطح کو کم کر دیا ہے۔ ACHE کی تبدیل شدہ سرگرمیاں؛ MDA، IL-6، IL-1، TNF- اور NF-κB کی بلند سطح؛ اور دماغی بافتوں میں BDNF کی سطح کو کم کیا۔ ایل پی ایس سے علاج شدہ جانوروں میں روزن کی انتظامیہ نے ایل پی ایس کی حوصلہ افزائی کی اعصابی خرابیوں، آکسیڈیٹیو تناؤ کو نمایاں طور پر کم کیا۔neuroinflammatoryمارکر، اور اچ اینزائم کی سرگرمیوں اور بی ڈی این ایف کی سطح کو معمول کی طرف تبدیل کر دیا۔ نتائج نے یہ ظاہر کیا۔rosinidinچوہوں میں میموری سیکھنے پر ایل پی ایس کے اثرات کو کم کرتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:acetylcholinesterase؛ anthocyanidin؛flavonoids; neuroprotective

تعارف

Neurodegenerative امراض اعصابی نظام کی سوزش کی طرف سے خصوصیات ہیں. نیوروئنفلامیشن اور مائٹوکونڈریل dysfunction کے نتیجے میں، ری ایکٹو آکسیجن (ROS) اور نائٹروجن (RNS) پرجاتیوں کو انتہائی سطح پر پہنچایا جاتا ہے [1–3]۔ سیل وال کمپوننٹ لیپوپولیسیکرائیڈ (LPS) جو گرام منفی بیکٹیریا میں پایا جاتا ہے اکثر جانوروں کے خلاف اعصابی نظام میں سوزش کی وجہ کے طور پر استعمال ہوتا ہے [1,2]۔ سیسٹیمیٹک ایل پی ایس کی شناخت اعلی فقاریوں کے ذریعہ پیتھوجین سے وابستہ مالیکیول پیٹرن کے طور پر کی گئی ہے۔ مدافعتی خلیوں کے ساتھ پابند ہونے سے، LPS ٹیومر نیکروسس فیکٹر (TNF-)، انٹرلییوکن-6 (IL-6)، اور انٹرلییوکن-1 کے اظہار کو بڑھانے کے لیے نیوکلیئر فیکٹر κB (NFκB) کو چالو کرتا ہے۔ IL-1)۔ سینٹرل نروس سسٹم (سی این ایس) میں سائٹوکائنز، مائیکروگلیہ اور میکروفیجز کی رہائی کے بعد بھی وہی سائٹوکائنز تیار کرتے ہیں، جو نیورونل سبسٹریٹس کو نشانہ بناتے ہیں اور نیوران کے اندر سوزش پیدا کرتے ہیں [1,2]۔ ایل پی ایس کی وجہ سے تیز اشتعال انگیز ردعمل CNS [1,2] میں پیرو آکسائیڈز اور ROS کی نسبتاً زیادہ سطح پیدا کرتا ہے۔ بالآخر، آکسیڈیٹیو تناؤ کی ثالثی پیتھالوجی کا نتیجہ ہوتا ہے جب پیرو آکسائیڈز اور ROS کی سطح اینڈوجینس اینٹی آکسیڈینٹ ڈیفنس [1,2] سے تجاوز کر جاتی ہے۔ لپڈ پیرو آکسیڈیشن دماغ میں پولی ان سیچوریٹڈ فیٹی ایسڈز کو نشانہ بناتی ہے [4,5]۔ مزید یہ کہ دماغ میں کچھ اینٹی آکسیڈینٹ دفاعی میکانزم ہوتے ہیں، اس لیے یہ آکسیڈیٹیو نقصان [4–6] کے لیے انتہائی حساس ہے۔ مزید برآں، LPS کے نتیجے میں رویے سے متعلق اسامانیتاوں جیسے علمی اسامانیتاوں اور ڈیمنشیا [1,2,5] کا نتیجہ ہوتا ہے۔ یہ ہے

نیورو انفلامیشن اور آکسیڈیٹیو تناؤ کو جلد کم کرکے نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں کے پھیلاؤ کو کم کرنا ممکن ہے [1,2]۔ حالیہ مطالعات نے ثابت کیا ہے کہ اینٹی آکسیڈنٹس اور اینٹی سوزش ایجنٹ مختلف سی این ایس پیتھالوجیز کے علاج کے لیے فائدہ مند ہیں، بشمول ایل پی ایس [1,2,5,7] کی وجہ سے سوزش اور آکسیڈیٹیو تناؤ۔ نیوروڈیجنریٹیو بیماریوں میں،flavonoids روکتا ہےسوزش کے ثالث، اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز کو چالو کرتے ہیں، لپڈ پیرو آکسیڈیشن کو دباتے ہیں، اور جین کے اظہار کو ماڈیول کرتے ہیں [8]۔ بہت سے flavonoids neurodegenerative بیماریوں کے مختلف ماڈلز میں neuroprotective اعمال رکھنے کی اطلاع دی گئی ہے [9,10]۔ اعلیٰ پودوں کے پھل اور پھول سرخ نیلے پانی میں حل پذیر ہوتے ہیں۔flavonoids anthocyaninاور اس کا شوگر فری ہم منصب اینتھوسیانائیڈن۔ اینتھوسیانین اور اینتھوسیانیڈن دونوں مختلف کھانوں میں رنگین کے طور پر اور دواسازی کے اجزاء کے طور پر استعمال ہوتے ہیں [11]۔ مزید یہ کہ اینتھوسیانین اور اینتھوسیانیڈن کے ممکنہ صحت کے فوائد ہیں [11,12]۔ اینتھوسیانز اور ان کے میٹابولائٹس کا مطالعہ مختلف نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں میں نیورو پروٹیکٹو افعال کے لئے کیا گیا تھا [13]۔ اینتھوسیانین نے نیورو ٹرانسمیٹر مونوامین اور دماغ سے ماخوذ نیوروٹروفک فیکٹر (BDNF) ایکسپریشن اپ ریگولیشن [14] میں اضافہ کرکے افسردگی میں فائدہ مند اثرات دکھائے۔ Rosinidin ایک flavonoid (anthocyanidin) ہے جو پھولوں میں روغن کے طور پر پایا جاتا ہے جیسے Catha ran اس طرح roseus اور Primula rosea۔ Rosinidin (شکل 1) پوزیشن 3 اور 5 پر ہائیڈروکسی متبادل کے ساتھ بینزوپیریلیم، پوزیشن 7 پر میتھوکسی متبادل، اور پوزیشن 2 پر ایک 4-ہائیڈروکسی-3-میتھوکسیفینیل متبادل پر مشتمل ہے۔

سلیکو انزیمیٹک ٹارگٹ میں، مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ روزینیڈین میں ضروری ساختی خصوصیات اور فارماسولوجیکل افعال ہوتے ہیں اور یہ نیوروڈیجینریٹیو علاج کے لیے منشیات کے امیدوار ہونے کی صلاحیت رکھتا ہے [8]۔ مالیکیولر ڈاکنگ اسٹڈیز سے پتہ چلتا ہے کہ rosinidin پارکنسنز کی بیماری کے خلاف اچھی نیورو پروٹیکٹو ایکشن رکھتا ہے [8]۔ مندرجہ بالا اعداد و شمار کی روشنی میں، مطالعہ چوہوں میں LPS کی حوصلہ افزائی میموری کی خرابی میں rosinidin کی تاثیر کا اندازہ کرنے کے لئے کیا گیا تھا.

طریقہ کار2.1 کیمیکلز روزینیڈین اور ایل پی ایس سگما ایلڈرچ (سینٹ لوئس، ایم او، یو ایس اے) سے حاصل کیے گئے تھے۔ انٹرلییوکن-6 (IL-6)، انٹرلییوکن-1 (IL-1)، ٹیومر نیکروسس فیکٹر الفا (TNF-)، نیوکلیئر فیکٹر کپا (NF) کے لیے تجزیاتی کٹس -κB)، اور دماغ سے ماخوذ نیوروٹروفک فیکٹر (BDNF) کو تجارتی طور پر دستیاب چوہے کے انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ سلیکو انزیمیٹک ٹارگٹ میں، مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ روزینیڈین میں ضروری ساختی خصوصیات اور فارماسولوجیکل افعال ہوتے ہیں اور یہ نیوروڈیجینریٹیو علاج کے لیے منشیات کے امیدوار ہونے کی صلاحیت رکھتا ہے [8]۔ مالیکیولر ڈاکنگ اسٹڈیز سے پتہ چلتا ہے کہ rosinidin پارکنسنز کی بیماری کے خلاف اچھی نیورو پروٹیکٹو ایکشن رکھتا ہے [8]۔ مندرجہ بالا اعداد و شمار کی روشنی میں، مطالعہ چوہوں میں LPS کی حوصلہ افزائی میموری کی خرابی میں rosinidin کی تاثیر کا اندازہ کرنے کے لئے کیا گیا تھا. 2. طریقہ کار 2.1. کیمیکلز روزینیڈین اور ایل پی ایس سگما ایلڈرچ (سینٹ لوئس، ایم او، یو ایس اے) سے حاصل کیے گئے تھے۔ انٹرلییوکن-6 (IL{{20}})، انٹرلییوکن-1 (IL-1)، ٹیومر نیکروسس فیکٹر-الفا (TNF-)، جوہری کے لیے تجزیاتی کٹس فیکٹر کپا (NF-κB)، اور دماغ سے ماخوذ نیوروٹروفک فیکٹر (BDNF) کی پیمائش تجارتی طور پر دستیاب چوہے کے انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ کٹ، انڈیا (ماڈرن لیب، ایم ایس، اندور، انڈیا) کے ذریعے کی گئی۔ یہ تجربہ اعلیٰ معیار کے ری ایجنٹس اور کیمیکلز کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ بائیو مالیکیولز۔ 2.2 جانور ویسٹار چوہے (200–240 گرام) لیبارٹری کے حالات کے مطابق تھے۔ وہ خوراک اور پانی تک رسائی کے لیے آزاد تھے۔ ادارے کی جانوروں کی اخلاقیات کمیٹی نے پروٹوکول کو منظوری دی، جس نے سی پی سی ایس ای اے، حکومت ہند کے رہنما خطوط پر عمل کیا۔ 2.3۔ شدید زبانی زہریلا مطالعہ روزینیڈین کا شدید زبانی زہریلا مطالعہ (LD50) اقتصادی تعاون اور ترقی کی تنظیم (OECD)، ANNEX- 423 [15,16] کے ذریعہ مقرر کردہ رہنما خطوط کے مطابق کیا گیا تھا۔ 2.4 تجرباتی Rosinidin کو 0.5 فیصد سوڈیم CMC محلول سے پتلا کیا گیا اور تجرباتی جانوروں کو 07 دنوں تک زبانی طور پر فراہم کیا گیا۔ چوہوں میں اعصابی سوزش اور یادداشت کی خرابی پیدا کرنے کے لیے، 1 ملی گرام/کلوگرام ایل پی ایس کو نمکین (پی ایچ 7.4) [1,2,5] کے ساتھ تازہ طور پر گھٹانے کے بعد انٹرا پیریٹونیلی دیا گیا۔ کل 24 چوہوں (n=6) کو یکساں طور پر چار مختلف گروپوں میں الگ کیا گیا اور درج ذیل علاج دیا گیا: گروپ I-normal اور II-LPS کنٹرول گروپس کا علاج 3 mL/kg 0.5 فیصد سوڈیم CMC کے ساتھ کیا گیا۔ ٹیسٹ گروپس III-کم خوراک اور IV-اعلی خوراک نے 0.5 فیصد SCMC میں 10 اور 20 mg/kg (po) rosinidin معطلی حاصل کی۔ ہر روز زبانی علاج کے اوپر 1 گھنٹے بعد، گروپ I کا علاج 3 mL/kg (ip) نارمل نمکین/دن کے ساتھ کیا گیا، اور 1 mg/kg/day LPS کا انجکشن (ip) گروپ II-IV کو لگایا گیا۔ مندرجہ بالا تمام علاج روزانہ 7 دن تک دیے جاتے تھے۔ علاج کے شیڈول کے دوران، جانوروں کے لیے 2 گھنٹے کے بعد ایل پی ایس کے علاج کے رویے کے ٹیسٹ کیے گئے۔ رویے کے ٹیسٹ کے بعد 7ویں دن جانوروں کی قربانی دی گئی اور بائیو کیمیکل ٹیسٹوں کے لیے دماغ ہٹا دیا گیا [1,2,5]۔ تجرباتی پروٹوکول کو شکل 2 میں منصوبہ بندی کے ساتھ دکھایا گیا ہے۔

2.5 رویے کے پیرامیٹرز 2.5.1. اوپن فیلڈ ٹیسٹ اوپنfield ایک بڑے کیوبک لکڑی کے باکس پر مشتمل ہوتا ہے جس کے طول و عرض 1.2 میٹر لمبا × 1.2 میٹر چوڑا × 50 سینٹی میٹر اونچا ہوتا ہے۔floor کو 16 مربعوں میں تقسیم کیا گیا ہے۔ دیواروں کے ساتھ 12 چوکوں کو پردیی مربع سمجھا جاتا تھا اور باقی چار مربع مرکزی تھے۔ انفرادی چوہوں کو کھلے میں رکھا گیا تھا۔fiکے لئے بزرگfiہر ایک میں ve منٹ اور جانور کے چڑھنے، پالنا اور لائن کراسنگ ریکارڈ کی گئی۔ جب کوئی جانور اپنے اگلے پنجوں کے ساتھ دیوار سے ٹیک لگاتا ہے تو اسے چڑھنا سمجھا جاتا ہے۔ جب سامنے کے دونوں پنجے اوپر سے اٹھا لیے گئے۔flیا اسے پالنے کے طور پر شمار کیا جاتا ہے، اور چاروں پنجوں کو ایک مربع سے ہٹا کر دوسرے مربع میں رکھنا لائن کراسنگ ہے۔ مرکزی چوکوں اور پردیی چوکوں کے درمیان کراسنگ کو الگ سے شمار کیا گیا تھا [17,18]۔ 2.5.2 ایلیویٹڈ پلس میز (ای پی ایم) ٹیسٹ ای پی ایم دو کھلے (50 × 10 سینٹی میٹر) اور ایک جیسے تناسب کے بند بازو اور 40 سینٹی میٹر سائیڈ وال سے بنا ہے۔ مرکزی مربع (10 cm2 ) EPM کے بازوؤں میں شامل ہوتا ہے۔ چھٹے دن، یادداشت کے حصول کی پیمائش جانور کو ایک کھلے بازو کے ٹرمینل حصے پر، مرکز کے مربع کی طرف رکھ کر کی گئی۔ ابتدائی منتقلی میں تاخیر (ITL) کو چوہے کے کھلے بازو سے کسی بند بازو میں داخل ہونے کے لیے درکار مدت کے طور پر ماپا گیا۔ اگر کوئی جانور 2 منٹ میں بند بازو میں داخل ہونے میں ناکام ہو جاتا ہے، تو چوہے کو ایک بند بازو میں داخل ہونے میں نرمی سے مدد دی گئی، اسے بند بازو کو 10 سیکنڈ تک تلاش کرنے کی اجازت دی گئی، اور 120 سیکنڈ کو اس کے ITL کے طور پر ریکارڈ کیا گیا۔ 7 ویں دن، برقرار رکھنے کی منتقلی میں تاخیر (RTL) کی پیمائش ITL [3,4,7] کے اسی طریقہ کار کے بعد کی گئی۔ 2.5.3 Y بھولبلییا ٹیسٹ Y بھولبلییا ایک سہ رخی مرکزی خطہ سے بنا ہے جو سیاہ رنگ کے Plexiglas سے بنے تین کمپارٹمنٹ بازوؤں سے جڑا ہوا ہے۔ علاج کے شیڈول کے 6 ویں دن، جانوروں پر 2 گھنٹے بعد LPS ٹریٹمنٹ لرننگ ٹرائل کیا گیا۔ سیکھنے کے مقدمے کی سماعت کے دوران، ہر چوہے کو Y بھولبلییا اپریٹس کے سامنے لایا گیا اور جانوروں کو کمپارٹمنٹ میں 5 منٹ آزادانہ طور پر حرکت کرنے کی اجازت دی گئی۔ بھولبلییا میں دو کمپارٹمنٹ تھے جہاں سٹینلیس سٹیل کی سلاخوں سے بجلی کے جھٹکے (2 Hz، 10 V کے لیے 125 ms) گزرے تھے۔ بجلی کے جھٹکے سے بچنے کے لیے جانور کوشش کریں گے۔fiبجلی کے جھٹکے سے پاک علاقہ بنائیں اور جھٹکے سے پاک کمپارٹمنٹ میں داخل ہوں۔ ایک جانور کو 30 سیکنڈ تک جھٹکے سے پاک جگہ میں رہنے کی اجازت دی گئی اور تربیت ختم کردی گئی۔ بجلی کا جھٹکا لگنے کے بعد جانور کو جھٹکے سے پاک کمپارٹمنٹ میں داخل ہونے میں کتنا وقت لگا اسے نوٹ کیا گیا۔ 7 دن، 2 گھنٹے بعد LPS علاج، آزمائشی دن کی طرح، ایک Y بھولبلییا ٹیسٹ کیا گیا اور جانور کو جھٹکے سے پاک کمپارٹمنٹ میں داخل ہونے میں لگنے والے وقت کو ریکارڈ کیا گیا۔ 6 ویں اور 7 ویں دنوں میں تاخیر میں فرق ریکارڈ کیا گیا [1,2,19,20]۔ 2.5.4 Morris Water Maze (MWM) ٹیسٹ اس ٹیسٹ میں، مندرجہ ذیلfiمسلسل دنوں کی تربیت کے بعد چھٹے دن پروب ٹیسٹ لیا گیا۔ ٹیسٹ ایک سرکلر پول میں کیے گئے تھے (120 سینٹی میٹر قطر، 50 سینٹی میٹر اونچائی)fi30 سینٹی میٹر پانی (25 ± 1 ◦C) کے ساتھ۔ تربیت کے دوران ایک غیر متحرک سفید پلیٹ فارم (قطر میں 9 سینٹی میٹر) پانی کی سطح کے نیچے 1 سینٹی میٹر رکھا گیا تھا۔ پلیٹ فارم کی تلاش کے لیے 90 سیکنڈ تک بھولبلییا کے پانی میں ڈوبے چوہوں کے ساتھ ایک ٹیسٹ کیا گیا۔

براہ کرم تفصیل کے لیے یہاں کلک کریں۔

مرئی پلیٹ فارم کا ٹرائل 1-2 دنوں پر کیا گیا تھا۔ اس دوران aflag (5 سینٹی میٹر اونچائی) کو پلیٹ فارم پر ظاہر کرنے کے لیے دکھایا گیا تھا۔ غیر مرئی پلیٹ فارم ٹرائل 3-5 دنوں میں کیا گیا تھا، اور اس دوران کوئی نہیں تھا۔flag پلیٹ فارم پر دکھایا گیا تھا۔ چھٹے دن، تحقیقات کا ٹرائل پلیٹ فارم کے بغیر کیا گیا [1,2,21]۔ 2.6۔ بائیو کیمیکل پیرامیٹرز 2.6.1۔ برین ٹشو ہوموجنائزیشن جانوروں کا سر کاٹ دیا گیا، دماغ کو الگ کیا گیا اور آئس کولڈ آئسوٹونک نمکین کا استعمال کرتے ہوئے صاف کیا گیا۔ فاسفیٹ بفر میں ({{1{{30}}}}.1 ایم، پی ایچ 7.4، آئس کولڈ)، دماغ کے نمونے یکساں تھے۔ ہوموجنیٹ کو سینٹرفیوج کیا گیا تھا اور سپرنٹنٹ [3,4,7] کا استعمال کرکے بائیو کیمیکل تجزیہ کیا گیا تھا۔ 2.6.2 Acetylcholinesterase (AchE) ایکٹیویٹی ایک پروٹوکول جیسا کہ ایلمین ایٹ ال نے فراہم کیا ہے۔ µM/mg پروٹین [22] کے طور پر پیش کردہ AchE سرگرمی کا تعین کرنے کے لیے (1961) کی پیروی کی گئی۔ 2.7۔ آکسیڈیٹیو اسٹریس پیرامیٹرز میلونڈیالڈہائڈ (ایم ڈی اے) کا اندازہ ولز کے طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے دماغی ہوموجنیٹ میں لگایا گیا تھا۔ ایم ڈی اے کی سطح کو nM/mg پروٹین [23] کے طور پر پیش کیا گیا تھا۔ ایل مین [24] کے ذریعہ پہلے بیان کردہ طریقہ کے مطابق کم شدہ گلوٹاتھیون (GSH) کی مقدار درست کردی گئی تھی۔ Misra اور Frodvich طریقہ استعمال کرتے ہوئے، superoxide dismutase (SOD) کا تعین کیا گیا۔ SOD سرگرمی کو کنٹرول کے فیصد کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا [25]۔ Razygraev et al.، 2018 میں دیئے گئے طریقہ کے مطابق، glutathione peroxidase (GPx) سرگرمی کی پیمائش کی گئی [26]۔ Catalase کی سرگرمی کا اندازہ لگانے کے لیے، کیویٹ میں 1.9 ملی لیٹر فاسفیٹ بفر (پی ایچ 7.0، 50 ایم ایم) میں 0.1 ملی لیٹر سپرنٹنٹ شامل کیا گیا۔ پھر، رد عمل شروع کرنے کے لیے 1.0 ملی لیٹر تازہ تیار H2O2 (30 mM) شامل کیا گیا۔ کیٹالیس سرگرمی کو µM/H2O2 سڑے/منٹ کے طور پر پیش کیا گیا تھا [27]۔ 2.8۔ نیوروئنflایمیٹری مارکر اور BDNF The IL-6, IL-1, TNF-, NF-κB، اور BDNF کوانٹی تھےfiimmunoassay کٹ کے ذریعے ایڈ۔ مارکروں کی تعداد کا حساب لگایا گیا اور pg/mL پروٹین میں ظاہر کیا گیا۔ 2.9 شماریاتی تجزیہ شماریاتی تجزیہ پرزم سافٹ ویئر کے ذریعے کیا گیا۔ اعداد و شمار کو اوسط ± SEM یک طرفہ انووا کے طور پر پیش کیا گیا ہے جس کے بعد ٹوکی ٹیسٹ کیا گیا تھا، اور اہمیت کی سطح p < 0.05="" پر="" سیٹ="" کی="" گئی="">

نتائج

شدید زبانی زہریلا مطالعہ سے پتہ چلتا ہے کہ Rosinidin چوہوں میں 200 mg/kg bw کی زیادہ سے زیادہ زبانی خوراک پر محفوظ تھا۔ 14 دنوں کی مدت میں کوئی مہلک یا زہریلا رد عمل نہیں دیکھا گیا۔ شدید زبانی زہریلا مطالعہ ڈیٹا 1/20ویں اور 1/10ویں خوراک کی بنیاد پر، یعنی 10 ملی گرام/کلوگرام اور 20 ملی گرام/کلوگرام، مزید مطالعہ کے لیے منتخب کیا گیا تھا۔ 3.1 برتاؤ کے پیرامیٹرز 3.1.1. اوپن فیلڈ ٹیسٹ جانوروں کی بے ساختہ لوکوموٹر سرگرمی کی پیمائش کے لیے ایک کھلا میدان استعمال کیا جاتا تھا۔ پیچھے کی تعداد (905 ± 0.35)، گرومنگ (7.22 ± 0.36)، اور لائن کراسنگ (1.08 ± { عام کنٹرول (بالترتیب 18.50 ± 0.56، 17.19 ± 0.43 اور 5.0 ± 0.11) کے مقابلے LPS علاج کے بعد {55}}.07) میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ LPS کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، rosinidin (10 اور 20 mg/kg) pretreatment dose-independently LPS-حوصلہ افزائی لائن کراسنگ میں کمی کو بہتر بناتا ہے (1.66 ± 0.06 اور 3.49 ± 0.14) اور پیچھے اوپر چڑھتا ہے (11.19 ± 0.10 ± 0.39 اور 1.49) . اوپن فیلڈ ٹیسٹ کے نتائج شکل 3 میں دکھائے گئے ہیں۔

3.1.2 EPM ٹیسٹ شکل 4 جانوروں کی یادداشت اور سیکھنے کی صلاحیتوں کے نتائج کی نمائندگی کرتا ہے جس کا اندازہ EPM ٹیسٹ کے ذریعے لگایا گیا ہے۔ LPS کے نتیجے میں کافی حد تک (p < 0۔{22}}5)="" جانوروں="" میں="" منتقلی="" میں="" تاخیر="" میں="" اضافہ="" ہوا="" بائیو="" مالیکیولز="" 2021,="" 11,="" 1747="" 6="" از="" 13="" (82="" ±="" 1.41)۔="" نچلے="" (75.17="" ±="" 1۔{34}}1)="" اور="" اس="" سے="" زیادہ="" (40.67="" ±="" 1۔{38}}5)="" خوراکوں="" کے="" علاج="" نے="" rosinidin="" خوراک="" پر="" انحصار="" کرتے="" ہوئے="" جانوروں="" میں="" منتقلی="" میں="" تاخیر="" کو="" بحال="" کیا۔="" نتائج="" اعدادوشمار="" کے="" لحاظ="" سے="" اہم="" تھے="" (p=""><0.01)، اور="" lps-کنٹرول="" جانوروں="" سے="" منسلک="" تھے۔="" بائیو="" مالیکیولز="" 2021,="" 11,="" x="" 14="" کا="" 6="" تصویر="" 3.="" ایل="" پی="" ایس="" سے="" علاج="" شدہ="" چوہوں="" پر="" کھلے="" میدان="" کے="" ٹیسٹ="" میں="" بے="" ساختہ="" لوکوموٹری="" سرگرمیوں="" پر="" روزینیڈین="" کا="" اثر۔="" (a)="" ٹارگٹ="" کراسنگ،="" (b)="" پالنا،="" اور="" (c)="" گرومنگ۔="" قدروں="" کو="" اوسط="" ±="" sem="" (n="6)" کے="" طور="" پر="" ظاہر="" کیا="" جاتا="" ہے۔="" #="" p="">< 0.05="" بمقابلہ="" عام="" کنٹرول="" چوہے="" اور="" *="" p="">< 0.05؛="" **="" p=""><0.01; اور="" ***="" p="">< 0.001="" بمقابلہ="" lps="" کنٹرول="">

3.1.3 LPS (9.18 ± 0.46) کے ساتھ Y بھولبلییا ٹیسٹ ٹریٹمنٹ نے عام جانوروں کے مقابلے منتقلی میں تاخیر (p < 0۔{11}}5)="" میں="" اضافہ="" کیا="" (6۔{15}="" }6="" ±="" 0.39)۔="" ایل="" پی="" ایس="" کے="" علاج="" شدہ="" چوہوں="" کی="" خوراک="" پر="" روزینیڈین="" کی="" انتظامیہ="" نے="" ایل="" پی="" ایس="" کنٹرول="" جانوروں="" (پی=""><0.01) کے="" مقابلے="" میں="" منتقلی="" میں="" تاخیر="" (بالترتیب="" 6.67="" ±="" 0.39="" اور="" 5.46="" ±="" 0.46)="" کو="" بحال="" کیا۔="" y="" بھولبلییا="" ٹیسٹ="" کا="" نتیجہ="" شکل="" 5="" میں="" دکھایا="" گیا="">

3.1.4 LPS کے MWM ٹیسٹ ایڈمنسٹریشن نے نمایاں طور پر (p < 0.05)="" تمام="" وقفوں="" میں="" mwm="" ٹیسٹ="" میں="" فرار="" کی="" تاخیر="" کو="" بڑھا="" دیا۔="" ایل="" پی="" ایس="" کے="" علاج="" شدہ="" جانوروں="" کو="" روزینیڈین="" کی="" انتظامیہ="" نے="" جانوروں="" میں="" فرار="" ہونے="" میں="" تاخیر="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" کیا۔="" rosinidin="" علاج="" (p=""><0.001) کی="" نچلی="" اور="" زیادہ="" دونوں="" خوراکوں="" میں="" اقدار="" اعدادوشمار="" کے="" لحاظ="" سے="" اہم="" تھیں۔="" ایم="" ڈبلیو="" ایم="" ٹیسٹ="" کا="" تفصیلی="" نتیجہ="" تصویر="" 6="" میں="" دکھایا="" گیا="">

بحث

ایل پی ایس کی حوصلہ افزائی میموری کی خرابی اور طرز عمل کی اسامانیتاوں کا ثبوت لوکوموٹر کی بے ساختہ سرگرمی، مقامی سیکھنے اور یادداشت میں کمی سے ہوا۔ ان علامات کو دماغ کے بافتوں میں بلند AchE، آکسیڈیٹیو تناؤ، نیورو انفلامیٹری مارکر، اور BDNF کی سطح سے منسوب کیا گیا تھا۔ دوسری طرف، rosinidin کے ساتھ علاج نے LPS کی حوصلہ افزائی کی رویے اور بائیو کیمیکل تبدیلی کو بہتر بنایا. Rosinidin خوراک پر انحصار کرتے ہوئے ایل پی ایس کی وجہ سے خود بخود لوکوموٹر کی سرگرمی، مقامی سیکھنے، اور میموری اور AchE تبدیلیوں میں بہتری آئی۔ اس کے علاوہ، rosinidin endogenous antioxidant کی حیثیت کو بحال کرتا ہے اور چوہے کے دماغ میں neuroinflammatory مارکر اور BDNF کی سطح کو کم کرتا ہے۔ جانوروں کے نفسیاتی مطالعہ میں، کھلے میدان کے ٹیسٹ کو جانوروں کے رویے کا اندازہ لگانے کے لیے بڑے پیمانے پر استعمال کیا جاتا ہے [28]۔ رویے سے متعلق معلومات کھلے میدان کے ٹیسٹوں سے جمع کی جاتی ہیں، جیسے کہ عام چلنے کی صلاحیت اور جانوروں کی جذباتی حالت کے بارے میں معلومات [28]۔ موجودہ مطالعہ میں، اس ٹیسٹ کا استعمال LPS سے علاج کیے جانے والے جانوروں میں بے ساختہ لوکوموٹری حرکات کا اندازہ لگانے کے لیے کیا جاتا ہے۔ ایل پی ایس کی انتظامیہ کے نتیجے میں ریئرز، گرومنگ اور لائن کراسنگ کی تعداد میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ یہ رویے کی تبدیلیاں جانوروں کی متاثرہ خود بخود لوکوموٹر سرگرمی کی نشاندہی کرتی ہیں۔ موٹر آؤٹ پٹ، ایکسپلوریٹری ڈرائیو، خوف سے متعلق رویہ، بیماری، سرکیڈین سائیکل، اور متعدد دیگر عوامل بے ساختہ حرکت کو متاثر کر سکتے ہیں [29]۔ rosinidin کے ساتھ علاج نے LPS سے متاثرہ اسامانیتاوں کو الٹ دیا جو LPS کے علاج شدہ جانوروں میں خود بخود لوکوموٹری حرکات میں ہوتا ہے، جو LPS سے متاثرہ لوکوموٹر کی اسامانیتاوں کے خلاف حفاظتی کارروائی کی نشاندہی کرتا ہے۔ ایل پی ایس کو علمی اسامانیتاوں، ڈیمنشیا، سیکھنے کی صلاحیتوں میں کمی، اور یادداشت میں خرابی [1,2,5] کا سبب جانا جاتا ہے۔ مندرجہ بالا نتائج کی حمایت کرنے کے لئے موجودہ مطالعہ کے اچھے نتائج ہیں۔ ایل پی ایس کے انتظام کے نتیجے میں جانوروں میں سیکھنے کی صلاحیتوں اور یادداشت میں کمی واقع ہوئی اور یہ جانوروں کے ای پی ایم، ایم ڈبلیو ایم، اور وائی میز ٹیسٹوں میں تاخیر سے ظاہر ہوتا ہے۔ ایل پی ایس کے علاج شدہ جانوروں کو روزینیڈین کے علاج سے سیکھنے کی صلاحیتوں میں بہتری آئی اور جانوروں میں یادداشت بحال ہوئی۔ یہ اثرات ایل پی ایس کی حوصلہ افزائی اسامانیتاوں کے خلاف روزینیڈین کی حفاظتی کارروائی کو ظاہر کرتے ہیں۔ مزید برآں، rosinidin خوراک پر منحصر علاج سے ACHE کی LPS کی حوصلہ افزائی میں اضافہ ہوا، جو کلیدی انزائم ہے جو acetylcholine (Ach) کے ہائیڈولیسس کو متحرک کرتا ہے۔ کم Achin CNS علمی خسارے کے لئے ذمہ دار ہے [30]. اس نے اشارہ کیا کہ rosinidin ACHE کو روک کر اور بالآخر CNS میں Ach کی سطح کو بہتر بنا کر LPS سے علاج شدہ جانوروں کی یادداشت کو بحال کرتا ہے۔ جیسا کہ اوپر بتایا گیا ہے، ایل پی ایس کی وجہ سے شدید اشتعال انگیز ردعمل سی این ایس میں پیرو آکسائیڈز اور آر او ایس کی بڑھتی ہوئی سطح پیدا کرتا ہے [1,2]۔ موجودہ مطالعہ کے اعداد و شمار مندرجہ بالا نتائج کی حمایت کرتے ہیں. ایل پی ایس کی انتظامیہ نے ایم ڈی اے کی سطح میں اضافہ کیا اور اینڈوجینس اینٹی آکسیڈینٹ کی سطح میں خلل ڈالا، جو کہ ایل پی ایس کے زیر انتظام جانوروں میں ایس او ڈی، جی ایس ایچ، جی پی ایکس، اور کیٹالیس میں کمی سے ظاہر ہوتا ہے۔ ایل پی ایس سے علاج شدہ چوہوں میں روزینیڈین کے ساتھ علاج نے ایل پی ایس کی حوصلہ افزائی کی وجہ سے اینڈوجینس اینٹی آکسیڈینٹ کی سطح کی کمی اور جانوروں میں آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کیا، جو ایل پی ایس کے خلاف روزینیڈین کی اینٹی آکسیڈینٹ خاصیت کی نشاندہی کرتا ہے۔ نیوروڈیجنریشن [31] میں سوزش ایک اہم کردار ادا کرتی ہے۔ محققین نے پایا ہے کہ نیوروڈیجینریٹیو بیماری والے مریض IL- 6، TNF-، IL-1، اور NF-κB [31] کی زیادہ تعداد ظاہر کرتے ہیں۔ موجودہ مطالعے میں، ایل پی ایس نے اشتعال انگیز مارکروں کی سطح کو متاثر کیا۔ rosinidin کی انتظامیہ نے ایل پی ایس سے حوصلہ افزائی کی IL-6، TNF-، IL-1، اور NF-κB کو کم کیا ہے۔ یہ چوہوں میں ایل پی ایس کی حوصلہ افزائی نیوران کی سوزش کے خلاف روزینیڈین کی سوزش کی خصوصیات کی نشاندہی کرتا ہے۔ BDNF، ایک pleiotropic پروٹین، ایک نیورو ٹرانسمیٹر ماڈیولیٹر کے طور پر کام کرتا ہے اور سیکھنے اور یادداشت سے متعلق صلاحیتوں میں شامل ہے [32]۔ اعصابی نظام کے کئی علاقوں کو اپنی معمول کی نشوونما کے لیے BDNF کی ضرورت ہوتی ہے [33]۔ بی ڈی این ایف پردیی اعصاب کی تخلیق نو اور اعصابی نقصان کے بعد اس کے مائیلینیشن کے لیے ضروری ہے [32,34]۔ کم BDNF جین اظہار اور افسردہ مریضوں میں پروٹین کی سطح میں کمی کے درمیان ایک لنک موجود ہے [35]۔ مزید یہ کہ یہ اطلاع دی جاتی ہے کہ بی ڈی این ایف کی کم سطح نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں سے وابستہ ہے [33]۔ ایل پی ایس کے ساتھ علاج نے دماغی بافتوں میں بی ڈی این ایف کی سطح کو کم کیا، جو ایل پی ایس کے علاج شدہ جانوروں میں نیورونل انسلٹس کی نشاندہی کرتا ہے۔ دوسری طرف، ایل پی ایس کے علاج شدہ جانوروں میں بائیو مالیکیولز 2021، 11، 1747 12 میں سے 13 روزینیڈین کے ساتھ علاج نے BDNF کی سطح کو معمول کی طرف بحال کیا، جس نے ایل پی ایس کی حوصلہ افزائی نیوروٹوکسائٹی کے خلاف روزینیڈین کی کارروائی کی نشاندہی کی۔

نتائج

موجودہ مطالعہ یہ ظاہر کرتا ہے کہ rosinidin چوہوں میں LPS کی وجہ سے ہونے والی طرز عمل اور بائیو کیمیکل اسامانیتاوں کو کم کر کے سوزش کے ردعمل، آزاد بنیاد پرست نقصان کو کم کر کے، اور BDNF کی سطح کو معمول پر لاتا ہے۔ rosinidin کے اینٹی آکسیڈینٹ اور سوزش کے عمل فائدہ مند اثر کے لئے جوابدہ ہوسکتے ہیں۔ rosinidis کے ساتھ علاج نے غیر معمولی طور پر ایل پی ایس کی حوصلہ افزائی شدہ لوکوموٹر سرگرمی میں کمی اور آزمائشی جانوروں میں یادداشت کی خرابی کو تبدیل کردیا۔ LPS نے GSH، SOD، GPx، اور catalasevels کو کم کر دیا ہے۔ ACHE کی تبدیل شدہ سرگرمیاں؛ MDA، IL-6، IL-1، TNF- اور NF-κB کی بلند سطح؛ اور دماغی بافتوں میں BDNF کی سطح کو کم کیا۔ ایل پی ایس سے علاج شدہ جانوروں میں روزن کی انتظامیہ نے ایل پی ایس کی حوصلہ افزائی کی اعصابی خرابیوں، آکسیڈیٹیو تناؤ، نیورو انفلامیٹری مارکرز کو نمایاں طور پر کم کیا، اور ایچ اینزائم کی سرگرمیوں اور ڈی این ایف کی سطح کو معمول کی طرف موڑ دیا۔ تاہم، انسانوں میں نیوروڈیجنریٹیو بیماری کے علاج میں اثرات کا جائزہ لینے کے لیے مستقبل کی تحقیق کی ضرورت ہے۔ دوبارہ دیکھیں اور ترمیم کریں، فنڈنگ: SA تمام مصنفین نے مخطوطہ کے شائع شدہ ورژن کو پڑھا اور اس سے اتفاق کیا ہے۔ فنڈنگ: اس تحقیق کو کنگ سعود یونیورسٹی، ریاض، سعودی عرب میں ریسرچرز سپورٹنگ پراجیکٹ نمبر (RSP-2021/146) کے ذریعے مالی اعانت فراہم کی گئی تھی۔ ادارہ جاتی جائزہ بورڈ کا بیان: یہ مطالعہ ہیلسنکی کے اعلامیہ کے رہنما خطوط کے مطابق کیا گیا تھا۔ اور بی آر این کالج آف فارمیسی، ایم پی، انڈیا کے ادارہ جاتی نظرثانی بورڈ (یا اخلاقیات کمیٹی) سے منظور شدہ جس کا منظوری نمبر IAEC/918/CPCSEA/01 ہے۔ پروٹوکول کی پیروی ARRIVE کے رہنما خطوط کے مطابق کی گئی تھی۔ باخبر رضامندی کا بیان: قابل اطلاق نہیں ہے۔ ڈیٹا کی دستیابی کا بیان: قابل اطلاق نہیں ہے۔ اعترافات: مصنفین کنگ سعود یونیورسٹی، ریاض، سعودی عرب میں ریسرچرز سپورٹنگ پروجیکٹ (نمبر RSP–2021/146) کے شکر گزار ہیں۔ مفادات کے تصادم: مصنفین مفادات کے تصادم کا اعلان نہیں کرتے ہیں۔

حوالہ جات

1. سدرائی، ایس. کیسالاری، زیڈ۔ رضاویان، ایم. عظیمی، ایس. Sedigh Nejad, L.; افشین-مجد، ص. بلوچنیجدموجراد، ٹی۔ روغانی، ایم. بربیرین نے چوہے میں لیپوپولی سیکرائیڈ کی وجہ سے سیکھنے اور یادداشت کے خسارے کو کم کیا: بنیادی مالیکیولر میکانزم کی بصیرت۔ میٹاب۔ برین ڈس۔ 2018، 34، 245–255۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
2. وانگ، ایچ. مینگ، جی ایل؛ ژانگ، C.T.؛ وانگ، ایچ. Hu, M.; لانگ، وائی۔ ہانگ، ایچ. تانگ، S.-S. موگرول چوہوں میں لیپوپولیساکرائڈ (ایل پی ایس) کی حوصلہ افزائی میموری کی خرابی اور نیورو انفلامیٹری ردعمل کو کم کرتا ہے۔ جے ایشین نیٹ۔ پیداوار Res. 2019، 22، 864–878۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
3. امور، ایس. Peferoen, LA; ووگل، ڈی وائی؛ بریور، ایم. وین ڈیر والک، پی. بیکر، ڈی. وین نورٹ، نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں میں جے ایم سوزش - ایک تازہ کاری۔ امیونولوجی 2014، 142، 151–166۔ [کراس ریف]
4. شیوشرن، بی ڈی؛ ناگاکنن، پی. تھیپیسوامی، بی ایس؛ ویراپور، مونوسوڈیم گلوٹامیٹ انڈسڈ آکسیڈیٹیو تناؤ اور چوہوں میں ایکسائٹوٹوکسک دماغ کو پہنچنے والے نقصان کے خلاف کیلنڈولا آفسینالس ایل کے پھولوں کا VP حفاظتی اثر۔ ہندوستانی جے کلن۔ بائیو کیم۔ 2012، 28، 292–298۔ [کراس ریف]
5. شیخ، A.؛ ڈھاڈے، ایس بی؛ درگ، ایس. ویراپور، وی پی؛ بادامی، ایس. تھیپیسوامی، بی ایس؛ پاٹل، چوہوں میں لیپوپولیساکرائیڈ سے متاثرہ بیماری کے رویے کے خلاف ایمبیلن کا جے ایس اثر۔ فائٹوتھر۔ Res. 2016، 30، 815–822۔ [کراس ریف]
6. درگ، ایس. ڈھاڈے، ایس بی؛ وینڈل، آر. شیوکمار، بی ایس؛ چرن، سی ایس وتھانیا سومنیفرا (اشواگندھا) چوہوں میں دماغی آکسیڈیٹیو تناؤ سے پیدا ہونے والے اعصابی عوارض میں: ایک منظم جائزہ اور میٹا تجزیہ۔ جے فارم۔ فارماکول۔ 2015، 67، 879–899۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
7. جدی سوامی، سی۔ میگھا، ایچ ایم؛ ڈھاڈے، ایس بی؛ درگ، ایس. پوٹادار، پی پی؛ تھیپیسوامی، بی ایس؛ ویراپور، وی پی پیروکسیکم نے چوہوں میں نائٹرو پروپیونک ایسڈ کی وجہ سے دماغی آکسیڈیٹیو تناؤ اور رویے کی تبدیلی کو کم کیا۔ ٹاکسیکول۔ میچ طریقے 2014, 24, 672–678۔
8. Monteiro, AF; ویانا، جے ڈی؛ نیریسری، اے. Zondegoumba, EN; مینڈونکا جونیئر، ایف جے؛ Scotti, MT; Scotti, L. کمپیوٹیشنل اسٹڈیز کا اطلاق فلاوونائڈز پر الزائمر اور پارکنسنز کی بیماریوں کے خلاف۔ آکسیڈیٹیو میڈ۔ سیل لونگیو۔ 2018، 2018، 7912765۔ [کراس ریف] [پب میڈ]