سیکریٹڈ نیوٹروفیل جیلیٹنیز سے وابستہ لیپوکلین غیر خفیہ شکل کے مقابلے ADPKD خلیوں کے سسٹوں کے بڑھنے کو روکنے کی مضبوط صلاحیت دکھاتا ہے Ⅳ

4. بحث

اس مطالعے میں ، ہم نے یہ ظاہر کیا کہ خفیہ ایم این جی اے ایل کا اضافہ اور / یا زیادہ اظہارپروٹین 2L3 سیل پھیلاؤ میں کمی آئیاوراپوپٹوس کو اپریگولیٹ کرکے وٹرو میں سسٹ کی نشوونما کو روکتا ہے۔اور آٹوفجی اورپھیلاؤ سے متعلق سگنلنگ راستوں کو کم کرنا. اس بات کی نشاندہی کرنے کے لیے کہ آیا M-1 خلیات، جو ماؤس رینل ٹیوبلز کے 2L3 خلیات کے مماثل مقام سے قائم کیے گئے ہیں، 2L3 خلیوں کے لیے جنگلی قسم کے کنٹرول سیل کے طور پر استعمال کیے جا سکتے ہیں، LTL کے ساتھ M-1 اور 2L3 خلیوں کے لیکٹین سٹیننگ اور DBA انجام دیا گیا تھا (شکل 1D)۔ ایل ٹی ایل اور ڈی بی اے کا استعمال بالترتیب [45,46] ماؤس کے گردے کی تفریق شدہ قریبی نلیوں اور جمع کرنے والی نالیوں کی شناخت کے لئے کیا گیا تھا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ M-1 خلیات کی شکل (Figure 1C) اور رینل نلیاں (Figure 1D) سے 2L3 خلیات میں ملتی جلتی ہے۔ لہذا، M-1 سیل لائن کو 2L3 سیلز کے لیے جنگلی قسم کے کنٹرول کے طور پر منتخب کیا گیا تھا۔

کے لیے نئی جڑی بوٹیاںADPKD(پولی سسٹک گردے کی بیماری)

زیادہ تر طبی معاملات میں، ADPKD کے مریض اپنے پیشاب میں NGAL کی سطح عام لوگوں کے مقابلے میں زیادہ دکھاتے ہیں [19,47–49]۔ اس مطالعے میں استعمال ہونے والے ADPKD ماؤس ماڈل میں NGAL اور NGAL-R اظہار کی سطح بھی زیادہ ہے [31]۔ RT–qPCR اور ویسٹرن بلاٹ دونوں کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ 2L3 خلیات نے M-1 جنگلی قسم کی سیل لائن (شکل 1F, H) کے مقابلے میں NGAL کی اعلی سطح کا اظہار کیا، جبکہ NGAL-R اظہار کی سطح میں کوئی خاص فرق نہیں پایا گیا۔ دو سیل لائنز (شکل 1G، H)، جو vivo کے نتائج سے مطابقت نہیں رکھتی ہیں [31]۔ یہ فرق ماؤس ٹشوز کے اندر پیچیدہ تعامل کی وجہ سے ہو سکتا ہے، جو زیادہ آسان سیل سسٹم میں نہیں ہوتا ہے۔

مغربی دھبے کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ 2L3 میں براہ راست انتظامیہ اور/یا mNGAL کی جینیاتی حد سے زیادہ اظہار نے ERK کے راستے کو روک دیا۔ جیسا کہ اعداد و شمار 4A اور 8A میں دکھایا گیا ہے، p-ERK1 (44 kDa) کا سگنل p-ERK2 (42 kDa) سے کمزور تھا، جبکہ ERK1 (44 kDa) ERK2 (42 kDa) سے زیادہ شدید تھا، جس کی وجہ سے اس میں واضح اضافہ ہوا p-ERK2/ERK2 تمام تجرباتی گروپوں میں p-ERK1/ERK1 کے مقابلے میں۔ ERK1 اور ERK2 ERKs کے دو isoforms ہیں جن کے سیل کے پھیلاؤ پر مختلف اثرات مرتب کرنے کی تجویز دی گئی ہے [50]۔ ERK1 کی شناخت سیل کی بقا اور نشوونما کے لیے کی گئی ہے۔ تاہم، ERK2 سیل کی تفریق کو فروغ دیتا ہے اور سیل کی افزائش کو روکتا ہے [51]۔ ہمارے مطالعے میں، p-ERK2/ERK2 کا تناسب تمام گروپوں میں p-ERK1/ERK1 سے خاصا زیادہ تھا، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ خلیات فرق کرتے ہیں اور ترقی کو کم کرتے ہیں۔ تاہم، ایم این جی اے ایل کے اضافے اور اوور ایکسپریشن دونوں نے کنٹرول گروپ کے مقابلے p-ERK1/ERK1 اور p-ERK2/ERK2 دونوں کے تناسب کو ڈرامائی طور پر کم کیا اور p-ERK/ERK کا نمایاں طور پر کم تناسب کا باعث بنا، جس نے mNGAL اثر کی نشاندہی کی۔ سیل کے پھیلاؤ کی روک تھام میں۔

2L3 خلیوں میں سسٹ کی تشکیل کی خصوصیات اور علاج کی تشخیص کے لیے 3D کلچر پلیٹ فارم قائم کرنے کے لیے، کئی شرائط کو آزمایا گیا۔ یہ ظاہر کیا گیا ہے کہ 3D کلچر کے لیے میٹریجل کا ارتکاز وٹرو [25,52,53] میں بننے والے سٹرکچرل سسٹ اور نلیاں کی فیصد کو متاثر کرتا ہے۔ ہمارے مطالعے میں، ہم نے پایا کہ 40٪ میٹریجل 2L3 خلیوں کی زیادہ سے زیادہ سسٹ ساخت کی تشکیل کو ظاہر کرنے کا بہترین فارمولا تھا۔ 3D ثقافتوں کے لیے ایمبیڈڈ پیٹرن اور آن ٹاپ پیٹرن سمیت کئی شرائط تھیں [54]۔ سسٹس کا تجزیہ کرنے کے بہتر اور آسان طریقہ کے لیے ہم نے آن ٹاپ طریقہ (سینڈوچ نما پیٹرن) کا انتخاب کیا (شکل 6)۔ تاہم، ہمارے تجربے سے پتہ چلتا ہے کہ 2L3 خلیات کے سسٹ کافی بڑے نہیں تھے جب 14 ویں دن تک 3D کلچر میں بغیر کسی inducer کے کلچر کیا جاتا تھا۔ Forskolin عام طور پر سائکلک اڈینوسین مونو فاسفیٹ (cAMP) کو بڑھانے کے لیے ایڈنائل سائکلیز (AC) کو چالو کرکے سسٹ کی تشکیل کو دلانے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ [11,55]۔ لہذا، ہمارے مطالعے میں، ہم نے ذہنی علاج سے پہلے 2L3 خلیوں میں سسٹ کی تشکیل کو دلانے کے لیے forskolin (20 µM) کا استعمال کیا۔

ہمارے پچھلے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ 2L3 چوہوں میں گردے سے متعلق مخصوص NGAL کی حد سے زیادہ کارکردگی سسٹ کے سائز کو کم کرکے ADPKD کی ترقی کو سست کر سکتی ہے لیکن 2L3 چوہوں میں سسٹ نمبر نہیں [31]۔ موجودہ مطالعے میں، سسٹ کے قطر، رقبہ، اور بڑے سسٹوں کے فیصد (شکل 6F، G، I) کو دبا کر 2L3 خلیوں کے سسٹ کے بڑھنے میں ذہنی طور پر نمایاں طور پر روکا گیا ہے، جبکہ کل کی بڑھتی ہوئی شرح میں کوئی خاص فرق نہیں تھا۔ سسٹ نمبر (شکل 6H)۔ 3D کلچر میں 2L3 سسٹ کی ترقی کے نتائج vivo کے نتائج کے مطابق تھے۔ تاہم، mNGAL علاج نے 3D کلچر میں 2L3 خلیوں کی سسٹ کی نشوونما کو روک دیا، جبکہ ہم نے MTT پرکھ کے لیے پچھلے 2D تجربات (600 µg/mL) کے مقابلے میں mNGAL (2 mg/mL) (شکل 6) کی زیادہ ارتکاز کا استعمال کیا۔ سیل کی عملداری پر mNGAL کا اثر (شکل 3)۔ ہم نے قیاس کیا کہ E. coli سے پاک ہونے والے recombinant mNGAL میں پوسٹ ٹرانسلیشنل ترمیم کی کمی تھی [56,57] اور اس کے نتیجے میں recombinant mNGAL کی کم بایو ایکٹیویٹی ہوتی ہے۔ pN + LS اور pN − LS تعمیرات کی منتقلی کے ذریعے 2L3 خلیوں میں NGAL کا زیادہ اظہار اس سوال کو واضح کرنے میں مدد کر سکتا ہے۔

اس بات کا تعین کرنے کے لیے کہ آیا 3D کلچر میں mNGAL (2 mg/mL) کی زیادہ ارتکاز کا استعمال 2L3 خلیات (شکل 6) کے سسٹ کی توسیع کو دبانے کے لیے کیا گیا ہے، اس کا نتیجہ mNGAL کی پوسٹ ٹرانسلیشنل ترمیم کی کمی کی وجہ سے ہوا ہے اور یہ جانچنے کے لیے کہ آیا NGAL کو خفیہ ہونا تھا اور اس کے ساتھ تعامل کرنا تھا۔ NGAL-R apoptosis کو دلانے اور سسٹ کے بڑھنے کو مزید روکنے کے لیے، pN + LS اور pN − LS کی تعمیرات کو 2L3 خلیوں میں تبدیل کیا گیا تاکہ خفیہ اور غیر سیکریٹڈ NGAL پروٹینز (شکل 7) کو زیادہ سے زیادہ متاثر کیا جا سکے۔ پولڈ ٹرانسفیکٹڈ سیلز کی کٹائی بلاسٹی سیڈن کے انتخاب کے ایک ہفتے بعد کی گئی تھی، اور دونوں pN + LS اور pN − LS ٹرانسفیکشن نے Lcn2 کے mRNA اظہار کی سطح میں بہت زیادہ اضافہ کیا (کل، بشمول اینڈوجینس اور خارجی NGAL دونوں) اور Lcn2-c-myc (exogenous) NGAL) کنٹرول گروپ (شکل 7F, G) کے ساتھ موازنہ کیا اور Lcn2 اور Lcn{16}}c-myc میں pN + LS اور pN − LS گروپس (شکل 7F, G) کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں تھا۔ pN + LS اور pN − LS گروپوں میں Lcn{{20}}myc کا اظہار 2L3 خلیوں میں اس سے تقریباً 8500-گنا زیادہ تھا (شکل 7G)؛ تاہم، pN + LS اور pN − LS میں Lcn2 کا اظہار تقریباً 1 تھا۔{29}}2L3 خلیات میں اس سے زیادہ گنا (شکل 7F) اصولی طور پر، Lcn2-myc 2L3 سیلز میں موجود نہیں تھا، جس کی وجہ سے RT–QPCR کے ذریعے اظہار کی کم سطح (پس منظر) ہوتی ہے۔ نتیجے کے طور پر، pN + LS اور pN − LS خلیوں میں Lcn2-myc کا رشتہ دار تناسب 2L3 کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھا (تقریباً 8500 بار)، جس کے نتیجے میں Lcn2 اور Lcn2-myc کے رشتہ دار تناسب کے درمیان بڑا فرق ہے۔ اس کے علاوہ، pN + LS اور pN − LS خلیات میں Lcn2 کا اظہار تناسب (pN + LS 0 تھا۔{47}} pN − LS کا گنا) Lcn2-c-myc کے جیسا تھا۔ (pN + LS 1 تھا۔{52}} pN − LS کا گنا) (شکل 7F، G)۔ pN + LS اور pN − LS خلیوں میں انٹرا سیلولر NGAL پروٹین ایکسپریشن کو کنٹرول گروپ (شکل 7I) کے مقابلے میں بڑھایا گیا تھا، اور pN + LS اور pN − LS گروپوں کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں تھا۔ pN + LS اور pN − LS گروپس میں کل NGAL پروٹین اظہار کے مغربی دھبے کے نتائج (pN + LS 0 تھا۔{60}} pN − LS کا گنا) (شکل 7I) RT–qPCR کے نتائج سے مطابقت رکھتے تھے۔ (pN + LS 0 تھا۔{64}} pN − LS کا گنا) (شکل 7F)۔ ان نتائج کے مطابق، pN + LS اور pN - LS خلیوں میں NGAL (مجموعی اور خارجی دونوں) پروٹین کی سطحیں ایک جیسی تھیں، جس نے اشارہ کیا کہ مزید تجربات میں دونوں گروہوں کا موازنہ کیا جانا چاہیے۔

ہم نے پیش گوئی کی ہے کہ بغیر کسی سگنل پیپٹائڈ کے NGAL کا زیادہ اظہار انٹرا سیلولر NGAL اظہار کی اعلی سطح کے باوجود NGAL کے سراو میں اضافہ نہیں کرے گا۔ تاہم، کلچر سے سپرناٹینٹ کا استعمال کرتے ہوئے ELISA کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ pN + LS اور pN − LS دونوں خلیوں میں 2L3 کنٹرول سیلز (شکل 7J) کے مقابلے میں خفیہ NGAL کی سطح نمایاں طور پر زیادہ تھی، جبکہ NGAL کی مقدار pN − LS خلیوں کے ذریعے خفیہ ہوتی ہے۔ pN + LS خلیات (شکل 7J) کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھا۔ ان نتائج سے انکشاف ہوا کہ سگنل پیپٹائڈ (pN - LS) کے بغیر NGAL کی حد سے زیادہ کارکردگی نے NGAL کے سراو کو محدود کر دیا، حالانکہ خلیوں کے اندر انٹرا سیلولر NGAL mRNA اور پروٹین کی اعلی سطح کی نشاندہی کی گئی تھی (شکل 7F، I)۔ BrdU شمولیت کے نتائج نے pN + LS خلیات (شکل 7K) کے مقابلے میں pN - LS خلیوں کا نمایاں طور پر زیادہ پھیلاؤ دکھایا۔

NGAL کی انٹرا سیلولر اور رطوبت کی مقدار تقریباً 1 تھی۔{1}} گنا اور 2۔{3}} pN + LS میں بالترتیب 2L3 خلیات کی نسبت زیادہ گنا (شکل 7I, J)، جو روک تھام کا باعث بن سکتی ہے۔ pN + LS کا 2L3 سیل پھیلاؤ (شکل 7K) کے مقابلے میں۔ تاہم، 2L3 خلیات میں NGAL کی انٹرا سیلولر اور خفیہ مقدار تقریباً 4-گنا اور 5۔{16}}گنا زیادہ M-1 سیلوں کے مقابلے میں، (شکل 1H، I)، جبکہ زیادہ سیل کا پھیلاؤ M-1 خلیات (شکل 2C) کے مقابلے 2L3 میں دیکھا گیا۔ ہمیں شبہ ہے کہ NGAL اظہار اور رطوبت میں اضافہ، جو 2L3 خلیوں میں حفاظتی کردار ادا کرتا ہے، Pkd1 ناک آؤٹ کے نتیجے میں سیل کے پھیلاؤ کو روکنے کے لیے ناکافی ہے، لیکن pN + LS میں NGAL اظہار اور سراو میں اضافہ پھیلاؤ کو دبانے کے لیے اضافی NGAL فراہم کرتا ہے۔ ہمارے پچھلے مطالعہ میں، Pkd1L3/L3 چوہوں میں NGAL پروٹین اور پھیلنے والے سیل نیوکلیئر اینٹیجن (PCNA) کی Pkd1+/+ چوہوں کی نسبت نمایاں طور پر زیادہ تھی۔ اس کے باوجود، Pkd1L3/L3 × NGALTg/Tg چوہوں میں NGAL پروٹین کی رینل لیول Pkd1L3/L3 × NGAL+/+ چوہوں میں اس سے تقریباً 2-گنا تھی، اور NGAL کی زیادہ کارکردگی کی وجہ سے Pkd13 میں PCNA کی نمایاں طور پر کم سطح ہو گئی۔ /L3 × NGALTg/Tg Pkd1L3/L3 × NGAL+/+ چوہوں کے مقابلے میں اور مزید روکا سسٹ کی نشوونما اور طویل عرصے تک بقا کے دن [31]۔ ایسا لگتا ہے کہ NGAL ADPKD ماڈلز میں بڑھتے ہوئے پھیلاؤ کو روکنے میں ایک حفاظتی کردار ادا کرتا ہے، جبکہ endogenous NGAL اظہار ناکافی ہے، اور اضافی exogenous NGAL مدد کر سکتا ہے۔

3D کلچر کے نتائج (شکل 10) کے مطابق، pN + LS اور pN − LS دونوں گروپوں نے قطر (فگر 10C)، رقبہ (فگر 10D) اور بڑے سسٹوں کا فیصد (قطر> 100 µm) کو کم کرکے سسٹ کی نشوونما کو روکا۔ (شکل 10F)، لیکن اعداد نہیں (شکل 10E)۔ یہ تلاش ہمارے شک سے مطابقت نہیں رکھتی کہ صرف pN + LS لیکن pN − LS نہیں سسٹ کے بڑھنے کو روکتا ہے کیونکہ سیل کے پھیلاؤ کو روکنے کے لیے 2L3 خلیوں سے mNGAL کا اخراج ضروری ہے۔ تاہم، pN − LS کے ذریعے سسٹ کے بڑھنے کی روک تھام pN + LS (شکل 10B–D) سے زیادہ غریب تھی، جس سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ سیکریٹڈ mNGAL کے زیادہ اظہار میں 3D کلچر میں 2L3 خلیوں کے سسٹوں کے بڑھنے کو روکنے کی اعلی صلاحیت موجود ہے . اگرچہ ہم 3D کلچر میں pN − LS گروپ کے مقابلے pN + LS گروپ میں سسٹ کے بڑھنے کا مضبوط دباو دیکھتے ہیں، p-AKT/AKT میں pN − LS کے مقابلے pN + LS کا بہتر اثر دیکھنا مشکل ہے (شکل 8B )، p-CREB/CREB (Figure 8C) اور p62 (Figure 9D)۔ یہ ظاہر کیا گیا ہے کہ NGAL اور NGAL-R جوڑے انٹرا سیلولر آئرن کو الگ کر سکتے ہیں اور مزید apoptosis [29] کو آمادہ کر سکتے ہیں، جو بیکٹیریل انفیکشن [30] کے خلاف پیدائشی مدافعتی نظام کی آئرن کی کمی کی حکمت عملی سے وابستہ ہے۔ ہم نے تجویز کیا کہ خفیہ شدہ mNGAL نے NGAL-R کے ساتھ بات چیت کے ذریعے 2L3 خلیوں میں apoptosis کی حوصلہ افزائی کی ، جبکہ nonsecreted mNGAL اپوپٹوسس (شکل 9A، B) کو دلانے کے لئے NGAL-R کے ساتھ تعامل نہیں کرسکتا ہے۔ یہ ظاہر کیا گیا ہے کہ Ras/B-Raf/MEK/ERK [10,11] اور AKT/mTOR [38] راستے ADPKD خلیات میں الگ ہو گئے ہیں، جو سیل کے پھیلاؤ اور سسٹ کی توسیع کا باعث بنتے ہیں۔ ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ خفیہ شدہ mNGAL نے ERK (شکل 8A) اور AKT (شکل 8B) کے راستوں کو روکا اور غیر خفیہ mNGAL غیر فعال ERK پاتھ وے (شکل 8A) کو روکا۔ یہ تجویز کرتا ہے کہ ERK پاتھ وے کو NGAL-R کے ذریعے ذہنی غیر فعال کرنا ضروری نہیں ہو سکتا۔ سوال کو دریافت کرنے کے لیے 2L3 سیلوں میں NGAL-R کا ناک آؤٹ انجام دیا جائے گا۔

اس کے علاوہ، 2L3 خلیوں میں mNGAL کی زیادہ کارکردگی نے سیل سسٹ کی توسیع (شکل 10) کو روکا اور NGAL (2.27 ng/mL) (شکل 7J) کے نسبتاً کم سراو کے ساتھ ہوا جس کے اثرات mNGAL (2 mg/mg/m) کے اعلیٰ ارتکاز کے ساتھ ہیں۔ mL) پچھلے 3D کلچر تجربات میں لاگو کیا گیا (شکل 6)۔ یہ نتیجہ E. coli سے mNGAL کی بعد از ترجمے کی ترمیم کی کمی کی وجہ سے ہو سکتا ہے جو پچھلے تجربات میں استعمال کیا گیا تھا، جس کے لیے mNGAL کی زیادہ خوراک کی ضرورت ہوتی تھی تاکہ سسٹوں کے بڑھنے کو روکا جا سکے (شکل 6)۔ مزید جانچ کرنے کے لیے کہ آیا mNGAL کی پوسٹ ٹرانسلیشنل ترمیم E. coli سے زیادہ recombinant mNGAL کی ضرورت کے لیے ذمہ دار عنصر ہے، ایک مشروط میڈیم بشمول ایک ماؤس سیل لائن سے چھپے ہوئے mNGAL کو مزید مطالعات میں استعمال کیا جائے گا۔

موجودہ مطالعے میں، RT – qPCR، ویسٹرن بلوٹنگ، ELISA، BrdU انکارپوریشن، اور 3D کلچر کے لیے استعمال ہونے والے pN + LS اور pN − LS خلیے ایک مخلوط پولی کلونل پول سے حاصل کیے گئے تھے، جس میں مخلوط آبادی میں ٹرانسجن اظہار کی سطح مختلف تھی۔ کلونل سیلز کا استعمال کرتے ہوئے اوپر بیان کردہ طریقوں سے ADPKD 2L3 سیلوں میں mNGAL کے طریقہ کار کی شناخت سے ADPKD کے مستقبل کے طبی علاج کے لیے حکمت عملی تلاش کرنے میں مدد ملنی چاہیے۔

5. نتائج

اس مطالعے میں، ہم نے ایک لافانی ADPKD سیل لائن کا استعمال کرتے ہوئے NGAL کی موجودگی میں سسٹ کے بڑھنے میں کمی کے بنیادی میکانزم کی کھوج کی۔ ریکومبیننٹ mNGAL کے اضافے نے ADPKD خلیوں میں سیل پھیلاؤ کو روک دیا۔ پیتھولوجیکل تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ ایم این جی اے ایل نے پھیلاؤ کو کم کیا اور ADPKD خلیوں میں apoptosis اور autophagy راستے کو حوصلہ افزائی کی۔ اس کے علاوہ، ایک 3D سیل کلچر پلیٹ فارم قائم کیا گیا تھا تاکہ سسٹ کے بڑھنے کی نشاندہی کی جا سکے اور یہ ظاہر کیا گیا کہ recombinant mNGAL کے اضافے نے سسٹوں کے بڑھنے کو روکا ہے۔ مزید برآں، سیکریٹڈ mNGAL (pN + LS) کے اوور ایکسپریشن کا ADPKD سیلوں کے سسٹوں کے بڑھنے کو روکنے میں غیر سیکریٹڈ mNGAL (pN − LS) کے مقابلے میں زیادہ اثر پڑا، حالانکہ دونوں شکلوں نے سسٹ کا قطر، بڑے سائز کے سسٹوں کا رقبہ اور فیصد کم کیا، نیز پھیلاؤ، اپوپٹوسس اور آٹوفجی پر ان کے اثرات۔ ہم یہ نتیجہ اخذ کرتے ہیں کہ خفیہ شدہ ایم این جی اے ایل میں اے ڈی پی کے ڈی خلیوں میں غیر سیکریٹڈ ایم این جی اے ایل کے مقابلے میں سسٹ کی توسیع کو روکنے کی زیادہ واضح اور مستقل صلاحیت ہے۔ ہمارا کام ADPKD کے مستقبل کے طبی علاج کے لیے حکمت عملیوں کی شناخت میں مدد کر سکتا ہے۔

اضافی مواد: اس مضمون کے ضمنی ویڈیوز آن لائن مل سکتے ہیں (1) ویڈیو S1: 3D کلچر میں سسٹ کی تعمیر: https://reurl.cc/Kjy8rq (26 نومبر 2021 کو رسائی حاصل کی گئی)؛ (2) ویڈیو S2: 3D کلچر میں سسٹ کے Z-stack حصے: https://reurl.cc/VXGY5y (26 نومبر 2021 کو رسائی حاصل کی گئی)۔ ضمنی گراف: تصویر 1D کے منفی کنٹرولز (LTL اور DBA سٹیننگ کو چھوڑ کر) آن لائن https://reurl.cc/LpMmje پر پایا جا سکتا ہے (26 نومبر 2021 کو رسائی حاصل کی گئی)۔ مصنف کی شراکتیں: تصوراتی، W.-YJ، HMH-L۔ اور Y.-YC؛ ڈیٹا کیوریشن، H.-YC؛ رسمی تجزیہ، H.-YC؛ فنڈنگ ​​کا حصول، HMH-L. اور Y.-YC؛ طریقہ کار، H.-YC، W.-YJ، EW، C.-MH، HMH-L. اور Y.-YC؛ پروجیکٹ ایڈمنسٹریشن، H.-YC اور HMH-L.؛ وسائل، W.-YJ، S.-TJ اور Y.-YC؛ نگرانی، HMH-L. تصور، H.-YC؛ تحریری-اصلی مسودہ، H.-YC اور HMH-L.؛ تحریری جائزہ اور ترمیم، H.-YC اور HMH-L۔ تمام مصنفین نے مخطوطہ کے شائع شدہ ورژن کو پڑھا اور اس سے اتفاق کیا ہے۔ فنڈنگ: اس تحقیق کو گرانٹس 107-2622-B-006-005-CC2 اور 108-2622-B-006-002- CC2 منسٹری آف سائنس اینڈ ٹیکنالوجی (MOST) اور یونیورسٹی ایڈوانسمنٹ کے ہیڈ کوارٹر سے فنڈ کیا گیا تھا۔ نیشنل چینگ کنگ یونیورسٹی، تائنان، تائیوان (یوآن یو چیو) سے۔ ادارہ جاتی جائزہ بورڈ کا بیان: قابل اطلاق نہیں ہے۔ باخبر رضامندی کا بیان: قابل اطلاق نہیں ہے۔ ڈیٹا کی دستیابی کا بیان: مطالعہ کے دوران تیار کردہ ڈیٹا متعلقہ مصنف کی درخواست پر دستیاب ہے۔ اعترافات: مصنفین MOST کے زیر اہتمام نیشنل تائیوان نارمل یونیورسٹی کی مالیکیولر امیجنگ کور سہولت کی مدد کے لیے شکر گزار ہیں۔ ہم وائرس کے ذرات، پلازمیڈ اور متعلقہ خدمات فراہم کرنے کے لیے تائیوان میں اکیڈمیا سینیکا میں قومی RNAi کور سہولت کا شکریہ ادا کرتے ہیں۔ گرافک ایڈیٹنگ میں مدد کرنے پر ہم Shu-Wen Lo کا شکریہ ادا کرتے ہیں۔ مفادات کے تصادم: مصنفین مفادات کے تصادم کا اعلان نہیں کرتے ہیں۔

حوالہ جات

1. Bergmann، C.؛ Guay-Woodford, LM; ہیرس، پی سی؛ ہوری، ایس. پیٹرز، DJ؛ ٹوریس، VE پولی سسٹک گردے کی بیماری۔ نیٹ Rev. Dis پرائمر 2018، 4، 50۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

2. گرانتھم، جے جے کلینیکل پریکٹس۔ آٹوسومل غالب پولی سسٹک گردے کی بیماری۔ این انگلش جے میڈ 2008، 359، 1477–1485۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

3. چیپ مین، AB؛ Devuyst, O.; Eckardt, K.-U.; گانسیوورٹ، آر ٹی؛ ہیرس، ٹی. ہوری، ایس. Kasiske, BL; اوڈلینڈ، ڈی۔ پی، وائی؛ پیرون، آر ڈی؛ وغیرہ آٹوسومل ڈومیننٹ پولی سسٹک کڈنی ڈیزیز (ADPKD): گردے کی بیماری سے ایگزیکٹیو سمری: امپرونگ گلوبل آؤٹکمز (KDIGO) تنازعات کانفرنس۔ کڈنی انٹ۔ 2015، 88، 17–27۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

4. گرانتھم، جے جے؛ ملاملا، ایس. Swenson-Fields, KI کیوں گردے آٹوسومل ڈومیننٹ پولی سسٹک کڈنی کی بیماری میں ناکام ہوجاتے ہیں۔ نیٹ Rev. Nephrol. 2011، 7، 556–566۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

5. ہیرس، پی سی؛ ٹوریس، VE جینیاتی میکانزم اور آٹوسومل ڈومیننٹ پولی سسٹک کڈنی کی بیماری میں سگنلنگ پاتھ ویز۔ جے کلین تفتیش کریں۔ 2014، 124، 2315–2324۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

6. اونگ، اے سی؛ ہیریس، پی سی سسٹ کی تشکیل اور بیماری کا ایک پولی سسٹین سنٹرک نقطہ نظر: پولی سسٹینز کا دوبارہ جائزہ لیا گیا۔ کڈنی انٹ۔ 2015، 88، 699–710۔ [کراس ریف]

7. ویمبس، ٹی. رینل سسٹ کی تشکیل میں تھرڈ ہٹ سگنلنگ۔ جے ایم Soc نیفرول۔ 2011، 22، 793–795۔ [کراس ریف]

8. حناوکا، K.؛ گوگنو، ڈبلیو بی سی اے ایم پی آٹوسومل پولی سسٹک گردے کی بیماری کے خلیوں میں خلیوں کے پھیلاؤ اور سسٹ کی تشکیل کو منظم کرتا ہے۔ جے ایم Soc نیفرول۔ 2000، 11، 1179–1187۔ [کراس ریف]

9. Starremans، P.؛ لی، ایکس۔ فنرٹی، پی. گو، ایل. تاکاکورا، اے. نیلسن، ای. Zhou, J. Pkd1 کے 5' آخر میں سومیٹک ان فریم ڈیلیٹیشن کے ذریعے پولی سسٹک کڈنی کی بیماری کے لیے ایک ماؤس ماڈل۔ کڈنی انٹ۔ 2008، 73، 1394–1405۔ [کراس ریف]

10. یاماگوچی، ٹی. ناگاو، ایس. والیس، ڈی پی؛ بیلیبی، ایف اے؛ Cowley, BD; پیلنگ، جے سی؛ گرانتھم، جے جے سائکلک اے ایم پی آٹوسومل ڈومیننٹ پولی سسٹک کڈنی سے سسٹ اپیتھیلیل سیلز میں B-Raf اور ERK کو چالو کرتا ہے۔ کڈنی انٹ۔ 2003، 63، 1983–1994۔ [کراس ریف]

11. یاماگوچی جل، ٹی. پیلنگ، جے سی؛ رامسوامی، این ٹی؛ ایپلر، جے ڈبلیو؛ والیس، ڈی پی؛ ناگاو، ایس. روم، ایل اے؛ سلیوان، ایل پی؛ گرانتھم، جے جے سی اے ایم پی ایکسٹرا سیلولر سگنل ریگولیٹڈ کناز پاتھ وے کو چالو کرکے رینل سسٹ اپیتھیلیل سیلز کے ان وٹرو پھیلاؤ کو متحرک کرتا ہے۔ کڈنی انٹ۔ 2000، 57، 1460–1471۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

12. زو، ص. سیبین، چیف جسٹس؛ Xu, X.; ہیرس، پی سی؛ لن، ایکس۔ آٹوفیجی ایکٹیویٹر ایک آٹوسومل ڈومیننٹ پولی سسٹک کڈنی ڈیزیز ماڈل میں سیسٹوجنیسیس کو دباتے ہیں۔ ہم مول جینیٹ 2016، 26، 158–172۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

13. بیلیبی، ایف. ظفر، آئی۔ روی چندرن، کے. Segvic, AB; جانی، اے. Ljubanovic, DG; ایڈلسٹین، سی ایل ہائپوکسیا-انڈیکیبل فیکٹر-1 (HIF-1) اور پولی سسٹک کڈنی ڈیزیز (PKD) میں آٹوفجی۔ ایم۔ J. Physiol.-Ren. فزیول 2011, 300, F1235–F1243۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

14. چون، وائی؛ کم، جے آٹوفجی: سیلولر ہومیوسٹاسس اور زندگی کے لیے ایک ضروری تنزلی کا پروگرام۔ سیلز 2018، 7، 278۔ [کراس ریف]

15. Rubinsztein, DC; شپلکا، ٹی. ایلزار، زیڈ میکانزم آف آٹوفاگوسم بایوجنسیس۔ کرر بائول 2012، 22، R29–R34۔ [کراس ریف]

16. مکوپادھیائے، ایس. پانڈا، پی کے؛ سنہا، این. داس، ڈی این؛ بھوٹیا، ایس کے آٹوفجی اور اپوپٹوسس: وہ کہاں ملتے ہیں؟ اپوپٹوس 2014، 19، 555–566۔ [کراس ریف]