سپیکٹرم ایکٹیویٹی ریلیشن شپ اور مالیکیولر ڈاکنگ کی بنیاد پر Atractylodis Macrocephalae Rhizoma سے Tyrosinase inhibitors کا انتخاب اور خصوصیات

کاپی رائٹ © 2021 Yong-Qin Liu et al. 2is تخلیقی العام انتساب لائسنس کے تحت تقسیم کیا گیا ایک کھلا رسائی مضمون ہے، جو کسی بھی میڈیم میں غیر محدود استعمال، تقسیم اور تولید کی اجازت دیتا ہے، بشرطیکہ اصل کام کا صحیح حوالہ دیا گیا ہو۔

Cistancheکولیجن کی پیداوار کو فروغ دینے کا کام ہے، جو جلد کی لچک اور چمک کو بڑھا سکتا ہے اور جلد کے خراب خلیوں کی مرمت میں مدد کر سکتا ہے۔CistanchePhenylethanol Glycosides کا ٹائروسینیز کی سرگرمی پر ایک نمایاں کمی کو کنٹرول کرنے والا اثر ہوتا ہے، اور ٹائروسینیز پر اثر کو مسابقتی اور الٹ جانے والی روک تھام کے طور پر دکھایا گیا ہے، جو Cistanche میں سفید کرنے والے اجزاء کو تیار کرنے اور استعمال کرنے کے لیے سائنسی بنیاد فراہم کر سکتا ہے۔ اس لیے جلد کی سفیدی میں سیستانچے کا کلیدی کردار ہے۔ یہ ہو سکتا ہےمیلانین کی پیداوار کو روکنارنگت اور پھیکا پن کو کم کرنے کے لیے؛ اور جلد کی لچک اور چمک کو بہتر بنانے کے لیے کولیجن کی پیداوار کو فروغ دیتے ہیں۔ cistanche کے ان اثرات کی وسیع پیمانے پر پہچان کی وجہ سے، جلد کو سفید کرنے والی بہت سی مصنوعات نے صارفین کی طلب کو پورا کرنے کے لیے Cistanche جیسے جڑی بوٹیوں کے اجزا کا استعمال شروع کر دیا ہے، اس طرح Cistanche کی تجارتی قدر میں اضافہ ہو رہا ہے۔جلد کی سفیدیمصنوعات. خلاصہ یہ کہ جلد کی سفیدی میں cistanche کا کردار بہت اہم ہے۔ اس کا اینٹی آکسیڈینٹ اثر اور کولیجن پیدا کرنے والا اثر رنگت اور پھیکا پن کو کم کر سکتا ہے،جلد کی لچک اور چمک کو بہتر بنائیں، اور اس طرح ایک whitening اثر حاصل. اس کے علاوہ، جلد کو سفید کرنے والی مصنوعات میں Cistanche کا وسیع استعمال یہ ظاہر کرتا ہے کہ تجارتی قدر میں اس کے کردار کو کم نہیں سمجھا جا سکتا۔

سفیدی کے لیے Organic Cistanche پر کلک کریں۔

مزید کے لیے پوچھیں: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Atractylodis macrocephalus Rhizoma (AMR) ایک مشہور کلاسیکی چینی روایتی دوا (CTM) ہے، جو ہزاروں سالوں سے کئی بیماریوں کے لیے ٹانک کے طور پر استعمال ہوتی رہی ہے۔ قدیم چین میں اسے محل میں خوبصورتی کے لیے اضافی خوراک کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ ابتدائی مطالعات میں، جلد کو سفید کرنے کا کام اور ٹائروسینیز (TYR) پر اہم روک تھام کا اثر جو کہ AMR کے میلانین کی ساخت میں رد عمل کرنے والا انزائم ہے دریافت کیا گیا، اور متعلقہ تحقیق شاذ و نادر ہی رپورٹ کی گئی۔ اس مطالعہ میں، ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) کے ساتھ جزوی کم از کم اسکوائر ریگریشن تجزیہ (PLS) کا اطلاق TYR سرگرمی پر کیمیکل اجزاء اور AMR کے 11 بیچوں کی روکنے والی سرگرمی کے درمیان ہم آہنگی کے سروے کے لیے کیا گیا تھا۔ PLS کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ chromatographic peaks 11 (atractylenolide III) اور 15 TYR سرگرمی کی روک تھام کے لیے اہم موثر اجزاء ہو سکتے ہیں جیسا کہ سپیکٹرم سرگرمی کے تعلقات سے معلوم ہوتا ہے۔ مزید برآں، atractylenolide III کی TYR روکنے والی سرگرمی کو ان وٹرو ٹیسٹ کے ذریعے -arbutin نے ایک مثبت کنٹرول دوائی کے طور پر استعمال کیا تھا۔دیان وٹرو ٹیسٹ اور مالیکیولر ڈاکنگ کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ atractylenolide III میں TYR روکنے والی سرگرمی زیادہ ہے اور TYR کیٹلیٹک جیب میں موجود باقیات سے منسلک ہو سکتی ہے۔دیrefore، bioassay، مالیکیولر ڈاکنگ، اور سپیکٹرم ایکٹیویٹی کے تعلقات نمونوں کے معیار کو فارماسیوٹیکل سے متعلقہ فعال اجزاء سے جوڑنے کے لیے موزوں ہیں۔ اور ہمارا مطالعہ سفید کرنے والی کاسمیٹکس میں AMR کے پانی کے عرق کو استعمال کرنے کے لیے ایک نظریاتی بنیاد رکھے گا۔

1. تعارف

Tyrosinase (TYR)، جسے پولیفینول آکسیڈیز کے نام سے بھی نامزد کیا جاتا ہے، ایک پولی فنکشنل گلائکوسلیٹڈ کاپر پر مشتمل انزائم ہے جو جانوروں، پودوں اور مائکروجنزموں میں وسیع پیمانے پر موجود ہے [1–3]۔ سالماتی آکسیجن کی موجودگی میں، ٹائروسین کو سب سے پہلے TYR کے ذریعے ڈوپا میں آکسائڈائز کرنے کے لیے اتپریرک کیا جاتا ہے، اور پھر مزید ڈوپاکوئنون میں آکسائڈائز کیا جاتا ہے، جو ڈوپا پگمنٹ بنانے کے لیے آئسومرائز ہوتا ہے۔ ڈوپا پگمنٹ نے آخر کار CO2 اور TRP-2 کی شراکت سے میلانین تشکیل دیا، جو جلد کی مختلف بیماریوں کا سبب بنتا ہے جیسے کہ ہائپر پگمنٹیشن، میلاسما، فریکلز، اور عمر کے دھبے [4, 5]۔ TYR ایک اہم کردار ادا کرتا ہے کیونکہ یہ میلانین مرکب [6-8] کے دوران ایک اہم انزائم اور پابندی کا انزائم ہے۔ روغن کے دھبوں اور میلانوما میں TYR کی سرگرمی اور مقدار میں نمایاں اضافہ ہوا ہے [9]۔ آج کل، TYR روکنے والوں کو ہائپو پگمنٹڈ ایجنٹوں کے طور پر ان کے اویکت استعمال کی وجہ سے وسیع توجہ ملی ہے [10]۔

Atractylodis macrocephalus rhizoma (AMR)، Atractylodes macrocephalaKoidz کا خشک rhizoma، چینی فارماکوپیا [11-15] میں مرتب کی گئی چینی جڑی بوٹیوں کی دوائیوں میں سے ایک ہے۔ قدیم چین میں، AMR کو سفید کرنے کے لیے مشہور کلاسک فارمولے کی تشکیل کے لیے اختیار کیا گیا تھا جس کا نام "Seven-white Ointment" رکھا گیا تھا اور اسے محل میں خوبصورتی کے لیے اضافی خوراک کے طور پر استعمال کیا گیا تھا [16]۔ یہ اطلاع دی گئی کہ AMR میں بنیادی طور پر sesquiterpenoids اور triterpenoids شامل ہیں (بشمول atractylenolideI، atractylenolide II، اور atractylenolide III)، polyacetylenes، coumarins اور phenylpropanoids، flavonoids اور flflavonoid glycosides، polysaccharides، 7000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000 فیصد). تاہم، جلد کو سفید کرنے اور فعال اجزاء پر اس کے اثرات شاذ و نادر ہی رپورٹ ہوئے۔دیسپیکٹرم سرگرمی کے تعلقات کا مطالعہ ان کی مطابقت کو تلاش کرنے کے لئے لاگو کیا گیا تھا۔

سپیکٹرم سرگرمی کے تعلق پر تحقیق نہ صرف کیمیائی اجزاء اور فارماکوڈینامکس کے درمیان علیحدگی کی کمی کو دور کر سکتی ہے بلکہ ریاضی کے ماڈل [19، 20] کے ذریعے فنگر پرنٹس کو فارماکوڈینامکس کے ساتھ کافی حد تک منسلک کر سکتی ہے۔ویںای سپیکٹرم ایکٹیویٹی ریلیشن شپ فنگر پرنٹ اور فارماکوڈینامکس کے درمیان مطابقت کو دریافت کرتا ہے تاکہ چینی جڑی بوٹیوں کی ادویات کی مادی بنیاد کو واضح کرنے کے لیے ایک قابل اعتبار طریقہ پیش کیا جا سکے [21]۔دیفنگر پرنٹس HPLC, UPLC, GC, GC MS, اور LC-MS کے ذریعہ عام طور پر قائم کیے گئے تھے [19, 22-24]۔ "فارماکوڈینامکس" ڈیٹا عام طور پر ماڈلز کے ذریعہ حاصل کیا جاتا ہے [25]۔دیڈیٹا پروسیسنگ کے طریقے، بنیادی طور پر پرنسپل کمپوننٹ انیلیسس (PCA)، جزوی کم سے کم اسکوائرز (PLS) ریگریشن تجزیہ، آرتھوگونل جزوی کم از کم اسکوائر-تعصبی تجزیہ (OPLS-DA)، کینونیکل ارتباطی تجزیہ (CCA)، اور گرے ریلیشنل تجزیہ (GRA) شامل ہیں۔ عام طور پر [26-29].

AMR کے اجزاء کو واضح کرنے کے لیے جو TYR کی روک تھام کی سرگرمی میں حصہ ڈالتے ہیں [30, 31]، HPLC کے ذریعے AMR کے 11 بیچوں کے فنگر پرنٹس قائم کیے گئے تھے۔ وٹرو میں TYR کی روک تھام کی سرگرمی کے فارماکوڈینامک کی جانچ بائیو کیمیکل انزیمیٹک طریقہ سے کی گئی۔ 2e موثر مرکبات کا انتخاب اسپیکٹرم ایکٹیویٹی ریلیشنیشن ماڈل کے ذریعے کیا گیا تھا جو فنگر پرنٹ چوٹیوں کو فارماکوڈینامک ڈیٹا کے ساتھ جوڑ کر قائم کیا گیا تھا۔ مزید برآں، وٹرو ٹیسٹ اور مالیکیولر ڈاکنگ تجربات کے ذریعے فعال مادوں کی توثیق کی جائے گی۔ 2is مطالعہ AMR کو روغن والی جلد کی بیماریوں کے علاج کی دوا کے طور پر لاگو کرنے اور اسے سفید کرنے والے کاسمیٹکس کے اضافی کے طور پر تیار کرنے کی ایک نظریاتی بنیاد رکھ سکتا ہے۔

2. مواد اور طریقہ

2.1 کیمیکل اور مواد.میتھانول (99.5 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر) سائنوفرم کیمیکل ریجنٹ کمپنی لمیٹڈ (شنگھائی، چین) سے خریدا گیا تھا۔ فاسفورک ایسڈ (99 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر) Chengdu Jinshan Chemical Reagent Co., Ltd. (Chengdu, China) سے خریدا گیا تھا۔ Acetonitrile Tiandi Reagent Co., Ltd. (USA) سے خریدا گیا تھا۔ Atractylodes III (98 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر)، فاسفیٹ بفر، ٹائروسینیز، اور L-tyrosine بیجنگ Soleibao Technology Co., Ltd. (بیجنگ، چین) سے خریدے گئے تھے۔ -آربوٹن (99.7 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر) چائنا اکیڈمی آف فوڈ اینڈ ڈرگ آئیڈینٹیفیکیشن سے خریدا گیا تھا۔ Tyrosinase اور L-tyrosine استعمال کرنے سے پہلے فاسفیٹ بفر (pH 6.8) میں تحلیل ہو گئے تھے۔ Atractyloses III اور -arbutin کو 50 فیصد میتھانول (v/v) میں تحلیل کیا گیا تھا۔دیخالص پانی Hangzhou Wahaha Baili Food Co., Ltd. (Hangzhou, China) سے خریدا گیا تھا۔ Comix C18 کالم (250 × 4.6 mm, 5 μm) Guangzhou Philemon Scientific Instrument Co., Ltd. (Guangzhou, China) سے خریدا گیا تھا۔

2.2 پلانٹ کا مواد۔دیAMR دواؤں کے نمونوں کے 11 بیچ جمع کیے گئے تھے اور ٹیبل 1 میں دکھائے گئے ہیں۔دیمندرجہ بالا نمونوں کی توثیق پروفیسر رونگگوئی کن (اسکول آف فارمیسی، گیزہو میڈیکل یونیورسٹی) نے کی تھی۔

2.3۔ نکالنا۔ہر نمونے کے جڑی بوٹیوں کے ٹکڑوں (تقریباً 10 گرام) کا وزن درست طریقے سے کیا گیا اور پھر ایک گول نیچے فلاسک میں رکھا گیا، جس میں پانی شامل کیا گیا اور نکالنے کے لیے ریفلکسنگ کی گئی۔ AMR کے پانی کے عرق کو حاصل کرنے کے لیے مصنوعات کو کم دباؤ میں خشک کیا گیا تھا۔ 2en، AMR کے پانی کے نچوڑ (تقریباً 3000 ملی گرام) کا وزن درست طریقے سے کیا گیا اور 50 فیصد میتھانول (v/v) کے ساتھ تحلیل کیا گیا۔

2.4 HPLC تجزیہ۔Comix C18 ریورسڈ فیز کرومیٹوگرافی کالم (250 × 4.6 ملی میٹر، 5 μm)۔دیموبائل فیز 0.1 فیصد فاسفورک تیزابی پانی (A)-acetonitrile (B) کا مرکب تھا۔ الیشن سسٹم کو ڈیزائن کیا گیا ہے اور اسے ٹیبل 2 میں درج کیا گیا ہے۔دیدرج ذیل شرح 0.6 ملی لیٹر فی منٹ پر طے کی گئی تھی۔ 2e کالم کا درجہ حرارت 30 ڈگری تھا۔دیUA طول موج 210 nm تھی۔دیانجیکشن کا حجم 30 μL تھا۔

پتہ لگانے کے طریقہ کی تصدیق درستگی ٹیسٹ، ریپیٹ ایبلٹی ٹیسٹ، اور استحکام ٹیسٹ کے ذریعے کی گئی۔

2.5 کیمومیٹرک تجزیہ۔اس مطالعہ میں، AMR کے 11 بیچوں کے فنگر پرنٹس کی عام چوٹیوں کی معلومات HCA، PCA، اور OPLS-DA کے سافٹ ویئر SIMCA14.1 میں درآمد کی گئیں۔

2.6۔ وٹرو میں TYR روکنا ٹیسٹ۔ دیAMR کے نچوڑ کو فاسفیٹ (pH 6.8) بفر کے ساتھ تحلیل کیا گیا، 4 ڈگری پر ذخیرہ کیا گیا، اور پھر انزائم کے پرکھ کے لیے استعمال کیا گیا۔

اس مطالعہ میں، TYR سرگرمی کی روک تھام کا تعین کرنے کے لیے L-tyrosine کو بطور ذیلی استعمال کیا گیا تھا۔دیرد عمل کے حل ٹیبل 3 کے مطابق تیار کیے گئے تھے، اور TYR سرگرمی پر AMR کی روک تھام کی شرح کا تعین کیا گیا تھا۔ سب سے پہلے، رد عمل کے حل کو 10 منٹ کے لیے 37 ڈگری پانی کے غسل میں ڈالا گیا۔ دوم، TYR حل کو T2 اور T4 رد عمل کے حل میں فوری طور پر شامل کیا گیا۔ 2 سوم، رد عمل کے حل 37 ڈگری پانی کے غسل کے مستقل درجہ حرارت پر 10 منٹ تک مکمل طور پر مکس ہونے کے بعد رد عمل ظاہر کرتے ہیں۔ آخر میں، جاذب اقدار کے رد عمل کے حل کو فوری طور پر 475 nm پر ناپا گیا۔ روک تھام کی شرح ( فیصد ) مساوات سے حاصل کی گئی تھی: روک تھام کی شرح ( فیصد ) =[(AT2− AT1) − (AT4 − AT3)]/(AT2− AT1) × 100 فیصد۔

2.7۔ سپیکٹرم سرگرمی تعلقات کا تجزیہ۔ دیسافٹ ویئر "چینی روایتی دوائی کرومیٹوگرافک فنگر پرنٹ مماثلت کی تشخیص کا نظام 2012 اے ایڈیشن" ہر چوٹی کے برقرار رکھنے کے اوقات کو ایڈجسٹ کرنے کے لئے استعمال کیا گیا تھا، اور چوٹی کے علاقے (PA) کو برابری کے ذریعہ پروسیس کیا گیا تھا۔دیn، مقداری ڈیٹا حاصل کیا گیا۔دیPLS ریگریشن مساوات سافٹ ویئر SIMCA14.1 کے ساتھ ترتیب دی گئی تھی۔ چوٹی کے علاقے کو آزاد متغیر (X) کے طور پر لیا گیا تھا، اور TYR روکنے کی شرح کو منحصر متغیر (Y) کے طور پر مقرر کیا گیا تھا۔

2.8۔ TYR اور مالیکیولر ڈاکنگ پر Atractylodes III کا روک تھام کا اثر۔TYR پر Atractylenolide III کے روکنے والے اثر کی گواہی دینے کے لیے، in vitro enzymatic ایکٹیویٹی ٹیسٹ -arbutin کے ذریعے کروائے گئے جو ایک مثبت کنٹرول دوائی کے طور پر کام کرتا ہے۔

AutoDock4.2 پروگرام ڈاکنگ سمیلیشنز میں لاگو کیا گیا تھا۔ Agaricus bisporus (PDB ID: 2Y9X) کے کرسٹل ڈھانچے کو TYR [32] کے 3D ڈھانچے کے طور پر لیا گیا تھا۔ ہم نے Atractylodes III میں TYR کی ڈاکنگ کی نقلی کارکردگی کا مظاہرہ کیا۔ AutoDock Vina کے ساتھ ڈاکنگ کے مقصد کے ساتھ، گرڈ کا سائز (x, y, z)=(16, 12, 14) کے لیے ڈیزائن کیا گیا تھا، اور گرڈ سینٹر کو (x, y, z) { کے لیے ڈیزائن کیا گیا تھا۔ {10}} (−10.348, −28.279, −45.925)۔ ہر نقلی طریقہ کار میں، ڈیفالٹ پیرامیٹرز کے ساتھ پیش رفت آٹو گرڈ اور آٹو ڈاک سے چلتی ہے۔ Lamarckian جینیاتی الگورتھم (LGA) کو سب سے مناسب لیگنڈ بائنڈنگ واقفیت کا پتہ لگانے کے لئے اپنایا گیا تھا۔

3. نتائج اور مباحثہ

3.1 طریقہ کار کی توثیقتجزیاتی طریقہ کے لیے درستگی، تکرار اور استحکام کی توثیق کی گئی۔ درستگی کی جانچ میں، رشتہ دار برقرار رکھنے کے اوقات (RRTs) اور رشتہ دار چوٹی والے علاقوں (RPAs) کی درستگی {{0} سے زیادہ نہیں تھی۔{7}}RSD میں بالترتیب 2 فیصد اور 4 فیصد؛ مماثلت 1 تھی۔ RRTs اور RPAs کی دہرانے کی صلاحیت RSD میں 0.11 فیصد اور 4 فیصد سے کم تھی، اور مماثلت 0.998 سے زیادہ یا اس کے برابر تھی۔ استحکام کا اندازہ 0، 6، 8، 12، اور 18 گھنٹے کے بعد لیبارٹری کے ماحولیاتی درجہ حرارت پر محفوظ کردہ ایک نمونہ حل کی جانچ کرکے لگایا گیا۔ عام چوٹیوں کے RRTs اور RPAs کے RSDs بالترتیب 0.1 فیصد اور 4 فیصد سے کم تھے۔ مماثلت 0.999 سے زیادہ تھی۔دینتائج نے تجویز کیا کہ فنگر پرنٹ تجزیہ کے لیے AMR تجرباتی نظام مستحکم اور قابل اعتماد ہے۔

3.2 HPLC فنگر پرنٹ اسٹیبلشمنٹ اور مماثلت کا تجزیہ۔Atractylodes III حوالہ جات کے فنگر پرنٹ کو شکل 1(a) میں دکھایا گیا ہے۔ AMR نمونے نے اپنی چوٹیوں کے درمیان سازگار علیحدگی ظاہر کی (شکل 1(b))۔ کامل حالات میں، AMR نمونوں کے 11 مختلف بیچوں کے HPLC فنگر پرنٹس بنائے گئے تھے (شکل 1(c))، اور مماثلت کا حساب لگایا گیا تھا۔ مماثلت کے نتائج جدول 4 میں دکھائے گئے ہیں، جس سے پتہ چلتا ہے کہ 11 نمونوں کی تمام مماثلت کی قدریں 0.8 سے زیادہ تھیں، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ تمام نمونے کیمیائی مرکبات کی اقسام میں ایک جیسے تھے۔ سولہ عام چوٹیوں کو UV سپیکٹرم کے برقرار رکھنے کے وقت کا موازنہ کرکے دیکھا گیا۔ چوٹی 11 کو حوالہ مادہ کے ذریعہ Atractylodes III کے طور پر شناخت کیا گیا تھا۔ 16 عام چوٹیوں کے PAs کے RSDs 1.18 فیصد اور 58.68 فیصد کے درمیان تھے (ٹیبل 5)۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ مختلف پیداواری علاقوں سے AMR میں کیمیائی مادوں کے مواد مختلف تھے۔

3.3 کیمومیٹرک تجزیہ

3.3.1 ایچ سی اے مختلف کلسٹرز اور فنگر پرنٹس کی مماثلت کی بنیاد پر مختلف پیداواری علاقوں سے AMR کی شناخت کے لیے HCA کا اطلاق کیا گیا تھا۔ AMR کے 11 بیچوں میں مشترکہ چوٹی کا علاقہ ایک اشارے کے طور پر استعمال کیا گیا تھا، اور کلسٹر تجزیہ سافٹ ویئر SIMCA14.1 کے ذریعے کیا گیا تھا۔ نتائج شکل 2 میں دکھائے گئے ہیں۔ AMR کے 11 بیچوں کے نمونوں کو 3 زمروں میں تقسیم کیا گیا جب کلاس کے فاصلے 20 اور 30 ​​کے درمیان تھے، جن میں سے S4، S8، S9، S1، اور S3 کو زمرے I اور S7 میں گروپ کیا گیا تھا۔ زمرہ II میں گروپ کیا گیا، جبکہ S2، S5، S10، S6، اور S11 کو زمرہ III میں گروپ کیا گیا۔

3.3.2 پی سی اے۔ اس مطالعہ میں، AMR کے 11 بیچوں کے PCA کا حساب لگایا گیا تھا۔ 16 پرنسپل اجزاء میں، پہلے پانچ پرنسپل اجزاء کے فرق کی مجموعی شراکت 91.3 فیصد تھی۔دیپہلے دو اجزاء کا سکور میٹرکس تجزیہ کے لیے استعمال کیا جائے گا کیونکہ مجموعی تغیر 65.9 فیصد سے تجاوز کر گیا ہے۔دیrefore، کچھ معلومات کی عدم موجودگی میں، پرنسپل جزو کا ایک دو جہتی طیارہ بنائیں کہ abscissa ایک پرنسپل جز تھا اور ordinate ایک اور اہم جز تھا۔ پھر، 11 نمونوں کو 2D طیارے پر پیش کیا گیا تاکہ ان کا قدرتی اجتماع دیکھا جا سکے (شکل 3(a))۔ یہ قائم کیا گیا تھا کہ S4، S8، S9، S1، اور S3 کی واضح درجہ بندی تھی، S7 کو ایک قسم میں تقسیم کیا جا سکتا ہے، اور S2، S5، S10، S6، اور S11 کو دوسری قسم میں تقسیم کیا جا سکتا ہے۔دیپی سی اے کا نتیجہ ایچ سی اے کے نتائج سے مطابقت رکھتا تھا۔

لوڈ ڈایاگرام میں ہر نقطہ ایک کرومیٹوگرافک چوٹی کی نمائندگی کرتا ہے، جو کہ ہر ایک کرومیٹوگرافک چوٹی کے جامع اثر میں شراکت کی نمائندگی کرتا ہے۔پرنسپل اجزاء.دیمتغیرات کی وزن کی قیمت کر سکتے ہیںکیمیائی ساخت کے درمیان تعلق کو ظاہر کرتا ہے۔اور نمونہ سب سے زیادہ حد تک۔دیسے زیادہ دورلوڈ ڈایاگرام کی اصلیت، متغیر جتنا زیادہ ہوگا۔وزندینتیجہ شکل 3(b) میں دکھایا گیا ہے، جس نے تجویز کیا ہے۔کہ کرومیٹوگرافک چوٹی 9, 11 (atractylenolide III)،اور 12 کا پہلے پرنسپل جزو پر زیادہ اثر پڑا. تاہم، کرومیٹوگرافک چوٹی 4، 5، 6، 15، اور 16 ہےدوسرے پرنسپل جزو پر زیادہ اثر پڑا۔ یہنے ظاہر کیا کہ مندرجہ بالا کرومیٹوگرافک چوٹیوں میں a ہو سکتا ہے۔درجہ بندی پر زیادہ اثر.

3.3.3 OPLS-DAدی11 نمونوں کو دو گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا کہ S1، S3، S4، S8، اور S9 پہلا گروپ تھا اور S2، S5، S6، S7، S10، اور S11 دوسرا گروپ تھا۔دیتمام نمونوں کی عام چوٹی کی معلومات OPLS-DA کے لیے SIMCA14.1 سافٹ ویئر میں درآمد کی گئی تھی۔ R2 X اور R2 Y ماڈل کی وضاحتی شرح کو x اور y میٹرکس میں انفرادی طور پر بیان کرتے ہیں، اور Q2 ماڈل کی پیشین گوئی کی صلاحیت کو نمایاں کرتا ہے۔دینتائج سے پتہ چلتا ہے کہ R2 X، R2 Y، اور Q2 کی قدریں بالترتیب 0.939، 0.992، اور 0.583 تھیں، جو سبھی {{ سے زیادہ تھیں۔ 9}}.5، اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ ماڈل نمونوں کے دو گروپوں میں فرق کر سکتا ہے اور ڈیٹا پروسیسنگ میں بہتر فٹنگ اور پیش گوئی کرنے کی صلاحیت رکھتا ہے۔ یہ مختلف پیداواری علاقوں سے AMR کو ممتاز کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے (شکل 4(a))۔

دیOPLS-DA ماڈل میں پروجیکشن (VIP) کے لیے اہم متغیرات کا پروفائل نمونے میں ہر کرومیٹوگرافک چوٹی کی شراکت کی عکاسی کر سکتا ہے۔دی16 کرومیٹوگرافک چوٹیوں کی VIP اقدار ہر AMR نمونے پر اثر و رسوخ کی عکاسی کرتی ہیں۔ انتخاب کے اصول کی بنیاد پر کہ VIP ویلیو 1 سے زیادہ تھی۔{2}} اور ایرر بار اصل سے کم تھا (شکل 4(b))، 4 اہم کرومیٹوگرافک چوٹیوں کو منتخب کیا گیا تھا، جنہیں ترتیب سے ترتیب دیا گیا تھا: چوٹی 1 > چوٹی 6 > چوٹی 16 > چوٹی 5۔

دیلوڈ ڈایاگرام کے تجزیہ کے نتائج شکل 4(c) میں دکھائے گئے ہیں، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ مذکورہ بالا 4 اہم کرومیٹوگرافک چوٹیوں کی پوزیشنیں اصل سے بہت دور تھیں۔ یہ تجویز کیا گیا تھا کہ 4 کرومیٹوگرافک چوٹیوں نے AMR کی درجہ بندی کو نمایاں طور پر متاثر کیا، اور یہ اجزاء جن کی نمائندگی 4 کرومیٹوگرافک چوٹیوں سے ہوتی ہے وہ ہر نمونے کے اہم مارکر اجزاء ہو سکتے ہیں۔

3.4 وٹرو میں TYR پر AMR کی روک تھام کی سرگرمی کا اندازہ۔دیTYR سرگرمی پر مختلف پیداواری علاقوں سے AMR کے روکنے والے اثرات کا تعین بائیو کیمیکل انزائم طریقہ سے کیا گیا تھا۔دیTYR سرگرمی پر نمونوں کے اثرات جدول 6 میں درج ہیں۔ 10 mg/mL ارتکاز کے ساتھ ہر نمونہ TYR کی سرگرمی کو روک سکتا ہے اور فارماسولوجیکل سرگرمی نمایاں طور پر مختلف تھی، جن میں S5 کی روک تھام کی شرح سب سے زیادہ تھی، جبکہ S6 سب سے کم تھی۔

3.5 سپیکٹرم-اثر تعلقات کا تجزیہ۔ اس مضمون میں، PLS کا اطلاق سپیکٹرم سرگرمی کے تعلق کا تجزیہ کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔دیجزوی ریگریشن گتانک اور VIP قدر کو اعداد و شمار 5(a) اور 5(b) میں دکھایا گیا ہے، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ کرومیٹوگرافک چوٹیاں 1، 2، 5، 6، 7، 9، 10، 11، 15، اور 16 مثبت طور پر منسلک تھیں۔ TYR سرگرمی کی روک تھام، لیکن کرومیٹوگرافک چوٹی 3، 4، 8، 12، 13، اور 14 ان کے ساتھ منفی طور پر منسلک تھے۔ کرومیٹوگرافک چوٹیوں میں مثبت طور پر TYR سرگرمی کی روک تھام کے ساتھ تعلق ہے، کرومیٹوگرافک چوٹیوں 11 (Atractylodes III) اور 15 کی VIP قدریں 1 سے زیادہ تھیں، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ یہ دونوں اجزاء TYR سرگرمی کی روک تھام کو نمایاں طور پر متاثر کرتے ہیں۔

3.6۔ TYR اور مالیکیولر ڈاکنگ پر Atractylodes III کا روک تھام کا اثر۔دیTYR سرگرمی پر Atractylodes III کے روکنے والے اثر کا تعین وٹرو میں بائیو کیمیکل انزائم طریقہ سے -arbutin کے ساتھ مثبت کنٹرول کے طور پر کیا گیا تھا۔دینتائج سے پتہ چلتا ہے کہ TYR سرگرمی پر Atractylodes III اور -arbutin کی روک تھام کی شرح بالترتیب 63.68 ± 2.36 فیصد اور 94.85 ± 0.35 فیصد تھی، جب نمونوں کا ارتکاز 1 mg/mL تھا۔

مالیکیولر ڈاکنگ کا استعمال TYR (اعداد و شمار 6(a)–6(c)) کے ساتھ تعامل کرنے والے Atractylodes III کے بائنڈنگ میکانزم کا مطالعہ کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔دیمشروم ٹائروسینیز کی بائنڈنگ سائٹ ایک تنگ، اتلی گہا پر مشتمل ہوتی ہے جس میں دو تانبے کے آئنوں (Cu2 پلس) ہوتے ہیں جن میں سے ہر ایک انزائم کے فعال مرکز میں تین ہسٹائڈائن کی باقیات (جیسے، His 61) کے ذریعے مستحکم ہوتا ہے۔ اس مطالعے میں، Atractylodes III ایک چھوٹا مالیکیول مرکب ہے جو انزائم کے فعال مرکز میں واقع ہے اور ارد گرد کے باقیات (His 244, Phe 264, Ala 286, His 263, Val 283, His259, His 85, Asn 260) کے ساتھ تعامل کرتا ہے۔ قابل ذکر بات یہ ہے کہ Atractylodes III نے 1.9 ˚ A کے بانڈ کی لمبائی کے ساتھ Asn 260 پر ایک مستحکم ہائیڈروجن بانڈ تشکیل دیا۔

4. نتائج

اس مطالعہ میں، ایک منظم طریقہ قائم کیا گیا تھا جو HPLC فنگر پرنٹس کو کیمومیٹرک تجزیہ کے ساتھ جوڑتا تھا تاکہ AMR کے نمونوں کو مختلف ماخذ سے الگ کیا جا سکے، اور AMR کے سفید ہونے کا اثر بائیو کیمیکل انزائم طریقہ سے ثابت ہوا۔ سپیکٹرم-اثر تعلقات نے اشارہ کیا کہ کرومیٹوگرافک چوٹیاں 1، 2، 5، 6، 9، 10، 11، 15، اور 16 TYR سرگرمی پر AMR روکنے والے اثر سے مثبت طور پر منسلک تھیں، جن میں چوٹی 11 (atractylenolide III) اور 15 ہو سکتی ہے۔ اہم فعال اجزاء۔ دریں اثنا، atractylenolide III میں وٹرو ٹیسٹ میں اعلی TYR روکنے والی سرگرمی ہے، اور مالیکیولر ڈاکنگ کے نتیجے سے ظاہر ہوا کہ اس کا طریقہ کار TYR کیٹلیٹک کیپسول میں امینو ایسڈ کی باقیات کے پابند ہونے سے متعلق ہو سکتا ہے۔دیrefore، ان نتائج نے ثابت کیا کہ بایواسے، مالیکیولر ڈاکنگ، اور سپیکٹرم ایکٹیویٹی کے رشتے نمونوں کے معیار کو فارماسیوٹیکل سے متعلقہ فعال اجزاء سے جوڑنے کے لیے موزوں ہیں۔

ڈیٹا کی دستیابی

اس مطالعہ کے نتائج کی حمایت کرنے کے لیے استعمال ہونے والا ڈیٹا متعلقہ مصنف کی درخواست پر دستیاب ہے۔

انکشاف

یونگ کن لیو اور چانگ یان سو کو شریک اولین مصنفین کے طور پر شمار کیا جاتا ہے۔

مفادات میں تضاد

مصنفین نے اعلان کیا ہے کہ اس مطالعہ میں ان کی دلچسپی کا کوئی تنازعہ نہیں ہے۔

مصنفین کی شراکتیں۔

یونگ کن لیو اور چانگ یان سو نے اس کام میں تعاون کیا۔

اعترافات

یہ مطالعہ Guizhou صوبے (نمبر 20195200925) میں کالج کے طلباء کے لیے اختراعی اور کاروباری تربیتی پروگرام کے ذریعے سپانسر کیا گیا تھا۔

حوالہ جات

[1] Y.-L. Wang, G. Hu, Q. Zhang, et al.، "Salvia miltiorrhiza اور Carthamus tinctorius سے tyrosinase inhibitors کی اسکریننگ اور خصوصیت بذریعہ سپیکٹرم-اثر تعلقات کے تجزیہ اور سالماتی ڈاکنگ،" جرنل آف اینالیٹیکل میتھڈز ان کیمسٹری، جلد۔ 2018، آرٹیکل ID 2141389، 10 صفحات، 2018۔

[2] HX Cui, FF Duan, SS Jia, FR Cheng, and K. Yuan, "Antioxidant and tyrosinase inhibitory activity of seed oils from Torreya grandis fort. ex Lindl," BioMed Research International, vol. 2018، آرٹیکل ID 5314320، 10 صفحات، 2018۔

[3] Y. Tian، Z. Zhang، N. Gao، P. Huang، اور FY Wu، "Tyrosinase سرگرمی کی نگرانی کے لیے ایک لیبل فری luminescent asay and inhibitor screening with responsive lanthanide coordination polymer nanoparticles،" Spectrochimica Acta Part A: مالیکیولر اور بائیو مالیکولر سپیکٹروسکوپی، والیوم۔ 228، 2020۔

[4] H. Liu, B. Liu, P. Huang, Y. Wu, FY Wu, اور L. Ma, "گولڈ نینو پارٹیکلز کے ذریعے اتپریرک چاندی کی دھات کاری کی بنیاد پر ٹائروسینیز کا رنگین تعین،" MikroChim Acta، جلد۔ 187، نمبر 10، ص۔ 551، 2020۔

[5] DC فرانکو، GS de Carvalho، PR Rocha، R. da Silva Teixeira، AD da Silva، اور NR Raposo، "مشروم ٹائروسینیز کی سرگرمی پر resveratrol analogs کے روکنے والے اثرات،" مالیکیولز (بیسل، سوئٹزرلینڈ)، جلد۔ 17، نمبر 10، صفحہ 11816– 11825، 2012۔

[6] HH Kim, JK Kim, J. Kim, S.-H. جنگ، اور کے. لی، "ایپی سوڈز تھنبرجینس سے کیفیوئلکوئنک ایسڈز کی خصوصیت اور ان کی میلانوجینیسیس روکی سرگرمی،" ACS اومیگا، والیوم۔ 5، نہیں 48، صفحہ 30946–30955، 2020۔

[7] F. Pintus، D. Span`o، A. Corona، اور R. Medda، "Euphorbia characiasextracts کی اینٹی ٹائروسینیز سرگرمی،" پیر جے، والیم۔ 3، ص۔ e1305، 2015۔

[8] M. Shi, Y. Zhang, M. Song, Y. Sun, C. Li, اور W. Kang، "Psoralea corylifolia L. میں مارکر اجزاء کی اسکریننگ اسپیکٹرم-اثر تعلقات اور اجزاء کی دستک کے ساتھ- UPLC-MS(2) کی طرف سے،" بین الاقوامی جرنل آف مالیکیولر سائنسز، جلد۔ 19، نمبر 11، 2018

[9] G.-H. وانگ، C.-Y. چن، T.-H. Tsai et al.، "Tyrosinase inhibitory and antioxidant activity of Angelica dahurica root extracts for four different probiotic bacteria fermentations," Journal of Bioscience and Bioengineering, vol. 123، نمبر 6، صفحہ 679–684، 2017۔

[10] YS Lin, HJ Chen, JP Huang et al., "Tyrosinase inhibitory activity of Viti's vinifera leaf extracts کا استعمال کرتے ہوئے حرکیات،" BioMed Research International، vol. 2017، آرٹیکل ID 5232680، 5 صفحات، 2017۔

S. Yang, J. Zhang, Y. Yan, et al. "Atractylodes macrocephala Koidz کے فارماسولوجک میکانزم کی تحقیقات کے لیے نیٹ ورک فارماکولوجی پر مبنی حکمت عملی۔ دائمی گیسٹرائٹس کے علاج کے لیے،" فرنٹیئرز ان فارماکولوجی، جلد۔ 10، ص۔ 1629، 2019۔

[12] H.-R. یانگ، جے یوان، ایل ایچ۔ لیو، ڈبلیو ژانگ، ایف چن، اور سی-سی۔ ڈائی، "ایٹریکٹائلوڈس میکروسیفالا کوئڈز پلانٹلیٹس میں گبریلیلک ایسڈ اور جیسمونک ایسڈ کے ذریعے ثالثی کی گئی اینڈوفائٹک سیوڈموناس فلوروسینٹ انڈوسیڈ سیسکوٹرپینائڈ جمع،" پلانٹ سیل، ٹشو اینڈ آرگن کلچر (PCTOC)، جلد۔ 138، نمبر 3، صفحہ 445–457، 2019۔

[13] L. Hu, X. Chen, J. Yang, اور L. Guo، "روایتی چینی ادویات Atractylodes macrocephala Koidz کی جغرافیائی توثیق۔ (Baizhu) مستحکم آاسوٹوپ اور کثیر عنصری تجزیوں کا استعمال کرتے ہوئے،" ماس سپیکٹرو میٹری میں ریپڈ کمیونیکیشنز، جلد . 33، نمبر 22، صفحہ 1703–1710، 2019۔

[14] H. Li اور G. Yang، "Atractylodes macrocephala Koidz کا مکمل کلوروپلاسٹ جینوم۔ (Asteraceae)" Mitochondrial DNA Part B، جلد۔ 5، نہیں 3، صفحہ 2060-2061، 2020۔

[15] S. Gu, L. Li, H. Huang, B. Wang, اور T. Zhang، "Atractylodes macrocephala Koidz سے ضروری تیلوں کی اینٹی ٹیومر، اینٹی وائرل، اور اینٹی سوزش افادیت،" مختلف پروسیسنگ طریقوں، مالیکیولز کے ساتھ تیار کردہ ، جلد۔ 24، نمبر 16، 2019

[16] J. Wang, L. Peng, M. Shi, C. Li, Y. Zhang, اور W. Kang، "سپیکٹرم اثر کا رشتہ اور اجزا ناک آؤٹ انجیلیکا ڈہوریکا ریڈکس میں ہائی پرفارمنس مائع کرو میٹوگرافی-Q ایگزیکٹو ہائبرڈ کواڈروپول-اوربٹریپ ماس اسپیکٹرومیٹر،" مالیکیولز، والیم۔ 22، نمبر 7، 2017.

[17] B. Zhu، Q.-L. ژانگ، جے ڈبلیو۔ ہوا، W.-L. چینگ، اور L.-P. کن،"دیAtractylodes macrocephala Koidz کے روایتی استعمال، فائٹو کیمسٹری، اور فارماسولوجی.: ایک جائزہ،" جرنل آف ایتھنوفارماکولوجی، والیم 226، صفحہ 143–167، 2018۔

[18] Y.-Y. فینگ، H.-Y. جی، ایکس ڈی۔ ڈونگ، اور A.-J. لیو، "Atractylodes macrocephala Koidz سے ایک الکحل میں گھلنشیل پولی سیکرائیڈ Eca-109 خلیوں کے apoptosis کو اکساتا ہے،" کاربوہائیڈریٹ پولیمر، والیوم۔ 226، آرٹیکل ID 115136، 2019۔

[19] W. Li, Y. Zhang, S. Shi, et al.، "UPLC-MS/MS اور جزو ناک آؤٹ طریقہ کے ذریعہ مالس پومیلہ کے پیروکاروں کے ساتھ اینٹی آکسیڈینٹ اور ٹائروسینیز کی سرگرمی کا سپیکٹرم-اثر تعلق،" خوراک اور کیمیائی ٹاکسیکولوجی، جلد۔ 133، آرٹیکل ID 110754، 2019۔

[20] B. Xu, J. Gao, S. Zhao, Y. Li, Y. Du, and H. Pan, "دیHPLC فنگر پرنٹ اور متحرک خون اور شہفنی کے پتوں کے تحلیل کرنے والے جمود کے اثر کے درمیان سپیکٹرم اثر کا تعلق،" کرومیٹوگرافیا، والیم 83، نمبر 3، صفحہ 409–421، 2020۔

[21] Y. Feng, Z. Jing, Y. Li et al.، "UPLC-TOF-MS کے ساتھ مل کر سپیکٹرم-اثر تعلقات کا تجزیہ کرکے شوانگ ہوانگ لیان انجیکشن کے anaphylactoid اجزاء کی اسکریننگ،" بایومیڈیکل کرومیٹوگرافی، جلد۔ 33، نمبر 2، آرٹیکل ID e4376، 2019۔

[22] X. Jiang, L. Tao, C. Li et al.، "مختلف علاقوں سے چینی پروپولس کی گروپ بندی، سپیکٹرم-اثر تعلقات اور اینٹی آکسیڈینٹ مرکبات ملٹی ویریٹیٹ تجزیہ اور آف لائن اینٹی ڈی پی پی ایچ پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے،" مالیکیولز، جلد . 25، نمبر 14، 2020۔

[23] Y. Zhao، X.-M. آپ، ایچ جیانگ، جی-ایکس۔ زو، اور بی وانگ، "اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی فنگر پرنٹس اور لیونٹوپوڈیم لیونٹوپوڈیوڈس (وِلڈ.) بیوو کی سوزش کی سرگرمیوں کے درمیان سپیکٹرم-اثر تعلقات،" جرنل آف کرومیٹوگرافی بی، والیم۔ 1104، صفحہ 11-17، 2019۔

[24] X. Zhou, Y. Li, M. Zhang, et al.، "UPLC فنگر پرنٹس اور سی جون زی تانگ کے پھیپھڑوں کے کینسر کے انسداد کے درمیان سپیکٹرم اثر کا تعلق،" ثبوت پر مبنی تکمیلی اور متبادل دوا، والیم۔ 2019، آرٹیکل ID 7282681، 9 صفحات، 2019۔

[25] X. Sun, Q. Zhao, Y. Si et al., "Sarcandra glabra سے proteoglycans کی حیاتیاتی ساختی بنیاد سپیکٹرم-اثر تعلق پر مبنی ہے،" جرنل آف ایتھنوفارماکولوجی، والیم۔ 259، آرٹیکل ID 112941، 2020۔

[26] S. Gao, H. Chen, and X. Zhou, "Ligustrum lucidum کی xanthine oxidase inhibitory activity کے spectrum-effect Relationship پر مطالعہ،" Journal of Separation Science, vol. 42، نمبر 21، صفحہ 3281–3292، 2019۔

[27] J. Tan, J. Liu, H. Wang, et al. "Xueshuan Xinmaining گولی سے خون کو متحرک کرنے والے اجزاء کی شناخت سپیکٹرم-اثر تعلقات اور نیٹ ورک فارماسولوجی تجزیہ کی بنیاد پر،" RSC ایڈوانسز، جلد۔ 10، نہیں 16، صفحہ 9587–9600، 2020۔

[28] J. Zhang, T. Chen, K. Li et al.، "تین کیمومیٹرکس کا استعمال کرتے ہوئے UPLC فنگر پرنٹ اور vasorelaxant سرگرمی کے درمیان سپیکٹرم-اثر تعلقات پر مبنی دونی کے فعال اجزاء کی اسکریننگ،" جرنل آف کرومیٹوگرافی B، جلد۔ 1134-1135، آرٹیکل ID 121854، 2019۔

[29] Y. Chen, G. Pan, W. Xu et al.، "HPLC فنگر پرنٹس کے درمیان سپیکٹرم-اثر تعلقات کا مطالعہ اور Sabia parviflflora کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی،" جرنل آف کرومیٹوگرافی B، جلد۔ 1140، آرٹیکل ID 121970، 2020۔

[30] M. Liao, P. Yan, X. Liu, et al. "UHPLC-MS/MS اور chemometric اپروچز کے ذریعے دواؤں کے Zicao میں shikonins اور shikonofurans کی اینٹی ٹیومر سرگرمی کے لیے سپیکٹرم-اثر تعلق،" جرنل آف کرومیٹوگرافی B، جلد۔ 1136، آرٹیکل ID 121924، 2020۔

[31] جے ایچ وو، وائی ٹی کاو، ایچ وائی پین، اور ایل ایچ وانگ، "اسپیکٹرم-اثر تعلقات کے تجزیہ اور اس کے فارماسولوجک میکانزم پر تحقیقات کے ذریعہ ٹاڈ زہر میں اینٹی ٹیومر اجزاء کی شناخت،" مالیکیولز، جلد۔ 25، نمبر 18، 2020۔

[32] J. Tang، J. Liu، اور F. Wu، "1,3 کی مالیکیولر ڈاکنگ اسٹڈیز اور بائیولوجیکل ایویلویشن،4-تھیاڈیازول ڈیریویٹوز بیئرنگ شیفف بیس موئیٹیز بطور ٹائروسینیز انحیبیٹرز،" بائیو آرگینک کیمسٹری، جلد۔ 69، صفحہ 29–36، 2016۔