Sidt2 Autophagy-lysosomal degradation پاتھ وے میں ایک کلیدی پروٹین ہے اور گردے کی ساخت اور فلٹریشن فنکشن کی بحالی کے لیے ضروری ہے Ⅱ

بحث

مطالعے کی ایک بڑی تعداد سے پتہ چلتا ہے کہ LMPs گردے کے فنکشن یا ساختی ہومیوسٹاسس [21-25] میں ملوث ہیں۔ ہمارے پچھلے مطالعے سے پتہ چلا ہے کہ LMP Sidt2 اشتعال انگیز سگنلنگ پاتھ وے کو متاثر کرتا ہے اور ماؤس گلومیرولر میسنجیئل سیلز کو نقصان پہنچاتا ہے [28]۔ اس مطالعہ میں، پہلی بار، ہم نے LMP Sidt2 کی وجہ سے ماؤس گردوں کی ساخت اور کام پر اثرات کی تحقیقات کی۔ یہ پایا گیا کہ Sidt2 کو حذف کرنے سے ماؤس کے گردے کے پاؤں کے عمل کے فیوژن، تہہ خانے کی جھلی کا گاڑھا ہونا، رینل ٹیوبلر اپیتھیلیل سیل کا ورم، مائیکروولی کو نقصان، اور 24 گھنٹے میں پروٹینوریا میں اضافہ ہوا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ Sidt2 کا نقصان فلٹریشن کی خرابی کا باعث بنتا ہے۔ اور ماؤس کے گردے کی ساخت، لیکن اس کا تفصیلی طریقہ کار واضح نہیں ہے۔

کیونکہ LMPs lysosome کی اہم فعال اکائیاں ہیں [17] اورlysosomal dysfunctionگردے کی بہت سی دائمی بیماریوں (CDKs) کے عام روگجنک عوامل میں سے ایک ہے (refs. [4, 29])، ہم نے Sidt2 کو حذف کرنے کے بعد lysosomes پر متعلقہ تحقیقات کی ہیں اور پتہ چلا ہے کہ تیزابیت والے lysosomes کی تعداد میں کمی آئی ہے اور پی ایچ ایچ وٹرو میں lysosomes میں اضافہ ہوا. تاہم، الیکٹران مائیکروسکوپی تجزیہ کے ذریعہ آٹوفاگوسوم کے پابند بنیادی لائسوزوم کی تعداد اور کل لائزوزوم میں کوئی واضح تبدیلیاں نہیں ہوئیں۔ کیتھیپسنز لائزوسومز [30] میں پروٹولوٹک انزائمز کے سب سے بڑے گروپ کی نمائندگی کرتے ہیں، جن میں سی ٹی ایس بی سب سے زیادہ پرچر لائسوسومل پروٹیز میں سے ایک ہے [31]۔

چونکہ کیتھیپسن کو پختگی (ایکٹیویشن) کے لیے تیزابیت کی ضرورت ہوتی ہے، اس لیے pH میں تبدیلی بالآخر پروٹین کے انحطاط میں نمایاں کمی کا باعث بنے گی [32]۔ ویوو اور ان وٹرو کی سطحوں میں لائسوسومل ایسڈ ہائیڈرولیس کی سرگرمی اور مواد میں کمی واقع ہوئی، مزید اس بات کی تصدیق ہوتی ہے کہ Sidt2 لائسو سوم میں پروٹیز کی پختگی کو متاثر کرکے لائسوسومل فنکشن کو روکتا ہے۔

گردے کے لیے Cistanche کی جڑی بوٹیوں سے متعلق فارمولیشن حاصل کرنے کے لیے یہاں کلک کریں

دریں اثنا، لائزوزوم آٹوفیجی کے اختتام پر سیلولر میٹابولائٹس اور فضلہ کی مصنوعات کو کم کرنے کے لیے ری سائیکلنگ سینٹر کے طور پر کام کرتا ہے [1]۔ آٹوفجی، سیل ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھنے، اور خلیوں کو جسمانی حالتوں میں زندہ رہنے کے قابل بنانے کے لیے نارمل لائسوسومل انحطاط کا فنکشن ضروری ہے [33–36]۔ گردے کی بہت سی بیماریوں کی موجودگی اور نشوونما کا تعلق غیر معمولی آٹوفیجی [37–39] سے ثابت ہوا ہے۔ حالیہ مطالعات سے پتہ چلا ہے کہ Sidt2 ایک lysosomal DNA/RNA ٹرانسپورٹر ہے۔ RNautophagy اور DNautophagy (RDA) کے ذریعے آٹوفجی کی غیر روایتی اقسام منتخب RNA/DNA انحطاط کے لیے اہم ہیں [40]۔ ہم نے پہلے پایا ہے کہ Sidt2 کو حذف کرنے سے آٹوفاگوسوم اور لائسو سومز کے فیوژن کو نقصان پہنچتا ہے، جس کی وجہ سے خراب شدہ مائٹوکونڈریا انحطاط کے قابل نہیں رہتا، جس کے نتیجے میں کنکال کے پٹھوں کی ساخت اور کام کو نقصان پہنچتا ہے [41]۔ لہذا، اس مطالعہ میں، ہم نے آٹوفیجی کی کھوج کی جب Sidt2 کو حذف کرنے سے گردے کو نقصان پہنچا تھا۔ ہم نے مشاہدہ کیا کہ الیکٹران مائیکروسکوپی کے ذریعے Sidt2-/- چوہوں کے گردوں میں آٹوفاگولیسومز جمع ہوئے تھے۔ آٹوفیجی ایک متحرک عمل ہے، جس میں آٹوفگوسوم کی تشکیل اور آٹوفاگولیسومز کی تشکیل اور انحطاط شامل ہے۔ ابتدائی آٹوفاگوزوم کی تشکیل Atg جین کے ذریعے کنٹرول کی جاتی ہے، اور LC3-II کی تشکیل آٹوفاگوزوم کی تشکیل کی علامت ہے [42]۔ ہم نے پایا کہ آٹوفجی سے متعلق پروٹینز Atg اور LC{{14}II دونوں کے اظہار میں Sidt2 کو حذف کرنے کے بعد اضافہ ہوا ہے، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ آٹوفجی کی سرگرمی میں اضافہ کیا جا سکتا ہے۔ تاہم، LC3-II کا جمع ہونا بھی آٹوفجی کے اختتام پر آٹوفگولیسوسم کے راستے میں رکاوٹ کی وجہ سے ہو سکتا ہے۔

گردوں کی آٹوفیجی حالت پر Sidt2 کے اثر کو مزید دریافت کرنے کے لیے، P62 کارگو پروٹین کے اظہار اور تشکیل کی پیمائش کی گئی، اور آٹوفیجی (CQ اور RAPA) کو نشانہ بنانے والی ادویات کے اثرات کی بھی چھان بین کی گئی۔ P62 کو LC3B کے ساتھ جوڑنے کی ضرورت ہے اور پھر lysosome میں انحطاط کی ضرورت ہے۔ P62 پروٹین کی سطح میں اضافہ اکثر آٹوفجی فلوکس [43] کی رکاوٹ کی نمائندگی کرتا ہے۔ P62 کی پیداوار میں اضافے کی وجہ کو ختم کرنے کے لیے، ہم نے P62 کی mRNA لیول کی پیمائش کی اور پتہ چلا کہ P62 کی پیداوار کم ہو گئی تھی، اس لیے LC3-II کا جمع ہونا ممکنہ طور پر رکاوٹ انحطاط کی وجہ سے تھا۔ آٹوفیجی کے عمل کو مزید دریافت کرنے کے لیے، ہم نے کلوروکوئن فلپ تجربہ کیا۔ کلوروکوئن لائزوزوم کے تیزابی ماحول کو بے اثر کر سکتی ہے، اور اس کے نتیجے میں، لائوسووم کے فنکشن کو تباہ کر سکتی ہے اور آٹوفجی کو روک سکتی ہے [44]۔ CQ ٹریٹمنٹ سے پہلے اور بعد میں LC3-II پروٹین میں اضافہ لائزوزوم کے ذریعے انحطاط شدہ آٹوفاگوسومز کی تعداد کو ظاہر کرتا ہے، جو آٹوفجی کی سرگرمی کو ظاہر کر سکتا ہے۔ اسی سی کیو فلپ ٹیسٹ کا استعمال آٹوفاگولیسوسم پاتھ وے کے ذریعے P62 انحطاط کی مقدار کا تعین کرنے کے لیے بھی کیا جا سکتا ہے۔ ہمارے نتائج سے مطابقت رکھتے ہوئے، Sidt2 کو حذف کرنے سے آٹوفجی کے بلاک شدہ اختتام کی وجہ سے آٹوفجی کے بہاؤ میں کمی واقع ہوئی۔ ایک ہی وقت میں، RAPA کے تجربے میں، LC3-II اور P62 پروٹین کی سطح Sidt2−/− گروپ میں نمایاں طور پر بڑھ گئی، جو اس بات کی مزید تائید کر سکتی ہے کہ Sidt2 کی کمی آٹوفجی کے آخری مرحلے کو متاثر کرتی ہے۔

آٹوفجی کے آخری مرحلے میں آٹوفاگولیسومز کی تشکیل اور انحطاط شامل ہے۔ ہم نے LAMP1 اور LC3B امیونو فلوروسینس شریک لوکلائزیشن تجربات کا استعمال آٹوفاگوسوم اور لائزوسومز [45، 46] کے فیوژن کا پتہ لگانے کے لیے کیا، اور نتائج سے ظاہر ہوا کہ Sidt2 کو حذف کرنے کے بعد آٹوفاگوسوم اور لائزوسومز کا فیوژن بلاک ہو گیا تھا۔ Ad-mCherry-GFP-LC3B ڈبل لیبلنگ تجربہ آٹوفاگولیسوسومز کی تشکیل اور انحطاط کا پتہ لگاتا ہے [27]۔ اس نے مزید تصدیق کی کہ Sidt2 ڈیلیٹ ہونے کے بعد گردے کی ساخت اور فنکشن کو پہنچنے والے نقصان کی بنیادی وجہ آٹوفاگولیسومز کی تشکیل اور انحطاط میں رکاوٹ ہے۔

مندرجہ بالا نتائج سے، ہم یہ نتیجہ اخذ کر سکتے ہیں کہ Sidt2 کی عدم موجودگی تیزابی لائزوزوم کی تعداد میں کمی کا سبب بنتی ہے اور یہ کہ لائزوزوم کی تیزابیت کی خرابی ہائیڈولائزڈ انزائمز کی پختگی کو متاثر کرتی ہے۔ یہ آٹوفاگوزوم اور لائسوزوم فیوژن عوارض کے علاوہ آٹوفجی-لائسوسوم انحطاط کے راستے کو پہنچنے والے نقصان کی سب سے اہم وجہ ہوسکتی ہے۔ دریں اثنا، خراب آٹوفجی کا عمل Sidt2 کو حذف کرنے کے بعد خراب گردوں کی ساخت اور فلٹر فنکشن سے قریبی تعلق رکھتا ہے (تصویر 8)۔ ہمارا مطالعہ صرف گردے کی ساخت اور کام پر Sidt2 کے اثرات کا کچھ حصہ بتاتا ہے، لیکن دلچسپ بات یہ ہے کہ کلیدی آٹوفجی پروٹینز کا جمع ہونا اور Sidt2 کے ڈیلیٹ ہونے کی وجہ سے گردے کی ساخت اور فنکشن کی خرابی کلیدی آٹوفجی پروٹین میں تبدیلیوں کی طرح ہے۔ ذیابیطس نیفروپیتھی میں نمایاں طور پر پروٹینوریا میں اضافہ ہوا [37، 47]۔ لائسوسم فنکشن کی مرمت ذیابیطس نیفروپیتھی کے علاج کے لیے ممکنہ نئی حکمت عملی ہو سکتی ہے [37]۔ ہم توقع کرتے ہیں کہ Sidt2 مستقبل میں گردے کی بیماریوں کے روگجنن اور علاج کو دریافت کرنے کا ایک طریقہ فراہم کرے گا۔

چوہوں میں پیشاب کی پروٹین کی جانچ تصادفی طور پر منتخب 12-ہفتہ پرانے WT چوہوں اور Sidt2−/- نر چوہوں کو میٹابولک پنجروں میں رکھا گیا اور روزہ رکھا گیا لیکن پانی دیا گیا۔ 24 گھنٹے پیشاب کے نمونے جمع کیے گئے، اور پھر پیشاب کے پروٹین کے لیے ٹیسٹ کیا گیا (نانجنگ جیانچینگ بائیو انجینیئرنگ انسٹی ٹیوٹ، CHN، C035-2-1) (براہ کرم تفصیلی طریقوں کے لیے ضمنی مواد دیکھیں)۔ سیلز MPC5 ماؤس گلوومیرولر پوڈوکیٹس بینا کلچر کلیکشن سے خریدے گئے تھے، اور 10% FBS (Excell Bio, South America, FSP500) اور کم گلوکوز DMEM (Sigma-Aldrich, 6046) کے ساتھ کلچر کیے گئے تھے۔ SV40 MES 13 ماؤس گلوومیرولر میسنجیل سیل چینی اکیڈمی آف سائنسز کے مخصوص کلچر پرزرویشن کمیٹی سیل بینک سے خریدے گئے تھے، اور 10% FBS (Excell Bio, South America, FSP500) اور ہائی گلوکوز DMEM (Sigma-Aldrich, 6429) کے ساتھ کلچر کیے گئے تھے۔ . سیل کلچر باکس کا CO2 ارتکاز 5% پر برقرار رکھا گیا اور درجہ حرارت 37 ڈگری پر برقرار رکھا گیا۔ کلوروکین (سی کیو) اور ریپامائسن (آر اے پی اے) سگما الڈرچ (C6628، V900930) سے خریدے گئے تھے۔ 10 mM CQ اور 25 mg/mL rapamycin دونوں کو انتہائی خالص پانی میں تحلیل کیا گیا تھا۔ سی کیو کو پیٹری ڈش میں شامل کیا گیا تھا تاکہ حتمی حراستی 50 μM ہو، اور آٹوفجی روکنے والے کے طور پر 16 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ ریپامائسن کو پیٹری ڈش میں 15 μM کی آخری حراستی میں شامل کیا گیا تھا اور آٹوفیگی ایکٹیویٹر کے طور پر 2 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ CRISPR/Cas9 جین ایڈیٹنگ لینٹیو وائرس ویکٹر سسٹم کا استعمال Sidt2 جین Lenticrispr-v2 (AddgenePlasmid49535، Feng Zhang) پلازمیڈ کو ہٹانے کے لیے کیا گیا تھا، اور sgRNA آن لائن ڈیزائن ٹول (http://crispr.mit.edu/) کو استعمال کیا گیا تھا۔ ڈیزائن sgRNA Sidt2 کو نشانہ بناتا ہے۔

پرائمر کی ترتیب حسب ذیل تھی: F: 5′-ACCACACCGTGACCC CAC-3′, R: 5′-GTTGCGGGTCACTGGTGT-3′، بائیوٹیکنالوجی کمپنی (سنگون بائیوٹیک، شنگھائی، CHN) کے ذریعہ ترکیب کردہ۔ CRISPR/Cas9 lentivirus سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے، Lenticrispr-v2 پلاسمڈ کو لائنرائز کیا گیا تھا اور اسے اینیلڈ sgRNA ڈوپلیکس سے منسلک کیا گیا تھا تاکہ Lenticrispr-v{{1{180}}} Sidt2 ریکومبیننٹ پلاسمڈ کی تعمیر کی جاسکے۔ Vigofect (Vigorous Biotechnology, Beijing, CHN) ٹرانسفیکشن ری ایجنٹ کا استعمال Lenticrispr-v2 پلاسمڈ اور Lenticrispr-v2-Sidt2 ریکومبیننٹ پلاسمڈ کو لینٹی وائرس بنانے کے لیے کیا گیا تھا۔ حاصل کردہ لینٹیو وائرس کو MPC5 خلیات اور SV40 MES 13 خلیوں میں منتقل کیا گیا تھا۔ 48 گھنٹے کے بعد، خلیات کو انتخاب کے لیے 72 گھنٹے کے لیے purinomycin کے ساتھ لگایا گیا تھا۔ زندہ بچ جانے والے خلیات Sidt2+/+ گروپ اور Sidt2−/- گروپ تھے جو کامیابی سے منتقل ہو چکے تھے۔ RNA تنہائی اور حقیقی وقت میں PCR پرکھ Trizol (Invitrogen) کا استعمال ماؤس کے گردے کے خلیوں سے RNA نکالنے کے لیے کیا گیا تھا، اور مخصوص RT-PCR طریقہ تھا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا [21]۔ RT-PCR کے پرائمر کی ترتیب درج ذیل تھی: ایکٹین (معنی: F: 5′- GGACTCC TATGTGGGTGACG-3′, R:5′-CTTCTCCATGTCGTCCCAGT-3′), P62 (معنی: F:5′) ′- GGACCCATCTACAGAGGCT G-3′, R: 5′-ATCACAATGGTGGAGGGTGC-3′)، Sidt2 {48}}′)۔ مغربی بلوٹنگ مخصوص طریقہ جیسا کہ پہلے ذکر کیا گیا ہے [28]۔ اس مطالعہ میں، بنیادی اینٹی باڈیز میں خرگوش اینٹی LC3B (1:1000؛ سگما-الڈرچ L7543)، خرگوش اینٹی P62 (1:1000؛ Abcam ab205719)، ماؤس اینٹی- -ایکٹین (1:1000؛ سگما ایلڈرچ) شامل تھے۔ A5316)، خرگوش اینٹی Sidt2 (1:1000؛ Invitrogen PA5-69064)، خرگوش اینٹی Atg5 (1:1000؛ سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی 9980S)، خرگوش اینٹی Atg7 (1:1000؛ سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی 8558S) ، خرگوش مخالف Atg12 (1:1000؛ سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی 2011S)، ماؤس اینٹی LAMP1 (1:1000؛ سانتا کروز بائیوٹیکنالوجی H4A3)، خرگوش اینٹی کیتھیپسن B (1:1000؛ سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی 31718S)۔ Ad-mCherry-GFP-LC3B خلیوں کو Nunc شیشے کے نیچے والی پیٹری ڈشوں پر ٹیکہ لگایا گیا تھا۔ مناسب کثافت تک بڑھنے کے بعد، Ad-mCherry-GFP-LC3B کو شامل کیا گیا (بیو ٹائم، شنگھائی، CHN، C3011-10 mL)، جس کے نتیجے میں حتمی ارتکاز 10 −11 vp/mL ہے۔ 48 گھنٹے تک محرک کرنے کے بعد، ایم چیری اور جی ایف پی فلوروسینس پوائنٹس کی تعداد براہ راست لیزر کنفوکل مائکروسکوپ (لائیکا ایس پی 8، جرمنی) کے تحت دیکھی گئی۔ امیونو فلوروسینس خلیوں کو شیشے کے نیچے والی پیٹری ڈشوں پر ٹیکہ لگایا گیا تھا اور پیرافارمیلڈہائڈ کے ساتھ فکس کیا گیا تھا۔ بلاک کرنے کے بعد، خلیوں کو راتوں رات پرائمری اینٹی باڈی کے ساتھ انکیوبیٹ کیا جاتا تھا، اور پھر اندھیرے میں 90 منٹ تک سیکنڈری اینٹی باڈی کے ساتھ انکیوبیٹ کیا جاتا تھا۔ DAPI (1 ug/mL) کے ساتھ نیوکلی کو رنگنے کے بعد لیزر اسکیننگ کنفوکل مائکروسکوپ (Leica SP8، Germany) کا استعمال کرتے ہوئے خلیوں کی تصویر کشی کی گئی۔ بنیادی اینٹی باڈیز میں P62 (1:200؛ Abcam ab205719)، LAMP1 (1:200؛ سانتا کروز بائیوٹیکنالوجی H4A3)، LC3B (1:200؛ سگما-الڈرچ L7543) شامل ہیں۔ ثانوی اینٹی باڈیز میں اینٹی ماؤس سیکنڈ اری اینٹی سائی3-کنجوگیٹڈ ایفنی پیور بکری اینٹی ماؤس آئی جی جی (H + L) (1:200؛ پروٹینٹیک SA00009-1)، CoraLite488-conjugated Affinipure goat شامل ہیں اینٹی ماؤس IgG (H + L) (1:200؛ Proteintech SA00013-1), CoraLite594- conjugated Affinipure goat anti-rabbit IgG (H + L) (1:200; Proteintech SA{{144) }})۔ LysoTracker (Beyotime, Shanghai, CHN, C1046) کے لیے، ہم نے شیشے کے نیچے والی پیٹری ڈشز پر بھی خلیات کو ٹیکہ لگایا۔ مناسب کثافت تک بڑھنے کے بعد، سیل کلچر فلوئڈ جس میں LysoTracker حتمی ارتکاز 75 nM ہوتا ہے سیلز میں شامل کیا گیا، جن کی 45 میٹر محرک کے بعد تصویر کشی کی گئی۔ فلوروسینٹ نقطوں کی تعداد اور پیئرسن کوریلیشن گتانک شمار کرنے کے لیے امیج جے کا استعمال کریں۔ ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ مشاہدات ہر گروپ سے، 3−5 12-ہفتہ پرانے Sidt2−/− اور WT نر چوہوں کو تصادفی طور پر گردے کے ٹشو کے الیکٹران مائکروسکوپی کے نمونے تیار کرنے کے لیے منتخب کیا گیا تھا، اور مخصوص طریقہ وہی ہے جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [48] الیکٹران مائیکروسکوپ کا استعمال کرتے ہوئے تصادفی طور پر حصوں کی تصاویر لیں، ہر ماؤس کے گردے کے حصوں سے لی گئی 10 سے زیادہ تصاویر ہیں، ہر ماؤس کی الیکٹران مائیکروسکوپ تصویروں سے 8000× میگنیفیکیشن کی 3–5 تصاویر کو تصادفی طور پر منتخب کریں، آٹوفاگولیسومز کی تعداد کا حساب لگائیں۔ تصویر میں، اور Sidt2-/- گروپ کا WT گروپ سے موازنہ کریں۔ سیل الیکٹران مائیکروسکوپ کے نمونوں کی تیاری کے بارے میں، سیل سکریپر کے ساتھ 105 سے کم خلیات کو کھرچیں اور انہیں EP ٹیوب میں جمع کریں، پھر 5 میٹر کے لیے 800 rpm/منٹ پر سینٹری فیوج کریں، سپرناٹینٹ کو ضائع کریں اور اسے الیکٹران مائیکروسکوپ فکسٹیو سے بھریں۔ 4 ڈگری ریفریجریٹر میں 1 گھنٹے سے زیادہ ذخیرہ کرنے کے بعد، اسے معائنہ کے لیے پیش کیا جا سکتا ہے۔ الیکٹران مائکروسکوپ شاٹ KingMed Diagnostics (Guangzhou, China) نے لیا تھا۔ LysoSensor خلیات کو ایک 96-کنویں پلیٹ پر ٹیکہ لگایا گیا تھا۔ مناسب کثافت تک بڑھنے کے بعد، پہلے سے گرم (37 ڈگری) میڈیم جس میں 1 µM LysoSensorDND-160® (تھرمو فشر L7545) شامل کیا گیا تھا۔ خلیوں کو 37 ڈگری پر 5 منٹ کے لئے انکیوبیٹ کیا گیا تھا ، اور پھر پی بی ایس کے ساتھ خلیوں کو تین بار دھونے کے بعد میڈیم کو ہٹا دیا گیا تھا اور تبدیل کیا گیا تھا۔ BioTek Citation 5 (BioTek, Winooski, VT, USA) میں پلیٹ کو پڑھنے کے لیے WellScan موڈ استعمال کیا گیا تھا۔ فلوروسینس کی پیمائش Ex360nm/Em450nm اور Ex380nm/Em540nm اتیجیت/اخراج طول موج کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی، اور lysosome pH کا تعین Em540 سے Em450 کے تناسب سے کیا گیا تھا۔ شماریاتی تجزیہ نتائج کو اوسط ± SEM کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ دو گروپوں کے درمیان شماریاتی موازنہ غیر جوڑی والے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ جب گرافکس 8.0 سافٹ ویئر شماریاتی تجزیہ کے لیے استعمال کیا جاتا تھا، P <0.05 کو شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا۔ اس مطالعے میں تجربات کے ہر گروپ کو آزادانہ طور پر کم از کم تین بار دہرایا گیا۔ ڈیٹا کی دستیابی موجودہ مطالعے کے دوران تیار کردہ اور/یا تجزیہ کیے گئے ڈیٹاسیٹس متعلقہ مصنف سے معقول درخواست پر دستیاب ہیں۔

حوالہ جات

1. Settembre C، Fraldi A، Medina DL، Ballabio A. lysosome سے سگنلز: سیلولر کلیئرنس اور توانائی کے تحول کے لیے ایک کنٹرول سینٹر۔ نیٹ ریو مول سیل بائیول۔ 2013؛ 14:283-96۔

2. Lamming DW، Bar-Peled L. Lysosome: میٹابولک سگنلنگ ہب۔ ٹریفک۔ 2019؛ 20:27–38۔

3. Ballabio A. خوفناک lysosome. EMBO Mol Med. 2016؛ 8:73–76۔

4. Yamamoto T، Takabatake Y، Takahashi A، Kimura T، Namba T، Matsuda J، et al. زیادہ چکنائی والی خوراک کی وجہ سے لائسوسومل dysfunction اور خراب آٹوفیجک فلوکس گردے میں lipotoxicity میں حصہ ڈالتے ہیں۔ جے ایم سوک نیفرول۔ 2017؛ 28:1534–51۔

5. Nonclercq D، Wrona S، Toubeau G، Zanen J، Heuson-Stiennon JA، Schaudies RP، et al. gentamicin کے شدید نمائش کے بعد چوہے کے گردے میں نلی نما چوٹ اور تخلیق نو: ایک وقتی مطالعہ۔ رین فیل۔ 1992؛ 14:507-21۔

Wecistanche کی معاون خدمت - چین میں سب سے بڑا cistanche برآمد کنندہ:

ای میل:wallence.suen@wecistanche.com

واٹس ایپ٪ 2ftel٪3a٪7b٪7b0٪7d٪7d

مزید تفصیلات کے لیے خریداری کریں:

https٪3a٪2f٪2fwww.xjcistanche.com٪2fcistanche-shop

گردے کے لیے 25% ایکیناکوسائیڈ اور 9% ایکٹیوسائیڈ کے ساتھ قدرتی آرگینک سیسٹانچ ایکسٹریکٹ حاصل کریں