چوہوں میں کنکال کے پٹھوں کی ایٹروفی کو کم کرنے کے لئے مائٹوفگی پاتھ وے کو ریگولیٹ کرنے والے سیستانچ ڈیزرٹیکولا پولی سیکرائڈ کے طریقہ کار پر مطالعہ

[خلاصہ]مقصد: چوہوں میں کنکال کے پٹھوں کے ایٹروفی کو کم کرنے کے لئے مائٹوکونڈریل آٹوفجی راستے کو منظم کرنے والے Cistanche deserticola polysaccharides کے طریقہ کار کو تلاش کرنا۔ طریقہ: ساٹھ C57BL/6 چوہوں کو تصادفی طور پر ایک کنٹرول گروپ، ایک ماڈل گروپ، Cistanche deserticola polysaccharides کا ایک کم خوراک والا گروپ، Cistanche deserticola polysaccharides کا ایک درمیانے درجے کا گروپ، Cistanche deserticola polysaccharides کا ایک اعلی خوراک والا گروپ، اور Cistanche deserticola polysaccharides کی ایک اعلی خوراک پلس EX-527 گروپ، ہر گروپ میں 10 چوہوں کے ساتھ۔ کنٹرول گروپ کے علاوہ، چوہوں کے دوسرے گروپوں کو دم معطلی کے طریقہ کار کے ذریعہ ماؤس کنکال کے پٹھوں کے ایٹروفی ماڈل قائم کرنے کے لئے استعمال کیا گیا تھا۔ ہر دواؤں کے گروپ کو گیویج کے ذریعہ متعلقہ ادویات دی گئیں، جبکہ کنٹرول گروپ اور ماڈل گروپ کے چوہوں کو مسلسل 7 دنوں تک دن میں ایک بار گیویج کے ذریعہ جسمانی نمکین کی مساوی مقدار دی گئی۔ چوہوں کے ہر گروپ میں جسم کے بڑے پیمانے پر tibialis anterior پٹھوں کے تناسب میں تبدیلیوں کا موازنہ کریں۔ tibialis کے پچھلے پٹھوں کے ٹشو کو الگ کریں، چوہوں کے ہر گروپ میں پٹھوں کے ریشوں کی atrophy کا مشاہدہ کریں، اور tibialis anterior پٹھوں کے رشتہ دار کراس سیکشنل علاقے کا موازنہ کریں۔ IL-18 اور IL-1 کا پتہ لگانا ہر گروپ افقی میں چوہوں کے tibialis anterior پٹھوں میں؛ ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی کا استعمال کرتے ہوئے ٹبیالیس کے پچھلے پٹھوں میں مائٹوکونڈریل ساختی تبدیلیوں کا مشاہدہ؛ ویسٹرن بلاٹنگ کا استعمال SIRT1/فورک ہیڈ باکس ٹرانسکرپشن فیکٹر O3 (FOXO3)/PTEN inducible kinase protein 1 (PINK1)/E3 ubiquitin ligase (Park) کے راستے کے پروٹین ایکسپریشن کا پتہ لگانے کے لیے کیا گیا تھا ہر گروپ میں چوہوں کے tibialis anterior پٹھوں میں۔ نتیجہ: کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، ٹبیالیس کے پچھلے پٹھوں کا جسم کے بڑے پیمانے پر تناسب، ٹبیالیس کے پچھلے پٹھوں کا رشتہ دار کراس سیکشنل ایریا، اور SIRT1، PINK1، FOXO3، اور پارکن پروٹین کے ٹبیالیس پچھلے پٹھوں کے ٹشو میں رشتہ دار اظہار کی سطح۔ ماڈل گروپ کے چوہوں کو نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا (P<0.05). IL-18 and IL-1 in the tibialis anterior muscle tissue were also significantly reduced β The content significantly increased (P<0.05), and the number of skeletal muscle mitochondria decreased, with mitochondrial swelling and disappearance of ridge structure; After intervention with different doses of Cistanche deserticola polysaccharides, mitochondrial autophagy was enhanced, and the ratio of tibialis anterior muscle to body mass, relative cross-sectional area of tibialis anterior muscle, relative expression levels of SIRT1, PINK1, FOXO3, and Parkin proteins were significantly increased (P<0.05). IL-18 and IL-1 in tibialis anterior muscle tissue were also significantly increased (P<0.05) β The content significantly decreased (P<0.05); Compared with the high-dose group of Cistanche deserticola polysaccharides, the addition of EX-527 reversed the improvement effect of Cistanche deserticola polysaccharides on skeletal muscle atrophy in mice. Conclusion: Cistanche deserticola polysaccharides can improve skeletal muscle atrophy in mice, which may be related to the activation of mitochondrial autophagy mediated by the SIRT1/FOXO3/PINK1/Parkin pathway.  

[مطلوبہ الفاظ] Sکیلیٹل پٹھوں کی ایٹروفی؛ Cistanche deserticola polysaccharides؛ دم کی معطلی؛ SIRT1/FOXO3/PINK1/Parkin سگنلنگ پاتھ وے؛ چوہوں

صحرائی رہنے والے cistanche

کنکال کے پٹھے ورزش، اشارے کی مدد، میٹابولک ہومیوسٹاسس، اور حرارت کی پیداوار کے لیے کلیدی ٹشوز ہیں، جو جسم کے کل ماس کا تقریباً 40 فیصد اور کل پروٹین کا 50 فیصد بنتے ہیں [1]۔ تاہم، بڑھاپے، پٹھوں کا استعمال اور کوئی بھی سنگین بیماری یا چوٹ کنکال کے پٹھوں کے ریشوں کی ایٹروفی کا باعث بنے گی، جو بالآخر پٹھوں کے معیار میں کمی کا باعث بنے گی۔ خاص طور پر بوڑھوں میں، یہ شدید بیماریوں، نظاماتی میٹابولک ڈس آرڈر، اور دائمی بیماریوں کی وجہ سے واقعات کی شرح اور اموات میں اضافے کا سبب بن سکتا ہے، جس سے لوگوں کی صحت اور معیار زندگی کو شدید نقصان پہنچے گا [2]۔ فی الحال، کنکال کے پٹھوں کے ایٹروفی کے لئے منشیات کے علاج کی کمی ہے، لہذا نئی ادویات کی تلاش اسکالرز کی تحقیق کا مرکز ہے۔Cistanche deserticola کا تعلق Rubiaceae خاندان سے ہے اور جنوب مشرقی چین میں وسیع پیمانے پر کاشت کی جاتی ہے۔ اس کی تاریخ 2000 سال سے زیادہ ہے اور اسے مختلف بیماریوں جیسے کہ ڈپریشن، نامردی، آسٹیوپوروسس، ماہواری کی خرابی اور سوزش کے علاج کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔.

Cistanche deserticola کا ٹکڑا

Morinda Officinalis polysaccharide (MOP) اس کے اہم بایو ایکٹیو اجزاء میں سے ایک ہے، لیکن ہڈیوں کے مسلز ایٹروفی کے علاج اور عمل کے طریقہ کار پر محدود تحقیق ہے۔ حالیہ برسوں میں، کنکال کے پٹھوں کی ایٹروفی میں آٹوفجی کے کردار کو بڑھتی ہوئی توجہ ملی ہے۔ تحقیق سے پتا چلا ہے کہ مائٹوکونڈریل آٹوفجی مخصوص آٹوفیجی کے ذریعے خراب مائٹوکونڈریا کو ختم کر سکتی ہے۔ مائٹوکونڈریا کو نقصان پہنچنے کے بعد، ان کی آٹوفیجی کی سطح میں نمایاں اضافہ ہو جائے گا [4]۔ رپورٹس کے مطابق، سائلنٹ انفارمیشن ریگولیٹر 1 (SIRT1) ممالیہ جانوروں میں وسیع پیمانے پر موجود ہے اور سیل کی بقا اور میٹابولزم میں کلیدی کردار ادا کرتے ہوئے، فورک ہیڈ باکس ٹرانسکرپشن فیکٹر O3 (FOXO3) کے ٹرانسکرپشن لیول کو چالو کرکے آٹوفجی سرگرمی کو ریگولیٹ کرنے میں شامل ہوسکتا ہے۔ PTEN-حوصلہ افزائی کناز پروٹین 1 (PINK1)/E3 ubiquitin ligase (Park) پاتھ وے mitochondrial autophagy میں ایک کلاسک راستہ ہے۔ اس مطالعے نے ماؤس سکیلیٹل مسلز ایٹروفی ماڈل قائم کیا جس میں ماؤس سکیلیٹل مسلز ایٹروفی پر مائٹوکونڈریل آٹوفجی پاتھ وے کو ریگولیٹ کرنے والے Cistanche deserticola polysaccharides کے اثر اور متعلقہ میکانزم کو دریافت کرنے کے لیے دم کی معطلی کا طریقہ استعمال کیا گیا۔

1 مواد اور طریقے

1.1 تجرباتی جانور

60 8-ہفتہ پرانا C57BL/6 نر چوہے، وزن 19-25 جی، بیجنگ ہوافوکانگ بائیو ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ کی طرف سے فراہم کردہ، جانوروں کی پیداوار کا لائسنس نمبر SCXK (بیجنگ) 2021-0009 کے ساتھ۔ کھانا کھلانے کا ماحول: درجہ حرارت 22-25 ڈگری، روشنی کے 12 گھنٹے/ تاریکی کے 12 گھنٹے، نسبتاً نمی (45 ± 5) فیصد۔ اس مطالعہ کو طبی تجرباتی جانوروں کی اخلاقیات کمیٹی نے منظوری نمبر IACUC1910621 کے ساتھ منظور کیا ہے۔

1.2 تجرباتی ادویات اور ری ایجنٹس

Cistanche deserticola polysaccharides (بیچ نمبر: SH200810) Shaanxi Fuheng Biotechnology Co., Ltd سے خریدے گئے تھے۔ Interleukin-1 （Interleukin-1 , IL-1 ） ELISA کٹ (بیچ نمبر: E-EL-M0037c) ووہان Yilairuite Biotechnology Co., Ltd سے خریدی گئی تھی۔ ماؤس انٹرلییوکن-18 (IL-18) ​​ELISA کٹ (بیچ نمبر: kt21183) ووہان موساک بائیو ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ سے خریدی گئی تھی۔ EX-527 (بیچ نمبر: A4181) ریاستہائے متحدہ میں APExBIO سے خریدا گیا؛ HE سٹیننگ کٹ (بیچ نمبر: G1120) بیجنگ سولاربیو کمپنی سے خریدی گئی تھی۔ PVDF فلم (بیچ نمبر: 1620177) امریکہ میں Bio Rad کمپنی سے خریدی گئی؛ SIRT1 مونوکلونل اینٹی باڈی (بیچ نمبر: ab110304)، FOXO3 مونوکلونل اینٹی باڈی (بیچ نمبر: ab47285)، PINK1 مونوکلونل اینٹی باڈی (بیچ نمبر: ab23707)، اور پارکن مونوکلونل اینٹی باڈی (بیچ نمبر: ab77924) سب Abcam کمپنی سے خریدے گئے تھے۔ ECL ٹیسٹنگ ریجنٹ (بیچ نمبر: 36208ES60) Yisheng Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd سے خریدا گیا تھا۔ BCA پروٹین کنسنٹریشن ڈیٹرمنیشن کٹ (بیچ نمبر: P0012) شنگھائی بائیونٹیان ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ سے خریدی گئی تھی۔

Cistanche deserticola تجربہ

Cistanche مصنوعات کو دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

1.3 اہم آلات

سپیکٹرا میکس i3 ملٹی فنکشنل انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ (سالماتی آلات)؛ 1645070 الیکٹروفورسس آلہ (بائیو ریڈ، امریکہ)؛ RM2235 روٹری ٹشو سلائسر (لائیکا، جرمنی)؛ HT7700 ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ (ہٹاچی، جاپان)؛ LV-150N آپٹیکل مائکروسکوپ (نیکون کارپوریشن، جاپان)۔

1.4 ماڈلنگ اور گروپ بندی

ساٹھ چوہوں کو تصادفی طور پر ایک کنٹرول گروپ، ایک ماڈل گروپ، کم خوراک والے گروپ Cistanche deserticola polysaccharides، Cistanche deserticola polysaccharides کا ایک درمیانی خوراک والا گروپ، Cistanche deserticola polysaccharides کا ایک اعلی خوراک والا گروپ، اور ایک اعلی خوراک پلس میں تقسیم کیا گیا تھا۔ Cistanche deserticola polysaccharides کا EX-527 گروپ، ہر گروپ میں 10 چوہوں کے ساتھ۔ کنٹرول گروپ کے علاوہ، دوسرے تمام گروپوں نے ماؤس کنکال کے پٹھوں کے ایٹروفی ماڈل قائم کیے ہیں۔ ماڈل کے قیام کا طریقہ [7]: جسم کے قریب ماڈل چوہوں کی دم 1/3 کے ارد گرد چپکنے والی ٹیپ لپیٹیں، جسم اور پنجرے کے نیچے کے درمیان 30 ڈگری کے زاویے کے ساتھ اس بات کو یقینی بنانے کے لیے کہ پچھلے اعضاء مکمل طور پر زمین سے دور ہیں۔ چوہوں کا ہر گروپ کل 14 دن تک آزادانہ طور پر پی سکتا ہے اور کھا سکتا ہے۔ کنٹرول گروپ کو کوئی علاج نہیں ملا۔ 1st، 7th، اور 14th دن چوہوں کے ہر گروپ کے جسمانی وزن میں تبدیلیوں کو ریکارڈ کریں۔ ماڈل چوہوں کا جسمانی وزن کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھا، جو ماڈل کے قیام کی بنیاد کے طور پر کام کرتا ہے [8]۔

1.5 تجرباتی انتظامیہ

کامیاب ماڈلنگ کے بعد، حوالہ [9] کا حوالہ دیتے ہوئے، Cistanche deserticola polysaccharides کے کم، درمیانے اور زیادہ خوراک والے گروپوں میں چوہوں کو بالترتیب 10، 30، اور 50 mg/kg کی مقدار میں Cistanche deserticola polysaccharide محلول کے ساتھ گیویج کیا گیا۔ Cistanche deserticola polysaccharides plus EX-527 کے اعلی خوراک والے گروپ میں چوہوں کو EX-527 (سالوینٹ 1 فیصد DMSO محلول) کا ایک intraperitoneal انجکشن 7.5 mg/kg [10] کی خوراک پر دیا گیا۔ Cistanche deserticola polysaccharides کے اعلی خوراک گروپ کی بنیاد؛ کنٹرول گروپ اور ماڈل گروپ دونوں چوہوں کو مسلسل 7 دنوں تک دن میں ایک بار جسمانی نمکین کی مساوی مقدار کے ساتھ گیویج کیا گیا۔

Cistanche deserticola کے اہم کیمیائی اجزاء

1.6 مشاہداتی اشارے

1.6.1 جسم کے بڑے پیمانے پر ٹبیالیس کے پچھلے پٹھوں کا تناسب

مداخلت کے بعد، چوہوں کے ہر گروپ کے باڈی ماس کو ریکارڈ کریں، چوہوں کو بے ہوشی کریں اور ان کا سر کاٹیں، دونوں اطراف کے ٹبیالیس کے پچھلے پٹھوں کے ٹشو کو الگ کریں، ان کے ماس کو ریکارڈ کریں، اور ٹبیالیس کے پچھلے پٹھوں کے جسمانی بڑے پیمانے پر تناسب کا حساب لگائیں۔

1.6.2 نمونے جمع کرنا

چوہوں کے مندرجہ بالا گروپوں سے tibialis anterior پٹھوں کے ٹشو کو جمع کریں۔ tibialis anterior پٹھوں کے ٹشو کا ایک حصہ HE staining اور tibialis anterior muscle کے رشتہ دار کراس سیکشنل ایریا کے حساب کے لیے 4 فیصد پیرافارمیلڈہائیڈ محلول میں طے کیا گیا تھا۔ دوسرے حصے کو 2.5 فیصد گلوٹرالڈہائیڈ سلوشن میں طے کیا گیا تھا تاکہ ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکروسکوپی پارٹیکل مورفولوجی میں تبدیلیوں کا مشاہدہ کیا جا سکے۔ tibialis anterior پٹھوں کے ٹشو کا ایک اور حصہ لیں اور اسے ELISA اور ویسٹرن بلوٹنگ ٹیسٹنگ کے لیے -80 ڈگری ریفریجریٹر میں محفوظ کریں۔

1.6.3 پٹھوں کے فائبر ایٹروفی اور ٹیبیلیس کے پچھلے پٹھوں کے رشتہ دار کراس سیکشنل ایریا کا HE داغدار مشاہدہ

4 فیصد paraformaldehyde کے ساتھ طے شدہ tibialis anterior پٹھوں کے ٹشو کو لیں اور الکحل کی پانی کی کمی، موم کا ڈوبنا، ایمبیڈنگ اور سلائسنگ جیسے اقدامات کے ذریعے پیرافین کے حصے تیار کریں۔ پیرافین کو زائلین، الکحل کی پانی کی کمی، اور ہیماتوکسیلین-ایوسین کے داغ والے حصوں سے ہٹا دیں۔ تصادفی طور پر 5 مختلف فیلڈز آف ویو کو منتخب کریں، امیجنگ سسٹم کے ساتھ داغدار نتائج کا مشاہدہ کریں، اور امیج 60 سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے ٹبیالیس اینٹریئر پٹھوں کے متعلقہ کراس سیکشنل ایریا کا حساب لگائیں۔

1.6.4 ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی کا استعمال کرتے ہوئے مائٹوکونڈریل ساختی تبدیلیوں کا مشاہدہ

مذکورہ بالا 2.5 فیصد glutaraldehyde فکسڈ tibialis anterior پٹھوں کے ٹشو کو لیں، اور پانی کی کمی، وسرجن، ایمبیڈنگ، سیکشننگ، سٹیننگ اور دیگر مراحل کے بعد، ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکروسکوپی کے تحت مشاہدے اور تصویر کی گرفت کے لیے تصادفی طور پر 5 فیلڈز آف ویو کا انتخاب کریں۔

1.6.5 ELISA اشتعال انگیز عنصر کی سطح کا پتہ لگانا

ریفریجریٹر سے tibialis کے پچھلے پٹھوں کے ٹشو کو ہٹا دیں، اسے ہم آہنگ کریں، سپرنٹنٹ کو سینٹری فیوج کریں، اور IL-18 اور IL-1 مواد کا پتہ لگانے کے لیے ELISA کٹ استعمال کریں۔

1.6.6 مائٹوکونڈریل آٹوفجی پاتھ وے اور متعلقہ پروٹین ایکسپریشن لیول کی مغربی بلوٹنگ کا پتہ لگانا

ریفریجریٹر سے tibialis anterior پٹھوں کے ٹشو کو ہٹا دیں، RIPA lysate، centrifuge شامل کریں، اور 2 μ لیں پروٹین کا ارتکاز BCA طریقہ استعمال کرتے ہوئے L پروٹین کے سپرناٹینٹ میں ماپا گیا۔ پروٹین کے نمونے لینے والے بفر کو شامل کریں اور پروٹین کو ڈینیچر کرنے کے لیے حرارت دیں۔ 30 μG پروٹین کا نمونہ لیں، SDS-PAGE الیکٹروفورسس کے ذریعے الگ کیا گیا، PVDF جھلی میں منتقل کیا گیا، 5 فیصد سکمڈ دودھ کے پاؤڈر کے ساتھ 1 گھنٹے کے لیے سیل کیا گیا، اور پھر SIRT1، FOXO3، PINK1، Parkin شامل کیا گیا - ایکٹین پہلا اینٹی باڈی رات بھر 4 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ ، TBST کے ساتھ دھویا جاتا ہے، اور پھر 1:500 پتلا شدہ دوسری اینٹی باڈی کے ساتھ شامل کیا جاتا ہے۔ 37 ڈگری پر 1 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔ فلم کو دھونے کے بعد، رنگ کی نشوونما اور نمائش کے لیے ڈویلپر شامل کریں، اور ٹارگٹ پروٹین SIRT1، FOXO3، PINK1، Park، اور اندرونی حوالہ بینڈ کی گرے اسکیل قدروں کی پیمائش کے لیے Image J کا استعمال کریں۔

1.7 شماریاتی طریقے

شماریاتی تجزیہ SPSS 27 کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ ایک طرفہ ANOVA کا استعمال کرتے ہوئے متعدد گروپ موازنہ کیے گئے، اور SNK-q ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے مزید جوڑے کے مقابلے کیے گئے۔ پی<0.05 indicates a statistically significant difference.  

2 نتائج

2.1 چوہوں کے ہر گروپ میں ٹبیالیس کے پچھلے پٹھوں کا جسمانی بڑے پیمانے کے تناسب سے موازنہ

کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ کے چوہوں میں ٹبیالیس کے پچھلے پٹھوں کے جسم کے بڑے پیمانے پر تناسب نمایاں طور پر کم ہو گیا تھا (P<0.05); The ratio of tibialis anterior muscle to body mass of mice in the low, medium, and high dose groups of Cistanche deserticola polysaccharides was significantly higher than that in the model group (P<0.05), and the difference between the two groups was statistically significant (P<0.05); Compared with the high-dose group of Cistanche deserticola polysaccharides, the ratio of tibialis anterior muscle to body mass in the high-dose group of Cistanche deserticola polysaccharides+EX-527 mice was significantly reduced (P<0.05). (See Table 1)

ٹیبل 1 چوہوں کے ہر گروپ میں ٹبیالیس کے پچھلے پٹھوں کا جسمانی ماس کے تناسب سے موازنہ (x ± s)

نوٹ: کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، a<0.05; Compared with the model group, b<0.05; Compared with the low-dose group of Morinda officinalis polysaccharides, c<0.05; Compared with the medium dose group of Cistanche deserticola polysaccharides, d<0.05; Compared with the high-dose group of Cistanche deserticola polysaccharides, e<0.05

2.2 چوہوں کے ہر گروپ میں ٹبیالیس کے پچھلے پٹھوں کی پیتھولوجیکل تبدیلیاں

کنٹرول گروپ کے چوہوں میں tibialis anterior پٹھوں کی شکل اور ساخت نارمل تھی۔ ماڈل گروپ کے چوہوں نے anterior tibial پٹھوں کی اہم atrophy ظاہر کی اور خلیوں کے درمیان سوزش کے خلیوں کی دراندازی میں اضافہ کیا۔ Cistanche deserticola polysaccharides کے کم، درمیانے اور زیادہ خوراک والے گروپوں نے چوہوں میں tibialis anterior پٹھوں کی atrophy ظاہر کی، جس میں خلیوں کے درمیان سوزش کے خلیوں کی دراندازی دکھائی دیتی ہے۔ تاہم، ایٹروفی کی ڈگری اور سوزش کے خلیوں کی دراندازی خوراک پر منحصر انداز میں کم ہوئی؛ Cistanche deserticola polysaccharides اور EX-527 گروپ کے اعلی خوراک کے امتزاج نے چوہوں میں anterior tibial پٹھوں کی اہم atrophy ظاہر کی، جس میں خلیوں کے درمیان سوزشی خلیوں کی دراندازی ہوتی ہے۔ (تصویر 1 دیکھیں)

کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ کے چوہوں میں ٹبیالیس پچھلے پٹھوں کا رشتہ دار کراس سیکشنل ایریا نمایاں طور پر کم ہو گیا تھا (P<0.05); Compared with the model group, the relative cross-sectional area of the tibialis anterior muscle in the low, medium, and high dose groups of Cistanche deserticola polysaccharides significantly increased (P<0.05) in a dose-dependent manner; Compared with the high-dose group of Cistanche deserticola polysaccharides, the high-dose group of Cistanche deserticola polysaccharides+EX-527 significantly reduced the relative cross-sectional area of the tibialis anterior muscle in mice (P<0.05); There was no statistically significant difference in the relative cross-sectional area of the tibialis anterior muscle between the high-dose group of Cistanche deserticola polysaccharides and the EX-527 group and the model group (P>0.05)۔ (ٹیبل 2 دیکھیں)

شکل 1 چوہوں کے ہر گروپ میں ٹبیالیس کے پچھلے پٹھوں کے پیتھولوجیکل سلائسس (HE, × 200)

ٹیبل 2 چوہوں کے ہر گروپ میں ٹبیالیس پچھلے پٹھوں کے رشتہ دار کراس سیکشنل ایریا کا موازنہ (x ± s, μm2)

نوٹ: کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، a<0.05; Compared with the model group, b<0.05, c P>0.05; Cistanche deserticola polysaccharides کے کم خوراک والے گروپ کے مقابلے میں، d<0.05; Compared with the medium dose group of Cistanche deserticola polysaccharides, e<0.05; Compared with the high-dose group of Cistanche deserticola polysaccharides, f<0.05

2.3 چوہوں کے ہر گروپ میں ٹبیالیس کے پچھلے پٹھوں کے مائٹوکونڈریل ڈھانچے میں تبدیلیاں

کنٹرول گروپ کے چوہوں میں ٹبیالیس کے پچھلے پٹھوں کا مائٹوکونڈریل ڈھانچہ نارمل تھا۔ کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ کے چوہوں کے ٹبیالیس اینٹریئر پٹھوں میں مائٹوکونڈریا کو بہت کم ترتیب دیا گیا تھا، مائٹوکونڈریا کی سوجن اور رج کے ڈھانچے کے غائب ہونے کے ساتھ، اور ان کے درمیان آٹوفاگوسوم کی ایک چھوٹی سی تعداد بکھری ہوئی دکھائی دے رہی تھی۔ Cistanche deserticola polysaccharides کے کم، درمیانے اور زیادہ خوراک والے گروپوں میں چوہوں کے tibialis anterior پٹھوں میں mitochondria کی تعداد میں اضافہ ہوا، اور mitochondrial سوجن کی ڈگری ماڈل گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم ہوئی، خوراک پر منحصر انداز میں؛ چوہوں کے Cistanche deserticola polysaccharide plus EX-527 گروپ کی اعلی خوراک نے tibialis anterior پٹھوں میں ویرل مائٹوکونڈریل ترتیب، رج کی ساخت کے غائب ہونے کے ساتھ mitochondria کی سوجن، اور ان کے درمیان بکھرے ہوئے آٹوفاگوسومز کی ایک چھوٹی سی تعداد کو ظاہر کیا۔ (تصویر 2 دیکھیں)

شکل 2 چوہوں کے ہر گروپ میں ٹبیالیس پچھلے پٹھوں کے مائٹوکونڈریل ڈھانچے کی الیکٹران مائکروسکوپی（ × 20 000）

2.4 چوہوں کے ہر گروپ میں tibialis anterior myositis عوامل کی سطح کا موازنہ

ماڈل گروپ چوہوں کے ٹبیالیس پچھلے عضلات IL-18, IL-1 مواد کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھا (P<0.05); Low, medium, and high dose groups of Cistanche deserticola polysaccharides IL-18 and IL-1 in the tibialis anterior muscle of mice β The content was significantly lower than that of the model group (P<0.05), and the difference between the two groups was statistically significant (P<0.05); Compared with the high-dose group of Morinda officinalis polysaccharides, the high-dose group of Cistanche deserticola polysaccharides+EX-527 group showed IL-18 and IL-1 in the tibialis anterior muscle of mice β The content significantly increased (P<0.05). (See Table 3)

جدول 3 چوہوں کے ہر گروپ میں سوزش کے عنصر کی سطح کا موازنہ (x ± s, pg)/ μg）

نوٹ: کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، a<0.05; Compared with the model group, b<0.05; Compared with the low-dose group of Morinda officinalis polysaccharides, c<0.05; Compared with the medium dose group of Cistanche deserticola polysaccharides, d<0.05; Compared with the high-dose group of Cistanche deserticola polysaccharides, e<0.05

SIRT1، FOXO3، PINK1، اور پارکن پروٹین کی نسبتی اظہار کی سطح کا موازنہ چوہوں کے 2.5 گروپوں کے ٹبیالیس پچھلے پٹھوں میں

ماڈل گروپ کے چوہوں کے tibialis anterior پٹھوں میں SIRT1، FOXO3، PINK1، اور Parkin پروٹین کی نسبتی اظہار کی سطح کنٹرول گروپ کے مقابلے کم تھی (P<0.05); The relative expression levels of SIRT1, FOXO3, PINK1, and Parkin proteins in the tibialis anterior muscle of mice in the low, medium, and high dose groups of Cistanche deserticola polysaccharides were significantly higher than those in the model group (P<0.05); Compared with the high-dose group of Cistanche deserticola polysaccharides, the relative expression levels of SIRT1, FOXO3, PINK1, and Parkin proteins in the tibialis anterior muscle of mice in the high-dose+EX-527 group of Cistanche deserticola polysaccharides were significantly reduced (P<0.05). (See Figure 3 and Table 4)

نوٹ: A. کنٹرول گروپ؛ B. ماڈل گروپ؛ C. Cistanche deserticola polysaccharides کا کم خوراک گروپ۔ D. Morinda officinalis polysaccharides کے درمیانی خوراک کا گروپ؛ E. Cistanche deserticola polysaccharide ہائی ڈوز گروپ؛ F. Cistanche deserticola polysaccharides ہائی ڈوز پلس EX-527 گروپ

شکل 3 SIRT1، FOXO3، PINK1، اور ہر گروپ میں چوہوں کے tibialis anterior پٹھوں میں پارک پروٹین کا اظہار کا مغربی بلوٹنگ

جدول 4 ہر گروپ میں چوہوں کے ٹبیالیس پچھلے پٹھوں میں SIRT1، FOXO3، PINK1، اور پارکن پروٹین کے متعلقہ اظہار کی سطح کا موازنہ (x ± s)

نوٹ: کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، a<0.05; Compared with the model group, b<0.05; Compared with the low-dose group of Cistanche deserticola polysaccharides, c<0.05; Compared with the medium-dose group of Cistanche deserticola polysaccharides, d P<0.05; Compared with the high-dose group of Cistanche deserticola polysaccharides, e<0.05

3 بحث

بڑھاپے، اعضاء کا استعمال، غذائیت کی کمی اور گلوکوکورٹیکائیڈز جیسی دوائیوں کا طویل مدتی استعمال کنکال کے پٹھوں کی خرابی کی بنیادی وجوہات ہیں [11]۔ حالیہ برسوں میں، کنکال کے پٹھوں کی ایٹروفی نے ایک سنگین صحت کے مسئلے کے طور پر دنیا بھر کی توجہ مبذول کرائی ہے۔ تاہم، کنکال کے پٹھوں کے ایٹروفی کا طریقہ کار جس کی وضاحت کی گئی ہے، ابھی تک کافی نہیں ہے، اور کنکال کے پٹھوں کے ایٹروفی کے علاج کا کوئی طریقہ نہیں ہے۔ اس تجربے نے مزید علاج کے طریقوں کے مطالعہ کے لیے دم کی معطلی کے طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے ایک ماؤس کنکال کے پٹھوں کا ایٹروفی ماڈل قائم کیا۔

Cistanche deserticola ایک بارہماسی بیل کا پودا ہے جس میں متعدد فعال اجزاء جیسے پولی سیکرائڈز اور ایتھر مرکبات ہوتے ہیں۔ اس میں مدافعتی افعال کو منظم کرنا، تھکاوٹ مخالف، ہڈیوں کو مضبوط کرنا، اور یادداشت کو بڑھانا جیسے کام ہوتے ہیں [12]۔

مؤثر اجزاء میں سے ایک کے طور پر، Cistanche deserticola polysaccharides کو سوزش اور ہڈیوں کی ریزورپشن پر روکنے والے اثرات پائے گئے ہیں، ہڈیوں کی ترکیب کو فروغ دیتے ہیں، اور اس طرح اوورییکٹومائزڈ چوہوں کے ماڈلز میں آسٹیوپوروسس کے خلاف حفاظت کرتے ہیں [13]۔ لائی مانشیانگ وغیرہ۔ [14] نے پایا کہ Cistanche deserticola polysaccharides وٹرو میں چوہے کے بون میرو mesenchymal اسٹیم سیلز کے osteogenic تفریق اور پھیلاؤ کو فروغ دے سکتے ہیں۔ YAN CY et al. [15] نے پایا کہ Cistanche deserticola polysaccharides ovariectomized چوہوں میں پورے فیمر، ڈسٹل فیمر، اور proximal femur کی ہڈیوں کے معدنی کثافت کو نمایاں طور پر بڑھا سکتے ہیں، جو کہ صحت کی مصنوعات میں کلیدی غذائی اجزاء کے طور پر ان کے استعمال کے لیے معاون ثبوت فراہم کرتے ہیں۔

سپرمین جڑی بوٹیاں cistanche

اس کے علاوہ، کنکال کے پٹھوں کی ایٹروفی کی خصوصیت ایک بے قابو سوزش کی حالت ہے جو پروٹین کیٹابولزم کو تیز کر سکتی ہے اور اسے کنکال کے پٹھوں کے ایٹروفی میں ایک اہم عنصر سمجھا جاتا ہے [16]۔ اس تحقیق سے پتا چلا ہے کہ ٹبیالیس کے پچھلے پٹھوں کا جسمانی بڑے پیمانے پر تناسب، ٹبیالیس پچھلے پٹھوں کا رشتہ دار کراس سیکشنل ایریا، اور ماڈل گروپ کے چوہوں میں مائٹوکونڈریا کی تعداد میں نمایاں کمی واقع ہوئی ہے۔ IL-18 اور IL-1 مواد میں نمایاں طور پر اضافہ ہوا، مائٹوکونڈریل سوجن اور کرسٹائی ڈھانچہ کے غائب ہونے کے ساتھ، چوہوں میں کنکال کے پٹھوں کے اہم ایٹروفی کی نشاندہی کرتا ہے۔ Cistanche deserticola polysaccharides کی مختلف خوراکوں کے ساتھ مداخلت سے tibialis anterior پٹھوں کے جسمانی بڑے پیمانے پر تناسب، tibialis anterior muscle کے رشتہ دار کراس سیکشنل ایریا، اور mitochondria کی تعداد میں نمایاں اضافہ ہو سکتا ہے، جبکہ IL-18 اور IL{{ کو کم کیا جا سکتا ہے۔ 6} مواد خوراک پر منحصر انداز میں مائٹوکونڈریل آٹوفجی کو بڑھاتا ہے۔ یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ Cistanche deserticola polysaccharides سوزش کے عوامل کی سطح کو کم کرکے چوہوں میں کنکال کے پٹھوں کے ایٹروفی کو کم کر سکتے ہیں، لیکن مخصوص طریقہ کار ابھی تک واضح نہیں ہے۔

کنکال کے پٹھوں میں بڑی تعداد میں مائٹوکونڈریا ہوتا ہے۔ ایک طرف، مائٹوکونڈریا انرجی پروسیسنگ پلانٹس کے طور پر کام کرتا ہے، سیل کی بقا کے لیے توانائی فراہم کرتا ہے۔ دوسری طرف، میٹابولک عمل کے دوران ری ایکٹو آکسیجن پرجاتیوں کا غیر معمولی جمع خود کو نقصان پہنچاتا ہے۔ مائٹوکونڈریل آٹوفجی ناقابل واپسی طور پر نقصان پہنچا مائٹوکونڈریا کو نشانہ بناتا ہے، منتخب طور پر ناپسندیدہ یا خراب مائٹوکونڈریا کو صاف کرتا ہے، اور بہت سی بیماریوں کی موجودگی اور نشوونما سے وابستہ ہے [17]۔ مائٹوکونڈریل آٹوفجی میں SIRT1، FOXO3، PINK1، اور پارکن پاتھ ویز کے کردار کو تسلیم کیا گیا ہے۔ وانگ سووگانگ وغیرہ۔ [18] نے پایا کہ SIRT1، FOXO3، PINK1، اور پارکن کے راستے رینل اسکیمیا ریپرفیوژن انجری کے عمل میں شامل ہیں، جو رینل اسکیمیا ریپرفیوژن انجری کو کم کرنے کے لیے ایک نیا طریقہ کار فراہم کرتے ہیں۔ سیرامائڈ کناز نما پروٹین ایس آئی آر ٹی 1، پن کے 1 اور پارکن کے راستوں کو چالو کرکے، اسکیمیا ریپرفیوژن سے متاثرہ اعصابی نقصان کو کم کرکے مائٹوکونڈریل آٹوفجی کو آمادہ کر سکتے ہیں [19]۔ یہ بات قابل غور ہے کہ عمر سے متعلق کنکال کے پٹھوں کے ایٹروفی [20] کے مطالعے میں، محققین نے پایا کہ مائٹوکونڈریل آٹوفیجی کو اپ گریجولیشن اور PINK1، FOXO3a، اور پارکن پروٹینز کے بڑھتے ہوئے اظہار سے عمر سے متعلق پٹھوں کے ایٹروفی کو کم کیا جا سکتا ہے۔ اس تجرباتی مطالعے سے معلوم ہوا ہے کہ SIRT1، PINK1، FOXO3، اور پارکن پروٹینز کا اظہار ایک کنکال کے پٹھوں کے ایٹروفی ماؤس ماڈل کے tibialis anterior پٹھوں میں نمایاں طور پر کم ہو گیا تھا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ tibialis anterior پٹھوں کے ٹشو میں پاتھ وے پروٹینز کے اظہار کو روکا جا سکتا ہے۔ کنکال کے پٹھوں کی ایٹروفی کے دوران نقل کی سطح، اس طرح مائٹوکونڈریل آٹوفجی کی شمولیت کو روکتا ہے؛ Cistanche deserticola polysaccharides کی مختلف خوراکوں کے ساتھ مداخلت کے بعد، mitochondrial autophagy میں نمایاں اضافہ ہوا، اور SIRT1، PINK1، FOXO3، اور Parkin پروٹین کے اظہار میں نمایاں اضافہ ہوا۔ اس سے ظاہر ہوتا ہے کہ Cistanche deserticola polysaccharides نقل کی سطح پر mitochondrial autophagy کو آمادہ کر سکتے ہیں، اس طرح کنکال کے پٹھوں کی ایٹروفی کو کم کر سکتے ہیں۔ اس مفروضے کی مزید تصدیق کے لیے، اس تجربے میں SIRT1 inhibitor EX-527 متعارف کرایا گیا تھا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ EX-527 نے کنکال کے پٹھوں کے ایٹروفی پر Cistanche deserticola polysaccharides کے ریلیف اثر کو الٹ دیا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ Cistanche deserticola polysaccharides سوزش اور کنکال کے پٹھوں کے ایٹروفی کو کم کر سکتے ہیں اور mitochondrial autophagy کو چالو کر سکتے ہیں۔ راستہ

Cistanche پاؤڈر صحت کے فوائد

خلاصہ،Cistanche deserticola polysaccharides SIRT1/FOXO3/PINK1/Parkin سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کر کے مائٹوکونڈریل آٹوفجی کو آمادہ کر سکتے ہیں، کنکال کے پٹھوں کے ایٹروفی کو کم کر سکتے ہیں، اور سکیلیٹل مسلز ایٹروفی کے طبی علاج کے لیے ممکنہ علاج کی دوائیں فراہم کر سکتے ہیں۔ تاہم، یہ نتیجہ صرف جانوروں کے ماڈلز میں حاصل کیا گیا تھا جس میں دم کی معطلی کی حوصلہ افزائی اٹروفی ہے، اور مختلف پیتھولوجیکل حالات کے تحت کنکال کے پٹھوں کے ایٹروفی ماڈلز کی مزید توثیق کی ضرورت ہے۔

حوالہ

[1] YIN L,LI N,JIA WH,et al. کنکال کے پٹھوں کی ایٹروفی: میکانزم سے علاج تک۔ Pharmacol Res, 2021, 172:105807۔

[2] ایبرٹ ایس ایم، ال زوگبی اے، بوڈائن ایس سی، وغیرہ۔ کنکال کے پٹھوں کی ایٹروفی: میکانزم اور ممکنہ علاج کی دریافت [جے]۔ فزیالوجی (بیتھیسڈا)، 2019,34 (4): 232-239۔

ZHU Z,ZHAO XZ,HUANG F,et al. مورنڈا آفیشنلس پولی سیکرائڈز varicocele-Induced spermato - angiogenesis اور رشتہ دار عوامل کی ماڈیولیشن کے ذریعے جینیاتی خرابی کو کم کرتے ہیں[J]۔ Evid پر مبنی تکمیلی متبادل میڈ، 2019,2019:8453635۔

[4] Wang Lianhui، Mi Guoqing، Xue Manzhong. PINK1/Parkin پاتھ وے [J] کی بنیاد پر شدید دماغی اسکیمیا ریپرفیوژن کے بعد مائٹوکونڈریل آٹوفجی کو ریگولیٹ کرنے والے Xiaoxuming Tang کے مالیکیولر میکانزم اور نیورونل اپوپٹوس کے اثر کو تلاش کرنا۔ روایتی چینی طب کا تعارف، 2022، 28 (1): 36-40، 44

[5] ZHAO XY، LIU YM، ZHU GL، وغیرہ۔ SIRT1 ڈاؤن ریگولیشن نے FOXO3a-Bim/PUMA axis[J] کو چالو کرنے کے ذریعے مینگنیج سے متاثرہ نیورونل اپوپٹوس میں ثالثی کی۔ سائنس کل ماحول، 2019,646:1047-1055۔

[6] NGUYEN TN,PADMAN BS,LAZAROU M. Deci － PINK1/parkin mitophagy[J] کے مالیکیولر سگنلز کی پیروی کرنا۔ Trends Cell Biol,2016,26(10):733-744۔

[7] Ren Chunguang، Pu Rongxi، Hu Die، et al. Heme oxygenase NLRP3 inflammasomes [J] کے ایکٹیویشن کو روک کر چوہوں میں کنکال کے پٹھوں کی ایٹروفی کو کم کرتا ہے۔ جرنل آف آرمی ملٹری میڈیکل یونیورسٹی، 2022,44(2):125-131۔

[8] چن شینگجو۔ دم کی معطلی کے دوران miRNA ایکسپریشن پروفائل میں تبدیلیاں کنکال کے پٹھوں کی ایٹروفی [D] کی حوصلہ افزائی کرتی ہیں۔ بیجنگ: بیجنگ اسپورٹ یونیورسٹی، 2017

[9] Liu Ruyin، Yue Zongjin، Bao Deming. آسٹیوپوروسس ماڈل چوہوں [J] کے vivo میں Cistanche deserticola polysaccharides کے 5-HT، VEGF، اور معدنی مواد پر اثرات کا مطالعہ کریں۔ چینی جرنل آف بائیو کیمیکل میڈیسن، 2015، 35 (4): 59-62

[10] Hu Yan، Wang Suogang، Zhai Qiongyao، et al. SIRT کے ضابطے پر میکانزم کا مطالعہ1-FOXO3-PINK1-Parkin پاتھ وے نے asiaticoside کے ذریعے mitochondrial autophagy میں ثالثی کی تاکہ گردوں کی اسکیمیا ریپرفیوژن انجری [J] سے بچایا جا سکے۔ تیانجن میڈیکل جرنل، 2021، 49 (11): 1148-1153

[11] شیرکاوا ٹی، مییاواکی اے، کاواموٹو ٹی، وغیرہ۔ قدرتی مرکبات تنزلی سے متاثر کنکال کے پٹھوں کی ایٹروفی[J] کو کم کرتے ہیں۔ Int J Mol Sci,2021,22(15):8310۔

[12] لائی مانکسیانگ، فینگ جوآن، روآن زیان، وغیرہ۔ بون میرو mesenchymal اسٹیم سیلز کے آسٹیوجینک تفریق کے دوران Cbfa-1 mRNA اظہار پر سیرم پر مشتمل Cistanche deserticola polysaccharide کے اثرات [J] چینی میڈیکل سائنس، 2017، 7 (15): 27-30

[13] Zhu Mengyong، Wang Caijiao، Hao Changsheng. آسٹیوپوروسس چوہوں میں سیرم آسٹیوپروٹیجیرن کے اظہار پر Cistanche deserticola polysaccharides کے اثر پر مطالعہ [J]۔ جدید عملی طب، 2010، 22 (7): 748-749

[14] لائی مانکسیانگ، فینگ جوآن، چن زیا، وغیرہ۔ چوہے کے بون میرو mesenchymal اسٹیم سیلز کے پھیلاؤ اور osteogenic تفریق پر Cistanche deserticola polysaccharides کے اثرات [J]۔ چینی طبی سائنس، 2018، 8 (7): 33-36

[15] یان سی وائی، ہوانگ ڈی، شین ایکس، وغیرہ۔ مورنڈا آفیشینالیس کی جڑوں سے پولی سیکرائڈ کی شناخت اور خصوصیت، ہدف جین کے اظہار کے اپ ریگولیشن کے ذریعے ہڈیوں کی تشکیل کے محرک کے طور پر۔ Int J Biol Macromol, 2019,133:446-456۔

[16] BYUN MK، چو این، چانگ جے، وغیرہ۔ سرکوپینیا COPD[J] میں نظامی سوزش سے تعلق رکھتا ہے۔ Int J Chron Obstruct Pulmon Dis,2017,12:669-675۔

[17] لیو لی، فینگ ڈو، زو یوشان، وغیرہ۔ مائٹوکونڈریل آٹوفجی [جے] پر تحقیقی پیشرفت۔ چینی جرنل آف سیل بائیولوجی، 2012، 34 (10): 959-966

[18] وانگ سووگانگ، وانگ گوانگسے۔ رینل اسکیمیا ریپرفیوژن انجری اور مائٹوکونڈریل آٹوفیجی SIRT1 FOXO3 PINK1 پارکن ریگولیٹری محور [J] پر تحقیقی پیشرفت۔ چینی میڈیکل جرنل، 2019، 16 (35): 31-35

[19] ہوانگ سی، ہانگ زیڈ، ژانگ ایل جی، وغیرہ۔ CERKL SIRT1/PINK1/Parkin پاتھ وے اور mitophagy induction[J] کو ماڈیول کرنے کے ذریعے اسکیمیا ریپرفیوژن کی وجہ سے اعصابی نظام کی چوٹ کو کم کرتا ہے۔ Biol Chem,2022,403(7):691- 701۔

[20] شو تیان۔ ایکسرسائز انٹروینشن [D] کے ذریعے ایجنگ سکیلیٹل مسکل میں مائٹوکونڈریل یو پی آر کے طریقہ کار پر مطالعہ۔ تیانجن: تیانجن انسٹی ٹیوٹ آف فزیکل ایجوکیشن، 2020