Glucocorticoid-Induced Rat Model میں Cistanche Deserticola اور اس کے رائس وائن سٹیمنگ پروڈکٹس کے Neuroendocrine-Immune Function پر مطالعہ-Ⅱ

3.2.4 امیونو ہسٹو کیمسٹری

نیورونل اپوپٹوس کو بہت سے اپوپٹوٹک اور اینٹی پاپٹوٹک جینز کے ذریعے کنٹرول کیا جاتا ہے، خاص طور پر اپوپٹوس کو فروغ دینے والے جین بیکس اور Bcl-2 جین فیملی کے اینٹی پاپٹوٹک جینز۔ Bcl-2 رد عمل آکسیجن پیدا کرنے والے آرگنیلز جیسے مائٹوکونڈریا، اینڈوپلاسمک ریٹیکولم، اور جوہری جھلیوں میں مقامی ہے۔ Bcl-2 کا آکسیجن فری ریڈیکلز پر بہت کم اثر پڑتا ہے لیکن ہو سکتا ہے۔خلیوں میں آکسیڈیٹیو نقصان کو روکتا ہے۔. بیکس سائٹوپلازم سے مائٹوکونڈریل جھلی میں منتقل ہوتا ہے، مائٹوکونڈریل جھلی کی ساخت کو تبدیل کرتا ہے، اور سائٹوکوم سی کے اخراج اور اپوپٹوسس کی شمولیت کو فروغ دیتا ہے۔

جنسی فعل کو بہتر بنانے کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Bax اور Bcl-2 پروٹین کے ایڈرینل سائٹوپلازم میں ایک اظہار تھا۔ داغ نے تمام پیلے رنگ کے ذرات دکھائے۔ BC گروپ کے مقابلے میں، MC گروپ میں Bax پروٹین کی اوسط نظری کثافت میں نمایاں اضافہ ہوا (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

شکل 5(b) سے پتہ چلتا ہے کہ BC گروپ کے مقابلے، MC گروپ میں Bcl-2 پروٹین کی اوسط نظری کثافت میں نمایاں کمی واقع ہوئی ہے (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

کیسپیس-3 پروٹین بنیادی طور پر عام بافتوں میں اپنی اصل شکل میں سائٹوپلازم میں مقامی ہوتا ہے اور اس کا اظہار کم ہوتا ہے۔ مثبت اشارے ہلکے پیلے یا بھورے پیلے ہوتے ہیں۔ BC گروپ کے مقابلے میں، MC گروپ میں کیسپیس-3 کے اظہار میں نمایاں اضافہ ہوا (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

نارمل ٹشوز میں، فاس جین کا اظہار کم ہو گیا تھا، اور سیٹو ہائبرڈائزیشن کے لیے مثبت اشارہ بھورا پیلا تھا۔ جیسا کہ شکل 5(d) میں دکھایا گیا ہے، BC گروپ کے مقابلے، MC گروپ میں فاس پروٹین کی اوسط نظری کثافت میں اضافہ ہوا (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

FasL پروٹین بنیادی طور پر سیل کی جھلی یا cytoplasm میں واقع ہے، اور اس کے مثبت اشارے بھورے ہوتے ہیں۔ BC گروپ کے مقابلے میں، MC گروپ میں FasL جین کی اوسط نظری کثافت میں نمایاں اضافہ ہوا ہے (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

نتائج نے ظاہر کیا کہ CD اور WCD کر سکتے ہیں۔سوزش کے خلیات میں apoptosis دلانااور FasL پروٹین کے اظہار کو فروغ دے کر اور Fas پروٹین کو پابند کرکے، کیسپیس-3 پروٹین کو چالو کرکے اور کیسپیس جھرن کو متحرک کرکے ایڈرینل نقصان کو کم کریں۔ WCD-HD گروپ کا اثر بہترین تھا۔

3.3 مدافعتی فنکشن کا تعین

3.3.1 امیون آرگن انڈیکس

BC گروپ کے مقابلے میں، thymus کے گتانک اور MC گروپ کی تللی انڈیکس میں نمایاں کمی واقع ہوئی ہے (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better. 

جنسی فعل کو بہتر بنانے کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2 پیریفرل بلڈ میں ٹی لیمفوسائٹ سبسیٹ کا پتہ لگانا

BC میں اوپری بائیں کواڈرینٹ میں CD4+ سیلز اور دائیں نچلے کواڈرینٹ میں CD8+ سیلز کا فیصد اور ہر دوائی گروپ MC گروپ میں اس سے زیادہ تھا۔ BC گروپ کے مقابلے میں، MC گروپ میں CD4+ThCD8+ کا تناسب نمایاں طور پر کم ہوا (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3 سیرم میں IL-10، IL-6، IL-2، TNF-Α، اور IFN-C کی سطح کا تعین

شکل 8 سے پتہ چلتا ہے کہ BC گروپ کے مقابلے میں، IL-6، TNF-، اور IFN-c کی سطح میں نمایاں اضافہ ہوا ہے (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4 لیمس ٹشو مائکروسکوپ مشاہدے کے تجربے کے نتائج

شکل 9 سے پتہ چلتا ہے کہ BC گروپ میں لمفوسائٹس کی ایک بڑی تعداد موجود تھی۔ لیمفوسائٹس اور ریٹیکولوسائٹس کو بکھرے ہوئے گول یا بیضوی تھائموسائٹس کے ساتھ مرکز میں ڈھیلے طریقے سے ترتیب دیا گیا تھا۔ کوئی necrosis نہیں تھا، کوئی سوزش سیل کی دراندازی، اور کوئی غیر معمولی تبدیلیاں.

ایم سی گروپ نے مرکز میں لیمفوسائٹس اور ریٹیکولوسائٹس کے بے ترتیب انتظام کے ساتھ لمفائیڈ نیکروسس ٹشو کی ایک بڑی مقدار دکھائی۔ گول یا بیضوی تھائموسائٹس غائب ہو گئے، خلیے کا بڑے پیمانے پر انحطاط یا نیکروسس واضح تھا، اور غیر معمولی پیتھولوجیکل تبدیلیوں کے ساتھ سوزشی خلیوں کی دراندازی تھی۔

سی ڈی گروپس میں، لیمفوسائٹس کی شکلی خصوصیات معمول پر آ گئی تھیں، اور مرکزی لیمفوسائٹس اور ریٹیکولوسائٹس کا انتظام تقریباً معمول کے مطابق تھا۔ گول یا بیضوی thymocytes ٹھیک ہو چکے تھے، لیکن degenerative یا necrotic lymphocytes اور infiltrating inflammatory خلیات کی ایک چھوٹی سی تعداد باقی تھی۔

ڈبلیو سی ڈی گروپس اور پی سی گروپ میں، لیمفوسائٹس کی مورفولوجیکل خصوصیات کی بہتر مرمت کی گئی۔ مرکز میں لیمفوسائٹس اور ریٹیکولوسائٹس اچھی طرح سے جڑے ہوئے تھے، گول یا بیضوی تھائیموسائٹس تقریباً معمول کے مطابق تھے، لیکن دراندازی اور انحطاط پذیر لیمفوسائٹس کی ایک چھوٹی سی تعداد باقی تھی۔

3.4 CaM پروٹین جین کا اظہار

RQ ویلیو (CaM mRNA -actin mRNA) CaM mRNA کے اظہار کی جانچ کرنے کے لئے سمجھا جاتا تھا۔ BC گروپ کا RQ 1 تھا۔ MC گروپ میں ہائپوتھیلمس میں CaM mRNA کے اظہار میں نمایاں اضافہ ہوا (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. بحث

چینی فارماکوپیا [2] ریکارڈ کرتا ہے کہ کلینک میں CD اور WCD کو کاڑھی کے ٹکڑوں کی اہم اقسام کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ چاول کی شراب کے ساتھ ابلی جانے کے بعد،اینٹی ایجنگ اور ٹونیفائینگ کڈنی یانگ اثراتبڑھا دیے گئے تھے۔ UPLC-QqQ-MS کے ذریعے، ہم نے چاول کی شراب کی بھاپ کے عمل کے دوران کیمیائی مواد کی بنیاد میں مقداری تبدیلیوں کا پتہ لگایا۔ Iridoid glycosides غیر مستحکم تھے اور ان glycosides کے مواد میں کمی واقع ہوئی، یہاں تک کہ ناقابل شناخت بن گیا. phenylethanol glycosides کا مواد بھی بدل گیا، جو فارماکوڈینامکس اور طبی اثر میں تبدیلیاں لا سکتا ہے۔

جنسی فعل کو بہتر بنانے کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا PHGS75% ECH 30% ACT 12%

کلاسک گردے یانگ کی کمی کے ماڈل کو کورٹیکوسٹیرون کے ذیلی کیوٹنیئس انجیکشن کے ذریعہ نقل کیا گیا تھا [19]۔ کورٹیکوسٹیرون کی زیادہ مقدار ہائپوتھیلمس میں سی آر ایچ کے راز کو روک سکتی ہے۔ اس دوران ACTH کا راز بھی ماند پڑ گیا۔ ایڈرینل کورٹیکس ہارمون کی سطح میں کمی واقع ہوئی، اور اس طرح، HPA محور کا کام کم ہو گیا۔ HPA محور کا ہائپو فنکشن گردے یانگ کی کمی کی ایک عام خصوصیت ہے [20]۔ پھر چوہے "کمی" کے مظاہر کو ظاہر کرتے ہیں اور علامات کلینک میں گردے یانگ کی کمی کی علامات کے مطابق ہیں۔

ایم سی گروپ میں، چوہے کے سیرم میں CRH، ACTH، T، اور CORT کی سطح میں نمایاں کمی واقع ہوئی ہے (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Bcl-2 خاندان کے افراد کے تناسب کو ماڈیول کرنا ان بنیادی میکانزم میں سے ایک ہے جس کے ذریعے FasThFasL موت کے رسیپٹر کے راستے میں ثالثی کرتا ہے، اور Bcl-2 خاندان مائٹوکونڈریل پاتھ وے کو منظم کرتا ہے [21]۔ اپوپٹوس کو روکنے والا عنصر Bcl-2 اور apoptosis کو دلانے والے عوامل، جیسے Bax، سبھی Bcl-2 خاندان سے تعلق رکھتے ہیں [22]۔ سیل اپوپٹوس کا تعین اپوپٹوس کو روکنے والے عوامل اور اپوپٹوس کو دلانے والے عوامل کے رشتہ دار تناسب سے کیا جا سکتا ہے [23]۔ مائٹوکونڈریا میں اپوپٹوس کی بہت سی شکلوں کے لیے مرکزی چوکیوں کا کام ہوتا ہے [24]۔ موجودہ مطالعہ سے پتہ چلتا ہے کہ CD-MD اور WCDs Bax کے اظہار کو نکال سکتے ہیں اور Bcl-2 کو بڑھا سکتے ہیں۔گردے یانگ کی کمی کو بہتر بنائیں. فاس ایک بڑا ڈیتھ ریسیپٹر ہے جو فاس لیگنڈ (FasL) [25] کے ساتھ ligation کے ذریعے apoptosis کو اکساتا ہے۔ MC گروپ میں Fas اور FasL کے اظہار میں اضافہ ہوا، جبکہ WCD-MD گروپ میں اس اظہار میں نمایاں اضافہ ہوا (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

مدافعتی فعل کی کمی گردے یانگ کی کمی کے اہم مظاہر میں سے ایک ہے [28]۔ اس مطالعے میں، ہم نے پایا کہ WCD-MD گروپ کے تلی اور thymus کا انڈیکس نمایاں طور پر بحال ہوا (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

HPA محور سب سے اہم ریگولیٹری نظام ہے کیونکہ یہ گلوکوکورٹیکائیڈ سراو اور اینڈوکرائن سسٹم کو منظم کرتا ہے تاکہ ایڈرینل کورٹیکس کے خفیہ فعل کو برقرار رکھا جاسکے [32]۔ ہائپوتھیلمس ٹشو میں CaM mRNA کا اوور ایکسپریشن گردے یانگ کی کمی سے متعلق تھا۔ سی ڈی اور ڈبلیو سی ڈی کیلشیم چینلز کو روک سکتے ہیں، ہائپوتھیلمس میں CaM mRNA اظہار کو روک سکتے ہیں، اور کیلشیم کی آمد کو کم کر سکتے ہیں، اس طرح Ca2+·CaM پیچیدہ سرگرمی کو کم کر سکتے ہیں۔

گردے یانگ کی کمی کی تشکیل ایک دائمی بیماری کی نشوونما کا عمل ہے۔ گردے اب مکمل طور پر ایک جسمانی تصور نہیں ہے، اور یہ نیورو اینڈوکرائن مدافعتی اور جینیٹورینری نظام کے لیے ایک عام اصطلاح ہے۔ Neuroendocrine-immune (NEI) نیٹ ورک ایک اہم مربوط ریگولیٹری نظام ہے [33]۔ CD اور WCD HPAT محور کے کام کو منظم کر سکتے ہیں اور گردے یانگ کی کمی کی بحالی کو بہتر بنا سکتے ہیں۔ یہ نتیجہ گردے یانگ کی کمی کی طبی روک تھام اور علاج کے لیے تجرباتی بنیاد فراہم کرتا ہے۔

جنسی فعل کو بہتر بنانے کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا PHGS75% ECH 30% ACT 12%