خلاصہ
کے ہم آہنگی روکنے والے اثرات کی تحقیقات کرناسسٹانچے صحرافینیلیٹھانائڈ گلائکوسائڈس (پی ایچ جی ایس) اور گلیبرڈین (جی ایل اے) جلد کی رنگت پر ، پی ایچ جی کا زیادہ سے زیادہ بڑے پیمانے پر تناسب کو جی ایل اے سے ابتدائی طور پر اسکرین کیا گیا تھاوٹرو میںٹائروسینیز سرگرمی کی روک تھام اسسیس ، 1 ، 1- ڈفینیل {2 {2}} picrylhydrazyl (DPPH) ریڈیکل اسکیوینگنگ ، اور 2،2'-azino-bis ({7 {}}}}}}}}} ایتھیلبینزوتیازولین {8}} sulfonents. مزید تشخیص تین سیلولر ماڈلز کا استعمال کرتے ہوئے کی گئیں:

ٹائروسنیز سرگرمی اور میلانن مواد کے ذریعہ میلانن ترکیب کی روک تھام کا اندازہ کرنے کے لئے ایک UVB حوصلہ افزائی B16F10 میلانوجینیسیس ماڈل ؛

انٹرلییوکن -6 (IL -6) اور ٹیومر نیکروسس عنصر- (TNF-) (TNF-) (TNF-) سپیگریشن کی پیمائش کرکے اینٹی سوزش کے اثرات کا اندازہ کرنے کے لئے ایک لیپوپولیساکرائڈ (ایل پی ایس) کی حوصلہ افزائی شدہ HACAT سوزش ماڈل ؛

سوپر آکسائیڈ ڈسموٹیس (ایس او ڈی) اور کیٹالیس (کیٹ) میں اضافہ کے ذریعہ اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کا تعین کرنے کے لئے ایک AAPH (2،2'-Azobis (2- amidinopropane) Dihydrochloride حوصلہ افزائی HACAT آکسیڈیٹیو تناؤ کا ماڈل۔

ان ماڈلز کے ذریعہ زیادہ سے زیادہ پی ایچ جی ایس/جی ایل اے ماس تناسب کی نشاندہی کی گئی۔ نتائج نے ثابت کیا کہ پی ایچ جی ایس/جی ایل اے حل (فاسفیٹ بفرڈ نمکین ، پی بی ایس ، پییچ 6.8 میں تیار کردہ) 1: 1 ، 5: 1 ، اور 10: 1 کے بڑے پیمانے پر تناسب پر اہم ٹائروسینیز روکنا اور ہم آہنگی اینٹی آکسیڈینٹ اثرات کی نمائش کرتے ہیں۔ ٹائروسینیز روکنے کی شرح بالترتیب 94.37 ٪ ، 92.93 ٪ ، اور 88.06 ٪ تھی۔ ڈی پی پی ایچ ریڈیکل اسکیوینگنگ کی شرح 89.44 ٪ ، 88.72 ٪ ، اور 88.10 ٪ تک پہنچ گئی۔ ABTS⁺ Scavenging کی شرح 100.13 ٪ ، 100.01 ٪ ، اور 99.87 ٪ تھی۔ ڈی ایم ای ایم میں 25 یو جی/ملی لیٹر میں ، پی ایچ جی ایس/جی ایل اے (1: 1 ، 5: 1 ، 10: 1) نے B16F10 یا HACAT خلیوں کی طرف کوئی سائٹوٹوکسائٹی نہیں دکھائی۔ پی ایچ جی ایس/جی ایل اے (1: 1) ڈی ایم ای ایم حل ظاہر ہوااعلی ٹائروسینیز روکنا(23.80 ٪ بقایا سرگرمی) ، نمایاں طور پرمیلانن کے مواد کو کم کیا گیا(30.90 ٪) ، اور IL -6}/TNF- جاری اور SOD/CAT کی سرگرمی کو بڑھانے میں دوسرے تناسب اور مونو تھراپیوں کو بہتر بناتا ہے۔ پی ایچ جی اور جی ایل اے کے ہم آہنگی کے امتزاج نے مؤثر طریقے سے ایس کو ختم کیاmelanogenesis کو روک کر رشتہ دار ہائپر پگمنٹیشن، سوزش کو کم کرنا ، اوراینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت کو بڑھانا.

کلیدی الفاظ
سسٹانچیصحرا فینیلیٹھانائڈ گلائکوسائڈز؛ گلیبرڈین ؛ ہم آہنگی کا اثر ؛ اینٹی میلانوجینیسیس ؛ اینٹی آکسیڈینٹ ؛ غیر سوزشی؛ دواسازی کے خام مال

 

 

 

سسٹانچیصحرا کے ساتھ نکالیںاعلی سطحجلد کی سفیدی کے لئے فینیلیٹھانائڈ گلائکوسائڈز

مزید تفصیلات کے لئے ہمیں واٹس ایپ کریں

 

تجرباتی سیکشن

1.1 مواد ، ریجنٹس ، اور آلات

ماؤس میلانوما خلیاتB16F10 (کیٹلاگ نمبر: STCC20013G -1) ، ووہان سروس بائیو ٹکنالوجی کمپنی ، لمیٹڈ۔

انسانی لافانی کیراٹینوسائٹسہاکات (کیٹلاگ نمبر: آئسیل-ایچ 066) ، آئسیل بائیو سائنس سائنس انکارپوریٹڈ ، شنگھائی ، چین۔

سسٹانچی فینیلیٹھانائڈ گلائکوسائڈز (پی ایچ جی)اورگلیبرڈین (جی ایل اے)، شانکسی تیانکسنگجیان حیاتیاتی کیمیکل ٹکنالوجی کمپنی ، لمیٹڈ ، لمیٹڈ

ٹائروسینیس، ہیفی بی اے ایس ایف بائیوٹیکنالوجی کمپنی ، لمیٹڈ

اربوٹین (اے آر بی)اورایل ٹائروسین، علاء بائیو کیمیکل ٹکنالوجی کمپنی ، لمیٹڈ ، شنگھائی ، چین۔

1 ، 1- diphenyl -2- picrylhydrazyl (DPPH)، ٹوکیو کیمیکل انڈسٹری کمپنی ، جاپان۔

2،2′-Azino-bis (3- enthylbenzothiazoline -6- سلفونک ایسڈ) ڈائممونیم نمک (ABTS)، شنگھائی یوانی بائیو ٹکنالوجی کمپنی ، لمیٹڈ

ascorbic ایسڈ (VC)، تیانجن ڈاماؤ کیمیکل ریجنٹ فیکٹری۔

پوٹاشیم پرسولفیٹاوراینہائڈروس ایتھنول، تیانجن ژیوان کیمیکل ریجنٹ کمپنی ، لمیٹڈ

سوڈیم ہائیڈرو آکسائیڈ، چینگدو ہوائی فارماسیوٹیکل ایکسیپینٹ مینوفیکچرنگ کمپنی ، لمیٹڈ

ڈپوٹشیم فاسفیٹ، شنگھائی سانپو کیمیکل کمپنی ، لمیٹڈ

ایل ڈوپا، شنگھائی یوانی بائیو ٹکنالوجی کمپنی ، لمیٹڈ

سیل گنتی کٹ -8 (CCK8)، بیجنگ sinoinvitrogen بائیوٹیکنالوجی کمپنی ، لمیٹڈ

ٹرائٹن x -100, ڈیمیتھائل سلفوکسائڈ (DMSO), 2،2′-Azobis (2- methylpropionamidine) ڈائی ہائڈروکلورائڈ (AAPH)، اورلیپوپولیساکرائڈ (ایل پی ایس)، بیجنگ سولربیو سائنس اینڈ ٹکنالوجی کمپنی ، لمیٹڈ

ڈی ایم ای ایم ہائی گلوکوز میڈیم، تھرمو فشر سائنسی (چین)۔

برانن بوائین سیرم (ایف بی ایس)، سگما الڈرچ (شنگھائی) ٹریڈنگ کمپنی ، لمیٹڈ

پینسلن اسٹریپٹومائسن حل، شنگھائی ڈیشیئر بائیو ٹکنالوجی کمپنی ، لمیٹڈ

انسانی IL -6 ایلیسا کٹ, ہیومن ٹی این ایف- ایلیسا کٹ، اورہیومن بلی ایلیسا کٹ، ووہان فائن بائیوٹیک کمپنی ، لمیٹڈ

کل سپر آکسائیڈ کو ختم کرنے (ایس او ڈی) پرکھ کٹ، نانجنگ جیانچینگ بایو انجینئرنگ انسٹی ٹیوٹ۔ تمام ریجنٹ تجزیاتی گریڈ کے تھے۔

استعمال شدہ آلات:

ملٹی اسکین ایف سی مکمل طول موج مائکروپلیٹ ریڈراورہراسیل 371 CO2 انکیوبیٹر، تھرمو فشر سائنسی ، امریکہ۔

کے کیو -200 VDB الٹراسونک کلینر، کنشن الٹراسونک انسٹرومینٹس کمپنی ، لمیٹڈ

DVKW-D -2 ڈیجیٹل ترموسٹیٹک پانی کا غسل، بیجنگ یونگگنگمنگ میڈیکل انسٹرومنٹ فیکٹری۔

DHG -9246 ایک الیکٹرک ترموسٹیٹک دھماکے خشک کرنے والے تندور، شنگھائی جینگھونگ تجرباتی سازوسامان کمپنی ، لمیٹڈ

KN4006B UVB الٹرا وایلیٹ تابکاری کا آلہ۔

1.2 طریقے

سب سے پہلے ، پی ایچ جی اور جی ایل اے یا تو فاسفیٹ بفرڈ نمکین (پی بی ایس ، پی ایچ =6. 8) یا 50 ٪ ایتھنول حل میں تحلیل ہوگئے تھے تاکہ بڑے پیمانے پر حراستی کے ساتھ حل تیار کریں۔{{0}}. 0 0 1 ، 0.. اس کے بعد ، پی ایچ جی اور جی ایل اے کے تناسب میں ملایا گیاایم (پی ایچ جی ایس): ایم (جی ایل اے)=40: 1 ، 20: 1 ، 10: 1 ، 5: 1 ، 1: 1 ، 1: 5 ، 1:10 ، 1:20 ، اور 1:40، پی ایچ جی ایس/جی ایل اے حل تیار کرنے کے لئے کل بڑے پیمانے پر حراستی کے ساتھ0.4 g/L، as کا لیبل لگا ہوا ہےپی ایچ جی ایس/جی ایل اے (40: 1) ~ پی ایچ جی ایس/جی ایل اے (1:40)، بالترتیب

 

1.3 بائیو کیمیکل تجربات

1.3.1 ٹائروسینیز سرگرمی روک تھام پرکھ

ایک 96- اچھی پلیٹ میں ،ٹیسٹ نمونہ حل کا 50 μl, پی بی ایس کا 50 μl (پی ایچ =6. 8)، اورایل ٹائروسین حل کا 50 μl (1 جی/ایل)ترتیب سے شامل کیا گیا تھا۔ پلیٹ کو 10 منٹ کے لئے 37 ڈگری پانی کے غسل میں انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ پھر ،ٹائروسینیز حل کا 5 0 μl (0.4 جی/ایل ، 200 یو/ایم ایل کے برابر)شامل کیا گیا ، اور پلیٹ کو مزید 10 منٹ کے لئے 37 ڈگری پانی کے غسل میں دوبارہ لگایا گیا۔

اربوٹین (اے آر بی)مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا ، اورپی بی ایس (پی ایچ =6. 8)خالی کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا.

حل کی جاذبیت490 این ایممائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا ، اور ان وٹرو ٹائروسینیز انفیکشن ریٹ (٪) کو مساوات (1) کا استعمال کرتے ہوئے حساب کیا گیا تھا۔

 

 

فارمولے میں:

A _ رد عملایل ٹائروسین حل ، پی بی ایس ، اور ٹائروسینیز حل پر مشتمل نمونہ حل کی جاذب ہے۔

A _ رد عمل کا کنٹرولٹائروسینیز حل کے بغیر ایل ٹائروسین حل اور پی بی ایس پر مشتمل نمونہ حل کی جاذب ہے۔

A _ خالینمونے کے بغیر L-Tyrosine حل ، PBS ، اور Tyrosinase حل پر مشتمل حل کی جاذب ہے۔

A _ خالی کنٹرولنمونہ اور ٹائروسینیز حل کے بغیر ایل ٹائروسین حل اور پی بی ایس پر مشتمل حل کی جاذب ہے۔

1.3.2 ڈی پی پی ایچ کا تعین فری ریڈیکل اسکیوینگنگ سرگرمی

سب سے پہلے ، DPPH کے {{0}}}. 0197 g (0.05 ملی میٹر) کو درست طریقے سے وزن کیا گیا تھا اور 250 ملی لیٹر انارڈروس ایتھنول میں تحلیل کیا گیا تھا تاکہ اس کی حراستی کے ساتھ ڈی پی پی ایچ کام کرنے کا حل تیار کیا جاسکے۔0. 2 ملی میٹر/ایل.

اس کے بعد ، پی ایچ جی اور جی ایل اے کو 50 ٪ ایتھنول میں تحلیل کردیا گیا تاکہ پی ایچ جی اور جی ایل اے کے ایتھنول حل تیار کیا جاسکے۔{{0}}. 0 0 1 ، 0.. وائس چانسلر کے ایتھنول حل اسی طرح تیار کیے گئے تھے۔

اس کے بعد ، پی ایچ جی اور جی ایل اے کے ایتھنول حل کو تناسب میں ملا دیا گیاایم (پی ایچ جی ایس حل): ایم (جی ایل اے حل)=40: 1 ، 20: 1 ، 10: 1 ، 5: 1 ، 1: 1 ، 1: 5 ، 1:10 ، 1:20 ، 1:40مختلف بڑے پیمانے پر تناسب کے ساتھ پی ایچ جی/جی ایل اے کے 9 ایتھنول حل حاصل کرنے کے لئے ، جیسے لیبل لگا ہوا ہےپی ایچ جی ایس/جی ایل اے (40: 1) ~ پی ایچ جی ایس/جی ایل اے (1:40).

آخر ،ہر نمونے کے حل کا 100 μlاورDPPH ورکنگ حل کا 100 μLایک 96- اچھی پلیٹ میں شامل کیا گیا ، یکساں طور پر ملا ہوا ، اور 30 ​​منٹ تک اندھیرے میں کمرے کے درجہ حرارت پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ جاذب پر517 این ایممائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا۔ وائس چانسلر کو مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا ، اور ہر تجربے کو تین بار دہرایا گیا تھا۔

مساوات (2) کا استعمال کرتے ہوئے ڈی پی پی ایچ فری ریڈیکل اسکیوینگنگ ریٹ (٪) کا حساب لگایا گیا تھا۔

 

فارمولے میں:

A1نمونہ حل + DPPH ورکنگ حل کی جاذب ہے۔

A250 ٪ ایتھنول + ڈی پی پی ایچ ورکنگ حل کی جاذب ہے۔

A3نمونہ حل + 50 ٪ ایتھنول کی جاذب ہے۔

 

1.3.3 ABTS⁺ آزاد بنیاد پرست اسکوینگنگ سرگرمی کا تعین

پہلے ،اے بی ٹی ایس کے 1 جی (1.82 ملی میٹر)حتمی حراستی کے ساتھ اے بی ٹی ایس کام کرنے کے حل کو تیار کرنے کے لئے ڈیئنائزڈ پانی میں تحلیل کیا گیا تھا7.4 ملی میٹر/ایل. 0. 5 جی پوٹاشیم پرسولفیٹحتمی حراستی کے ساتھ پوٹاشیم پرسولفیٹ ورکنگ حل تیار کرنے کے لئے ڈیئنائزڈ پانی میں تحلیل کیا گیا تھا2.6 ملی میٹر/ایل. اے بی ٹی ایس کے کام کرنے والے حل اور پوٹاشیم پرسولفیٹ ورکنگ حل کی مساوی حجم کو ملا دیا گیا تھا اور اسے ABTS⁺ ورکنگ حل تیار کرنے کے لئے 12 گھنٹوں تک اندھیرے میں رد عمل ظاہر کرنے کی اجازت دی گئی تھی۔

پھر ، پی ایچ جی ، جی ایل اے ، اور وی سی کے ایتھنول حل ، نیز پی ایچ جی ایس/جی ایل اے ایتھنول حل کے تناسب کے ساتھپی ایچ جی ایس/جی ایل اے (40: 1) ~ پی ایچ جی ایس/جی ایل اے (1:40)، سیکشن 1.3.2 میں بیان کردہ طریقہ کار کے مطابق تیار کیا گیا تھا۔

آخر ،ہر نمونے کے حل کا 40 μlاورABTS⁺ ورکنگ حل کا 160 μLایک 96- اچھی پلیٹ میں شامل کیا گیا ، یکساں طور پر ملا ہوا ، اور کمرے کے درجہ حرارت پر اندھیرے میں 6 منٹ تک اس کا رد عمل ظاہر کیا گیا۔ حل کی جاذبیت734 این ایممائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا۔

مساوات (3) کا استعمال کرتے ہوئے ABTS⁺ فری ریڈیکل اسکیوینگنگ ریٹ (٪) کا حساب لگایا گیا تھا۔

 

 

فارمولے میں:

A1نمونہ حل + ABTS⁺ ورکنگ حل کی جاذب ہے۔

A2ڈیوائنائزڈ واٹر + اے بی ٹی ایس کے کام کرنے والے حل کی جاذب ہے۔

A3نمونے کے حل + deionized پانی کی جاذب ہے۔

1.4 سیل تجربات

1.4.1 سیل کلچر

B16F10 اور HACAT خلیوں کو زندہ کرنے کے بعد ، ان کو ڈی ایم ای ایم ہائی گلوکوز میڈیم (جس میں 10 ٪ برانن بوائین سیرم اور 1 ٪ پینسلن اسٹریپٹومائسن حل) شامل تھے اور ان میں مہذب تھے۔37 ڈگری, 5 ٪ CO2، اور70 ٪ نمی24 گھنٹے انکیوبیٹر میں۔ سیل کی نمو کی حیثیت ایک خوردبین کے تحت دیکھی گئی ، اور درمیانے درجے کی تبدیلیاں یا گزرنے کو سیل کی نشوونما کی حالت کی بنیاد پر ضروری طور پر انجام دیا گیا۔

1.4.2 تجرباتی گروپ بندی

لوگرتھمک فیز B16F10 اور HACAT خلیوں کو 96- میں مناسب سیل کثافت پر اچھی طرح سے پلیٹیں لگائی گئیں اور سیل پر عمل پیرا ہونے کی اجازت دینے کے لئے 24 گھنٹوں تک مہذب تھے۔ مختلف حراستی کے ساتھ نمونہ حل ڈی ایم ای ایم میڈیم کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیے گئے تھے۔

تجرباتی گروپ مندرجہ ذیل تھے:

عام گروپ

ماڈل گروپ

پی ایچ جی ایس کم خوراک گروپ(125 ug/ml)

پی ایچ جی ایس میڈیم ڈوز گروپ(250 ug/ml)

پی ایچ جی ایس اعلی خوراک گروپ(500 ug/ml)

جی ایل اے کم خوراک گروپ(6.25 ug/ml)

جی ایل اے میڈیم ڈوز گروپ(12.5 ug/ml)

جی ایل اے اعلی خوراک گروپ(25 ug/ml)

پی ایچ جی ایس/جی ایل اے (1: 1) گروپ(25 ug/ml)

پی ایچ جی ایس/جی ایل اے (5: 1) گروپ

پی ایچ جی ایس/جی ایل اے (10: 1) گروپ

کے لئےB16F10 خلیوں میں UVB کی حوصلہ افزائی روغن ماڈل، ماڈل گروپ خلیوں کا علاج کیا گیا30 μl Pbs (ph =7. 4)اور UVB الٹرا وایلیٹ تابکاری کے آلے کے تحت غیر منقولہڈیوائس کے نیچے 3 سینٹی میٹرکے لئے110 سیکنڈ. تجرباتی گروپوں کے ساتھ پریٹریٹ کیا گیا تھامختلف نمونے کے حل میں سے 100 μlشامل کرنے سے پہلے 1 گھنٹہ کے لئےپی بی ایس کے 30 μlاور 110 سیکنڈ کے لئے UVB ڈیوائس کے تحت شعاع ریزی کرنا۔ عام گروپ کا مسلسل اعلی گلوکوز ڈی ایم ای ایم میڈیم کے ساتھ سلوک کیا جاتا تھا ، اور خالی گروپ میں خلیات شامل نہیں تھے لیکن ان کی جگہ درمیانے درجے کی مساوی مقدار میں تبدیل کردی گئی تھی۔

کے لئےHACAT خلیوں میں LPS کی حوصلہ افزائی سوزش کا ماڈل، ماڈل گروپ کے ساتھ سلوک کیا گیا20 UG/ML LPS PBS حل24 گھنٹوں کے لئے. تجرباتی گروپوں کے ساتھ پریٹریٹ کیا گیا تھامختلف نمونے کے حل میں سے 100 μlشامل کرنے سے پہلے 24 گھنٹے کے لئے20 UG/mL LPS حلمزید 24 گھنٹوں کے لئے۔ عام گروپ کا مسلسل اعلی گلوکوز ڈی ایم ای ایم میڈیم کے ساتھ سلوک کیا جاتا تھا ، اور خالی گروپ میں خلیات شامل نہیں تھے لیکن ان کی جگہ درمیانے درجے کی مساوی مقدار میں تبدیل کردی گئی تھی۔

کے لئےHACAT خلیوں میں AAPH کی حوصلہ افزائی آکسیڈیٹیو تناؤ کا ماڈل، ماڈل گروپ کے ساتھ سلوک کیا گیا25 ملی میٹر/ایل اے اے پی اے ایف حل24 گھنٹوں کے لئے. تجرباتی گروپوں کے ساتھ پریٹریٹ کیا گیا تھامختلف نمونے کے حل میں سے 100 μlشامل کرنے سے پہلے 24 گھنٹے کے لئے25 ملی میٹر/ایل اے اے پی اے ایف حلمزید 24 گھنٹوں کے لئے۔ عام گروپ کا مسلسل اعلی گلوکوز ڈی ایم ای ایم میڈیم کے ساتھ سلوک کیا جاتا تھا ، اور خالی گروپ میں خلیات شامل نہیں تھے لیکن ان کی جگہ درمیانے درجے کی مساوی مقدار میں تبدیل کردی گئی تھی۔

ہر گروپ کے ساتھ قائم کیا گیا تھا3 کوں کی نقل تیار کریںاور میں مہذب37 ڈگری, 5 ٪ CO2، اور70 ٪ نمیایک انکیوبیٹر میں

1.4.3 سائٹوٹوکسیٹی پرکھ

سائٹوٹوکسائٹی کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھاCCK8 طریقہ. لوگرتھمک فیز B16F10 اور HACAT خلیوں کے ساتھ ہضم کیا گیا تھا0. 25 ٪ ٹرپسن3 منٹ کے لئے. ہاضمے کو درمیانے درجے کے ساتھ روکنے کے بعد ، خلیوں کو بار بار پائپیٹ کیا گیا تاکہ کثافت کے ساتھ سیل معطلی تیار کی جاسکے1 × 10⁴ خلیات/ملی لیٹر. خلیوں کو 96- اچھی پلیٹوں میں یکساں طور پر سیڈ کیا گیا تھا100 μl فی اچھی طرح سے، اور پی بی ایس کو پردیی کنوؤں میں شامل کیا گیا تھا۔ سیل پر عمل پیرا ہونے کے بعد ، نمونے کے حل کی مختلف حراستی شامل کی گئیں ، اس کے ساتھ3 ہر گروپ کے کنواں کی نقل تیار کریں، اور خلیوں پر ثقافت کی گئی تھی37 ڈگری, 5 ٪ CO2، اور70 ٪ نمیکے لئے24 ، 48 ، اور 72 گھنٹےمیڈیم کو خارج کرنے سے پہلے۔

تمام گروہوں کے لئے ،100 μl CCK8 DMEM اعلی گلوکوز میڈیم (جس میں 10 ٪ CCK8 پر مشتمل ہے)شامل کیا گیا تھا اور اس کے لئے انکیوبیٹ کیا گیا تھا60 منٹ. حل کی جاذبیت450 این ایممائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا۔

مساوات (4) کا استعمال کرتے ہوئے سیل کی اہلیت (٪) کا حساب لگایا گیا تھا۔

 

فارمولے میں:

a _ علاج کیا گیااچھی طرح سے خلیوں ، CCK8 حل ، اور نمونہ حل کی جاذبیت ہے۔

A _ خالیاچھی طرح سے میڈیم اور سی سی کے 8 حل پر مشتمل ہے لیکن خلیوں کے بغیر۔

A0اچھی طرح سے خلیوں اور CCK8 حل پر مشتمل ہے لیکن نمونہ حل کے بغیر۔

1.4.4 ٹائروسینیز سرگرمی پرکھ

ایل ڈوپا کا طریقہ ٹائروسنیز سرگرمی کی پیمائش کے لئے استعمال کیا گیا تھا۔ خلیوں کا علاج کرنے کے بعد48 گھنٹےجیسا کہ سیکشن 1.4.2 میں بیان کیا گیا ہے ، سپرنٹنٹنٹ کو ضائع کردیا گیا تھا ، اور کنوؤں کو پی بی ایس (پی ایچ =7. 4) سے دو بار دھویا گیا تھا۔ پھر ،1 ٪ ٹرائٹن x -100 حل کا 50 μlہر ایک میں شامل کیا گیا تھا اور فوری طور پر ایک –80 ڈگری فریزر میں رکھا گیا تھا30 منٹ. خلیوں کو لیسس کو دلانے کے لئے کمرے کے درجہ حرارت پر پگھلایا گیا تھا۔

پری وارمنگ کے بعد37 ڈگریکے لئے5 منٹ, 10 ملی میٹر/ایل ایل ڈوپا حل کا 10 μlہر ایک میں شامل کیا گیا تھا اور اس پر انکیوبیٹڈ تھا37 ڈگری ، 5 ٪ CO2 ، اور 70 ٪ نمیکے لئے1 گھنٹہ. جاذب پر475 این ایممائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا۔ ہر تجربہ دہرایا گیاتین بار، اور ٹائروسینیز سرگرمی (٪) کا حساب مساوات (5) کے ذریعے کیا گیا تھا۔

فارمولے میں:

A _ تجربہUVB شعاع ریزی کے تحت اچھی طرح سے خلیوں اور نمونے کے حل پر مشتمل جذب ہے۔

A _ عامUVB شعاع ریزی کے بغیر اچھی طرح سے خلیوں اور نمونہ حل پر مشتمل جذب ہے۔

A _ خالیاچھی طرح سے میڈیم پر مشتمل ہے لیکن خلیوں کے بغیر جذب ہے۔

 

1.4.5 میلانن مواد کی پیمائش

NaOH lysis کا طریقہ میلانن کے مواد کی پیمائش کے لئے استعمال کیا گیا تھا۔ خلیوں کا علاج کرنے کے بعد72 گھنٹےجیسا کہ سیکشن 1.4.2 میں بیان کیا گیا ہے ، سپرنٹنٹنٹ کو ضائع کردیا گیا ، اور پی بی ایس کے ساتھ کنوؤں کو دو بار دھویا گیا۔100 μl NaOH پانی کے حل میں 10 ٪ DMSO (1 mol/L) پر مشتمل ہےہر کنویں میں شامل کیا گیا تھا ، اور پلیٹ کو ایک میں رکھا گیا تھا90 ڈگری تندورکے لئے1 گھنٹہ. جاذب پر490 این ایممائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا۔ ہر تجربہ دہرایا گیاتین بار، اور میلانن مواد (٪) مساوات (5) کا استعمال کرتے ہوئے حساب کیا گیا تھا۔

 

سوزش کے عوامل اور آکسیڈیٹیو تناؤ کے اشارے کی 1.5 پیمائش

خلیوں کا علاج کرنے کے بعد48 گھنٹےجیسا کہ سیکشن 1.4.2 میں بیان کیا گیا ہے ،ہیکات خلیاتہر گروپ سے سیل کھرچنے والے ، سینٹرفیوجڈ کا استعمال کرتے ہوئے جمع کیا گیا تھا ، اور سپرنٹنٹنٹ جمع کیا گیا تھا۔ IL -6 اور TNF- کی حراستی ELISA کٹس کی ہدایات کے مطابق ماپا گیا۔

خلیوں کا علاج کرنے کے بعد48 گھنٹے، HACAT خلیوں کو سیل کھرچنی کا استعمال کرتے ہوئے جمع کیا گیا ، سیل لیسس کو دلانے کے لئے بار بار منجمد کرنے کے چکروں کا نشانہ بنایا گیا ، اور اس پر سینٹرفیوج کیا گیا12 ، 000 RPM 10 منٹ کے لئے 4 ڈگری پر. سپرنٹنٹنٹ جمع کیا گیا تھا ، اور اس کی سرگرمیاںسوڈاور حراستی کیبلیELISA کٹ ہدایات کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔

 

1.6 مجموعہ انڈیکس پیمائش

امتزاج انڈیکس (CI) کا طریقہ[20] اس بات کا اندازہ کرنے کے لئے استعمال کیا گیا تھا کہ آیا مختلف بڑے پیمانے پر تناسب میں پی ایچ جی اور جی ایل اے کے امتزاج نے ٹائروسنیز سرگرمی اور اینٹی آکسیڈیشن کو روکنے میں ہم آہنگی کے اثرات کی نمائش کی ہے۔ مساوات (6) کا استعمال کرتے ہوئے امتزاج انڈیکس کا حساب لگایا گیا تھا۔

 

فارمولے میں:

D1اورD2حاصل کرنے کے لئے مطلوبہ امتزاج میں دو دوائیوں کے متعلقہ حراستی (G/L) کی نمائندگی کریںx ٪ سرگرمی.

dxجب حاصل کرنے کے لئے تنہا استعمال ہوتا ہے تو ہر فرد مادے کی حراستی (G/L) کی نمائندگی کرتا ہےx ٪ سرگرمی.

کمپوزین سافٹ ویئرحساب کتاب کے لئے استعمال کیا گیا تھا:

ci> 1ایک مخالف اثر کی نشاندہی کرتا ہے۔

CI=1ایک اضافی اثر کی نشاندہی کرتا ہے۔

ci <1ہم آہنگی کے اثر کی نشاندہی کرتا ہے۔

 

1.7 ڈیٹا تجزیہ

تمام اعداد و شمار کا اظہار اس طرح کیا گیا تھا"مطلب ± معیاری انحراف (x̄ ± s)"، اور مباحثے اوسط اقدار پر مبنی تھے۔

اعداد و شمار کا تجزیہ استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھاگراف پیڈ پرزم 9.5. 0. ایک طرفہ اونووا (تغیر کا تجزیہ) متعدد گروہوں کے مابین موازنہ کے لئے استعمال کیا گیا تھا۔ ap-value <0. 05اعداد و شمار کے لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا۔