Synergistic Immunity and Protection by Co-immunization with DNA Viccines Encoding the Spike Protein and other Structural Proteins of SARS-CoV-2

خلاصہ:شدید ایکیوٹ ریسپائریٹری سنڈروم کورونا وائرس 2 (SARS CoV-2) کی نئی اقسام کے ظہور نے دنیا بھر میں بار بار ہونے والے انفیکشن کے پھیلنے کو جنم دیا ہے۔ یہ انتہائی تبدیل شدہ قسمیں موجودہ کورونا وائرس بیماری 2019 (COVID-19) ویکسین کی تاثیر کو کم کرتی ہیں، جو اصل وائرس کے صرف اسپائیک (S) پروٹین کو نشانہ بنانے کے لیے بنائی گئی ہیں۔ SARS-CoV-2 کے S کے علاوہ، دیگر ساختی پروٹینوں (نیوکلیو کیپسڈ، این؛ لفافے، ای؛ جھلی، ایم) کی ویکسین ٹارگٹ اینٹیجنز کی مدافعتی صلاحیت ابھی تک غیر واضح اور تحقیقات کے لائق ہے۔ اس مطالعہ میں، مصنوعی ڈی این اے ویکسین جو چار SARS-CoV-2 ساختی پروٹین (pS, pN, pE، اور pM) کو انکوڈ کرتی ہیں تیار کی گئیں، اور چوہوں کو تین خوراکوں کے ساتھ انٹرا مسکولر انجیکشن اور الیکٹروپوریشن کے ذریعے حفاظتی ٹیکے لگائے گئے۔ خاص طور پر، دو ڈی این اے ویکسینز کے ساتھ مشترکہ حفاظتی ٹیکوں نے جس نے ایس اور این پروٹین کو زیادہ بے اثر کرنے والی اینٹی باڈیز کی حوصلہ افزائی کی اور SARS-CoV{10}} وائرل بوجھ کو کم کرنے میں صرف چوہوں میں S پروٹین کے مقابلے میں زیادہ موثر تھی۔ اس کے علاوہ، pN یا pE + pM کے ساتھ pS کو-امیونائزیشن نے تین حفاظتی ٹیکوں کے بعد ایک اعلی S پروٹین مخصوص سیلولر استثنیٰ پیدا کیا اور چیلنج کے بعد pS کے مقابلے میں ہلکی ہسٹوپیتھولوجیکل تبدیلیاں کیں۔ SARS-CoV-2 کے محفوظ ساختی پروٹین کے کردار، بشمول N/E/M پروٹین، کی ویکسین ڈیزائن میں ان کی درخواستوں کے لیے مزید چھان بین کی جانی چاہیے، جیسے mRNA ویکسین۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنائیں

مطلوبہ الفاظ: COVID-19; SARS-CoV-2}}؛ مشترکہ حفاظتی ٹیکوں؛ ڈی این اے ویکسین؛ سپائیک پروٹین؛ ساختی پروٹین

1. تعارف

شدید ایکیوٹ ریسپائریٹری سنڈروم کورونا وائرس 2 (SARS-CoV-2) کورونا وائرس کی بیماری 2019 (COVID-19) کی وجہ ہے، جس سے دنیا بھر میں لاکھوں انفیکشن اور اموات ہوئی ہیں اور اس نے انسانی صحت اور عالمی معیشت کو خطرے میں ڈال دیا ہے۔ . اگرچہ مؤثر علاج کے طریقے ابھی تک دستیاب نہیں ہیں، لیکن انہوں نے تیزی سے ترقی کی ہے، بشمول CAR-T سیل تھراپی اور نینو ٹیکنالوجی کا اطلاق [1,2]۔ ویکسینیشن وبائی مرض پر قابو پانے کا ایک مؤثر طریقہ ہے، اور متعدد ویکسین کو صحت کے مختلف ریگولیٹری اداروں کے استعمال کے لیے منظور کیا گیا ہے [3,4]۔ کورونا وائرس جینوم چار اہم ساختی پروٹینوں کو انکوڈ کرتا ہے، یعنی اسپائیک (S)، نیوکلیو کیپسڈ (N)، جھلی (M)، اور لفافے (E) پروٹین، جو virion کی اسمبلی اور میزبان کے مدافعتی ردعمل کو دبانے کے ذمہ دار ہیں [5] ] ایس پروٹین 1273 امینو ایسڈ کی باقیات پر مشتمل ہے جس میں دو ذیلی یونٹ ہیں، یعنی S1 اور S2۔ یہ وائرل داخلے میں ثالثی کرتا ہے اور کورونا وائرس کی ویکسین تیار کرنے کا ایک بڑا ہدف ہے [6-11]۔ تاہم، SARS-CoV-2 S پروٹین میں اتپریورتن کی اعلی تعدد ہوتی ہے۔ حیرت کی بات نہیں، SARS-CoV-2 میں، ایک RNA وائرس، تغیر مسلسل اور ناگزیر ہے۔ SARS-CoV-2 تشویش کی پانچ اقسام ہیں جو ستمبر 2020 سے ابھری ہیں، بشمول B.1.1.7 (UK، Alpha)، B.1.351 (جنوبی افریقہ، بیٹا)، P.1 (برازیل، گاما)، B.1.617.2 (انڈیا، ڈیلٹا)، اور B.1.1.529 (جنوبی افریقہ، اومیکرون) (اینڈریانو اور ریپوولی، 2021؛ گپتا، 2021)۔ ان سب میں اسپائک پروٹین میں متعدد تغیرات ہیں [12]۔ یہ مختلف قسمیں موجودہ COVID-19 ویکسینز کی تاثیر کو خطرے میں ڈالتی ہیں، جو صرف اسپائیک پروٹین کو نشانہ بنانے کے لیے بنائی گئی ہیں۔

SARS-CoV-2 کا N پروٹین اپنے کور میں ایک 140-امینو ایسڈ طویل RNA-بائنڈنگ ڈومین کے ذریعے وائرل RNA سے منسلک ہوتا ہے۔ یہ کورونا وائرس کے درمیان انتہائی محفوظ ہے، SARS-CoV کے ساتھ ~90% تسلسل کی شناخت کا اشتراک کرتا ہے، اور یہ ویرون کے اندر واحد ساختی پروٹین بھی ہے [13]۔ اس کے علاوہ، یہ وائرل آر این اے کو رائبونیوکلیو کیپسڈ کمپلیکس میں پیک کرنے میں اہم کردار ادا کرتا ہے اور وائرل آر این اے کی نقل، ویرون اسمبلی، اور میزبان خلیوں سے اخراج کے لیے ضروری ہے [14]۔ کورونا وائرس میں N پروٹین کی اعلی ترتیب کی مماثلت کی بنیاد پر، اسے کراس پروٹیکشن ویکسین ہدف کے طور پر تجویز کیا جا سکتا ہے۔ ہم نے پہلے پایا تھا کہ E اور M پروٹین کا اظہار کرنے والی دو DNA ویکسینز کے ساتھ مشترکہ حفاظتی ٹیکوں سے SARS-CoV-2 کے خلاف جزوی تحفظ ملتا ہے، اور ویکسین کی تیاری کے دوران اس طریقہ پر غور کیا جانا چاہیے [15]۔ ڈبلیو ایچ او کی لینڈ سکیپ دستاویز پر منحصر ہے، SARS-CoV-2 ویکسین کے امیدواروں کے لیے عام طور پر سات حکمت عملی ہیں، جنہیں مزید تین زمروں میں تقسیم کیا جا سکتا ہے: پہلی، پروٹین پر مبنی ویکسین، بشمول غیر فعال وائرس کی ویکسین، وائرس جیسی ذرات، اور پروٹین سبونائٹ ویکسین؛ دوسرا، جین پر مبنی ویکسین، بشمول وائرس ویکٹرڈ ویکسین، ڈی این اے ویکسین، اور ایم آر این اے ویکسین؛ تیسرا، پروٹین پر مبنی اور جین پر مبنی دونوں طریقوں کا ایک مجموعہ، جیسے لائیو-ٹینیویٹڈ وائرس ویکسین۔ ڈی این اے ٹیکنالوجیز، ناول جین پر مبنی ویکسین کی حکمت عملی کے طور پر، ابتدائی جانچ کے دوران متعدد ویکسین امیدواروں اور حکمت عملیوں کا تیزی سے موازنہ کر سکتی ہیں [16,17]۔ نظریاتی طور پر، تقریباً تمام وائرل پروٹین ممکنہ امیونوجن اور ویکسین کے اہداف ہیں۔ تاہم، ہمارے بہترین علم کے مطابق، مصنوعی ڈی این اے ویکسین کی مدافعتی صلاحیت اور SARS-CoV-2 S پروٹینز اور دیگر ساختی پروٹینوں کی انکوڈنگ میں حفاظتی صلاحیت کی ابھی تک منظم طریقے سے اطلاع نہیں دی گئی ہے۔ SARS-CoV-2 S, N, E، اور Ml پروٹین کو ظاہر کرنے والی چار DNA ویکسینز کا چوہوں میں ان کی مدافعتی صلاحیت اور حفاظتی افادیت کے لیے جائزہ لیا گیا تاکہ S کے امیونولوجیکل اثرات کو دوسرے ساختی پروٹینوں کے ساتھ مل کر دریافت کیا جا سکے۔

2. مواد اور طریقہ

2.1 خلیات

پورے مطالعے کے دوران Huh7.5 خلیات اور انسانی برانن گردے کے 293T خلیات کو 37 ◦C پر مرطوب ماحول میں 5% CO2 پر کلچر کیا گیا۔ خلیوں کو DMEM میڈیم (HyClone, Logan, UT, USA) میں کلچر کیا گیا تھا، 10% FBS (GEMINI Co., Shanghai, China) اور 1% penicillin-streptomycin (Gibco, New York, NY, USA) کے ساتھ ضمیمہ کیا گیا تھا۔ مائکوپلاسما آلودگی کے لئے تمام سیل لائنوں کی منفی تصدیق کی گئی۔

2.2 SARS-CoV-2 S/N/E/M کوڈنگ ڈی این اے ویکسینز کی تعمیر

SARS-CoV-2 S/N پروٹین-انکوڈنگ جین، جس میں N-ٹرمینل کوزاک سیکوینس (GCCACC) ہوتا ہے جس کے بعد ایک انیشیشن کوڈن (ATG) ہوتا ہے، کو ممالیہ کے لیے موزوں کوڈن (GenScript Co.، Nanjing) کا استعمال کرتے ہوئے ترکیب کیا گیا تھا۔ ، چین)۔ اس کے بعد اسے ایکسپریشن ویکٹر pcDNA3.1 (+) میں EcoRI اور XbaI ہضم کے ذریعے کلون کیا گیا اور pS/pN (DNA ویکسینز) (شکل 1A) کا نام دیا گیا۔ پی ای / پی ایم پروٹین کی تعمیر اور شناخت کی گئی تھی جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [15]۔ اینڈوٹوکسین فری میکسیپریپ کٹس (کیجین، بیجنگ، چین) کا استعمال کرتے ہوئے ویکسین تیار کی گئیں، اور سینجر ڈی این اے کی ترتیب کا استعمال کرتے ہوئے ترتیب کی تصدیق کی گئی۔ S/N پروٹین کے اظہار کی تصدیق ویسٹرن بلوٹنگ اور اینٹی ایس (سائنو بائیولوجیکل، بیجنگ، چین)/اینٹی این اینٹی باڈیز کو 1:1000 پر گھٹا کر کی گئی۔ یہ تجربات کئے گئے جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [15,18]۔

شکل 1. ریکومبیننٹ DNA پر مبنی SARS-CoV-2 S/N پروٹین ویکسین کی تشکیل کا ڈیزائن اور اظہار۔ (A) SARS-CoV-2 اسپائک (PS)، نیوکلیو کیپسڈ (pN)، لفافہ (pE)، اور/یا جھلی (PM) پروٹین کو انکوڈنگ کرنے والی دوبارہ پیدا کرنے والے DNA پر مبنی ویکسین کا اسکیمیٹک خاکہ۔ (B) ڈی این اے ویکسین میں ہدف پروٹین اظہار کی توثیق pS/pN/pE/pM پلازمیڈ کے ساتھ منتقلی 293T خلیوں کے مغربی بلاٹ تجزیہ کے ذریعے کی گئی۔

2.3 امیونائزیشن اور چیلنج

خواتین BALB/c چوہوں (چارلس ریور لیبارٹریز، فرانس) کو 6 ہفتے کی عمر میں نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف آکیوپیشنل ہیلتھ اینڈ پوائزن کنٹرول میں 21 ◦C اور نمی پر قابو پانے والے ماحول میں 12 گھنٹے روشنی/تاریک چکروں کے ساتھ رکھا گیا تھا۔ دریں اثنا، خوراک اور پانی فراہم کیا گیا، اور تمام جانوروں کے تجربات کو چائنیز سینٹر فار ڈیزیز کنٹرول اینڈ پریوینشن (چائنا سی ڈی سی) کی جانوروں کے تجربات کی اخلاقیات کی کمیٹی نے منظور کیا۔ تحقیق نے متعلقہ اخلاقی ضوابط کی تعمیل کی ہے۔

چوہوں کو تصادفی طور پر پانچ گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا اور اکیلے pS/pN کے ساتھ حفاظتی ٹیکے لگائے گئے تھے یا pS + pN یا pS + pE + PM دنوں 0، 21، اور 42 کو انٹرماسکلر انجیکشن پلس الیکٹروپوریشن (35 mg/50) کے ذریعے حفاظتی ٹیکے لگائے گئے تھے۔ mL) (شکل 2) [19,20]۔ مختصراً، ڈی این اے ویکسین کو ٹبیالیس اینٹریئر (TA) کے پٹھوں میں انجکشن لگایا گیا اور سوئیوں کے ساتھ 5 ملی میٹر کے علاوہ دو سوئی والے الیکٹروڈ (ECM830؛ BTX) کا استعمال کرتے ہوئے فوری طور پر بجلی سے نبض کی گئی۔ چوہوں سے سیرا کو مزاحیہ مدافعتی ردعمل کے تجزیہ کے لئے جمع کیا گیا تھا، اور سیلولر مدافعتی ردعمل (شکل 2) کی پیمائش کرنے کے لئے ماؤس کے تلیوں پر کارروائی کی گئی تھی۔

شکل 2. حفاظتی ٹیکوں اور SARS-CoV-2 چیلنج کی منصوبہ بندی۔ ویکسینیشن کا ٹائم کورس، چیلنجنگ، اور خون/ٹشو کے نمونے لینے۔ BALB/C چوہوں کو تصادفی طور پر گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا۔

SARS-CoV-2 چیلنج کے تجربات کیے گئے جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [15,21]۔ مختصراً، چوہوں کو بے ہوشی کی گئی اور پھر 45 µL کے کل حجم میں Ad5-hACE2 کے 2.5 × 108 PFU کے ساتھ اندرونی طور پر منتقل کیا گیا۔ منتقلی کے پانچ دن بعد، چوہوں کو بے ہوشی کی گئی اور پھر SARS-CoV-2 (ووہان/IVDC HB-02/2019) کے 1 × 105 TCID50 کے ساتھ 50 µL نمکین کے ساتھ اندرونی طور پر چیلنج کیا گیا۔ بفر ماؤس ماڈلز میں لائیو SARS-CoV-2 کے ساتھ تمام کام اینیمل بائیو سیفٹی لیول 3 (ABSL-3) لیبارٹریوں میں انجام دیا گیا۔

2.4 انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ

انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ اسسیس (ELISA) کئے گئے جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [15]۔ مختصراً، کاربونیٹ بفر (0.1 M، pH 9.6) میں پتلا شدہ S (Sino Biological سے خریدا گیا)/N پروٹین (سنگ کی طرف سے ایک تحفہ) کو 96- اچھی طرح سے EIA/RIA پلیٹوں (تھرمو) پر لیپت کیا گیا تھا۔ Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) رات بھر 4 ◦C پر۔ پلیٹوں کو PBS میں 200 µL 10% بکری سیرم کے ساتھ 37 ◦C پر 2 گھنٹے کے لیے بلاک کیا گیا تھا، اس کے بعد PBST کے ساتھ پانچ بار دھویا گیا تھا۔ اس کے بعد، پی بی ایس میں 2٪ بکرے کے سیرم میں سیرم کے نمونے شامل کیے گئے اور 2 گھنٹے کے لیے 37 ◦C پر انکیوبیٹ کیے گئے، اس کے بعد پی بی ایس ٹی کے ساتھ پانچ دھوئے گئے۔ HRP-conjugated goat anti-mouse IgG Ab (1:5000) 37 ◦C پر 1 گھنٹے کے لیے شامل کیا گیا۔ ہر کنویں میں کل 100 µL TMB سبسٹریٹ شامل کیا گیا اور 2M H2SO4 کے 50 µL کے ساتھ بجھایا گیا۔ جذب کو SPECTR Ostar Nano (BIO-GENE، Hong Kong، China) کا استعمال کرتے ہوئے 450 nm کی طول موج پر پڑھا گیا۔

cistanche پلانٹ میں مدافعتی نظام میں اضافہ

Cistanche Enhance Immunity مصنوعات دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

2.5 سیوڈوائرس انفیکشن اور نیوٹرلائزیشن کے تجربات

سیوڈو وائرس نیوٹرلائزیشن پرکھ کی گئی تھی جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [21,22]۔ آبائی وائرس ایس پروٹین کا اظہار کرنے والا ایک پلازمیڈ پہلے بنایا گیا تھا [22]۔ Omicron ویریئنٹ SARS-CoV-2 سپائیک پروٹین جین (GISAID: EPI_ISL_6590782.2) کی ترکیب کی گئی تھی (وازیم بائیوٹیک کمپنی لمیٹڈ، نانجنگ، چین کی طرف سے ایک تحفہ) ایک ممالیہ کے لیے موزوں کوڈن کا استعمال کرتے ہوئے اور pcDNA3.1 ویکٹر میں کلون کیا گیا، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [22]۔ مختصراً، لوسیفریز رپورٹر کا اظہار کرنے والے پلازمیڈز اور ایس پروٹین کا اظہار کرنے والے پلازمیڈز کو X-treme GENE HP DNA ٹرانسفیکشن ریجنٹ کا استعمال کرتے ہوئے HEK 293T خلیوں میں باہم منتقل کیا گیا تھا۔ سیل کلچر کو ٹرانسفیکشن کے 6 گھنٹے بعد ریفریش کیا گیا، اور سیوڈو وائرس پر مشتمل سپرنٹنٹ کو 48 گھنٹے کے بعد کاٹا گیا اور −70 ◦C پر محفوظ کیا گیا۔ سیوڈو وائرس نیوٹرلائزیشن پرکھ میں، ایک مساوی سیرم – وائرس کا مرکب پھر سیوڈو وائرس پر مشتمل سپرنٹنٹ کی 37 جلدوں پر لگایا گیا تھا اور پھر اسے پتلا سیرم میں شامل کیا گیا تھا۔ ◦C 1 گھنٹے کے لیے۔ پھر Huh7.5 سیلز کلچر میڈیا کو 100 µL سیرم – وائرس کے مرکب سے تبدیل کیا گیا اور 12 گھنٹے کے لیے 37 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ صرف SARS-CoV-2 pseudoviruses کے ساتھ کلچر شدہ سیل متوازی طور پر چلائے گئے تھے۔ اس کے بعد میڈیا کو DMEM (2% FBS) سے تبدیل کیا گیا، اور انکیوبیشن کو 48 گھنٹے کے لیے 37 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ پھر، برائٹ-گلو فائر فلائی لوسیفریز کٹ (پرومیگا) کا استعمال کرتے ہوئے لوسیفریز سگنل کی پیمائش کی گئی۔

2.6۔ SARS-CoV-2 نیوٹرلائزیشن پرکھ

اس تجربے میں SARS-CoV-2 (Wuhan/IVDC-HB-02/2019) استعمال کیا گیا تھا۔ مختصراً، سیرا کو 1:10 کے آغاز سے دوگنا پتلا کیا گیا، لائیو SARS-CoV-2 کے مساوی حجم (10–15 pfu/well) کے ساتھ ملایا گیا، اور 37 ◦C پر 1 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا، جس کے بعد انہیں سیڈ ویرو سیلز میں شامل کر دیا گیا۔ 48 گھنٹے کے لیے 37 ◦C پر انکیوبیشن کے بعد، ایک سائٹوپیتھک اثر (CPE) دیکھا گیا، اور 100 µL کلچر سپرنٹنٹ کو نیوکلیک ایسڈ نکالنے اور ریئل ٹائم فلوروسینس ریورس ٹرانسکرپشن PCR (RT-PCR) کے لیے کاٹا گیا۔ میڈین نیوٹرلائزیشن ڈوز (ND50) کا حساب ریڈ – منچ طریقہ [15] کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔

2.7۔ IFN- ELISpot Assay

پورے S/N/E/M پروٹین پر پھیلے ہوئے پیپٹائڈ پولز کو 10 امینو ایسڈز کے ذریعے لگاتار 15-میرس اوور لیپنگ کے طور پر Scilight Biotechnology, LLC نے ترکیب کیا تھا۔ پیپٹائڈ پول میں ہر پیوریفائیڈ پیپٹائڈ کا تقریباً 2.5 ملی گرام فی شیشی موجود تھا۔ تجربہ کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا [18]۔ مختصراً، 96-کنویں کی پلیٹیں (BD ELISPOT Set, USA) کو اینٹی-IFN- کیپچر Ab کے ساتھ لیپت کیا گیا تھا اور 4 ◦C پر رات بھر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ پلیٹوں کو تین بار دھونے کے بعد مکمل کلچر میڈیم کے ساتھ بلاک کر دیا گیا تھا۔ 35 دنوں میں چوہوں کی خوشنودی کے بعد اسپلینوسائٹس کی کٹائی کی گئی تھی اور ہر گروپ سے 120 تازہ سنگل سیل معطلیاں 5 × 106 فی کنویں پر چڑھائی گئی تھیں، اور پیپٹائڈس شامل کیے گئے تھے۔ اس کے بعد پلیٹوں کو 22 گھنٹے کے لیے 5% CO2 میں 37 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا اور ELISpot پلیٹ ریڈر (Biosys, So. Pasadena, CA, USA) کے استعمال سے پتہ چلا۔ اسپاٹ فارمنگ یونٹ (SFU) T سیل کو سیکریٹ کرنے والے IFN- کی نمائندگی کرتا ہے۔

2.8۔ چوہوں کے بعد SARS-CoV-2 چیلنج میں تحفظ کا اندازہ

تجربات کیے گئے جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [15,21]۔ مختصراً، پھیپھڑوں کی کٹائی کے بعد چوہوں کی خوشامد کی گئی۔ نصف ٹشوز نیوکلک ایسڈ نکالنے، ریئل ٹائم فلوروسینس RT-PCR، اور TCID50 کے لیے استعمال کیے گئے تھے۔ باقی آدھے کو پیتھولوجیکل تشخیص کے لیے چائنا ایگریکلچرل یونیورسٹی کے کالج آف ویٹرنری میڈیسن بھیج دیا گیا۔

2.9 شماریاتی تجزیہ

جوڑا نہ بنائے گئے ٹی ٹیسٹ، دو طرفہ ANOVA ٹیسٹ، اور Dunnett کا متعدد موازنہ ٹیسٹ GraphPad Prism 7 کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔{3}} (GraphPad Software LLC)۔ p-values ​​< 0۔{7}}5 کو شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا (* p < 0۔{11}}5; ** p < 0.01; * ** p < 0.001؛ **** p < 0.0001)۔

3. نتائج

3.1 ڈی این اے ویکسین کی خصوصیت

ویسٹرن بلوٹنگ کا استعمال کرتے ہوئے E اور M پروٹین کی سطح کا پتہ چلا۔ ہم نے HEK میں SARS-CoV-2 کے انکوڈ شدہ S/N/E/M پروٹینز کے اظہار کی پیمائش کی -S/anti-N اینٹی باڈیز اور ایک اینٹی-6 x اس کا اینٹی باڈی، سیل لیسٹس میں۔ بینڈز نے S (140–142 kDa)، N (45 kDa)، E (10 kDa)، اور M (22–25 kDa) پروٹینز (شکل 1B) کے پیش گوئی شدہ مالیکیولر وزن کا تخمینہ لگایا۔

3.2 مضبوط اور پائیدار اینٹی ایس اور/یا اینٹی این آئی جی جی پروڈکشن pS اور/یا pN DNA کے ذریعے حوصلہ افزائی

ویکسینز سیرم کو BALB/c چوہوں سے 35، 56، 96، اور 120 دنوں میں جمع کیا گیا تھا (شکل 2)۔ ELISA کا استعمال کرتے ہوئے اینٹی S/N anti-IgG لیولز کا پتہ چلا۔ پہلے اور دوسرے اضافے کے بعد سیرم میں pS یا pN کے ذریعہ حوصلہ افزائی S- یا N- مخصوص IgG ردعمل کی شدت میں اضافہ ہوا تھا۔ اینٹی ایس اور اینٹی این آئی جی جی ٹائٹرز pS + pN گروپ میں دوسرے گروپوں کی نسبت زیادہ تھے۔ تاہم، فرق اعداد و شمار کے لحاظ سے اہم نہیں تھا (شکل 3A، B)۔ کوئی مضبوط E/M پروٹین سے متعلق مخصوص اینٹی باڈی ردعمل کا پتہ نہیں چلا، جو پچھلے مطالعے کے نتائج سے مطابقت رکھتا ہے (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا) [15]۔

شکل 3. BALB/c چوہوں میں SARS-CoV-2 پر B-سیل کے ردعمل۔ (A) SARS-CoV-2 S (A) اور N پروٹینز (B) کے لیے سیرم IgG بائنڈنگ اینڈ پوائنٹ ٹائٹرز۔ (C) نیوٹرلائزیشن ٹائٹرز کا تعین SARS-CoV-2 pseudotyped-virus نظام کی بنیاد پر کیا گیا تھا۔ (D) اینٹی SARS-CoV-2 نیوٹرلائزیشن ٹائٹرز کا تعین SARS-CoV-2 وائرس کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ (E) SARS-CoV-2 Omicron pseudotyped وائرس سسٹم پر مبنی نیوٹرلائزیشن پرکھ۔ موک (نیلے)، pS (سرخ)، pS + pN (سبز)، pS + pE + pM (گلابی)، اور pN (اورینج) گروپس سے سیرا کے لیے روکنا تناسب دکھایا گیا ہے۔ ایرر بارز SEM کی نمائندگی کرتے ہیں، اور p-values ​​کا حساب دو طرفہ ANOVA اور Sidak کے پوسٹ ہاک تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، جہاں * p < 0.05

3.3 پی ایس اور پی این ویکسین کے ساتھ مشترکہ حفاظتی ٹیکوں کے ذریعے غیر جانبدار اینٹی باڈی کی اعلی سطح

سیریلی طور پر گھٹائے ہوئے سیرم کے نمونوں کے غیر جانبدار ٹائٹرز کا تعین سیوڈوٹائپڈ SARS-CoV-2 وائرس کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ غیر جانبدار اینٹی باڈیز (nAbs) کی اعلیٰ ترین سطحیں pS + pN گروپ میں دیکھی گئیں، باہم EC50 جیومیٹرک اوسط ٹائٹرز 2988 (دن 35 پر) اور 3578 (دن 56 پر) (شکل 3C) تک پہنچ گئے۔ اسی طرح کے نتائج لائیو وائرس مائیکرو نیوٹرلائزیشن (MN) پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے دیکھے گئے، جس میں pS + pN گروپ میں nAbs کی سطح 56 اور 96 دنوں میں S گروپ کے مقابلے زیادہ تھی (p < 0.05؛ شکل 3D)۔ مزید یہ کہ دن 56 (دوسرا فروغ) پر pS + pN گروپ میں nAbs کی سطح 35 دن کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھی (p <0.05؛ شکل 3D)۔

SARS-CoV-2 Omicron ویرینٹ کے خلاف ہر ویکسین کے طریقہ کار کی غیرجانبدار سرگرمی کا مزید تعین سیوڈوٹائپڈ پلیٹ فارم اور سیرم کے نمونوں کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ 35 اور 56 دنوں میں Omicron وائرس کے خلاف نیوٹرلائزیشن پروفائل آبائی وائرس (Figure 3E) کے خلاف اسی طرح کا تھا، جو تجویز کرتا ہے کہ PS + pN کے علاج میں کراس نیوٹرلائزنگ پوٹینسی تھی۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنائیں

3.4 ڈی این اے ویکسینیشن کے ذریعہ ٹی سیل کے جوابات

جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے، SARS-CoV-2 S/N/E/M اینٹیجنز کے خلاف ٹی سیل ردعمل کا تخمینہ IFN- ELISpot کے استعمال سے لگایا گیا تھا، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [15]۔ جیسا کہ توقع کی گئی ہے، PS + pN اور pS + pE + pM دونوں طرز عمل نے دن 35 (p < 0) کے مقابلے میں دن 120 کو S پروٹین کے لیے مخصوص IFN + T خلیات کی نمایاں طور پر اعلیٰ سطح کی حوصلہ افزائی کی۔ 05؛ شکل 4A)۔ مزید یہ کہ، دن 120 (دوسرا فروغ) پر N پروٹین کے لیے مخصوص IFN + T خلیوں کی تعداد pS + pN گروپ (p <0.05؛ شکل 4B) میں دن 35 کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھی۔ آخر میں، دن 120 (دوسرا فروغ) پر ایم پروٹین کے لیے مخصوص IFN + T خلیوں کی تعداد دونوں گروپوں میں 35 دن کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھی (p <0.05؛ شکل 4D)۔

شکل 4. BALB/c چوہوں میں SARS-CoV-2 انفرادی ساختی پروٹین کے لیے T سیل کے ردعمل۔ (A) SARS-CoV-2 S, (B) N, (C) E، پر پھیلے ہوئے اوورلیپنگ پیپٹائڈ پولز کے ساتھ 20 گھنٹے کے لیے متحرک splenocytes میں IFN- ELISpot کا استعمال کرتے ہوئے T-cell کے ردعمل کی پیمائش کی گئی۔ اور (D) ایم پروٹین۔ سلاخیں اوسط ± SD کی نمائندگی کرتی ہیں۔ اعداد و شمار کے تجزیے دو طرفہ ANOVA اور Sidak کے پوسٹ ہاک ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے، جہاں * p < 0۔{13}}5, ** p < 0.01, *** p < 0.01، اور **** p <0.0001۔

3.5 pS/pN یا pS/pE/pM کے ساتھ کو-امیونائزیشن کے ذریعے ہم آہنگی کا تحفظ

اس کے بعد ہم نے آبائی SARS-CoV-2 وائرس کے ساتھ hACE2 چوہوں کے حفاظتی ٹیکوں کے بعد چیلنج کے بعد ڈی این اے ویکسین کی حفاظتی افادیت کا جائزہ لیا۔ چیلنج کے بعد، فرضی گروپ کے چوہوں نے بتدریج وزن میں کمی کی نمائش کی۔ اس کے برعکس، pS یا pS+ کے ساتھ حفاظتی ٹیکے لگائے گئے چوہوں نے انفیکشن کے فوراً بعد وزن میں ہلکا کمی ظاہر کی، جس کے بعد صحت یابی (شکل 5A)۔ pS، pS + pN، یا pS + pE + pM سے ٹیکے لگائے گئے چوہوں میں کوئی زندہ وائرس نہیں پایا گیا۔ مزید برآں، pS + pN ویکسینیشن نے وائرل RNA کاپی نمبروں کو ان کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم کیا جو صرف pS ویکسینیشن سے حاصل کیے گئے تھے (p=0.0228؛ شکل 5B)۔ مزید یہ کہ پھیپھڑوں کی ہسٹوپیتھولوجی نے یہ ظاہر کیا کہ فرضی اور پی این دونوں گروپوں میں چوہوں نے سوزش کے فوکل پیچ دکھائے، فوففس پر حملہ، الیوولر گرنا، سوزش کے خلیوں میں دراندازی کی اعلی سطح، اور ہیمرج کے علاقے۔ اس کے مقابلے میں، pS + pN یا pS + pE + pM کے ساتھ علاج کیے گئے چوہوں میں ہلکی ہسٹوپیتھولوجیکل تبدیلیاں اور دوسرے گروپ (شکل 5C) کے مقابلے میں چیلنج کے بعد INHAND اسکور کم ہوئے۔

تصویر 5. لائیو SARS-CoV-2 وائرس کے ساتھ چیلنج کے بعد حفاظتی ٹیکوں کی افادیت۔ (A) چوہوں کا روزانہ وزن کیا جاتا تھا (یعنی ± معیاری غلطی کا اوسط (SEM)، n=4) چیلنج کے بعد تین دن تک۔ (B) چیلنج کے بعد تیسرے دن پھیپھڑوں میں متعدی SARS-CoV-2 ٹائٹر، جیسا کہ TCID5{{10}} پرکھ اور RNA کاپی نمبر کے ذریعے طے کیا گیا ہے۔ گروپوں کے درمیان شماریاتی طور پر اہم فرق کا تعین یک طرفہ ANOVA کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا جس کے بعد Dunnett کی متعدد موازنہ اصلاح (* p < 0۔{16}}5, ** p < 0.01, *** p < 0.001، اور **** p <0.0001)۔ (C) H&E سٹیننگ کا استعمال کرتے ہوئے پھیپھڑوں کا ہسٹوپیتھولوجیکل تجزیہ۔

4. بحث

اس تحقیق میں، دو ڈی این اے ویکسینز کے ساتھ مشترکہ حفاظتی ٹیکہ جات جو ایس اور این پروٹینز کا اظہار کرتے ہیں، نے اعلیٰ سطح کی nAbs کی حوصلہ افزائی کی اور چوہوں میں SARS-CoV-2 وائرل بوجھ کو کم کرنے میں انتہائی موثر تھا۔ ایس پروٹین کی حوصلہ افزائی کرنے والی ڈی این اے ویکسین نے تین حفاظتی ٹیکوں کے بعد ایس پروٹین مخصوص سیلولر قوت مدافعت کی سطح میں اضافہ کیا جب چوہوں کو N/E اور M پروٹین کے ساتھ مشترکہ حفاظتی ٹیکے لگائے گئے اور چیلنج کے بعد ہسٹوپیتھولوجیکل تبدیلیوں کو کم کیا۔ ہماری بہترین معلومات کے مطابق، یہ پہلی رپورٹ ہے جس میں چوہوں میں قوت مدافعت اور تحفظ کی ہم آہنگی بڑھانے کا انکشاف کیا گیا ہے جس میں ایس پروٹین کو انکوڈ کرنے والی ڈی این اے ویکسین کا استعمال کیا گیا ہے جب وہ SARS-CoV کے دیگر ساختی پروٹینوں کو انکوڈنگ کرنے والی DNA ویکسین کے ساتھ مل کر حفاظتی ٹیکے لگائے جاتے ہیں۔ }}۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنائیں

متعدد مطالعات میں N اینٹیجن علاقوں میں امیونوڈومیننٹ بی سیل ایپیٹوپس کا مشاہدہ کیا گیا ہے۔ N-based ویکسین عام طور پر nAbs کو آمادہ نہیں کر سکتیں، اس لیے کہ N پروٹین وائرل کی سطح پر ظاہر نہیں ہوتا ہے۔ خاص طور پر، S اور N پروٹینز کے ساتھ مشترکہ حفاظتی ٹیکوں نے دوسرے گروپوں کے مقابلے میں آبائی اور Omicron SARS-CoV-2 وائرس کے خلاف nAbs کی اعلی سطح کی حوصلہ افزائی کی۔ nAb کے بڑھتے ہوئے ردعمل بہتر وائرل کلیئرنس اور حفاظتی افادیت سے وابستہ ہیں۔ ہمارے نتائج نے ثابت کیا کہ pS + pN علاج SARS-CoV-2 وائرل لوڈ پوسٹ چیلنج کو کم کرنے میں اکیلے pS علاج سے زیادہ موثر تھا۔ ایک پچھلی تحقیق میں بتایا گیا ہے کہ ایم اور این پروٹینز کا اظہار کرنے والی ویکسین کے ساتھ حفاظتی ٹیکے لگائے گئے ہیمسٹرز کو شدید وزن میں کمی اور پھیپھڑوں کی پیتھالوجی سے محفوظ رکھا گیا تھا اور SARS-CoV{12}} چیلنج کے بعد oropharynx اور پھیپھڑوں میں وائرل ٹائٹرز کو نمایاں طور پر کم کیا تھا، جو ہمارے نتائج سے مطابقت رکھتا ہے [23]۔ بدقسمتی سے، وائرس ٹائٹرز میں کمی کو خاص طور پر M یا N پروٹین سے منسوب نہیں کیا جا سکتا، اور اس مطالعے میں nAb کی سطح کا اندازہ نہیں کیا گیا۔ ایک SARS-CoV-2 mRNA ویکسین کے مطالعے میں بتایا گیا ہے کہ S + N کو-امیونائزیشن نے S-specific CD8+ T-cell کے ردعمل اور اینٹی باڈی کی سرگرمی کو بے اثر کرنے کی حوصلہ افزائی کی ہے، جس سے پھیپھڑوں میں ڈیلٹا کے خلاف بہتر تحفظ ملتا ہے۔ اکیلے ایس کے مقابلے میں مختلف، جو اس مطالعہ کے نتائج کے مطابق ہے [24]۔ ایک اور تحقیق میں بتایا گیا ہے کہ ٹرانسمیسیبل گیسٹرو اینٹرائٹس کورونا وائرس کے N پروٹین نے اینٹی باڈیز کو بے اثر کرنے کی ترکیب کو فروغ دیا جب پورسین TGEV-IMMUNE خلیات کو وٹرو میں S اور N پروٹین کے امتزاج کے ساتھ متحرک کیا گیا تھا، اور اس اثر کی وضاحت مددگار T-lymphocyte ردعمل کے ذریعے کی جا سکتی ہے۔ N پروٹین [25]۔

N-antigen علاقوں میں امیونوڈومیننٹ CD4+/CD8+ T-cell epitopes کی شناخت پہلے کی جا چکی ہے۔ کئی مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ SARS-CoV-2 N پروٹین پر مبنی ویکسین مؤثر طریقے سے سیلولر مدافعتی ردعمل پیدا کرتی ہیں۔ S + N گروپ نے تین حفاظتی ٹیکوں کے بعد S پروٹین مخصوص سیلولر قوت مدافعت کی سطح کو ظاہر کیا۔ ایک SARS-CoV-2 mRNA ویکسین کے مطالعے میں بتایا گیا ہے کہ امتزاج S + N نے اکیلے S کے مقابلے میں ایک بڑھا ہوا S- مخصوص CD8+ T-cell ردعمل پیدا کیا، جو ہمارے نتائج سے مطابقت رکھتا ہے [24]۔ ایک اور تحقیق میں بتایا گیا ہے کہ دوہری اینٹیجن hAd5 S + N پرائم ویکسینیشن کے بعد S اور N اینٹیجنز کے لیے T-cell کے ردعمل پہلے SARS-CoV-2- سے متاثرہ مریضوں کے برابر تھے، اور T-cell کے سلیکو پیشن گوئی ماڈلز میں۔ ایپیٹوپ HLA بائنڈنگ نے تجویز کیا کہ hAd5 S + N ویکسین کے T-سیل ردعمل B.1.351 ویرینٹ کے خلاف اپنی افادیت کو برقرار رکھیں گے۔ مزید یہ کہ، پہلے SARS-CoV-2-متاثرہ مریضوں کے پلازما نے صرف hAd5 S-Fusion کے مقابلے میں دوہری اینٹیجن S-Fusion + N-ETSD کی ساخت کا اظہار کرنے والے خلیوں کے ساتھ زیادہ پابند وابستگی ظاہر کی، مزید یہ بتاتا ہے کہ امیونوجنیسیٹی S + N ڈبل اینٹیجن ویکسین S سنگل اینٹیجن ویکسین [26] سے بہتر ہے۔

پھیپھڑوں میں زندہ وائرس کا پتہ نہیں چلا، اور پی ایس، پی ایس + پی این، اور پی ایس + پی ای + پی ایم گروپس میں چیلنج کے بعد وزن میں کمی کو کم کیا گیا، جبکہ پی این کے علاج سے وائرس ٹائٹر کو مؤثر طریقے سے کم نہیں کیا گیا۔ یہ نتائج ویکسین کے ہدف کے طور پر ایس پروٹین کی ناگزیریت اور تاثیر پر زور دیتے ہیں۔ خاص طور پر، pS اور pN کے ساتھ مشترکہ حفاظتی ٹیکوں کے وائرل کلیئرنس پر pS یا pN سے بہتر اثرات تھے۔ پی ایس + پی ای + پی ایم گروپ نے پھیپھڑوں میں کم ہسٹوپیتھولوجیکل تبدیلیوں کا اشارہ کیا، جو ہمارے پچھلے مطالعہ [15] کے نتائج کے مطابق ہے۔ S + N گروپ کے پھیپھڑوں میں وائرل RNA کاپیاں کم تھیں، وزن میں کمی، اور SARS-CoV{11}} کے بعد فوری بحالی کا وقت صرف S/N سے حفاظتی ٹیکے لگائے گئے گروپ کے مقابلے میں تھا، جو کہ اس کے مطابق تھا۔ اس مطالعہ کے نتائج. تاہم، کسی بھی گروپ نے غیر جانبدار اینٹی باڈی ٹائٹرز کا پتہ نہیں لگایا، جس کی وضاحت ویکسین کی مختلف قسم اور تجرباتی جانوروں میں فرق سے کی جا سکتی ہے [26]۔ ایک SARS-CoV-2 اڈینو وائرس ویکٹر ویکسین کے مطالعے میں بتایا گیا ہے کہ S ویکسین صرف اس وقت شدید دماغی تحفظ فراہم کرتی ہے جب N ویکسین کے ساتھ مشترکہ حفاظتی ٹیکہ لگایا جاتا ہے [27]۔ ایک اور تحقیق نے Tri: ChAd، Bi: ChAd، اور Mono: ChAd ویکسین تیار کیں جو بالترتیب S1/N/RdRp، N/RdRp، اور S1 پروٹین کا اظہار کرتی ہیں، اور انہیں B.1.351 جانوروں کے ماڈل میں آزمایا گیا۔ مونو: ChAdlungs میں وسیع پیمانے پر پیتھالوجی دیکھی گئی، جبکہ Bi: ChAd اور Tri: ChAd پھیپھڑے اس پیتھالوجی سے تقریباً آزاد دکھائی دیے [28]۔

مزید برآں، غیر ویکسین شدہ جانوروں میں پھیپھڑوں میں وائرل بوجھ زیادہ تھا، جبکہ Tri: ChAd علاج نے وائرل بوجھ کو 3.5 لاگز تک نمایاں طور پر کم کیا۔ اس کے مقابلے میں، دونوں Bi: ChAd اور Mono: ChAd ویکسینز نے وائرل بوجھ کو صرف اعتدال سے کم کیا۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ مختلف قسموں کے خلاف S/N ڈبل اینٹیجن ویکسین کا حفاظتی اثر S سنگل اینٹیجن ویکسین سے بہتر ہو سکتا ہے، جو ہمارے نتائج [28] سے مطابقت رکھتا ہے۔ کچھ مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ N پروٹین سے حفاظتی ٹیکوں والے چوہے SARS-CoV انفیکشن [29–31] کے بعد پھیپھڑوں کی شدید سوزش پیدا کرتے ہیں۔ پچھلے مطالعات میں یہ بھی بتایا گیا ہے کہ ماؤس ہیپاٹائٹس وائرس این پروٹین کو ظاہر کرنے والی ایڈینو وائرس ویکٹر ویکسین کے ساتھ حفاظتی ٹیکے چوہوں کو مہلک انفیکشن سے بچاتا ہے، جو یہ ظاہر کرتا ہے کہ این پروٹین حفاظتی اثر پیدا کر سکتا ہے [32]۔ مزید برآں، CRT/N DNA ویکسین کے ذریعے حفاظتی ٹیکوں والے گروپ میں چیلنج کے بعد وائرل ٹائٹر میں نمایاں کمی واقع ہوئی، جس میں ویکسینیا وائرس SARS-CoV N پروٹین کا اظہار کرتا ہے [33]۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنائیں

ایس پروٹین پر ہونے والی ایک تحقیق نے یہ ظاہر کیا کہ مشترکہ ڈی این اے/پروٹین ویکسین صرف ڈی این اے/پروٹین ویکسین سے بہتر مزاحیہ اور سیلولر قوت مدافعت پیدا کرتی ہے [8]۔ صرف ایس پروٹین کو نشانہ بنانے والی ویکسینز نے ابھرتی ہوئی مختلف حالتوں کی وجہ سے ہلکے سے اعتدال پسند COVID-19 کے خلاف حفاظت میں کم تاثیر کا مظاہرہ کیا ہے۔ محفوظ شدہ SARS-CoV-2 ساختی پروٹین کے کردار، بشمول N/E/M پروٹین، ویکسین کے ڈیزائن اور ایپلی کیشنز میں توجہ کے لائق ہیں، کیونکہ محفوظ شدہ ایپیٹوپس کے خلاف ویکسین کے ذریعے ٹی سیل کے ردعمل عام طور پر اتپریورتنوں سے متاثر نہیں ہوتے ہیں۔ . ایک تحقیق میں بتایا گیا ہے کہ SARS سے صحت یاب ہونے والے مریضوں (n=23) کے پاس 2003 کے پھیلنے کے 17 سال بعد بھی SARS-CoV N پروٹین کے لیے دیرپا میموری T خلیات موجود تھے، جس نے SARS CoV کے لیے مضبوط کراس رد عمل ظاہر کیا۔ {15}} N پروٹین، N پروٹین کے استعمال کو کراس پروٹیکٹیو ویکسین ہدف کے طور پر مزید توثیق کرتا ہے [34]۔ اس مطالعہ نے یہ ظاہر کیا کہ pS/pN کو-امیونائزیشن اعلی nAb ردعمل، بہتر وائرل کلیئرنس، اور بہتر سیلولر مدافعتی ردعمل کے ساتھ منسلک تھی اور صرف pS کے مقابلے میں SARS-CoV-2 چیلنج کے بعد بہتر تحفظ فراہم کر سکتی ہے۔ مزید برآں، SARS-CoV-2 کی مختلف اقسام جانوروں کی بہت سی انواع کو متاثر کرتی ہیں، اور کچھ جنگلی جانوروں اور پالتو جانوروں میں انسان سے جانوروں میں منتقلی دیکھی گئی ہے [7]۔ لہذا، ویٹرنری SARS-CoV-2 ویکسین کو زیادہ توجہ دینے کی ضرورت ہے۔ اس کے علاوہ، نینو ٹیکنالوجی ویکسین کو بہتر بنانے میں ایک طاقتور ذریعہ ہو سکتی ہے اور زیادہ توجہ کے لائق ہے [2]۔

اس مطالعہ میں کئی حدود ہیں۔ سب سے پہلے، ہم نے صرف BALB/c چوہوں میں ڈی این اے ویکسین کی حکمت عملی کا مشاہدہ کیا، اور مستقبل کے مطالعے کو جانوروں کے دوسرے ماڈلز میں ان ویکسین کے نظام کے مدافعتی اثرات کا جائزہ لینا چاہیے۔ دوسرا، S اور N پروٹین کا استعمال کرتے ہوئے مشترکہ حفاظتی ٹیکوں کے ذریعے حوصلہ افزائی شدہ nAb- اور S- مخصوص CD8 T-سیل کے ردعمل کے تحت مالیکیولر میکانزم کو مکمل طور پر سمجھنے کے لیے اور اس علم کو COVID کو بہتر بنانے کے لیے استعمال کرنے کے لیے اضافی تحقیق کی ضرورت ہے-19 ویکسین ڈیزائن. آخر میں، N پروٹین مخصوص اینٹی باڈیز کا کام مزید مطالعہ کا مستحق ہے۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنائیں

آخر میں، اس مطالعہ نے SARS-CoV-2 S, N, E، اور M پروٹین کے ساتھ مشترکہ حفاظتی ٹیکوں کی مدافعتی صلاحیت کا جائزہ لیا۔ صرف ایس پروٹین کو نشانہ بنانے والی متعدد ویکسین ابھرتی ہوئی مختلف قسموں پر حفاظتی اثر کم کرتی ہیں۔ ہمارے نتائج موجودہ اور ابھرتی ہوئی SARS-CoV-2 مختلف حالتوں کو کنٹرول کرنے اور ممکنہ کورونا وائرس وبائی امراض کو روکنے کے لیے ایک کراس ری ایکٹیو COVID-19 ویکسین تیار کرنے کی بنیاد رکھیں گے۔

حوالہ جات

1. Zmievskaya, E.; ویلینا، اے. گنیوا، آئی۔ پیٹوخوف، اے. رضوانوف، اے. بلاتوف، ای. آنکولوجی سے آگے CAR-T سیل تھراپی کا اطلاق: خود بخود امراض اور وائرل انفیکشن۔ بائیو میڈیسنز 2021، 9، 59۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

2. رشید زادہ، ایچ. دانفر، ایچ. رحیمی، ایچ. مظفری، ایف۔ صالحیبر، ایم. رحمتی، ایم اے؛ رحموز-ہغیثی، ص۔ موسی زادہ، ن. محمدی، اے. Ertas, YN; ET رحمہ اللہ تعالی. ناول کورونا وائرس کے خلاف نینو ٹیکنالوجی (شدید ایکیوٹ ریسپائریٹری سنڈروم کورونا وائرس 2): تشخیص، علاج، علاج اور مستقبل کے تناظر۔ نینو میڈیسن 2021، 16، 497–516۔ [کراس ریف]

3. فونٹانیٹ، A.؛ Cauchemez, S. COVID-19 ہرڈ امیونٹی: ہم کہاں ہیں؟ نیٹ Rev. Immunol. 2020، 20، 583–584۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

4. جیاناتھن، ایم. افخمی، ایس. سمیل، ایف۔ ملر، ایم ایس؛ Lichty, BD; Xing, Z. COVID-19 ویکسین کی حکمت عملیوں کے لیے مدافعتی تحفظات۔ نیٹ Rev. Immunol. 2020، 20، 615-632۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

5. وینڈیلی، اے. مونٹی، ایم؛ Milanetti, E.; Armaos, A.; روپرٹ، جے؛ Zacco, E.; بیچارا، ای. ڈیلی پونٹی، آر. Tartaglia، GG SARS-CoV-2 جینوم کا ساختی تجزیہ اور انسانی تعامل کی پیشین گوئیاں۔ نیوکلک ایسڈ Res. 2020، 48، 11270–11283۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

6. جیکسن، سی بی؛ فرزان، ایم. چن، بی؛ Choe, H. خلیوں میں SARS-CoV-2 کے داخلے کا طریقہ کار۔ نیٹ Rev. Mol. سیل بائیول۔ 2022، 23، 3–20۔ [کراس ریف]

7. کنفورٹی، اے. سانچیز، ای. Salvatori, E.; شیر، ایل. کمپگنون، ایم. پنٹو، ای. پالمبو، ایف۔ D'Acunto, E.; موزی، اے. Roscilli, G.; ET رحمہ اللہ تعالی. SARS-CoV-2 ریسیپٹر بائنڈنگ ڈومین کو انکوڈنگ کرنے والی ایک لکیری ڈی این اے ویکسین کا امیدوار گھریلو بلیوں میں طاقتور مدافعتی ردعمل اور اینٹی باڈیز کو بے اثر کرتا ہے۔ مول وہاں طریقے کلین۔ دیو 2023۔ [کراس ریف]

8. بورگویاکووا، ایم بی؛ کارپینکو، ایل آئی؛ Merkulyeva, IA; Shcherbakov، DN؛ روڈومیٹوف، اے پی؛ سٹاروسٹینا، ای وی؛ شانشین، ڈی وی؛ ایساوا، اے اے؛ Nesmeyanova, VS; Volkova, NV; ET رحمہ اللہ تعالی. COVID-19 کے خلاف DNA/پروٹین مشترکہ ویکسین کی مدافعتی صلاحیت۔ بیل. ختم بائول میڈ. 2023، 1–4۔ [کراس ریف]

9. کیو، ایل۔ یی، زیڈ؛ شین، وائی؛ لن، ایل. چن، ایف. Xu, Y.; وو، زیڈ؛ تانگ، ایچ. ژانگ، ایکس۔ تیان، ایف۔ ET رحمہ اللہ تعالی. SARS-CoV-2 اور ابھرتی ہوئی اقسام کے خلاف سرکلر RNA ویکسین۔ سیل 2022, 185, 1728–1744.e16۔ [کراس ریف]

10. کاربیٹ، کے ایس؛ ایڈورڈز، ڈی کے؛ لیسٹ، ایس آر؛ ابیونا، او ایم؛ Boyoglu-Barnum, S.; گلیسپی، RA؛ ہمانسو، ایس. Schäfer، A.؛ زیواو، سی ٹی؛ DiPiazza, AT; ET رحمہ اللہ تعالی. SARS-CoV-2 mRNA ویکسین کا ڈیزائن پروٹو ٹائپ پیتھوجین تیاری کے ذریعہ فعال کیا گیا ہے۔ فطرت 2020، 586، 567–571۔ [کراس ریف]

11. تیان، جے ایچ؛ پٹیل، این. Haupt, R.; چاؤ، ایچ. ویسٹن، ایس. ہیمنڈ، ایچ. لوگو، جے؛ پورٹنوف، اے. نورٹن، جے؛ Guebre-Xabier، M. ET رحمہ اللہ تعالی. SARS-CoV-2 سپائیک گلائکوپروٹین ویکسین امیدوار NVX-CoV2373 بیبونوں میں امیونوجنیسیٹی اور چوہوں میں تحفظ۔ نیٹ کمیون 2021، 12، 372۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

12. Andreano, E.; Paciello، I.؛ پکینی، جی؛ منگنارو، این. پیلیری، پی. Hyseni, I.; لیونارڈی، ایم. Pantano, E.; ابینٹو، وی. بیننکاسا، ایل۔ ET رحمہ اللہ تعالی. ہائبرڈ قوت مدافعت SARS-CoV-2 مختلف حالتوں کے خلاف B خلیات اور اینٹی باڈیز کو بہتر بناتی ہے۔ فطرت 2021، 600، 530–535۔ [کراس ریف]

13. نقوی، اے اے ٹی؛ فاطمہ، K. محمد، ٹی. فاطمہ، یو۔ سنگھ، آئی کے؛ سنگھ، اے. عاطف، ایس ایم؛ ہری پرساد، جی۔ حسن، جی ایم؛ حسن، MI بصیرت SARS-CoV-2 جینوم، ساخت، ارتقاء، روگجنن اور علاج: ساختی جینومکس اپروچ۔ بائیوکیم۔ بائیوفیس۔ ایکٹا مول۔ بنیاد ڈس 2020، 1866، 165878۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

14. عباسی، جے انڈیا کی نئی COVID-19 نوجوانوں اور بالغوں کے لیے ڈی این اے ویکسین پہلی ہے۔ JAMA 2021, 326, 1365۔ [CrossRef] [PubMed]

15. چن، جے؛ ڈینگ، وائی۔ ہوانگ، بی. ہان، ڈی. وانگ، ڈبلیو. ہوانگ، ایم؛ Zhai، C.؛ زاؤ، زیڈ؛ یانگ، آر. زاؤ، وائی؛ ET رحمہ اللہ تعالی. ڈی این اے ویکسین جو لفافے اور جھلی کے پروٹین کو ظاہر کرتی ہیں چوہوں میں SARS-CoV-2 کے خلاف جزوی تحفظ فراہم کرتی ہیں۔ سامنے والا۔ امیونول۔ 2022، 13، 827605۔ [کراس ریف]

16. تباس، ص. Kraynyak, KA; پٹیل، اے. مسلو، جے این؛ مورو، ایم پی؛ سلویسٹر، اے جے؛ نوبلاک، ڈی۔ گلیسپی، ای. امانت، ڈی۔ Racine, T.; ET رحمہ اللہ تعالی. انٹراڈرمل SynCon®Ebola GP DNA ویکسین درجہ حرارت مستحکم ہے اور صحت مند رضاکاروں میں سیلولر اور مزاحیہ مدافعتی فوائد کو محفوظ طریقے سے ظاہر کرتی ہے۔ J. انفیکٹ۔ ڈس 2019، 220، 400–410۔ [کراس ریف]

17. سمتھ، TRF؛ پٹیل، اے. راموس، ایس. ایلوڈ، ڈی. Zhu, X.; یان، جے؛ گیری، EN؛ واکر، SN؛ Schultheis, K.; پرور، ایم. ET رحمہ اللہ تعالی. COVID-19 کے لیے ڈی این اے ویکسین کے امیدوار کی مدافعتی صلاحیت۔ نیٹ کمیون 2020، 11، 2601۔ [کراس ریف]

18. زاؤ، زیڈ؛ ڈینگ، وائی۔ نیو، پی. گانا، جے؛ وانگ، ڈبلیو. Du, Y.; ہوانگ، بی. وانگ، ڈبلیو. ژانگ، ایل. زاؤ، پی. ET رحمہ اللہ تعالی. CHIKV VLP اور DNA ویکسین کے ساتھ مشترکہ حفاظتی ٹیکوں سے چوہوں میں مزاحیہ ردعمل پیدا ہوتا ہے۔ فرنٹ امیونول۔ 2021، 12، 655743۔ [کراس ریف]

19. گوان، جے؛ ڈینگ، وائی۔ چن، ایچ. ین، ایکس؛ یانگ، وائی؛ ٹین، ڈبلیو. پرائمنگ دو ڈی این اے ویکسین کے ساتھ جو ہیپاٹائٹس سی وائرس این ایس 3 پروٹین کو ٹارگٹ کرنے والے ڈینڈرٹک سیلز کو ظاہر کرتی ہے چوہوں میں اعلی ہیٹرولوجس حفاظتی صلاحیت کو ظاہر کرتی ہے۔ محراب ویرول۔ 2015، 160، 2517–2524۔ [کراس ریف]

20. چن، ایچ. وین، بی؛ ڈینگ، وائی۔ وانگ، ڈبلیو. ین، ایکس؛ گوان، جے؛ روآن، ایل. Tan, W. ہیپاٹائٹس بی وائرس کور-PreS1 اور S-PreS1 پلازمیڈز کے امتزاج کے ساتھ ڈی این اے امیونائزیشن پلس ویوو الیکٹروپوریشن کا بہتر اثر۔ کلین ویکسین امیونول۔ 2011، 18، 1789–1795۔ [کراس ریف]

21. یانگ، آر. ڈینگ، وائی۔ ہوانگ، بی. ہوانگ، ایل. لن، اے. لی، وائی؛ وانگ، ڈبلیو. لیو، جے؛ لو، ایس. Zhan، Z.؛ ET رحمہ اللہ تعالی. سازگار بایو ڈسٹری بیوشن پیٹرن اور امید افزا استثنیٰ کے ساتھ ایک بنیادی شیل ساختہ COVID-19 mRNA ویکسین۔ سگنل کی نقل و حمل۔ وہاں کو نشانہ بنائیں۔ 2021، 6، 213۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

22. یانگ، آر. ہوانگ، بی. A, R.; لی، ڈبلیو. وانگ، ڈبلیو. ڈینگ، وائی۔ ٹین، ڈبلیو. سیوڈوٹائپڈ SARS-CoV-2 سسٹم کی نشوونما اور تاثیر جیسا کہ وٹرو میں کارکردگی اور انٹری انہیبیشن ٹیسٹ کو غیرجانبدار بنانے سے طے ہوتا ہے۔ بایوسف. صحت 2020، 2، 226–231۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

23. جیا، س. Bielefeldt-Ohmann, H.; Maison, RM; Masleša-Gali´c, S.; کوپر، ایس کے؛ بوون، RA؛ Horwitz، MRA نقل کرنے والی بیکٹیریم ویکٹرڈ ویکسین جو SARS-CoV-2 جھلی اور نیوکلیو کیپسڈ پروٹین کا اظہار کرتی ہے ہیمسٹرز میں شدید COVID-19-جیسے بیماری سے حفاظت کرتی ہے۔ NPJ ویکسینز 2021, 6, 47۔ [CrossRef] [PubMed]

24. ہاجنک، آر ایل؛ پلانٹ، جے اے؛ لیانگ، Y. عالمہ، ایم جی؛ تانگ، جے؛ Zhong، C.؛ آدم، اے. Scharton, D.; رافیل، جی ایچ؛ لیو، وائی؛ ET رحمہ اللہ تعالی. مشترکہ mRNA ویکسینیشن SARS-CoV-2 ڈیلٹا ویرینٹ کے خلاف تحفظ کو بڑھاتی ہے۔ bioRxiv 2021۔ [کراس ریف]

25. Antón, IM; González, S.; Bullido, MJ; Corsín، M.؛ Risco, C.; Langeveld, JP; Enjuanes، L. وائرس سے متعلق مخصوص اینٹی باڈیز کے ان وٹرو انڈکشن میں ٹرانسمیسیبل گیسٹرو اینٹرائٹس کورونا وائرس (TGEV) ساختی پروٹین کے درمیان تعاون۔ وائرس ریس 1996، 46، 111–124۔ [کراس ریف]

26. Deschambault, Y.; لنچ، جے؛ وارنر، بی؛ Tierney, K.; Huynh، D.؛ Vendramelli، R.؛ درزی، این. فراسٹ، K.؛ بوتھ، ایس. سجیش، بی. ET رحمہ اللہ تعالی. ریکومبیننٹ ACAM2000 ویکسینیا وائرس کے ساتھ سنگل امیونائزیشن جو سپائیک کا اظہار کرتی ہے اور نیوکلیو کیپسڈ پروٹین ہیمسٹر کو SARS-CoV-2-کی وجہ سے طبی بیماری سے بچاتے ہیں۔ bioRxiv 2021۔ [کراس ریف]

27. Penaloza-MacMaster, P.; کلاس، جے؛ لعنت بھیجو.؛ رچنر، JM A SARS CoV-2 نیوکلیو کیپسڈ ویکسین ڈسٹل وائرل پھیلاؤ کے خلاف حفاظت کرتی ہے۔ bioRxiv 2021۔

28. افخمی، ایس. D'Agostino, MR; ژانگ، اے. سٹیسی، ایچ ڈی؛ مارزوک، اے. کانگ، اے. سنگھ، آر. Bavananthasivam, J.; جی، جی؛ لوو، ایکس۔ ET رحمہ اللہ تعالی. اگلی نسل کی COVID-19 ویکسین کی سانس کے بلغمی ترسیل SARS-CoV-2 کے آبائی اور مختلف دونوں قسموں کے خلاف مضبوط تحفظ فراہم کرتی ہے۔ سیل 2022, 185, 896–915.e19۔ [کراس ریف]

29. زینگ، این. زیا، آر. یانگ، سی. ین، بی؛ لی، وائی؛ Duan, C.; لیانگ، ایل. گو، ایچ. Xie, Q. تمباکو میں SARS-CoV نیوکلیو کیپسڈ پروٹین کے اظہار اور چوہوں میں اس کی مدافعتی صلاحیت۔ ویکسین 2009، 27، 5001–5007۔ [کراس ریف]

30. یاسوئی، ایف۔ کائی، سی۔ کتابتاکے، ایم۔ Inoue, S.; یونیڈا، ایم؛ یوکوچی، ایس. کیس، آر. Sekiguchi, S.; موریتا، کے. ہشیما، ٹی. ET رحمہ اللہ تعالی. شدید ایکیوٹ ریسپائریٹری سنڈروم (SARS) سے وابستہ کورونا وائرس (SARS-CoV) نیوکلیو کیپسڈ پروٹین کے ساتھ پہلے حفاظتی ٹیکوں سے SARS-CoV سے متاثرہ چوہوں میں شدید نمونیا ہوتا ہے۔ J. Immunol. 2008، 181، 6337–6348۔ [کراس ریف]

31. ڈیمنگ، ڈی. شیہان، ٹی. Heise، M. یونٹ، بی؛ ڈیوس، این. سمز، اے. سوتھر، ایم. ہرکیما، جے۔ وائٹمور، اے. اچار، آر. ET رحمہ اللہ تعالی. سنسنی خیز چوہوں میں ویکسین کی افادیت کو دوبارہ پیدا کرنے والے SARS-CoV بیئرنگ ایپیڈیمک اور زونوٹک اسپائک مختلف حالتوں کے ساتھ چیلنج کیا گیا۔ پی ایل او ایس میڈ۔ 2006، 3، e525۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

32. ویسلنگ، جے جی؛ گوڈیکے، جی جے؛ Schijns, VE; Prevec, L.; گراہم، ایف۔ ہورزینیک، ایم سی؛ روٹیر، پی جے ماؤس ہیپاٹائٹس وائرس اسپائک اور نیوکلیو کیپسڈ پروٹین جس کا اظہار اڈینو وائرس ویکٹرز کے ذریعہ چوہوں کو مہلک انفیکشن سے بچاتا ہے۔ جے جنرل ویرول 1993، 74، 2061–2069۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

33. کم، ٹی ڈبلیو؛ لی، جے ایچ؛ ہنگ، سی ایف؛ پینگ، ایس. روڈن، آر. وانگ، ایم سی؛ Viscidi, R.; تسائی، وائی سی؛ وہ، ایل. چن، پی جے؛ ET رحمہ اللہ تعالی. شدید ایکیوٹ ریسپائریٹری سنڈروم کورونا وائرس کے نیوکلیو کیپسڈ پروٹین کو نشانہ بنانے والی ڈی این اے ویکسین کی تخلیق اور خصوصیات۔ جے ویرول۔ 2004، 78، 4638–4645۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

34. لی برٹ، این. ٹین، اے ٹی؛ Kunasegaran, K.; تھام، سی وائی ایل؛ حافظی، ایم. چیا، اے. Chng, MHY; لن، ایم. ٹین، این. لنسٹر، ایم. ET رحمہ اللہ تعالی. SARS-CoV-2-COVID-19 اور SARS کے کیسز میں T سیل کی مخصوص قوت مدافعت اور غیر متاثرہ کنٹرول۔ فطرت 2020، 584، 457–462۔ [کراس ریف]