پولی سسٹک گردے کی بیماری کی وجہ

مزید معلومات کے لیے:ali.ma@wecistanche.com

PKD1 کا زیادہ اظہار پولی سسٹک گردے کی بیماری کا سبب بنتا ہے۔

Caroline Thivierge، Almira Kurbegovic، Martin Couillard، Richard Guillaume، Olivier Coté، اور Marie Trude

پیتھوجینیٹک میکانزم بنیادی طور پرآٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری(ADPKD) کو واضح کرنا باقی ہے۔ جبکہ ثبوت موجود ہیں کہ Pkd1(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)جین ہیپلو کی کمی اور heterozygosity کا نقصان چوہوں میں سسٹ کی تشکیل کا سبب بن سکتا ہے، Pkd1 کی متضاد اعلی سطحپولی سسٹک گردے کی بیماری 1ADPKD کے گردوں میں اظہار کا پتہ چلا ہے (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری) مریض. اس بات کا تعین کرنے کے لیے کہ آیا Pkd1(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)فنکشن کا فائدہ ایک پیتھوجینیٹک عمل ہو سکتا ہے، ایک Pkd1 بیکٹیریل مصنوعی کروموسوم (Pkd1-BAC) کو ہم جنس دوبارہ ملاپ کے ذریعے تبدیل کیا گیا تھا تاکہ صرف بالغ گردے کو ترجیحی طور پر ایک مستقل Pkd1 اظہار کو نشانہ بنایا جا سکے، کئی ٹرانسجینک لائنیں خاص طور پر زیادہ دبائی گئی تھیں۔ گردوں میں Pkdl ٹرانسجن 2- سے 15- Pkd1 اینڈوجینس سطحوں پر گنا۔ تمام ٹرانسجینک چوہوں نے تولیدی طور پر نلی نما اور گلومیرولر اخراجات اور گردوں کی کمی پیدا کی اور گردوں کی ناکامی سے مر گئے۔ یہ ماڈل یہ ظاہر کرتا ہے کہ صرف جنگلی قسم کے Pkd1 کا زیادہ اظہار ہی انسانی ADPKD سے مشابہہ سیسٹوجنیسیس کو متحرک کرنے کے لیے کافی ہے۔ (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری). ہمارے نتائج نے تمام ٹرانسجینک لائنوں سے چوہوں میں گردوں کے c-myc اظہار میں نمایاں اضافہ کا بھی انکشاف کیا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ Pkd1 کے Vivo ڈاؤن اسٹریم اثر میں c-myc اہم ہے۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)مالیکیولر ڈتھواوس، اس مطالعہ نے نہ صرف ایک انمول اور پہلا PKD تیار کیا۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری)مالیکیولر روگجنن اور علاج کا اندازہ کرنے کے لئے ماڈل لیکن یہ ثبوت بھی فراہم کرتا ہے کہ ADPKD میں فنکشن کا فائدہ ایک روگجنیاتی طریقہ کار ہوسکتا ہے۔ (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری).

گردے کی بیماری کے لیے Cistanche پر کلک کریں۔

آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری(ADPKD) انسانوں میں اکثر جینیاتی بیماریوں میں سے ایک ہے۔ یہ نیفران کے تمام حصوں کو متاثر کرنے والے ایک سے زیادہ رینل سسٹس کی ترقی پسندانہ ترقی کی خصوصیت ہے۔ دیگر مظاہر میں جگر اور لبلبہ میں سسٹوں کی تشکیل کے ساتھ ساتھ انٹراکرینیل اینیوریزم اور قلبی نقائص شامل ہیں۔ اے ڈی پی کے ڈی (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری)عام طور پر ادھیڑ عمر کے آخر تک گردوں کی بیماری کے اختتامی مرحلے کی طرف بڑھنے کے ساتھ گردوں کی ناکامی کا باعث بنتا ہے۔

ADPKD کا تقریباً 85 فیصد (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری)معاملات PKD1 میں تغیرات سے وابستہ ہیں۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)جین یہ PKD1(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)جین بڑا ہے، 54 kb تک پھیلا ہوا ہے، اور 46 exons پر مشتمل ہے۔ یہ 14۔ انسانی PKD1 اور پولی سسٹین{11}} اظہار کا عام اور ADPKD میں تجزیہ کیا گیا ہے۔ (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری)گردے گردوں کی نشوونما کے دوران، پولی سسٹین-1 کو گلومیرولر اور نلی نما اپکلا خلیات میں آسانی سے پتہ چلا ہے (حوالہ 37 اور اس میں حوالہ جات کا جائزہ لیا گیا ہے)۔ عام بالغوں میں، ہم اور دوسروں نے دکھایا ہے کہ PKD1(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)آر این اے اور پروٹین کو جمع کرنے اور ڈسٹل نلیوں میں اعتدال سے کم سطح پر ظاہر کیا جاتا ہے، جبکہ ADPKD میں سطحوں میں اضافہ (~2-گنا) (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری)گردے (22، 39)۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ رینل اپیتھیلیل سسٹوں کی اکثریت میں مستقل یا بڑھا ہوا پولی سسٹین-1 اظہار پایا جاتا ہے، حالانکہ سسٹوں کی ایک اہم اقلیت میں داغ نہیں تھا(29)۔ گردوں کے علاوہ، PKD1(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)اظہار عام طور پر دوسرے بالغ ٹشوز میں وسیع ہوتا ہے، بشمول اپکلا اور غیر اپیتھیلیل سیل اقسام (6,14,18,29,30, 39)۔

200 سے زیادہ مختلف PKD1(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)اتپریورتنوں کو بیان کیا گیا ہے، جن میں سے زیادہ تر حذف کرنا، فریم شفٹ، یا بیہودہ تغیرات ہیں۔ ان کے نتیجے میں پروٹین کی کٹی ہوئی شکلوں کی پیش گوئی کی گئی ہے، جو ایک ایلیل کے غیر فعال ہونے کے ساتھ مطابقت رکھتی ہے۔

تاہم، ایک اہم تناسب ایک غلط فہمی یا ان فریم اتپریورتن ہے جو پورے جین میں پائے جاتے ہیں اور اکثر کسی خاص خاندان کے لیے منفرد ہوتے ہیں (33, 34)۔ جیسا کہ نام کا مطلب ہے، ADPKD (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری)غالب ہے اور منتقل شدہ تبدیل شدہ PKD1(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)ایلیل بیماری پیدا کرنے کے لیے کافی ہے۔ تاہم، ADPKD میں گردوں کے cysts کی فوکل نوعیت (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری)تجویز کرتا ہے کہ PKD1 کے لئے باہمی میکانزم(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)ایک دو ہٹ یا heterozygosity کا نقصان ہوسکتا ہے۔ اس میکانزم کے لیے سپورٹ PKD1 کی کھوج سے حاصل کی گئی۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)cysts کے ایک اہم تناسب سے خلیات میں کلونل سومیٹک تغیرات (3, 21, 32)۔ heterozygosity کے نقصان کا ایک طریقہ کار وسیع پیمانے پر مختلف فینوٹائپ کا سبب بن سکتا ہے جو عام طور پر انفرادی خاندانوں میں دیکھا جاتا ہے۔

ماؤس Pkd1 پر مطالعہ(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)جین PKD1 فنکشن (فنکشنز) کے بارے میں قیمتی بصیرت فراہم کر سکتا ہے کیونکہ انسان اور مورین جین اور جین کی مصنوعات کے درمیان قریبی مماثلت ہے۔ عام نشوونما میں، مورین پی کے ڈی 1 کا اظہار مورولا مرحلے سے اعلیٰ سطح پر ہوتا ہے اور اس کا پتہ تمام نیورل کریسٹ سیل ڈیریویٹوز میں پایا جاتا ہے۔ بشمول بالغ دماغ، aortic arch، cartilage، اور mesenchymal condensation (16, 17)۔ Pkd1 کو حذف کرنے کے لیے نشانہ بنائے گئے ہم جنس پرست چوہوں کے رحم میں مرنے اور گردوں اور لبلبے کے سسٹ (2,19,24-26, 40) کی نشوونما کی اطلاع دی گئی ہے۔ ماؤس ماڈل تیار کرنے کی یہ پچھلی کوششیں بدقسمتی سے بعد از پیدائش کے قابل عمل جانور فراہم نہیں کرتی تھیں۔ بہر حال، ان ہوموزائگس Pkd1 اتپریورتی چوہوں میں رینل سسٹ کا ہونا انسانوں میں دو ہٹ میوٹیشنل میکانزم کے مفروضے کے مطابق ہوگا جس میں جراثیم کی تبدیلی اور عام ایلیل کی سومیٹک غیر فعال ہونا شامل ہے۔ تاہم، Pkd1 ٹارگٹڈ ڈیلیٹ کرنے کے لیے چوہوں نے PKD کو بھی دیر سے بالغ ہونے کے باوجود کبھی کبھار جگر اور لبلبے کے سسٹوں کے ساتھ ظاہر کیا، جو کہ ہاپلوانسفیسی یا جین کی خوراک میں کمی کے طریقہ کار کی حمایت کرتا ہے۔ مزید یہ کہ، heterozygosity یا haploinsufficiency کا نقصان ADPKD کا واحد طریقہ کار نہیں ہوسکتا ہے۔ (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری)روگجنن. درحقیقت، یہ میکانزم PKD1 کے مستقل یا بہتر اظہار کے ساتھ مختلف ہیں(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)انسانی رینل سسٹوں کی اکثریت میں دیکھا جاتا ہے جب تک کہ غیر فعال پروٹین تیار نہ ہوں۔ پائیدار یا بڑھے ہوئے PKD1 اظہار کی یہ تلاش اس سوال کو جنم دیتی ہے کہ کیا فنکشن یا اوور ایکسپریشن کا فائدہ آپریٹ ہو سکتا ہے۔ Pkd1 گین آف فنکشن پیتھوجینیٹک میکانزم کی چھان بین کرنے کے لیے، ہم نے ایک مورین Pkd1 بیکٹیریل مصنوعی کروموسوم (Pkd1-BAC) کو الگ تھلگ اور اس کی خصوصیت کی ہے جسے بعد میں Pkd1 کے ہدف کے اظہار کے لیے Escherichia coli میں ہم جنس دوبارہ ملاپ کے ذریعے تبدیل کیا گیا تھا۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)خاص طور پر گردوں کے لیے۔ ہم تین ٹرانسجینک لائنوں کی تیاری کی اطلاع دیتے ہیں جنہوں نے مختلف سطحوں پر Pkd1 ٹرانسجن کا اظہار کیا۔ تمام چوہوں نے تولیدی طور پر انسانی ADPKD کے ساتھ متعدد مماثلتیں ظاہر کیں اور گردوں کی شکل اور فنکشنل تبدیلیوں کی تیز رفتار ترقی کے ساتھ مستقل طور پر ابتدائی آغاز تیار کیا اور درمیانی عمر تک گردوں کی ناکامی سے مر گیا۔ اس کے علاوہ، موجودہ مطالعہ ایک ان ویوو میکانزم کی وضاحت کرتا ہے جس کے ذریعے Pkd1 اس PKD فینوٹائپ میں ثالثی کر سکتا ہے۔ یہ چوہے PKD کے پہلے ماڈل کی نمائندگی کرتے ہیں جو آرتھولوجس PKD1 کے واحد رینل اوور ایکسپریشن کے ذریعہ تیار کیا گیا ہے۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)جین

مواد اور طریقے

Pkd1 پر مشتمل BAC کلون کی تنہائی(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)لوکس بیکٹیریل ہوسٹ اسٹرین E. coli DH10B (RecA؛ RecBC) سے Pkd1-BAC کلون ایک 129Sv ماؤس pBelo11BAC لائبریری (ریسرچ جینیٹکس) سے الگ تھلگ تھے۔ BAC سپر پولز کی اسکریننگ PCR کے ذریعے درج ذیل پرائمر کے ساتھ کی گئی: 5 علاقے، 5-CTG ATGAGTTCTGCCATGGATG-3 (فارورڈ Pkd1 exon 1) اور 5-CTGCCA GCCAATGCCATAGTCAC-3 (ریورس Pkd1 exon 1); اور 3 علاقے، 5-TCG GCCCTAGCGTCTGCAGCC-3 (پی کے ڈی 1 ایکسون 39 کو آگے بڑھانا) اور 5-TCCAGTCC CACCTACAAGCCAAC-3 (ریورس Pkd1 exon 40)۔ دونوں پروردن کے لئے ایک مثبت کلون کی نشاندہی کی گئی اور اس کا معیاری جیل اور پلسڈ فیلڈ جیل الیکٹروفورسس (PFGE) پر تجزیہ کیا گیا جس کے بعد سدرن بلوٹنگ ہوئی۔ سدرن بلاٹ تجزیہ کے لیے، سات ماؤس Pkd1 پروبس کو ڈیزائن کیا گیا ہے: جینومک ایکسون 1 (516 bp؛ نیوکلیوٹائڈز [nt] 1 سے 516؛ NCBI الحاق نمبر U70209)، جینومک ایکسون 2-3 (220 bp)، جینومک ایکسون {{{ 31}} (8,479 bp), cDNA exon 15-20 (1,724 bp; nt 6455 to 8179), cDNA exon 25-34 (1,315 bp; nt 9415 to 10730), cDNA exon 36-45 ( 1,655 bp؛ nt 10963 سے 12618)، اور جینومک ایکسون 45-46 (1,640 bp) (16)۔ اس murine Pkd{53}}BAC کے BAC داخل کرنے والے انتہاپسندوں سمیت کئی خطوں کو بھی ترتیب دیا گیا ہے اور اس بات کی تصدیق کی گئی ہے کہ وہ انسانی PKD1 جین اور متصل خطوں کے لئے آرتھولوگس ہیں۔

نتائج

SBPkdl کی پیداوار(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1) rAc-BAC بذریعہ ہم جنس دوبارہ ملاپ۔ اس بات کا تعین کرنے کے لیے کہ آیا صرف Pkd1 فنکشن کا فائدہ ADPKD پیدا کرنے کے لیے کافی ہے۔ (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری)فینوٹائپ، ہم نے سب سے پہلے BAC ویکٹر 129/Sv لائبریری میں مکمل Pkdl جین پر مشتمل ایک جینومک کلون کو الگ تھلگ کیا۔ اس لائبریری کو PCR نے Pkd1 جین کے لیے پرائمر کے دو سیٹوں کے ساتھ اسکرین کیا تھا جو 5'end پر exon 1 اور 3'end (تصویر 1) کی طرف exon 39 سے 40 تک پھیلا ہوا تھا۔ Pkd1 جین کے لیے ایک مثبت BAC کلون کی نشاندہی کی گئی جس میں پورے ملحقہ Tsc2 جین کا جسم شامل تھا۔ اس بات کو یقینی بنانے کے لیے کہ جینومک ڈھانچہ endogenous Pkd1 سے مماثل ہے Pkd1 داخل کی خصوصیت تفصیل سے کی گئی تھی۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)129/Sv ماؤس سٹرین کا جین جس سے داخل کیا گیا تھا اور C57BL/6J انبریڈ سٹرین سے۔ BAC میں Pkd1 لوکس کے جینومک نقشے اور جنوبی دھبے کے تجزیہ کے ذریعہ ان نسلی تناؤ میں، چار پابندی والے انزائم ہضم اور سات تحقیقات کے ساتھ جو پورے Pkdl جین کو ڈھانپتے ہیں، دوبارہ ترتیب کے بغیر ایک جیسے دکھائی دیتے ہیں (تصویر 1)۔ اس BAC میں ایک ~121-kb insert شامل ہے جس میں -37 kb upstream اور -39 kb Pkd1 کے نیچے کی ترتیب(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)الیکٹروفورسس اور ترتیب کے ذریعہ طے شدہ جین۔

اس Pkd1-BAC کلون کو E.coli میں یکے بعد دیگرے دو ہم جنس دوبارہ ملاپ کے واقعات کے ذریعے تبدیل کیا گیا تھا۔ پی کے ڈی 1(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)cDNA نقشے پر 2355 پوزیشن پر ایک ناول EcoRI سائٹ بنانے کے لیے نیوکلیوٹائڈ (G سے A) کی جگہ لے کر جین کو exon 10 میں ٹیگ کیا گیا تھا۔ یہ خاموش نقطہ اتپریورتن Pkd1 کو ممتاز کرنے کے لیے تیار کیا گیا تھا۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)اینڈوجینس اصل سے BAC کا جین اور نقل۔ اس کے علاوہ، ہم نے SBM (c-Myc سے منسلک) یا SBF سے پہلے سے شناخت شدہ "SB" گردوں کے اپکلا سے متعلق مخصوص عناصر کا فائدہ اٹھاتے ہوئے Pkd1-BACgene کے 5'ریگولیٹری عناصر کو تبدیل کر دیا ہے۔ fos) گردوں تک اظہار کو محدود کرنے کے لیے ٹرانس جین کی تعمیر (36,38) (تصویر 2a)۔

اس نئے SBPkd1TAc-BAC کو Notl کے ساتھ ہضم کیا گیا، جو SB عناصر کے فوراً اوپر کی طرف واقع ایک منفرد سائٹ ہے، اور Tsc2 جین باڈی کے اندر ClaI، Tsc2 ریگولیٹری عناصر اور جین کے نصف حصے کو تراش کر Tsc2 خارجی اظہار کی کمی کو یقینی بناتا ہے۔ تمام ٹشوز میں اور پروکاریوٹک بی اے سی ویکٹر کی ترتیب (تصویر 1 اور 2) کو ہٹانا۔ یہ 70-kb Notl-Clal لکیری ٹکڑا الگ تھلگ کیا گیا تھا، صاف کیا گیا تھا، اور oocyte microinjection (36) کے لیے مقدار درست کیا گیا تھا۔

SBPkd1rAc ٹرانسجینک چوہوں کی پیداوار اور تجزیہ۔ چار ٹرانسجینک بانی جو SBPkd1rAc ٹرانسجن کی متعدد کاپیاں لے کر مسلسل PKD تیار کرتے ہیں۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری). جنوبی تجزیہ کے ذریعہ طے شدہ چار SBPkdlrAc بانی چوہوں سے، تین SBPkd1rAG ٹرانسجینک لائنیں ٹرانسجن کی دو سے نو کاپیوں کے ساتھ قائم کی گئیں (تصویر 2b)۔ ان لائنوں میں ٹرانسجین سالمیت کی خصوصیت کی نگرانی 5'، اندرونی، اور 3' تحقیقات کے ساتھ کی گئی تھی جیسا کہ تصویر 2b میں نمائندہ مثالوں سے دکھایا گیا ہے۔ ٹرانسجینک لائنوں کا انکشاف 5'"SB" پروب ایک بینڈ کے ساتھ 10.9 kb پر ہوتا ہے جو کہ SBPkd1rAc ٹرانس جین کو ہیڈ ٹو ٹیل واقفیت میں ضم کیا جاتا ہے اور 3'probe a 7.1-kb بینڈ کے ساتھ ظاہر ہوتا ہے۔ (تصویر 2b)۔ اس کے علاوہ، اندرونی تحقیقات نے EcoRI داخل کرنے والی سائٹ کی وجہ سے ٹرانسجن کے 9{17}}kb endogenous Pkd1 بینڈ کے ساتھ ساتھ 6{20}}kb اور 2{22}}kb بینڈ کا بھی پتہ لگایا Exon 10 میں (تصویر 2b)۔ ان چوہوں میں جینومک اوورلیپنگ ڈھانچے کے تجزیہ کی بنیاد پر ٹرانسجن کی مکمل کاپیاں تھیں۔

Pkd1(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)بالغ SBPkdlrAc ٹرانسجینک چوہوں میں فنکشن کا فائدہ۔ مختلف اعضاء میں SBPkdlrAG transgene اور Pkd1 جین کے اظہار کی تحقیقات کی گئیں۔ ٹرانسجن اور/یا اینڈوجینس جین سے ٹرانسکرپٹ کی سطحوں کی مقدار کا تعین ناردرن بلاٹ تجزیہ (تصویر 3 اے) کے ذریعے کیا گیا تھا۔ جیسا کہ توقع کی گئی تھی، ٹرانسجن اور اینڈوجینس جین ٹرانسکرپٹس ایک جیسی لمبائی (14.2 kb) کی تھیں۔ کنٹرول GAPDH اظہار کی بنیاد پر، تمام SBPkd1TAG ماؤس لائنوں کے گردوں نے اسی عمر کے بالغ گردوں (n=3) میں عام Pkdl کی سطح کے مقابلے میں ٹرانسکرپٹ اظہار میں مسلسل اضافہ کیا تھا۔ مختلف ٹرانسجینک لائنوں کے لیے رینل ٹرانسجین اور اینڈوجینس ایکسپریشن نے رینل اینڈوجینس Pkd1 لیولز (تصویر 3a) کے اوپر 2- سے 15- گنا کی حد ظاہر کی ہے۔ خاص طور پر، ٹرانسجینک لائن 39 (n {{11}) }) زیادہ Pkd1 دکھایا(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)لائنوں 3(n=3) اور 41 (n =4) سے لیولز۔ مزید برآں، Pkd1 ایکسپریشن لیولز جن کی پیمائش ناردرن بلاٹ تجزیہ کے ذریعے کی گئی ہے ان سے تعلق رکھتے ہیں جو ریئل ٹائم PCR کے ذریعے exons 1 اور 2 میں پرائمر استعمال کرتے ہوئے حاصل کیے گئے ہیں (تصویر 3b)۔

ٹرانسجن ایکسپریشن لیول کی مقدار کا تعین خاص طور پر ریئل ٹائم پی سی آر اور نیم مقداری RT-PCR کے ذریعے بالغ عمر میں تین ٹرانسجینک لائنوں میں 5'غیر ترجمہ شدہ خطے (B، -گلوبین پروموٹر) اور Pkd1 کے exon 2 میں پرائمر استعمال کرکے کیا گیا تھا۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)(تصویر 3b)۔ ٹرانسجینک چوہوں میں SBPkdlrAc اظہار کا موازنہ S16 رائبوسومل پروٹین جین پروڈکٹ سے اندرونی معیار کے طور پر کیا گیا تھا۔ نیم مقداری RT-PCR امپلیفیکیشن کے لیے استعمال ہونے والی شرائط لکیری حد کے اندر تھیں۔ ریئل ٹائم پی سی آر اور نیم مقداری RT-PCR کے ذریعہ ٹرانسجین اظہار نے مسلسل اور خاص طور پر دیگر اعضاء (تصویر 3b اور c) کی نسبت تمام ٹرانسجینک لائنوں کے گردے میں سب سے زیادہ اظہار ظاہر کیا۔ انفرادی نمونے کے لیے گردوں کے اظہار کی سطح استعمال ہونے والی کسی بھی سراغ رسانی تکنیک کے ساتھ دوبارہ پیدا کی جا سکتی تھی۔ Pkd1 کی بلند ترین سطح(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)ٹرانسجین رینل ایکسپریشن لائن 39 اور 41 کے لیے ماپا گیا تھا۔ یہ مانیٹر کرنے کے لیے کہ آیا Pkd1 میں اضافہ ہوا ہے(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)ٹرانسجین یا اینڈوجینس جین کے نتیجے میں اظہار، تین ٹرانسجینک لائنوں سے چوہوں کے ایک ہی گروپ کا موازنہ رینل پی کے ڈی 1 ٹرانسجن ایکسپریشن اور رینل پی کے ڈی 1 کل (ٹرانسجین اور اینڈوجینس) اظہار کے لیے ریئل ٹائم پی سی آر کے ذریعے کیا گیا۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ لائن 3 کے نسبت 39 اور 41 لائنوں نے ظاہر کیا کہ Pkdl ٹرانسجن رینل ایکسپریشن میں اضافہ Pkd1 کل رینل ایکسپریشن سے ملتا جلتا یا اس سے اوپر تھا، جو ٹرانسجن کی طرف اشارہ کرتا ہے جو اس حوصلہ افزائی اظہار کے لیے خاص طور پر ذمہ دار ہے۔ مختلف اعضاء میں (بشمول دل، پھیپھڑے، دماغ، جگر، لبلبہ، اور تلی)، SBPkd1rAg ٹرانسجن نے بہت کمزور اظہار دکھایا جو کبھی کبھار تلی اور پھیپھڑوں میں پایا جاتا ہے، دوسرے اعضاء میں بہت کم سے ناقابل شناخت اظہار کے ساتھ (تصویر 3b)۔ ریئل ٹائم پی سی آر کے ذریعہ کوانٹیفیکیشن نے گردے کے اظہار (تصویر 3c) کی نسبت ایکسٹرا رینل ٹشوز میں ٹرانسجن ایکسپریشن کی 1،000- گنا نچلی سطح کو ظاہر کیا۔ SBPkdlrA ٹرانسجن کے "SB" ریگولیٹری عناصر نے ترجیحی گردوں کے اظہار کو عطا کیا؛ اس مخصوص اعضاء کی تقسیم کا تعین بھی اس وقت کیا جاتا تھا جب سی-مائک (SBM) اور c-fos (SBF) (36، 38) سے منسلک ٹرانسجینز میں استعمال کیا جاتا تھا۔

C-myc، Pkd1 کا ایک بہاو اثر کرنے والا(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)SBPkdlrAc چوہوں میں سگنلنگ راستے۔ SBPkdlrAg ٹرانسجینک چوہوں کے انٹرا سیلولر پیتھوجینک میکانزم کے بارے میں بصیرت حاصل کرنے کے لئے، ہم نے اگلا انسانی ADPKD میں c-myc ڈی ریگولیشن کے اپنے پچھلے مشاہدے کی بنیاد پر c-myc گردوں کے اظہار کی سطح کی نگرانی کرنے کی کوشش کی۔ (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری)گردے(22)۔گردوں کا تجزیہ تینوں ٹرانسجینک لائنوں 3(n =4)، 39(n =7)، اور 41 (n=4) کے ساتھ ساتھ کنٹرول سے کیا گیا تھا۔ (n=4)۔جیسا کہ تصویر 3d میں دکھایا گیا ہے، اسی طرح کی عمر کے چوہوں کو کنٹرول کرنے کے سلسلے میں SBPkd1TAG چوہوں میں endogenous c-myc کا کافی اظہار ہے۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ کچھ SBPkd{12}c گردوں میں c-myc اظہار کی سطح۔ خاص طور پر لائن 39، رینل c-myc اظہار کے ذریعہ تیار کردہ PKD SBM ٹرانسجینک ماؤس ماڈل میں مشاہدہ کے مقابلے کی سطح تک پہنچ گئی۔

SBPkd1raG چوہوں میں PKD کی طرح گردوں کی بے ضابطگییں۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری). To characterize the phenotype caused by the transgene expression, gross and histologic examinations were undertaken on transgenic kidneys. Adult kidneys from all transgenic lines were affected bilaterally. Kidneys contained numerous cortical cysts that varied from microscopic to macroscopic in size(Fig.4a and b). SBPkdl-AG kidneys were pale, a typical finding in PKD. On histologic examination, all transgenic founder mice and progenies (n =25;n>ہر لائن کے لیے 6) نے ایک سے زیادہ نلی نما (T) اور گلوومیرولر سسٹ (G) (Fig.4d،f، اور g) تیار کیے ہیں۔ سسٹس کارٹیکل اور میڈولری علاقوں کے ساتھ ساتھ پیپلا (تصویر 1) سے نلیاں جمع کرتے ہوئے نلیوں میں دیکھے گئے۔ 4d اور e)۔ ٹرانسجینک چوہوں نے نلی نما اپیتھیلیل ہائپرپلاسیا (تیر کا نشان) ظاہر کیا جس میں سسٹک اور نان سسٹک دونوں نلیاں اور بار بار ہائپر ٹرافی (تصویر 4 جی اور ایچ) شامل ہیں، لیکن انفرادی چوہوں کے درمیان شدت مختلف تھی۔ انٹرسٹیشل فبروسس (F)، پیریواسکولر لیمفائیڈ انفلٹریٹس، اور پروٹیناسیئس کاسٹ (P) کثرت سے دیکھے گئے (تصویر 4d اور e)۔

بڑھے ہوئے Pkd1 کی لوکلائزیشن سائٹ کو مزید واضح طور پر بیان کرنے کے لیے(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)گردوں میں اظہار، ہم نے پہلے استعمال شدہ exon 36-45 تحقیقات کا استعمال کرتے ہوئے سیٹو ہائبرڈائزیشن کی (16)۔ ہائبرڈائزیشن سگنل کو خاص طور پر اپیتھیلیل سیل استر کے سسٹ اور ہائپر پلاسٹک نلیوں کے ساتھ ساتھ گلوومیرولر سسٹوں کے لیے مقامی بنایا گیا تھا۔ اس کے علاوہ، نان سسٹک یا قدرے پھیلی ہوئی نلیوں کے اپیتھیلیم پر کچھ سگنل دیکھے گئے، جو ممکنہ طور پر مستقبل میں سسٹک تبدیلیوں (تصویر 4i اور j) سے گزرنے کے لیے پہلے سے طے شدہ نلیوں کی نشاندہی کرتے ہیں۔

رینل ہسٹولوجک تجزیہ بھی پیدائش کے وقت ٹرانسجینک چوہوں پر کیا گیا تھا {7}}، اور P45(n=3) ایک ہی عمر کے گروپ (n 2 سے 4) کے منفی لیٹر میٹس کے مقابلے میں۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ تمام نوزائیدہ ٹرانسجینک چوہوں نے منفی لیٹر میٹس (تصویر 4k اور l) کو کنٹرول کرنے کے سلسلے میں نلی نما اور گلوومیرولر پھیلاؤ ظاہر کیا، جو اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ SBM چوہوں اور ADPKD میں مشاہدہ کے مطابق utero میں گردوں کی بے ضابطگیوں کا آغاز ہوتا ہے۔ (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری)مریض. نلی نما اور گلومیرولر پھیلاؤ ترقی پسند عمر کے ساتھ سائز اور تعداد میں بڑھتا گیا۔ P35 تک، ٹرانسجینک چوہوں نے زیادہ شدید ہائپرپالسیا اور گلوومیرولوسکلروسیس کے ثبوت دکھائے۔ SBPkd1TAG چوہوں میں گردوں کے جسمانی افعال میں ردوبدل۔ تمام ٹرانسجینک چوہوں کے رینل فزیولوجک فنکشنز PKD جیسی خصوصیات دکھاتے ہیں۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری)، جب کہ غیر ٹرانسجینک لیٹر میٹس نے کبھی بھی بیماری پیدا نہیں کی۔ پیدائش کے چند مہینوں کے اندر، متاثرہ جانوروں میں دائمی گردوں کی ناکامی پیدا ہوگئی۔ ان جانوروں کو رینل فنکشنل پیرامیٹرز کے لیے سیرم اور پیشاب کی سطح، بلڈ یوریا نائٹروجن (BUN) اور کریٹینائن، پیشاب کی osmolality، پیشاب کی پروٹین، اور آئن کے اخراج (ٹیبل 1) کی پیمائش کے ذریعے مانیٹر کیا گیا تھا۔ کنٹرول کے مقابلے میں تین لائنوں کے تمام چوہوں نے توجہ مرکوز کرنے والے نقائص ظاہر کیے، ADPKD میں ایک عام تلاش، اور اس کے نتیجے میں پیشاب کی BUN، کریٹینائن، پروٹین، اور آئرن کی تعداد میں کمی ظاہر ہوئی۔ SDS-PAGE (تصویر 5) کے ذریعہ پیشاب کے نمونوں پر پروٹینوریا کے لئے ہر لائن سے ٹرانسجینک SBPkd1TAG کے بانی اور اولاد (n 6) کی معیار کی نگرانی کی گئی۔ 2 ماہ سے زیادہ عمر کے چوہوں نے غیر منتخب پروٹینوریا ظاہر کیا جو عمر کے ساتھ ترقی کرتا ہے۔ اس کے علاوہ، سیرم BUN اور سیرم کریٹینائن کی سطح میں اضافہ کیا گیا تھا، جو گردوں کی کمی کو ظاہر کرتا ہے (ٹیبل 2)۔ چونکہ دائمی گردوں کی ناکامی عام طور پر ہیماٹولوجک پیرامیٹرز میں تبدیلی کا باعث بنتی ہے، ان کی جانچ SBPkd1TAG 3 سے 14 ماہ کی عمر کے ٹرانسجینک چوہوں میں کی گئی تھی (ٹیبل 2)۔ یہ ٹرانسجینک چوہے خون کی کمی کا شکار تھے جیسا کہ خون کے سرخ خلیوں کی تعداد میں نمایاں کمی سے ظاہر ہوتا ہے، جس میں ہیموگلوبن اور ہیماٹوکریٹ معمول کی نصف سطح تک پہنچ چکے ہیں۔ دیگر سرخ خون کے خلیات کے پیرامیٹرز، جیسے ریٹیکولوسائٹس کی فیصد، غیر متاثر ہوئے، جیسا کہ توقع کی جاتی ہے جب گردوں کی خرابی کی وجہ سے متاثر ہوتا ہے۔ یہ جانور مستقل طور پر 5 سال کی عمر میں گردوں کی ناکامی سے مرتے تھے۔{12}}.8 ماہ کی عمر (n 42) ٹرانس جینک لائن 39 اور بعد کی عمر میں، 14۔{17}}.1 ماہ (n 20) اور 11۔ .

انجیر. 1. ایک مورین Pkd1-BAC کی منصوبہ بندی کی نمائندگی اور تفصیلی پابندی کے نقشے کا تجزیہ۔

Pkd1 کے جینومک DNA عمل انہضام کے نمونے۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)-BAC کا موازنہ Pkd1 سے کیا گیا۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)129Sv اور C57Bl/6J انبریڈ ماؤس سٹرین میں لوکس۔ زیادہ تر مورین Pkd1 جین پر مشتمل سات تحقیقات تیار کی گئیں:

(a) exon 1، (b) exon 2-3، (c) exon 7-15، (d) exon 15-20، (e) exon 25-34، (f) exon 36-45، اور (g) exon 45-46، جینومک Pkd1 پر a سے g کا لیبل لگا ہوا ہے۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)نمائندگی اور انفرادی دھبوں سے زیادہ۔

Pkd1-BAC اور murine Pkd1 سے جینومک ڈی این اے کے پابندی ہضم (BamHI، EcoRI، HindIII، اور KpnI) کے بعد جنوبی دھبے کا تجزیہ(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)لوکی نے تمام سات تحقیقات کے ساتھ ایک جیسے نمونے دکھائے۔ M, HindIII مارکر; 129, 129/Sv; C57, C57Bl/6J۔

بحث

یہاں، ہم ایک murine Pkd1-BAC کی تنہائی اور خصوصیت کی اطلاع دیتے ہیں۔ یہ Pkd1(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)جین کو ٹیگ کیا گیا تھا اور ریگولیٹری عناصر کو خاص طور پر گردوں کے اظہار کو ہدف بنانے کے لیے دو یکے بعد دیگرے یکے بعد دیگرے واقعات کے ذریعے تبدیل کیا گیا تھا۔ اس ناول SBPkd1TAG جین کے ساتھ پیدا ہونے والے ٹرانسجینک چوہوں نے Pkd1 اظہار میں 2- سے 15-گنا اضافہ دکھایا اور PKD کی مخصوص رینل مورفولوجیکل تبدیلیوں کو تولیدی طور پر تیار کیا۔ درمیانی عمر میں گردوں کی کمی ظاہر ہوتی ہے، اور چوہے گردوں کی ناکامی سے قبل از وقت مر جاتے ہیں۔ ہمارے نتائج یہ بھی بتاتے ہیں کہ اس فینوٹائپ کے لئے ذمہ دار Pkd1 اوور ایکسپریشن میکانزم Vivo میں c-myc کو چالو کرنے کے سگنلنگ کے ذریعہ ثالثی کیا گیا ہے۔ یہ مطالعہ یہ ظاہر کرتا ہے کہ گردوں میں murine Pkd1 کا فنکشن PKD رینل فینوٹائپ پیدا کرنے کے لیے کافی ہے۔ چونکہ murine Pkd1 جین کی نقل نہیں کی گئی ہے جیسا کہ یہ انسانوں میں ہے (27)، ہم نے براہ راست ایک BAC کلون کی شناخت اور الگ تھلگ کیا ہے جس میں پورا Pkd1 جین موجود تھا۔ 129/Sv murine Pkd{11}}BAC کی مکمل خصوصیات، دو دیگر نسلی ماؤس سٹرین کے ساتھ بالواسطہ موازنہ، Pkd1 لوکس کی سالمیت کی تصدیق کرتا ہے۔ Pkd1-BAC انسرٹ میں Pkd1 جین سے 37 سے 39 kb اپ اسٹریم اور ڈاون اسٹریم سیکونسز شامل ہیں۔ ہمارے تجزیے نے یہ ظاہر کیا کہ اس BAC میں Pkd1 جین ایک حقیقی مورائن جنگلی قسم کا لوکس تھا جو مزید مطالعات کے لیے کام کر سکتا ہے۔ اگرچہ ADPKD میں سسٹ کی تشکیل کے مضبوط ثبوت موجود ہیں۔ (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری)عام PKD1 کے سومٹک غیر فعال ہونے کے بعد heterozygosity کے نقصان کا نتیجہ ہوسکتا ہے۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)ایلیل (3، 21، 32)، سسٹک نلی نما اپیتھلیم (22، 29) میں پائیدار یا اس سے بھی بڑھے ہوئے پولی سسٹین-1 اظہار کے لیے بھی تجویز کردہ ثبوت موجود ہیں۔ مؤخر الذکر مشاہدے سے یہ سوال پیدا ہوتا ہے کہ کیا Pkd1 فی se کا حد سے زیادہ اظہار cystogenesis کی کافی قربت کی وجہ ہے۔ انسانی PKD1 والے ٹرانسجینک چوہوں میں(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)، TSC2، RAB 26، NTHL1، اور SLC9A3R2 جین، چوہوں کی صرف ایک اقلیت نے سسٹ تیار کیے اور کسی میں بھی ٹرانسجن کی 30 کاپیاں ہونے کے باوجود جوانی میں قابل شناخت ٹرانسجن اظہار نہیں تھا۔ ان ٹرانسجینک چوہوں میں، سیسٹوجنیسیس میں Pkd1 اوور ایکسپریشن کے لیے واضح کردار قائم کرنا مشکل تھا۔ ہمارا ماڈل مختلف ہے، کیونکہ اکیلے Pkd1 کی دو سے نو جنگلی قسم کی کاپیاں، بغیر کسی مربوط جین کے، ٹرانسجینک چوہوں میں ضم کی گئی تھیں۔ چونکہ Pkd1 جین مختلف اعضاء یا بافتوں میں ضروری کام کرتا ہے، جیسا کہ Pkd1 جین کے خاتمے کے ساتھ متعدد چوہوں کے لیے بیان کیا گیا ہے، Pkd1 کا نظامی حد سے زیادہ اظہار اضافی الجھنے والے اثرات کا باعث بن سکتا ہے۔ نتیجتاً، ہم نے Pkd1 کے فنکشن کے حصول کے کردار کو ایک نقطہ نظر کا استعمال کرتے ہوئے حل کیا ہے جو Pkd1 کو خاص طور پر گردوں کو نشانہ بناتا ہے۔ ہم جنس بحالی کے ذریعہ، ہم نے سب سے پہلے Pkd1 اپ اسٹریم ریگولیٹری ریجن کو "SB" رینل ریسٹریٹڈ ریگولیٹری عناصر کے ساتھ تبدیل کیا ہے، اس طرح جوانی میں Pkd1 کے لیے عام طور پر دیکھے جانے والے جین کے اظہار میں کمی کے ساتھ ساتھ ممکنہ ثانوی فیڈ بیک لوپ ریگولیشن (36، 38) کو روکا جاتا ہے۔ دوسرا، ہم نے مورین Pkd1 transgene (Pkd1TAG) کو ایکسون 10 میں خاموش نقطہ کی تبدیلی کے ساتھ نشان زد کیا ہے لیکن اس بات کو یقینی بنانے کے لیے ایپیٹوپ ٹیگ نہیں ڈالا کہ محفوظ ساخت اور سالمیت کے ساتھ مکمل طور پر فعال "وائلڈ ٹائپ" پروٹین تیار کیا جائے گا۔ اس ترمیم شدہ BAC سے، ایک SBPkd1TAG ٹکڑے کو Tsc2 جین اور BAC ویکٹر سے دور صاف کیا گیا تاکہ Tsc2 جین کی مداخلت کو روکا جا سکے، جو سسٹک فینوٹائپ (8, 20, 28) کو بھی آمادہ کر سکتا ہے اور ساتھ ہی اس کے روکنے والے اثر سے بچنے کے لیے پروکاریوٹک تسلسل (5)۔

چار مختلف SBPkd1TAG ٹرانسجینک بانی چوہے اور تین آزاد لائنیں مخصوص رینل Pkd1 کے ساتھ تیار کی گئیں۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)- بہتر اظہار۔ ان ٹرانسجینک چوہوں میں فینوٹائپ کی مکمل رسائی خاص طور پر حیران کن ہے۔ SBPkd1TAG کے بانی اور ماؤس لائنوں نے ADPKD کے ساتھ مشترکہ طور پر متعدد فزیو پیتھولوجک خصوصیات کا اشتراک کیا۔ (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری). ان میں پرانتستا، میڈولا، اور گلومیرولی میں سسٹوں کی نشوونما کے ساتھ ساتھ اپکلا ہائپرپلاسیا، بیچوالا فبروسس، اور فوکل بیچوالا سوزش شامل ہیں۔

کیونکہ پی کے ڈی(پولی سسٹک گردے کی بیماری)فینوٹائپ کو تمام مختلف ٹرانسجینک بانی چوہوں میں مستقل طور پر دیکھا گیا اور ماؤس جینوم میں ٹرانسجن کا انضمام ایک بے ترتیب رجحان ہے، فینوٹائپ کروموسومل پوزیشن کے اثر سے نہیں ہو سکتا بلکہ صرف Pkd1 اظہار میں اضافہ سے ہو سکتا ہے۔ درحقیقت، تمام لائنوں میں Pkd1 ٹرانسجن کے اظہار کو گردوں پر پابندی کا مظاہرہ کیا گیا تھا، جیسا کہ پہلے "SB" عناصر (36، 38) کے ذریعے ریگولیٹ کیے جانے والے دوسرے ٹرانسجنز کے لیے مشاہدہ کیا گیا تھا۔ مزید یہ کہ ، یہ بڑھتا ہوا Pkd1 اظہار ٹرانسجن کی وجہ سے ہوا تھا نہ کہ بالواسطہ endogenous Pkd1 ایکٹیویشن کی وجہ سے۔ لہذا، ہمارے نتائج واضح ثبوت فراہم کرتے ہیں کہ جنگلی قسم کے فنکشنل Pkd1 کے فنکشن کا فائدہ ایک سے زیادہ رینل سسٹ پیدا کر سکتا ہے۔ اہم بات یہ ہے کہ یہ SBPkd1TAG چوہے پہلا ماؤس ماڈل تشکیل دیتے ہیں جو انسانی PKD1 جین کے ماؤس آرتھولوگ کے واحد اوور ایکسپریشن سے پیدا ہوتا ہے۔

SBPkd1TAG چوہے یہ ظاہر کرتے ہیں کہ Pkd1(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)اوور ایکسپریشن رینل سیسٹوجنیسیس کا ایک بنیادی پیتھوجینیٹک طریقہ کار ہے۔ اہم بات یہ ہے کہ گردوں میں ٹرانسجن کے اظہار کی بلند ترین سطح فینوٹائپ کی بڑھوتری اور شدت کے ساتھ منسلک دکھائی دیتی ہے۔ ہم نے یہ بھی پایا کہ SBPkd1TAG فینوٹائپ کی ترقی میں Pkd1 اوور ایکسپریشن Vivo میں c-myc کو چالو کرنے کا امکان ہے۔ ممکنہ طور پر، یہ ایکٹیویشن پولی سسٹین-1 سی ٹرمینل ٹیل کے ذریعے بھی براہ راست ہو سکتی ہے جو پروٹولیٹک کلیویج اور نیوکلیئر ٹرانسلوکیشن (7) سے گزر رہی ہے۔ چونکہ بالغ چوہوں میں c-myc کے بڑھے ہوئے گردوں کے اظہار کو PKD کو آمادہ کرنے کے لیے دکھایا گیا تھا، اس لیے Pkd1 سگنلنگ پاتھ ویز کے ایک بڑے بہاو اثر کے طور پر c-myc کو سپورٹ کرنا انتہائی مطابقت رکھتا ہے۔ یہ نتیجہ تمام انسانی ADPKD کے گردوں میں بڑھے ہوئے c-myc اظہار کی ہماری پچھلی دریافتوں سے بھی منسلک ہے۔ (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری)تجزیہ کیا گیا (22) مجموعی طور پر، یہ نتائج بتاتے ہیں کہ c-myc Pkd1 کا ایک اہم ثالث ہے۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)cystogenesis. Pkd1 کے فائن آف فنکشن ماڈل کے ہمارے نتائج، مورائن Pkd1 ہیپلوانسفینسی اور فنکشن کے نقصان کے ساتھ، اس بات کی نشاندہی کرتے ہیں کہ Pkd1 کی کوئی بھی خرابی سیسٹوجنیسیس (2، 19، 23–26، 31، 40) کا باعث بن سکتی ہے۔

شدید Pkd1(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)Pkd1 کی طرف سے حوصلہ افزائی چوہوں میں عدم توازن(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)ایبلیشن یا ٹرانسجینک اوور ایکسپریشن رینل سسٹس کے ابتدائی آغاز اور تیزی سے بڑھنے کا سبب بنتا ہے اور نلیوں کے اعلی تناسب کو متاثر کرتا ہے۔ اس کے برعکس، ایک ہلکا Pkd1 عدم توازن جیسے haploinsufficiency زیادہ فوکل سسٹ کے ساتھ PKD کی سست ترقی کا باعث بنی۔ متضاد پولی سسٹین-1 ڈس ریگولیشن کے ذریعہ اسی طرح کے فینوٹائپ کی ظاہری متضاد ترقی کی وضاحت عام نتیجہ سے کی جا سکتی ہے، یعنی ایک رشتہ دار پروٹین کی حراستی کا عدم توازن جو ایک فعال پولی سسٹین ملٹی پروٹین کمپلیکس کی تشکیل یا کام کو تبدیل کر سکتا ہے۔ ایک ساتھ لے کر، ہمارے نتائج اور دوسرے تفتیش کاروں کی دلیل ہے کہ ADPKD میں سسٹ کی تشکیل کا طریقہ کار (آٹوسومل غالبپولی سسٹک گردے کی بیماری)تین پیتھوجینیٹک میکانزم سے پیدا ہونے کا امکان ہے: فنکشن کا فائدہ، فنکشن کا نقصان، اور جین کی خوراک کے اثرات۔ ناول SBPkd1TAG چوہے رینل سیسٹوجنیسیس کا ایک طاقتور ماڈل تشکیل دیتے ہیں جو PKD کی پیتھوفیسولوجی میں اہم بصیرت فراہم کر سکتا ہے۔(پولی سسٹک گردے کی بیماری), Pkd1(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)سگنل کی نقل و حمل کے راستے، اور بات چیت کرنے والے شراکت دار۔ اس ماڈل کا مطالعہ Pkd1 ملٹیمیرک کمپلیکس کے اندر عام پروٹین کے توازن کو بحال کرنے کے لیے نئی علاج کی حکمت عملیوں کی ترقی کا باعث بھی بن سکتا ہے۔

حوالہ جات

1. بلوئن، ایم جے، ایچ بیوچیمین، اے رائٹ، میڈی پیپے، ایم سوریٹ، اے ایم۔ بلیو بی ناکاموٹو۔ C.-N, Ou, G. Stamatovannopoulos, and M. Trudel 2000. سکل سیل کی بیماری کی جینیاتی اصلاح: ٹرانسجینک ماؤس ماڈلز کا استعمال کرتے ہوئے بصیرت۔ نیٹ میڈ. 6:177-182۔

2. بولٹر، C.، S.Mulroy، S.Webb، S. Fleming، K. Brindle، اور R. Sandford. 2001. Pkd1 کی ہدفی رکاوٹ کے ساتھ چوہوں میں قلبی، کنکال، اور گردوں کے نقائص(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)gene.Proc. ناٹل اکاد۔ سائنس USA 98:12174-12179۔

3. Brasier, JL, اور EPHenske.1997. Loss of theپولی سسٹک گردے کی بیماری(PKD1) رینل سسٹ سیلز میں کروموسوم 16p13 کا خطہ سسٹ روگجنن کے لیے نقصان کے فنکشن ماڈل کی حمایت کرتا ہے۔ جے کلین تفتیش 99:194-199۔

4. Burn, TC, TD Connors, WRDackowski, LRPetry, TJVan Raay, JM Millholland, M. Venet, G.Miller, RM Hakim, GMLandes, KW Klinger, F. Qian, LF Onuchic, T.Watnick, GG Germino, and NA Doggett.1995. جینومک ترتیب کا تجزیہآٹوسومل غالب پولی سسٹک گردے کی بیماری(PKD1) جین لیوسین سے بھرپور ریپیٹ کی موجودگی کی پیش گوئی کرتا ہے۔ ہم مول جینیٹ 4:575-582۔

5. چڈا، کے، جے میگرام، کے. رافیل، جی ریڈیس، ای لیسی، اور ایف کوسٹنٹینی۔1985۔ ٹرانسجینک چوہوں کے erythroid خلیات میں غیر ملکی گلوبین جین کا مخصوص اظہار۔ فطرت 314:377-380۔

6. Chauvet, V, F. Qian, N. Boute, Y. Cai, B.Phakdeekitacharoen, LF Onuchic, T.Attie-Bitach, L.Guicharnaud, O.Devuyst,GG Germino, and M.-C. گبلر۔2002۔ PKD1 کا اظہار(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)اور PKD2(پولی سسٹک گردے کی بیماری 2)انسانی جنین میں اور گردے کی عام نشوونما کے دوران نقلیں اور پروٹین۔ ایم۔ جے پاتھول 160:973-983۔

7. Chauvet, V., X. Tian, ​​H.Husson, DHGrimm, T.Wang, T.Hiesberger, P. Igarashi, AM Bennett, O. Ibraghimov-Beskrovnava, S. Somlo, and MJ Caplan.2004. مکینیکل محرک پولی سسٹین-1 C ٹرمینس کے کلیویج اور نیوکلیئر ٹرانسلوکیشن کو دلاتے ہیں۔ جے کلین تفتیش کریں۔ 114:1433-1443۔

8. Cheadle,JPMP Reeve,JR Sampson, and DJ Kwiatkowski.2000. تپ دق سکلیروسیس میں سالماتی جینیاتی ترقی۔ ہم جینیٹ۔107:97-114۔ 9. کنسورشیم، EPKD1993. کروموسوم 16 پر تپ دق سکلیروسیس جین کی شناخت اور خصوصیت۔ سیل 75:1305-1315۔

10. کنسورشیم، EPKD1994. پولی سسٹک کڈنی ڈیزیز 1 جین ایک 14 kb ٹرانسکرپٹ کو انکوڈ کرتا ہے اور کروموسوم 16 پر نقل شدہ علاقے کے اندر ہوتا ہے۔ سیل 77:881-894۔

11. کنسورشیم، IPKD1995۔ پولی سسٹک گردے کی بیماری: PKD1 کی مکمل ساخت(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)جین اور اس کا پروٹین۔ سیل 81:289-298۔

12. Couillard, M., R. Guillaume, N. تانجی، وی داگاتی، اور ایم ٹروڈیل۔2002۔ پولی سسٹک گردے کی بیماری میں c-myc- حوصلہ افزائی apoptosis FasL Fas تعامل سے آزاد ہے۔ کینسر ریس 62:2210-2214۔

13. De Paepe, ME, اور M. Trudel.1994. ٹرانسجینک SAD ماؤس: انسانی سکیل سیل گلوومیرولوپیتھی کا ایک ماڈل۔ کڈنی انٹ۔ 46:1337-1345۔

14. Geng, L., Y. Segal, B.Peissel, N.Deng, Y. Pei,F. Carone,HGRennke, AM Glücksmann-Kuis, MC Schneider, M. Ericsson, STReeders, and J.Zhou. 1996. پولی سسٹین کی شناخت اور لوکلائزیشن، PKD1(پولی سسٹک گردے کی بیماری 1)جین کی مصنوعات. جے کلین تفتیش کریں۔ 98:2674-2682۔

15. Gong, S., XWYang, C. Li, and N.Heintz.2002. بیکٹیریل مصنوعی کروموسوم (BACs) کی انتہائی موثر ترمیم جس میں نقل کی R6Ky اصل پر مشتمل ناول شٹل ویکٹر کا استعمال کیا گیا ہے۔ جینوم ریس 12؛1992-1998۔