رینل فائبروسس ڈویلپمنٹ میں گروتھ فیکٹر β (ٹی جی ایف-β) کو تبدیل کرنے کا مرکزی کردار

رابطہ: آڈری ہو واٹس ایپ/ ایچ پی: 0086 13880143964 ای میل:audrey.hu@wecistanche.com

حصہ اول: ٹی جی ایف میں ہیومن پرائمری رینل فائبروبلاسٹ کا کردار-β1-ثالثی فائبروسس-نقالی آلات

سیونگ ہی ہوانگ، یون-می لی اور ایٹ ال۔

1۔ تعارف

گردے کی فائبروسسگردے کی بے شمار ترقی پسند بیماریوں کا آخری عام راستہ، ماورائے خلوی میٹرکس (ای سی ایم) پروٹین کی پیداوار میں اضافہ، میٹرکس کی تنزلی میں کمی، خلیات میٹرکس تعامل کی خرابی، رہائشی خلیوں کی تبدیلی اور سوزش خلیات کی دراندازی کی خصوصیت ہے۔نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β(ٹی جی ایف-β) ایک کثیر العمل مدھم پیپٹائیڈ ہے جو حیاتیاتی عمل جیسے خلیات کے پھیلاؤ، تفریق اور مدافعتی جوابات کو منظم کرتا ہے [1]۔ متعدد فائبروجینک عوامل میں سے، ٹی جی ایف-βنمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β) مرکزی کردار ادا کرتا ہے اور اس کا سوزش مخالف اثر ہے۔ ٹی جی ایف β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)کمی چوہے بڑے پیمانے پر سوزش سے مر جاتے ہیں. ٹرانسجینک چوہوں نے ٹی جی ایف β1 کا زیادہ اظہار کیا(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)عملا گردے کے فائبروٹک پیتھالوجی کی ترقی سے محفوظ ہیں، بنیادی طور پر اس کی سوزش مخالف سرگرمی کے ذریعے [2]. ٹی جی ایف β کی ناپاک اور سوزش مخالف خصوصیات(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)ٹی جی ایف β کے علاج کے اطلاق کے بارے میں دو دھاری تلواریں ہیں(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)روک تھام. ٹی جی ایف β میں رکاوٹ ڈالنے کی قابل ذکر کوششیں کی گئی ہیں(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)کی پیش رفت میں رکاوٹ ڈالنے کے لئے عملگردےفائبروسس[3]. اگرچہ اس سے نمٹنے کے لیے بہت سے طریقوں سے استفادہ کیا گیا ہےگردےفائبروسس، فی الحال دستیاب ادویات کا جائزہ لینے کے لئے ایک تجرباتی ماڈل مثالی نہیں ہے۔

سیستانچے جڑی بوٹی روکتا ہےگردے کی بیماریاں

عمومی طور پر، جانوروں کے مطالعے فارماکوکینیٹکس اور منشیات کی افادیت کی پیشگوئی کرنے میں پری کلینیکل ٹیسٹ میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ تاہم جانوروں اور انسانوں کے درمیان مختلف اختلافات موجود ہیں جو ہمیں جانوروں پر مبنی منشیات کی افادیت اور حفاظتی جانچ کی درستگی پر سوال اٹھانے پر مجبور کرتے ہیں۔ پچھلی رپورٹوں کا انحصار منشیات کی ترقی کے دوران پری کلینیکل جانوروں کے مطالعے پر ہے تاکہ منشیات کی نیفروٹوکسکٹی اور حفاظت کا جائزہ لیا جاسکے۔ جانوروں کی گردے کی کارکردگی انسانی گردوں سے دوگنا زیادہ ہے۔ لہذا، منشیات کو انسانوں کے مقابلے میں جانوروں میں زیادہ تیزی سے میٹابولڈ کیا جاتا ہے، جس سے جانوروں کے مطالعے کا استعمال کرتے ہوئے منشیات کے زہریلے ٹیسٹ کے نتائج کو واضح کرنا مشکل ہو جاتا ہے۔ مزید برآں جانوروں کے تجربات کے نتائج کو انسانوں میں منشیات کے ردعمل کی پیشگوئی کے لیے استعمال نہیں کیا جا سکتا کیونکہ جانوروں کے جسمانی افعال مختلف ہوتے ہیں۔ جانوروں پر مبنیگردے کی فائبروسسماڈلز کو انسان کو دوبارہ تیار کرنے میں مشکلات کاگردے کی فائبروسس; لہذا، موجودہ رکاوٹوں پر قابو پانے اور منشیات کی دریافت کے پلیٹ فارموں کو بہتر بنانے کے لئے تحقیق جاری ہے [5]۔

آرگن آن اے چپ (او سی) ٹیکنالوجی ان مسائل کو حل کرنے کے لئے ایک نئے تصور کے طور پر ابھری ہے۔ یہ پلیٹ فارم موجودہ خامیوں کو مدنظر رکھتے ہوئے ڈیزائن کیا گیا تھا، اور اس نے نیفرالوجی کے شعبے میں بہت بڑا وعدہ ظاہر کیا ہے [6]۔ اس کے علاوہ، او سی ماڈل تجرباتی جانوروں کے نمونوں کے متبادل کے طور پر بڑی صلاحیت رکھتے ہیں، بین الاقسام اختلافات کا حل فراہم کرتے ہیں، اور جانوروں کے ظلم اور اخلاقی مباحثوں کو ختم کرنے میں مدد کر سکتے ہیں [7]. کچھ ان ویٹرو ماڈل ز ہیں جو بیک وقت انڈوتھیلیئل اور ایپیتھیلیئل خلیات کے ساتھ بنیادی گردے کے فائبروبلاسٹس کا استعمال کرتے ہیں، جو اہم خلیات ہیںگردہفائبروسس. ہر سیل کا کردارفائبروسسکا الگ سے مطالعہ کیا جا رہا ہے۔ تاہم خلیوں کے تعامل سے متعلق محدود علم موجود ہے۔

موجودہ مطالعے میں، ہم نے ترقی کیفائبروسسانسانی بنیادی فائبروبلاسٹس کا استعمال کرتے ہوئے آلات کی نقل کرنا۔ ہم نے تصدیق کی کہ ٹی جی ایف β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)علاج کے مختلف اثرات ہیںگردے کی فائبروسسماڈل. قابل ذکر بات یہ ہے کہ فائبروبلاسٹس اثر ی خلیوں کے طور پر اہم کردار ادا کرتے ہیں، فائبروٹک مائیکرو انوائرمنٹ کے حامی کی تشکیل کو فروغ دیتے ہیں اور نمو کے عوامل اور سائٹوکینز کو خارج کرتے ہیں۔ لہذا، اس نئے طریقہ کار کی بنیاد پر، فائبروبلاسٹس گردے کی بیماری کے مطالعے کے لئے ایک مثالی سیل ماڈل نظام فراہم کر سکتا ہے۔ ہم نے جائزہ لیا کہ کیا فائبروٹک گردے کی بیماری سے ماخوذ فائبروبلاسٹس تین جہتوں (3ڈی) میں تہذیب یافتہ خلیوں کی سالمیت کو متاثر کرتے ہیں۔ آخر میں، ہم ایک اصولی مطالعہ پیش کرتے ہیں جو انسانی صلاحیت کو ظاہر کرتا ہےگردے کی فائبروسس-انسان کے جواب کی پیشن گوئی کے لئے ایک ماڈل کے طور پر آلات کی نقل کرناگردے کی فائبروسس.

سیستانچے کے اثرات: گردے کے انفیکشن کا علاج

2. نتائج

2.1.ٹی جی ایف کی طرف سے الفا ہموار پٹھوں ایکٹن (اے-ایس ایم اے) اور کیراٹن-8 (کے آر ٹی-8) کی شناخت β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)ایچ کے-2 سیل میں

ابتدائی مرحلے میں، ہم نے معلوم مارکرز کا معائنہ کیافائبروسساور دو جہتی (2ڈی) ثقافتوں میں سائٹو اسکیلٹن۔ میسنچیمل ٹرانزیشن (ای ایم ٹی) مارکر اور کے آر ٹی 8 کی سطح وں کو سائٹواسکیلٹن مارکر کے طور پر فائبروسس اور ٹیوبلر ایپیتھیلیئل کے α-ایس ایم اے اظہار کا تخمینہ لگانے کے لئے ایمیونوفلوریسنٹ سٹیننگ مضامین انجام دیئے گئے تھے۔ ایمیونوفلوریسینس سٹیننگ سے پتہ چلا کہ α ایس ایم اے کا اظہار اصل میں کمزور تھا اور کے آر ٹی 8 کی سطح مونولیئر ایچ کے-2 ایپیتھیلیئل خلیوں میں زیادہ تھی۔ ٹی جی ایف کی جانب سے فلوریسینس کی شدت میں کوئی خاص تبدیلی نہیں کی گئی β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)(5 این جی/ایم ایل) یا 24 گھنٹہ (تصویر 1) کے لئے ایچ کے-2 ایپیتھیلیئل خلیوں کا مخصوص انہیبیٹر علاج۔

شکل 1. ایمیونوفلوریسینس سے پتہ چلتا ہے کہ الفا-ایس ایم اے اور کیراٹن-8(کے آر ٹی 8) کا اظہار ٹی جی ایف-β1 کے علاج سے برقرار رکھا گیا تھا۔(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)یا ایچ کے-2 خلیوں میں انہیبیٹر۔(الف) الفا ایس ایم اے اور (بی) سی سی کے-8 کے اظہار کا ٹی جی ایف β1 کی جانب سے ایچ کے 2 سیل پر کوئی اثر نہیں پڑا۔(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)(5این جی/ایم ایل) یا انہیبیٹر۔ خلیات اصل میں 1×10° فی کنویں (اے سی) غیر علاج کنٹرول اور (ڈی ایف) کی کثافت پر چڑھایا گیا تھا 5این جی / ایم ایل ٹی جی ایف β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)یا (جی-آئی)10 μM انہیبیٹر (ایس بی 431542) 24 ایچ کے لئے اور 4 فیصد پیرافارمالڈیہائیڈ کے ساتھ مستحکم۔ اس کے بعد خلیوں پر 20 منٹ کے عوض اینٹی α ایس ایم اے اور اینٹی سائٹوکیراٹن-8 سے داغدار کیا گیا۔ سیل نیوکلیائی کی شناخت کے لئے ہوچسٹ ڈائی ایچ 33342 کے ساتھ کو سٹیننگ کی گئی۔ مائیکرو گراف میں پیمانہ بار 200 ام کی نشاندہی کرتا ہے۔

سیستانچے پاؤڈر گردے کے کام کو بہتر بناتا ہے

2.2. کے آر ٹی 8 اظہار میں ٹی جی ایف β1 کی کمی(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)ایک چپ پر

اس کے بعد، ہم نے تھری ڈی کلچرڈ ایچ کے-2 میں α-ایس ایم اے اور کے آر ٹی 8 کے اظہار کی سطح اور ٹی جی ایف-β1 کے ساتھ علاج کیے جانے والے جی ایف پی انسانی نال وین انڈوتھیلیئل سیلز (ایچ یو وی ای سی) کی کل لمبائی کا جائزہ لیا۔(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)اور ایک مخصوص انہیبیٹر. اس کو پورا کرنے کے لئے، ہم نے سب سے پہلے دو سیل اقسام، ایچ کے-2 ایپیتھیلیئل سیلز، اور جی ایف پی-ایچ یو وی ای سی پر مشتمل ایک ٹشو چپ پیٹرن قائم کیا۔ تعمیر کی تصدیق کے بعد، ہم نے ٹی جی ایف β1 کے ساتھ ٹشو چپ کو بے نقاب کیا(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)(5 این جی/ایم ایل) یا 24 گھنٹہ کے لئے ایک مخصوص انہیبیٹر (10 ام ایس بی 431542)۔

جیسا کہ فگر 2اے سی میں دکھایا گیا ہے، α ایس ایم اے کے اظہار کو ٹی جی ایف β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)یا مخصوص انہیبیٹر علاج. تاہم کے آر ٹی 8 کے اظہار کو دو سیل قسم کی مشترکہ ثقافت والی چپ میں کم کر دیا گیا۔ مزید برآں، ٹی جی ایف ß1 انہیبیٹر کے اضافے سے کے آر ٹی 8 کے اظہار میں اضافہ ہوا۔

ہم نے ٹی جی ایف β1 کی طرف سے تھری ڈی ٹیوبلر کیپیلری جیسے نیٹ ورک کی تشکیل کا جائزہ لیا(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)ایچ یو وی ای سی میں علاج، جیسا کہ انڈوتھیلیئل خلیات خود ساختہ طور پر تھری ڈی ٹیوبلر کیپیلری جیسا نیٹ ورک بنا سکتے ہیں۔ ہمارے ثقافتی حالات کے مطابق موٹی لکیروں کی تشکیل میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ تاہم ٹی جی ایف β1 میں کیپیلری جیسی پتلی لائنوں میں اضافہ کیا گیا۔(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)جی ایف پی-ہوویکس کا علاج کیا۔ ٹی جی ایف β1 کے معاملے میں(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)تھری ڈی کلچرڈ چپ پر انہیبیٹر ٹریٹمنٹ، موٹی اور موٹی لائنوں کی کل لمبائی نے ٹی جی ایف β1 کا الٹا رجحان ظاہر کیا(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)علاج. غیر علاج شدہ کنٹرول گروپ کے مقابلے میں موٹی لائن کی لمبائی میں اضافہ دیکھا گیا۔ ٹی جی ایف β1 کے بعد جی ایف پی-ایچ یو وی ای سی میں موٹی لائن کے قطر میں بھی ایسا ہی نمونہ دیکھا گیا تھا۔(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)علاج اور انہیبیٹر علاج. جی ایف پی-ایچ یو وی ای سی کا قطر ٹی جی ایف β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)علاج لیکن دونوں کنٹرول اور ٹی جی ایف β1 کے مقابلے میں انہیبیٹر کی طرف سے لائن کی موٹائی سے قطع نظر اضافہ(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β). موٹی لائن کی کل لمبائی اور قطر میں غیر علاج شدہ کنٹرول اور ٹی جی ایف β1 علاج کے مقابلے میں ٹی جی ایف β1 انہیبیٹر علاج سے ڈرامائی طور پر اضافہ کیا گیا تھا۔ قابل ذکر بات یہ ہے کہ حاصل کردہ نتائج نے ٹی جی ایف β میں چھوٹے جہازوں کی کثافت میں اضافے کا اشارہ دیا ہے۔(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)ان کے غیر علاج شدہ ہم منصبوں کے مقابلے میں علاج شدہ گروپ۔ اس کے برعکس ٹی جی ایف β1 میں موٹے برتنوں کی کثافت(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)علاج گروپ غیر علاج کنٹرول گروپ (شکل 2ڈی، ای) میں اس سے کم تھا۔

شکل 2. کے آر ٹی 8 کا اظہار ایچ کے-2 اور ایچ یو وی ای سی کی کل لمبائی اور قطر۔(الف) ایمیونوفلوریسینس سے پتہ چلتا ہے کہ α ایس ایم اے کے اظہار کو برقرار رکھا گیا تھا اور ٹی جی ایف β1 کے علاج سے کے آر ٹی 8 کے اظہار میں ڈرامائی طور پر کمی واقع ہوئی تھی۔(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)ایچ کے-2 میں. سیلوں کو 5این جی/ایم ایل ٹی جی ایف-β1 کے ساتھ پلیٹ کیا گیا تھا اور متحرک کیا گیا تھا(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)یا 24 گھنٹہ کے لئے 10 μm انہیبیٹر (ایس بی 431542) اور 4٪پیرافارمالڈیہائیڈ کے ساتھ مستحکم۔ خلیات کو 20 منٹ کے عوض اینٹی α ایس ایم اے اور اینٹی سائٹوکیراٹن-8 سے داغدار کیا گیا تھا۔ سیل نیوکلیائی کی شناخت کے لئے ہوچسٹ ڈائی ایچ 33342 کے ساتھ کو سٹیننگ کی گئی۔ α ایس ایم اے (اے-سی) کے اظہار میں کوئی تبدیلی نہیں کی گئی تھی لیکن ایچ کے ٹو سیلز میں کے آر ٹی 8 (ڈی ایف) اور ایچ یو وی ای سی (جی-آئی) اظہار میں جی ایف پی کو ٹی جی ایف-β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)(5 این جی/ایم ایل) اور انہیبیٹر (بی، سی)۔ ایچ یو وی ای سی کی کل لمبائی میں پتلے برتن میں اضافہ کیا گیا لیکن موٹے برتن کو ٹی جی ایف β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β). پتلے اور موٹے دونوں برتنوں میں قطر بڑھا دیا گیا تھا۔ ان نتائج کو انہیبیٹر ایس بی 431542 (ڈی، ای) نے الٹ دیا۔ خرد گراف میں پیمانہ بار 100 μm کی نشاندہی کرتا ہے۔*پی<><><0.001 versus="" the="" control=""><><0.001 versus="" the="" tgf-β1="" group.="" each="" value="" represents="" three="" technical="" replicates="" of="" each="" of="" the="" three="" biological="" replicates.="" statistical="" significance="" of="" the="" length="" compared="" to="" the="" non-treated="" cells="" is="" represented="" in="" the="" graph.="" thin="" vessels="" mean="" a="" length="" shorter="" than="" 50="" um="" and="" thick="" vessels="" represent="" a="" length="" longer="" than="" 50="">

سیستانچے کس چیز کے لئے استعمال کیا جاتا ہے: گردے کی دائمی بیماریوں کا علاج

2.3. ٹی جی ایف β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)کثیر کمپارٹمنٹ ساخت کے ساتھ چپ کی تین سیل اقسام کو متاثر کرتا ہے

ٹی جی ایف β1 کا مطالعہ کرنے کے لئے(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)مجوزہ تھری ڈی چپ کے جوابات، ہم نے ہر کمپارٹمنٹ پر الگ سے ایمیونو سٹیننگ کی (تصویر 3)۔ اس تجزیے میں بنیادی انسانی گردے کے ریشے دار دھماکوں کا استعمال کیا گیا۔ نمونوں کا تجزیہ ایف اے سی ایس کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا اور فیبروبلاسٹ مارکر اینٹی باڈی کے لئے مثبت ہونے کی تصدیق کی گئی تھی۔ ٹی جی ایف β1 کے ساتھ تین خلیات کی اقسام کی انکیوبیشن کے بعد(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)24 گھنٹہ کے لئے α ایس ایم اے اور کے آر ٹی 8 کے اظہار کا جائزہ لینے کے لئے مدافعتی داغ کا مظاہرہ کیا گیا۔ اے ایس ایم اے کے اظہار کو ٹی جی ایف-1 علاج کے ذریعے اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا اور ٹی جی ایف β1 کے ساتھ مخالف نتائج دیکھے گئے تھے(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)انہیبیٹر علاج. اس کے برعکس کے آر ٹی 8 کے اظہار کو ٹی جی ایف β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)اور ٹی جی ایف β کا مخالف جواب دکھایا(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)انہیبیٹر (شکل 4اے-سی)

شکل 3. بناوٹ اور تجرباتی شیڈول کے آلہ منصوبہ بند مظاہرے کے ساتھ نمونہ تصویر۔(الف) اوپر کی دو تصاویر لے آؤٹ دکھاتا ہے۔ بائیں تصویر میں ڈیوائس کی مجموعی طور پر ٹاپ ڈاؤن تصویر دکھائی گئی ہے۔ نیچے کی تصاویر کراس سیکشن دکھاتا ہے۔ منصوبہ بند منظر مائع رہنماوں کی جہتوں کی تفصیل. (بی) یہ اعداد و شمار تجرباتی شیڈول کی وضاحت کرتا ہےفائبروسس-نقل کرنے والے آلات. ہر کنویں کے لئے چار مرحلہ لوڈنگ کا عمل۔ ہر ہائیڈروجیل پیٹرننگ ایریا کا محل وقوع، نیز ٹاپ ڈاؤن اور آئسومیٹرک کراس سیکشن میں میڈیا کی جگہ۔ (1) ہائیڈروجیل 1 کا کل 1.5 یو ایل بے ساختہ مرکزی چینل میں رہنمائی کرتا ہے۔ (2) مرکزی چینل ہائیڈروجیل کے ٥ یو ایل سے بھرا ہوا ہے۔ (3) آبی ذخائر کے فرش پر مجموعی طور پر ١٠ یو ایل ہائیڈروجیل ٣ کا نمونہ ہے۔ (4) میڈیا کی کل 200μL تقسیم کی جاتی ہیں۔ سرخ پیمانہ بار=9 ملی میٹر.

جیسا کہ فگر 4ڈی جی میں دکھایا گیا ہے، ٹی جی ایف β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)جی ایف پی-ایچ یو وی ای سی میں علاج۔ تاہم ٹی جی ایف β1 میں موٹی لائن کی موٹائی میں کمی کی گئی۔(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)ہوویکس کا علاج کیا۔ ایچ یو وی ای سی میں پتلے اور موٹے برتنوں کے لئے قطر اوسطا کم کردیا گیا تھا۔ ٹی جی ایف β1 کے معاملے میں(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)تھری ڈی کلچرڈ چپ پر انہیبیٹر ٹریٹمنٹ، موٹی اور موٹی لائنوں کی کل لمبائی نے ٹی جی ایف β1 علاج کے برعکس رجحان ظاہر کیا۔ مزید برآں، موٹی لائن کی لمبائی میں غیر علاج شدہ کنٹرول گروپ کے مقابلے میں اضافہ کیا گیا تھا۔

شکل 4. تھری ڈی کلچرڈ ایچ کے-2 اور ایچ یو وی ای سی ز میں بنیادی گردے کے فائبروبلاسٹس کے ساتھ تبدیلی۔کل خلیات کو 5×10° فی 3ڈی چپ کی کثافت پر چڑھایا گیا تھا اور 5 این جی/ایم ایل ٹی جی ایف-β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)یا 24 گھنٹہ کے لئے 10 μm انہیبیٹر (ایس بی 431542) اور 4٪پیرافارمالڈیہائیڈ کے ساتھ مستحکم۔ (اے) تھری ڈی چپ میں موجود سیلوں پر اینٹی oα ایس ایم اے اور اینٹی سائٹوکیراٹن-8 کے داغ تھے۔ α ایس ایم اے (اے-سی) کے اظہار میں اضافہ کیا گیا اور کے آر ٹی 8 (ڈی ایف) کے اظہار میں ٹی جی ایف β1 (5 این جی/ایم ایل) نے نمایاں کمی کی۔ ایچ یو وی ای سی کی کل لمبائی؛ پتلی برتنوں میں ڈرامائی طور پر اضافہ کیا گیا اور ٹی جی ایف ß1 کی طرف سے موٹے برتنوں میں کمی کی گئی۔(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)(ڈی، ای) پتلے اور موٹے برتنوں (ایف، جی) کے لئے قطر کم کر دیا گیا تھا۔ ان نتائج کو انہیبیٹر ایس بی ٤٣١٥٤٢ نے الٹ دیا۔ خرد گراف میں پیمانہ بار 100 μm کی نشاندہی کرتا ہے۔*پی<><0.01，and **=""><0.001 versus="" the="" control=""><><><0.001 versus="" the="" tgf-β1="" group.="" each="" value="" represents="" three="" technical="" replicates="" of="" each="" of="" the="" three="" biological="" replicates.="" thin="" vessels="" mean="" a="" length="" shorter="" than="" 50="" um="" and="" thick="" vessels="" represent="" a="" length="" longer="" than="" 50="">

2.4.ٹی جی ایف-81 سوزش ثالث اور نمو کے عوامل کو موڈول کرتا ہے

اس کے بعد، ہم نے سپرناٹنٹ میں سوزش کے سائٹوکینز اور نمو کے عوامل کی تحقیقات کیں؛ آئی ایل 1β، ایف جی ایف-2، ٹی جی ایف-β2(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)، اور ٹی جی ایف β3(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)تھری ڈی کلچرڈ چپس میں پروٹین کا رطوبڈرامائی طور پر 2ڈی فائبروبلاسٹ کی اچھی طرح سے ثقافت کے مقابلے میں زیادہ تھا، حالانکہ ان میں خلیات کی کل گنتی یکساں تھی۔ تاہم ٹی جی ایف β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)سطحیں ایک جیسی تھیں، کیونکہ 2ڈی یا تھری ڈی کلچرڈ ماڈلز کے ساتھ ٹی جی ایف β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)(شکل 5اے-ای) . خاص طور پر انسانی پرائمری رینل فائبروبلاسٹس سے ایف جی ایف-2 کا اجراء 20.9 ± 0.4 پی جی/دن/5× 10° 2ڈی مونو پرت دار ثقافت کے خلیات اور 3094.8± 0.2 پی جی/دن/5× 10° سیل بشمول ایچ یو وی ای سی اور غیر علاج شدہ کنٹرول میں تھری ڈی کلچرڈ چپ کے ایچ کے-2 تھا۔ ٹی جی ایف-2 کی جانب سے ایف جی ایف-2 کا رطوبت β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)2ڈی کلچر کے لئے 31.0±0.2پی جی/دن/5×10°سیل اور 3683.9± 0.8 پی جی/دن/5×10° سیل تھری ڈی کلچرڈ چپ کے لئے تھے۔ 2ڈی مونولیئر کلچر میں ایف جی ایف-2 پروٹین کی پیداوار میں یہ اضافہ ٹی جی ایف β1 کی جانب سے تھری ڈی کلچرڈ چپ ماڈل میں اضافے سے متوازی تھا(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)علاج (شکل 5بی) .

شکل 5. 2ڈی اور تھری ڈی کلچرڈ ماڈلز کا موازنہ رینل فائبروسس کی نقل کرنے والے پلیٹ فارمز کے طور پر کیا جاتا ہے۔خلیات کو 5×10°فی 2ڈی کنویں یا تھری ڈی چپ کی کثافت پر چڑھایا گیا تھا اور 5این جی/ایم ایل ٹی جی ایف-β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)یا 24 گھنٹہ کے لئے 10 ام انہیبیٹر (ایس بی 431542)۔ بنیادی انسانی گردے کے ریبروبلاسٹس کو 2ڈی کلچرڈ اور تھری ڈی کلچرڈ ماڈل میں استعمال کیا گیا تھا۔ فائبروبلاسٹس کو 8× 10* کی کثافت پر استعمال کیا گیا جس کی ثقافت ایچ یو وی ای سی اور ایچ کے-2 سے کی گئی۔ بنیادی انسانی گردے کے فائبروبلسٹ سے ایچ یو وی ای سی تناسب، یا ایف: ایچ تناسب، تشخیص کے لئے 1:5 تھافائبروسس. ایچ کے-2 خلیات 2×104 کی کثافت پر استعمال کیے گئے تھے۔ سائٹوکینز اور ملٹی پلیکس بیڈ ایمیونواسسے کے ملٹی پلیکس تجزیے کے ذریعے سپرناٹنٹ میں (اے)آئی ایل 1β،(بی)بنیادی فائبروبلاسٹ گروتھ فیکٹر (ایف جی ایف-2) اور (سی ای)ٹی جی ایف بیٹا 1، 2 اور 3 کا پتہ لگایا گیا۔ ہر بار درمیانی ± ایس ای کی نمائندگی کرتا ہے۔<0.05,***><0.001 versus=""><0.01,##><0.001 versus="">(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β).

سیستانچے ٹیوبلوسا کے فوائد: گردے کی بیماریوں کا علاج

مزید برآں، ہم نے آئی ایل 1β، آئی ایل-6، آئی ایل-8 اور ٹی این ایف-α جیسے اشتعال انگیز سائٹوکینز کے ایم آر این اے اظہار کا تخمینہ لگایا۔ نتائج کو انسانی ٹی جی ایف β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)ٹی جی ایف β کی اینٹی انفلیمیٹری پراپرٹی کے طور پر تھری ڈی کلچرڈ چپ میں علاج(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β). ہم نے پایا کہ ایم آر این اے اظہار کو ٹی جی ایف β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)انہیبیٹر (ایس بی 431542) . مزید برآں، آئی ایل-6، آئی ایل-8 اور ٹی این ایف-αwas کے انہیبیٹر ثالثی اظہار کو غیر علاج شدہ کنٹرول (شکل 6 اے ڈی) کے مقابلے میں خاص طور پر ڈاؤن ریگولیٹ کیا گیا ہے۔ ایک فائبروٹک عنصر وی ای جی ایف کی ایم آر این اے سطح میں ٹی جی ایف β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)علاج. وی ای جی ایف کی ایم آر این اے سطح کو ٹی جی ایف β1 انہیبیٹر (فگر 6 ای) نے کم کیا جبکہ ٹی جی ایف β1 کی طرف سے پیدا کردہ فائبروٹک حالات میں اینٹی فائبروٹک اثر کے ساتھ آئی ایل-10 کے ایم آر این اے اظہار میں کمی کی گئی۔ اس کے برعکس، آئی-10 ایم آر این اے اظہار میں ٹی جی ایف β1inhibitor علاج (فگر 6 ایف) کے ذریعے اضافہ کیا گیا تھا۔

شکل 6. ریئل ٹائم پی سی آر تھری ڈی چپ کے مجموعی ایم آر این اے اظہار کو ظاہر کرتا ہے۔خلیات کو 5×10° فی 3ڈی چپ کی کثافت پر چڑھایا گیا تھا اور 5این جی/ایم ایل ٹی جی ایف-β1(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)یا 24 گھنٹہ کے لئے 10 ام انہیبیٹر (ایس بی 431542)۔ تھری ڈی کلچرڈ چپ سے کل آر این اے نکالا گیا۔ ایم آر این اے کا اظہار (اے)آئی ایل-1 β،(بی)ٹی این ایف-α،(سی)آئی ایل-6 اور (ڈی)آئی ایل-8 ٹی جی ایف-β1 کے سوزش مخالف اثرات کی نمائندگی کرتا ہے(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β)علاج. (ای) ایک انجیوجینک عنصر کے طور پر وی ای جی ایف کے اظہار میں اضافہ کیا گیا تھا۔ (ایف) ٹی جی ایف β1 کی جانب سے اینٹی فائبروٹک عنصر کے طور پر آئی ایل-10 کے اظہار میں نمایاں کمی کی گئی۔<><><0.001 versus=""><><><0.001 versus="">(نمو کے عنصر کو تبدیل کرنا β).

حصہ دوم کے لیے یہاں کلک کریں۔