ایپی جینیٹک ریگولیٹر BRD4 چوہے کے گردے میں کیڈیمیم سے متحرک سوزشی ردعمل میں شامل ہے۔

مزید معلومات کے لیے:ali.ma@wecistanche.com

Zhongguo Gong et al

Cistanche tubulosa گردے کی بیماری سے بچاتا ہے، حاصل کرنے کے لیے یہاں کلک کریں۔مصنوعات اور Cistanche DHT

خلاصہ

Cadmium (Cd) کو ایک ممکنہ سوزش پیدا کرنے والے کے طور پر بیان کیا گیا ہے جبکہ بڑھتے ہوئے شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ نامناسب سوزش ایک اہم عنصر ہے۔گردے کی چوٹ. لہذا، Cd-حوصلہ افزائی نیفروٹوکسٹی کے طریقہ کار کو واضح کرنے کے لئے Cd سے متحرک اشتعال انگیز ردعمل پر تحقیق بہت اہمیت کی حامل ہے۔ بروموڈومین پر مشتمل 4(بی آر ڈی 4) ایک اہم ایپی جینیٹک ریگولیٹر ہے جو بہت سے سوزش کی بیماریوں کی نشوونما میں ملوث ہے، لیکن سی ڈی ٹرگرڈ میں اس کے ریگولیٹری کرداراشتعال انگیزجواب واضح ہونا باقی ہے. یہاں، ہم نے پایا کہ Sprague-Dawley چوہوں (2 mg/kg BW, ip, مسلسل 5 دن) اور چوہوں میں Cd کے ساتھ علاجگردے کے سیللائن (NRK{{0}}E, 0–10 μM, 12 h) نے سوزش والی سائٹوکائنز کی نقل کی حوصلہ افزائی کی، جسے JQ1 (BRD4 inhibitor، 25 mg/kg BW، ip) سے کم کیا جا سکتا ہے۔ , مسلسل 3 دن vivo میں؛ 0.5 μM، 12 h in vitro) یا BRD4 چھوٹے مداخلت کرنے والا RNA (siRNA، in vitro)، یہ تجویز کرتا ہے کہ BRD4 Cd سے متحرک اشتعال انگیز ردعمل میں حصہ لیتا ہے۔ اگلا، ہمارے مطالعے نے Cd سے متحرک اشتعال انگیز ردعمل میں BRD4 کے کردار کو واضح کیا۔ BRD4 کی روک تھام نے Cd سے فروغ پانے والے NF-κB نیوکلیئر ٹرانسلوکیشن اور Vivo اور in Vitro میں ایکٹیویشن کو کم کیا۔ Cd نے RelA K310 کی acetylation کی سطح کو بڑھایا اور BRD4 کو Vivo اور in Vitro میں acetylated NF-κB RelA کے ساتھ بائنڈنگ بڑھایا، جسے BRD4 کو روک کر منسوخ کر دیا گیا تھا۔ خلاصہ طور پر، ہمارے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ BRD4 NF-κB سگنلنگ پاتھ وے کی ایکٹیویشن میں ثالثی کرکے اور خود کو چوہے میں acetylated NF-κB RelA کا پابند بنا کر سوزش والی سائٹوکائنز کی Cd سے متحرک نقل میں ملوث ہے۔گردہ،لہذا، BRD4 Cd سے متاثرہ گردوں کی بیماریوں کے لیے ممکنہ علاج کا ہدف ہو سکتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ: بی آر ڈی 4کیڈیمیمگردے کی سوزشسائٹوکائنز NF-κB JQ1

1. تعارف

کیڈمیم (سی ڈی) ایک بھاری دھاتی آلودگی ہے جس میں زیادہ زہریلا اور طویل نصف زندگی ہے۔ صنعتی پیداوار کی ترقی کے ساتھ، ماحولیاتی تحفظ اور انسانی صحت کے لیے Cd آلودگی کے بڑھتے ہوئے خطرے نے تشویش پیدا کر دی ہے (Wang et al., 2020; Horiguchi and Oguma, 2016)۔ جسم کے ذریعے جذب ہونے کے بعد، سی ڈی کثیر اعضاء کو نقصان پہنچاتا ہے اورگردہاہم ہدف کا عضو ہے (Fernando et al., 2020; Zhao et al., 2021)۔ اس سے قبل، ہم نے منظم طریقے سے تصدیق کی کہ آٹوفجی روکنا، آکسیڈیٹیو تناؤ، اور اپوپٹوسس ہم آہنگی سے چوہوں میں سی ڈی کی وجہ سے نیفروٹوکسیٹی میں حصہ ڈالتے ہیں (لیو ایٹ ال۔، 2017؛ وانگ ایٹ ال۔، 2017)۔ سوزش ایک جسمانی ردعمل ہے جو انفیکشن یا چوٹ کے خلاف ایک دفاعی ردعمل کے طور پر کام کرتا ہے، لیکن سی ڈی کی حوصلہ افزائی کے لیے بے قابو اور نامناسب اشتعال انگیز ردعمل نقصان کا سبب بن سکتا ہے جیسے کہ عام ٹشو کو نقصان پہنچانا اور خود بخود مدافعتی امراض کو فروغ دینا (Hossein-Khannazer et al., 2020; al.، 2020)۔ سی ڈی سے متحرک اشتعال انگیز ردعمل قلبی امراض اور جگر کو پہنچنے والے نقصان کو بڑھاتا ہے، یہ تجویز کرتا ہے کہ سوزش سی ڈی میں ثالثی میں اہم کردار ادا کر سکتی ہے۔گردہپیتھولوجیکل عمل (Fagerberg et al.، 2017؛ Almeer et al.، 2019)۔

ایپی جینیٹکس سے مراد غیر DNA ترتیب کی تبدیلیوں کی بنیاد پر جین کے اظہار میں وراثتی تبدیلیاں ہیں، اور ان تبدیلیوں کی الٹ پھیر نئے علاج کے اہداف کی دریافت کے قابل بناتی ہے (وینڈیٹی اور روڈن، 2013)۔ بروموڈومین اور ایکسٹرا ٹرمینل ڈومین (BET) فیملی میں بروموڈومین پر مشتمل 2 (BRD2)، BRD3، BRD4، اور بروموڈومین ٹیسٹس اسپیسیفک (BRDT) شامل ہیں، جو کہ دو بروموڈومینز کی خصوصیت رکھتے ہیں اور ہسٹونز اور غیر ہسٹون (غیر ہسٹون) کے ایسٹیلیٹڈ لائسینز سے منسلک ہوتے ہیں۔ Lochrin et al.، 2014؛ چٹرجی اور بوہمن، 2018)۔ بی ای ٹی پروٹین بہت سے جینوں کے ٹرانسکرپشنل کو ایکٹیویٹر کے طور پر کام کرتے ہیں، اس طرح مختلف پیتھولوجیکل ماڈلز میں سیل سائیکل، سوزش کے ردعمل، آکسیڈیٹیو تناؤ، اور دیگر جسمانی عمل کو منظم کرتے ہیں (Jiao et al., 2020; Wang et al., 2019b)۔ BRD4 خاص طور پر BET پروٹین فیملی کا ایک اچھی طرح سے زیر مطالعہ رکن ہے، اور جمع ہونے والی تحقیقات نے اسے مختلف قسم کے ریگولیٹ کرنے میں ایک نئے ایپی جینیٹک ہدف کے طور پر رپورٹ کیا ہے۔گردے کی بیماریوںبشمول دائمی ورم گردہ، ذیابیطس نیفروپیتھی، اور تجرباتی گردوں کو پہنچنے والے نقصان (زینگ اور زو، 2002؛ مورگاڈو-پاسکول ایٹ ال۔، 2019)۔ BRD4 کے جوہری عنصر-κB (NF-κB) - متعدد بیماریوں میں سوزش کے ردعمل کو منظم کرنے کے لیے منحصر نقل کے عمل میں حصہ لینے کی تصدیق کی گئی ہے (Xu اور Vakoc، 2014؛ Suarez-Alvarez et al.، 2017)۔ BRD4 کو lysine 310 (RelA-K310ac) پر اس کے بروموڈومینز کے ذریعے acetylated RelA (NF-κB subunit، ایک پروٹین کوڈنگ جین) کے ذریعے بھرتی کیا جا سکتا ہے، اس طرح سائکلن پر منحصر کناز 9 (CDK9) کو چالو کیا جاتا ہے اور RNA کو پولیمیریز II کو فاسفوریلیٹ کرتا ہے۔ NF-κB ٹارگٹ جین کی نقل (ہاجمیرزا ایٹ ال۔، 2018)۔ حال ہی میں ہونے والے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ BRD4 inhibitors سوزش کی بیماریوں کے لیے ممکنہ علاج کا اختیار ہو سکتا ہے۔ چوہے کی ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے ماڈلز میں، BRD4 کی روک تھام نے اشتعال انگیز ردعمل کو کم کیا اور مائکروگلیہ کی فعال بحالی کو فروغ دیا (Dey et al.، 2019)۔ اس کے علاوہ، BRD4 کی روک تھام نے یکطرفہ ureteral رکاوٹ کے murine ماڈلز میں تجرباتی گردوں کی سوزش کو منسوخ کر دیا، اینٹی میمبرین بیسل GN، اور Angiotensin II (Suarez-Alvarez et al.، 2017) کے انفیوژن کو۔

Cd کے ممکنہ حامی اشتعال انگیز اثرات اور BRD4 کے سوزش پر ریگولیٹری اثرات کے پیش نظر، ہم نے قیاس کیا کہ BRD4 Cd سے متحرک اشتعال انگیز ردعمل میں ملوث ہے۔ جیسا کہ توقع کی گئی ہے، BRD4 Cd بے نقاب چوہے کے گردے کے ماڈلز میں سوزش والی سائٹوکائنز کی نقل کے عمل میں ثالثی کرتا ہے۔ ہمارا مطالعہ سی ڈی سے متحرک اشتعال انگیز ردعمل میں ایک ممکنہ طریقہ کار کو ظاہر کرتا ہے اور سی ڈی سے متاثرہ نیفروٹوکسائٹی کے علاج میں نئی ​​بصیرت فراہم کرتا ہے۔

2. مواد اور طریقہ

2.1 کیمیکل اور اینٹی باڈیز

کیڈمیم کلورائد (CdCl2, anhydrous, 439800) سگما-Aldrich (Carlsbad, CA, USA) سے خریدا گیا تھا۔ (پلس)-JQ1 (HY-13030) MedChemExpress (Monmouth Junction, NJ, USA) سے حاصل کیا گیا تھا۔ بیو ٹائم انسٹی ٹیوٹ آف بائیو ٹیکنالوجی (شنگھائی، چین، P0027) سے جوہری پروٹین نکالنے کی کٹ خریدی گئی۔ تھرمو فشر سائنٹیفک (میڈیسن، WI، USA) سے ایک موثر کیمیلومینیسینس کٹ (ECL، 32209) اور bicinchonic acid پروٹین پرکھ ریجنٹ (BCA، 23225) حاصل کیا گیا تھا۔ درج ذیل پروٹین کے خلاف بنیادی اینٹی باڈیز استعمال کی گئیں: NF-κB p65 (10745-1- AP)، IL-1 (26048-1-AP)، TNF- (17590-1-AP) سے خریدے گئے تھے۔ پروٹینٹیک گروپ (ووہان، چین)؛ ایکٹین (3700s)، ہسٹون H3 (His3, 4499)، Sirtuin 1 (Sirt1, 8469)، نارمل خرگوش IgG (IgG، 4394) سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی (ڈینورس، ایم اے، یو ایس اے) سے خریدے گئے تھے۔ BRD4 (ab128874)، K (lysine) acetyltransferase 3 (KAT3B/Ep300، ab14984)، NF-κB RelA (acetyl K310) (RelA-K310ac، ab19870)، Alexa Fluor® 488–conjugated donkey (conjugated donkey) تھے۔ Abcam (کیمبرج، UK) سے۔ دوسری اینٹی باڈیز: بکری اینٹی ماؤس آئی جی جی (ایچ پلس ایل) (115-035-003) اور گوٹ اینٹی ریبٹ آئی جی جی (ایچ پلس ایل) (111-035-003) جیکسن امیونو ریسرچ (ویسٹ گروو، PA، USA) سے خریدی گئی تھیں۔ )۔

2.2 جانور اور تجربات

چوبیس Sprague-Dawley چوہے (نر، 6 ہفتے پرانے، 110–120 g) Pengyue Experimental Animal Breeding Co., Ltd (Jinan, Shandong, China) سے خریدے گئے تھے۔ چوہوں کو ماحولیات کے کنٹرول والے کمرے میں خوراک اور پانی تک مفت رسائی کی اجازت دی گئی تھی (24 ± 5 ​​ڈگری، 12 گھنٹے روشنی/تاریک چکر)۔ تجرباتی طریقہ کار جانوروں کے تجربات کے لیے یورپی کمیونٹی کونسل ڈائریکٹیو 2010/63/EU پر لاگو تھے، اور تمام طریقہ کار یانگ زو یونیورسٹی کے جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کمیٹی کے ذریعے منظور کیے گئے تھے۔ موافقت کے ایک ہفتے کے بعد، چوہوں کو تصادفی طور پر چار گروپوں میں تقسیم کیا گیا: (1) کنٹرول گروپ: متعلقہ سالوینٹس (فزیولوجیکل نمکین یا 2-ہائیڈروکسپروپیل- -سائیکلوڈیکسٹرین محلول) کے ساتھ انٹراپریٹونی طور پر انجیکشن لگایا گیا۔ (2) سی ڈی گروپ: سی ڈی سی ایل 2 (2 ملی گرام/کلوگرام جسمانی وزن، جسمانی نمکین میں تحلیل) سی ڈی نشہ ماڈل قائم کرنے کے لیے لگاتار 5 دنوں تک انٹراپیریٹونی طور پر انجیکشن لگایا گیا۔ (3) سی ڈی پلس جے کیو 1 گروپ: سی ڈی نشہ کا ماڈل قائم کرنے کے لیے سی ڈی سی ایل 2 (2 ملی گرام/کلوگرام جسمانی وزن) کو لگاتار 5 دن تک انٹراپیریٹونی طور پر انجکشن لگایا گیا، اور JQ1 (25 ملی گرام/کلوگرام جسمانی وزن، {{24}ہائیڈرو آکسی پروپیل{{) میں تحلیل 25} cyclodextrin محلول) 6-8 دن کو انٹراپیریٹونی طور پر انجیکشن لگایا گیا۔ (4) JQ1 گروپ: JQ1 (25 ملی گرام/کلوگرام جسمانی وزن) 6-8 دنوں میں انٹراپیریٹونی طور پر انجیکشن لگایا گیا۔ چوہوں کے سیرم اور گردے کے ٹشوز میں سی ڈی کے مواد کے اعدادوشمار ٹیبل S1 میں درج کیے گئے تھے، جو سی ڈی کے سامنے آنے والے چوہے کے ماڈلز کے کامیاب قیام کی عکاسی کرتے ہیں۔

8 دن کے علاج کے بعد، چوہوں کو 12 گھنٹے کے روزے کے بعد گہری اینستھیزیا کے تحت سروائیکل ڈس لوکیشن سے ہلاک کر دیا گیا۔ گردے کے ٹشوز کو الگ کر دیا گیا اور مغربی دھبے اور مقداری PCR (qPCR) تجزیہ کے لیے ہر گردے کے 1 جی ٹشو کو تیزی سے −80 ◦C پر محفوظ کر لیا گیا۔ امیونو ہسٹو کیمیکل (IHC) کے داغ کے لیے ٹشو کی باقی مقدار کو 4 فیصد پیرافارمیلڈہائیڈ (PFA) میں فوری طور پر طے کیا گیا۔

2.3۔ سیل کلچر اور علاج

چوہے کے گردے کی سیل لائن (NRK{{0}}E) شنگھائی سیل بینک آف چائنا اکیڈمی آف سائنسز سے حاصل کی گئی تھی۔ NRK-52E خلیات کو Dulbecco کے ترمیم شدہ Eagles میڈیم (DMEM, Gibco, 12800-017) کے ساتھ کلچر کیا گیا تھا جس میں 5 فیصد فیٹل بوائین سیرم (FBS, Gibco, 10437-028)، پینسلن، اور سٹریپٹومائسن (1 00 U/mL) نمی والی حالت میں 5 فیصد CO2 اور 95 فیصد ہوا 37 ڈگری پر۔ CdCl2 (انتہائی صاف پانی سے تحلیل شدہ) اور JQ1 (ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ سے تحلیل شدہ) کو الگ الگ 4 ڈگری اور −20 ڈگری پر ذخیرہ کیا گیا تھا، اور استعمال سے پہلے کام کرنے والے محلول میں گھٹا دیا گیا تھا۔ تجرباتی ڈیزائن مندرجہ ذیل تھا: (1) خلیوں کا علاج 0، 2.5، 5، 10 μM Cd کے ساتھ 12 h کے لیے، یا 5 μM Cd کے لیے 0، 6، 12، 24 h کے ساتھ کیا گیا تاکہ بعد کے اسسیس کو انجام دیا جا سکے۔ (2) خلیوں کا علاج 5 μM Cd اور/یا 0.5 μM JQ1 کے ساتھ 12 گھنٹے کے لیے کیا گیا تاکہ اس کے بعد کے اسسیس کو انجام دیا جاسکے۔ (3) سیلز کو siBRD4 سے تبدیل کیا گیا اور/یا 5 μM Cd کے ساتھ مزید 12 گھنٹے کے لیے علاج کیا گیا تاکہ اس کے بعد کے اسسیس کو انجام دیا جا سکے۔

2.4 چھوٹی مداخلت کرنے والا آر این اے ٹرانسفیکشن

ہم نے 20 nM BRD4 چھوٹے مداخلت کرنے والے RNA (siBRD4, Invitrogen, CA, USA) کو NRK-52E سیلز بذریعہ Lipofectamine RNAiMAX ٹرانسفیکشن ری ایجنٹ (تھرمو فشر سائنٹیفک، کیٹ # 13778150) میں پروڈکٹ مینوئل کے مطابق 24 گھنٹے کے لیے منتقل کیا۔ درج ذیل معنوں میں siRNAs استعمال کیے گئے تھے۔

siBRD4، 5′-CCGTCAAGCTGAACCTCCCTGATTA-3′ کے ہدف کی ترتیب کے ساتھ

siCt (siRNA منفی کنٹرول)، 5′- UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′ کے ہدف کی ترتیب کے ساتھ۔

2.5 مغربی دھبہ

گردے کے بافتوں کے نمونے اور NRK-52E خلیات کو RIPA بفر میں لیس کیا گیا تھا جس میں کل پروٹین نکالنے کے لیے پروٹیز انحیبیٹرز شامل تھے۔ جوہری پروٹین کو تازہ ٹشوز اور خلیات سے پہلے سے تیار کیا گیا تھا اور −80 ڈگری پر محفوظ کیا گیا تھا۔ پروٹین کے نمونے (20–30 ug فی نمونہ) کو SDS-PAGE الیکٹروفورسس کے ذریعہ الگ کیا گیا تھا، پھر پولی وینیلائیڈین فلورائڈ جھلیوں (ملی پور، ISEQ00010) میں منتقل کیا گیا تھا۔ جھلیوں کو 5 فیصد سکم دودھ کے ساتھ 90 منٹ تک روک دیا گیا، اور درج ذیل بنیادی اینٹی باڈیز کے ساتھ 4 ڈگری پر 12 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا: -ایکٹین (1:5000)، NF-κB p65 (1:1000)، IL-1 ( 1:600)، TNF- (1:600)، BRD4 (1:1000)، Ep300 (1:1000)، Sirt1 (1:1000)، His3 (1:1000)، RelA-K310ac (1:1000)۔ پھر جھلیوں کو TBST سے دھویا گیا اور کمرے کے درجہ حرارت (RT) پر 90 منٹ کے لئے اسی ثانوی اینٹی باڈیز (1:10000) کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ جھلیوں کو الیکٹرو کیمیلومینیسینس (ای سی ایل، تھرمو فشر سائنٹیفک) کے ساتھ لگایا گیا تھا اور کیمیڈوک ایکس آر ایس (بائیو ریڈ، مارنس-لا کوکیٹ، فرانس) پر تعین کیا گیا تھا، اور امیج جے (NIH، Bethesda، MD، USA) کا استعمال کرتے ہوئے آپٹیکل کثافت کا تجزیہ کیا گیا تھا۔

2.6۔ امیونو فلوروسینس (IF) داغ

NRK{{0}}ایک 24-ویلز پلیٹ میں بیج کیے گئے ای سیل تقریباً 60 فیصد سنگم تک بڑھے تھے۔ خلیوں کا علاج 5 μM Cd اور/یا 0.5 μM JQ1 کے ساتھ 12 گھنٹے کے لیے کیا گیا، پھر PFA (4 فیصد، 10 منٹ) کے ساتھ طے کیا گیا، Triton X- 100 (0.1 فیصد، 15 منٹ) کے ساتھ گھمایا گیا، BSA کے ساتھ بلاک کیا گیا۔ (2 فیصد، 90 منٹ) RT پر، اور راتوں رات 4 ڈگری پر پرائمری اینٹی باڈی (NF-κB p65، 1:50 dilution) کے ساتھ انکیوبیٹڈ۔ پی بی ایس کے ساتھ تین بار دھونے کے بعد، خلیات کو 90 منٹ کے لیے سیکنڈری اینٹی باڈی (1:500 کم کرنے) کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا، اور DAPI کے ساتھ RT پر 5 منٹ تک، پھر خلیوں کو کنفوکل مائکروسکوپ کے تحت دیکھا گیا۔ NF-κB جوہری نقل مکانی کا تجزیہ تین آزاد مطالعات میں کیا گیا۔

2.7۔ کیو پی سی آر

گردے کے ٹشوز اور NRK-52 کے کل RNA کو RNAiso Plus kit (Takara Bio, Shiga, Japan) کے ساتھ نکالا گیا تھا۔ مینوفیکچرر کے دستی (روچے، باسل، سوئٹزرلینڈ) کے مطابق پہلی چین سی ڈی این اے کی ترکیب کے لیے کل RNA کا 1 ug استعمال کیا گیا تھا۔ LightCycler® 96 ریئل ٹائم PCR سسٹم (Roche) کا استعمال کرتے ہوئے متعلقہ mRNA کی سطح کا پتہ لگانے کے لیے 2 μL تکمیلی DNA (cDNA) فی کنواں لیا گیا۔ مساوات 2-△△CT کے مطابق متعلقہ mRNA کی سطح کا حساب لگائیں۔ پرائمر ٹیبل S2 میں درج تھے۔ ایکٹین ایک چوہا حوالہ جین تھا۔

2.8۔ Co-immunoprecipitation (Co-IP)

گردے کے ٹشوز اور NRK-52E خلیات کو تازہ تیار کردہ سیل لیسز بفر (20 mM HEPES–KOH pH 7.5، 150 mmol/L NaCl، 2 mmol/L EDTA، 1 فیصد Triton X{{8} }) PMSF پر مشتمل ہے۔ پروٹین G موتیوں (100 μL فی نمونہ، Bio-Rad، Hercules, CA, USA) کو 2 ug BRD4، RelA-K310ac، یا IgG اینٹی باڈی فی نمونہ کے ساتھ ملایا گیا، اور RT پر 10 منٹ تک گھمایا گیا۔ اس کے بعد، کل پروٹین لائسیٹس کو موتیوں کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا – اینٹی باڈی کمپلیکس راتوں رات 4 ڈگری پر۔ سیل لیسس بفر سے تین بار دھونے کے بعد، امیونوپریسیپیٹیٹس کو 1 × SDS PAGE سیمپل بفر کے ساتھ دوبارہ معطل کر دیا گیا تاکہ نمونوں کو ترتیب دیا جا سکے۔ اینٹی بی آر ڈی 4 اور اینٹی ریلا K310ac پرائمری اینٹی باڈیز کے ساتھ ویسٹرن بلوٹنگ کا استعمال کرتے ہوئے ہدف پروٹین کا پتہ لگایا گیا۔

2.9 شماریاتی تجزیہ

تمام اعداد و شمار کم از کم تین آزاد تجربوں سے حاصل کیے گئے تھے اور اس کا مطلب ± SEM کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا جب تک کہ دوسری صورت میں ذکر نہ کیا جائے۔ تجرباتی گروپوں کا موازنہ SPSS 22 کا استعمال کرتے ہوئے غیر جوڑی والے دو دم والے طالب علم کے ٹی-ٹیسٹ یا یک طرفہ تجزیے کے تغیر (ANOVA) سے کیا گیا۔{4}} (SPSS Inc., شکاگو, IL, USA)۔ اہمیت p < 0.05="" پر="" سیٹ="" کی="" گئی="">

3. نتائج

3.1 سی ڈی ویوو اور وٹرو میں سوزش والی سائٹوکائنز کے اظہار کو اکساتا ہے۔

ماحولیاتی آلودگی کے طور پر، سی ڈی حیاتیاتی عمل کی ایک سیریز کو منظم کرتے ہوئے گردے کو نقصان پہنچاتی ہے (Wang et al., 2019c)۔ اس مطالعے میں، سی ڈی کی نمائش کے بعد سوزش والی سائٹوکائنز کی ٹرانسکرپشن لیول میں ہونے والی تبدیلیوں کا جائزہ لیا گیا تاکہ یہ معلوم کیا جا سکے کہ آیا سی ڈی سے متاثرہ نیفروٹوکسٹی میں سوزش شامل ہے۔ ڈیٹا سے پتہ چلتا ہے کہ Cd کی نمائش نے نمایاں طور پر انٹرلییوکن (IL)-1 اور ٹیومر نیکروسس فیکٹر (TNF)- NRK-52E خلیات (تصویر 1A-B) اور چوہے کے گردے کے ٹشوز (تصویر 1C) میں پروٹین کی سطح میں اضافہ کیا۔ -D)۔ دریں اثنا، جیسا کہ تصویر 1E-F میں دکھایا گیا ہے، Cd کی نمائش نے سوزش والی سائٹوکائنز (IL-1، IL-6، TNF-، اور (Monocyte chemoattractant protein-1) MCP کی نقل کی سطح کو بڑھایا۔ -1) vivo اور in vitro میں۔ ان نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ سی ڈی چوہے کے گردوں میں سوزش والی سائٹوکائنز کے اظہار کو اکساتا ہے۔

3.2 BRD4 سوزش والی سائٹوکائنز کی Cd-حوصلہ افزائی ٹرانسکرپشن کے عمل میں حصہ لیتا ہے۔

BRD4 ایک نیا بیان کردہ ایپی جینیٹک ریگولیٹر ہے جو بہت سی بیماریوں میں سوزش کے عمل کو منظم کرنے کے لیے ایسٹیلیٹڈ ہسٹون یا نان ہسٹون سے منسلک ہوتا ہے۔ یہاں، BRD4 inhibitor JQ1 اور BRD4-siRNA کا استعمال Cd سے متحرک اشتعال انگیز ردعمل پر BRD4 کے کردار کو جانچنے کے لیے کیا گیا تھا۔ ڈیٹا سے پتہ چلتا ہے کہ Cd-Evelated IL-1 اور TNF- پروٹین کی سطح کو Vivo اور in Vitro میں JQ1 ٹریٹمنٹ (تصویر 2A–D) اور وٹرو میں BRD4 ناک ڈاؤن (تصویر S1A-B) کے ذریعے نیچے ریگولیٹ کیا گیا تھا۔ دریں اثنا، JQ1 کے علاج نے NRK-52E خلیات (تصویر 2E) میں IL-1، IL-6، TNF-، اور MCP-1 کی Cd-بڑھائی ہوئی نقل کی سطح کو نمایاں طور پر روک دیا۔ اور چوہے کے گردے کے ٹشوز (تصویر 2 ایف)۔ اس کے علاوہ، BRD4 دستک ڈاؤن نے NRK-52E خلیات (تصویر S1C) میں سوزش والی سائٹوکائنز کی Cd- بڑھی ہوئی ٹرانسکرپشن لیول میں نمایاں کمی کی۔ اجتماعی طور پر، یہ نتائج بتاتے ہیں کہ BRD4 چوہوں کے گردوں میں Cd سے متحرک اشتعال انگیز ردعمل کا ایک اہم ریگولیٹر ہے۔

3.3 Cd کی نمائش کے بعد BRD4 اظہار کی سطح میں کوئی تبدیلی نہیں ہے۔

اگلا، Cd کی نمائش کے بعد BRD4 کے اظہار کی سطح میں تبدیلیوں کا پتہ چلا۔ NRK-52E خلیات کو Cd کے ساتھ ارتکاز کے میلان کے تحت علاج کیا گیا، اور چوہوں کو 5 دنوں کے لیے Cd کے ساتھ intraperitonely انجکشن لگایا گیا تاکہ Vivo اور in Vitro میں گردے میں BRD4 اظہار پر Cd کے اثر کو واضح کیا جا سکے۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ BRD4 پروٹین کی سطحیں Cd سے ظاہر ہونے والے NRK-52E خلیات (تصویر 3A-B) اور چوہے کے گردے کے ٹشوز (تصویر 3C-D) دونوں میں غیر تبدیل شدہ تھیں۔ اس کے علاوہ، BRD4 mRNA کی سطح Cd کی نمائش کے بعد غیر تبدیل شدہ تھی (تصویر 3E-F)۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ BRD4 ثالثی کرتا ہے Cd سے متحرک اشتعال انگیز ردعمل اظہار کی سطح میں تبدیلیوں پر منحصر نہیں ہے۔

3.4 BRD4 Cd سے فروغ یافتہ NF-κB جوہری نقل مکانی کو منظم کرتا ہے۔

ہمارے مطالعے میں Cd سے متحرک اشتعال انگیز ردعمل میں BRD4 کے کردار کی کھوج کی گئی۔ NF-κB سگنلنگ پاتھ وے میں ردوبدل کا گہرا تعلق سوزش والی سائٹوکائنز (Chi et al.، 2021) کی نقل سے ہے۔ ہمارے مطالعے سے معلوم ہوا ہے کہ BRD4 Cd- ریگولیٹڈ نیوکلیئر ٹرانسلوکیشن اور NF-κB کو چالو کرنے میں ملوث ہے۔ سب سے پہلے، NF-κB کے ذیلی سیلولر لوکلائزیشن کا تعین IF سٹیننگ اور IHC سٹیننگ کے ذریعے کیا گیا تھا۔ اعداد و شمار 4A اور D میں دکھایا گیا ہے کہ JQ1 NRK-52E خلیات اور چوہے کے گردے کے ٹشوز میں Cd سے فروغ پانے والے NF-κB جوہری ٹرانسلوکیشن کو روکتا ہے۔ دریں اثنا، مغربی دھبے کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ JQ1 نے Vivo (تصویر 4B-C) اور وٹرو (تصویر 4E-F) میں NF-κB کے Cd-بڑھے ہوئے جوہری پروٹین کی سطح کو نمایاں طور پر کم کیا ہے۔ اسی طرح BRD4 دستک ڈاؤن نے بھی نمایاں طور پر Cd سے فروغ پانے والے NF-κB نیوکلیئر ٹرانسلوکیشن (تصویر S2A) کو روکا اور NRK-52E خلیوں میں NF-κB (تصویر S2B-C) کے Cd میں اضافہ شدہ جوہری پروٹین کی سطح کو کم کیا۔ ایک ساتھ مل کر، BRD4 کی روک تھام Cd کے فروغ یافتہ NF-κB نیوکلیئر ٹرانسلوکیشن کو کم کر سکتی ہے، یہ تجویز کرتا ہے کہ BRD4 Cd کی نمائش کے بعد گردے میں NF-κB سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کرنے میں ثالثی کرتا ہے۔

3.5 Cd RelA K310 acetylation کی سطح کو بڑھاتا ہے۔

مطالعات نے اس بات کی تصدیق کی ہے کہ BRD4 اپنے برومین ڈومینز کے ذریعے acetylated RelA K310 سے منسلک ہوتا ہے تاکہ NF-κB– منحصر نقل کو ریگولیٹ کیا جا سکے (Morgado-Pascul et al., 2019; Zhong et al., 2018)۔ اس طرح، RelA K310 کی acetylation کی سطح اور دو خامروں کے اظہار کا پتہ چلا۔ ڈیٹا سے پتہ چلتا ہے کہ Cd کے بڑھتے ہوئے ارتکاز کے ساتھ RelA-K310ac اور acetylase Ep300 پروٹین کی سطح میں مسلسل کمی واقع ہوئی ہے، جبکہ NRK-52E خلیات (تصویر 5A-B) اور چوہے کے گردے کے ٹشوز (تصویر 4) میں deacetylase Sirt1 پروٹین کی سطح میں بتدریج اضافہ ہوا ہے۔ 5C-D)۔ اس کے علاوہ، Ep300 اور Sirt1 mRNA کی سطحوں نے ایک جیسے رجحانات دکھائے (تصویر 5E-F)۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ Cd RelA K310 کے ایسٹیلیشن لیول کو فروغ دیتا ہے، اس طرح BRD4 گردے میں Cd سے متحرک ہونے والی سوزش والی سائٹوکائنز کی نقل میں ملوث ہو سکتا ہے۔

3.6۔ Cd نے BRD4 کو RelA-K310ac پر بائنڈنگ بڑھاتا ہے تاکہ اس کے ٹرانسکرپشن فنکشن کو بہتر بنایا جا سکے۔

ایسٹیلیشن سائٹس کا پابند ہونا BRD4 (Huang et al.، 2009) کے نقلی ضابطے کی بنیاد ہے۔ اس بات کی تصدیق کرنے کے لیے کہ آیا Cd BRD4 فنکشن کو RelA-K310ac پر بائنڈنگ بڑھا کر ریگولیٹ کرتا ہے، Co-IP کے ذریعے RelA-K310ac اور BRD4 کے درمیان تعامل کا پتہ چلا۔ تصویر 6A میں موجود ڈیٹا سے پتہ چلتا ہے کہ Cd نے NRK-52ای سیلز میں RelA-K310ac اور BRD4 کے درمیان تعامل کو نمایاں طور پر بڑھایا، جسے JQ1 علاج یا BRD4 دستک ڈاؤن سے کم کیا گیا۔ نیز، چوہے کے گردے کے ٹشوز (تصویر 6B) میں بھی یہی رجحان دیکھا گیا۔ یہ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ Cd BRD4 کے RelA-K310ac کے پابند ہونے کو بڑھاتا ہے، جو NF-κB- منحصر نقل کو فروغ دیتا ہے اور اس کے نتیجے میں Cd سے متحرک اشتعال انگیز ردعمل میں حصہ ڈالتا ہے۔

4. بحث

سی ڈی کو اس کے زیادہ زہریلے ہونے کی وجہ سے سوزش کے ممکنہ محرک کے طور پر رپورٹ کیا گیا ہے، جبکہ صحیح طریقہ کار ابھی تک پوری طرح سے سمجھ میں نہیں آیا ہے (عرب-نوزاری وغیرہ، 2020؛ گھوش، 2018)۔ ہمارے مطالعے نے اس بات کی تصدیق کی کہ سی ڈی چوہوں کے گردوں کے خلیوں میں سوزش والی سائٹوکائنز کے اظہار کو اکساتا ہے، اور پتہ چلا کہ BRD4، ایک ایپی جینیٹک ہدف جو سوزش سمیت سیلولر عمل کی ایک سیریز میں اہم کام کرتا ہے، سی ڈی سے متحرک اشتعال انگیز ردعمل میں حصہ ڈالتا ہے۔ مزید تجربات نے اشارہ کیا کہ BRD4 Cd سے فروغ پانے والے NF-κB سگنلنگ پاتھ وے ایکٹیویشن میں شامل ہے۔ اس کے علاوہ، Cd نے RelA K310 کے ایسٹیلیشن لیول میں اضافہ کیا، اس طرح NF-κB- منحصر سوزش والی سائٹوکائنز ٹرانسکرپشن کو فروغ دینے کے لیے BRD4 کو ایسٹیلیٹڈ NF-κB RelA کے ساتھ پابند کیا گیا۔

سوزش خارجی کیمیکلز کے خلاف قدرتی دفاعی طریقہ کار میں سے ایک ہے، جب کہ بے قابو اور نامناسب اشتعال انگیز ردعمل عام بافتوں کو نقصان پہنچا سکتا ہے اور خود کار قوت مدافعت کی بیماریوں کو جنم دے سکتا ہے (جیان ایٹ ال۔، 2018)۔ سوزش کے سی ڈی میں اضافہ حیاتیاتی مارکر اکثر مختلف بیماریوں سے منسلک ہوتے ہیں۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ سی ڈی کی حوصلہ افزائی سوزش atherogenesis میں ملوث ہے (Tinkov et al.، 2018)۔ مزید یہ کہ، سی ڈی نے سوزش والی سائٹوکائنز کے اظہار کو فروغ دیا، جس نے پھیپھڑوں اور خصیوں کے بافتوں کو نقصان پہنچایا اور ہیپاٹوٹوکسٹی کو آمادہ کیا (کوپسامی نائیڈو ایٹ ال۔، 2019؛ عرفہ ایٹ ال۔، 2014)۔ یہ نقصان دہ اثرات ہمارے نتائج سے مطابقت رکھتے ہیں، کہ سوزش کا ردعمل سی ڈی سے متاثرہ گردے کی چوٹ میں شامل ہے۔ بڑھتی ہوئی تحقیقوں نے سی ڈی کی حوصلہ افزائی کی سوزش کے وقوع کے طریقہ کار پر توجہ مرکوز کی ہے۔ BET پروٹین فیملی ممبر کے طور پر اچھی طرح سے مطالعہ کیا گیا ہے، BRD4 بہت سے حیاتیاتی عمل بشمول سوزش میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ یہاں، JQ1 (BRD4 کا ایک روکنے والا) اور siRNA کا استعمال BRD4 کی فعال سرگرمی کو بے قابو کرنے کے لیے کیا گیا اور پتہ چلا کہ BRD4 کی روک تھام نے چوہوں کے گردوں میں سوزش والی سائٹوکائنز کی Cd-حوصلہ افزائی کی نقل کو کم کر دیا، جس سے یہ معلوم ہوتا ہے کہ BRD4 Cd سے متحرک ہونے والے سوزش کے ردعمل میں حصہ لیتا ہے۔ . عام طور پر یہ خیال کیا جاتا ہے کہ BRD4 اظہار کی بے ضابطگی اشتعال انگیز ردعمل کی موجودگی میں ایک اہم واقعہ ہے۔ ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ، پیتھولوجیکل کارڈیک ہائپر ٹرافی، اور سوزش سے وابستہ دیگر بیماریوں میں، خراب BRD4 اظہار نے سوزش والی سائٹوکائنز کے اظہار میں اہم کردار ادا کیا (Zhu et al.، 2020؛ Marazzi et al.، 2018؛ Ren et al.، 2019)۔ تاہم، موجودہ تجرباتی حالات کے تحت BRD4 کے اظہار کی سطح پر Cd کا کوئی اثر نہیں ہوا، جس کی وجہ سے ہمیں اس بات پر غور کرنا پڑا کہ آیا BRD4 دوسرے راستوں سے Cd سے متحرک اشتعال انگیز ردعمل میں ثالثی کرتا ہے۔

NF-κB سوزش کے عمل میں ایک اہم ریگولیٹری عنصر ہے اور بہت سے اشتعال انگیز ثالثوں کے اظہار کو کنٹرول کرنے کے لئے ذمہ دار ہے (لارنس، 2009)۔ مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ BRD4 NF-κB سگنلنگ پاتھ وے کے ضابطے میں شامل ہے۔ ہوانگ وغیرہ۔ (2017) نے تجویز کیا کہ BRD4 نے P38 اور JNK–MAPK راستوں کے ذریعے IKK-ثالثی NF-κB ایکٹیویشن کو منظم کیا۔ وانگ وغیرہ۔ (2019a) نے پایا کہ BRD4 دستک ڈاؤن یا JQ1 علاج نے مائیکروگلیہ میں لپوپولیساکرائڈ (LPS) سے متحرک NF-κB سگنلنگ پاتھ وے کو مسدود کردیا۔ مینگ وغیرہ۔ (2014) نے یہ ظاہر کیا کہ JQ1 کے علاج نے LPS سے علاج شدہ RAW 264.7 خلیوں میں NF-κB کی ایکٹیویشن کو روک کر سوزش والی سائٹوکائنز کے اظہار کو روک دیا۔ ان رپورٹس نے اشارہ کیا کہ BRD4 بہت سے سوزش کے ماڈلز میں NF-κB کو چالو کرنے میں ثالثی کرتا ہے جبکہ BRD4 کو روکنا سوزش کے لیے ایک مؤثر علاج کا طریقہ ہے۔ موجودہ مطالعہ میں، BRD4 کی روک تھام نے NF-κB کی جوہری نقل مکانی کو روک دیا Cd-exposed چوہے کے گردے کے ٹشوز اور NRK-52E خلیوں میں، یہ تجویز کرتا ہے کہ BRD4 Cd-activated NF-κB سگنلنگ پاتھ وے میں ثالثی کرتا ہے۔

عام طور پر، NF-κB کو مختلف محرکات کے ذریعے چالو کرنے اور نیوکلئس میں منتقل ہونے کے بعد، BRD4 K310 سائٹ پر ایسٹیلیٹڈ NF-κB RelA سے منسلک ہوتا ہے، جو نیوکلئس میں اس کے استحکام اور نقل کی سرگرمی کو بڑھاتا ہے (ہاجمیرزا ایٹ ال۔، 2018)۔ اس طرح RelA K310 کا ایسٹیلیشن لیول سوزش کے ردعمل پر BRD4 کے ریگولیٹری فنکشن کو متاثر کرتا ہے۔ ہپپوکیمپل نیوران میں، ڈیسیٹیلیز سیرٹ 1 نے BACE1 اظہار کو منظم کرنے کے لیے RelA K310 deacetylation میں ثالثی کی، جس نے نیورونل امائلائیڈ (Flores-Leon et al.، 2019) کی تیاری میں تعاون کیا۔ گلیوبلاسٹوما خلیوں میں، فوٹو ڈائنامک تھراپی نے ڈیسیٹیلیز سیرٹ 1 کو نیچے سے منظم کیا اور ایسٹیلیز Ep300 کو فعال کیا، جس سے RelA-K310ac کی سطح میں اضافہ ہوا اور بقا کے حامی نائٹرک آکسائیڈ کی بلند پیداوار کا باعث بنی (Fahey et al.، 2019)۔ ہمارے مطالعے سے پتا چلا ہے کہ Cd Ep300 ایکسپریشن کو بڑھا کر اور Sirt1 ایکسپریشن کو کم کر کے RelA K310 کے ایسٹیلیشن لیول کو فروغ دیتا ہے، اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ Cd RelA K310 کے ایسٹیلیشن لیول کو بڑھا کر ریگولیٹری فنکشن BRD4 کو متاثر کرتا ہے۔

خاص طور پر، ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ JQ1 کا علاج BRD4 دستک ڈاؤن سے زیادہ مؤثر تھا Cd سے متحرک سوزش کے ردعمل کو کم کرنے میں۔ JQ1 BRD4 کے ساتھ ایک اعلی پابند تعلق رکھتا ہے اور BRD4 کو کروموسوم کے پابند ہونے کو تقریباً مکمل طور پر روک سکتا ہے، جبکہ siBRD4 صرف BRD4 پروٹین کے اظہار میں مداخلت کر سکتا ہے تاکہ BRD4 کو ہدف کی جگہ پر بائنڈنگ کو کم کیا جا سکے، یہ تجویز کرتا ہے کہ BRD4 ثالثی کرتا ہے۔ acetylated NF-κB RelA کے ساتھ بائنڈنگ۔ حالیہ مطالعات نے اسی طرح کے ریگولیٹری میکانزم کو دکھایا ہے: NF-κB جوہری نقل مکانی اور ایکٹیویشن کے بعد، BRD4 نے پھر NF-κB کی ٹرانسکرپشنی ایکٹیویشن کو فعال کرنے کے لیے acetylated RelA کے ساتھ بات چیت کی (Huang et al.، 2009)۔ RelA – BRD4 کو مختلف اشتعال انگیز محرک حالات میں NF-κB ہدف پروموٹرز میں بھرتی کیا گیا تھا، جبکہ JQ1 علاج نے BRD4 کو acetylated NF-κB RelA کے پابند ہونے سے روک کر کام کیا، اس طرح NF-κB کی نقل کی سرگرمی کو کم کیا (Zou et al.، 2014)۔ ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ BRD4 کی روک تھام BRD4 اور RelA-K310ac کے درمیان چوہوں کے گردے میں Cd سے بڑھے ہوئے تعامل کو روکتی ہے، جو ہمارے مندرجہ بالا نتائج کی حمایت کرتی ہے کہ BRD4 کو روکنا NF-κB کی Cd-حوصلہ افزائی ٹرانسکرپشن سرگرمی کو دباتا ہے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ Cd BRDet4Bin کو بڑھاتا ہے۔ NF-κB RelA سوزش والی سائٹوکائنز کی نقل کو بڑھانے کے لیے۔

خلاصہ طور پر، ہمارے مطالعے نے چوہوں کے گردوں میں Cd سے متحرک اشتعال انگیز ردعمل میں BRD4 کے ریگولیٹری میکانزم کا انکشاف کیا: (1) BRD4 Cd-حوصلہ افزائی NF-κB جوہری نقل مکانی اور ایکٹیویشن میں ثالثی کرتا ہے۔ (2) Cd RelA K310 acetylation کی سطح کو بڑھاتا ہے اور BRD4 کو acetylated NF-κB RelA کے پابند کرتا ہے، جو NF-κB- منحصر سوزش والی سائٹوکائنز ٹرانسکرپشن کو فروغ دیتا ہے۔ مزید برآں، بی آر ڈی 4 کی روک تھام نے سی ڈی ایلیویٹیڈ سوزش والی سائٹوکائن کی سطح کو نمایاں طور پر کم کیا، جس سے معلوم ہوتا ہے کہ ہدف شدہ بی آر ڈی 4 سوزش کی بیماریوں کے علاج کے ایک مؤثر ذریعہ کے طور پر تیار ہونے کی صلاحیت رکھتا ہے جس میں سی ڈی سے متاثرہ ورم گردہ بھی شامل ہے۔

CREDIT تصنیف کی شراکت کا بیان

Zhongguo Gong: تصور سازی، طریقہ کار، تصور، رسمی تجزیہ، توثیق، تحقیقات، رسمی تجزیہ، ڈیٹا کیوریشن، تحریر - اصل مسودہ۔ گینگ لیو: تصور، طریقہ کار، تصور، ڈیٹا کیوریشن، تحریر - اصل مسودہ، پروجیکٹ ایڈمنسٹریشن، فنڈنگ ​​کا حصول۔ وینجنگ لیو: سافٹ ویئر، وسائل، طریقہ کار، رسمی تجزیہ۔ ہوئی زو: پراجیکٹ انتظامیہ، نگرانی۔ Ruilong گانا: سافٹ ویئر، رسمی تجزیہ، نگرانی. ہانگیان زاؤ: سافٹ ویئر، رسمی تجزیہ، نگرانی۔ یان یوآن: نگرانی۔ جیان ہونگ گو: نگرانی۔ جیانچون بیان: فنڈنگ ​​کا حصول، نگرانی۔ Jiaqiao Zhu: تحریر - جائزہ اور ترمیم، نگرانی۔ زونگپنگ لیو: تحریر - جائزہ اور ترمیم، نگرانی،

پروجیکٹ ایڈمنسٹریشن، فنڈنگ ​​کا حصول، تصور

مسابقتی دلچسپی کا اعلان

مصنفین اعلان کرتے ہیں کہ ان کے پاس کوئی مسابقتی مالی مفادات یا ذاتی تعلقات نہیں ہیں جو اس مقالے میں رپورٹ کردہ کام پر اثر انداز ہوتے دکھائی دے سکتے ہیں۔

اعتراف

اس کام کو چین کی نیشنل نیچرل سائنس فاؤنڈیشن (نمبر 31872533، 31902329، 32072933)، چین کے قومی کلیدی تحقیق اور ترقی کے پروگرام (نمبر 2016YFD0501208)، اور جیانگسو ہائی ایجوکیشن کے ترجیحی تعلیمی پروگرام کی ترقی کے منصوبے کی حمایت حاصل تھی۔ ادارہ (PADP)۔ مخطوطہ کو انگریزی زبان، گرامر، رموز، ہجے، اور مجموعی انداز کے لیے ELIXIGEN کے ایک یا زیادہ اہل انگریزی بولنے والے ایڈیٹرز کے ذریعے ایڈٹ کیا گیا تھا۔

حوالہ جات

Almeer, RS, AlBasher, GI, Alarifi, S., Alkahtani, S., Ali, D., Abdel Moneim, AE, 2019. رائل جیلی نر چوہوں میں کیڈمیم سے متاثرہ نیفروٹوکسیٹی کو کم کرتی ہے۔ سائنس Rep. 9 (1)، 5825۔

Arab-Nozari, M., Mohammadi, E., Shokrzadeh, M., Ahangar, N., Amiri, FT, Shaki, F., 2020. کیڈمیم اور فلورائیڈ کی غیر زہریلی سطحوں کے ساتھ مشترکہ نمائش چوہوں میں ہیپاٹوٹوکسٹی کو متاثر کرتی ہے۔ مائٹوکونڈریل آکسیڈیٹیو نقصان، اپوپٹوسس، اور NF-kB راستے کو متحرک کرنا۔ ماحولیات۔ سائنس آلودگی. Res. انٹر 27 (19)، 24048–24058۔

Arafa, MH, Mohammad, NS, Atteia, HH, 2014. میتھی کے بیجوں کا پاؤڈر نر چوہوں میں کیڈمیم کی وجہ سے خصیوں کے نقصان اور ہیپاٹوٹوکسٹی کو کم کرتا ہے۔ ختم ٹاکسیکول۔ پاتھول۔ 66 (7)، 293–300۔

چٹرجی، این.، بوہمن، ڈی.، 2018. Nrf2 پر BET-ting: Nrf2 سگنلنگ کیسے BET پروٹین روکنے والوں کی علاج کی سرگرمیوں کو متاثر کر سکتی ہے۔ بائیو ایسز 40 (5)، 1800007۔

Chi, Q., Zhang, Q., Lu, Y., Zhang, Y., Xu, S., Li, S., 2021. reactive آکسیجن پرجاتیوں پر منحصر نیوٹروفیل ایکسٹرا سیلولر ٹریپ کی تشکیل میں selenoprotein S کے کردار کمی آرٹرائٹس. ریڈوکس بائیول۔ 44, 102003 Dey, A., Yang, W., Gegonne, A., Nishiyama, A., Pan, R., Yagi, R., Grinberg, A., Finkelman, FD, Pfeifer, K., Zhu, J ., Singer, D., Zhu, J., Ozato, K., 2019. BRD4 hematopoietic اسٹیم سیل کی نشوونما کی ہدایت کرتا ہے اور میکروفیج کی سوزش کے ردعمل کو ماڈیول کرتا ہے۔ EMBO J. 38 (7)

فیگربرگ، بی، پیدا ہوئے۔, Y., Barregard, L., Sallsten, G., Forsgard, N., Hedblad, B., Persson, M., Engstr.m, G., 2017. Cadmium کی نمائش کا تعلق گھلنشیل urokinase plasminogen ایکٹیویٹر ریسیپٹر سے ہے، جو سوزش اور مستقبل کی دل کی بیماری کا ایک گردش کرنے والا نشان ہے۔ ماحولیات۔ Res. 152، 185-191۔

Fahey, JM, Korytowski, W., Girotti, AW, 2019۔ اپ اسٹریم سگنلنگ کے واقعات فوٹوڈینامیکل طور پر چیلنج شدہ گلیوبلاسٹوما خلیوں میں بقا کے حامی نائٹرک آکسائیڈ کی بلند پیداوار کا باعث بنتے ہیں۔ فری ریڈک۔ بائول میڈ. 137، 37–45۔

Fernando, TD, Jayawardena, BM, Mathota Arachchige, YLN, 2020۔ سری لنکا میں نامعلوم ایٹولوجی کی دائمی گردے کی بیماری سے متعلق اوریزا سیٹیوا ایل میں مختلف میٹابولائٹس اور بھاری دھاتوں کا تغیر۔ کیموسفیئر 247، 125836۔

Flores-Leon,M.,Perez-Domingues, M., Gonzalez-Barrios, R., Arias, C., 2019. Palmitic acid-induced NAD (plus ) depletion SIRT1 کے کم فعل اور BACE1 کے بڑھتے ہوئے اظہار سے وابستہ ہے۔ ہپپوکیمپل نیوران میں۔ نیورو کیم۔ Res. 44 (7)، 1745–1754۔

گھوش، کے این آئی، 2018۔ کیڈمیم ٹریٹمنٹ البینو ویسٹار چوہوں کے کارڈیک ٹشو میں ایچینوکوکوسس، ڈی این اے کو پہنچنے والے نقصان، سوزش اور اپوپٹوس کو متاثر کرتا ہے۔ ماحولیات۔ ٹاکسیکول۔ فارماکول۔ 59، 43–52۔ سوزش اور کینسر. بائیو میڈیسن 6 (1)، 16۔

Horiguchi, H., Oguma, E., 2016. کیڈمیم کی شدید نمائش چوہوں کے جگر میں گرینولوسائٹ کالونی محرک عنصر کی تاخیر سے شمولیت کے ساتھ طویل عرصے تک نیوٹروفیلیا کو جنم دیتی ہے۔ محراب ٹاکسیکول۔ 90 (12)، 3005–3015۔

حسین خنضر، ن.، عزیزی، جی، اسلامی، ایس.، الحسن محمد، ایچ، فیاض، ایف.، حسین زادہ، آر، عثمان، اے بی، کمالی، اے این، محمدی، ایچ.، جدیدی-نیراغ، F., Dehghanifard, E., Noorisepehr, M., 2020. سوزش کی شمولیت میں کیڈیمیم کی نمائش کے اثرات۔ امیونو فارماکول۔ امیونوٹوکسیکول۔ 42 (1)، 1-8۔