جلد جسم کے درجہ حرارت کو تبدیل کرنے، درد اور دباؤ کو سمجھنے میں اہم کردار ادا کرتی ہے

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

خلاصہ

پس منظر:کافی عربیکا ایل فیملی کی سبز پھلیاں: روبیاسی پولی فینول کا بھرپور ذریعہ ہے جو جلد کو آکسیڈیٹیو نقصان سے بچاتی ہے۔ اس مطالعہ میں، لیپوسومز کو منشیات کے کیریئر کے طور پر تیار کیا گیا تھا تاکہ حالات کی انتظامیہ کے لئے پولیفینول کی جلد کی پارگمیتا کو بڑھایا جا سکے۔ مواد اور طریقے: سبز کافی کی پھلیاں میتھانول اور پانی کے تناسب میں مختلف ہو کر تیار کی گئیں۔ مزید مطالعات کے لیے بہترین نچوڑ کا انتخاب کرنے کے لیے تمام نچوڑوں پر فائیٹو کیمیکل تجزیہ اور ان وٹرو اینٹی آکسیڈینٹ کا جائزہ لیا گیا۔ cytotoxicity پوٹینشل (MTT پرکھ) اور منتخب کردہ ایکسٹریکٹ کی اینٹی ایلسٹیس سرگرمی کا جائزہ L929 سیل لائنوں پر فلو سائٹو میٹر کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ نچوڑ کے لیپوسومز کو پتلی فلم ہائیڈریشن کے طریقہ کار سے تیار کیا گیا تھا اور فاسفیٹائڈیلچولین کو کولیسٹرول کے تناسب میں مختلف کرکے اور اقتباس کی مقدار کو آہستہ آہستہ بڑھا کر بہتر بنایا گیا تھا۔ لیپوسومل فارمولیشن کو کاربوپول"974P کو جیلنگ ایجنٹ کے طور پر استعمال کرتے ہوئے جیل میں تبدیل کیا گیا۔ تیار شدہ لیپوسومل سسپنشن اور لیپوسومل جیل کا مختلف فارمولیشن پیرامیٹرز کے لیے جائزہ لیا گیا۔ نتائج: فائٹو کیمیکل تجزیہ کے نتائج، وٹرو اینٹی آکسیڈینٹ اسیسز، اور وٹرو ایویلویشن پر۔ L929 سیل لائنز نے یہ نتیجہ اخذ کیا کہ 25 فیصد میتھانولک نچوڑ غیر زہریلا تھا جس میں سب سے زیادہ فینولک مواد تھا اور اس میں اینٹی ایلسٹیز کی اچھی سرگرمی دکھائی گئی تھی۔ آپٹمائزڈ لیپوسومل فارمولیشن میں کلوروجینک ایسڈ کی انکیپسولیشن کی کارکردگی 75 فیصد تھی۔ لیپوسومل جیل نے ظاہر کیا کہ دوائیوں کے اخراج کے لیے 21 کو برقرار رکھا گیا ہے۔ روایتی فارمولیشن کے 6-7 گھنٹے کے مقابلے میں۔ نتیجہ: تیار کردہ گرین کافی بین کے عرق سے بھری ہوئی لیپوسومل پر مبنی جیل اینٹی ایجنگ اثرات کے لیے ممکنہ کیریئر کے طور پر کام کر سکتی ہے۔

مطلوبہ الفاظ:سبز کافی پھلیاں (جی سی بی)، کلوروجینک ایسڈ، ایکسٹریکٹ، لیپوسومز، اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی ایجنگ۔

تعارف

جلد جسمانی درجہ حرارت کو تبدیل کرنے، درد اور دباؤ کو سمجھنے میں ایک اہم کردار ادا کرتی ہے، اور ماحولیاتی آلودگی کے خلاف ایک اہم رکاوٹ کے طور پر کام کرتی ہے جس سے جلد کی عمر بہت واضح ہو جاتی ہے۔ 1 الٹرا وائلٹ شعاعوں سے جلد کی طویل مدتی نمائش آزاد ریڈیکلز پیدا کرتی ہے جو آکسیڈیٹیو تناؤ کو متاثر کرتی ہے۔ جلد فوٹو گرافی، سن برن، میلانوجینیسیس، امیونوسوپریشن اور فوٹو کارسینوجنیسیس کی نشوونما کا باعث بنتی ہے۔ ² فری ریڈیکلز انتہائی رد عمل والے آکسیجن مالیکیولز ہیں جو کولیجن کے مالیکیولز کے ساتھ آپس میں ربط پیدا کرنے میں مصروف ہوتے ہیں جس کی وجہ سے جلد کی لچک میں کمی آتی ہے۔ پتلا ہونا، خشکی، اور جلد پر دھبہ۔ اس طرح، جوان نظر آنے کی خواہش کے ساتھ، اینٹی ایجنگ مصنوعات کی بہت مانگ ہے۔ جڑی بوٹیوں سے پیدا ہونے والے اینٹی آکسیڈنٹس نے کاسمیٹک انڈسٹری میں اہمیت حاصل کر لی ہے۔ اینٹی آکسیڈینٹ فری ریڈیکلز کی وجہ سے ہونے والے آکسیڈیٹیو نقصان کو ٹھیک کرنے اور روکنے میں مدد کرتے ہیں۔ جڑی بوٹیوں کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی بنیادی طور پر فینولک مرکبات کی ریڈوکس خصوصیات کی وجہ سے ہوتی ہے۔ 4 اس طرح، اینٹی آکسیڈنٹس عمر بڑھنے کی علامات جیسے جھریوں، عمر کے دھبوں اور باریک لکیروں میں تاخیر کرنے میں امید افزا پائے جاتے ہیں۔

سبز کافی (Coffea arabica L، Rubiaceae) پھلیاں پولی فینول جیسے کلوروجینک ایسڈ اور اس سے متعلقہ مرکبات جیسے کیفیک ایسڈ، کومرک ایسڈ، اور فیرولک ایسڈ کا بھرپور ذریعہ ہیں جو جلد کو آکسیڈیٹیو نقصان سے روکتی ہیں۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ C. عربیکا کے نچوڑوں میں اینٹی بیکٹیریل، 5 اینٹی وائرل، 6 اینٹی انفلامیٹریز، 7 جلد کے زخم کو ٹھیک کرنا، اور میکرو مالیکیولز کو آکسیڈیٹیو نقصان میں کمی؟ اور میٹالوپروٹینیس اظہار کی دبانے والی سرگرمی۔10

کلوروجینک ایسڈ، سبز کافی کی پھلیاں کا بڑا پولی فینولک مرکب اینٹی آکسیڈینٹ اور ڈیپگمنٹیشن خصوصیات رکھتا ہے اور یہ UV سے متاثرہ جلد کو پہنچنے والے نقصان کو روکتا ہے۔ I2 سائنسی مطالعات کے مطابق، سبز کافی کی پھلیاں بھنی ہوئی کافی کی پھلیاں اور دیگر پودوں کے مقابلے میں کلوروجینک ایسڈ کی زیادہ مقدار پر مشتمل ہوتی ہیں۔ "3

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

جلد کے ذریعے پولیفینول کی ترسیل اس کی محدود رسائی کی وجہ سے غیر موثر ہے۔ اس طرح اس کے دخول کو بڑھانے والے فارمولیشن بیس یا دخول بڑھانے والے کی ضرورت ہے۔" اس لیے لیپوسومز کو منشیات کے کیریئر کے طور پر منتخب کیا گیا کیونکہ وہ فطرت میں ایمفیفیلک ہوتے ہیں اور ہائیڈرو فیلک مالیکیول آسانی سے مرتکز بائلیئرز میں سرایت کر سکتے ہیں۔ لیپوسومز جسمانی طور پر خلیے کی جھلی سے ملتے جلتے ہیں۔ -فطری طور پر زہریلا۔ لیپوسومز میں فاسفولیپڈز کی موجودگی جلد پر دوائی فاسفولیپڈ کمپلیکس کے چپکنے میں اضافے کی وجہ سے ایپیڈرمس سے نچلی تہوں میں دوائیوں کے حالات کے جذب کو بہتر بناتی ہے۔'5 موجودہ مطالعے کا مقصد یہ ہے کہ جیل جس میں سبز کافی بین کے عرق سے بھری ہوئی لیپوسومز کو اینٹی آکسیڈینٹ کاسمیٹک فارمولیشن کے طور پر استعمال کیا جائے گا جو اینٹی ایجنگ اثرات کے لیے ہے۔

مواد اور طریقے مواد

گرین کافی عربیکا ایل بینز اگست 2019 میں ممبئی کی مقامی مارکیٹ سے حاصل کی گئی تھیں اور ڈاکٹر ہرشد ایم پنڈت نے ان کی تصدیق کی تھی۔ نباتیات کے سابق سربراہ اور ایسوسی ایٹ پروفیسر، گرو نانک خالصہ کالج، ممبئی، انڈیا۔ فاسفیٹائڈیلچولین ہائی میڈیا لیبارٹریز پرائیویٹ لمیٹڈ سے خریدی گئی، کولیسٹرول 99 فیصد لوبا کیمی پرائیویٹ لمیٹڈ سے خریدا گیا، 2،2-ڈفینائل-1-پکریل ہائیڈرزائل (ڈی پی پی ایچ)، اور کلوروجینک ایسڈ اوٹو کیمی پرائیویٹ لمیٹڈ، ممبئی سے خریدا گیا۔ . گیلک ایسڈ اور ایسکوربک ایسڈ ایس ڈی فائن کیمیکلز لمیٹڈ، ممبئی سے منگوائے گئے تھے۔ اس تحقیق میں استعمال ہونے والے تمام کیمیکلز AR گریڈ کے تھے۔ لیپوسومز کو روٹری ایوپوریٹر، روٹیوا، ایکوئٹرون، اور یووی ویزیبل سپیکٹرو فوٹومیٹر کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا تھا، شیمادزو 1800 لیپوسومز کی تشخیص کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

Cistanche بڑھاپے کو روک سکتا ہے۔

طریقے

نکالنے کا طریقہ کار

پاؤڈر شدہ سبز کافی بینز کو سوکسہلیٹ اپریٹس میں 3 گھنٹے کے لیے پیٹرولیم ایتھر 40-60 ڈگری (1:6 فیصد w/v) کا استعمال کرتے ہوئے ڈیفیٹ کیا گیا۔ ڈیفیٹڈ گرین کافی پاؤڈر کو مختلف سالوینٹس جیسے پانی، 25 فیصد میتھانول، 50 فیصد میتھانول، 75 فیصد میتھانول، اور 100 فیصد میتھانول 2 گھنٹے کے لیے سوکسلیٹ سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا۔ اس کے نتیجے میں نکالے گئے نچوڑ کو چینی مٹی کے برتن میں 80 ڈگری پر برقی پانی کے غسل پر مرتکز کیا گیا تاکہ سالوینٹس کو نکالا جا سکے۔ تیار شدہ نچوڑ کو کوالٹی اور مقداری تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

کل فینولک مواد

کل فینولک مواد کا تعین معیاری طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے Folin-Ciocalteu reagent طریقہ سے کیا گیا تھا۔ گیلک ایسڈ کو ایک معیاری کے طور پر استعمال کیا گیا تھا اور کل پولی فینولک مواد کو گیلک ایسڈ کے کیلیبریشن کریو سے mg/g گیلک ایسڈ مساوی (GAE) کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔

سپیکٹرل اوورلے

نچوڑ میں کلوروجینک ایسڈ کی موجودگی کا تعین کرنے کے لیے یووی سپیکٹرو میٹرک طریقہ استعمال کیا گیا تھا۔ معیاری محلول کی تیاری کے لیے، معیاری کلوروجینک ایسڈ کے Img/ml کو فاسفیٹ بفر میں تحلیل کیا گیا اور معیاری محلول کے 10 ug/ml حاصل کرنے کے لیے مزید کمزوری تیار کی گئی۔ نمونے کے حل کے لیے، 1 ملی گرام/ملی لیٹر میتھانولک نچوڑ کا 25 فیصد فاسفیٹ بفر میں تحلیل کیا گیا اور 10 ug/ml معیاری محلول حاصل کرنے کے لیے مزید کمزوری تیار کی گئی۔ دونوں حل کا ایک اوورلے سپیکٹرم UV-Vis spectrophotometry کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کیا گیا تھا۔

ہر ایک نچوڑ میں کلوروجینک ایسڈ کی مقدار معیاری حل کی تیاری

معیاری کلوروجینک ایسڈ پانی، 25 فیصد میتھانول، 50 فیصد میتھانول، 75 فیصد میتھانول، اور 100 فیصد میتھانول جیسے سالوینٹس میں تحلیل کیا گیا تھا۔ تیاری کے طریقہ کار میں خرابی کو کم کرنے کے لیے، کلوروجینک ایسڈ 10 پی پی ایم محلول ہر اوپر والے سالوینٹس میں تیار کیا گیا تھا، اور پھر ارتکاز 2 سے 10 پی پی ایم تک اسی طرح کی کمی کو تیار کیا گیا تھا۔ لکیریٹی پلاٹ UV-Vis اسپیکٹرو فوٹومیٹر کا استعمال کرتے ہوئے 324 nm پر جاذبیت کو ریکارڈ کرکے بنایا گیا تھا۔

نمونہ حل کی تیاری

نمونے کے حل کی تیاری کے لیے، عرقوں کو ان کے متعلقہ سالوینٹس میں تحلیل کیا گیا اور 10 پی پی ایم محلول بنایا گیا۔ نمونے کے حل کے لیے جذب کو UV-Vis اسپیکٹرو فوٹومیٹر کا استعمال کرتے ہوئے 324 nm پر ریکارڈ کیا گیا۔ حاصل شدہ جاذبیت کو ہر ایک نچوڑ میں کلوروجینک ایسڈ کا ارتکاز تلاش کرنے کے لیے لکیریٹی پلاٹ میں نکالا گیا تھا۔

اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں کا تعین

PDF (2,2-diphenyl -1-picrylhydrazyl) اینٹی آکسیڈینٹ پرکھ DPPH ریڈیکلز پر نچوڑ کی ریڈیکل سکیوینگنگ سرگرمی کی جانچ معیاری طریقہ پر عمل کرتے ہوئے کی گئی۔ Ascorbic ایسڈ کو معیاری کے طور پر استعمال کیا گیا۔ تجربہ سہ رخی میں کیا گیا۔ DPPH ریڈیکل اسکیوینگنگ سرگرمی کا فیصد ہر ایک نچوڑ کے ارتکاز کے خلاف تیار کیا گیا تھا اور IC کا تعین کیا گیا تھا۔ نائٹرک آکسائیڈ اینٹی آکسیڈینٹ پرکھ

نائٹرک آکسائیڈ ریڈیکل اسکیوینگنگ سرگرمی کی تحقیقات گریس ایلوسوائے رد عمل کے ذریعے کی گئیں۔کھوئی ہوئی ایمپائر سیستانچl8 Ascorbic ایسڈ معیاری کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ تجربہ سہ رخی میں کیا گیا تھا۔ نائٹرک آکسائیڈ ریڈیکل سکیوینگنگ سرگرمی کی فیصد کو ہر ایکسٹریکٹ ارتکاز کے خلاف پلاٹ کیا گیا تھا اور دونوں اینٹی آکسیڈینٹ اسٹڈیز کے لیے IC فیصد انحبیشن کا حساب ذیل کے فارمولے کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا سکیوینجنگ ایکٹیویٹی کو مندرجہ ذیل فارمولے کا استعمال کرتے ہوئے انحبیشن فیصد کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا:

MTT Assay Green coffee beans extract یعنی L929 سیل لائنوں کے خلاف cytotoxicity کے مطالعہ کے لیے 25 فیصد میتھانولک ایکسٹریکٹ کے ذریعے سیل کی قابل عملیت کا تعین۔ سیل کثافت (20،000 سیل فی کنواں)، بغیر ٹیسٹ ایجنٹ کے۔ خلیوں کو تقریباً 24 گھنٹے تک بڑھنے دیا گیا۔ ٹیسٹ ایجنٹ کی مناسب حراستی (25 فیصد میتھانولک ایکسٹریکٹ) شامل کی گئی، پلیٹ کو 5 فیصد CO، ماحول میں 24 گھنٹے تک 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا، اور خرچ شدہ میڈیا کو ہٹا دیا گیا۔ MTT ریجنٹ کو کل حجم کے (0.5mg/mL) کے حتمی ارتکاز میں شامل کیا گیا تھا اور پلیٹوں کو تاریک حالات میں 2-3 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ MIT ری ایجنٹ کو ہٹانے اور آہستہ سے ہلانے کے بعد 100 ul DMSO شامل کیا گیا۔ ELISA ریڈر پر اسپیکٹرو فوٹومیٹر کا استعمال کرتے ہوئے جذب کو 570nm اور 630nm پر ماپا گیا۔ IC.o قدر کا تعین لکیری ریگریشن مساوات کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ مطالعہ کے لیے استعمال ہونے والے فارمولے:

اینٹی Elastase سرگرمی کا تعین

خلیوں کو 3×105 خلیات/2 ملی لیٹر کی کثافت پر کلچر کیا گیا تھا اور ایک CO، انکیوبیٹر میں 37 ڈگری پر 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ 1 اینٹی ایلسٹیس اسٹڈی کے لیے، 250uM epigallocatechin gallate (EGCG) کے ساتھ علاج کیے گئے خلیات کو مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا، خلیوں کا علاج 200ug/ml 25 فیصد میتھانولک ایکسٹریکٹ کو ٹیسٹ کے نمونے کے طور پر استعمال کیا گیا تھا (ٹیبل 6)، اور صرف کلچر میڈیا والے سیلز کو منفی کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا اور 24 گھنٹے تک کلچر میڈیم کے 2ml میں انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ ٹیوبوں کو 25 ڈگری پر 300x جی پر پانچ منٹ کے لئے سینٹرفیوج کیا گیا اور خلیوں کو پی بی ایس سے دھویا گیا۔ PBS کو ہٹانے کے بعد BD Cytofix/Cytoperm محلول کا 0.5 ملی لیٹر شامل کیا گیا اور ٹیوبوں کو 10 منٹ تک بغیر کسی رکاوٹ کے رکھا گیا۔ 0.5 فیصد بوائین سیرم البومین (BSA) S[PO OU] USEM Ol pes sem op پر فیصد I'O pue میں ماؤس اینٹی ہیومن نیوٹروفیل ایلسٹیز/ELA2 Alexa Fluor® 647- کا SEd 20 μL کنجوگیٹڈ مونوکلونل اینٹی باڈی شامل کیا گیا، ملایا گیا اور تاریک حالت میں کمرے کے درجہ حرارت پر 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ خلیوں کا علاج 0.1 فیصد سوڈیم ایزائڈ اور 0.5 ملی لیٹر پی بی ایس کے ساتھ کیا گیا اور فلو سائٹومیٹری کے ذریعہ بالترتیب 650nm اور 668nm کے جوش اور اخراج کے ساتھ تجزیہ کیا گیا۔ اس مطالعہ میں، ٹیسٹ مرکبات یعنی گرین کافی بین ایکسٹریکٹ (25 فیصد میتھانولک ایکسٹریکٹ) اور معیاری Epigallocatechin gallate (EGCG) کو L929 سیل میں ELA-2 (کنجوگیٹڈ ماؤس اینٹی ہیومن ایلسٹیس اینٹی باڈی) اظہار پر ان کے اثر کا اندازہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا۔ لائنیں

گرین کافی بینز کی تیاری بھری ہوئی لیپوسومز کے نچوڑ

پتلی فلم ہائیڈریشن کا طریقہ جیسا کہ Bangham et al.1 ڈگری نے بیان کیا ہے اسے لیپوسومز بنانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ لپڈ مرکب کو کلوروفارم اور میتھانول (2:1) میں فاسفیٹائڈیلچولین اور کولیسٹرول کو گول نیچے فلاسک (RBF) میں تحلیل کرکے تیار کیا گیا تھا اور یکساں فلم کی تشکیل کے لئے شیشے کے موتیوں کو شامل کیا گیا تھا۔ RBF کو روٹری فلیش ایوپوریٹر (روٹیوا، مساوات) سے منسلک کیا گیا تھا اور اسے 40 ڈگری پر تھرموسٹیٹڈ پانی کے غسل میں 80 rpm/منٹ پر گھومنے کی اجازت تھی۔ نامیاتی سالوینٹس کو ویکیوم کے سست استعمال سے ہٹا دیا گیا جس کی وجہ سے فلاسک کی دیواروں پر 100 فیصد یکساں لپڈ فلم بنتی ہے۔ نامیاتی سالوینٹس کے مکمل خاتمے کے لیے فلم کو LH کے لیے خشک ہونے دیا گیا۔ خشک لپڈ فلم کو فاسفیٹ بفر (pH: 5.4) کے ساتھ ہائیڈریٹ کیا گیا تھا جس میں تحلیل شدہ عرق (25 فیصد میتھانولک ایکسٹریکٹ) تھا اور پھر RBF کو 150 rpm/min پر ایک تھرموسٹیٹڈ پانی کے غسل میں گھمایا گیا تھا جو کہ منتقلی کے درجہ حرارت سے اوپر ہے 46 ڈگری پر برقرار رکھا گیا تھا۔ لپڈ کی. یکساں معطلی حاصل کرنے تک گردش 60 منٹ تک جاری رکھی گئی۔ اس طریقہ کار کو استعمال کرتے ہوئے تیار کیے گئے لیپوسومز سائز میں بڑے اور متضاد ہیں، اس طرح لیپوسومز کو کم کرنے کے لیے غسل سونیکیشن کا طریقہ 30 منٹ تک استعمال کیا گیا۔ مکمل ہائیڈریشن کو یقینی بنانے کے لیے گرین کافی بینز کے عرق پر مبنی لیپوسومل سسپنشن کو کمرے کے درجہ حرارت پر 2 گھنٹے تک کھڑے رہنے کی اجازت تھی۔ لیپوسومل سسپنشن کو عنبر رنگ کی شیشے کی بوتل میں فریج میں مزید استعمال تک محفوظ کیا گیا تھا۔

لیپوسومز کی خصوصیت

مندرجہ ذیل پیرامیٹرز ہیں جن کے لئے تیار شدہ لیپوسومز کی خصوصیات تھیں۔

Encapsulation Efficiency کا تعین UV-Vis spectrophotometer کا استعمال گرین کافی بین ایکسٹریکٹ سے بھری ہوئی لیپوسومز میں کلوروجینک ایسڈ کی انکیپسولیشن کی کارکردگی کا اندازہ لگانے کے لیے کیا گیا تھا۔ سینٹرفیوگریشن کے بعد سپرنٹنٹ میں باقی رہنے والے کلوروجینک ایسڈ کے جذب کو UV-Vis spectrophotometer کا استعمال کرتے ہوئے 324 nm پر ماپا گیا۔مائکرونائزڈ پیوریفائیڈ فلاوونائڈ فریکشن 1000 ملی گرام استعمال کرتا ہے۔پھر، ارتکاز کا حساب معیاری کلوروجینک ایسڈ کے لیے حاصل کردہ انشانکن پلاٹ سے کیا گیا۔

آپٹیکل مائیکروسکوپی میں شامل کردہ دوائیوں کی کل مقدار

لیپوسومل معطلی کا ایک قطرہ صاف شیشے کی سلائیڈ پر رکھا گیا تھا اور آپٹیکل مائکروسکوپ (موٹک مائکروسکوپ) کے 45X اور 100X کی طاقت کے تحت مشاہدہ کیا گیا تھا۔ Vesicle سائز، Polydispersibility Index (PDI)، اور Zeta Potential کا تعین

کمپیوٹرائزڈ انسپیکشن سسٹم (مالورن پارٹیکل سائز اینالائزر) کے ساتھ متحرک روشنی بکھیرنے والے آلے کا استعمال کرکے ویسیکل سائز اور پولی ڈسپرسیبلٹی انڈیکس کا تجزیہ کیا گیا۔ تازہ تیار شدہ لیپوسومل بیچز کو 1:100 کے تناسب سے ڈیونائزڈ پانی سے پتلا کیا گیا تھا۔ تمام پیمائشیں 25±0.5 ڈگری پر سہ رخی میں کی گئیں۔ لیپوسومل معطلی کو ڈیونائزڈ پانی سے پتلا کیا گیا تھا اور مالورن زیٹازائزر کا استعمال کرتے ہوئے زیٹا کی صلاحیت کا تعین کیا گیا تھا۔

ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی (TEM) TEM تجزیہ ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی (Tecnai T20,200Kev, FEI) کے ذریعہ منشیات سے بھری ہوئی معطلی کے لئے کیا گیا تھا۔ گرڈ پر مائکروپپیٹ کی مدد سے معطلی کا ایک قطرہ رکھا گیا تھا۔ گرڈ اچھی طرح خشک کیا گیا تھا. نمونے پر مشتمل خشک گرڈ پر 200 VK پر تیز رفتار الیکٹرانوں سے بمباری کی گئی۔ پھر ویکیوم کے تحت ٹی ای ایم کے ذریعہ ویسیکل سائز اور لیپوسومل مورفولوجی کا تصور کیا گیا (شکل 1)۔ لیپوسومل جیل کی تیاری

گرین کافی بینز ایکسٹریکٹ لوڈڈ لیپوسومل جیل کاربوپول@974P جیل بیس کا استعمال کرکے تیار کیا گیا تھا۔ درست طریقے سے 0.5 فیصد carbopol@974P کا وزن کیا گیا تھا اور اسے رات بھر پرزرویٹیو پر مشتمل ڈبل ڈسٹل واٹر میں ہائیڈریشن کے لیے رکھا گیا تھا۔ سنٹرفیوگریشن کے بعد حاصل کیے گئے لیپوسومل چھرے سونیکیشن کے ذریعے ڈسٹل واٹر میں منتشر کیے گئے اور ہلچل کے ساتھ ہائیڈریٹڈ کاربوپول محلول میں شامل کیے گئے۔ گیلنگ کو ٹرائیتھانولامین (ٹی ای اے) کا استعمال کرتے ہوئے غیرجانبدار کرنے کی طرف راغب کیا گیا تھا۔ جیل کا رنگ، ساخت (ہمواری اور چکنائی)، پی ایچ، واسکاسیٹی، منشیات کے مواد، پھیلاؤ، اور منشیات کے مطالعہ کو جاری کرنے کے لیے جانچا گیا تھا۔

وٹرو منشیات کی رہائی کا مطالعہ

فرانز ڈفیوژن سیل اپریٹس جس میں ریسیپٹر کمپارٹمنٹ کی گنجائش 22 ملی لیٹر ہے اور سطح کا رقبہ 3.91 سینٹی میٹر 2 ہے وٹرو ڈرگ ریلیز ڈائلیسس میمبرین (سالماتی وزن کٹ آف 12،000-14،000) میں تخمینہ لگانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ راتوں رات بفر میں بھگو کر پہلے سے ہائیڈریٹ کیا گیا تھا سیلوں پر نصب کیا گیا تھا۔ فاسفیٹ بفر pH 5.4 (37 ڈگری ±0.5 ڈگری ) کو رسیپٹر سیال کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ ذخائر کے محلول کو مقناطیسی مالا کا استعمال کرتے ہوئے 100 rpm/منٹ پر ہلایا گیا۔ 0.5 جی جیل کو جھلی پر ڈونر کے ٹوکری میں رکھا گیا تھا۔ ایلی کوٹس کو 1,2, 3, 4, 5,6,7,8,12, اور 24 گھنٹے کے وقفوں پر جمع کیا گیا اور UV-Vis spectrophotometer کے ذریعے 324nm.20 پر تجزیہ کیا گیا۔

نتائج اور بحث نکالنے کا طریقہ کار

سبز کافی عربیکا ایل بینز کے نچوڑ کی فیصد پیداوار جدول 3 میں پیش کی گئی ہے۔ تمام عرقوں کی ظاہری شکل گہرا پیلا اور گہرا بھورا تھا۔ میتھانولک نچوڑ کے 25 فیصد نے دیگر تمام نچوڑ کے مقابلے میں 26.54±0.13 پر سب سے زیادہ فیصد پیداوار ظاہر کی۔

کل فینولک مواد

Folin-Ciocalteu طریقہ تمام نچوڑ کے کل فینولک مواد کا اندازہ لگانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ تمام نچوڑ کے TPC کا اظہار گیلک ایسڈ کے مساوی کے لحاظ سے کیا گیا ہے (معیاری منحنی مساوات: y= 0۔ تمام نچوڑ میں سے اہم فینولک مواد کا اندازہ 25 فیصد میتھانولک عرق میں لگایا گیا ہے۔ ہر ایک نچوڑ میں کلوروجینک ایسڈ کی سپیکٹرل اوورلے مقدار کا تعین ہر ایک نچوڑ میں موجود کلوروجینک ایسڈ کی مقدار کا ذکر جدول 3 اور شکل 2 میں کیا گیا ہے۔otflavonoidنتائج کے مطابق کلوروجینک ایسڈ کی سب سے زیادہ مقدار 25 فیصد میتھانولک ایکسٹریکٹ میں پائی گئی۔

کل فینولک مواد سے حاصل کردہ نتائج کی بنیاد پر، کلوروجینک ایسڈ کی مقدار، اور اینٹی آکسیڈینٹ پرکھ کے 25 فیصد میتھانولک ایکسٹریکٹ میں سب سے زیادہ فینولک مواد، کلوروجینک ایسڈ کی زیادہ مقدار، اور دیگر نچوڑ کے مقابلے میں زیادہ سے زیادہ ریڈیکل اسکیوینگنگ سرگرمی پائی گئی۔

MTT Assay کے ذریعے سیل کی قابل عملیت کا تعین Viability پرکھ ایک پرکھ ہے جو ٹشوز، خلیات، یا اعضاء کی بقا کی حالت کو برقرار رکھنے یا بحال کرنے کی صلاحیت کا تعین کرتی ہے۔ ELISA ریڈر کے ذریعہ سیل سائٹوٹوکسٹی اسٹڈی کے اعدادوشمار کے اعداد و شمار میں L929 سیل لائنوں کے خلاف ٹیسٹ کمپاؤنڈ، گرین کافی بین ایکسٹریکٹ کا سائٹوٹوکسیٹی اسٹڈی نے تجویز کیا کہ گرین کافی بین ایکسٹریکٹ نے 30ug/30g/30g/30ml کے مقابلے میں معتدل سائٹوٹوکسیٹی ممکنہ خصوصیات ظاہر کیں۔ 23ug/ml کے ساتھ دوائی کیمپٹوتھیسن ٹیبل 5۔ مشاہدے سے پختہ طور پر پتہ چلتا ہے کہ سبز کافی بین کے عرق میں 12 سے لے کر ارتکاز کے ساتھ نمایاں سائٹوٹوکسیٹی صلاحیت نہیں ہے۔ (گراف 1)۔

اینٹی Elastase سرگرمی کا تعین

انزائم ایلسٹیز ایلسٹن کو توڑنے کی صلاحیت رکھتا ہے، ایک ناقابل حل لچکدار ریشہ دار پروٹین جو کولیجن کے ساتھ مل کر جوڑنے والے بافتوں کی میکانکی طاقت میں حصہ ڈالتا ہے۔ متعدد مطالعات نے تجویز کیا ہے کہ جلد کی عمر بڑھنے اور جھریوں کے خلاف اثرات دونوں نمایاں طور پر کم ایلسٹیس سرگرمی سے مطابقت رکھتے ہیں۔ اس طرح اینٹی ایجنگ ایجنٹ کے طور پر گرین کافی بین کے عرق کی افادیت کی تصدیق کے لیے اینٹی ایلسٹیز اسٹڈیز کی گئیں۔ اس مطالعہ میں، ٹیسٹ کمپاؤنڈ یعنی گرین کافی بین ایکسٹریکٹ اور Std، EGCG کا استعمال L929 سیل لائن میں ELA-2 (کنجوگیٹڈ ماؤس اینٹی ہیومن ایلسٹیس اینٹی باڈی) اظہار پر ان کے اثر کا جائزہ لینے کے لیے کیا گیا تھا۔ تجربے میں استعمال ہونے والے مرکبات کی تعداد حسب ذیل تھی:

دیئے گئے ٹیسٹ کمپاؤنڈ GC بین ایکسٹریکٹ نے L929 سیل لائن میں ELA-2 اظہار کو دبا دیا۔ ELA-2 کی نسبتہ اوسط فلوروسینس شدت کی قدریں تقریباً اسی طرح std، Epigallocatechin gallate، اور ٹیسٹ کمپاؤنڈ گرین کافی بین ایکسٹریکٹ میں کم ہوئیں۔ (ٹیبل 7؛ شکل 3 اور ہسٹوگرام 1)۔ لہذا، جی سی بین کو ایک اچھا اینٹی ایلسٹیس ایجنٹ سمجھا جا سکتا ہے۔ گرین کافی بینز کی تیاری بھری ہوئی لیپوسومز کے نچوڑ

اس تحقیق میں لیپوسومز بنانے کے لیے پتلی فلم ہائیڈریشن کا طریقہ استعمال کیا گیا۔puritans وٹامن سیاس کو منتخب کرنے کی وجہ

طریقہ یہ ہے کیونکہ یہ ملٹی لیملر ویسیکلز کی تیاری کا سب سے آسان طریقہ ہے اور یہ ہائیڈرو فیلک مالیکیولز جیسے کہ کلوروجینک ایسڈ کو یونی لیملر ویسیکلز کے مقابلے میں لوڈ کرنے کی صلاحیت رکھتا ہے۔ پتلی فلم ہائیڈریشن کا طریقہ نچوڑ ٹیبل 2 میں موجود کلوروجینک ایسڈ کے لیے انکیپسولیشن کی 75 فیصد کارکردگی دیتا ہے۔

لیپوسومس آپٹیکل مائکروسکوپی کی خصوصیت

ملٹی میلر ویسیکل واضح طور پر دیکھا گیا تھا (شکل 4)۔ خوردبین مشاہدات کا استعمال تمام تیار کردہ بیچوں کے لئے نوٹ کردہ vesicles کی شکل اور سائز کا اندازہ کرنے کے لئے کیا گیا تھا۔

Polydispersibility Index (PDI)، Zeta Potential، اور Vesicle سائز کا تعین

PDI بنیادی طور پر دیے گئے نمونے میں vesicles کے سائز کی تقسیم کے لیے ظاہر ہوتا ہے۔sistanchePDI کی عددی قدر {{0}} سے شروع ہوتی ہے۔{5}} (بالکل یکساں ذرہ سائز) 1.1 (انتہائی پولی ڈسپرس پارٹیکل سائز) تک۔ لپڈ پر مبنی کیریئر سسٹمز جیسے لیپوسومز اور 0.3 اور اس سے نیچے کے nanoliposomes قابل قبول ہیں کیونکہ یہ phospholipid vesicles کی یکساں آبادی کو ظاہر کرتا ہے۔ -30 mV سے plus 30mV تک کی قدر کو عام طور پر بہتر جسمانی کولائیڈیل استحکام حاصل کرنے کے لیے کافی رجعتی قوت سمجھا جاتا ہے۔

پتلی فلم ہائیڈریشن کا طریقہ بڑے اور متفاوت ملٹی میلر ویسکلز دیتا ہے۔ تیار شدہ لیپوسومز کے سائز کے تجزیے سے ظاہر ہوا کہ زیڈ اوسط (d.nm) سائز 864.2 nm، PDI 0.375، اور Zeta Potential of -12.4 اچھے کے ساتھ پھنسانے کی کارکردگی.

ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکروسکوپی (TEM) TEM کے ذریعہ ان لیپوسومز کے مورفولوجیکل تجزیے میں کروی کی شکل کے لیپوسومز دکھائے گئے۔ لیپوسومل جیل کی تیاری

اسی طرح کے جیل دینے کے لئے لیپوسومل بازی کو پولیمر کے ساتھ آسانی سے ملایا گیا تھا۔ لیپوسومل جیل کی تشکیل فائدہ مند ہے کیونکہ vesicles کے فیوژن کو مؤثر طریقے سے گریز یا کم کیا جا سکتا ہے کیونکہ پولیمر لیپوسومس کے درمیان سپیسر کا کام کرتا ہے۔ اس طرح، ویسیکل سائز متاثر نہیں ہوتا ہے کیونکہ یہ ایک کنٹرول شدہ پولیمر/لیپوزوم تعامل کا عمل ہے۔ لیپوسومل پر مبنی کریم فارمولیشن کا انتخاب نہیں کیا گیا تھا کیونکہ اس طریقہ کار کی وجہ سے ایملشن پر مبنی مصنوعات میں استحکام کے مسائل کی اطلاع دی جاتی ہے کیونکہ یہ ملٹی میلر ویسکلز کی تیاری کا سب سے آسان طریقہ ہے اور یہ ہائیڈرو فیلک مالیکیولز جیسے کہ کلوروجینک ایسڈ کے مقابلے میں زیادہ مقدار میں لوڈ کرنے کی صلاحیت رکھتا ہے۔ unilamellar vesicles. پتلی فلم ہائیڈریشن کا طریقہ نچوڑ ٹیبل 2 میں موجود کلوروجینک ایسڈ کے لیے انکیپسولیشن کی 75 فیصد کارکردگی دیتا ہے۔

لیپوسومس آپٹیکل مائکروسکوپی کی خصوصیت

ملٹی میلر ویسیکل واضح طور پر دیکھا گیا تھا (شکل 4)۔ خوردبین مشاہدات کا استعمال تمام تیار کردہ بیچوں کے لئے نوٹ کردہ vesicles کی شکل اور سائز کا اندازہ کرنے کے لئے کیا گیا تھا۔

Polydispersibility Index (PDI)، Zeta Potential، اور Vesicle سائز کا تعین

PDI بنیادی طور پر دیے گئے نمونے میں vesicles کے سائز کی تقسیم کے لیے ظاہر ہوتا ہے۔ PDI کی عددی قدر {{0}} سے شروع ہوتی ہے۔{5}} (بالکل یکساں ذرہ سائز) 1.1 (انتہائی پولی ڈسپرس پارٹیکل سائز) تک۔ لپڈ پر مبنی کیریئر سسٹمز جیسے لیپوسومز اور 0.3 اور اس سے نیچے کا سائز نانولیپوسومز قابل قبول ہے کیونکہ یہ فاسفولیپڈ ویسیکلز کی یکساں آبادی کی نشاندہی کرتا ہے۔ -30 mV سے plus 30mV تک کی قدر کو عام طور پر بہتر جسمانی کولائیڈیل استحکام حاصل کرنے کے لیے کافی رجعتی قوت سمجھا جاتا ہے۔ 2

پتلی فلم ہائیڈریشن کا طریقہ بڑے اور متفاوت ملٹی میلر ویسکلز دیتا ہے۔ تیار شدہ لیپوسومز کے سائز کے تجزیے سے ظاہر ہوا کہ زیڈ اوسط (d.nm) سائز 864.2 nm، PDI 0.375، اور Zeta Potential of -12.4 اچھے کے ساتھ پھنسانے کی کارکردگی.

ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکروسکوپی (TEM) TEM کے ذریعہ ان لیپوسومز کے مورفولوجیکل تجزیے میں کروی کی شکل کے لیپوسومز دکھائے گئے۔

لیپوسومل جیل کی تیاری

اسی طرح کے جیل دینے کے لئے لیپوسومل بازی کو پولیمر کے ساتھ آسانی سے ملایا گیا تھا۔ لیپوسومل جیل کی تشکیل فائدہ مند ہے کیونکہ vesicles کے فیوژن کو مؤثر طریقے سے گریز یا کم کیا جا سکتا ہے کیونکہ پولیمر لیپوسومس کے درمیان سپیسر کا کام کرتا ہے۔ اس طرح، ویسیکل سائز متاثر نہیں ہوتا ہے کیونکہ یہ ایک کنٹرول شدہ پولیمر/لیپوزوم تعامل کا عمل ہے۔ لیپوسومل پر مبنی کریم کی تشکیل کا انتخاب نہیں کیا گیا تھا کیونکہ ایملشن پر مبنی مصنوعات میں استحکام کے مسائل کی اطلاع دی جاتی ہے۔

سرفیکٹنٹ اور اضافی تیل کی موجودگی جو vesicles کے ساتھ تعامل کر سکتی ہے۔ پولیمر کے ارتکاز کو مختلف کرکے یا پولیمر کی قسم کو تبدیل کرکے مختلف خصوصیات جیسے viscosity کو آسانی سے کنٹرول کیا جاسکتا ہے۔ اس طرح لیپوسومل جیل تیار کیے گئے تھے کیونکہ وہ استحکام کے مسئلے کو دور کرتے ہیں، کنٹرول ریلیز فراہم کرتے ہیں، تیار کرنے میں آسان، اور جلد کی دیکھ بھال کے کاسمیٹکس کے طور پر جمالیاتی اپیل رکھتے ہیں۔ 0.5 فیصد w/w carbopol@974P میں اچھی مستقل مزاجی اور ہموار شکل پائی گئی جس میں کسی بھی مجموعے سے مبرا نہیں ہے۔ لیپوسومل جیل کے لیے منشیات کا مواد 13,500 cps سے 16,500 cps اور 7-8 g.cm/s کے ارد گرد پھیلنے کی صلاحیت کے ساتھ 94.16±1.3 پایا گیا۔

وٹرو منشیات کی رہائی کا پروفائل

جلد کی سب سے بیرونی تہہ سٹریٹم کورنیئم ہے اور یہ بنیادی طور پر پروٹین کیراٹین اور لپڈس پر مشتمل ہوتی ہے۔ انٹر سیلولر لپڈز پرکیوٹینیئس جذب کو کنٹرول کرنے میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ انٹر سیلولر لپڈز لیپوسومز میں موجود فاسفولیپڈز کے ساتھ تعامل کر سکتے ہیں اور اس طرح سٹریٹم کورنیئم کے متعدد بلیئر ڈھانچے کو تبدیل کیے بغیر لپڈس کی سوجن کا سبب بن سکتے ہیں۔ یہ سوجن لپڈس کی وجہ سے دوائی جمع ہوتی ہے اور ایک انٹرا کیوٹینیئس ڈپو بنتی ہے۔ اگرچہ ٹاپیکل طور پر لاگو لیپوسومز کا طریقہ کار پوری طرح سے نہیں سمجھا جاتا ہے، لیکن لپڈ کمپوزیشن، سطح کا چارج، اور لیپوسومل لیملیریٹی بنیادی طور پر منشیات کے اخراج میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ مطالعہ نے یہ بھی انکشاف کیا ہے کہ حالات کی ترسیل بھی لائپوسومز کے سائز سے متاثر ہوتی ہے۔ لیپوسومل جیل کے ان وٹرو =ریلیز اسٹڈی نے روایتی جیل گراف 2 کے 7-8 گھنٹے کے مقابلے میں 12 گھنٹے تک مستقل رہائی کا اثر دکھایا ہے۔

نتیجہ

گرین کافی عربیکا پھلیوں کے نچوڑوں کو کل فینولک مواد، کلوروجینک ایسڈ کی مقدار، اور اینٹی آکسیڈینٹ پرکھ کے لیے اسکرین کیا گیا تھا۔ ان مطالعات سے حاصل کردہ نتائج کی بنیاد پر 25 فیصد میتھانولک ایکسٹریکٹ کو لائپوسومز میں شامل کرنے کا انتخاب کیا گیا کیونکہ اس میں سب سے زیادہ فینولک مواد، زیادہ مقدار میں کلوروجینک ایسڈ اور بہتر اینٹی آکسیڈنٹ سرگرمی دکھائی گئی تھی۔ لیپوسومز میں عرق کو شامل کرنے سے پہلے اسے MTT اور antielastase پرکھ کے لیے اسکرین کیا گیا تھا۔ ایم ٹی پرکھ کی بنیاد پر نچوڑ میں سیل کی سائٹوٹوکسائٹی کی کوئی صلاحیت نہیں تھی اور اینٹی ایلسٹیز پرکھ کے مطابق، نچوڑ میں اینٹی ایلسٹیز سرگرمی تھی۔ اس طرح عرق کو اینٹی ایجنگ لائپوسومز بنانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ پتلی فلم ہائیڈریشن کے طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے ملٹی میلر ویسیکل تیار کیے گئے تھے۔ تیار شدہ لیپوسومز میں اچھی انکیپسولیشن کی کارکردگی اور بہتر جسمانی استحکام تھا۔ نچوڑ پر مبنی لیپوسومل معطلی کو لیپوسومل جیل میں تیار کیا گیا تھا۔ وٹرو ڈرگ ریلیز اسٹڈی کے مطابق لیپوسومل جیل نے روایتی جیل کے مقابلے میں 12 گھنٹے تک طویل ریلیز اثر دکھایا ہے۔ اس لیے سبز کافی بین کے عرق سے بھری ہوئی لیپوسومز کو اینٹی ایجنگ پوٹینشل کے ساتھ ٹاپیکل ڈیلیوری کے لیے ایک موثر کیریئر سمجھا جا سکتا ہے۔

اعتراف

مصنفین ایم ٹی ٹی پرکھ اور اینٹی ایلسٹیس پرکھ کے مطالعے کو مکمل کرنے میں ان کی مدد کے لیے سٹیلیکسیر بائیوٹیکنالوجی، بنگلورو اور کرناٹک کے شکر گزار ہیں، ہم اسپرنٹ ٹیسٹنگ سلوشنز، ممبئی ٹی ای ایم امیجنگ اور ہمارے کالج ایس وی کے ایم کے ڈاکٹر بھانوبین ناناوتی کالج آف فارمیسی کا بھی شکریہ ادا کرتے ہیں۔ اس مطالعہ کو انجام دینے کے لیے بہترین سہولیات فراہم کرنا۔

مفادات کا تصادم

مصنفین مفادات کے تصادم کا اعلان نہیں کرتے ہیں۔

مخففات:

TPC: کل فینولک مواد؛ ڈی پی پی ایچ:2،2-ڈفینائل -1-پکریل ہائیڈرزائل؛ GAE: گیلک ایسڈ کے برابر؛ جی سی: گرین کافی؛ جی سی بی: سبز کافی پھلیاں؛ ELA-2 (کنجوگیٹڈ ماؤس اینٹی ہیومن ایلسٹیز اینٹی باڈی): نیوٹروفیل ایلسٹیز؛ EGCG: Epigallocatechin gallate؛ PC: Phosphatidylcholine؛ CH: کولیسٹرول؛ RBF: گول نیچے فلاسک؛ TEM: ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی؛ MTT: 3-(4,5-diemthylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide; PDI: Polydispersibility Index؛ IC": نصف زیادہ سے زیادہ روک تھام کرنے والا ارتکاز۔

یہ مضمون ڈیسائی اور مالیا سے ماخوذ ہے: گرین کافی بینز ایکسٹریکٹ کی ترقی اینٹی ایجنگ لیپوسومل جیل