ایم پی پی پلس کی طرف سے حوصلہ افزائی کی گئی Mesencephalon Dopaminergic نیوران پر Cistanche اور Fomitopsis Pinicola کے نیورو پروٹیکٹو میکانزم پر مطالعہ

ایم پی پی پلس کی طرف سے حوصلہ افزائی میسینسفالا ڈوپیمینرجک نیوران پر Cistanche اور Fomitopsis Pinicola کے نیورو پروٹیکٹو میکانزم پر مطالعہ

رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

جھلکیاں

Fomitopsis Pinicola اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی سوزش، اور immunostimulant خصوصیات کی طرف سے خصوصیات ہے. موجودہ مطالعہ میں، برانن ماؤس میسینسفالا سے تیار کردہ بنیادی ڈوپامینرجک سیل کلچرز کا تعین کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔neuroprotectiveایم پی پی پلس کے ذریعہ ڈوپامینرجک نیوران کے انحطاط پر فومیٹوپسس پنیکولا کے پانی کے عرق کے اثرات اور ممکنہ طریقہ کار۔ نتائج نے ظاہر کیا کہ فومیٹوپسس پنیکولا کے پانی کے عرق نے ایم پی پی پلس کے خلاف ڈوپامائن نیوران کی حفاظت کی۔ Fomitopsis Pinicola کے پانی کے نچوڑ نے اینٹی آکسیڈینٹ اور سوزش کی سرگرمیاں ظاہر کیں۔ کا طریقہ کارneuroprotectiveFomitopsis Pinicola کے پانی کے نچوڑ کا اثر مائٹوکونڈریل آکسیڈیٹیو تناؤ پر روک تھام سے متعلق ہو سکتا ہے۔ حالیہ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہneuroprotectiveکا اثرCistancheاعصابی امراض کو بہتر بنانے کے لیے اسے ایک "مثالی امیدوار" بناتا ہے۔Cistancheechinacosides میں امیر ہے. کا نچوڑcistancheویوو اور ان وٹرو تجربات میں اعصاب کی نشوونما کے عنصر کی ترکیب کو دلانے، دماغ میں متعلقہ عوامل کے اخراج کو فروغ دینے اور یادداشت سے متعلق دماغی افعال کی ایک سیریز کو بہتر بنانے کے لیے دکھایا گیا ہے۔

Cistancheہےneuroprotectiveاثرات

خلاصہ

مقصد: مشاہدہ کرناneuroprotectiveوٹرو میں mesencephalic dopaminergic خلیات کے MPP'Induced apoptosis پر Fomitopsis Pinicola کے پانی کے عرق کا طریقہ کار پھپھوند کی سوزش کی سرگرمی کا پتہ ایل پی ایس کے ذریعہ NO ریلیز کے طریقہ کار سے لگایا گیا تھا۔ Mesencephalic dopaminergicنیورانTHir کی بقا کا مشاہدہ کرنے کے لیے TH سٹیننگ کا لیبل لگایا گیا تھا۔نیوراننتائج: اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی پرکھ میں، فومیٹونسس پنیکولا کے پانی کے عرق کی Trolox مساوی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت (TEAC) کا تعین کیا گیا تھا (165.80±7.13) umol Trolox/g ایکسٹریکٹ Fomitopsis Pimicola کے پانی کے عرق (100,50,25) ,12.5ug/ml) NO کی تشکیل میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ MPP* نے mesencephalic dopaminergic کے نیوکللی میں اہم کرومیٹن گاڑھا ہونے کی حوصلہ افزائی کی۔نیورانجوہری لیسز کے ساتھ، مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت میں نمایاں کمی واقع ہوئی، اور ROS کی پیداوار میں نمایاں اضافہ ہوا۔ ایم پی پی ٹی کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، اپوپٹوسس کے بعد سیل نیوکلی کی مورفولوجیکل تبدیلیاں فومٹیٹنسس پنیکولا کے پانی کے نچوڑ سے الٹ گئیں۔ Fomitopsis Pinicola ٹریٹمنٹ (50,25,12.5ug/ml) کے پانی کے عرق نے بالترتیب MPP'control کے مقابلے میں رشتہ دار مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت میں ڈرامائی طور پر اضافہ کیا۔ MPPt کنٹرول کے مقابلے میں، Fomitonsis Pimicola ٹریٹمنٹ (50, 25ug/ml) کے پانی کے عرق نے بالترتیب رشتہ دار ROS کی تشکیل میں نمایاں کمی کی ہے، Conclusions∶ Fomitopsis Pinicola کے پانی کے عرق نے نمایاں طور پر دکھایا۔neuroprotectiveMPpt کی طرف سے حوصلہ افزائی mesencephalic dopaminergic خلیات پر اثر، Fomitopsis Pinicola کے پانی کے عرق نے اینٹی آکسیڈینٹ اور سوزش کی سرگرمیاں ظاہر کیں۔ کا طریقہ کارneuroprotectiveFomitopsis Pimicola کے پانی کے نچوڑ کا اثر مائٹوکونڈریل آکسیڈیٹیو تناؤ پر روک تھام سے متعلق ہو سکتا ہے۔Cistancheگلائکوسائیڈز الزائمر کے مرض میں مبتلا مریضوں کے سیکھنے اور یادداشت کی سطح کو بہتر بنا سکتے ہیں، دماغی بافتوں میں میلونڈیالڈہائیڈ (ایم ڈی اے) کے مواد کو کم کر سکتے ہیں، اور گلوٹاتھیون پیرو آکسیڈیز (جی ایس ایچ) کو بڑھا سکتے ہیں۔ -Px)، سپر آکسائیڈ ڈسمیوٹیز (سپر آکسائیڈ ڈسموٹیز، ایس او ڈی) سرگرمی، ایسٹیلکولین ایسٹراس (ایسیٹیلچولین ایسٹیریز، ٹی سی ایچ ای) کی سرگرمی، دماغی خلیے کے اپوپٹوس کی شرح، اور دماغ کے بافتوں میں کیلشیم کے جمع ہونے کو کم کرتی ہے۔

مطلوبہ الفاظ: Fomitopsis Pimicola، dopaminergicنیوراناپوپٹوسس، اینٹی آکسیڈینٹ، مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت، ROS کی تشکیل،Cistanche, نیورو پروٹیکٹو

پس منظر

پارکنسنز کی بیماریانسانوں میں ایک نیوروڈیجنریٹیو بیماری ہے، جو دنیا بھر میں 6.5 ملین سے زیادہ لوگوں کی صحت کو بری طرح متاثر کرتی ہے۔ 65 سال سے زیادہ عمر کے بزرگوں کا پھیلاؤ تقریباً 1 2 فیصد ہے [1, 2]۔ اگرچہ کے عین مطابق etiology اور روگجننپارکنسنز کی بیماریابھی تک واضح نہیں ہے، آکسیڈیٹیو تناؤ ڈوپامینرجک کے منتخب انحطاط کا ایک اہم عنصر ثابت ہوا ہے۔نیوراننگروسٹریٹل سٹرائٹم میں [3، 4]۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ Reactive Oxygen Species (ROS) کی ضرورت سے زیادہ پیداوار مائٹوکونڈریل dysfunction کو دلاتی ہے، بشمول مائٹوکونڈریل میمبرین پوٹینشل (△Ψm) میں کمی اور سانس کی زنجیر کے پیچیدہ خامروں Ⅰ کی سرگرمی، نیز غیر معمولی مائٹوکونڈریا، ڈی این اے [56]۔ اس کے علاوہ، آکسیڈیٹیو تناؤ کے نگروسٹریٹل راستے کی حساسیت اور انتخاب بھی ڈوپیمینرجک کے ڈی این اے کو نقصان پہنچا سکتا ہے۔نیورانکے ساتھ مریضوں میںپارکنسنز کی بیماری [7].

Phenylethanoid glycoside extract inCistanchedeserticola نمایاں طور پر 1-میتھائل-4-فینائل-1،2,3،6-ٹیٹراہائیڈروپائرڈائن، ایم پی ٹی پی کی ساخت کو بہتر بنا سکتا ہے۔ نائگرا ٹائروسین ہائیڈروکسیلیس (ٹائروسین ہائیڈروکسیلیس، ٹی ایچ) تک اور ڈی اے مواد کے ساتھ مریضوں کے سٹرائٹم میںپارکنسنز کی بیماری.اس کے علاوہ، دیcistancheفینائل ایتھنول گلائکوسائیڈ ایکسٹریکٹ کا مریضوں میں سیریبلر گرینول سیل کی عملداری کے زوال پر اچھا روکا اثر ہوتا ہے۔پارکنسنز کی بیماریاور سیریبلر گرینول کے ایم پی پی پلس انڈسڈ سیل اپوپٹوس کو روکتا ہے۔نیورانکیسپیس-3 اور کیسپیس-8 کے ایکٹیویشن کو روک کر۔ موت، اس کے اینٹی اپوپٹوٹک اثر ڈالیں۔

Fomitopsis Pinicola ایک دواؤں کی فنگس ہے جو Polyporaceae اور Pseudomonas سے تعلق رکھتی ہے۔ اس کا ذائقہ فلیٹ، قدرے کڑوا ہے اور اس کے فارماسولوجیکل اثرات ہیں جیسے اینٹی آکسیڈیشن، اینٹی بیکٹیریل، اینٹی ٹیومر، اور قوت مدافعت میں اضافہ [8، 9]۔ ہمارے پچھلے مطالعات نے اس بات کی تصدیق کی ہے کہ فومیٹوپسس پنیکولا کے پانی کے نچوڑ کا ایم پی پی پلس پر حفاظتی اثر پڑتا ہے - برانن کے مڈبرین ڈوپامینرجک خلیوں کے اپوپٹوسس، جو ڈوپامینرجک کی تعداد میں نمایاں اضافہ کر سکتا ہے۔نیوراناور محوری لمبائی، اور مائٹوکونڈریل ریسپائریٹری چین کمپلیکس انزائم I[10] کی سرگرمی میں اضافہ۔

اس مطالعے میں، ہم فومیٹوپسس پنیکولا کے آبی عرقوں کی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت کا مشاہدہ کرنے کے لیے فیرک کو کم کرنے والے اینٹی آکسیڈینٹ پاور میتھڈ (FRAP) کا استعمال کریں گے، اور BV2 مائیکروگلیہ میں لیپوپولیساکرائڈ (LPS) کی حوصلہ افزائی NO ریلیز کے اینٹی سوزش اثر کا مشاہدہ کریں گے۔ مہذب مڈبرین ڈوپامینرجک کے اثراتنیوراننیوکلیئر مورفولوجی پر، مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت، اور آر او ایس کی پیداوار وٹرو میں دیکھی گئی، تاکہ ڈوپامینرجک پر اینڈومیسیٹس کے حفاظتی طریقہ کار کو ظاہر کیا جا سکے۔نیوران.

مواد

جانور

آسٹریا کے لیبارٹری اینیمل اینڈ ویٹرنری جینیٹکس انسٹی ٹیوٹ کے 14-دن کے حمل کے چوہوں، OF1/SPF نے یورپی کمیشن کے ہدایت نامہ 86/609/EU کے مطابق تجرباتی جانوروں پر تجربہ کیا۔

ٹیسٹ کا نمونہ

Fomitopsis Pinicola آسٹریا میں تیار کیا گیا تھا اور اس کی شناخت پروفیسر وولف-ڈیٹر راؤش نے Footmitopsis Pinicola کے نام سے کی تھی۔ Fomitopsis Pinicola کے pulverization کے بعد، پانی کا نچوڑ گرم پانی نکال کر حاصل کیا گیا، اور خام پولی سیکرائیڈ کا مواد 8.95 فیصد تھا۔

سیل لائن

ماؤس مائکروگلیوما سیل لائن BV2، شعبہ بائیو کیمسٹری، ویانا ویٹرنری یونیورسٹی سے، DMEM میڈیم (سگما) میں جس میں 10 فیصد فیٹل بوائن سیرم، 2 فیصد B27 (Gibco)، 2 فیصد گلوٹامین، 37 ڈگری 5 فیصد CO2 کلچر ہے۔

سیل کلچر میڈیم

BM(بنیادی میڈیم) میڈیم جس میں DMEM میڈیم کو 10 فیصد فیٹل بووائن سیرم، 30 ایم ایم گلوکوز، 2 ایم ایم گلوٹامین، 1 فیصد اسٹریپٹومائسن، اور 0.5 فیصد ایمفوٹیرسن کے ساتھ ضمیمہ کیا گیا تھا۔

اہم ری ایجنٹس اور آلات

MPP پلس ایک سگما پروڈکٹ ہے، پاکیزگی 98 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر ہے؛ اینٹی ٹائروسین ہائیڈروکسیلیس (TH)پرائمری اور سیکنڈری اینٹی باڈیز تمام امریکن ویکٹاسٹین کی مصنوعات ہیں۔ TPTZ(2.46-terpyridine triazine)، FeCl3·6H2O، FeSO4·7H2O امریکی سگما-Aldrich.DAPI خشک کرنے والے محلول کی مصنوعات ہیں۔ JC-1 ڈائینگ سلوشن اور C-DCDHF-DA ڈائینگ سلوشن سبھی انویٹروجن مالیکیولر پروبس کی مصنوعات ہیں۔ اصل حل کا ارتکاز بالترتیب 1mg/ml، Img/ml اور 1M تھا۔ فلوروسینس مائیکروسکوپ، جاپان میں Nikon کمپنی کی طرف سے بنایا گیا، ماڈل TS-100-F. Spectrophotometer for Germany Pharmacia Biotech مصنوعات، Novaspec ⅡI کے ماڈل۔

Cistancheروک سکتے ہیںپارکنسنز کی بیماری

طریقہ

FRAP طریقہ کے ذریعہ نچوڑ کی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت کا تعین

30 ملی لیٹر FRAP ورک فلوئڈ کی تیاری کے بعد (300 mmol/L acetate بفر، 10 mmol/L TPTZ محلول، 20 mmol/L FeCly محلول 10:1:1 کے حجم کے تناسب سے یکساں طور پر ملایا جاتا ہے)، 450 mmol/L FRAP کام کرتا ہے۔ فومیٹوپسس پنیکولا کے 60 ul آبی عرقوں اور 45 ul ڈبل بخارات کے پانی کے مختلف ارتکاز کے ساتھ مائع شامل کیا گیا تھا۔ 37 ڈگری سینٹی گریڈ کا ملاوٹ 30 منٹ کے بعد روشنی کے رد عمل سے بچتا ہے، پھر 593 nm پر اس کی جاذبیت کی قدروں کا تعین کرتا ہے۔ ٹرولوکس کو معیار کے طور پر استعمال کرتے ہوئے ہر ایک نچوڑ کی کل اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت کی مقدار درست کی گئی۔ ہر نمونے کے لئے تین متوازی اسیس کیے گئے تھے۔ نتائج کو ٹرولوکس مساوی (TEAC) (mol TEAC/g) فی گرام نچوڑ کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔

نچوڑ کے اینٹی سوزش اثر کا پتہ لگانے کے لئے کوئی ریلیز پرکھ استعمال نہیں کیا گیا تھا۔

لوگاریتھمک فیز BV2 سیلز کو 1 x 10 ڈگری سیلز/ ملی لیٹر کے ارتکاز پر 48-کنویں پلیٹوں میں ٹیکہ لگایا گیا تھا۔ 37 ڈگری اور 5 فیصد CO2 کے لیے انکیوبیشن کے بعد، محرک کے لیے لیپوپولیسیکرائیڈ (LPS) شامل کیا گیا، حتمی ارتکاز 1lug/ml تھا۔ اس کے بعد، نچوڑ کے مختلف ارتکاز کو شامل کیا گیا، اور خلیات کو 5 فیصد CO کے تحت 37 ڈگری پر 48 گھنٹے کے لیے کلچر کیا گیا، جس کے بعد NO کی حراستی کی پیمائش کی گئی۔ مقدمے کی سماعت سے پہلے۔ گریس ری ایجنٹس A اور B کو ریفریجریٹر سے 4 ڈگری سینٹی گریڈ پر نکالا گیا اور 30 ​​منٹ تک کمرے کے درجہ حرارت کو متوازن کرنے کی اجازت دی گئی۔ معیاری منحنی خطوط پیدا کرنے کے لیے نائٹریٹ کے معیارات کو سلسلہ وار کمزور کیا گیا تھا (20,10, 5,2.1، اور 0.5uM)۔ پتلا معیار کا 50 μL اور ٹیسٹ کیے جانے والے نمونے کا سپرنٹنٹ شامل کریں (ہر ارتکاز کے لیے 4 نقلیں)، 96-وییل پلیٹ میں شامل کریں، پھر 50 شامل کریں۔

A محلول کا uL، کمرے کے درجہ حرارت پر اندھیرے میں 10 منٹ تک انکیوبیٹ کریں اور B محلول کا 50 uL شامل کریں۔ اندھیرے میں کمرے کے درجہ حرارت پر 10 منٹ تک انکیوبیشن کے بعد، جاذب کو 550 nm پر مائکروپلیٹ ریڈر کے ساتھ 30 منٹ کے اندر ناپا گیا، اور سپرنٹنٹ میں NO کی رہائی کا حساب معیاری وکر [11] کے مطابق کیا گیا۔ اسی وقت، سیل پلیٹ کے ہر کنویں میں 10 ul MTT (5 mg/mL in PBS محلول) شامل کیا گیا، اور 4 گھنٹے کے لیے 5 فیصد CO کے لیے 37 ڈگری پر کلچر کیا گیا۔ سپرنیٹنٹ کو ضائع کرنے کے بعد، ہر کنویں میں 100 uL DMSO شامل کیا گیا، اور خلیے کی بقا کی شرح کو دیکھنے کے لیے، مکمل طور پر تحلیل ہونے کے بعد جذب کو 570 nm پر ماپا گیا۔

بنیادی مڈبرین ڈوپامینرجک سیلز اور منشیات کے علاج کی ثقافت اور شناخت

حاملہ چوہوں کو قربان کیا گیا اور DPBS بفر پر مشتمل پیٹری ڈش میں منتقل کیا گیا، ماؤس ایمبریوز کو الگ کیا گیا، مڈ برین کو الگ تھلگ کیا گیا، چھوٹے چھوٹے ٹکڑوں میں کاٹا گیا، اور DPBS بفر میں جمع کیا گیا جس میں 2ml 0 1 فیصد ٹرپسن اور 2ml {{ 3}}۔ 4 منٹ کے لیے 100 xg پر ٹشو، اور سپرنٹنٹ کو ضائع کر دیں۔ اس کے بعد، 0.02 فیصد DNase I پر مشتمل DMEM میڈیم شامل کیا گیا، اور الگ کیے گئے خلیوں کو BM سیل کلچر میڈیم میں دوبارہ معطل کر دیا گیا، پولی لیسین سے علاج شدہ سیل پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا، اور 37 ڈگری، 5 فیصد CO پر کلچر کیا گیا۔ کلچر کے 10ویں دن، 10۔ علاج کے لیے μM MPP* کو کلچرڈ پرائمری نیورون سیلز میں شامل کیا گیا، اور پھر 50.25.12.5 ug/ml آبی عرق فومیٹوپسس پنیکولا کو 37 ڈگری، 5 فیصد CO پر علاج کے لیے شامل کیا گیا، 48 گھنٹے تک کلچر کیا گیا۔ ثقافت کے 12 ویں دن، ڈوپامینرجک نیوران کی شناخت کے لیے کچھ خلیات استعمال کیے گئے، اور خلیوں کو 4 فیصد پیرافارمیلڈہائیڈ کے ساتھ 4 ڈگری پر 30 منٹ کے لیے طے کیا گیا، اور پھر 0.4 فیصد ٹریٹن ایکس کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت پر 30 منٹ کے لیے پارگمی کیا گیا۔ 33}}۔ پی بی ایس بفر سے 3 بار کلی کرنے کے بعد، اسے ہارس سیرم بلاکنگ سلوشن کے ساتھ 90 منٹ کے لیے بلاک کر دیا گیا، پھر اینٹی ٹی ایچ پرائمری اینٹی باڈی کو راتوں رات شامل کیا گیا، پھر کمرے کے درجہ حرارت پر 90 منٹ کے لیے بائیوٹینیلیٹڈ سیکنڈری اینٹی باڈی شامل کی گئی، اور آخر میں، 3,3۔ '-diaminobenzidine (DAB, 5 mg/ml) تیار کیا گیا تھا۔ TH رنگ کے لیے مثبت خلیوں کو خوردبین کے نیچے ڈوپامینرجک نیوران کے طور پر دیکھا گیا۔

نیوکلیئر مورفولوجی کا مشاہدہ

ایم پی پی پلس اور منشیات سے علاج شدہ خلیوں کو 4 فیصد پیرافارمیلڈہائڈ کے ساتھ 30 منٹ کے لیے طے کیا گیا، پھر 30 منٹ کے لیے 0.4 فیصد ٹرائٹن ایکس-100 کے ساتھ پھٹ دیا گیا، اور پھر DAPI کے داغ کے محلول کے ساتھ شامل کیا گیا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ کے لیے 1 ug/ml۔ نیوکلئس کی مورفولوجی فلوروسینس مائکروسکوپ کے تحت دیکھی گئی۔ حوصلہ افزائی طول موج 340 این ایم تھی، اور ہر کنویں کے لیے تصادفی طور پر 4 فیلڈز منتخب کیے گئے تھے۔

مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت کا پتہ لگانا

MPP پلس اور منشیات سے علاج شدہ خلیوں کو JC-1 dve میں 10 ug/ml کی حتمی حراستی میں شامل کیا گیا تھا اور 15 منٹ کے لئے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ فلوروسینس کی شدت میں تبدیلیاں فلوروسینس مائکروسکوپی کے ذریعہ بالترتیب 488 nm اور 568 nm اتیجیت روشنی پر دیکھی گئیں۔ مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت میں تبدیلی کو فلوروسینس کی شدت کے تناسب سے 568 nm پر فلوروسینس کی شدت سے 488 nm پر ماپا گیا۔

ROS پروڈکشن ٹیسٹ

MPP پلس اور منشیات سے علاج شدہ خلیوں کو C-DCDHF-DA dve میں 10 mM کی حتمی حراستی میں شامل کیا گیا تھا اور 37 ڈگری پر 30 منٹ تک انکیوبیشن کے بعد، ثقافتی محلول کو ضائع کر دیا گیا تھا، اور خلیوں کو بے رنگ DMEM میڈیم سے دو بار دھویا گیا تھا۔ . فلوروسینس مائکروسکوپی کا استعمال فلوروسینس کی شدت کی تبدیلی کو دیکھنے کے لئے کیا گیا تھا۔ اتیجیت طول موج 488 nm تھی، اور ہر کنویں کے لیے تصادفی طور پر 4 فیلڈز کا انتخاب کیا گیا تھا۔ اتیجیت کی روشنی میں خلیوں کی نمائش کا وقت 5 سیکنڈ سے زیادہ نہیں تھا۔

نتائج

Fomitopsis Pinicola کی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت

Fomitopsis Pinicola میں واضح اینٹی آکسیڈیشن اثر ہے، اور اس کے پانی کے عرق میں （165.80±7.13）μmol TEACH نچوڑ کی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت ہے۔

فومیٹوپسس پنیکولا کا اینٹی سوزش اثر

LPS کی حوصلہ افزائی BV2 خلیوں کے بعد، NO کی رہائی میں نمایاں اضافہ ہوا، جو عام کنٹرول گروپ سے نمایاں طور پر مختلف تھا۔ Fomitopsis Pinicola کے پانی کے نچوڑ کے بعد، NO کا اخراج نمایاں طور پر کم ہوا، جس میں 100,50, 25، 12.5 ug/ml خوراک گروپ اور LPS گروپ (تصویر 1) کے درمیان نمایاں فرق تھا۔ LPS کی حوصلہ افزائی BV2 خلیوں کے بعد، سیل کی بقا کی شرح عام کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھی۔ Fomitopsis Pimicola کے پانی کے نچوڑ کے عمل کے بعد، 100ug/ml خوراک کے گروپ میں سیل کی قابل عملیت میں نمایاں کمی واقع ہوئی، اور LPS گروپ کے مقابلے میں نمایاں فرق تھا۔ 50,25,12.5 ug/ml خوراک گروپ کا سیل کی عملداری پر کوئی خاص اثر نہیں پڑا (شکل 1، شکل 2)۔

جنین چوہوں میں مڈبرین ڈوپیمینجک نیوران کی شناخت

مہذب برانن چوہے کے مڈبرین نیوران کے مخصوص TH داغ کے بعد، ڈوپامینرجک نیوران نے ایک واضح بھورا پیلا رنگ دکھایا، اور خلیے کے جسموں اور محوروں کا داغ واضح طور پر دکھائی دے رہا تھا، جس سے ثابت ہوتا ہے کہ ڈوپامینرجک نیوران کامیابی کے ساتھ کلچر کیے گئے تھے (شکل 3) .

تصویر 1 BV2 خلیات میں NO کے اخراج پر فومیٹوپسس پنیکولا کے پانی کے عرق کے اثرات

LPS کی طرف سے حوصلہ افزائی

نوٹ: عام کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، **p < {{0}}۔{4}}1;="" lps="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں،="" ##p=""><0.01، #p=""><>

تصویر 2 BV2 خلیوں کی بقا کی شرح پر Fomitopsis Pinicola کے پانی کے عرق کا اثر

نوٹ: عام کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، **p < 0.01;="" lps="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں،=""><>

شکل 3 TH - لیبل لگا mesencephalon DA نیوران سٹیننگ

نیوکلیئر مورفولوجی DAPI,4'6-diamidino-2-phenylindole پر Fomitopsis Pinicola کا اثر، ایک فلوروسینٹ غوطہ ہے جو خلیے کی جھلی میں گھس جاتا ہے اور عجیب طرح سے DNA سے جڑ جاتا ہے۔ اس تجربے کے نتائج سے معلوم ہوا کہ نارمل کنٹرول گروپ میں ڈوپامینرجک نیورونز کا مرکزہ تقریباً برقرار ہے اور کرومیٹن یکساں ہے۔ ایم پی پی پلس کنٹرول گروپ نے نمایاں کرومیٹن کنڈینسیشن، نیوکلیئر میمبرین لیسس، اور نیوکلیئر لیسز کو دکھایا۔ Fomitopsis Pinicola کے پانی کے نچوڑ کی کارروائی کے بعد، نیوکلئس کی مورفولوجی نسبتاً برقرار تھی، اور apoptosis کی خصوصیات کم ہو گئی تھیں (شکل 4)۔

مائٹوکونڈریل میمبرین پوٹینشل پر فومیٹوپسس پنیکولا کا اثر

ایم پی پی پلس انڈکشن کے بعد، ڈوپیمینرجک نیوران کی مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت میں نمایاں کمی واقع ہوئی، جو کہ عام کنٹرول گروپ سے نمایاں طور پر مختلف تھی۔<0.01). after="" the="" action="" of="" the="" aqueous="" extract="" of="" fomitopsis="" pinicola,="" the="" mitochondrial="" membrane="" potential="" decreased="" after="" mpp+="" induction.="" there="" was="" a="" significant="" increase="" in="" mitochondrial="" membrane="" potential="" in="" the="" 50,="" 25,="" and="" 12.5ug/ml="" dose="" groups="" compared="" with="" the="" mpp+="" control="" group=""><0.01,><0.05)(figure>

ROS کی پیداوار پر Pseudomonas Sinensis کا اثر

ایم پی پی پلس انڈکشن کے بعد، ڈوپیمینرجک نیوران کی آر او ایس کی پیداوار میں نمایاں اضافہ ہوا تھا۔ جو عام کنٹرول گروپ (P<0.01). after="" the="" action="" of="" the="" aqueous="" extract="" of="" fomitopsis="" pinicola,="" the="" ros="" increased="" after="" mpp+induction.="" the="" reduction="" of="" ros="" production="" in="" the="" 50="" and="" 25="" ug/ml="" dose="" groups="" was="" significantly="" different="" from="" the="" mpp+control="" group=""><0.01)(figure 6,="" figure="">

تصویر 4. میسینسفالک میں DA نیوران کی DAPI فلوروسینس سٹیننگ امیجنگ

تصویر 5 ایم پی پی پلس انڈسڈ مائٹوکونڈریل پر فومیٹوپسس پنیکولا کے پانی کے عرق کا اثر

mesencephalic DA نیوران کی جھلی کی صلاحیت

نوٹ: عام کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، **P < {{0}}.01;="" mpp="" پلس="" کنٹرول="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں،="" #="" #="" p=""><0.01، #="">

0.05.

تصویر 6. میسینسفالک میں DA نیوران کا C-DCDHF-DA فلوروسینس سٹیننگ

ایم پی پی پلس-حوصلہ افزائی میسینسفالک ڈی اے پر فومیٹوپسس پنیکولا کے پانی کے عرق کے تصویر 7 اثرات

نیوران ROS کی پیداوار

نوٹ: عام کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، **P < {{0}}.01;="" mpp="" پلس="" کنٹرول="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں،="" #="" #="" p=""><>

نتیجہ

مڈبرین میں ڈوپیمینرجک نیوران (DA نیوران) کا انحطاط ختم ہو گیا ہے اور بقایا نیوران کے سائٹوپلازم میں لیوی باڈی کی اہم خصوصیت ہے۔پارکنسنز کی بیماری.طبی علامات میں بنیادی طور پر جامد جھٹکے، بریڈیکنیزیا، ہائپرمیوٹونیا، کرنسی میں عدم استحکام، وغیرہ شامل ہیں۔ فی الحال، کا علاجپارکنسنز کی بیماریاب بھی ڈوپامائن ریپلیسمنٹ تھراپی کا غلبہ ہے۔ اگرچہ یہ مریضوں کے علامات کو بہتر بنا سکتا ہے، لیکن یہ بیماری کی ترقی کو روک نہیں سکتا. طویل مدتی اطلاق بہت سے منفی ردعمل کا سبب بنے گا [12]، اس لیے نئے علاج کے طریقوں کا مطالعہ ضروری ہے۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ آکسیڈیٹیو تناؤ اور آکسیڈائزڈ ڈوپامائن کی سطح ڈوپامینرجک نیورونز کے منتخب نقصان کی اہم وجوہات ہیں [13]، اور کچھ قدرتی اینٹی آکسیڈنٹس جیسے quercetin، curcumin، tea polyphenols، et al کے اعصابی ایجنٹوں کی وجہ سے ڈوپامائن ہونے کی تصدیق کی گئی ہے۔ اعصابی نقصان کے واضح حفاظتی اثرات ہوتے ہیں [14-16]، اس لیے اس کے علاج کے لیے ادویات کی اسکریننگ کا وعدہ کیا جاتا ہے۔پارکنسنز کی بیماریاینٹی آکسیڈینٹ فارماسولوجیکل اثرات کے ساتھ روایتی چینی ادویات سے۔

اس مطالعہ میں، (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman)2- کا استعمال کرتے ہوئے، FRAP کا استعمال Fomitopsis Trolox Pinicola کے آبی عرقوں کی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت کا پتہ لگانے کے لیے کیا گیا تھا۔ کاربو آکسیڈک ایسڈ) میں نمایاں اینٹی آکسیڈینٹ اثرات پائے گئے۔ پائے جانے والے پانی کے عرقوں کا سوزش مخالف اثر Pnicolawas Fomitopsis dby lipopolysaccharide-induced BV2 microglia ریلیز NO طریقہ ہے، اور 100 ug/ml سے کم ارتکاز پر سیل کی قابل عملیت پر کوئی خاص اثر نہیں تھا، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ یہ glial خلیات میں نمایاں طور پر اینٹی سوزش کی صلاحیت رکھتا ہے۔ سوزش کے اثرات اور سیل کی بقا پر کوئی خاص اثر نہیں ہے۔

آکسیڈیٹیو تناؤ سے مراد جسم میں آکسیجن فری ریڈیکلز کی پیداوار اور خاتمے کے درمیان عدم توازن ہے۔ یہ نیورونل انحطاط-اپوپٹوسس کے عمل میں ایک ابتدائی واقعہ ہے۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ دماغ کے ٹشو فاسفولیپڈز اور غیر سیر شدہ فیٹی ایسڈز سے بھرپور ہوتے ہیں، یہ دونوں ہی آکسیڈیٹیو تناؤ کے لیے حساس ہوتے ہیں۔ کے ساتھ مریضوں میںپارکنسنز کی بیماری, Malondialdehyde، لپڈ peroxidation انڈیکس، striatum میں نمایاں طور پر اضافہ ہوا ہے، جبکہ polyunsaturated کی حراستی. فیٹی ایسڈز میں نمایاں کمی واقع ہوئی [17]، گلوٹاتھیون (GSH) کے مواد میں کمی واقع ہوئی، اور مائٹوکونڈریل ریسپائریٹری چین کمپلیکس انزائم I کا کام خراب ہوا[18,19]۔ ایم پی پی پلس جسم میں نیوروٹوکسک ایجنٹ ایم پی ٹی پی کا ایک میٹابولائٹ ہے، جو جسم میں آزاد ریڈیکلز پیدا کرسکتا ہے، مائٹوکونڈریل فنکشن کو روک سکتا ہے، سبسٹینیا نگرا میں ڈی اے نیوران کو تباہ کرسکتا ہے، اور اس کی علامات پیدا کرسکتا ہے۔پارکنسنز کی بیماریجانوروں کے ماڈل میں. NO MPP پلس کے نقصان کے طریقہ کار میں بھی شامل ہے۔ ضرورت سے زیادہ NO ڈی اے نیوران میں پھیلتا ہے، جو انزائم کی سلف ہائیڈرل سائٹ کے ساتھ نائٹروشن کر سکتا ہے اور مائٹوکونڈریل ریسپائریٹری چین کمپلیکس انزائم I کی سرگرمی کو روک سکتا ہے [20,21]۔

اس مطالعے کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ ایم پی پی پلس کی حوصلہ افزائی پرائمری کلچرڈ ڈی اے نیوران کے بعد، نیوکلئس نے واضح اپوپٹوس ظاہر کیا، مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت میں کمی واقع ہوئی، اور آر او ایس کی پیداوار میں نمایاں اضافہ ہوا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ ایم پی پی پلس مائٹوکونڈریل تناؤ کو روک کر ڈی اے نیوران کے اپوپٹوس کو آمادہ کر سکتا ہے۔ Fomitopsis Pinicola a کا آبی عرق MPP پلس انڈکشن کے بعد ڈوپامینرجک نیوران کی شکل کو بہتر بنا سکتا ہے، مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت کو بڑھا سکتا ہے، اور ROS کی پیداوار کو کم کر سکتا ہے، اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ Fomitopsis Pinicola کے پانی کا عرق مڈبرین ڈی اے نیوران کے نقصان کو روکتا ہے، جس سے اعصاب کو نقصان پہنچ سکتا ہے۔ اس کے اینٹی آکسیڈیشن اور NO کی پیداوار کی روک تھام سے متعلق ہے، اور مائٹوکونڈریل آکسیڈیٹیو تناؤ کو روک کر نیوران کی حفاظت کرتا ہے۔

حوالہ جات

1. خان اے یو، اکرم ایم، دانیال ایم، وغیرہ۔ پارکنسن کی بیماری کے بارے میں آگاہی اور موجودہ علم: ایک نیوروڈیجینریٹو ڈس آرڈر۔ Int J Neurosci 2018، 8: 1-64۔

2. Klingelhoefer L، Reichmann H. Parkinson's disease as a multi-system disorder. جے نیورل ٹرانسم (ویانا) 2017، 124: 709-713۔

3. Choi DH، Cristóvão AC، Guhathakurta S، et al. NADPH oxidase 1-ثالثی آکسیڈیٹیو تناؤ پارکنسنز کی بیماری میں ڈوپامائن نیورون کی موت کا باعث بنتا ہے۔ اینٹی آکسیڈ ریڈوکس سگنل 2012، 16: 1033-1045۔

4. Asaithambi A, Ay M, Jin H, et al. پروٹین کناز D1 (PKD1) فاسفوریلیشن 6-OHDA-حوصلہ افزائی آکسیڈیٹیو تناؤ کے دوران ڈوپامینرجک نیورونل بقا کو فروغ دیتا ہے۔ PLOS One, 2014, 9: e96947۔

5. Berndt N، Bulik S، Holzhütter HG. نیورونل سیلز کے مائٹوکونڈریل انرجی میٹابولزم کی کائنےٹک ماڈلنگ: اے ٹی پی پروڈکشن اور ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں کی تخلیق پر کیٹوگلوٹیریٹ ڈیہائیڈروجنیز سرگرمیوں میں کمی کا اثر۔ انٹ جے سیل بائیول 2012، 2012: 757594۔

6. یان MH، Wang X، Zhu X. الزائمر کی بیماری اور پارکنسن کی بیماری میں مائٹوکونڈریل نقائص اور آکسیڈیٹیو تناؤ۔ Free Radic Biol Med 2013, 62: 90-101۔

7. گوو سی، سن ایل، چن ایکس، ژانگ ڈی. آکسیڈیٹیو تناؤ، مائٹوکونڈریل نقصان، اور نیوروڈیجنریٹیو امراض۔ نیورل ریجن ریس 2013، 8: 2003-2014۔

8. ہاؤ ایل، شینگ زیڈ، لو جے، وغیرہ۔ فومیٹوپسس پنیکولا سے ایکسٹرا سیلولر اور انٹرا سیلولر پولی سیکرائڈز کی خصوصیات اور اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیاں۔ کاربوہائیڈ پولیم، 2016، 141: 54-59۔

9. شاہ ایف، مالی ٹی، لنڈیل ٹی کے۔ Polyporales Brown Rot Species Fomitopsis Pinicola: Enzyme Activity Profiles, Oxalic Acid Production, and Fe3 plus-Reducing Metabolite Secretion.Appl Environ Microbiol, 2018, 84: e02662-17۔

10. Guo SS, Wolf D. وٹرو میں ڈوپیمینرجک نیوران پر فومیٹوپسس پنیکولا کے پانی کے عرق کے نیورو پروٹیکٹو اثرات پر مطالعہ۔ Chin J Pharmacovigil 2018, 15: 582-586۔

11. خالد رداد، روڈولف مولڈزیو، وولف ڈائیٹر راؤش۔ Toxicity Minocycline طویل مدتی Rotenone کے خلاف Dopaminergic نیوران کی حفاظت کرتی ہے۔ Can J Neurol Sci 2010, 37: 81-85۔

12. ریزیک پی، کمار این، جوگ ایم ایس۔ پارکنسنز کی بیماری کی تشخیص اور علاج کے بارے میں ایک تازہ کاری۔ MAJ 2016, 188: 1157-1165۔

13. Crotty GF، Ascherio A، Schwarzschild MA. پارکنسنز کی بیماری میں آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرنے کے لیے یوریٹ کو نشانہ بنانا۔ Exp Neurol 2017, 298: 210-224۔

14. Ay M، Luo J، Langley M، et al. مالیکیولر میکانزم جو مائٹوکونڈریل dysfunction کے خلاف quercetin کے حفاظتی اثرات اور سیل کلچر میں ترقی پسند ڈوپامینرجک نیوروڈیجنریشن اور پارکنسنز کی بیماری کے MitoPark ٹرانسجینک ماؤس ماڈلز پر مشتمل ہے۔ جے نیورو کیم 2017، 141: 766-782۔

15. وانگ ایم ایس، بوداپتی ایس، عمادی ایس، وغیرہ۔ کرکیومین پارکنسنز کی بیماری کے سیل ماڈل میں الفا-سینوکلین حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسیٹی کو کم کرتا ہے۔ BMC Neurosci 2010، 11:57۔

16. وینریب او، امیت ٹی، مینڈیل ایس، وغیرہ۔ (-) epigallocatechin-3-gallate کے نیورو پروٹیکٹو مالیکیولر میکانزم: اس کے اینٹی آکسیڈینٹ، آئرن چیلیٹنگ اور نیوریٹوجینک خصوصیات کا عکاس نتیجہ۔ جینز نیوٹر 2009، 4: 283-296۔

17. Dawson TM, Ko HS, Dawson VL. پارکنسن کی بیماری کے جینیاتی جانوروں کے ماڈل۔ نیوران 2010، 66:646-61۔

18. Bodis-Wolner. پارکنسنز کی بیماری میں ریٹینوپیتھی۔ جے نیورل ٹرانسم (ویانا) 2009، 116: 1493-1501۔

19. Hisahara S, Shimohama S. پارکنسنز کی بیماری کے ٹاکسن سے متاثرہ اور جینیاتی جانوروں کے ماڈل۔ پارکنسنز ڈس۔ 2010، 2011: 951709۔

20. یانگ ایس، لیو ٹی، لی ایس، وغیرہ۔ قدرتی طور پر عمر رسیدہ چوہوں کے دماغوں کا تقابلی پروٹومک تجزیہ۔ نیورو سائنس 2008، 154: 1107-1120۔

21. Gautier CA، Corti O، Brice A. پارکنسنز کی بیماری میں مائٹوکونڈریل ڈیسفکشنز۔ Rev Neurol (Paris) 2014, 170:339-343.