X سے منسلک ایپی جینیٹک ریگولیٹر UTX NK سیل کے اندرونی جنس کے فرق کو کنٹرول کرتا ہے۔

وائرل انفیکشن کے نتائج جنسی طور پر متعصب ہوتے ہیں، عام طور پر خواتین کے مقابلے مرد زیادہ حساس ہوتے ہیں۔ متضاد طور پر، مردوں میں اینٹی وائرل قدرتی قاتل (NK) خلیوں کی تعداد بڑھ جاتی ہے۔ ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ جب نر چوہوں میں NK خلیوں کی تعداد میں اضافہ ہوتا ہے، تو وہ چوہوں اور انسانوں میں خواتین کے مقابلے میں کم اثر کرنے والے کام کو ظاہر کرتے ہیں۔ یہ اختلافات مکمل طور پر گوناڈل ہارمونز پر منحصر نہیں تھے، کیونکہ وہ گوناڈیکٹومائزڈ چوہوں میں برقرار رہتے ہیں۔ Kdm6a (جو پروٹین UTX کو انکوڈ کرتا ہے)، ایک ایپی جینیٹک ریگولیٹر جو X غیر فعال ہونے سے بچ جاتا ہے، مرد NK خلیات میں کم تھا، جبکہ مادہ چوہوں میں NK سیل-اندرونی UTX کی کمی نے NK سیل نمبروں میں اضافہ کیا اور اثر کرنے والے ردعمل کو کم کیا۔ مزید برآں، NK سیل-اندرونی UTX کی کمی والے چوہوں نے ماؤس سائٹومیگالو وائرس کے لیے بڑھتی ہوئی مہلکیت ظاہر کی۔ انٹیگریٹیو ملٹی اومکس تجزیہ نے UTX کے لیے کرومیٹن کی رسائی اور NK سیل ہومیوسٹاسس اور انفیکٹر فنکشن کے لیے اہم جین اظہار کو منظم کرنے میں ایک اہم کردار کا انکشاف کیا۔ اجتماعی طور پر، یہ اعداد و شمار UTX کو NK خلیوں میں جنسی اختلافات کے ایک اہم مالیکیولر تعین کنندہ کے طور پر ملوث کرتے ہیں۔

ارتقائی طور پر محفوظ جنسی اختلافات پیدائشی اور انکولی مدافعتی ردعمل 1,2 دونوں میں موجود ہیں۔ اگرچہ مرد خود بخود قوت مدافعت کے لیے کم حساس ہوتے ہیں، لیکن وہ خواتین کے مقابلے میں کم طاقتور اینٹی وائرل مدافعتی ردعمل بھی بڑھاتے ہیں۔ مثال کے طور پر، انفیکشن کے بعد مردوں میں ہیومن سائٹومیگالووائرس (HCMV) کا بوجھ زیادہ ہوتا ہے، جس سے یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ وائرل خطرات کے لیے حساسیت بڑھ جاتی ہے۔ یہ حال ہی میں کورونا وائرس بیماری 2019 (COVID-19) وبائی بیماری کے دوران بھی واضح کیا گیا ہے، جس میں شدید بیماری کے لیے مضبوط مردانہ تعصب کو مدافعتی ردعمل میں جنسی فرق کی عکاسی کرنے کے لیے وضع کیا گیا ہے5۔ انسانوں اور چوہوں میں متعدد مطالعات نے حال ہی میں مدافعتی خلیوں کی تقسیم اور/یا مردوں میں خواتین کے مقابلے میں 6,7 میں فرق کی اطلاع دی ہے۔ تاہم، ان اختلافات کی مالیکیولر بنیاد، اور وہ طریقہ کار جن کے ذریعے یہ اختلافات بیماری کے نتائج کو متاثر کرتے ہیں، کو اچھی طرح سے سمجھا جاتا ہے۔ ستنداریوں میں جنس کے فرق کی وضاحت نہ صرف مختلف گوناڈل ہارمونز سے ہوتی ہے بلکہ جنسی کروموسوم کی خوراک سے بھی ہوتی ہے۔ مثال کے طور پر، X سے منسلک جینز کے ذیلی سیٹ کا اظہار خواتین (XX) میں مردوں (XY)8 کے مقابلے میں زیادہ ہے۔ جب کہ خواتین جنسوں کے درمیان X سے منسلک پروٹین کے اظہار کی یکساں سطح کو برقرار رکھنے کے لیے بے ترتیب X-کروموزوم ان ایکٹیویشن (XCI) سے گزرتی ہیں، XCI نامکمل ہے، X-کروموزوم کے 3-7% جین چوہوں میں غیر فعال ہونے سے بچ جاتے ہیں اور 20-30% غیر فعال ہونے سے بچ جاتے ہیں۔ انسان 8،9. اس طرح، خواتین بمقابلہ مردوں میں X سے منسلک جین کے اظہار کی تفریق کی سطح کو عصبی ٹیوب کے نقائص 10 اور آٹومیمون بیماری 11,12 سمیت وسیع پیمانے پر حالات میں جنسی فرق سے جوڑا گیا ہے۔ گردش کرنے والی قسم 1 فطری لیمفوسائٹس کے طور پر، NK خلیے ہرپیس وائرس کے خاندان کے افراد کے خلاف دفاع کی ابتدائی لائن کے طور پر کام کرتے ہیں۔ اینٹی وائرل امیونٹی میں NK سیلز کی اہمیت ان مریضوں میں واضح کی جاتی ہے جن میں NK سیل نمبر یا فعالیت خراب ہوتی ہے، جو HCMV اور Epstein – Barr وائرس جیسے ہرپیس وائرس سے انفیکشن کے لیے انتہائی حساس ہوتے ہیں۔ چوہوں میں، ماؤس سائٹومیگالو وائرس (MCMV) اور دیگر وائرل انفیکشن کے کنٹرول کے لیے NK سیلز کی ضرورت ہوتی ہے۔ NK سیل کے فنکشن میں جینیاتی کمی یا NK سیل نمبروں کی کمی والے چوہوں میں MCMV انفیکشن 15-18 کے بعد وائرل ٹائٹرز اور اموات میں نمایاں اضافہ ہوتا ہے۔ اس طرح، NK خلیات چوہوں اور انسانوں دونوں میں اینٹی وائرل استثنیٰ میں اہم ہیں۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنائیں

NK خلیات کے قوی اینٹی وائرل فنکشن کو دیکھتے ہوئے، اس لیے یہ غیر متوقع تھا کہ وائرس سے متاثرہ مرد NK خلیات 6,7 کی زیادہ تعداد دکھاتے ہیں۔ NK سیل نمبروں کے علاوہ، دیگر پہلے غیر قابل تعریف جنسی طور پر dimorphic NK سیل فیچرز وائرل انفیکشن کے دوران جنسی اختلافات کا سبب بن سکتے ہیں۔ ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ جب کہ مرد NK خلیات چوہوں میں سیلولر فٹنس کو بڑھاتے ہیں، وہ چوہوں اور انسانوں میں انفیکٹر فنکشن میں کمی کو ظاہر کرتے ہیں۔ این کے سیل کی ساخت اور فنکشن میں یہ جنسی تعصبات ہارمونل اختلافات کی وجہ سے مکمل طور پر نہیں تھے، کیونکہ وہ گوناڈیکٹومائزڈ چوہوں میں برقرار رہتے ہیں۔ امتیازی اظہار کی اسکریننگ کے ذریعے، ہم نے X سے منسلک ایپی جینیٹک ریگولیٹر اور معروف XCI فراری UTX کی نشاندہی کی، جس کا اظہار ماؤس اور انسانی مرد NK خلیوں دونوں میں نمایاں طور پر نچلی سطح پر کیا گیا تھا۔ UTX نے خوراک پر منحصر انداز میں NK سیل فٹنس اور انفیکٹر فنکشن دونوں کو ریگولیٹ کیا کیونکہ خواتین NK سیلز میں UTX haploinsufficiency NK سیل نمبروں کو بڑھانے کے لیے کافی تھی جبکہ سائٹوکائن کی پیداوار اور سائٹوٹوکسٹی کو نقصان پہنچاتی تھی۔ خواتین UTX کی کمی والے NK خلیوں نے Vivo میں بہتر استقامت اور apoptosis ex vivo کے خلاف مزاحمت کے ساتھ ساتھ MCMV انفیکشن کے لیے حساسیت میں اضافہ ظاہر کیا۔ یہ اثرات UTX کی اندرونی demethylase سرگرمی سے آزاد تھے، کیونکہ NK سیل نمبر اور انٹرفیرون (IFN) - پیداوار میں کوئی تبدیلی نہیں کی گئی تھی جو چوہوں میں 'demethylase-dead' UTX اتپریورتی کا اظہار کرتے تھے۔ سیکوینسنگ (ATAC-seq)، بلک RNA سیکوینسنگ (RNA-seq)، اور جنگلی قسم (WT) اور UTX کے اینٹی UTX CUT&Tag (Cleavage Under Targets and Tagmentation Assay) کا استعمال کرتے ہوئے ٹرانسپوز سے قابل رسائی کرومیٹن کے لیے پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے انٹیگریٹو تجزیہ۔ NK سیل کی کمی نے NK سیل کی فٹنس اور انفیکٹر ردعمل میں شامل جین لوکی کے اظہار کو منظم کرنے میں UTX کے لیے ایک اہم کردار کا انکشاف کیا۔ ہماری تلاشیں UTX کو NK سیل ہومیوسٹاسس میں جنسی اختلافات کے ایک بڑے ڈرائیور کے طور پر شناخت کرتی ہیں اور جین کے اظہار کی ڈیمیتھیلیس سے آزاد ماڈیول کے ذریعے انفیکٹر فنکشن۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنائیں

Cistanche Enhance Immunity مصنوعات دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

نتائج

NK جنسی ڈمورفزم گوناڈل جنسی ہارمونز سے آزاد ہے۔

C57BL/6 چوہوں کی تلیوں کی جانچ کرنے والی ایک حالیہ تحقیقات میں بتایا گیا ہے کہ مردوں کے مقابلے خواتین میں NK خلیوں کی تعداد میں اضافہ ہوا ہے۔ ان اعداد و شمار سے مطابقت رکھتے ہوئے، ہم نے مشاہدہ کیا کہ splenic NK خلیات (جس کی شناخت CD3− TCR − NK1 کے طور پر کی گئی ہے۔{5}}؛ توسیعی ڈیٹا تصویر 1a) تعدد میں اضافہ ہوا ہے (تصویر 1a،b) اور مطلق نمبر (تصویر 1c ) خواتین کے مقابلے مرد C57BL/6 چوہوں میں۔ ان نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ NK سیل نمبروں سے باہر دیگر جنسی طور پر dimorphic خصوصیات وائرل انفیکشن کے لئے مردانہ حساسیت میں اضافہ کا سبب بن سکتی ہیں۔ وائرل انفیکشن کے جواب میں، این کے خلیات سوزش کے حامی سائٹوکائنز کی ابتدائی پیداوار کے لیے اہم ہیں، خاص طور پر IFN- 20–22۔ یہ جانچنے کے لیے کہ آیا این کے سیل کے اندرونی فنکشن میں جنسی اختلافات موجود ہیں، ہم نے این کے خلیوں میں انفیکٹر سائٹوکائن کی پیداوار کا موازنہ کیا جو مادہ بمقابلہ مرد چوہوں سابق ویوو سے الگ تھلگ ہے۔ پرو انفلامیٹری سائٹوکائنز انٹرلییوکن (IL)-12 اور IL-15 کے ساتھ محرک کے نتیجے میں مرد NK خلیات (تصویر 1d,e اور توسیعی ڈیٹا تصویر 1b) کے ذریعہ IFN- کی پیداوار کم ہوئی۔ اسی طرح کے نتائج IL-12 اور IL-18 (توسیعی اعداد و شمار کی شکل 1c,d) کے جواب میں دیکھے گئے، جو سائٹوکائن محرک کے لیے مردانہ NK سیل ردعمل میں متعلقہ نقص کی تجویز کرتے ہیں۔ مزید برآں، انسانی NK خلیات (TCR − CD3− CD56+ ) IL-12 اور K562 لیوکیمیا خلیوں کے ساتھ فعال ہونے والے پیریفرل بلڈ مونو نیوکلیئر سیلز (PBMCs) سے الگ تھلگ ہونے کے نتیجے میں IFN کا فیصد کم ہوا- + (تصویر 1f اور توسیعی ڈیٹا Fig. 1e) اور IFN- مطلب فلوروسینس کی شدت (MFI؛ Fig. 1g) مرد بمقابلہ خواتین NK خلیوں میں۔ اس طرح، اگرچہ NK سیل نمبروں میں اضافہ کیا جاتا ہے، وائرل انفیکشن کے دوران پیدا ہونے والی سوزش والی سائٹوکائنز کے جواب میں مرد NK سیل انفیکٹر سائٹوکائن کی پیداوار چوہوں اور انسانوں دونوں میں مستقل طور پر کم ہوتی ہے۔

زنانہ یا مردانہ جنس گوناڈل ہارمونز (مثال کے طور پر ایسٹروجن یا اینڈروجن) اور جنسی کروموسوم (مثلاً 46XX یا 46XY) کے مرکب پر مبنی ہے۔ پچھلے مطالعات نے NK خلیات23 کے ذریعہ IFN- کی پیداوار کے ضابطے میں گوناڈل ہارمونز کے براہ راست اثرات کو ظاہر کیا تھا، لیکن یہ ممکن ہے کہ NK سیل جنسی اختلافات کو سیل کے اندرونی عوامل سے بھی منسوب کیا جائے۔ جنسی ہارمون کے ثالثی اثرات کی نشاندہی کرنے کے لیے، ہم نے گوناڈیکٹومائزڈ چوہوں میں NK سیل کی کثرت اور فنکشن کی جانچ کی۔ گوناڈیکٹومی NK سیل فریکوئنسی (تصویر 1h اور توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 1f)، مطلق نمبر (تصویر 1i) اور IFN- پروٹین کی پیداوار میں سائٹوکائن محرک کے جواب میں جنسی فرق کو ختم کرنے میں ناکام رہا (تصویر 1j، k اور توسیعی ڈیٹا کی تصویر۔ 1 جی)، ظاہر کرنے والے گوناڈل ہارمونز NK خلیوں میں جنسی فرق کے لیے مکمل طور پر ذمہ دار نہیں ہیں۔ جب کہ CD11b اور CD27 اظہار کے ذریعہ شناخت کردہ NK سیل میچوریشن سب سیٹس میں بقا اور انفیکٹر فنکشن 24 کے لیے امتیازی صلاحیتیں ہیں، WT یا gonadectomized مادہ اور نر چوہوں سے اخذ کردہ splenic NK سیلز NK سیل میچوریشن سب سیٹس کی تعدد میں نمایاں فرق ظاہر نہیں کرتے (توسیع شدہ ڈیٹا) 1h–k)۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ NK سیل نمبر اور انفیکٹر فنکشن میں مشاہدہ شدہ جنسی تعصب فرق کی پختگی کی حالتوں کی وجہ سے نہیں ہیں۔ اس طرح، ہم نے قیاس کیا کہ جنسی کروموسوم کی خوراک NK سیل کی کثرت اور جنسوں کے درمیان کام کرنے میں اہم کردار ادا کر سکتی ہے۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنائیں

UTX X غیر فعال ہونے سے بچ جاتا ہے اور خواتین میں اس کا زیادہ اظہار ہوتا ہے۔

جب کہ 46XX خواتین X سے منسلک جینز کی خوراک کو کنٹرول کرنے کے لیے XCI سے گزرتی ہیں، جینز کا ایک ذیلی سیٹ XCI (جسے XCI فرار کہا جاتا ہے) سے بچ جاتا ہے، جس کے نتیجے میں اکثر خواتین میں مردوں کے مقابلے 25,26 کا اظہار زیادہ ہوتا ہے۔ اس طرح، مردوں کے مقابلے خواتین میں XCI سے بچنے والے اظہار میں اضافہ NK خلیوں میں جنسی اختلافات کو ممکنہ طور پر ثالثی کر سکتا ہے۔ جبکہ مختلف جین انسانوں اور چوہوں میں X کے غیر فعال ہونے سے بچ جاتے ہیں، پانچ جینز (XIST, DDX3X, KDM6A, EIF2S3, KDM5C) کو پہلے دونوں 27 میں XCI فرار ہونے والے کے طور پر شناخت کیا جا چکا ہے۔ XIST کو مزید تجزیے سے خارج کر دیا گیا تھا کیونکہ خواتین کے خلیوں میں XCI میں اس کے معروف کردار کی وجہ سے مرد خلیوں میں اس کا اظہار نہیں کیا جاتا ہے۔ باقی چاروں جینز کو مرد بمقابلہ خواتین NK خلیوں میں نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا، دونوں انسانوں (تصویر 2a) اور چوہوں (تصویر 2b) میں۔ Kdm6a (جو UTX کو انکوڈ کرتا ہے) ٹرانسکرپٹ لیولز نے انسانی اور ماؤس NK سیلز (تصویر 2a، b) دونوں میں سب سے زیادہ جنسی طور پر متنوع اظہار ظاہر کیا۔ مرد NK خلیوں نے بھی چوہوں میں خواتین NK خلیوں کے مقابلے میں کم UTX پروٹین کی سطح کا اظہار کیا (تصویر 2c،d)۔ Kdm6a ٹرانسکرپٹ کی سطحوں اور UTX پروٹین کی سطحوں میں یہ فرق دونوں گوناڈیکٹومائزڈ چوہوں (تصویر 2e–g) اور فور کور جینوٹائپس (FCG) چوہوں (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 2a) میں برقرار ہے جس میں جنسی کروموسوم تکمیلی (XX یا XY) کو اکٹھا نہیں کیا گیا ہے۔ گوناڈل جنسی عضو (بیضہ دانی یا خصیہ) 28۔ یہ اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ Kdm6a (UTX) کے اظہار کی سطح NK خلیات میں جنسی طور پر متعصب ہیں اور بنیادی طور پر گوناڈل ہارمونز کے بجائے X-کروموزوم کی خوراک سے طے ہوتی ہے۔

UTX NK سیل فٹنس کو دباتا ہے۔

اس بات کا تعین کرنے کے لئے کہ آیا UTX NK خلیوں میں مشاہدہ شدہ جنسی اختلافات میں ثالثی کرتا ہے، ہم نے UTX کی خوراک پر منحصر نقصان کے ساتھ چوہوں کی ایک سیریز تیار کی۔ سب سے پہلے، ہم نے NK خلیات (Kdm6afl/WT Ncr1Cre+، اس کے بعد UTXHet؛ سپلیمنٹری ڈیٹا ٹیبل 1) میں UTX کے متفاوت حذف کے ساتھ مادہ چوہوں کو پیدا کیا تاکہ مردوں میں ظاہر کردہ UTX کی واحد کاپی کی نقل کی جا سکے۔ ہم نے خواتین UTXHet اور مرد WT (Kdm6afl/y Ncr1Cre-) چوہوں (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 2b) کے درمیان اسی طرح کے NK سیل UTX پروٹین اظہار کی تصدیق کی۔ خواتین UTXHet چوہوں نے مرد WT (تصویر 3a,b) کے مقابلے اسی طرح کے splenic NK سیل نمبر دکھائے، اور دونوں نے خواتین WT کے مقابلے NK سیلوں کی تعداد میں اضافہ دکھایا۔ CD11b اور CD27 اظہار کے ذریعے پختگی میں کوئی خاص فرق خواتین WT، مرد WT، اور خواتین UTXHet چوہوں (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 2c) کے NK خلیوں کے درمیان نہیں دیکھا گیا۔ اس طرح، UTX کی ایک کاپی کا نقصان NK سیل نمبروں کو پختگی سے آزاد انداز میں بڑھانے کے لیے کافی تھا۔ اس کے بعد ہم نے UTX (Kdm6afl/flNcr1Cre+، اس کے بعد UTXNKD؛ سپلیمنٹری ڈیٹا ٹیبل 1 کے نام سے جانا جاتا ہے) کے ہم جنس پرست حذف کے ساتھ چوہوں کو تیار کیا، جس کے نتیجے میں NK خلیوں میں UTX کی دونوں کاپیاں ضائع ہو گئیں۔ UTX پروٹین کا اظہار خواتین UTXNKD NK خلیوں میں بہاؤ cytometry (توسیع شدہ ڈیٹا Fig. 2b) کے مقابلے خواتین WT NK خلیوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھا، نیز ایک UTX کاپی والے NK خلیوں کے مقابلے میں کم تھا (یعنی مرد WT اور خواتین UTXHet )۔ WT NK خلیات کے مقابلے خواتین UTXNKD میں پیشن گوئی شدہ سائز (180 kD) پر UTX پروٹین کی عدم موجودگی کی تصدیق ویسٹرن بلاٹ (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 2d) سے ہوئی۔ UTX کاپی نمبر میں کمی کے ساتھ NK سیل فریکوئنسی اور مطلق نمبروں میں اضافہ ہوا (تصویر 3c،d اور توسیعی ڈیٹا تصویر 3a)۔ یہ اعداد و شمار UTX کو خوراک پر منحصر انداز میں NK سیل فریکوئنسی اور مطلق نمبروں کو منظم کرنے میں ملوث کرتے ہیں۔

تصویر 1|IFN- پروڈکشن اور NK سیل نمبرز میں جنسی فرق گوناڈل ہارمونز سے آزاد ہیں۔ a–c، نمائندہ ڈاٹ پلاٹ (a)، فریکوئنسی (b)، اور مطلق نمبر (c) splenic NK خلیات (CD3− TCR − NK1.1+ ) خواتین اور نر C57BL/6 چوہوں میں (n { {7}} فی گروپ)۔ d,e، فی صد IFN- + (d) اور نارملائزڈ IFN- MFI (e) کل سپلینک NK سیلز کا مادہ بمقابلہ نر چوہوں کے بغیر علاج (NT) یا IL{{10} } (50 ng ml−1) اور IL-12 (20 ng ml−1) 4 h کے لیے، خواتین IL-15/IL-15 کے MFI کے لیے معمول کے مطابق {18}} علاج (n=8 فی گروپ)۔ f,g، فیصد IFN{{20}} (f) اور نارملائزڈ IFN- MFI (g) CD3− CD56+ خواتین (n=6) اور مرد (n { {25}}) انسانی NK خلیات K562 خلیات کی موجودگی میں 10 ng ml−1 IL-12 کے ساتھ 16 گھنٹے کے لیے مہذب اور محرک ہوتے ہیں، جو خواتین IL کے MFI میں معمول کے مطابق ہوتے ہیں-12 علاج. گوناڈیکٹومائزڈ مادہ اور نر چوہوں (n=18 فی گروپ) میں splenic NK خلیات کی h, i، تعدد (h) اور مطلق نمبر (i)۔ j,k، فیصد IFN- + (j) اور نارملائزڈ IFN- MFI (k) کل splenic NK خلیات جو گوناڈیکٹومائزڈ مادہ اور نر چوہوں سے الگ تھلگ اور NT یا IL-15 (50 ng ml− 1) اور IL-12 (20 ng ml−1) 4 h (n=12 فی گروپ) کے لیے۔ ڈیٹا 2-4 آزاد تجربوں کا نمائندہ ہے۔ نمونوں کا موازنہ دو دم والے بغیر جوڑ والے طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا اور ڈیٹا پوائنٹس کو انفرادی چوہوں کے طور پر اوسط ± sem کے ساتھ پیش کیا گیا (*P <0.05؛ **P <0.01؛ ***P <0.001؛ ****P <0.0001)۔ مخصوص P قدریں درج ذیل ہیں: b=0.0002; c=0.006; d=0.0036; e=0.0013; f=0.04; g=0.03; h <0.0001؛ i=0.0006; j=0.0234; k=0.0019۔

UTXNKD چوہوں (CD452+) میں بڑھے ہوئے NK سیل نمبروں کے بنیادی میکانزم کی وضاحت کرنے کے لیے، WT (CD451+) کے ساتھ مخلوط بون میرو چیمرک (mBMC) چوہوں کا 1:1 تناسب تیار کیا گیا تھا۔ . تشکیل نو کے چھ ہفتے بعد، ہم نے بون میرو ٹرانسپلانٹیشن (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 3b،c) کے بعد خواتین وصول کنندگان (CD451x2) میں WT کے مقابلے خواتین UTXNKD (CD452+ ) NK سیلز کا نمایاں مسابقتی فائدہ دیکھا۔ NK سیلز کے برعکس، ایک ہی ڈونر (UTXNKD, CD452+ ) کے T خلیات، جو UTX کے NK-مخصوص حذف ہونے کی وجہ سے UTX کافی ہیں، نے اصل انجکشن تناسب (1:1؛ توسیعی ڈیٹا کی تصویر) ظاہر کیا۔ 3b،c)۔ یہ اعداد و شمار ترقی کے دوران سیل کے اندرونی انداز میں UTX دبائے ہوئے NK سیل نمبروں کی تجویز کرتے ہیں۔ یہ جانچنے کے لیے کہ آیا یہ فینوٹائپ پھیلاؤ میں فرق سے کارفرما تھا، ہم نے WT میں splenic NK خلیات میں سیل ڈویژن مارکر Ki67 کا تجزیہ کیا: UTXNKD mBMC چوہوں کو 4:1 کے تناسب سے انجکشن لگایا گیا تاکہ جینی ٹائپس کے درمیان سیل نمبر کو معمول پر لایا جا سکے۔ متضاد طور پر، UTXNKD NK خلیات نے Ki67+ خلیات کی کم تعدد ظاہر کی اور IL-15 (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 3d,e) کے جواب میں کم CFSE کمزوری دکھائی۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ UTXNKD چوہوں میں مشاہدہ کردہ اعلی NK سیل نمبر بڑھتے ہوئے پھیلاؤ کی وجہ سے نہیں تھے۔ ان نتائج کو دیکھتے ہوئے، ہم نے قیاس کیا کہ UTXNKD چوہوں (تصویر 3c،d) میں NK خلیوں کی بلند تعدد UTX اظہار کی عدم موجودگی میں NK خلیوں کی سیلولر فٹنس میں اضافہ کی وجہ سے ہو سکتی ہے۔ اس امکان کو جانچنے کے لیے، پیدائشی طور پر الگ WT (CD451x2 ) اور UTXNKD (CD452+ ) سپلینک NK سیلز کو سیل ٹریس وائلٹ (CTV) کا لیبل لگا کر WT (CD451+ ) وصول کنندگان میں منتقل کیا گیا۔ 1:1 تناسب (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 3f)۔ منتقلی کے بعد 7 دن، منتقل شدہ آبادی وصول کنندہ کے تلیوں (تصویر 3e،f) میں UTXNKD NK خلیات کی طرف متوجہ تھی، جو کہ بالغ NK سیل ہومیوسٹاسس کے سیل اندرونی UTX دبانے کا مظاہرہ کرتی ہے۔ یہ فرق بدلے ہوئے پھیلاؤ کی وجہ سے نہیں تھا، کیونکہ منتقلی کے بعد 7ویں دن دونوں منتقل شدہ آبادیوں کے ذریعے CTV کم سے کم تھا (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 3g)۔ یہ جانچنے کے لیے کہ آیا UTX نے اپوپٹوس کے ضابطے کے ذریعے NK سیل ہومیوسٹاسس کو دبایا، ہم نے چھانٹے ہوئے NK خلیوں میں کلیویڈ کیسپیس 3 ایکسپریشن کا موازنہ IL-15 اکیلے یا IL-15 اور apoptosis inducer، Nutlin{42} کے ساتھ کیا۔ a29۔ کم خوراک والے IL-15 اور Nutlin-3ایک علاج (تصویر 3g,h) کی موجودگی میں نچلے UTX اظہار کا تعلق کلیویڈ کیسپیس 3+ NK سیلوں میں کمی کے ساتھ ہے۔ مزید برآں، مرد NK خلیات نے Nutlin کے جواب میں Cleaved caspase 3+ NK خلیات کی فریکوئنسی میں معمولی لیکن نمایاں کمی بھی ظاہر کی-3خواتین NK خلیات کے مقابلے میں، جو گوناڈیکٹومائزڈ چوہوں میں بھی برقرار رہتے ہیں (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 3h–k)۔ مزید برآں، NK سیل اپوپٹوسس اور بقا کا ضابطہ Bcl-2 (اینٹی اپوپٹوٹک فیکٹر)30 کے رشتہ دار اظہار کی سطح پر منحصر ہے، جسے Bim (pro-apoptotic عنصر)31 کے ذریعے مخالف کیا جا سکتا ہے۔ UTXNKD NK خلیات نے Bcl-2 کے انٹرا سیلولر پروٹین ایکسپریشن میں اضافہ اور WT NK سیلز کے مقابلے Bim (تصویر 3i,j اور توسیعی ڈیٹا Fig. 3l) میں معمولی اضافہ دکھایا۔ اس کے نتیجے میں Bcl-2: UTXNKD NK خلیات میں Bim تناسب میں نمایاں اضافہ ہوا (تصویر 3k)۔ مرد NK خلیوں نے بھی Bcl-2: Bim تناسب (تصویر 3l) میں نمایاں اضافہ ظاہر کیا، جو گوناڈیکٹومی (تصویر 3m) کے بعد برقرار رہا۔ ایک ساتھ، یہ اعداد و شمار ظاہر کرتے ہیں کہ تبدیل شدہ UTX کی سطحیں Bcl-2 اظہار کے ضابطے کے ذریعے NK سیل فٹنس میں جنسی فرق کو متاثر کر سکتی ہیں۔

تصویر 2|X سے منسلک UTX جنسی ہارمونز سے آزاد جنسی طور پر dimorphic جین کا اظہار دکھاتا ہے۔ DICE ڈیٹا بیس RNA-seq ڈیٹا کا استعمال کرتے ہوئے XCI فراری جین کا عام اظہار انسانی خواتین (n=36) بمقابلہ مردوں (n {{4}) سے ترتیب شدہ NK خلیوں پر }}) خواتین کے لیے نارمل کیا گیا۔ b، مادہ بمقابلہ نر چوہوں (C57BL/6؛ 8 ہفتے پرانا، n=5 فی گروپ) سے splenic NK خلیات میں ریورس ٹرانسکرپشن (RT–qPCR) کے ساتھ مقداری PCR کے ذریعے XCI فراری جینوں کا معمول کا اظہار۔ جینز کو عورتوں اور مردوں کے درمیان بائیں سے دائیں طرف گنا تبدیلی میں اضافہ کرکے ترتیب دیا جاتا ہے۔ c,d, نمائندہ ہسٹوگرام (c) اور نارملائزڈ MFI (d) UTX پروٹین ایکسپریشن کا UTX پروٹین ایکسپریشن فلو cytometry کے ذریعے بولی مادہ بمقابلہ نر چوہوں سے، مادہ چوہوں کے MFI پر معمول بنایا گیا (C57BL/6؛ 8 ہفتے پرانا؛ n { {12}} فی گروپ)۔ e، Kdm6a (UTX) کا رشتہ دار اظہار RT–qPCR کے ذریعے الگ تھلگ splenic NK خلیات (n=6 فی گروپ) کے لیے نارمل کیا گیا ہے۔ f,g نمائندہ ہسٹوگرامس (f) اور NK خلیات کے رشتہ دار UTX MFI (g) گوناڈیکٹومائزڈ مادہ اور نر چوہوں کے تلیوں سے بہاؤ سائٹومیٹری کے ذریعے (n=6 فی گروپ) مادہ کے لیے نارمل۔ نمونوں کا موازنہ بغیر جوڑ والے دو دم والے طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا اور ڈیٹا پوائنٹس کو اوسط ± sem کے ساتھ انفرادی چوہوں کے طور پر پیش کیا گیا (*P < 0.{{20}}5; **P < 0.01؛ ***P <0.001)۔ مخصوص P قدریں درج ذیل ہیں: a <0.001; b: Ddx3x=0.03, Kdm5c=0.0017, Eif2s3 = 0.0113, Kdm6a=0.000087; d=0.003; e=0.008; g=0.0029)۔

UTX NK سیل انفیکٹر فنکشن کو بڑھاتا ہے۔

چونکہ مردانہ NK خلیات نے IFN- پیداوار میں کمی (تصویر 1d,e) ظاہر کی جو گوناڈل ہارمونز (تصویر 1j,k) سے آزاد ہے ہم نے اگلا یہ تعین کرنے کی کوشش کی کہ آیا یہ فینوٹائپ UTX کی سطح کے ذریعہ ریگولیٹ کیا گیا تھا۔ سائٹوکائن محرک کے بعد، IFN- -پیدا کرنے والے خلیات کی تعدد اور مطلق تعداد (تصویر 4a اور توسیعی ڈیٹا Fig. 4a,b) نیز IFN- MFI (تصویر 4a) مرد WT اور خواتین UTXHet NK کے درمیان ایک جیسے تھے۔ خلیات IFN- خواتین UTXHet NK خلیات کے ذریعہ پیداوار خواتین WT اور خواتین UTXNKD NK خلیات (تصویر 4a اور توسیعی ڈیٹا تصویر 4a، b) کے درمیان درمیانی تھی۔ اس رجحان کو ELISA (تصویر 4b) کے ذریعے NK سیل IFN- جمع کا موازنہ کرتے ہوئے بھی دیکھا گیا۔ مزید برآں، یہ رجحان IFN- کے لیے مخصوص نہیں تھا، کیونکہ گرینولوسائٹ-میکروفیج کالونی محرک عنصر (GM-CSF) کی پیداوار، ایک پرو-انفلامیٹری NK انفیکٹر مالیکیول 32، بھی خواتین NK خلیوں میں UTX کاپی نمبر میں کمی کے ساتھ کم ہو گئی تھی (تصویر 4c۔ )۔

سائٹوکائن کی پیداوار کے علاوہ، این کے سیل سائٹولائٹک سرگرمی اینٹی وائرل33 اور اینٹی ٹیومر ڈیفنسز کے لیے بہت اہم ہے۔ NK سیل cytotoxicity میں جنسی فرق کا اندازہ لگانے کے لیے، ہم نے میجر ہسٹو کمپیٹیبلٹی کمپلیکس (MHC) کلاس I-کمی والے MC38 سیلز کو اہداف کے طور پر قتل کرنے والے اسسیس کو انجام دیا۔ 4:1 اثر کرنے والے: ہدف کے تناسب پر، مرد WT NK خلیات نے خواتین WT (تصویر 4d) کے مقابلے ہدف کے خلیات کی نمایاں طور پر کم لیسیس ظاہر کی، جو گوناڈیکٹومائزڈ چوہوں میں برقرار تھا (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 4c)۔ مردانہ NK سیلز کے ذریعے ٹارگٹ سیل کی خرابی انحطاط میں فرق کی وجہ سے نہیں تھی، کیونکہ CD107a کی سطح خواتین اور مرد NK خلیوں کے درمیان ایک جیسی تھی (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 4d،e)۔ تاہم، مردوں نے IL-15 اور اینٹی NK1.1 ایکٹیوٹنگ ریسیپٹر ligation (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 4d,e) کے جواب میں سائٹوٹوکسک مالیکیولز پرفورین اور گرینزائم بی کی نمایاں طور پر کم سطح پیدا کی۔ خاص طور پر، UTXHet اور مرد WT NK خلیات نے اسی طرح کی ہلاکت کی صلاحیت (تصویر 4d) ظاہر کی، جو خواتین WT اور UTXNKD NK خلیات (تصویر 4d) کے درمیان درمیانی تھی۔ ایک ساتھ، یہ اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ UTX خوراک پر منحصر انداز میں NK سیل سائٹوٹوکسٹی کو بڑھاتا ہے۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنائیں

NK سیل انفیکٹر فنکشن پر UTX نقصان کے مشاہدہ شدہ اثرات پر غور کرتے ہوئے، ہم نے جانچ کی کہ آیا UTXNKD چوہے وائرل انفیکشن کا زیادہ خطرہ ہیں۔ تیز رفتار IFN- اور GM-CSF پیداوار NK سیل ثالثی اینٹی وائرل کنٹرول 20 کے لیے اہم ہے۔ حیرت انگیز طور پر، UTXNKD چوہے تیزی سے انفیکشن کا شکار ہو گئے (n=3/8 بچ گئے) MCMV (تصویر 4e) کی ایک ذیلی خوراک کے ساتھ چیلنج پر۔ مزید برآں، UTX کی کمی والے splenic NK خلیوں نے انفیکشن کے بعد 1.5 دن کو IFN- کی پیداوار اور کل NK خلیوں میں گرانزیم B کی پیداوار میں واضح نقص ظاہر کیا (تصویر 4f اور توسیعی ڈیٹا تصویر 4f،g)۔ مزید برآں، UTXNKD کے ذریعہ IFN- پیداوار میں اسی طرح کی خرابی تمام پختگی کے ذیلی سیٹوں (توسیعی ڈیٹا کی شکل 4h) میں دیکھی گئی، UTX کو پختگی سے آزاد طریقے سے IFN- پروڈکشن کے کنٹرول میں ملوث کرتا ہے۔ اس بات کی تصدیق کرنے کے لیے کہ آیا بالغ NK خلیوں میں UTX اظہار کی خوراک Vivo میں وائرل انفیکشن کے دوران IFN- کی پیداوار سے منسلک ہے، ہم نے tamoxifen-inducible UTX ڈیلیٹیشن (Kdm6afl/fl Rosa26ERT2CRE+، اس کے بعد iUTX− کے نام سے جانا جاتا ہے) حاصل کرنے کے لیے ٹرانسجینک چوہوں کو تیار کیا۔ −؛ ضمنی ڈیٹا ٹیبل 1)۔ mBMC چوہوں کو WT (CD451+ ) اور iUTX−/− (CD45.2+ ) کے 1:1 مکس کے ساتھ تیار کیا گیا تھا تاکہ UTX کو ہیماٹوپوئٹک کمپارٹمنٹ تک حذف کیا جا سکے۔ WT:iUTX−/− mBMC چوہوں کا علاج MCMV سے انفیکشن سے پہلے tamoxifen کے ساتھ کیا گیا تاکہ UTX اظہار کو کم کیا جا سکے (تصویر 4g)۔ IDX−/− (CD45۔{32}} ) NK خلیات نے اپنے WT ہم منصبوں کے مقابلے میں کم IFN- تیار کیا (تصویر 4h اور توسیعی ڈیٹا تصویر 4i)۔ WT میں Tamoxifen انتظامیہ:iUTX−/− mBMC چوہوں کے نتیجے میں UTX پروٹین کے نقصان کی تفریق ڈگری ہوئی اور انفیکشن کے بعد 1.5 دن کو انٹرا سیلولر UTX کی سطح اور IFN- پروڈکشن کے درمیان ایک اہم مثبت تعلق ظاہر ہوا (تصویر 4i)۔ یہ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ بالغ NK خلیوں میں سیل کے اندرونی UTX کی سطح انفیکٹر مالیکیول کی پیداوار اور اس کے نتیجے میں MCMV انفیکشن کے خلاف تحفظ کو منظم کرتی ہے۔

تصویر 3|UTX NK سیل فٹنس کو دباتا ہے۔ a,b, تعدد (F اور M WT: n=12; F UTXHet: n=16; a) اور مطلق اعداد (F WT: n=6; M WT: n {{ 4}}؛ F UTXHet: n=9؛ b) خواتین (F) WT، نر (M) WT اور F UTXHet چوہوں کی تلی میں NK خلیات۔ c,d, تعدد (WT: n=12; UTXHet: n=16; UTXNKD: n=6; c) اور مطلق اعداد (WT: n=8; UTXHet: n {{10}}؛ UTXNKD: n=6; d) F WT، UTXHet اور UTXNKD چوہوں کی تلی میں NK خلیات۔ e، پیدائشی طور پر الگ WT (CD451x2 ) اور UTXNKD (CD45۔{15}} ) NK سیلز WT (CD45۔{17}} ) وصول کنندگان میں انجیکشن سے پہلے 1:1 کے تناسب سے منتقل کیے گئے (بائیں) اور منتقلی کے بعد 7 دن (دائیں)۔ f، انجیکشن سے پہلے وصول کنندہ چوہوں کی تلی میں WT اور UTXNKD خلیوں کی فریکوئنسی اور منتقلی کے بعد 7 دن (n=6)۔ g,h، نمائندہ ہسٹوگرامس (g) اور فیصد (h) IL-15 (5 ng ml−1) کے ساتھ کلچر شدہ خواتین WT، UTXHet، اور UTXNKD چوہوں کے NK سیلز 3+ کلیویڈ کیسپیس کا dimethylsulfoxide (DMSO; F WT: n=7; F UTXHet: n=11; F UTXNKD: n=6) یا 2.5 μM نٹلن-3a (F WT: n { {33}}؛ F UTXHet: n=7; F UTXNKD: n=3) 24 گھنٹے کے لیے۔ i–k، نارملائزڈ Bcl-2 MFI (i)، Bim MFI (j)، اور Bcl-2: Bim MFI تناسب (k) خواتین WT اور UTXNKD چوہوں کے splenic NK خلیوں میں (n {{ 39}})۔ l,m, Bcl{{40}}: مادہ WT اور نر WT چوہوں (n=6; l) اور گوناڈیکٹومائزڈ مادہ اور نر چوہوں کے splenic NK خلیوں میں Bim MFI تناسب (n {{ 42}}؛ م)۔ ڈیٹا 2-4 آزاد تجربوں کا نمائندہ ہے۔ نمونوں کا موازنہ ویرینس کے عام یک طرفہ تجزیہ (ANOVA؛ a–d)، ایک سے زیادہ موازنہ (h) کے لیے ٹوکی کی اصلاح کے ساتھ دو طرفہ انووا، یا بغیر جوڑ والے دو دم والے طالب علم کے ٹی-ٹیسٹ (f، i–m) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ ڈیٹا پوائنٹس اوسط ± sem کے ساتھ انفرادی چوہے ہیں (NS، اہم نہیں؛ *P < 0۔{55}}5; **P < 0۔{75}}1; * **P < 0۔{93}}01; ****P <0.0001)۔ مخصوص P قدریں درج ذیل ہیں: a: F WT بمقابلہ M WT=0.0201، M WT بمقابلہ UTXHet=0.989، F WT بمقابلہ UTXHet=0.0327، WT بمقابلہ UTXNKD { {63}}.001; b: F WT بمقابلہ M WT=0.0320, M WT بمقابلہ UTXHet < 0.99, F WT بمقابلہ UTXHet=0.0029, WT بمقابلہ UTXNKD=0.001; c: WT بمقابلہ UTXHet=0.0375, UTXHet بمقابلہ UTXNKD اور WT بمقابلہ UTXNKD < 0.0001; d: WT بمقابلہ UTXHet=0.0191, UTXHet بمقابلہ UTXNKD=0.0278, WT بمقابلہ UTXNKD=0.001; f: پری انجیکشن=0.3304; دن 7=0.001918؛ h: DMSO <0.0001، Nutlin-3a–F WT بمقابلہ F UTXHet=0.0048، باقی < 0.0001; i <0.0001؛ j=0.0004; k=0.0025; l=0.0115; m=0.0227۔

UTX NK خلیوں کو ڈیمیتھیلیس سے آزاد طریقے سے منظم کرتا ہے۔

ہسٹون ڈیمیتھلیس کے طور پر، UTX NK سیل ہومیوسٹاسس اور انفیکٹر جین ایکسپریشن پروگراموں کو ٹرائیمیتھلیٹڈ ہسٹون H3 Lys27 (H3K27me3؛ ایک جابرانہ ہسٹون نشان) سے ایک میتھائل گروپ کو ہٹا کر فعال جین ایکسپریس 5 کے لیے کرومیٹن کو پوز کرنے کے لیے کنٹرول کر سکتا ہے۔ تاہم، UTX کے پاس epigenetic ریگولیٹرز اور chromatin modifiers کے ساتھ تعامل کرتے ہوئے demethylase سے آزاد سرگرمیاں بھی ہوتی ہیں تاکہ جین کے اظہار 36,37 کو مربوط کیا جا سکے۔ NK سیل ہومیوسٹاسس اور انفیکٹر فنکشن کو ماڈیول کرنے میں UTX demethylase سرگرمی کے کردار کو دریافت کرنے کے لیے، ہم نے ان چوہوں کا فائدہ اٹھایا جو ایک اتپریرک طور پر غیر فعال UTX (UTX 'demethylase-dead' یا UTXDMD چوہوں کا اظہار کرتے ہیں؛ ضمنی ڈیٹا ٹیبل 1) p.6la14G اور p.6la1448 کو پناہ دیتے ہیں۔ کیٹلیٹک ڈومین میں نقطہ اتپریورتن 38۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ خواتین UTXDMD اور WT چوہوں نے اسی طرح کی تعدد اور splenic NK خلیات (تصویر 5a–c) کی مکمل تعداد کی نمائش کی، جبکہ UTXNKD چوہوں نے دونوں کے مقابلے میں splenic NK سیل نمبروں میں اضافہ دکھایا۔ ان نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ UTX کا NK سیل نمبروں کا جبر ڈیمیتھیلیس سے آزاد تھا۔ مزید برآں، سائٹوکائن محرک (تصویر 5d–f) کے جواب میں IFN- پیدا کرنے کی صلاحیت میں WT اور UTXDMD NK خلیات کے درمیان کوئی فرق نہیں دیکھا گیا۔ یہ نتائج ظاہر کرتے ہیں کہ NK سیل نمبروں کو روکنے اور IFN- پروڈکشن کو فروغ دینے میں UTX کا کام ڈیمیتھائلیز سے آزاد ہے۔ UTX کی ایک کاپی کے علاوہ، مرد اتپریرک طور پر غیر فعال Kdm6c (جو پروٹین UTY کو انکوڈ کرتا ہے) کا اظہار کرتے ہیں، UTX کا Y-کروموزوم سے منسلک ہومولوگ۔ ہم نے تصدیق کی کہ UTY کا اظہار صرف انسانوں کے مرد NK سیلز (Extended Data Fig. 5a) اور چوہوں (Extended Data Fig. 5b) میں ہوتا ہے اور چوہوں میں گوناڈیکٹومی کے ذریعے تبدیل نہیں کیا گیا تھا (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 5b)۔ جیسا کہ اوپر بحث کی گئی ہے، NK سیل نمبرز یا انفیکٹر فنکشن میں مرد WT (UTX اور UTY کی ایک کاپی) اور خواتین UTXHet (UTX کی ایک کاپی) چوہوں (Figs. 3a,b اور 4a,d) کے درمیان کوئی فرق نہیں دیکھا گیا، جو تجویز کرتا ہے کہ NK سیل ہومیوسٹاسس اور انفیکٹر فنکشن کو ریگولیٹ کرنے میں UTY کا محدود کردار۔ مزید برآں، مرد UTXNKD (Kdm6afl/y Ncr1cre+) چوہوں نے NK سیل فریکوئنسی اور مطلق نمبروں میں اضافہ دکھایا (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 5c,d) اور کم IFN- (Extended Data Fig. 5e–h) پیدا کیا، جو کہ مرد WT کنٹرولز کے مقابلے میں۔ این کے سیل UTX کی کمی والی خواتین میں آئینے کی تبدیلیاں نظر آتی ہیں۔ (تصویر 3 اے، بی اور 4 اے، بی)۔ اس طرح، NK خلیوں میں UTX کے نقصان کے خواتین اور مردوں میں ایک جیسے اثرات ہوتے ہیں۔

UTX کرومیٹن کو دوبارہ تشکیل دے کر NK سیل ٹرانسکرپٹوم کو کنٹرول کرتا ہے۔

حالیہ مطالعات نے NK سیل ریگولیٹری سرکٹری (ریگولن) کی نشاندہی کی ہے جو NK سیل ایکٹیویشن 39 سے پہلے ہی تیز اثر کرنے والے ردعمل کے لیے فطری لمفائیڈ خلیات کو اہم بناتے ہیں۔ ایک ایپی جینیٹک موڈیفائر کے طور پر، UTX ٹارگٹ جین لوکی کے ریگولیٹری عناصر پر کرومیٹن کو ترتیب دے کر ٹرانسکرپشن کو تبدیل کر سکتا ہے۔ } NK خلیات میں کرومیٹن کی رسائی اور جین کے اظہار پر UTX کی ثالثی کی تبدیلیوں کی چھان بین کرنے کے لیے، ہم نے ترتیب سے پیوریفائیڈ WT (CD451+) اور UTXNKD (CD45) پر بلک RNA-seq کے ساتھ ٹینڈم میں ATAC-seq انجام دیا۔ 9}} ) 4:1 WT سے NK خلیات: UTXNKD mBMC چوہوں (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 6a)۔ ایم بی ایم سی چوہوں کا استعمال اندرونی طور پر کنٹرول شدہ تجربے اور ماحولیاتی الجھنے والے عوامل کو کم سے کم کرنے کی اجازت ہے۔ ATAC-seq اور RNA-seq دونوں ڈیٹا کے پرنسپل-جزو تجزیہ (PCA) نے جینی ٹائپ کے ذریعہ نمونہ کلسٹرنگ کا انکشاف کیا (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 6b)۔ ATAC-seq نے انکشاف کیا کہ WT NK سیلز کے مقابلے UTXNKD میں رسائی میں 3,569 چوٹیوں میں کمی اور 2,113 چوٹیوں میں اضافہ ہوا ہے (log2 fold change > ±0.5، ایڈجسٹ P ویلیو < 0۔{34}}5 ، غلط دریافت کی شرح (FDR) < 0۔{38}}5؛ ضمنی ڈیٹا ٹیبل 2)۔ مزید برآں، RNA-seq نے UTXNKD بمقابلہ WT میں 701 میں کمی اور 554 جینز کی نشاندہی کی (log2 فولڈ تبدیلی > ±0.5، ایڈجسٹ P ویلیو <0.05، FDR <0.05؛ توسیعی ڈیٹا تصویر 6c اور سپلیمنٹری ڈیٹا ٹیبل 3)۔ یہ نتائج UTX کی عدم موجودگی میں NK خلیوں کے کرومیٹن لینڈ اسکیپ اور ٹرانسکرپٹوم دونوں میں گہری تبدیلیوں کا مشورہ دیتے ہیں۔

cistanche پلانٹ میں مدافعتی نظام میں اضافہ

ATAC-seq اور RNA-seq کے انٹیگریٹو تجزیہ نے 395 جینوں کی نشاندہی کی جو دونوں مختلف طور پر قابل رسائی ہیں اور ایک اہم مثبت ارتباط (Spearman correlation: R=0.62, P <2.2 × 10−16) کے درمیان اوسط لاگ 2 کے درمیان ظاہر کیے گئے ہیں۔ ATAC-seq چوٹیوں کی فولڈ تبدیلی اور RNA-seq اظہار کی لاگ 2 فولڈ تبدیلی (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 6d)۔ فزی سی کا مطلب ہے کہ ATAC-seq اور RNA-seq دونوں ڈیٹاسیٹس کے کلسٹرنگ نے چھ بڑے کلسٹروں کی نشاندہی کی جن میں نمایاں طور پر کمی واقع ہوئی تھی (کلسٹرز 1، 2، 3 اور 6) یا بڑھے ہوئے (کلسٹر 4 اور 5) ناقابل رسائی (تصویر 6a) اور اظہار۔ (تصویر 6b) UTXNKD NK خلیوں میں۔ فنکشنل افزودگی کے تجزیے کے لیے، g:Profiler کو RNA-seq (تصویر 6c) کے ذریعے شناخت کیے گئے مختلف جینز کے کلسٹرز کا تجزیہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ بڑے راستے جیسے کہ مدافعتی نظام کا عمل، سائٹوکائن کی پیداوار، IFN- پیداوار، لیمفوسائٹ ایکٹیویشن اور مدافعتی اثر کا عمل UTXNKD میں اظہار میں کمی کے ساتھ منسلک تھے (کلسٹرز 1، 2، 3 اور 6؛ تصویر 6c)۔ دریں اثنا، UTXNKD (کلسٹرز 4 اور 5؛ تصویر 6c) میں بڑھتے ہوئے اظہار کے ساتھ ترقیاتی عمل، بایو سنتھیٹک عمل اور میٹابولک عمل جیسے راستے نمایاں طور پر وابستہ تھے۔ قابل ذکر بات یہ ہے کہ سیل ڈیتھ پاتھ وے جینز کے تجزیے سے یہ بات سامنے آئی کہ متعدد جینوں کو مختلف طریقے سے ظاہر کیا گیا ہے (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 6e)۔ خاص طور پر، اینٹی اپوپٹوٹک جین Bcl2 کے اظہار میں اضافہ کیا گیا تھا، جبکہ پرو اپوپٹوٹک جین Casp3 میں کمی آئی تھی (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 6e)۔ اجتماعی طور پر، یہ نتائج UTX کے نتیجے میں کرومیٹن کی رسائی میں ترمیم اور NK سیل ہومیوسٹاسس اور انفیکٹر فنکشن سے وابستہ جینوں کے اظہار میں ہونے والے نقصان کو متاثر کرتے ہیں۔

تصویر 4|UTX NK سیل انفیکٹر فنکشن کو بڑھاتا ہے اور وائرل انفیکشن کے خلاف بقا کے لیے ضروری ہے۔ فی صد IFN- + اور نارملائزڈ IFN- MFI NK سیلز سے خواتین WT (n=8)، مرد WT (n=8)، خواتین UTXHet (n=12) اور خواتین UTXNKD (n=6) چوہے بغیر علاج کے (NT) یا IL-15 (5{{70}} ng ml−1) اور IL{{1{{8{ {82}}}}} (20 ng ml−1) 4 گھنٹے کے لیے، خواتین کے IL-15/IL-12 کے علاج کے MFI کے لیے معمول کے مطابق۔ b,c, IFN- (b) اور GM-CSF (c) ارتکاز ELISA کے ذریعے ماپا گیا مادہ WT (n=4)، UTXHet (n=5) اور UTXNKD (n {{2) 0}) NT یا IL-12 (20 ng ml−1) اور IL-18 (1{{1{{1{115}) کے ساتھ NK سیل }8}}4}} ng ml−1) 4 گھنٹے کے لیے۔ d، خواتین WT (n {{30}})، مرد WT (n=8)، خواتین UTXHet (n=12) کے ذریعے MHCI کی کمی والے MC38 (ٹارگٹ) سیلز کا مخصوص lysis ) یا خواتین UTXNKD (n=6) NK (اثر) خلیات 16 گھنٹے کے لیے 4:1 انفیکٹر پر: ہدف کا تناسب، خواتین WT کے ذریعے lysis کے لیے نارمل کیا گیا۔ e، Kaplan–Meier MCMV (n=8) سے متاثر WT اور UTXNKD چوہوں کے بقا کے منحنی خطوط۔ Mantel-Cox ٹیسٹ (P=0.0093)۔ f، فیصد IFN- + (n=14)، نارملائزڈ IFN- MFI (n=14) اور گرانزیم B (GzmB) MFI (n=8) splenic میں WT کی نسبت 4:1 WT:UTXNKD mBMC چوہوں کے MCMV انفیکشن کے بعد D1.5 پر NK خلیات۔ g، اسکیمیٹک آف 1:1 WT (CD45۔{52}}) اور iUTX−/− (CD45.2+ ) بون میرو (BM) کو بسلفان کی کمی والے میزبانوں میں منتقل کیا گیا اور 3 کے لیے 1 ملی گرام ٹاموکسفین کے ساتھ علاج کیا گیا۔ d MCMV انفیکشن سے پہلے۔ h، فیصد IFN- + اور NK سیلز کے IFN-MFI کو 1:1 WT:iUTX−/− mBMC چوہوں سے D1.5 پر MCMV انفیکشن کے بعد نارملائز کیا گیا، WT (n=6) پر معمول بنایا گیا۔ i، NK خلیات (n=12; r 2=0.775; P <0.0001) کے IFN- بمقابلہ UTX MFI کا دو دم والا پیئرسن ارتباط۔ ڈیٹا 2-3 آزاد تجربوں کا نمائندہ ہے۔ دو طرفہ ANOVA (a–c)، ایک سے زیادہ موازنہ (d) کے لیے Tukey کی تصحیح کے ساتھ یک طرفہ ANOVA، یا جوڑا بنائے گئے دو دم والے اسٹوڈنٹ کے ٹی-ٹیسٹ (f,h) کا استعمال کیا گیا۔ ڈیٹا پوائنٹس انفرادی چوہے ہیں جن کا اوسط ± sem *P <0.05; **P <0.01؛ ***پی <0.001; ****P <0.0001۔ مخصوص P اقدار: a: F WT بمقابلہ M WT=0.0027، F WT بمقابلہ F UTXHet اور F WT بمقابلہ F UTXNKD < 0.0001، M WT بمقابلہ F UTXHet=0.269، F F UTXHet بمقابلہ UTXNKD=0.0007; b: WT بمقابلہ UTXHet=0.0037, UTXHet بمقابلہ UTXNKD=0.0011, WT بمقابلہ UTXNKD < 0.0001; c: WT بمقابلہ UTXHet=0.0026, UTXHet بمقابلہ UTXNKD=0.0349, WT بمقابلہ UTXNKD < 0.0001; d: F WT بمقابلہ M WT=0.0005، F WT بمقابلہ F UTXHet اور F WT بمقابلہ F UTXNKD < 0.0001، M WT بمقابلہ F UTXHet=0.1616، F UTXHet بمقابلہ F UTXHet=0.1616 }}.0439; f: %IFN- + < 0.0001, IFN- MFI=0.0024, GzmB=0.0032; g: %IFN- + < 0.0001, IFN- MFI=0.0018۔ PI، پوسٹ انفیکشن۔

تصویر 5|UTX NK سیل ہومیوسٹاسس اور IFN- پروڈکشن کو ڈیمیتھیلیس سرگرمی سے آزاد کنٹرول کرتا ہے۔ a–c، نمائندہ کثافت پلاٹ (a)، تعدد (b)، اور NK خلیات کی مطلق تعداد (c) خواتین WT، UTXDMD، اور UTXNKD چوہوں کی تلیوں میں (n=5 فی گروپ)۔ d–f، نمائندہ کنٹور پلاٹ (d)، فیصد IFN- + (e)، اور نارملائزڈ IFN- MFI (f) خواتین کے WT، UTXDMD، اور UTXNKD NK سیلز (n=5 فی گروپ) ڈبلیو ٹی میں معمول بنایا گیا۔ ڈیٹا 2-3 آزاد تجربوں کا نمائندہ ہے۔ متعدد موازنہ کے لیے ٹکی کی اصلاح کے ساتھ یک طرفہ ANOVA کا استعمال کرتے ہوئے نمونوں کا موازنہ کیا گیا۔ ڈیٹا پوائنٹس کو اوسط ± sem *P < 0 کے ساتھ انفرادی چوہوں کے طور پر پیش کیا جاتا ہے۔{11}}5; **P < 0۔{17}}1; ****P < 0.0001۔ مخصوص P قدریں درج ذیل ہیں: b: WT بمقابلہ UTXDMD=0.7353، WT بمقابلہ UTXNKD اور UTXDMD بمقابلہ UTXNKD < 0.0001; c: WT بمقابلہ UTXDMD=0.4888، WT بمقابلہ UTXNKD اور UTXDMD بمقابلہ UTXNKD < 0.0001; e: WT بمقابلہ UTXDMD=0.855, WT بمقابلہ UTXNKD=0.0030, UTXDMD بمقابلہ UTXNKD=0.0380; f: WT بمقابلہ UTXDMD=0.1382، WT بمقابلہ UTXNKD=0.0079، UTXDMD بمقابلہ UTXNKD=0.0166۔

رسائی اور جین کے اظہار میں جینوم کے وسیع فرق پر غور کرتے ہوئے ہم نے ATAC-seq اور RNA-seq کے ذریعہ مشاہدہ کیا، ہم نے براہ راست UTX کے ثالثی اثرات کو بھی تلاش کیا۔ ہم نے اینٹی UTX CUT&Tag کو انجام دیا جس کے بعد ترتیب ترتیب دی گئی، جس سے اینٹی باڈی پر مبنی امیونوپریسیپیٹیشن طریقہ41 کا استعمال کرتے ہوئے UTX سے منسلک ڈی این اے ریجنز کا پتہ لگانے کی اجازت دی گئی۔ ترتیب سے پیوریفائیڈ WT اور UTXNKD NK سیلز پر اینٹی UTX CUT&Tag نے 5,746 UTX- پابند چوٹیوں کا انکشاف کیا (FDR < 0۔ اور سپلیمنٹری ڈیٹا ٹیبل 4)۔ ATAC-seq اور RNA-seq دونوں ڈیٹا کے PCA نے جینی ٹائپ کے ذریعہ نمونہ کلسٹرنگ کا انکشاف کیا (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 6f)۔ ہم نے 191 جینز کی نشاندہی کی جو UTX کے پابند تھے، ATAC-seq کے ذریعے مختلف طور پر قابل رسائی اور RNA-seq (تصویر 6d) کے ذریعے تفریق کا اظہار کیا۔ ان 191 جینوں کے اندر، UTX سے منسلک چوٹیوں کی اکثریت پروموٹر (20.58%)، انٹرنیک (46.94%) اور انٹرجینک (27.4%) علاقوں (تصویر 6e) میں واقع تھی۔ NK سیل ہومیوسٹاسس (Bcl2 اور Thy1؛ تصویر 6f) 30,42 اور انفیکٹر فنکشن (Ifng اور Csf2) میں شامل قابل ذکر جین UTX کے پابند تھے، امتیازی طور پر قابل رسائی اور امتیازی طور پر ظاہر کیے گئے تھے (تصویر 6g)۔ مزید برآں، 191 UTX سے منسلک جینوں میں سے، 140 جین اظہار میں کم ہوئے، جبکہ بقیہ 51 جینوں میں اضافہ کیا گیا (ضمنی ڈیٹا ٹیبل 3) T خلیوں میں پیشگی رپورٹ کی تصدیق کرتے ہوئے کہ UTX جین کی نقل کو چالو کرنے اور دبانے دونوں میں کام کرتا ہے۔ ان 191 UTX سے منسلک جینوں پر Enrichr پاتھ وے تجزیہ44 سے پتہ چلا کہ UTXNKD NK خلیات میں سوزش کے ردعمل، IFN- سگنلنگ اور NK سیل سائٹوٹوکسائٹی کے راستے (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 6g) میں کمی واقع ہوئی۔ اس کے برعکس، سیلولر کیٹابولک عمل میں اضافہ اور اپوپٹوسس سگنلنگ پاتھ ویز، جس میں پرو اپوپٹوٹک اور اینٹی اپوپٹوٹک جینز (مثال کے طور پر، Bcl2، Bbc3 اور Gadd45g) شامل ہیں، UTXNKD NK سیلز میں دیکھے گئے۔ UTX پر منحصر اظہار اور کرومیٹن کی رسائی کے فرق کے ساتھ 865 UTX سے منسلک چوٹیوں میں (191 منفرد جین)، لکیری ریگریشن تجزیہ نے کرومیٹن کے درمیان ایک اہم مثبت ارتباط (پیئرسن کے R=0.5165، P <0.0001) کو ظاہر کیا۔ رسائی اور جین کا اظہار (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 6h، i)۔ Bcl2، Thy1، Ifng، اور Csf2 جین لوکی کے اندر UTX کے زیر قبضہ علاقے ان خطوں کے ساتھ مطابقت رکھتے ہیں جن میں رسائی اور جین کے اظہار میں فرق بھی نوٹ کیا گیا تھا (تصویر 6f،g)۔ یہ اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ UTX کرومیٹن کی رسائی کو منظم کرتا ہے اور NK سیل ہومیوسٹاسس اور فنکشن کو ریگولیٹ کرنے میں اہم جین ٹرانسکرپشن پاتھ ویز۔

UTX ٹارگٹ جین ٹرانسکرپشن40 کو آرکیسٹریٹ کرنے کے لیے ٹرانسکرپشن عوامل (TFs) کے ساتھ تعامل کرنے کے لیے جانا جاتا ہے۔ UTX کے نقصان کی وجہ سے امتیازی رسائی کے ساتھ Putative TF motifs کی شناخت کرنے کے لیے، ہم نے HOMER (Hypergeometric Optimization of Motif Enrichment) 45 TF موٹیف تجزیہ کیا جس کی شناخت ATAC-seq (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 6j) کے ذریعے قابل رسائی چوٹیوں پر کی گئی۔ NK سیل انفیکٹر فنکشن سے وابستہ TFs (مثال کے طور پر Runt (Runx1 اور Runx2)46 اور T-box (Eomes, T-bet, Tbr1 اور Tbx6) 47 فیملی ممبرز) زیادہ اہم تھے اور ان کے ساتھ وابستہ ہدف کے نقشوں کا زیادہ فیصد تھا۔ UTXNKD میں رسائی میں کمی (کلسٹرز 1، 2، 3 اور 6؛ توسیعی ڈیٹا تصویر 6j)۔ اس کے برعکس، زنک فنگر اور ETS فیملی TFs48 میں پھیلاؤ، تفریق اور میٹابولزم سے وابستہ TFs زیادہ نمایاں طور پر بڑھی ہوئی رسائی کے ساتھ وابستہ تھے (کلسٹرز 4 اور 5؛ توسیعی ڈیٹا تصویر 6j)۔ مزید برآں، UTX CUT&Tag کے ذریعے UTX سے منسلک چوٹیوں کا TF موٹف تجزیہ NK سیل انفیکٹر پروسیس (T-bet، Eomes، Runx1 اور Tbx5) اور ترقیاتی پروگراموں (ETS1 اور AP) دونوں میں اہم TFs کو ظاہر کرتے ہوئے ان نتائج کی تصدیق کرتا ہے۔ توسیعی ڈیٹا تصویر 6k)۔ یہ اعداد و شمار NK سیل فٹنس اور انفیکٹر پروسیسز کو ریگولیٹ کرنے میں ملوث اہم TF بائنڈنگ شکلوں کی امتیازی رسائی اور براہ راست UTX بائنڈنگ دونوں کا مشورہ دیتے ہیں۔ ان تجزیوں سے پتہ چلتا ہے کہ UTX NK سیل ہومیوسٹاسس (Bcl2 اور Thy1) اور انفیکٹر فنکشن (Ifng اور Csf2) میں اہم جینز کے اظہار کو کنٹرول کرنے کے لیے کرومیٹن لینڈ سکیپ کو ماڈیول کرتا ہے۔ بالآخر، یہ نتائج ایک ایسے ماڈل کی تجویز کرتے ہیں جس میں NK سیل کی فٹنس اور انفیکٹر فنکشن (تصویر 6h) کے مرکزی ریگولیٹر کے طور پر NK خلیوں میں UTX اظہار کی سطحیں جنسی تفاوت کو جنم دے سکتی ہیں۔

تصویر 6|NK سیل کرومیٹن کی رسائی میں عالمی تبدیلیاں اور UTX کے ذریعے ثالثی کی گئی نقل۔ a–c, 4:1 WT: UTXNKD mBMCs WT (CD451+ ) اور UTXNKD (CD452+ ) بون میرو کو لیمفوڈیپلیٹیڈ میزبان چوہوں (CD451x2) میں منتقل کرکے تیار کیا گیا تھا اور اس کے لیے دوبارہ تشکیل دینے کی اجازت دی گئی تھی۔ 6 ہفتے Splenic NK خلیوں کو ATAC-seq اور RNA-seq لائبریری کی تیاری کے لیے ترتیب دیا گیا تھا (n=3 فی گروپ)۔ مبہم سی کے لائن گراف (بائیں) اور حرارت کا نقشہ (دائیں) جس کی شناخت ATAC-seq (a) کے ذریعے کی گئی مختلف طور پر قابل رسائی چوٹیوں اور WT سے splenic NK خلیات کے RNA-seq (b) کے ذریعے شناخت شدہ امتیازی طور پر ظاہر کردہ جینز: UTXNKD mBMC چوہے (ایڈجسٹڈ P ویلیو < 0۔{18}}5 اور ممبرشپ سکور > 0.5)۔ لائن گراف وسط (سیاہ لکیر) اور معیاری انحراف (سرخ ربن) کو ظاہر کرتے ہیں۔ c، اہم مبہم سی کے پاتھ وے تجزیہ کا مطلب ہے g کا استعمال کرتے ہوئے کلسٹرڈ RNA-seq جینز: پوائنٹ سائز کے ساتھ پروفائلر جو کہ −log10 (P قدر؛ جی کے ذریعے حساب کیا جاتا ہے: فشر کے ون ٹیلڈ ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے GOST)۔ d–g، اینٹی UTX CUT&Tag کو WT اور UTXNKD NK سیلوں میں انجام دیا گیا تھا اور 5,746 منفرد UTX سے منسلک چوٹیوں کی نشاندہی کی گئی تھی (n=3 فی گروپ)۔ d، وین ڈایاگرام کا خاکہ اوورلیپنگ ڈیفرینشل طور پر قابل رسائی (DA) جینز جن کی شناخت ATAC-seq کے ذریعے کی گئی ہے اور RNA-seq کے ذریعے شناخت کردہ تفریق ظاہر شدہ (DE) جین۔ e، UTX سے منسلک چوٹیوں کا مقام۔ f,g، اینٹی UTX CUT&Tag ('anti-UTX') کے UCSC انٹیگریٹڈ جینوم براؤزر سے نمائندہ جین ٹریک، Bcl2 اور Thy1 (f) اور Ifng اور Csf2 (g) کے ATAC-seq اور RNA-seq؛ y-axis تعداد فی ملین (CPM) کو ظاہر کرتا ہے۔ h، اسکیمیٹک کہ کس طرح تفریق UTX اظہار کی سطح NK سیل کی ساخت اور فنکشن (بائیں) میں جنسی تفاوت کو کم کرتی ہے۔ ہومیوسٹاسس اور وائرل انفیکشن (دائیں) کے دوران NK سیل نمبرز اور انفیکٹر فنکشن میں شامل جین پروگراموں کو کس طرح UTX ریگولیٹ کر سکتا ہے اس کا خاکہ۔ BioRender.com کے ساتھ تخلیق کیا گیا۔

بحث

جنس وائرل انفیکشن کے نتائج کا تعین کرنے میں ایک اہم حیاتیاتی تغیر ہے۔ یہ حال ہی میں COVID-19 کے ساتھ واضح کیا گیا تھا، جس میں مردانہ جنس کو سنگین بیماری کے لیے ایک بڑے خطرے کے عنصر کے طور پر شناخت کیا گیا تھا5۔ مزید برآں، حالیہ مطالعات نے NK سیل کی خرابی کو شدید COVID-19 بیماری سے منسلک کیا ہے۔ اینٹی وائرل استثنیٰ میں NK خلیوں کی اہمیت کو دیکھتے ہوئے، NK سیل بائیولوجی میں جنسی اختلافات کی بنیادی وجوہات کو سمجھنے سے اینڈوجینس انفیکٹر ردعمل کو بہتر بنانے میں دور رس اثرات مرتب ہوں گے۔ اس مطالعے میں، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ مرد NK خلیوں میں UTX کا کم اظہار ان کی بڑھتی ہوئی تعداد اور اثر کرنے والے کی فعالیت میں کمی کا باعث بنتا ہے۔ NK سیل UTX کی NK سیل فٹنس کو کنٹرول کرنے، TF بائنڈنگ موٹیفز کی رسائی کو موڈیول کرنے، انفیکٹر جین لوکی پر کرومیٹن کی رسائی میں اضافہ، اور وائرل انفیکشن پر تیز ردعمل کے لیے NK سیلز کو پوز کرنے کے لیے ضروری ہے۔

این کے سیلز کے علاوہ، بی سیلز، مونوکیٹس، نیوٹروفیلز، سی ڈی4+ ٹی سیلز، اور سی ڈی8+ ٹی سیلز25 میں جنسی ڈمورفزم کی اطلاع دی گئی ہے۔ اگرچہ مدافعتی خلیوں میں جنسی اختلافات کو پہلے گوناڈل جنسی ہارمونز50-52 کے ذریعہ ثالثی کرنے کی اطلاع دی گئی ہے، یہ ممکن ہے کہ ان تفاوتوں کا ایک ذیلی سیٹ بھی امتیازی UTX اظہار سے منسوب ہو۔ اس امکان کی حمایت میں، UTX کی کمی کو T سیل میں کمی اور NK T سیل نمبر 53–55 کے ساتھ منسلک کیا گیا ہے۔ اور UTX ٹرانسکرپٹس مرد بمقابلہ خواتین کے خلیوں میں ایک سے زیادہ مدافعتی خلیوں کی اقسام (CD4+ T خلیات، CD8+ T خلیات، monocytes، B خلیات) DICE ڈیٹا بیس میں پوچھے گئے 56 میں کم ہیں۔ دیگر مدافعتی خلیوں کی اقسام میں جنسی اختلافات کو ماڈیول کرنے میں UTX کے کردار کا تعین کرنے کے لیے مزید فینوٹائپک مطالعات کی ضرورت ہے۔ این کے سیل ثالثی اثر کرنے والے افعال میں سائٹوکائن کی پیداوار اور سائٹوٹوکسک مالیکیول اظہار شامل ہیں۔ ہمارے ملٹی اومک تجزیوں سے پتہ چلتا ہے کہ UTX NK سیلز کے کرومیٹن لینڈ اسکیپ کو تیار کرتا ہے تاکہ انفیکٹر لوکی کی رسائی اور ٹرانسکرپشن کو بڑھا کر وائرل چیلنجز کا تیزی سے جواب دے سکے۔ ان مطالعات نے 191 جینز (بشمول Ifng اور Csf2) 20,32 کا انکشاف کیا جو بیک وقت UTX کے پابند تھے، مختلف طور پر قابل رسائی اور اظہار۔ IFN- اور GM-CSF سائٹوکائن کی پیداوار میں کمی اور UTX کی کمی والے NK خلیات کی سائٹولائٹک صلاحیت میں کمی سوزش کے دوران انفیکٹر کی فعالیت کو فروغ دینے میں UTX کے کردار کی حمایت کرتی ہے۔ تاہم، UTX کی ثالثی والے جین ریگولیشن کے اضافی بالواسطہ نتائج ہو سکتے ہیں جو NK سیل انفیکٹر فنکشن میں اہم کردار ادا کرتے ہیں، جیسا کہ اضافی جینوں سے ظاہر ہوتا ہے جو کہ UTX کی طرف سے متفرق طور پر ظاہر ہوتے ہیں لیکن پابند نہیں ہوتے ہیں۔

H3K27me3 demethylase کے طور پر، UTX فعال جین کے اظہار کے لیے کرومیٹن کو تیار کرتا ہے۔ اس کی کیٹلیٹک سرگرمی کے علاوہ، UTX دوسرے ایپی جینیٹک ریگولیٹرز (مثال کے طور پر، SWI/SNF، MLL4/5، اور p300) کے ساتھ ملٹی پروٹین کمپلیکس میں کام کرتا ہے تاکہ ڈیمیتھیلیس سے آزاد طریقے سے کرومیٹن کی دوبارہ تشکیل میں ثالثی کی جا سکے۔36,57۔ ہم NK خلیوں میں ہومیوسٹاسس اور انفیکٹر پروگراموں کو منظم کرنے میں UTX کے ڈیمیتھیلیس سے آزاد افعال کی اطلاع دیتے ہیں۔ یہ غیر متزلزل NK T خلیوں میں UTX کے کردار کے برعکس ہے، جس میں اس کی demethylase سرگرمی کی ضرورت ہے53۔ اس طرح، مالیکیولر میکانزم جن کے ذریعے UTX افعال نسب کے لحاظ سے مخصوص ہو سکتے ہیں۔ اس مفروضے کی حمایت میں، UTX کو T خلیوں میں نسب سے متعلق مخصوص TFs کے ساتھ تعامل کرنے کی اطلاع دی گئی ہے تاکہ انفیکٹر لوکی 40 کو نشانہ بنایا جا سکے۔ ہمارے HOMER شکل کے تجزیے سے یہ انکشاف ہوا کہ Runx1، Runx2، Eomes، اور دیگر TFs کے ساتھ ممکنہ UTX تعاملات وائرل انفیکشن کے دوران NK سیل انفیکٹر فنکشن کے لیے اہم ہیں46,47۔ مزید یہ کہ، یہ تجزیے KLF1، KLF5، Sp2، اور NK سیل کے پھیلاؤ، تفریق، اور میٹابولزم48 سے وابستہ دیگر TFs کے ساتھ UTX تعاملات کی طرف بھی اشارہ کرتے ہیں۔ مزید برآں، ہمارے نتائج پہلے شائع شدہ مطالعات کی حمایت کرتے ہیں جن میں دیگر سیل اقسام میں UTX کو T-bet، Eomes، اور Tbx5 (ref. 40)، ETS1 (ref. 48) اور AP-1 کے ساتھ جوابات کو مربوط کرنے کی اطلاع دی گئی ہے۔ ref.58)۔ آخر میں، Runx1 کو UTX-regulated BRG1 اور SWI/SNF کمپلیکس46 کے ساتھ تعامل کرتے ہوئے دکھایا گیا ہے۔ تاہم، HOMER تجزیہ کی متعلقہ نوعیت کی وجہ سے، حالات میں ان تعاملات کی تجرباتی طور پر تصدیق کرنے کے لیے co-immunoprecipitation اور mass spectrometry کے ساتھ مزید مطالعات کی ضرورت ہے۔ مزید برآں، ایک تشکیلاتی XCI فرار کے طور پر، UTX کے پاس دو امکانات کے ذریعے سیل قسم کے مخصوص میکانزم ہو سکتے ہیں: (i) موجود کوفیکٹرز کا پول اور (ii) اس کے ایپی جینیٹک بائنڈنگ پارٹنرز کی دستیابی۔ UTX کوفیکٹرز (مثال کے طور پر، Fe(II)، -ketoglutarate، اور آکسیجن) کے لیے میٹابولک پاتھ ویز کے ضمنی پروڈکٹس پر انحصار کرتا ہے جو اس کی انزیمیٹک سرگرمی کے لیے اہم ہیں۔ اس طرح، میٹابولک حالت پر انحصار کرتے ہوئے، UTX کے ڈیمیتھائلیز فنکشن کے لیے کوفیکٹرز کے الگ الگ پول موجود ہیں، جو سیل کی قسم کی بنیاد پر اتپریرک سرگرمی کی تفریق سطح کی اجازت دیتے ہیں۔ مزید برآں، UTX کی فعالیت اس کے پابند شراکت داروں (مثال کے طور پر، MLL3/4، SWI/SNF، اور p300) کی سرگرمی اور اظہار کی سطح پر بھی منحصر ہو سکتی ہے جو خود بخود انکوڈ شدہ ہیں۔

مردوں کے لئے cistanche فوائد - مدافعتی نظام کو مضبوط

وزنی عوامل جو مختلف مدافعتی ردعمل کے ساتھ مریض کے ذیلی سیٹوں کی وضاحت کرتے ہیں ہمیں صحت سے متعلق دوائی کے نمونے تک 'ایک سائز کے تمام فٹ' علاج کے نقطہ نظر سے گزرنے کی اجازت دے گا۔ UTX کی کمی کابوکی سنڈروم اور ٹرنر سنڈروم 60 کے ساتھ منسلک ہے، دو انسانی حالات جو مدافعتی کمزوری اور بڑھتے ہوئے انفیکشن سے وابستہ ہیں۔ ہماری تلاشیں اس امکان کی تجویز کرتی ہیں کہ انسانی NK خلیوں میں UTX کی کمی ان مریضوں میں پائے جانے والے وائرل امیونو سرویلنس میں کمی کا باعث بن سکتی ہے، حالانکہ اس مفروضے کی تائید کے لیے مستقبل میں کام کی ضرورت ہوگی۔ مزید برآں، علاج کے فیصلوں میں جنس کو حیاتیاتی عنصر کے طور پر شامل کرنے کے لیے NK سیل فنکشن میں جنسی فرق کو سمجھنے کی ضرورت ہے۔ شدید وائرل بیماری والے مردوں میں، مثال کے طور پر، NK سیل UTX سرگرمی کو بڑھانا علاج کے فوائد فراہم کر سکتا ہے۔ ہم توقع کرتے ہیں کہ یہ بصیرتیں نہ صرف وائرل انفیکشن کی ترتیب میں بلکہ دیگر انفیکشنز اور کینسر میں بھی اہم ہوں گی، جہاں NK خلیات بھی اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ ان نتائج میں اپنانے والے سیلولر علاج کے لیے بھی اہم مضمرات ہو سکتے ہیں، جس میں NK خلیات شدید دلچسپی کا موضوع ہیں۔

حوالہ جات

1. ولکنسن، این ایم، چن، ایچ سی، لیکنر، ایم جی اور ایس یو، ایم اے استثنیٰ میں جنسی اختلافات۔ Annu Rev. Immunol. 40، 75–94 (2022)۔

2. کلین، ایس ایل اور فلاناگن، کے ایل مدافعتی ردعمل میں جنس کے فرق۔ نیٹ Rev. Immunol. 16، 626–638 (2016)۔

3. Pardue، M.-L. & Wizemann, TM انسانی صحت میں حیاتیاتی شراکت کی کھوج: کیا جنسی فرق پڑتا ہے؟ نیشنل اکیڈمیز پریس https://doi.org/10.17226/10028 (2001)۔

4. Gianella، S. et al. دبانے والے ART کے دوران CMV نقل اور HIV استقامت میں جنسی فرق۔ اوپن فورم انفیکٹ۔ ڈس 7، ofaa289 (2020)۔

5. تاکاہاشی، T. اور Iwasaki، A. مدافعتی ردعمل میں جنسی اختلافات۔ سائنس 371، 347–348 (2021)۔

6. Patin، E. et al. پیدائشی مدافعتی خلیوں کے پیرامیٹرز میں قدرتی تغیرات ترجیحی طور پر جینیاتی عوامل کے ذریعہ کارفرما ہیں۔ نیٹ امیونول۔ 19، 302–314 (2018)۔

7. ہوانگ، زیڈ وغیرہ۔ مدافعتی سیل کے منظر نامے پر جنسی اور عمر بڑھنے کے اثرات جیسا کہ سنگل سیل ٹرانسکرومیٹک تجزیہ کے ذریعے اندازہ کیا گیا ہے۔ پروک Natl Acad. سائنس USA 118, e2023216118 (2021)۔

8. تلبیزادہ، زیڈ، سائمن، ایس ڈی اور بٹلر، انسانی بافتوں میں ایم جی ایکس کروموسوم جین کا اظہار: مرد اور خواتین کا موازنہ۔ جینومکس 88، 675–681 (2006)۔

9. Fang, H., Disteche, CM & Berletch, JB X غیر فعال ہونا اور فرار: ایپی جینیٹک اور ساختی خصوصیات۔ سامنے والا۔ سیل دیو۔ بائول 7، 219 (2019)۔

10. چن، ایکس وغیرہ۔ p53-نول چوہوں میں عصبی ٹیوب کے نقائص میں جنسی فرق X کی تکمیل میں فرق کی وجہ سے ہوتا ہے، Y جین کی نہیں۔ دیو نیوروبیول۔ 68، 265–273 (2008)۔

11. Smith-Bouvier, DL et al. آٹومیمون بیماری میں خواتین کے تعصب میں جنسی کروموسوم کی تکمیل کے لئے ایک کردار۔ J. Exp. میڈ. 205، 1099–1108 (2008)۔

12. Souyris، M. et al. TLR7 مدافعتی خلیوں میں X کروموسوم کے غیر فعال ہونے سے بچ جاتا ہے۔ سائنس امیونول۔ 3، eaap8855 (2018)۔

13. ہتھوڑا، Q.، Ruckert، T. & Romagnani، C. وائرل انفیکشنز کے لیے قدرتی قاتل سیل کی خصوصیت۔ نیٹ امیونول۔ 19، 800–808 (2018)۔

14. اورنج، جے ایس نیچرل قاتل سیل کی کمی۔ J. الرجی کلین۔ امیونول۔ 132، 515–525 (2013)۔

15. Bukowski, JF, Warner, JF, Dennert, G. & Welsh, RM ایڈاپٹیو ٹرانسفر اسٹڈیز Vivo میں قدرتی قاتل خلیوں کے اینٹی وائرل اثر کو ظاہر کرتی ہیں۔ J. Exp. میڈ. 161، 40–52 (1985)۔

16. براؤن، ایم جی وغیرہ۔ وائرل انفیکشن کے خلاف مزاحمت میں قدرتی قاتل سیل ایکٹیویشن ریسیپٹر کی اہم شمولیت۔ سائنس 292، 934-937 (2001)۔

17. Welsh, RM, Brubaker, JO, Vargas-Cortes, M. & O'Donnell, CL نیچرل کلر (NK) شدید مشترکہ امیونو کی کمی کے ساتھ چوہوں میں وائرس کے انفیکشن پر سیل ردعمل۔ NK خلیات کی محرک اور وائرس کے انفیکشن کا NK سیل پر منحصر کنٹرول T اور B سیل کے کام سے آزادانہ طور پر ہوتا ہے۔ J. Exp. میڈ. 173، 1053–1063 (1991)۔

18. بین کرافٹ، جی جے، شیلم، جی آر اور چلمر، جے ای مورین سائٹومیگالو وائرس انفیکشن کے دوران قدرتی قاتل خلیوں کی افزائش پر جینیاتی اثرات: مزاحمت کے نمونوں کے ساتھ ارتباط۔ J. Immunol. 126، 988-994 (1981)۔

19. مینیس، کے بی وغیرہ۔ Splenic امیون سیل پروفائل اور NK سیل فینوٹائپس اور C57BL/6J چوہوں میں فنکشن کی جنس اور عمر پر منحصر تبدیلیاں۔ امون. عمر 18، 3 (2021)۔

20. Mujal, AM, Delconte, RB & Sun, JC قدرتی قاتل خلیات: پیدائشی سے لے کر انکولی خصوصیات تک۔ انو Rev. Immunol. 39، 417–447 (2021)۔

21. Loh, J., Chu, DT, O'Guin, AK, Yokoyama, WM & Virgin, HWT قدرتی قاتل خلیات تلی اور جگر میں مورین سائٹومیگالو وائرس انفیکشن کو کنٹرول کرنے کے لیے پرفورین اور گاما انٹرفیرون دونوں کا استعمال کرتے ہیں۔ جے ویرول۔ 79، 661–667 (2005)۔

22. اورنج، جے ایس، وانگ، بی، ٹیر ہورسٹ، سی اور بیرون، سی اے کی ضرورت ہے قدرتی قاتل سیل سے تیار کردہ انٹرفیرون گاما کے لیے مورین سائٹومیگالو وائرس انفیکشن کے خلاف دفاع اور انٹرلییوکن-12 انتظامیہ کے ذریعے اس دفاعی راستے کو بڑھانا۔ J. Exp. میڈ. 182، 1045–1056 (1995)۔

23. نکایا، ایم، تاچیبانا، ایچ اور یاماڈا، K. ماؤس اسپلینوسائٹس کے خلیوں کی آبادی پیدا کرنے والے انٹرفیرون-گاما پر ایسٹروجن کا اثر۔ بائیوسی۔ بائیو ٹیکنالوجی بائیو کیم۔ 70، 47–53 (2006)۔

24. Chiossone، L. et al. ماؤس NK خلیات کی پختگی ایک 4- مرحلہ ترقیاتی پروگرام ہے۔ خون 113، 5488–5496 (2009)۔

25. وینر کٹسیر، کے. اینڈ لینیئل، ایم. انسانی جینز ایکس ان ایکٹیویشن سے بچتے ہوئے ایک سیل ایکسپریشن ڈیٹا کے ذریعے انکشاف کیا گیا ہے۔ بی ایم سی جینومکس 20، 201 (2019)۔

26. یانگ، ایف، بابک، ٹی، شینڈور، جے اینڈ ڈسٹیچ، ماؤس میں آر این اے کی ترتیب کے ذریعے ایکس کے غیر فعال ہونے سے فرار کا سی ایم گلوبل سروے۔ جینوم ریس 20، 614–622 (2010)۔

27. Berletch، JB et al. ایکس غیر فعال ہونے سے فرار ماؤس ٹشوز میں مختلف ہوتا ہے۔ پی ایل او ایس جینیٹ۔ 11، e1005079 (2015)۔

28. آرنلڈ، اے پی فور کور جین ٹائپس اور XY* ماؤس ماڈل: SABV تحقیق پر اثرات کی تازہ کاری۔ نیوروسکی بائیو بیوہ Rev. 119, 1–8 (2020)۔

29. ہاسیگاوا، ایچ ایٹ ال۔ MDM2 کے مخالف، Nutlin-3a کے ذریعے p53 کو چالو کرنا، بالغ ٹی سیل لیوکیمیا کے خلیات میں apoptosis اور سیلولر سنسنی پیدا کرتا ہے۔ لیوکیمیا 23، 2090–2101 (2009)۔

30. Riggan، L. et al. ٹرانسکرپشن فیکٹر Fli1 وائرل انفیکشن کے دوران میموری کے پیشگی NK خلیوں کی تشکیل کو روکتا ہے۔ نیٹ امیونول۔ 23، 556–567 (2022)۔

31. Min-Oo, G., Bezman, NA, Madera, S., Sun, JC & Lanier, LL Proapoptotic Bim سائٹومیگالو وائرس کے انفیکشن کے بعد اینٹیجن مخصوص NK سیل کے سنکچن اور میموری NK سیل پول کی نسل کو منظم کرتا ہے۔ J. Exp. میڈ. 211، 1289–1296 (2014)۔

32. Louis, C. et al. NK سیل سے ماخوذ GM-CSF سوزش والی گٹھیا کو ممکن بناتا ہے اور CIS کے ذریعے منفی طور پر کنٹرول کیا جاتا ہے۔ J. Exp. میڈ. 217، e20191421 (2020)۔

33. Bjorkstrom, NK, Strunz, B. & Ljunggren, HG قدرتی قاتل خلیات اینٹی وائرل امیونٹی میں۔ نیٹ Rev. Immunol. 22، 112–123 (2022)۔

34. سمتھ، ایم جے وغیرہ۔ ٹیومر میٹاسٹیسیس کے این کے سیل کنٹرول میں پرفورین ایک اہم شراکت دار ہے۔ J. Immunol. 162، 6658–6662 (1999)۔

35. Van der Meulen, J., Speleman, F. & Van Vlierberghe, P. The H3K27me3 demethylase UTX عام نشوونما اور بیماری میں۔ ایپی جینیٹکس 9، 658–668 (2014)۔

36. وانگ، ایس پی وغیرہ۔ ایک UTX-MLL4-p300 ٹرانسکرپشن ریگولیٹری نیٹ ورک ہم آہنگی سے ٹرانسکرپشن کو حاصل کرنے کے لیے فعال بڑھانے والے مناظر کی شکل دیتا ہے۔ مول سیل 67، 308–321 (2017)۔

37. Gozdecka، M. et al. UTX کی ثالثی میں اضافہ کرنے والا اور کرومیٹن ریموڈلنگ ETS اور GATA پروگراموں کے noncatalytic inverse regulation کے ذریعے myeloid leukemogenesis کو دباتا ہے۔ نیٹ جینیٹ 50، 883–894 (2018)۔

38. وانگ، سی. وغیرہ. UTX H3K27 ڈیمیتھیلیس سرگرمی سے آزاد برانن اسٹیم سیلز کے میسوڈرم تفریق کو منظم کرتا ہے۔ پروک Natl Acad. سائنس USA 109, 15324–15329 (2012)۔

39. Shih، HY et al. ریگولومس کا ترقیاتی حصول فطری لیمفائیڈ سیل کی فعالیت کو زیر کرتا ہے۔ سیل 165، 1120–1133 (2016)۔

40. Miller, SA, Mohn, SE & Weinmann, AS Jmjd3 اور UTX ٹی باکس فیملی کے ممبر پر منحصر جین اظہار کو منظم کرنے کے لیے کرومیٹن کی دوبارہ تشکیل میں ڈیمیتھائلیز سے آزاد کردار ادا کرتے ہیں۔ مول سیل 40، 594–605 (2010)۔

41. Kaya-Okur، HS et al. چھوٹے نمونوں اور واحد خلیات کی موثر ایپی جینومک پروفائلنگ کے لیے کٹ اینڈ ٹیگ۔ نیٹ کمیون 10، 1930 (2019)۔

42. کپز، اے وغیرہ۔ سالمونیلا ٹائیفیموریم انفیکشن کے دوران حفاظتی IFN-gamma کی پیداوار میں آپ کے NK سیلز کا تعاون۔ پروک Natl Acad. سائنس USA 110, 2252–2257 (2013)۔

43. Langmead, B. & Salzberg, SL Bowtie کے ساتھ فاسٹ گیپڈ-ریڈ الائنمنٹ 2. نیٹ۔ طریقے 9، 357–359 (2012)۔

44. چن، ای وائی وغیرہ۔ افزودگی: انٹرایکٹو اور باہمی تعاون پر مبنی HTML5 جین فہرست افزودگی تجزیہ ٹول۔ بی ایم سی بایو انفارمیٹکس 14، 128 (2013)۔

45. Heinz, S. et al. نسب کا تعین کرنے والے ٹرانسکرپشن عوامل کے سادہ مجموعے بنیادی cis-ریگولیٹری عناصر جو میکروفیج اور B سیل کی شناخت کے لیے درکار ہیں۔ مول سیل 38، 576–589 (2010)۔

46. ​​Rapp، M. et al. کور بائنڈنگ فیکٹر بیٹا اور رنکس ٹرانسکرپشن فیکٹرز انکولی قدرتی قاتل سیل کے ردعمل کو فروغ دیتے ہیں۔ سائنس امیونول۔ 2، eaan3796 (2017)۔

47. Simonetta, F., Pradier, A. & Roosnek, E. T-bet and eomesodermin in NK سیل کی نشوونما، میچوریشن اور فنکشن۔ سامنے والا۔ امیونول۔ 7، 241 (2016)۔

48. Presnell, JS, Schnitzler, CE & Browne, WE KLF/SP ٹرانسکرپشن فیکٹر فیملی ایوولوشن: توسیع، تنوع اور یوکرائٹس میں جدت۔ جینوم بائیول۔ ارتقاء 7، 2289–2309 (2015)۔

49. Kramer, B. et al. ابتدائی IFN-alpha دستخط اور مستقل خرابی شدید COVID-19 میں NK خلیوں کی امتیازی خصوصیات ہیں۔ استثنیٰ 54، 2650–2669 (2021)۔

50. D'Agostino، P. et al. جنسی ہارمون میکروفیجز کے ذریعہ تیار کردہ سوزش کے ثالثوں کو ماڈیول کرتے ہیں۔ این۔ NY Acad. سائنس 876، 426–429 (1999)۔

51. Lu, FX et al. خواتین کے ریسس میکاک میں بی سیل کی قوت مدافعت کو ڈمبگرنتی سٹیرایڈ ہارمونز کے زیر اثر سی ڈی8+ ٹی سیلز کے ذریعے کنٹرول کیا جاتا ہے۔ کلین ختم امیونول۔ 128، 10–20 (2002)۔

52. سنگھ، RP اور Bischof، DS جنسی ہارمونز اور جنس SLE مریضوں میں ریگولیٹری ٹی سیلز کے مارکروں کے اظہار کو متاثر کرتے ہیں۔ سامنے والا۔ امیونول۔ 12، 619268 (2021)۔

53. کک، کے ڈی وغیرہ۔ مسلسل وائرس کے انفیکشن کی T follicular مددگار سیل پر منحصر کلیئرنس کے لیے ہسٹون ڈیمیتھلیس UTX کے T سیل اظہار کی ضرورت ہوتی ہے۔ استثنیٰ 43، 703–714 (2015)۔

54. بیاز، ایس وغیرہ۔ ہسٹون ڈیمیتھیلیس UTX غیر متزلزل قدرتی قاتل ٹی خلیوں کے نسب سے متعلق مخصوص ایپی جینیٹک پروگرام کو منظم کرتا ہے۔ نیٹ امیونول۔ 18، 184–195 (2017)۔

55. مچل، جے ای وغیرہ۔ UTX CD8+ T سیل میں ثالثی اینٹی وائرل دفاع کو فروغ دیتا ہے لیکن T سیل کی پائیداری کو کم کرتا ہے۔ سیل کا نمائندہ 35، 108966 (2021)۔

56. Schmiedel, BJ et al. انسانی مدافعتی سیل جین کے اظہار پر جینیاتی پولیمورفزم کا اثر۔ سیل 175، 1701–1715 (2018)۔

57. Bosselut, R. H3K27Me3 ڈیمیتھلیسس کے مدافعتی خلیوں کے فرق میں Pleiotropic افعال۔ رجحانات Immunol. 37، 102–113 (2016)۔

58. Kechin, A., Boyarskikh, U., Kel, A. اور Filipenko, M. cutPrimers: اگلی نسل کی ٹارگٹڈ سیکوینسنگ کے ریڈز سے پرائمر کی درست کٹنگ کے لیے ایک نیا ٹول۔ J. Comput بائول 24، 1138–1143 (2017)۔

59. ہانگ، ایس وغیرہ۔ JmjC ڈومین پر مشتمل UTX اور JMJD3 کی ہسٹون H3 lysine 27 demethylases کے بطور شناخت۔ پروک Natl Acad. سائنس USA 104، 18439–18444 (2007)۔

60. وان لارہوون، پی ایم وغیرہ۔ کابوکی سنڈروم جینز KMT2D اور KDM6A: فنکشنل تجزیے کرینیو فیشل، دل اور دماغ کی نشوونما میں اہم کردار کو ظاہر کرتے ہیں۔ ہم مول جینیٹ 24، 4443–4453 (2015)۔

61. ریزوانی، K. انجینئرڈ قدرتی قاتل خلیات کا استعمال کرتے ہوئے اڈاپٹیو سیل تھراپی۔ بون میرو ٹرانسپل۔ 54، 785–788 (2019)۔