Cistanche Deserticola کے ٹوٹل گلائکوسائیڈز Nrf- 2/Keap-1 پاتھ وے کے ذریعے ایم سی اے او/آر چوہوں میں نیوروواسکولر ری جنریشن کو شامل کرکے اعصابی فنکشن کی بحالی کو فروغ دیتے ہیں۔

رابطہ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ای میل:audrey.hu@wecistanche.com

فوجیانگ وانگ، روئیان لی، پینگفی ٹو، جیان پنگ چن، کیوو زینگ اور یونگ جیانگ

پس منظر:روایتی چینی دوا Cistanche deserticola کو قلبی اور دماغی امراض کے لیے درست بتایا گیا ہے۔ تاہم، اسکیمک اسٹروک کے تحفظ کے لیے اس کے فعال اجزاء واضح نہیں ہیں۔ ہمارا مقصد کے فعال اجزاء کو تلاش کرنا ہے۔C. deserticolaاسکیمک اسٹروک کے ساتھ ساتھ اس کے ممکنہ میکانزم کے خلاف۔طریقے:ہم نے نچوڑ کے دماغی حفاظتی اثرات کی تحقیقات کی۔C. deserticola, ٹوٹل گلائکوسائیڈز (TGs)، پولی سیکرائڈز (PSs)، اور oligosaccharides (OSs) درمیانی دماغی شریانوں کی موجودگی-reperfusion (MCAO/R) کے چوہے کے ماڈل میں۔ 2, 3, 5-ٹریفنائل ٹیٹرازولیم کلورائد (TTC) سٹیننگ کا استعمال دماغی انفکشن کے حجم کا اندازہ لگانے کے لیے کیا گیا تھا، اور ایونز بلیو پرکھ کو خون کے دماغی رکاوٹ (BBB) ​​کی پارگمیتا کا اندازہ لگانے کے لیے اپنایا گیا تھا۔ پھر، اظہارات CD31, a-SMA, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, ZO-1, claudin-5, occludin, Keap-1, اور Nrf{{ 12}} کا تجزیہ مغربی بلوٹنگ یا امیونو فلوروسینس کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا، اور کٹس کا استعمال کرتے ہوئے MDA، SOD، CAT، اور GSH-Px کی سرگرمیوں کا تجزیہ کیا گیا تھا۔نتائج:TGs کے علاج نے اعصابی خسارے کے اسکورز اور انفکشن کی مقدار میں نمایاں کمی کی، انجیوجینیسیس اور نیورل ریموڈلنگ کو فروغ دیا، اور ماڈل گروپ کے مقابلے میں خون-دماغ کی رکاوٹ کی سالمیت کو مؤثر طریقے سے برقرار رکھا۔ مزید برآں، TGs نے MDA کی سطح کو نمایاں طور پر کم کیا اور دماغ میں اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں (SOD، CAT، اور GSH-Px) میں اضافہ کیا۔ دریں اثنا، TGs نے Keap-1 اظہار کو نمایاں طور پر کم کیا اور Nrf-2 جوہری نقل مکانی کی سہولت فراہم کی۔ اس کے برعکس، PSs اور OSs گروپس کے لیے کوئی حفاظتی اثرات نہیں دیکھے گئے۔نتیجہ:TGs کے اہم فعال اجزاء ہیں۔C. deserticolaMCAO/R-حوصلہ افزائی دماغی چوٹ کے خلاف، اور تحفظ بنیادی طور پر Nrf-2/Keap-1 راستے سے ہوتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ: Cistanche deserticola, cerebral injury, total glycosides, polysaccharides, oligosaccharides, Nrf-2/Keap- 1 راستہ

تعارف

فالج کو دنیا میں موت اور معذوری کی ایک بڑی وجہ سمجھا جاتا ہے (Donnan et al.، 2008)۔ فالج کے تمام معاملات میں سے تقریباً 87 فیصد اسکیمک اسٹروک (Ovbiagele and Nguyen-huynh, 2011) سے شروع ہوتے ہیں۔ فی الحال، اسکیمک اسٹروک کے علاج کے لیے سب سے زیادہ موثر ایجنٹ اور واحد ایف ڈی اے سے منظور شدہ دوائی ریکومبیننٹ ٹشو پلاسمینوجن ایکٹیویٹر ہے۔ تاہم، فالج کے مریضوں کی ایک بڑی تعداد اس دوا کا جواب دینے میں ناکام رہتی ہے، کیونکہ اس کے علاج کے محدود وقت اور ہیمرج کی پیچیدگیوں کے سنگین خطرے کی وجہ سے (لی ایٹ ال۔، 2012؛ شیلنگر اور کوہرمن، 2014)۔ تھرومبولیٹک علاج کا ایک بڑا چیلنج ischemia/reperfusion (I/R) چوٹ ہے، جو دماغی چوٹ اور فنکشن کی تباہی کا بنیادی سبب سمجھا جاتا ہے۔ دماغی اسکیمیا کے بعد ریفرفیوژن دماغی نکسیر کے خطرے کو بڑھاتا ہے جبکہ نیوروواسکولر چوٹ کا باعث بنتا ہے اور ضرورت سے زیادہ رد عمل آکسیجن اسپیسز (ROS) پیدا کرتا ہے جو خون کے دماغی رکاوٹ کو نقصان پہنچاتا ہے (Alluri et al.، 2015)۔ متعدد مطالعات نے اس بات کی تصدیق کی ہے کہ BBB میں خلل اسکیمک اسٹروک کے روگجنن کی ایک بڑی وجہ ہے (Cao et al., 2016b)۔

بی بی بی بنیادی طور پر اینڈوتھیلیل سیلز، پیریسیٹس، ایسٹروائٹس، نیورانز اور تہہ خانے کی جھلیوں پر مشتمل ہوتا ہے۔ BBB کے بنیادی اجزاء دماغی مائیکرو واسکولر اینڈوتھیلیل خلیات ہیں جو سخت جنکشن کے ذریعے جڑے ہوئے ہیں، اس طرح دماغ میں خارجی مالیکیولز کو محدود کرتے ہیں۔ سخت جنکشنز کی پیتھولوجیکل تبدیلیاں—خاص طور پر occludin، claudin-5، اور zonula occludens-1 (ZO-1)—ایک اسکیمک اسٹروک کے دوران BBB فنکشن کو نمایاں طور پر متاثر کرتی ہے، خاص طور پر رکاوٹ پارگمیتا (Liu et al., 2014; Hu et al., 2018; Liu et al., 2019)۔ I/R ادوار کے دوران، ضرورت سے زیادہ ROS دماغی نیوران کو براہ راست نقصان پہنچانے والے اہم عوامل میں سے ایک ہے (Ding et al.، 2014)۔ ROS کی زیادہ پیداوار بعض جنکشنز کے انحطاط اور BBB میں خلل کا باعث بنتی ہے، جس کے نتیجے میں خارجی مالیکیول BBB کے ذریعے دماغ میں داخل ہوتے ہیں، جس سے دماغی نقصان میں اضافہ ہوتا ہے (Cheon et al.، 2016؛ Zhang QY et al.، 2017)۔ لہذا، اینٹی آکسیڈینٹ کے ذریعہ بی بی بی کے تحفظ کو ریپرفیوژن چوٹ کو روکنے کا ایک ممکنہ طریقہ سمجھا جاتا ہے۔

BBB کے ٹوٹنے کے علاوہ، I/R کے نتیجے میں نیوروواسکولر چوٹ اور نیورونل موت ہو سکتی ہے (جنگ ایٹ ال۔، 2010)۔ فالج کے دوران، اعصابی خلیوں کی بڑھتی ہوئی موت آکسیڈیٹیو تناؤ کے نتیجے میں ہو سکتی ہے (Chi et al.، 2018)، اور متعدد مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ ROS فالج کی شدت اور اعصابی نقصان کو بڑھاتا ہے (Kondo et al., 1997; Crack et al., 2001; Crack et al.، 2006)۔ اگرچہ کلینیکل ٹرائلز کے تسلی بخش نتائج نہیں ملے ہیں، نیورو پروٹیکشن اب بھی شدید اسکیمک اسٹروک کے علاج کے لیے ایک امید افزا حکمت عملی ہے (Moretti et al.، 2015)۔ اس طرح، فالج کے علاج کے لیے موثر نیورو پروٹیکشن دوائیں تلاش کرنا فالج کے مریضوں کے لیے فائدہ مند ہے۔

روایتی چینی طب (TCM) جسم کے اندرونی عدم توازن کے خلاف مداخلت کے لیے اقدامات کرتی ہے (Gaire، 2018)۔ اسکیمک اسٹروک کے پیچیدہ روگجنن کی وجہ سے، TCM کا کثیر الجہتی اثر اور اس کے فعال اجزاء فالج کے علاج میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ Cistanche deserticola YC Ma، پورے منگولیا اور شمال مغربی چین کے بنجر یا نیم بنجر علاقوں میں وسیع پیمانے پر استعمال ہونے والی TCM جڑی بوٹی چین میں 1،000 سال سے زیادہ عرصے سے بھولنے اور افسردگی جیسی مختلف بیماریوں کے علاج کے لیے استعمال ہوتی رہی ہے۔ . جدیدفارماسولوجیکل اسٹڈیز نے اشارہ کیا کہ خام تیل سے نکالتا ہے۔C. deserticolaنے متعدد فارماسولوجیکل سرگرمیاں دکھائیں، جیسے سیکھنے اور یادداشت کے فنکشن کو بڑھانا، نیورو پروٹیکشن، قوت مدافعت میں اضافہ، اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی ایجنگ، اور تھکاوٹ کے اثرات (کو اور لیونگ، 2007؛ وانگ ایٹ ال۔، 2012؛ لی ایٹ ال۔، 2015)۔ C. deserticola کے کیمیائی تجزیے سے پتہ چلتا ہے کہ اس کی اہم تشکیلات میں phenylethanoid glycosides، iridoid glycosides، polysaccharides، اور oligosaccharides (Jiang and Tu, 2009) شامل ہیں۔ تاہم، دماغی تحفظ کے لیے C. deserticola کے فعال اجزاء زیادہ واضح نہیں ہیں۔C. deserticola کی نیورو پروٹیکٹو خاصیت علمی سے متعلقہ بیماریوں جیسے کہ فالج اور ڈپریشن کے ساتھ ساتھ الزائمر کی بیماری (Wang et al., 2017) میں اس کے علاج کی صلاحیت کو ظاہر کرتی ہے۔ تاہم، کے اثرات پر تحقیقC. deserticolaاسٹروک پر، بشمول اس کے فعال اجزاء اور ایکشن میکانزم، بہت محدود ہے۔ موجودہ کام میں، ہم نے دماغی I/R کی چوٹوں پر C. deserticola، کل گلائکوسائیڈز (TGs، phenylethanoid glycosides، and other glycosides)، polysaccharides (PSs)، اور oligosaccharides (OSs) کے تین نچوڑوں کے حفاظتی اثر کو دریافت کیا۔ ہمارے نتائج کے درست طبی اطلاق میں حصہ لے سکتے ہیں۔C. deserticolaاور اسکیمک اسٹروک تھراپی کے لیے امیدوار ایجنٹ فراہم کریں۔

مواد اور طریقے

کیمیکل اور ری ایجنٹس

Cistanche deserticola کے تنوں کو الاشان، اندرونی منگولیا سے خریدا گیا تھا اور اس کی شناخت ایک مصنف (P.-F. Tu) نے کی تھی۔ TGs، PSs، اور OS ہمارے پہلے بتائے گئے طریقہ (Gao et al.، 2015) کے مطابق تیار کیے گئے تھے۔ TGs کا مقداری تجزیہ ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) کے ذریعے کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے (Li et al، 2019)، اور اس کا کرومیٹوگرام شکل 1 میں دکھایا گیا ہے۔ TGs کے اہم اجزاء echinacoside، tubuloside A، acteoside، iso-side ہیں۔ acteoside، اور 2'-acetylacteoside؛ ان کے مواد بالترتیب 163.05 mg/g، 4.125 mg/g، 41.66 mg/g، 22.655 mg/g، اور 12.045 mg/g ہیں۔ PSs اور OSs کے مواد بالترتیب 69.42 فیصد اور 65.24 فیصد ہیں، جیسا کہ بالترتیب HPLC اور فینول – سلفورک ایسڈ کے تجزیہ سے طے کیا گیا ہے (Zhang A. et al., 2018; Shi et al, 2019)۔

Echinacoside (A0282)، tubuloside A (A0942)، acteoside (A0280)، iso-acteoside (A0281)، اور 2'- acetylacteoside (A0943) کے معیاری حوالہ جات چینگڈو مسٹ بائیو ٹیکنالوجی (سیچوان، چین) سے خریدے گئے تھے۔ تمام معیارات کی پاکیزگی 98 فیصد سے زیادہ ہے۔ Nissl stain H&E کٹس بوسٹر (ووہان، چین) سے خریدی گئیں۔ Edaravone (T0407-1) کو ٹارگٹ مول (شنگھائی، چین) سے خریدا گیا تھا۔ خرگوش اینٹی چوہا MAP-2 (ab32454)، Nrf-2 (ab31163)، PDGFRb (ab32570)، Keap-1 (ab66620)، اور ماؤس اینٹی چوہا CD31 (ab24590) خریدے گئے تھے۔ Abcam Inc (کیمبرج، MA، USA) سے۔ خرگوش مخالف چوہا Claudin5 (BS1069)، ZO-1 (BS9802M)، اور Occludin (BS72035) Bioworld Technology (Nanjing, China) سے خریدے گئے تھے۔ Cell Signaling Technology Inc. (Boston, MA, USA) خرگوش مخالف چوہا Synapsin-1 (SYN,5297T), PSD95 (3450T), a-Smooth Muscle Actin (a-SMA,19245T) کا ذریعہ تھا۔ GAPDH (HRP-60004) Proteintech Group, Inc. (شکاگو، USA) سے خریدا گیا تھا۔ ثانوی اینٹی باڈیز ژونگشن گولڈن برج بائیو ٹیکنالوجی (بیجنگ، چین) کے ذریعے فراہم کی گئیں۔ Hoechst 33258 Beyotime (Jiangsu, China) سے حاصل کیا گیا تھا۔

جانور

Sprague-Dawley چوہے (نر، 250–300g وزن) وائٹل ریور لیبارٹری اینیمل ٹیکنالوجی (بیجنگ، چین) سے حاصل کیے گئے تھے اور 12 گھنٹے روشنی/تاریک سائیکل پر رکھے ہوئے ایک ایئر کنڈیشنڈ کمرے میں رکھا گیا تھا۔ جانوروں کے تمام تجربات جانوروں کی تحقیق ARRIVE رہنما خطوط (Kilkenny et al., 2010; McGrath et al., 2010) کے ذریعہ کئے گئے تھے اور پیکنگ یونیورسٹی ہیلتھ سائنس سینٹر (LA2019123) کی ادارہ جاتی جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کمیٹی کے ذریعہ منظور کیا گیا تھا۔

جانوروں کے تجرباتی پروٹوکول

چوہوں کو MCAO/R کا نشانہ بنایا گیا، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا تھا (وانگ ایٹ ال۔، 2018)۔ مختصراً، بائیں کامن کیروٹڈ شریان (CCA)، ایکسٹرنل کیروٹڈ شریان (ECA)، اور اندرونی کیروٹڈ شریان (ICA) کو بے نقاب کیا گیا، اور درمیان تک پہنچنے تک ECA سے ICA میں ایک 3-0 نایلان مونوفیلمنٹ سیون داخل کیا گیا۔ دماغی شریان (MCA)۔ ایم سی اے کی شمولیت کے 1.5 گھنٹے کے بعد، ریپرفیوژن کو فلیمینٹ کو ہٹا کر نقل کیا گیا۔ جراحی کے عمل کے دوران تمام چوہوں کے جسم کا درجہ حرارت 37.0 ڈگری پر برقرار رکھا گیا۔

ڈرگ ایڈمنسٹریشن

SPSS سافٹ ویئر ورژن 22 کا استعمال کرتے ہوئے چوہوں کو تصادفی طور پر چھ گروپوں میں الگ کر دیا گیا۔{1}} جیسا کہ بیان کیا گیا ہے (جیانگ ایٹ ال۔، 2014): نارمل گروپ (NOR) ماڈل گروپ (MOD)؛ ایڈاراون گروپ (مثبت دوا، 6 ملی لیٹر/کلوگرام، ای ڈی آئی)؛ TGs گروپ (280 mg/kg, TGs)؛ PSs گروپ (280 mg/kg، PSs)، اور OSs گروپ (280 mg/kg، OSs)۔ TGs، PSs، اور OS کا انتظام 14 دنوں تک MCAO/R کے بعد دن میں ایک بار کیا جاتا تھا۔ NOR اور MOD گروپوں کا علاج نارمل نمکین سے کیا گیا۔ جانوروں کی تعداد ٹیبل 1 میں دکھائی گئی ہے۔

وزن کی پیمائش اور ترمیم شدہ اعصابی خسارے کے اسکور (mNSS)

ADVENTURE™ ڈیجیٹل اسکیل (OHAUS, New Jersey, USA) کا استعمال کرتے ہوئے 14ویں دن جسمانی وزن کی نگرانی کی گئی۔ MNSS کا اندازہ FJ Wang (Wang et al.، 2018) کے بیان کردہ طریقہ کے مطابق کیا گیا تھا، معمولی ترمیم کے ساتھ۔

2، 3، 5-ٹریفینیلٹیٹرازولیم کلورائڈ (TTC) داغ

انفارکٹ کا حجم ماپا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے (وانگ ایٹ ال۔، 2015)۔ مختصراً، دماغوں کو سات مساوی فاصلہ والے کورونل بلاکس (2 ملی میٹر) میں تقسیم کیا گیا تھا۔ ان حصوں کو 2 فیصد ٹی ٹی سی (کولبر، بیجنگ، چین) کے ساتھ 37 ڈگری پر 15 منٹ تک داغ دیا گیا تھا۔ انفارکٹ والیوم (فیصد)=(ipsilateral ischemic hemisphere volume −contralateral ischemic hemisphere volume)/contralateral ischemic hemisphere volume × 100۔

Nissl اور H&E سٹیننگ

چوہوں کو گہرائی سے بے ہوشی کی گئی، اور پھر پورے دماغ کو تیزی سے کھوپڑی سے ہٹا دیا گیا اور 4 فیصد پیرافارمیلڈہائیڈ کا استعمال کرتے ہوئے اسے طے کیا گیا اور پیرافین ویکس میں سرایت کر کے 7 µm موٹائی کے ٹکڑوں میں تقسیم کیا گیا۔ حصے Nissl اور H&E سے داغدار تھے۔ اس مطالعہ میں، چھ بے ترتیب 200 × 200 µm فیلڈز کو ہر ٹشو کے نمونے میں ہلکے خوردبین کے ساتھ پکڑا گیا تھا۔ Nissl کی لاشوں کی تعداد IPP سافٹ ویئر ورژن 6.0 (Media Cybernetics, Bethesda, USA) کے ساتھ شمار کی گئی۔

ایونز بلیو پرکھ

MCAO/R کے بعد چوہوں کو 2 فیصد EB (Coolaber Science & Technology Co., LTD) لگایا گیا تھا۔ دو گھنٹے بعد، چوہوں کو بے ہوشی کی گئی اور اس کے بعد پورے دماغ کو تیزی سے ہٹا دیا گیا اور ایسیٹون میں یکساں کر دیا گیا۔ سپرنٹنٹس کا تجزیہ 800 TS جاذب ریڈر (BioTek، USA) کے ذریعہ 620 nm پر کیا گیا۔

Catalase (CAT)، Superoxide Dismutase (SOD)، Malondialdehyde (MDA)، اور Glutathione Peroxidase (GSH-Px) کی سرگرمیوں کی پیمائش

تمام سیرم کے نمونوں کو 4 ڈگری پر 15 منٹ کے لیے 4,000 × rpm پر سینٹرفیوج کیا گیا اور پھر مینوفیکچرر کی ہدایات پر عمل کرتے ہوئے MDA، CAT، SOD، اور GSH-Px کی سرگرمیوں کا پتہ لگانے کے لیے تجزیہ کیا گیا (Jiangsu Meimian Industrial Co., لمیٹڈ، چین)۔

مغربی بلوٹنگ تجزیہ

ہر چوہے سے جمع کیے گئے دماغ کے ٹشوز (100 ملی گرام) کو RIPA lysis بفر میں یکساں بنایا گیا اور پھر BCA کٹ (Beijing TransGen Biotech Co., Ltd.) کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین کی حراستی کا پتہ لگانے کے لیے تجزیہ کیا گیا۔ ٹشو ٹوٹل پروٹین کو 10 فیصد SDS-PAGE جیلوں پر لوڈ کیا گیا اور نائٹروسیلوز جھلی پر منتقل کیا گیا۔ جھلی کو 5 فیصد سکم دودھ کا استعمال کرتے ہوئے بلاک کیا گیا تھا، پھر 4 ڈگری پر بنیادی اینٹی باڈیز کے ساتھ راتوں رات انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد جھلی کو ثانوی اینٹی باڈی سے لگایا گیا تھا۔ کوڈک ڈیجیٹل امیجنگ سسٹم (5200 ملٹی، ٹینون، چین) کا استعمال کرتے ہوئے مغربی بلٹ تجزیہ کا تجزیہ کیا گیا۔

امیونو فلوروسینٹ تجزیہ

CD31، a-SMA، ZO-1، claudin5، occludin، PDGFRb، SYN، PSD95، MAP-2، Nrf-2، اور Keap-1 کے لیے امیونو فلوروسینس سٹیننگ کی گئی تھی۔ Nrf-2، CD31، a-SMA، ZO-1، claudin5، occludin، PDGFRb، SYN، PSD95، MAP-2، اور Keap-1 کے خلاف پرائمری اینٹی باڈیز کو پتلا کر دیا گیا تھا۔ بالترتیب 1:200 اور 1:100۔ الیکسا فلور 488 ماؤس اینٹی خرگوش IgG اور روڈامین (TRITC) بکری اینٹی خرگوش IgG کی ثانوی اینٹی باڈی دونوں کو 1:200 پر گھٹا دیا گیا تھا۔ نیوکلی کو ہوچسٹ 33258 نے داغ دیا تھا۔ تصاویر ویکٹرا® پولارس™ آٹومیٹڈ کوانٹیٹیٹو پیتھولوجی امیجنگ سسٹم (پرکن ایلمر، یو ایس اے) کا استعمال کرتے ہوئے حاصل کی گئیں۔ آئی پی پی سافٹ ویئر ورژن 6.0 کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین ایکسپریشن کا تجزیہ کیا گیا۔

شماریاتی تجزیہ

تمام اعداد و شمار کو اوسط ± SD کے طور پر بیان کیا گیا تھا۔ SPSS سافٹ ویئر ورژن 22۔{1}} شماریاتی تجزیہ کے لیے انجام دیا گیا تھا۔ مختلف گروہوں کا موازنہ کرتے وقت یک طرفہ انووا استعمال کیا گیا۔ P < 0.05="" شماریاتی="" فرق="" سمجھا="" جاتا="">

نتائج

TGs جسمانی وزن میں اضافہ کرتا ہے اور MCAO/R چوہوں میں دماغی نقصانات کو کم کرتا ہے۔

TGs، PSs، Oss، اور EDI کے ساتھ 14 دن کے علاج کے بعد، جسم کے وزن، اعصابی خسارے، اور I/R چوہوں کے infarct حجم کا جائزہ لیا گیا۔ نتائج سے ظاہر ہوا کہ MOD گروپ میں جسمانی وزن میں بہت کمی واقع ہوئی ہے، جبکہ TGs، PSs، اور EDI گروپوں میں وزن میں کمی ہوئی ہے (شکل 2A)۔ EDI اور TGs (شکل 2B) کے ذریعہ اعصابی خسارے کے اسکور کو کافی حد تک کم کیا گیا تھا۔ NOR گروپ کے چوہوں میں دماغ کے ٹکڑے گہرے سرخ تھے اور کوئی انفکشن نہیں تھا، جبکہ MOD گروپ کے چوہوں نے ایک بڑا ipsilateral cerebral infarction دکھایا تھا۔ TGs کے علاج کے بعد، infarct کے حجم نمایاں طور پر کم ہو گئے تھے (اعداد و شمار 2C، D)۔ PSs اور OSs کے علاج نے مذکورہ اشاریہ جات پر کوئی واضح اثر نہیں دکھایا۔ مندرجہ بالا اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ TGs نمایاں طور پر I/R-حوصلہ افزائی دماغی چوٹ کو کم کر سکتے ہیں، لیکن PSs اور OSs ایسا نہیں کرسکتے ہیں۔

MCAO/R چوہوں میں TGs ہسٹوپیتھولوجیکل نقصان کو کم کرتا ہے۔

ہسٹوپیتھولوجیکل نقصانات پر TGs، PSs، اور OSs کے علاج کے کچھ اثرات کا تعین کرنے کے لیے، پیتھولوجیکل نقصان کو ظاہر کرنے کے لیے H&E سٹیننگ کی گئی تھی۔ NOR گروپ میں دماغ کے ہسٹومورفولوجیکل ڈھانچے کو باقاعدگی سے ترتیب دیا گیا تھا۔ TGs گروپوں میں مورفولوجی تبدیلیاں MOD گروپ کے مقابلے میں معمولی تھیں۔ تاہم، PSs اور OSs ٹریٹمنٹ گروپس نے مورفولوجی تبدیلیوں میں کوئی خاص بہتری نہیں دکھائی (شکل 3)۔

I/R-حوصلہ افزائی چوہوں کے بعد TGs نیورونل انجری کو کم کرتی ہے۔

Nissl سٹیننگ نے اسکیمک ایریا کے penumbra میں نیوران کی ہسٹوپیتھولوجیکل تبدیلیاں ظاہر کیں۔ جیسا کہ شکل 4 میں دکھایا گیا ہے، عام نیوران میں ایک واضح نیوکلیولس اور برقرار ڈھانچہ ہوتا ہے۔ MOD گروپ میں، نیوران نے انٹر سیلولر اسپیس کو بڑھا دیا تھا۔ nissl لاشیں غائب، سکڑ اور گہرے داغ ہو گئے تھے۔ تاہم، یہ تبدیلیاں EDI، TGs، اور PSs گروپوں میں شاذ و نادر ہی دیکھی گئیں۔ ان نتائج نے واضح کیا کہ TGs اور PSs اسکیمیا / ریپرفیوژن سے متاثرہ نیورونل چوٹ کو نمایاں طور پر کم کرسکتے ہیں۔

I/R- علاج شدہ چوہوں کے بعد TGs BBB میں خلل کو کم کرتے ہیں۔

ایونز بلیو پرکھ BBB پارگمیتا کی تبدیلی کی تحقیق کے لیے ایک کلاسیکی طریقہ ہے۔ تجرباتی نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ ایم او ڈی گروپ میں ایونز کے نیلے رنگ میں اضافہ دیکھا گیا، جبکہ ٹی جیز اور ای ڈی آئی سے علاج شدہ چوہوں میں ایونز کے نیلے رنگ میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ مزید یہ کہ PSs اور OSs تھراپی گروپس (شکل 5) کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں تھا۔ ان نتائج نے تجویز کیا کہ TGs نمایاں طور پر بی بی بی کی رکاوٹ کو کم کرسکتے ہیں۔

TGs I/R زخمی چوہوں میں انجیوجینیسیس کو فروغ دیتے ہیں۔

مزید حالیہ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ شدید اسکیمک اسٹروک (یوین ایٹ ال۔ انجیوجینیسیس پر TGs، PSs، اور OS کے اثرات کا جائزہ لینے کے لیے، CD31 اور a-SMA کو کیپلیری نمبروں کی مقدار درست کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ امیونو فلوروسینس سٹیننگ سے پتہ چلتا ہے کہ MOD گروپ نے عام چوہوں کے مقابلے میں CD31 (اعداد و شمار 6A, B) اور a-SMA (اعداد و شمار 6C, D) I/R چوہوں کے اسکیمک علاقوں کے پنمبرا میں نمایاں کمی کا باعث بنا۔ . اس نتیجے نے واضح کیا کہ I/R اسکیمک نصف کرہ کے پرانتستا پنمبرا میں عروقی نقصان کا سبب بن سکتا ہے۔ تاہم، TGs اور EDI علاج نے کیپلیری کثافت، angiogenesis، اور arteriogenesis میں نمایاں اضافہ کیا جیسا کہ CD31 اور a-SMA کے بڑھتے ہوئے تاثرات سے ظاہر ہوتا ہے۔ ان نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ TGs I/R چوہوں کے اسکیمک penumbra میں انجیوجینیسیس کو فروغ دے سکتے ہیں، لیکن PSs اور OS ایسا نہیں کر سکے۔

TGs I/R زخمی چوہوں میں سخت جنکشن پروٹین کے اظہار کو بڑھاتا ہے۔

BBB میں خلل دماغی پانی کے مواد اور ٹشووں کی سوجن کو بڑھا سکتا ہے، جس سے دماغ کو چوٹ پہنچتی ہے۔ سخت جنکشن پروٹین BBB کے اہم ساختی اجزاء ہیں (Tenreiro et al., 2016; Jiang et al., 2018)۔ یہ جانچنے کے لیے کہ آیا فالج کے بعد TGs، PSs، اور OSs کا علاج BBB کی سالمیت کو متاثر کر سکتا ہے، ZO-1، claudin-5، اور occludin کے تاثرات امیونو فلوروسینس تجزیہ کے ذریعے کیے گئے تھے۔ نتائج نے اشارہ کیا کہ MOD گروپ میں کلاڈین-5، occludin اور ZO-1 کے تاثرات واضح طور پر کم ہوئے ہیں۔ تاہم، TGs انتظامیہ کے 14 دنوں کے بعد ان میں خاطر خواہ اضافہ کیا گیا۔ PSs اور OSs گروپوں نے ان پروٹین ایکسپریشنز میں کوئی خاص تبدیلی نہیں دکھائی (شکل 7)۔ ان اعداد و شمار نے اشارہ کیا کہ TGs سخت جنکشن پروٹین اظہار کو منظم کر سکتے ہیں اور شاید I/R چوٹ کے بعد BBB کی سالمیت کو برقرار رکھ سکتے ہیں۔ TGs I/R زخمی چوہوں میں کیپلیریوں پر پیریسیٹ کوریج کو بڑھاتا ہے کیپلیریوں پر پیرسائٹ کوریج BBB کی سالمیت کو برقرار رکھنے میں اہم کردار ادا کرتی ہے (آرمولک ایٹ ال۔، 2010؛ ڈینیمن ایٹ ال۔، 2010)۔ اس طرح، ہم نے جانچ کی کہ آیا TGs، PSs، اور OSs کے علاج سے پیریسیٹ کوریج میں اضافہ کیا جا سکتا ہے۔ امیونو فلوروسینس کی شدت کے تجزیہ کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ MOD گروپ میں PDGFRb اور CD31 دونوں تاثرات میں ڈرامائی طور پر کمی واقع ہوئی ہے۔ I/R چوہوں کو TGs کی انتظامیہ نے PDGFRb اور CD31 کے اظہار کی شدت کو نمایاں طور پر بحال کیا یا اس میں بھی اضافہ کیا، لیکن PSs اور OSs ٹریٹمنٹ گروپس (شکل 8) میں کوئی فرق نہیں دیکھا گیا۔ اس طرح، TGs کا علاج pericyte کوریج میں نمایاں اضافہ کر سکتا ہے۔ ان نتائج نے مزید تصدیق کی کہ TGs I/R کے بعد BBB کی سالمیت کو برقرار رکھ سکتے ہیں۔

TGs I/R زخمی چوہوں میں نیورل ریموڈلنگ کو فروغ دیتے ہیں۔

متعدد مطالعات کے مطابق، فالج کے بعد نیوروجینیسیس فنکشنل ریکوری کو نمایاں طور پر بہتر بنا سکتا ہے (گریفکس اینڈ وارڈ، 2014؛ ژانگ ایٹ ال۔، 2019)۔ Synaptophysin (SYN)، postsynaptic density 95 (PSD-95) پروٹین، اور microtubule سے وابستہ پروٹین 2 (MAP-2) کو کارٹیکس کے اسکیمک پینمبرا میں نیورونل پلاسٹکٹی کی جانچ کرنے کے لیے مارکر کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ I/R زخمی چوہوں میں نیوروجینیسیس پر TGs، PSs، اور OSs کے علاج کے اثرات کا جائزہ لینے کے لیے، SYN، PSD95، اور MAP-2 اظہار کے لیے امیونو فلوروسینس اور ویسٹرن بلاٹ انجام دیا گیا۔ جیسا کہ اعداد و شمار 9 اور 10 میں دکھایا گیا ہے، I/R چوہوں میں SYN، PSD95، اور MAP-2 کے اظہار کی سطح 14 دن کے ریفرفیوژن کے بعد NOR چوہوں کے مقابلے میں کم ہوئی، جبکہ TGs اور PSs کا علاج نمایاں طور پر بڑھ سکتا ہے۔ ان کے اظہار کی سطح کو منظم کریں۔ OSs گروپ میں MOD گروپ کے مقابلے میں کوئی خاص تبدیلی نہیں آئی۔ اعداد و شمار نے اشارہ کیا کہ TGs اور PSs کا علاج I/R چوٹ کے بعد ڈرامائی طور پر نیورل ریموڈلنگ کو فروغ دینے کے قابل تھا۔

I/R زخمی چوہوں میں TGs Alter Nrf-2 اور Keap-1 اظہارات

آکسیڈیٹیو تناؤ I/R چوٹ میں ایک اہم روگجنک طریقہ کار ہے (Ya et al., 2018; Yu et al., 2018)۔ مطالعات نے تصدیق کی کہ Nrf-2 اینٹی آکسیڈیٹیو ردعمل کا ایک ماسٹر ریگولیٹر ہے (Thompson et al.، 2015)۔ I/R چوٹ کے بعد Nrf-2 اور Keap-1 ثالثی آکسیڈیٹیو ردعمل کی چھان بین کرنے کے لیے، ہم نے کیپ-1 کے جوہری ٹرانسلوکیشن کے ساتھ ساتھ سائٹوپلاسمک اظہار کا بھی جائزہ لیا۔ دریں اثنا، I/R زخمی چوہے کے دماغی بافتوں میں Nrf-2 کے اظہار کا بھی جائزہ لیا گیا (اعداد و شمار 10 اور 11)۔ امیونو فلوروسینس تجزیہ کے مطابق، NRf{10}} بنیادی طور پر NOR گروپ میں سائٹوپلازم پر پایا گیا تھا۔ TGs گروپ میں، سائٹوپلاسمک لوکلائزیشن میں Nrf-2 کے اظہار کو کم کیا گیا تھا، لیکن نیوکلئس میں اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا، اور Keap-1 اظہار میں کمی بھی دیکھی گئی تھی۔ اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ TGs کا دماغی تحفظ Nrf-2 اور Keap-1 کی ماڈیولیشن سے وابستہ ہو سکتا ہے۔

TGs I/R زخمی چوہوں میں دماغی ٹشو آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرتا ہے۔

TGs کے اینٹی آکسیڈیٹیو اثرات کی تصدیق کرنے کے لیے، SOD، CAT، GSH-Px، اور MDA کی سرگرمیوں کا I/R زخمی چوہوں میں جائزہ لیا گیا۔ شکل 12 میں، MOD گروپ میں MDA کے مواد میں واضح طور پر اضافہ کیا گیا تھا، اور ایک ہی وقت میں، SOD، CAT، اور GSH-Px کی سرگرمیوں میں عام چوہوں کے مقابلے میں کمی واقع ہوئی تھی۔ اس کے برعکس، TGs کے علاج سے MDA کے مواد میں نمایاں کمی اور SOD، CAT، اور GSH-Px کی سرگرمیوں میں اضافہ ہوا۔ ان نتائج نے TGs کی اینٹی آکسیڈیشن سرگرمی کی مزید تصدیق کی۔

بحث

بہت سے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ TCMC. deserticolaاس میں وسیع حیاتیاتی سرگرمیاں ہیں، مثلاً سیکھنے کی صلاحیت، یادداشت اور قوت مدافعت کو بڑھانا (ڈونگ ایٹ ال۔، 2007؛ جیانگ اور ٹو، 2009؛ وانگ ایٹ ال۔، 2017؛ زیا ایٹ ال۔، 2018)۔ تاہم، نیورو پروٹیکشن کے لیے C. deserticola کے فعال اجزاء غیر واضح ہیں۔ موجودہ کام کا مقصد فعال اجزاء کو اسکرین کرنا ہے۔C. deserticolaMCAO/R ماڈل پر اسکیمک اسٹروک کے خلاف۔ C. deserticola (TGs، PSs، اور OSs) سے تین اقتباسات MCAO/R چوہوں پر ان کے اثرات کے ساتھ ساتھ ممکنہ میکانزم کا جائزہ لینے کے لیے استعمال کیے گئے۔

فالج ایک عام شدید دماغی بیماری ہے۔ وبائی امراض کے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ خواتین کے مقابلے مردوں میں فالج زیادہ عام ہے (Sealy-Jefferson et al., 2012; Guzik and Bushnell, 2017)۔ اس طرح، ہمارے تجربے میں، ٹیسٹ کے لئے نر چوہوں کو اپنایا گیا تھا. ہمارے نتائج نے ثابت کیا کہ I/R انڈکشن نے آکسیڈیٹیو تناؤ اور infarct حجم کو تیز کیا، BBB کو توڑا اور اعصاب اور دماغی چوٹ کا باعث بنی۔ اسکریننگ کے بعد، TGs infarct حجم کو کم کرنے اور نیورل ریموڈلنگ اور انجیوجینیسیس کو فروغ دینے کے لیے پائے گئے۔ مزید یہ کہ I/R چوٹ کے بعد BBB کی سالمیت کو برقرار رکھنے کے لیے TGs کا مشاہدہ کیا گیا۔ اس کے برعکس، PSs اور OS I/R کی چوٹ میں کوئی خاص کمی نہیں لاتے۔ اس طرح، TGs کا بڑا فعال حصہ سمجھا جاتا ہے۔C. deserticolaنیورو پروٹیکشن کے لیے، ممکنہ طور پر Nrf- 2/Keap-1 پاتھ وے کو چالو کرنے کے ذریعے نیورل ریموڈلنگ، انجیوجینیسیس، اور BBB سالمیت کو فروغ دینے کے ذریعے۔

بڑھتے ہوئے شواہد اس بات کی نشاندہی کرتے ہیں کہ انفکشن اور اسکیمک پینمبرا کی تشکیل سے بچنے کے لیے موثر کولیٹرل گردش کا قیام نمایاں طور پر اہم ہے، اور اسکیمک اسٹروک کے ابتدائی مرحلے میں ایک اہم علاج ہے (ElAli, 2016; Iwasawa et al., 2016)۔ اسکیمک انفکشن کے بعد عروقی اینڈوتھیلیل خلیوں اور ہموار پٹھوں کے خلیوں کا پھیلاؤ کولیٹرل گردش کے قیام کا تعین کرتا ہے۔ تاہم، اسکیمیا ماڈلز میں ایک عام رجحان ہوتا ہے- یعنی دماغی مائیکرو واسکولیچر میں آکسیڈیٹیو تناؤ وسیع پیمانے پر موجود تھا۔ مطالعہ کے اعداد و شمار نے ظاہر کیا ہے کہ اینٹی آکسائڈنٹ کی ایک بڑی تعداد BBB کے کام اور انجیوجینیسیس کی خصوصیات کو پریشان کر سکتی ہے (مینٹر اور فشر، 2017)۔ CD31 اور a-SMA بالترتیب عروقی اینڈوتھیلیل خلیوں کے ساتھ ساتھ ہموار پٹھوں کے خلیوں کے مارکر ہیں (صبور ایٹ ال۔، 2016)۔ سے ارک کے اوپر بیان کردہ سیل کے پھیلاؤ پر اثر کی تحقیقات کرنے کے لئےC. deserticola، ہم نے دماغی اسکیمک penumbra homogenate میں CD31 اور a-SMA کے تاثرات کی جانچ کی۔ ہمارے اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ TGs نے CD31 اور a-SMA کے تاثرات کو نمایاں طور پر بڑھایا۔ تاہم، PSs اور OSs گروپوں کے لیے کوئی خاص فرق نہیں تھا۔ لہذا، ہم نے اندازہ لگایا کہ TGs CD31 اور a-SMA کے تاثرات کو بڑھا کر انجیوجینیسیس کو فروغ دے کر دماغی نقصان کو کم کر سکتے ہیں، جبکہ PSs اور OSs نے دماغی نقصان سے ایسا کوئی تحفظ فراہم نہیں کیا۔ ان نتائج نے مزید تصدیق کی کہ صرف TGs ہی دماغی I/R کی چوٹ کو روک سکتے ہیں۔

اسکیمک اسٹروک کو دماغی اسکیمیا کے نتیجے کے طور پر سوچا جاسکتا ہے جو اعصابی پلاسٹکٹی میں خرابی یا دماغی علاقوں کی دوبارہ تشکیل کی وجہ سے ہوتا ہے۔ فالج کے مریضوں کی اکثریت اعصابی خسارے کا شکار ہوتی ہے۔ نیوروجنسیس کو چالو کرنا فالج کے مریضوں کے لیے اپنے اعصابی افعال کو بہتر بنانے کے لیے ایک امید افزا حکمت عملی ہے (Cramer and Chopp, 2000)۔ دماغی I/R چوٹ (Zhang et al.، 2019) کے بعد نیوروجینیسیس نیورولوجیکل فنکشن کی بحالی میں براہ راست حصہ لیتا ہے۔ پچھلی تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ TGs ہپپوکیمپل اہرام کے خلیوں کی بقا کی شرح کو بہتر بنا سکتے ہیں اور نیوروجنسیس (Lian et al.، 2017) کو آمادہ کر سکتے ہیں۔ آکسیڈیٹیو تناؤ بہت سی بیماریوں کے دوران نیوران کے نقصان کا سبب بنتا ہے، جیسے پارکنسنز، فالج، وغیرہ (Duan and Si, 2019; Singh et al., 2019)۔ Nrf-2 اپنے فروغ دینے والے علاقے میں نیورو پروٹیکشن سے متعلق بہت سے جینوں کی نقل کرتا ہے، جس میں بنیادی طور پر SOD، MDA، CAT، اور g گلوٹامل سیسٹین لیگیسس وغیرہ شامل ہیں (ستوہ ایٹ ال۔، 2006)۔ SYN، PSD-95، اور MAP-2 پروٹین، جو Synaptic تشکیل اور نیورو ٹرانسمیشن کے ساتھ قریب سے وابستہ ہیں، کو اسکیمک penumbra خطے میں ریسرچ نیورونل پلاسٹکٹی کے مارکر کے طور پر سمجھا جا سکتا ہے۔ مطالعہ کرنے کے بعد، ہم نے پایا کہ TGs کے ساتھ علاج PSD95، SYN، اور MAP-2 کے تاثرات کو نمایاں طور پر بڑھا سکتا ہے، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ TGs کا دماغی تحفظ I/R کے دوران بڑھے ہوئے نیورونل پلاسٹکٹی کے ساتھ منسلک تھا۔ تاہم، یہ افسوس کی بات ہے کہ PSs کے ساتھ ساتھ OSs گروپس کے لیے کوئی واضح فرق نہیں ہے۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ TGs دماغی I/R چوٹ کے بعد نیوروپلاسٹیٹی کو بڑھا سکتے ہیں۔فالج کے مریضوں میں امیجنگ ریسرچ سے پتہ چلتا ہے کہ بی بی بی کی خرابی کو پیری اسکیمک دماغ کی ایک نمایاں صفت کے طور پر سوچا جا سکتا ہے (بینگ ایٹ ال۔، 2007)۔ TJs، جو cytoplasmic پروٹین، transmembrane پروٹینز، اور کیپلیری endothelial خلیات کے درمیان جنکشن adhesion molecules پر مشتمل ہیں، BBB کی سالمیت کو برقرار رکھنے میں بہت اہم ہیں (Ye et al.، 2019)۔ ان میں، ZO-1، claudin-5، اور occludin TJs میں سب سے اہم پروٹین ہیں۔ بڑھتے ہوئے شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ اسکیمیا کی وجہ سے BBB کی بڑھتی ہوئی پارگمیتا عام طور پر ZO-1، claudin-5، اور occludin (Cao et al., 2016a; Page et al., 2016; Yu et al.، 2017؛ Liu et al.، 2018)۔ اس کام میں، نتائج نے ظاہر کیا کہ اگرچہ TGs ZO-1، claudin-5، اور occludin پروٹین کے اظہار کو MCAO سے متاثر دماغی بافتوں میں نمایاں طور پر بڑھا سکتے ہیں، نہ تو PSs اور نہ ہی OSs نے ایسا کیا۔ بی بی بی دماغی اینڈوتھیلیل خلیوں پر مشتمل ہوتا ہے اور یہ پیریسیٹس (Nyul-Toth et al.، 2016) کے ساتھ قریبی تعلق رکھتا ہے۔ پیریسیٹس بی بی بی کی سالمیت کے لیے اہم ہیں (بیل ایٹ ال۔، 2010)۔ اسکیمک اسٹروک شدید مرحلے میں دماغ کے اینڈوتھیلیل سیلز سے پیریسیٹس کی موت اور لاتعلقی کو متحرک کرتا ہے، اس طرح مائیکرو ویسکولیچر کو غیر مستحکم کرتا ہے اور بی بی بی کی خصوصیات کو تبدیل کرتا ہے (زکریا ایٹ ال۔، 2013)۔ ہمارے ڈیٹا سے پتہ چلتا ہے کہ TGs کیپلیریوں پر pericyte کوریج میں اضافہ کر سکتا ہے اور ZO-1، claudin-5، اور occludin کے اظہار کی سطح کو بڑھا سکتا ہے۔ ان مظاہر نے ثابت کیا کہ TGs دماغی I/R کی چوٹ کے بعد مؤثر طریقے سے BBB کی سالمیت کی حفاظت کر سکتے ہیں۔ خلاصہ طور پر، TGs دماغی چوٹ کو متعدد طریقوں سے کم کر سکتے ہیں، جیسے انجیوجینیسیس کو فروغ دینا، نیورونل پلاسٹکٹی کو بہتر بنانا، اور BBB کی سالمیت کو برقرار رکھنا۔

اس کے بعد ہم نے TGs کے دماغی تحفظ کے بنیادی طریقہ کار کو دریافت کرنے کے لیے سگنلنگ پاتھ وے کی چھان بین کی۔ I/R چوٹ کا عمل کثیر الجہتی ہے، اور اس طرح روگجنن میں متعدد میکانزم شامل ہیں۔ آکسیڈیٹیو تناؤ ایک بنیادی خطرے کا عنصر ہے جو I/R-حوصلہ افزائی دماغی چوٹوں (Suda et al.، 2013) میں کردار ادا کرتا ہے، جیسے BBB ڈھانچے کو نقصان، ویسکولر اینڈوتھیلیل dysfunction، اور اسکیمک نیورونل چوٹ کا بڑھ جانا (Xiong et al., 2015; Caglayan; et al., 2019; Priestley et al., 2019)۔ اس طرح، آکسیڈیٹیو تناؤ I/R حوصلہ افزائی دماغی چوٹ میں ایک پرکشش علاج کا ہدف بن گیا ہے۔ فیز 2 انزائمز، جو جوہری عنصر E2-متعلقہ عنصر-2 (Nrf-2) کے ذریعے ثالثی کرتے ہیں، کو ایک اہم ذریعہ سمجھا جاتا ہے جس کے ذریعے نیوران خود کو آکسیڈیٹیو تناؤ سے بچاتے ہیں (سوزوکی اور Yamamoto، 2015؛ Ya et al.، 2018)۔ بڑھتے ہوئے شواہد بتاتے ہیں کہ I/R کے دوران Nrf-2 کو چالو کرنا نیورو پروٹیکشن کے لیے ممکنہ علاج کا ہدف ہے (Ding et al., 2015; Zhang R. et al., 2017)۔ Nrf-2، endogenous antioxidant دفاع کے ایک اہم ریگولیٹر کے طور پر، heme oxygenase 1 (HO-1) اور دیگر اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز، جیسے NAD(P)H quinone oxidoreductase 1 (NQO1) کی سطح میں ثالثی کرتا ہے۔ SOD، CAT، GSH، اور MDA (Siow et al.، 2007؛ Ding et al.، 2014)۔ مزید برآں، Nrf-2 انجیوجینیسیس میں ایک اہم ریگولیٹر کا کردار ادا کرتا ہے۔ موجودہ مطالعہ سے پتہ چلتا ہے کہ Nrf-2 کو عروقی نشوونما کے عمل میں نمایاں طور پر بڑھا اور فعال کیا جا سکتا ہے (Wei et al.، 2013)۔

جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے (جیانگ اور ٹو، 2009)، TGs میں بہت سارے بایو ایکٹیو مرکبات ہوتے ہیں، مثال کے طور پر، ایکیناکوسائیڈ، ٹیوبولوسائیڈ A، ایکٹیوسائیڈ، iso-acteoside، اور 2'-acetylacteoside، اور ان میں سے کچھ نے دماغی I/R کے بعد نیوروپروٹیکٹو افعال دکھائے۔ چوٹ (Peng et al.، 2016)۔ Echinacoside کے بہت سے فارماسولوجیکل اثرات ہیں، جیسے اینٹی آکسیڈیشن، اینٹی سینسینس، نیورو پروٹیکشن، اینٹی سوزش، سیکیٹرائزیشن کو فروغ دینا، ہیپاٹو پروٹیکشن، ہڈیوں کی تشکیل کو فروغ دینا، اور ٹیومر مخالف سرگرمیاں (Yu et al., 2016; Li et al., 2018؛ Zhang Y. et al., 2018; Ji et al., 2019; Xu et al., 2019)۔ حال ہی میں، echinacoside کو مرکزی اعصابی نظام میں ایک طاقتور اینٹی آکسیڈینٹ کے طور پر شناخت کیا گیا ہے (Lu et al.، 2016)۔ Echinacoside MDA مواد کو کم کر سکتا ہے اور اسکیمیا دماغی چوٹ میں SOD اور GSH Px کی سرگرمیوں کو بہتر بنا سکتا ہے، اور مالیکیولر ڈاکنگ تجزیہ ظاہر کرتا ہے کہ echinacoside Keap-1 سے منسلک ہو سکتا ہے، جس کے نتیجے میں Nrf-2 جوہری نقل مکانی (Li) وغیرہ، 2018)۔ Xia کے مطالعہ سے پتہ چلتا ہے کہ ایکٹیوسائڈ انفارکٹ کے حجم اور دماغ کے پانی کے مواد کو کم کر کے آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرنے کے ذریعے MCAO/R چوہوں میں اعصابی خسارے کو بہتر بنا سکتا ہے (Xia et al., 2018)۔ دیگر مطالعات نے یہ ثابت کیا ہے کہ iso-acteoside H2O2-علاج شدہ V79-4 خلیوں میں سیلولر اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز، SOD، اور CAT کی سرگرمیوں کو بڑھا سکتا ہے (Chae et al.، 2005)۔ TGs میں موجود فعال مرکبات کی مندرجہ بالا رپورٹوں کی بنیاد پر، یہ اندازہ لگانا ممکن ہے کہ TGs اینٹی آکسیڈیشن راستوں کے ذریعے اسکیمک اسٹروک سے حفاظت کر سکتے ہیں۔

Li نے Nrf2/ARE پاتھ وے (Li et al.، 2018) کے ذریعے PC12 خلیوں پر H2O2-کی حوصلہ افزائی apoptosis پر phenylethanoid glycosides (PhGs) کے نیورو پروٹیکٹو اثرات کی اطلاع دی۔ ان PhGs کو Nrf2 نیوکلیئر ٹرانسلوکیشن کو متحرک کرکے اور HO-1، NQO1، گلوٹامیٹ-سسٹین لیگیس کیٹلیٹک سبونائٹ (GCLC)، اور گلوٹامیٹ-سسٹین لیگیس موڈیفائر سبونائٹ (GCLM) (Li et al. گونگ وغیرہ، 2019)۔ لہذا، یہ نتائج بتاتے ہیں کہ Nrf-2/ARE پاتھ وے نیورونل سیلز پر PhGs کی ثالثی کے حفاظتی اثرات میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ اسی طرح، اس مطالعہ میں، ہم نے پایا کہ TGs MDA کی سطح کو کم کر سکتے ہیں اور I/R چوہوں میں SOD، CAT، اور GSH-Px کی سطح کو بڑھا سکتے ہیں۔ دریں اثنا، TGs نیوکلئس میں Nrf2 اظہار کو اپ گریڈ کر سکتے ہیں، سائٹوپلازم میں متعلقہ اظہار کو کم کر سکتے ہیں، اور Keap-1 اظہار کو نمایاں طور پر کم کر سکتے ہیں۔ لہذا، Nrf-2/Keap-1 راستہ TGs کے ثالثی نیورو پروٹیکٹو اثرات میں شامل ہو سکتا ہے۔ اس راستے کی مزید توثیق مستقبل میں آکسیجن-گلوکوز کی کمی/ری آکسیجنیشن انجری ماڈلز کے ساتھ وٹرو سیل کلچر میں کی جائے گی۔ مزید یہ کہC. deserticolaہمارے مطالعے میں 14 دن تک نچوڑ کا انتظام کیا گیا۔ چونکہ بالغ نیوروجینیسیس 14 دنوں کے ریفرفیوژن کے دوران نیورو پروٹیکٹو اثرات کی تشریح کو متاثر کرے گا، اس لیے CTs کے نیورو پروٹیکٹو اثر کی کھوج میں ہمارے موجودہ تجرباتی ڈیزائن میں نیوروجینیسیس کو خارج نہیں کیا جا سکتا۔ یہ ہماری تحقیق کی حد ہے۔

آخر میں، یہ TGs سے ہے۔C. deserticolaجو angiogenesis اور neurogenesis کو بڑھا سکتا ہے اور ساتھ ہی I/R چوٹ والے چوہوں میں BBB کی سالمیت کو برقرار رکھ سکتا ہے، لیکن PSs اور OSs میں نہیں۔ Nrf-2/Keap-1 پاتھ وے کو چالو کرنے سے اثرات میں ثالثی کی جا سکتی ہے۔