Cistanche Deserticola اقتباس کی حفاظت پر زہریلا مطالعہ

خلاصہ:

مقصد عام زہریلا کا اندازہ کرنا اورCistanche deserticola کی جینیاتی زہریلا نکالنااور اس کی بنیاد فراہم کریں۔مزید فعال مطالعہ کی ترقی. طریقے Anشدید زبانی زہریلا ٹیسٹاور ایک بار بار خوراک90-دن کی زبانی زہریلاچوہوں میں ٹیسٹ عام زہریلا کا مشاہدہ کرنے کے لئے کیا گیا تھاCistanche deserticola اقتباس. Cistanche deserticola extract کے جینیاتی زہریلے پن کا اندازہ کرنے کے لیے تین mutagenicity Asses بشمول ایک بیکٹیریل ریورس میوٹیشن ٹیسٹ (Ames test)، ایک ماؤس بون میرو پولی کرومیٹک erythrocyte اور ایک in Vitro mamalian chromosomeaberration ٹیسٹ۔ تمام ٹیسٹ کے طریقے قومی معیارات کے مطابق کئے گئے تھے۔ تجرباتی ڈیٹا کو یا تو theχ{{0}} ٹیسٹ یا تغیر کے تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے شماریاتی طور پر پروسیس کیا گیا تھا۔ کا ٹیسٹ لیول 0. 05 تھا۔

نتائج Theشدید زبانی میڈین مہلک خوراک(LD50) کاCistanche deserticola اقتباسمادہ اور نر دونوں چوہوں میں 10g/kg سے زیادہ تھا۔ ایمز ٹیسٹ کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ Cistanche deserticola اقتباس نے تمام ٹیسٹ شدہ تناؤ کی بیک میوٹیشن کالونیوں میں کوئی اضافہ نہیں کیا، اور اس کا منفی نتیجہ نکلا۔ ماؤس بون میرو پولی کرومیٹک erythrocyte کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ خوراک کے گروپوں اور سالوینٹ کے درمیان مادہ اور نر چوہوں میں اعداد و شمار کے لحاظ سے کوئی اہم فرق (χ2=3. 036, 1. 755, all P > 0. 05) نہیں تھا۔ کنٹرول گروپ، اور ایک منفی نتیجہ تھا. ان وٹرو میمالین کروموسوم ابریشن ٹیسٹ کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ میٹابولک ایکٹیویشن سسٹم کے ساتھ یا اس کے بغیر، اعدادوشمار کے لحاظ سے اہم فرق تھے (χ2=13. 244,9. 955, all P<0. 05) in chromosome aberration rate of Chinese hamster lung (CHL) cell between the positive control groups and the solvent control groups, and there were no statistically significant differences (χ 2 = 0. 436,1. 008, all P>0۔ 05) Cistanche deserticolaextract کے ڈوز گروپس اور سالوینٹ کنٹرول گروپس کے درمیان کروموسوم ابریشن سیل کی شرح میں، اور اس کا منفی نتیجہ تھا۔ چوہوں میں دہرائی جانے والی خوراک 90-دن کی زبانی زہریلا ٹیسٹ کے دوران، جانوروں کی سرگرمیاں، خوراک کا استعمال، اور پانی کا استعمال معمول کے مطابق تھا۔ کوئی واضح رویے میں تبدیلی اور زہر کے اظہار کا مشاہدہ نہیں کیا گیا، اور کوئی موت نہیں دیکھی گئی. کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، جسم کے بڑے پیمانے پر، خوراک کی کھپت، ہیماتولوجیکل اور بائیو کیمیکل انڈیکس، اعضاء کا وزن، اور ہر خوراک کے گروپ میں چوہوں کے رشتہ دار اعضاء کے وزن میں کوئی واضح غیر معمولی نہیں دیکھا گیا۔ ہسٹوپیتھولوجیکل امتحان میں کوئی واضح پیتھولوجیکل غیر معمولی تبدیلی نہیں پائی گئی۔ نتیجہ موجودہ تجرباتی حالات کے تحت، Cistanche deserticola نچوڑ میں کوئی عام زہریلا اور جینیاتی زہریلا نہیں ہے، اور مزید فعال مطالعہ کئے جا سکتے ہیں.

مطلوبہ الفاظ:حفاظت کی تشخیص؛Cistanche deserticola اقتباس; شدید زہریلا؛ جینیاتی زہریلا؛ عام زہریلا

فروخت کے لئے قدرتی CISTANCHE خام مال

فائیٹو کیمیکلز کم مالیکیولر ویٹ بائیو ایکٹیو مادوں کا ایک طبقہ ہے جس میں پودوں میں ضروری غذائی اجزاء کے علاوہ صحت کے مختلف افعال ہوتے ہیں [1]۔ حالیہ برسوں میں، نیوٹریشن سائنس کی مسلسل ترقی کے ساتھ، انسانی جسم پر مختلف فائٹو کیمیکلز کے فائدہ مند اثرات، جیسے تھکاوٹ کو روکنا، خون میں لپڈس کو کم کرنا، اور قوت مدافعت میں اضافہ کرنا، مسلسل دریافت کیا گیا ہے۔ Cistanche deserticola، جسے ارتھ اسپرٹ، cistanche اور دن کے نام سے بھی جانا جاتا ہے، عام طور پر "صحرائی ginseng" [2] کے نام سے جانا جاتا ہے۔ میرے ملک میں، 6 انواع اور 1 قسمیں ہیں، یعنی Cistanche deserticola، Cistanche alsa، Cistanche tubulosa، Cistanche sinensis، Cistanche lanzhouensis، Cistanche ambigua، اور variant Cistanche salsavar [3]۔ Cistanche deserticola بنیادی طور پر نمکین الکالی زمین، ریتلی زمین، اور صحرائی ماحول میں اگتا ہے۔ میرے ملک میں، یہ بنیادی طور پر اندرونی منگولیا خود مختار علاقے، گانسو صوبے، اور شانسی صوبے میں تقسیم کیا جاتا ہے۔ اس کے عرق میں صحت کے فوائد ہیں جیسے آنتوں کو نمی بخشنا، خلیاتی قوت مدافعت بڑھانا، اور جگر کی حفاظت کرنا [4-7]۔ فی الحال، Cistanche deserticola نچوڑ پر جانوروں کے زہریلے مطالعہ موجود ہیں۔ اس مطالعہ نے منظم طریقے سے اس کی شدید زہریلا، عام زہریلا، اور جینیاتی زہریلا کا جائزہ لیا تاکہ اس کی حفاظت کا اندازہ لگایا جا سکے اور مستقبل میں مزید گہرائی سے تحقیق کی بنیاد رکھی جا سکے۔

1 مواد اور طریقے

1. 1 مواد

1. 1. 1 ٹیسٹ مادہ

Cistanche deserticola extract ایک پاؤڈر ٹھوس ہے، جو اندرونی منگولیا Yuhangren High-tech Industry Co., Ltd.، بیچ نمبر: 211101 کی طرف سے تیار اور فراہم کیا گیا ہے۔ تجویز کردہ انسانی کھپت 0. 72g/d ہے، جسے 12mg/kg·bw کی روزانہ تجویز کردہ کھپت میں تبدیل کیا جاتا ہے۔

1. 1. 2 تجرباتی جانور

صحت مند بالغ مخصوص پیتھوجین فری (SPF) گریڈ Sprague-Dawley (SD) چوہے Hunan Slake Jingda Experimental Animal Co., Ltd. سے SCXK (Xiang) 2019-0014 کے جانوروں کی پیداوار کے لائسنس نمبر کے ساتھ خریدے گئے تھے۔ انہیں ہنان پیشہ ورانہ امراض کی روک تھام اور کنٹرول انسٹی ٹیوٹ کے بیریئر گریڈ جانوروں کے کمرے میں رکھا گیا تھا، جس کا درجہ حرارت 21 ~ 24 ڈگری اور نمی 45 ~ 68 % تھی۔ تجرباتی جانوروں کے استعمال کا لائسنس نمبر SYXK (Xiang) 2017-0001 ہے۔

1. 1. 3 بیکٹیریا

ہسٹائڈائن کی کمی والا سالمونیلا ٹائیفیموریم۔ تناؤ TA97, TA98, TA100, اور TA102 ہیں، یہ سب MOLTOX، USA کے ذریعے فراہم کیے گئے ہیں، اور ہماری لیبارٹری نے ضروریات کو پورا کرنے کے طور پر شناخت کی ہے۔

1. 1. 4 سیلز چینی ہیمسٹر پھیپھڑوں (CHL) سیل لائن، چینی اکیڈمی آف سائنسز (شنگھائی، چین) کے سیل بینک سے خریدی گئی ہے۔

1. 2 طریقے

1. 2. 1 شدید زبانی زہریلا ٹیسٹ

اس ٹیسٹ نے حد کا طریقہ اپنایا۔ 20 SD چوہے جن کا جسمانی وزن 185. 80 ~ 220. 00g منتخب کیا گیا، نصف خواتین اور آدھے مرد، اور 16 گھنٹے تک روزہ رکھا۔ 10 کا ایک خوراک گروپ بنائیں۔ mg/ml ٹیسٹ محلول کو زبانی طور پر 15 کی خوراک پر دیا گیا۔{15}}ml/kg·bw۔ مشاہدے کی مدت 14 دن تھی، اور روزانہ جانوروں کی زہریلی علامات اور اموات ریکارڈ کی گئیں۔ جانوروں کا وزن تجربے کے آغاز میں، انتظامیہ کے ساتویں دن، اور تجربے کے اختتام پر کیا گیا۔ مشاہدے کی مدت کے بعد، چوہوں کو CO2 اینستھیزیا کے ذریعے ہلاک کیا گیا، اور جانوروں کا مجموعی جسمانی معائنہ مکمل ہوا۔

1.2.2 ایمس ٹیسٹ

50، 158، 500، 1580، اور 5000ug/dish کی 5 خوراکیں مرتب کریں، اور ایک مثبت تبدیلی کنٹرول گروپ اور سالوینٹ کنٹرول گروپ قائم کریں۔ مثبت مادے ہیں سوڈیم ایزائیڈ، 2-امینو فلورین، 1، 8-ڈائی ہائیڈروکسیانتھراکوئنون، اور ڈائی کلوروتھیازائڈ، اور سالوینٹ خالص پانی ہے۔ اس ٹیسٹ میں ہر خوراک کے گروپ کے لیے تین متوازی پکوان بنائے گئے تھے۔ یہ ٹیسٹ S9 (جگر کے مائکروسومل انزائم) کے ساتھ اور S9 کے بغیر دو نظاموں میں کیا گیا تھا، اور خلیوں کو انتظامیہ کے بعد 48 گھنٹے تک 37 ڈگری مستقل درجہ حرارت کے انکیوبیٹر میں کلچر کیا گیا تھا۔

1.2.3 ماؤس بون میرو پولی کرومیٹک erythrocyte micronucleus ٹیسٹ

کنمنگ چوہے، 25 خواتین، اور 25 نر، جس کا جسمانی وزن 29.3~35 ہے۔{5}}g ٹیسٹ نے 2.5، 50، اور 10.0g/kg·bw کے تین خوراک کے گروپس، ایک مثبت کنٹرول گروپ، اور ایک سالوینٹ کنٹرول گروپ قائم کیا۔ مثبت مادہ cyclophosphamide (CP؛ مینوفیکچرر: Baxter؛ بیچ نمبر: OH397A) تھا، اور خوراک 40 mg/kg·bw تھی۔ سالوینٹ کنٹرول گروپ اور خوراک گروپ کو 40 ملی لیٹر/کلو جی بی ڈبلیو دیا گیا تھا، اور مثبت کنٹرول گروپ کو 20 ملی لیٹر/کلوگرام دیا گیا تھا۔ انتظامیہ کا طریقہ یہ تھا کہ 30 گھنٹوں کے اندر دو بار دوا دی جائے، اور آخری انتظامیہ پہلی انتظامیہ کے 24 گھنٹے بعد کی گئی۔ جانوروں کو انتظامیہ کے خاتمے کے 6 گھنٹے بعد مار دیا گیا، اسٹرنم بون میرو کو تیاری کے لیے لیا گیا، اور مائکرونیوکلی پر مشتمل خلیوں کی تعداد کو ایک خوردبین کے نیچے شمار کیا گیا (مینوفیکچرر: اولمپس، ماڈل: CX23)۔

1.2.4 ان وٹرو ممالیہ سیل کروموسوم ابریشن ٹیسٹ

ٹیسٹ نے ایک سالوینٹ کنٹرول گروپ (خالص پانی)، 250، 500، اور 1000g/ml خوراک کے گروپس، اور ایک مثبت کنٹرول گروپ قائم کیا۔ مثبت کنٹرول 20ug/ml methyl methanesulfonate (MMS) (مینوفیکچرر: West Asia Reagent، بیچ نمبر: 20200109) (میٹابولک ایکٹیویشن سسٹم کے بغیر) اور 10ug/ml cyclophosphamide (مینوفیکچرر: بیکسٹر، بیچ نمبر:

OH397A) (میٹابولک ایکٹیویشن سسٹم کے ساتھ)۔ اس بات کی تصدیق کرنے کے بعد کہ خلیات آلودہ نہیں ہیں، سیل کی حراستی کو 5 × 10 پر ایڈجسٹ کریں۔

5/ml، ہر بوتل میں 200ml سیل معطلی شامل کریں، پھر 300ml Dulbecco کے ترمیم شدہ ایگل میڈیم (DMED) (مینوفیکچرر: Zhejiang Jinuo Biomedical Technology Co., Ltd. بیچ نمبر: 22112501)، اور تقریباً 24 گھنٹے تک انکیوبیٹر میں رکھیں۔ بوتل میں کلچر میڈیم چوسنے کے بعد، ہر بوتل میں 4.95ml DMEM مکمل میڈیم (بغیر میٹابولک ایکٹیویشن سسٹم) یا 4.45ml DMEM مکمل میڈیم اور 0.50ml S9 مکسڈ سلوشن (میٹابولک ایکٹیویشن سسٹم کے ساتھ) شامل کریں، اور آخر میں تیار شدہ ٹیسٹ کے نمونے یا کنٹرول کے نمونے کا 50ul شامل کریں، اور کلچر کی بوتل کو انکیوبیٹر میں رکھیں (مینوفیکچرر: Shanghai Lishen Scientific Instrument Co., Ltd.، ماڈل: HF160W) زہر کے 4 گھنٹے کے لیے۔ انفیکشن کے بعد، کلچر میڈیم کو ضائع کریں، خلیات کو تین بار Hanks متوازن نمک کے محلول (HBSS) سے دھوئیں (مینوفیکچرر: Zhejiang Jinuo Biomedical Technology Co., Ltd.، بیچ نمبر: 2109220213)، اور پھر 5 شامل کریں۔{19} }ml DMEM ہر بوتل میں کلچر میڈیم مکمل کریں، 24 گھنٹے تک کلچر کریں اور سیلز کی کٹائی کریں۔

کٹائی سے 4 گھنٹے پہلے، ہر بوتل میں 50 ul 100 mg/ml colchicine شامل کریں، 4 گھنٹے تک انکیوبیٹ کریں، 0.25% ٹرپسن محلول کے ساتھ ڈائجسٹ کریں (مینوفیکچرر: Zhejiang Jinuo Biopharmaceutical Technology Co., Ltd.، بیچ نمبر: 22071201)، سیلز کو سینٹری فیوج اور کٹائی کریں، معمول کے طریقہ کار کے مطابق سلائیڈیں تیار کریں، فی بوتل ایک سلائیڈ تیار کریں، اور 10% Giemsa اسٹین کے ساتھ داغ لگائیں [مینوفیکچرر: چائنا فارماسیوٹیکل (گروپ) شنگھائی کیمیکل ریجنٹ کمپنی، بیچ نمبر: 20201]2020۔

تیل وسرجن لینس کے تحت (مینوفیکچرر: اولمپس، ماڈل: CX23)، ہر گروپ میں 100 میٹا فیزز کا تجزیہ کیا گیا، مسخ شدہ خلیات کی تعداد، خرابی کی قسم، اور غیر معمولی بصری فیلڈ کے نقاط کا مشاہدہ اور ریکارڈ کیا گیا، اور کروموسوم کی خرابی کی شرح تھی۔ حساب کیا

1.2۔{2}}چوہوں میں دن کی زبانی زہریلا ٹیسٹ

120 SD چوہے، 4 ہفتے پرانے، آدھے مادہ اور آدھے نر، جس کا جسمانی وزن 75 ہے۔{3}} مادہ چوہوں اور 80 کے لیے ٹیسٹ کے آغاز میں 0 گرام۔{6} 8 جی نر چوہوں کے لیے۔ تجربے نے 600، 1,200، اور 3,600 mg/(kg·bw·d) کے تین خوراکی گروپ بنائے اور ایک مثبت کنٹرول گروپ، ہر گروپ میں 10 مادہ اور نر جانور تھے۔ اس کے علاوہ، ایک وسط مدتی کنٹرول سیٹلائٹ گروپ، ریکوری پیریڈ کنٹرول سیٹلائٹ گروپ، وسط مدتی ہائی ڈوز سیٹلائٹ گروپ، اور ریکوری پیریڈ ہائی ڈوز سیٹلائٹ گروپ، ہر گروپ میں 5 مادہ اور نر چوہے تھے۔ کم، درمیانے اور زیادہ خوراک والے گروپوں کی خوراک بالترتیب 50، 100، اور 300 گنا تجویز کردہ انسانی استعمال کے برابر تھی۔ ٹیسٹ محلول ہر روز تازہ تیار کیا جاتا تھا، اور گیویج کا حجم 10ml/(kg·bw·d) تھا۔ تجربے کے دوران ہر روز جانوروں کا مشاہدہ کیا گیا اور ان کے عمومی حالات ریکارڈ کیے گئے۔ تجربے کے اختتام پر، 16 گھنٹے روزہ رکھنے کے بعد خون جمع کیا گیا، اور خون کے معمولات اور خون کی بائیو کیمسٹری کی پیمائش کی گئی، اور اعضاء کے مجموعی گھاووں اور ہسٹوپیتھولوجیکل امتحانات کا مشاہدہ کیا گیا۔

1.3 شماریاتی تجزیہ

ڈیٹا کا تجزیہ کرنے کے لیے IBM SPSS شماریات 20.0 شماریاتی سافٹ ویئر استعمال کیا گیا۔ ممالیہ erythrocyte micronucleus ٹیسٹ کا شماریاتی طور پر Poisson کی تقسیم اور تغیر تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا۔ وٹرو ممالیہ سیل کروموسوم ابریشن ٹیسٹ کا شماریاتی طور پر χ2 ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا۔ 90- دن کے زبانی زہریلے ٹیسٹ کا شماریاتی طور پر یک طرفہ تغیر تجزیہ اور (یا) ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا۔ پی<0.05 was considered statistically significant, and the test level was α = 0.05.