لیوپس نیفرائٹس میں کیسپیس کی روک تھام کے ذریعے مجموعہ تھراپی کے نئے اثرات

مزید معلومات کے لیے:ali.ma@wecistanche.com

ہینگ کاو، جونیو لیانگ، جینگ لیو، یہ ہی، ینی کی، ییدو سن، سونگ جیانگ اور جن لن

خلاصہ

مقاصد: مائکوفینولٹ موفٹیل، ٹیکرولیمس، اور سٹیرائڈز کے ساتھ امتزاج تھراپی مکمل معافی حاصل کرنے میں موثر ہے۔lupus ورم گردہ(ایل این)۔ یکجہتی تھراپی نے مونوتھراپیوں کے مقابلے میں منفرد طور پر کیسپیس کو کم کیا-1، جو گیسڈرمین ڈی (GSDMD) کو صاف کر سکتا ہے اور حال ہی میں اس کی شناختpyroptosisجلاد لہذا، ہم نے تحقیق کی کہ آیا امتزاج تھراپی نے کیسپیس کو دبانے کے قابل بنایا ہے-1/GSDMD-mediatedpyroptosisLN میں (lupus ورم گردہ).

ورم گردہ کے لیے cistanche deserticola ma پر کلک کریں۔

طریقے: LN (lupus ورم گردہ) امیونو ہسٹو کیمیکل سٹیننگ اور امیونو بلوٹنگ کا استعمال۔ MRLlpr چوہوں سے الگ تھلگ پرائمری پوڈوسیٹس کو LPS پلس ATP کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا اور مونو تھراپی یا امتزاج تھراپی کے ساتھ پہلے سے علاج کیا گیا تھا۔ کیسپیس کی روک تھام-1/GSDMD-حوصلہ افزائیpyroptosisمرکب تھراپی کے ذریعہ MRLlpr چوہوں اور انسانی نمونوں میں تشخیص کیا گیا تھا۔ FAM کیسپیس-1 کٹ اور فلو سائٹومیٹری کا استعمال کرتے ہوئے میرا معائنہ کیا گیا۔ کے درمیان ارتباطpyroptosisپردیی خون میں اور سیسٹیمیٹک لیوپس ایریٹیمیٹوسس بیماری سرگرمی انڈیکس (SLEDAL) کا تجزیہ کیا گیا۔

نتائج: LN سے گردے کے ٹشو کے نمونے (lupus ورم گردہ) مریضوں اور چوہوں نے جی ایس ڈی ایم ڈی کے اظہار کی سطح میں بہت زیادہ اضافہ کیا۔ کلچرڈ پوڈوسائٹس میں، امتزاج کے علاج نے NLRP3 اور کیسپیس-1 کی ایکٹیویشن کو نمایاں طور پر دبایا اور GSDMD N-ٹرمینل کی سطح کو کم کیا۔ امتزاج تھراپی نے کیسپیس کی روک تھام کے ذریعے بیماری کے بڑھنے کو دبایا-1/GSDMD-ثالثیpyroptosisانسانوں اور MRL/LPR چوہوں دونوں میں۔ پردیی خون میں کیسپیس-1/PI مثبت سیل نمبر SLE-DAl کے ساتھ مثبت طور پر منسلک تھے۔ ایل این (lupus ورم گردہ) مکمل معافی اور جزوی معافی والے مریضوں میں بیس لائن کے مقابلے کیسپیس-1/PI مثبت سیل نمبروں میں نمایاں کمی واقع ہوئی تھی۔ Ac-FLTD-CMK، ایک GSDMD سے ماخوذ روکنے والا، LN کی ترقی کو روکتا ہے۔lupus ورم گردہ).

نتیجہ: کمبی نیشن تھراپی سپریسڈ کیسپیس-1/GSDMD-ثالثیpyroptosisوٹرو اور ویوو میں اور بیماری کے بڑھنے میں کمی۔

مطلوبہ الفاظ:lupus ورم گردہ, pyroptosis، کیسپیس-1، گیسڈرمین ڈی، تھراپی

کے لیے علاج معالجہpyroptosis

تعارف

لوپس ورم گردہ(LN) گردے کی سوزش ہے جو آٹو امیون بیماری کے نظامی lupus erythematosus (SLE) کے نتیجے میں پیدا ہوتی ہے۔LN (lupus ورم گردہ) ایس ایل ای میں مبتلا مریضوں میں ایک اہم مظہر ہے۔ تقریباً 60 فیصد مریض یہ حالت پیدا کرتے ہیں، تقریباً 20 فیصد گردے کی بیماری کے اختتامی مرحلے (ESRD) (1) میں ترقی کرتے ہیں۔ Mycophenolate mofetil (MMF)، کیلسینورین انحیبیٹرز (CNI)، اور سٹیرائڈز کے ساتھ امتزاج تھراپی تکمیلی اثرات پیدا کرتی ہے اور زہریلے پن کو بھی کم کرتی ہے (2)۔ یہ تھراپی LN کے ابتدائی علاج کے طور پر تجویز کی جاتی ہے۔lupus ورم گردہ) اور انٹرا وینس سائکلو فاسفمائڈ (IVCY) اور سٹیرائڈز (3-5) کے مقابلے میں بہتر افادیت اور زیادہ مکمل معافی پیدا کرتا ہے۔

مجموعہ تھراپی کے مالیکیولر اور سیلولر میکانزم کی چھان بین کے لیے، LN کے ایک مورین ماڈل میں جامع ٹرانسکرومیٹک تجزیہ کا استعمال کیا گیا تھا۔ (lupus ورم گردہ). MRL/LPR چوہوں کو اکیلے MMF، tacrolimus، یا prednisone بطور monotherapy، یا ٹرپل ڈرگ کے مجموعے دیے گئے۔ ایل این کے ساتھ چوہوں کے گردوں میں جین کے اظہار کے پروفائلز (lupus ورم گردہ)ممکنہ میکانزم کا انکشاف کیا جو مونو تھراپی کے مقابلے میں امتزاج تھراپی کے اضافی اور ہم آہنگی کے اثرات کا سبب بن سکتا ہے۔ 45 ڈاؤن ریگولیٹڈ جینز میں سے ایک جو منفرد طریقے سے امتزاج تھراپی کے ذریعے ماڈیول کیا جاتا ہے کیسپیس-1 (6) ہے۔ یہ سوزش کے ذریعے چالو ہوتا ہے، جو ملٹی پروٹین اولیگومر ہیں جو NLRP3، پرو کیسپیس-1، اور apoptosis سے وابستہ سپیک نما پروٹین (ASC) پر مشتمل ہوتے ہیں، جس میں ایک مربوط کیسپیس انفینٹی ڈومین ہوتا ہے۔ NLRP3/ASC/caspase-1 سوزش کو LN کے روگجنن میں کلیدی معاون کے طور پر تسلیم کیا گیا ہے۔ (lupus ورم گردہ). این ایل آر پی 3 انفلامیسموم کیسپیس-1 کو چالو کر کے خود بخود سوزش کے عوارض کو چلاتا ہے، سوزش کے حامی سائٹوکائنز جیسے IL-1 کی نسل شروع کرتا ہے، جو LN(7-9) میں پوڈوسیٹ کے dysfunction کو متحرک کرنے کے لیے جانا جاتا ہے۔

فعال کیسپیس-1 اپنے N-اور C-ٹرمینل ڈومینز کے ربط کے اندر گیسڈرمن D(GSDMD) کو صاف کرتا ہے۔ اس کے بعد، N-ٹرمینل ڈومین سیل جھلی میں تاکنا بنانے کی سہولت فراہم کرتا ہے، سیل کو متحرک کرتا ہے۔pyroptosisاور سائٹوکائن IL-1 اور IL-18 کی پیداوار (10)۔ ابھرتے ہوئے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ جی ایس ڈی ایم ڈی کی ثالثی۔pyroptosisبیماریوں کے بڑھنے میں حصہ لیتا ہے جن میں آٹومیمون انسیفالومائلائٹس (11)، ایک سے زیادہ سکلیروسیس (12)، الکحل سے متعلق ہیپاٹائٹس (13)، اور آنتوں کی سوزش کی بیماری (14) شامل ہیں۔ ذیابیطس کے گردے کی بیماری (15, 16) اور گردے کی شدید چوٹ (17-19) کے بعد بھی گردے کو چوٹ سے بچانے کے لیے دکھایا گیا ہے۔ البتہ،pyroptosisایل این میں (lupus ورم گردہ)آج تک ناقص طور پر بیان کیا گیا ہے (20)۔ ہم نے قیاس کیا کہ امتزاج تھراپی نے ایل این میں فائدہ مند اثرات مرتب کیے ہیں۔ (lupus ورم گردہ)) روک کرpyroptosisکیسپیس-1/GSDMD کے ذریعہ حوصلہ افزائی۔

موجودہ مطالعہ میں، گردے کے ٹشوز میں کیسپیس-1 اور جی ایس ڈی ایم ڈی کے ایکٹیویشن کے ساتھ ساتھ کیسپیس-1/GSDMD-انحصار پر امتزاج تھراپی کے اثرات کی بھی تحقیق کی گئی۔pyroptosisMRL/LPR چوہوں اور LN والے مریضوں میں روکنا (lupus ورم گردہ)۔ کے ممکنہ ارتباطpyroptosisSLE بیماری کی سرگرمی انڈیکس (SLEDAI) کے ساتھ اور علاج کے ردعمل کا بھی جائزہ لیا گیا۔

کے لیے علاجpyroptosis

مواد اور طریقے

آبادی کا مطالعہ کریں۔

مطالعہ کا گروپ ان مریضوں پر مشتمل تھا جن کی بایپسی سے LN (lupusورم گردہ) اندراج سے پہلے 6 ماہ سے کم یا اس کے برابر۔ مریض کی عمر کی حد 18-65 سال تھی اور سبھی امریکن کالج آف ریمیٹولوجی برائے SLE (2l, 22) اور انٹرنیشنل سوسائٹی آف نیفروولوجی/رینل پیتھالوجی سوسائٹی (2003) کے درجہ بندی کے معیار پر پورا اترے۔ زیجیانگ یونیورسٹی اسکول آف میڈیسن اور نانجنگ یونیورسٹی اسکول آف میڈیسن سے ایسے مریضوں کو بھرتی کیا گیا تھا جن میں پروٹینوریا تھا (1.5 g/d سے زیادہ یا اس کے برابر) اور سیرم کریٹینائن کا ارتکاز 265.2 umol/L سے کم یا اس کے برابر تھا۔ اخراج کے معیار میں شامل ہیں: ایک مریض کا پہلے میتھلپریڈنیسولون کی زیادہ مقدار میں علاج کیا گیا تھا۔ حیاتیات (مخصوص پیتھوجینک مالیکیولز کو نشانہ بنانا) یا مجموعہ تھراپی؛ موجودہ پلازما فیریسس یا اسکریننگ کے 12 ہفتوں کے اندر اندر اندر گلوبیولن کے ساتھ علاج؛ غیر معمولی جگر کے افعال؛ موجودہ فعال انفیکشن؛ اور مطالعہ شروع ہونے کے 4 ہفتوں کے اندر ایک مہلک ٹیومر۔ ایل این (lupusورم گردہ) مریضوں کو میتھلپریڈنیسولون کے ساتھ 3 دن تک 0.5 جی فی دن کی خوراک پر نبض کی تھراپی حاصل ہوئی۔ میتھلپریڈنیسولون پلس تھراپی مکمل ہونے کے بعد، پریڈیسون (0.6 ملی گرام/کلوگرام/ڈی)، ایم ایم ایف (0.5 جی، دو خوراکیں/ڈی)، اور ٹیکرولیمس (2 ملی گرام، دو خوراکیں/d) کل 4 ہفتوں کے لیے دی گئیں۔ پھر prednisone کی خوراکیں، جو اب بھی MMF(0.5 g، دو خوراک/d) اور tacrolimus (2 mg، دو خوراک/d) کے ساتھ مل رہی تھیں، ہر 2 ہفتوں میں 5 mg/d تک کم کر دی گئیں۔ ایک 10 mg/d دیکھ بھال کی خوراک حاصل کی گئی (4)۔ مکمل معافی (CR) کو پیشاب میں پروٹین کی مقدار 0.4 جی سے کم یا اس کے مساوی، فعال پیشاب کی تلچھٹ کی عدم موجودگی، سیرم البومین کا ارتکاز 35 g/L سے زیادہ یا اس کے برابر، اور عام کریٹینائن کے طور پر لیا گیا تھا۔ (23)۔ جزوی معافی (PR) کو 24-h پیشاب میں پروٹین کی ارتکاز میں 50 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر کمی کے طور پر 3.5 جی سے کم یا اس کے برابر، سیرم البومین کی حراستی 30 گرام/ سے زیادہ یا اس کے برابر ہے۔ L، اور بیس لائن سے سیرم کریٹینائن کے ارتکاز میں عام یا اس سے کم یا 25 فیصد کے برابر اضافہ۔ ہمارے ادارہ جاتی جائزہ بورڈ نے مطالعہ کی منظوری دی (نمبر IIT20200410A) اور تمام مریضوں نے اندراج سے قبل تحریری رضامندی فراہم کی۔

جانوروں کے ماڈلز

خواتین MRL/emoji-FasPr(MRL/LPR) چوہوں کو SLAC لیبارٹری اینیمل کمپنی لمیٹڈ (شنگھائی، چین) نے فراہم کیا تھا، تمام چوہوں کو بے ترتیب نمبر جنریٹر کی مدد سے تصادفی طور پر تقسیم کیا گیا تھا، ہر گروپ اور ہر پنجرے میں 5 چوہے تھے۔ . ان کا علاج 8 ہفتوں کی عمر میں زبانی طور پر کیا گیا، 0.5 ملی گرام/کلو گرام ٹیکرولیمس (MCE HY-13756)، 50 mg/kg MMF(MCE HY-B0199)، اور 1 ملی گرام/ kg prednisone (MCE HY-B0214) یا گاڑی روزانہ کل 8 ہفتوں کے لیے جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے(6)۔ Ac-FLTD-CMK کو MCE کے ذریعہ ترکیب کیا گیا تھا اور روزانہ 10 ملی گرام/کلوگرام ip انجیکشن لگایا گیا تھا۔ مندرجہ ذیل پتہ لگانے کے لیے ذمہ دار شرکاء کے لیے تمام علاج کو اندھا کر دیا گیا تھا۔ پیشاب البومین سے کریٹینائن تناسب (UACR) کا تعین البویل ایم اور کریٹینائن کمپینین (ایکسل، فل، یو ایس) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ ہسٹولوجیکل اور امیونو ہسٹو کیمیکل سٹیننگ سے پہلے گردے کے نمونوں کو 4 فیصد پیرافارمیلڈہائڈ میں طے کیا گیا تھا اور امیونو بلوٹنگ تجزیہ کے لئے نکالے جانے والے گردے کی کورٹیسز۔ چوہوں کے استعمال کی منظوری ہماری ادارہ جاتی جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کمیٹی (نمبر۔{20}}) نے دی تھی۔

چوہوں کی گلومیرولی تنہائی اور پوڈوکیٹ کلچر

Glomeruli کو 12- ہفتہ کی عمر کی خاتون C57 اور MRL/LPR چوہوں کے گردوں سے پاک کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے (24)۔ اینستھیٹائزڈ چوہوں کو 37 ڈگری سینٹی گریڈ پہلے سے گرم مقناطیسی موتیوں سے پرفیوز کیا گیا تھا۔ گردے نکالے گئے اور برف پر 1 ملی میٹر میں کیما بنایا گیا۔ پھر رینل ٹشوز کو 37 ڈگری پر 1 mg/ml collagenase اور 100 U/ml DNase I کے ساتھ 30 منٹ تک ہضم کیا گیا، پھر 100-μm Falcon cell strainers（431752, BD) کے ساتھ دو بار فلٹر کیا گیا۔ 4 ڈگری HBSS محلول (H1025, Solarbio) کے ساتھ کئی بار دھونے کے بعد اور 200g پر 5 منٹ تک ہلکے سنٹرفیوگریشن کے بعد، مقناطیسی اسٹینڈ (HY-K0200, MCE) کا استعمال کرتے ہوئے گلومیرولی پر مشتمل موتیوں کو اکٹھا کیا گیا اور HBSS محلول سے تین بار دھویا گیا۔ الگ تھلگ گلوومیرولی قسم I کولیجن (C3867، سگما-الڈرچ) پر کلچرڈ ڈشز کو 5 فیصد CO میں، 37 ڈگری پر جیفری (25) کے بیان کردہ طریقہ کے مطابق کلچر کیا گیا تھا۔ ان وٹرو تجربے میں پیسیج 2 پوڈوسیٹس استعمال کیے گئے تھے۔پائروپٹوسسانڈکشن، سائٹوٹوکسیٹی، اور IL-1 سیکریشن کا پتہ لگانا

MRL/LPR چوہوں کے پوڈوسائٹس کو 1 mg/ml LPS (tell-pb5lps، InvivoGen) کے ساتھ 4h کے لیے Opti-MEM میں حل کیا گیا، پھر 5mM ATP (tlrlatpl، In Vivo جین) محرک کے ساتھ۔ C57 چوہوں کے پوڈوسائٹس کو عام کنٹرول کے طور پر منقطع کردیا گیا تھا۔ Monotherapies tacrolimus（10μM）، MMF（luM）، اور prednisone（10μM）، یا مشترکہ تھراپی LPS پرائمنگ سے پہلے 1 گھنٹہ کے لیے خلیوں کے ساتھ پہلے سے انکیوبیٹ کی گئی تھی۔ محرک کے بعد cytotoxicity کا تعین کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق سائٹوٹوکسیٹی ڈیٹیکشن کٹ (11644793001، Roche) کے ذریعے کیا گیا تھا۔ محرک کے بعد سپرناٹینٹ کو مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق IL-1 ماؤس ELISA Kit(BMS6002, Invitrogen) کا استعمال کرتے ہوئے جمع اور ماپا گیا۔

اینٹی باڈیز اور ری ایجنٹس

Caspase-1(sc-398715, Santa Cruz Biotech), GSDMDC1 (sc-81868, Santa Cruz Biotech) کی سطحوں کا تعین کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق کیا گیا۔پائروپٹوسسپیریفرل خون میں FAM FLICAMCaspase-1 Kit(Bio-Rad, USA) کا استعمال کرتے ہوئے بہاؤ سائٹومیٹری کے ذریعے ماپا گیا۔

شماریاتی تجزیہ

اعداد و شمار کے تجزیے گراف پیڈ پرزم کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے تھے۔ پیئرسن کے ارتباط کا استعمال کرتے ہوئے طلباء کے ٹی ٹیسٹ اور ارتباط کے تجزیوں کا استعمال کرتے ہوئے دو گروپ موازنہ کیے گئے۔ دو دم والا صفحہ<0.05 was="" considered="" statistically="">

کے لیے علاجمیں pyroptosisلیوپس ورم گردہ (LN)

نتائج

GSDMD- ثالثی۔پائروپٹوسسLN سے متاثرہ گردوں میں چالو ہےlupusورم گردہ)

اس بات کی جانچ کرنے کے لئے کہ آیا GSDMD نے LN کے روگجنن میں حصہ ڈالا (lupusورم گردہ)، ہم نے سب سے پہلے LN سے لیے گئے گردے کے نمونوں میں GSDMD کے پروٹین ایکسپریشن لیول کا تجربہ کیا۔lupusورم گردہ) مریض. امیونو ہسٹو کیمیکل تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ LN (lupusورم گردہ) قسم IV، V، I پلس Vand IV پلس V والے مریض، اور صحت مند مضامین کے مقابلے۔ جی ایس ڈی ایم ڈی کا اظہار عالمی طور پر ایل این (lupusورم گردہ) مریض. مثبت (سرخ تیر) اور منفی داغ (سیاہ تیر) والے علاقے کو بڑھا دیا گیا تھا (شکل 1A)۔ اس کے بعد گردے میں GSDMD- مثبت علاقے کی فیصد کا تخمینہ لگایا گیا تھا (شکل 1B)۔ اسی طرح کے نتائج MRL/LPR چوہوں اور جنگلی قسم کے کنٹرول کے گردوں میں پائے گئے۔ امیونوبلوٹنگ تجزیہ نے MRL/LPR چوہوں (شکل 1C) کے گردے کے نمونوں میں GSDMD کے اظہار اور کلیویج میں بہت زیادہ اضافہ کی تصدیق کی۔ کنٹرول چوہوں (شکل 1D) کے مقابلے ایم آر ایل / ایل پی آر چوہوں میں گلوومیرولر پوڈوسیٹس، نلی نما خلیات اور دراندازی بیچوالا خلیوں میں جی ایس ڈی ایم ڈی کو بلند کیا گیا تھا۔ ان اعداد و شمار نے تجویز کیا کہ GSDMD- ثالثی کو LN سے متاثرہ گردوں کے ٹشووں میں چالو کیا گیا تھا۔lupusورم گردہ).

تصویر 1|LN (lupus nephritis) سے متاثرہ مریضوں اور چوہوں کے گردوں میں GSDMD مضبوطی سے بلند اور کلیو ہوا ہے۔

(A) صحت مند مضامین اور LN سے لیے گئے گردوں کے نمونوں میں GSDMD کا امیونو کیمیکل داغlupusورم گردہ) مریض، مثبت (سرخ تیر) اور منفی داغ (سیاہ تیر) کو بڑھا دیا گیا تھا۔

(B) GSDMD مثبت علاقوں کی مقدار کو ٹائپ III پلس V، IV، IV جمع V، V LN میں دکھایا گیا ہے۔lupusورم گردہ) مریض اور صحت مند مضامین۔

(C) کنٹرول کے تین جوڑوں اور MRL/LPR چوہوں سے رینل کورٹیکس میں مکمل لمبائی، کلیویڈ N-ٹرمینل ڈومین اور C-ٹرمینل ڈومین GSDMD کا امیونو بلوٹ تجزیہ۔

(D) کنٹرول اور MRL/LPR چوہوں سے لیے گئے گردے کے نمونوں میں GSDMD کا امیونو کیمیکل داغ۔

*p < {{0}}.05،="" **p=""><0.01۔ ایل="" این="">lupusورم گردہ), lupusورم گردہ; FL، پوری لمبائی؛ NT، N-ٹرمینل ڈومین؛ سی ٹی، سی ٹرمینل ڈومین۔

مجموعہ علاج GSDMD-ثالثی کو دباتا ہے۔پائروپٹوسسوٹرو میں پرائمری پوڈوکیٹس میں ایکٹیویشن

امتزاج تھراپی کے روکنے والے اثرات کی تحقیقات کے لیےpyroptosis، ہم نے دلانے کے لیے ایل پی ایس پلس اے ٹی پی محرک کا طریقہ استعمال کیا۔pyroptosisMRL/LPR چوہوں سے پوڈوسائٹس میں، جنگلی قسم کے C57 چوہوں سے پوڈوسائٹس کو عام کنٹرول کے طور پر لینا۔ MRLlpr چوہوں کے پوڈوسائٹس کو ایل پی ایس کے ساتھ 4 گھنٹے کے لیے پرائم کیا گیا تھا اور اس کے بعد اے ٹی پی کے ساتھ 4 گھنٹے تک علاج کیا گیا تھا، جو GSDMD کی ثالثی کے لیے عام طور پر استعمال ہونے والا محرک ہے۔pyroptosisایکٹیویشن (26) عام کنٹرول کے مقابلے میں، پوڈوسائٹس نے بعد میں پائروپٹوٹک مورفولوجیکل خصوصیات جیسے سیل سوجن اور بلبلنگ کی نمائش کی۔ امتزاج تھراپی کے ساتھ پہلے سے علاج نے پائروپٹوٹک مورفولوجیکل خصوصیات اور سائٹوٹوکسٹی (شکل 2A) کو نمایاں طور پر بہتر کیا۔ ایل پی ایس پلس اے ٹی پی حوصلہ افزائی پوڈوکیٹس سائٹوٹوکسائٹی۔ موازنہ کے طور پر، مشترکہ تھراپی نے LPS پلس ATP محرک (اعداد و شمار 2B, C) کے ذریعہ سپرنیٹنٹ میں سائٹوٹوکسیٹی اور IL-1 کے سراو کو نمایاں طور پر کم کیا۔ GSDMD-ثالثی کی مزید ایکٹیویشن کی تصدیق کرنے کے لیےpyroptosis، ہم نے امیونوبلوٹنگ کا استعمال کرتے ہوئے کیننیکل سوزش اور GSDMD ایکٹیویشن کا تجزیہ کیا۔ پائروپٹوٹک مورفولوجیکل تبدیلیوں اور سائٹوٹوکسیٹی کے ساتھ ہم آہنگ، ایل پی ایس پلس اے ٹی پی نے نمایاں طور پر NLRP3، کیسپیس-1، اور پوڈو سائیٹس میں کلیویڈ GSDMD کو فعال کیا (شکل 2D)۔ امتزاج کے علاج نے NLRP3 اور کیسپیس-1 کی ایکٹیویشن کو واضح طور پر دبا دیا اور GSDMD N-ٹرمینل کی سطح کو کم کر دیا۔ خاص طور پر، tacrolimus، MMF، یا prednisone کے ساتھ monotherapies نے LPS پلس ATP کو متحرک کر دیا سیل سائٹوٹوکسیٹی اور L-1 سراو، لیکن مجموعہ تھراپی نے Caspase-1 اور GSDMD پر زیادہ اہم روک تھام کا اثر دکھایا۔ ان نتائج نے ایسے شواہد فراہم کیے جو اس نظریے کی تائید کرتے ہیں کہ مجموعہ علاج سے GSDMD کی ثالثی میں بہتری آئیpyroptosisNLRP3 اور کیسپیس کے ایکٹیویشن کو دبا کر-1۔

تصویر 2|مجموعہ علاج وٹرو میں پوڈوکیٹس میں پائروپٹوسس کو بہتر بناتا ہے۔

(A) LPS پلس ATP کے ساتھ انکیوبیٹ ہونے اور امتزاج کے علاج کے ساتھ پہلے سے علاج کرنے کے بعد کلچرڈ پرائمری پوڈوسیٹس میں پائروپٹوٹک خصوصیات کی نمائش کی گئی۔ تیروں نے پائروپٹوٹک جیسی خصوصیات کی نمائش کرنے والے خلیوں کی نشاندہی کی۔

(B) چیلنج شدہ خلیوں سے سپرنٹنٹس کا تجزیہ سیل کی موت کے لیے کیا گیا، جیسا کہ LDH سراو سے ماپا جاتا ہے۔

(C) IL-1b کی رہائی کے لیے چیلنج شدہ خلیوں سے سپرنٹنٹس کا تجزیہ کیا گیا۔

(D) NLRP3، کیسپیس-1، GSDMD-NT، اور ASC اظہار کے بعد tacrolimus، MMF، prednisone، یا NLRP3 سوزش ایکٹیویشن کے بعد مجموعہ علاج کا امیونو بلوٹنگ تجزیہ۔

*p < {{0}}۔{4}}5;="" **p="">< 0.01;="" ***p=""><0.001؛ ****p=""><0.0001۔ ldh،="" lactate="">

DSMO، Dimethyl سلفوکسائڈ، FK506، tacrolimus؛ MMF، mycophenolate mofetil؛ پی این ایس، پریڈیسون؛ COM، مجموعہ تھراپی؛ ASC، apoptosis سے وابستہ سپیک نما پروٹین۔

امتزاج علاج دبے ہوئے کیسپیس-1/GSDMD-InducedپائروپٹوسسMRL/LPR چوہوں میں

آٹھ ہفتے پرانے MRL/LPR چوہوں کو MMF، tacrolimus، اور prednisone یا گاڑی کے کنٹرول کا مجموعہ دیا گیا۔ پچھلے مطالعہ (6) کے مطابق، 8 ہفتوں کے علاج کے بعد، گاڑی اور مجموعہ علاج گروپوں کے درمیان اموات یا جسمانی وزن میں کوئی فرق نہیں پایا گیا۔ گاڑیوں کے گروپ کے برعکس، پروٹینوریا، گلوومیرولوسکلروسیس، اور گردوں کے بیچوالا مدافعتی خلیوں کی دراندازی کو روکنے میں امتزاج کی تھراپی بہت مؤثر تھی (ضمنی شکل 1)۔

اگلا، ہم نے مجموعہ تھراپی اور گاڑیوں کے کنٹرول گروپس میں کیسپیس-1 اور GSDMD اظہار کی سطحوں کی جانچ کی۔ امیونو ہسٹو کیمیکل تجزیہ سے یہ بات سامنے آئی کہ گلومیرولر اور رینل انٹرسٹیشل کیسپیس-1 اور جی ایس ڈی ایم ڈی ایکسپریشن کو کمبی نیشن تھراپی گروپ (شکل 3A) میں واضح طور پر کم کیا گیا تھا۔ امیونوبلوٹنگ کے تجزیے میں کمبی نیشن ٹریٹمنٹ گروپ (شکل 3B) کے کڈنی کورٹیسز میں کیسپیس-1 اور جی ایس ڈی ایم ڈی کے اظہار میں کمی اور کلیویج بھی پایا گیا۔ مزید برآں، کیسپیس-1/پروپیڈیم آئوڈائڈ (PI) دوہری مثبت خلیات کو بہاؤ سائٹوومیٹری اور ایکpyroptosisایف اے ایم کیسپیس-1کِٹ۔ نتائج نے MRL/LPR چوہوں میں کیسپیس-1*/PI' پیریفرل بلڈ سیل نمبروں میں واضح کمی کا انکشاف کیا جنہوں نے گاڑی کے ساتھ علاج کیے جانے والے MRL/LPR چوہوں کے مقابلے میں مجموعہ علاج حاصل کیا۔(اعداد و شمار 3C,D)۔ اس کے علاوہ، امتزاج کے علاج نے سیرم Ii کی حراستی (شکل 3E) میں بھی نمایاں کمی کی۔ اس طرح ہم نے یہ نتیجہ اخذ کیا کہ مجموعہ علاج نے کیسپیس کو دبایا-1/GSDMD-حوصلہ افزائیpyroptosisLN کے گردوں اور خون کے خلیوں میں (lupusورم گردہ) چوہوں.

تصویر 3|MRL/LPR چوہوں میں امتزاج کا علاج کم کیسپیس-1/GSDMD-mediated pyroptosis۔

(A) MRL/LPR چوہوں کے گردے کے نمونوں میں GSDMD اور کیسپیس-1 کا امیونو کیمیکل داغ۔ گاڑی کے کنٹرول کے مقابلے میں، کیسپیس-1 اور GSDMD اظہار کو مجموعہ علاج گروپ میں واضح طور پر روکا گیا تھا۔

(B) MRL/LPR چوہوں کے رینل پرانتستا کے نمونوں میں مکمل لمبائی اور کلیویڈ GSDMD اور کیسپیس-1 کا امیونو بلوٹ تجزیہ؛ گاڑی اور امتزاج علاج گروپوں کے نتائج کا موازنہ۔

(C) MRL/LPR چوہوں سے پیریفرل خون میں کیسپیس-1/PI ڈبل پازیٹو سیلز کے FACS جنہیں امتزاج علاج دیا گیا یا نہیں دیا گیا۔

(D) MRL/LPR چوہوں کے پیریفرل خون میں کیسپیس-1/PI ڈبل پازیٹو سیلز کی مقدار کا تعین یا امتزاج تھراپی نہیں دی گئی۔

(E) MRL/LPR چوہوں میں سیرم IL{{0}}b کی مقدار کی مقدار کا تعین کرنا جو امتزاج علاج دیا گیا یا نہیں دیا گیا۔ ####P <0.0001۔ facs،="" فلوروسینس="" ایکٹیویٹڈ="" سیل="" چھانٹنا؛="" ct،="" مجموعہ="">

کمبینیشن تھیراپی سپریسڈ کیسپیس-1/GSDMD-InducedپائروپٹوسسLN میں (lupusورم گردہ) مریض

جنوری 2020 اور جون 2020 کے درمیان LN کے 47 مریضlupusورم گردہ) کا اندراج کیا گیا اور 43 نے مجموعہ تھراپی کے 24-ہفتوں کو مکمل کیا۔ اندراج شدہ کوہورٹ کی بنیادی بیماری اور آبادیاتی اعداد و شمار ضمنی جدول 1 میں درج ہیں۔ کیسپیس-1/پروپیڈیم آئوڈائڈ (PI ڈبل پازیٹو سیلز LN کے مریضوں میں کئے گئے تھے۔lupusورم گردہ) قسم III، IV، V، III جمع V، IV جمع V اور صحت مند کنٹرول میں a کا استعمال کرتے ہوئےpyroptosisFAM کیسپیس-1 کٹ اور فلو سائٹومیٹری۔ صحت مند کنٹرول کے مقابلے میں، پیریفرل خون میں کیسپیس-1/PI ڈبل پازیٹو سیلز کی تعداد میں اضافہ کیا گیا تھا (اعداد و شمار 4A، B)۔ ہم نے کیسپیس-1/PI ڈبل پازیٹو سیلز کا بھی معائنہ کیا 24-ہفتوں کی تھراپی کے بعد اور بیس لائن پر۔ انڈکشن تھراپی کے 24-ہفتوں کے بعد، CR اور PR کے واقعات بالترتیب 39.5 فیصد (17/43) اور 32.6 فیصد (14/43) تھے۔ CR اور PR مریضوں کے پیریفرل خون میں کیسپیس-1/PI ڈبل پازیٹو سیل نمبرز کو بیس لائن (فگر 4C) کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا۔ ہم نے کیسپیس-1 کے درمیان باہمی تعلق کی بھی نشاندہی کی۔pyroptosisاور SLEDA؛ ڈیٹا نے واضح طور پر ظاہر کیا کہ پیریفرل خون میں کیسپیس-1/PI مثبت تناسب SLEDAI (Figure 4D) کے ساتھ مثبت طور پر منسلک تھا۔ Ac-FLTD-CMK، ایک GSDMD سے ماخوذ روکنے والا، LN کی ترقی کو روکتا ہے (lupusورم گردہ).

تصویر 4|ایل این (لیوپس نیفرائٹس) کے مریضوں میں کمبی نیشن تھراپی اٹینیویٹڈ کیسپیس-1-ثالثی پائروپٹوسس۔

(A) LN کے پیریفرل خون میں کیسپیس-1/PI ڈبل مثبت خلیات کے FACS (lupusورم گردہ) مرکب تھراپی کے ساتھ یا اس کے بغیر علاج کیے جانے والے مریض۔

(B) قسم III، IV، V، III جمع V، اور IV جمع V LN (lupusورم گردہ) مریض اور صحت مند مضامین۔

(C) LN کے پیریفرل خون میں کیسپیس-1/PI ڈبل مثبت خلیوں کی مقدار (lupusورم گردہ) بیس لائن، CR، PR، اور امتزاج تھراپی کے بعد عدم معافی کے مریض۔

(D) SLE-DAI کے ساتھ کیسپیس-1/PI ڈبل مثبت خلیوں کے تناسب کا ارتباطی تجزیہ۔

**p < 0.01۔="" facs،="" فلوروسینس="" ایکٹیویٹڈ="" سیل="" چھانٹنا؛="" ایل="" این="">lupusورم گردہ), lupusورم گردہ; CR، مکمل معافی؛ PR، جزوی معافی؛ SLE-DAI، نظامی lupus erythematosus بیماری کی سرگرمی کا اشاریہ۔

ایک حالیہ تحقیق سے پتا چلا ہے کہ GSDMDhmice نے SLE.17 کے imiquimod-حوصلہ افزائی ماڈل میں گردوں کے C3 اور IgG کے جمع ہونے، زیادہ شدید گردوں کی چوٹ، اور اموات میں اضافہ کیا ہے تاکہ LN میں GSDMD کے کردار کو مزید واضح کیا جا سکے۔lupusورم گردہ)، MRL/LPR چوہوں کا علاج Ac-FLTD-CMK21 کے ساتھ کیا گیا تھا جس کی شروعات 8-ہفتے پرانی تھی، گاڑی کے کنٹرول کے ساتھ۔ علاج کے 8-ہفتوں کے بعد، گاڑی اور Ac-FLTD-CMK کے علاج شدہ گروپ کے درمیان اموات یا جسمانی وزن میں کوئی فرق نہیں پایا گیا۔ گاڑیوں پر قابو پانے والے چوہوں کے مقابلے میں، AC-FLTD-CMK سے علاج شدہ MRL/LPR چوہوں میں پیشاب کا البومین-کریٹینائن کا تناسب کم تھا (شکل 5A)، سیرم میں کریٹینائن کا کم ارتکاز (شکل 5B)، کم گلوومیرولوسکلروسیس (فگر 5C)، اور CD3۔ ، CD4، اور CD68 مثبت سیل کی دراندازی (شکل 5D)۔ امیونو ہسٹو کیمسٹری کے نتائج نے GSDMD(Figure 5D) اور دبائے ہوئے سیرم IL-1 کی رطوبت کا کم اظہار دکھایا جس کا تعین ELISA(Figure 5E) کے ذریعے کیا گیا ہے۔ اجتماعی طور پر، اعداد و شمار نے تجویز کیا کہ Ac-FLTD-CMK روکتا ہے۔pyroptosisLN سے متاثرہ گردوں میں (lupusورم گردہ).

تصویر 5|Ac-FLTD-CMK، ایک GSDMD سے ماخوذ روکنے والا، LN (lupus nephritis) کی نشوونما کو روکتا ہے۔

(A) پیشاب کے البومین سے کریٹینائن کے تناسب کا حساب MRL/LPR چوہوں میں کیا گیا جو GSDMD inhibitor دیا گیا یا نہیں دیا گیا۔

(B) MRL/LPR چوہوں میں سیرم کریٹینائن کو GSDMD inhibitor دیا گیا یا نہیں دیا گیا۔

(C) پیریڈک ایسڈ – شیف (PAS) سے داغے ہوئے گردے کے نمونوں کی نمائندہ تصاویر اور گلوومیرولوسکلروسیس فیصد کی مقدار۔

(D) CD3، CD4، F4/80، اور GSDMD کا امیونو کیمیکل سٹیننگ۔ (E) MRL/LPR چوہوں میں سیرم IL-1b کی مقدار کو GSDMD inhibitor دیا گیا یا نہیں دیا گیا۔

ڈیٹا کو اوسط ± SEM کے طور پر دکھایا گیا ہے۔ #p < {{0}.05،="" ##p=""><>

بحث

کمبی نیشن تھراپی ایک امید افزا حکمت عملی ہے کیونکہ زیادہ CR اور مجموعی ردعمل کی شرح، معافی کے لیے ایک مختصر وقت، اور کم ضمنی اثرات۔ اب تک، مجموعہ تھراپی کے بنیادی مالیکیولر میکانزم معلوم نہیں تھے۔ حال ہی میں، Fu et al.(6) نے MRL/LPR چوہوں کا علاج monotherapies یا مجموعہ تھراپی سے کیا اور پورے گردوں پر ایک جامع ٹرانسکرپٹومک تجزیہ کیا۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ انہوں نے یہ پایا کہ مرکب تھراپی لیکن مونوتھراپی خاص طور پر اور منفرد طور پر دبائے ہوئے کیسپیس-1 اظہار کو نہیں۔

NLRP3/ASC/caspase-1 inflammasome اب LN کے روگجنن میں کلیدی معاون کے طور پر پہچانا جاتا ہے (lupusورم گردہ)۔ پوڈوسائٹس میں NLRP3 سوزش والے چوہوں اور LN کے مریضوں میں بھی چالو ہوتے ہیں۔lupusورم گردہ)۔ جب NLRP3 inflammasomes کو کیسپیس-1 inhibitor کے ساتھ دبایا گیا تو پروٹینوریا، گردوں کے ہسٹولوجیکل گھاووں، اور پوڈو سائیٹ پاؤں کے عمل کی افزائش کو lupus کے شکار چوہوں میں بہتر پایا گیا (8)۔ ہوانگ وغیرہ۔ (27) نے اطلاع دی ہے کہ NLRP3 کا اظہار LN کے نلی نما خلیوں میں کیا گیا تھا (lupusورم گردہ) درجہ چہارم اور NLRP3 ایکٹیویشن LN والے مریضوں کے لیے سرگرمی انڈیکس سکور کے ساتھ مثبت طور پر منسلک تھا۔ Caspase-1 lupus اور vascular dysfunction میں ایک اہم کردار ادا کرنے کے لیے ثابت ہوا ہے، اور اس طرح نئے علاج کی مداخلتوں کے لیے ایک ممکنہ ہدف ہے(28)۔ ابھرتی ہوئی تجرباتی دوائیں جیسے RIP3(29)، P2X7 ریسیپٹر مخالف (30)، GSK-3 inhibitors (31) اور Nrf2 agonist (32) LN کی نشوونما کو روکتی ہیں۔lupusورم گردہ) MRL/LPR چوہوں میں NLRP3/ASC/caspase-1 سوزش کی سرگرمی کو ماڈیول کر کے، جو LN میں NLRP3/ASC/caspase-1 کی اہمیت اور اہمیت کو نمایاں کرتی ہے۔ IL-18 کے سیرم میں بڑھے ہوئے ارتکاز کا تعلق بیماری کی شدت اور SLE مریضوں میں گردے کی چوٹ/ملوثیت کی ڈگری (33) سے ہے۔ ہمارے بہترین علم کے مطابق، ایسا لگتا ہے کہ گیسڈرمین فیملی کی ترقی کے لیے ضروری ہو سکتا ہے۔pyroptosis، لیکن SLE مریضوں میں GSDMD/GSDME کی موجودگی کے ثبوت کی کمی ہے۔

مجموعی طور پر، ہم نے LN (lupusورم گردہ) مریض اور MRL/LPR چوہے۔ GSDMD مضبوطی سے حوصلہ افزائی اور گلومیرولر پوڈوکیٹس اور نلی نما خلیوں اور دراندازی بیچوالا خلیوں میں کلیویڈ تھا۔ اس کے بعد، MRL/LPR چوہوں کو MMF، tacrolimus، اور prednisone یا گاڑی کا مجموعہ دیا گیا۔ گاڑیوں کے کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، کیسپیس-1 اور GSDMD کی ایکٹیویشن کو امتزاج علاج گروپ میں کم کیا گیا تھا۔ کی ڈگریpyroptosisپردیی خون میں بھی LN میں بہت کم تھا (lupusورم گردہ) امتزاج تھراپی کی انتظامیہ کے بعد مریض۔ مزید یہ کہpyroptosisپردیی خون میں مثبت طور پر SLEDAI کے ساتھ منسلک کیا گیا تھا، جس نے تجویز کیا کہpyroptosisپردیی خون میں SLE سرگرمی کے لیے ایک اہم مارکر کے طور پر کام کر سکتا ہے۔ اس طرح ہم نے قیاس کیا کہ امتزاج تھراپی LN میں فائدہ مند اثرات دے سکتی ہے (lupusورم گردہ) روک کرpyroptosisکیسپیس-1/GSDMD کے ذریعہ حوصلہ افزائی۔ Ac-FLTD-CMK کے ساتھ ایک کمپلیکس میں کیسپیس-1 کے پچھلے کرسٹل اسٹرکچرل اسٹڈیز نے بہت سے انزائم-انحیبیٹر تعاملات کا انکشاف کیا جو کیسپیس-1 کے ذریعہ GSDMD کی شناخت کو روکتے تھے۔ تاہم، ہم نے پایا کہ Ac-FLTD-CMK، جو GSDMD سے ماخوذ روکنے والے کے طور پر کام کرتا ہے، روکتا ہے۔pyroptosisLN میں (lupusورم گردہ)، جو ایک مختلف میکانزم کی طرف سے حوصلہ افزائی کی جا سکتی ہے.

حال ہی میں، SLE(34) کے TLR7-حوصلہ افزائی شدہ مورین ماڈل میں، GSDMD-/-چوہوں نے گردے کو زیادہ نقصان پہنچایا اور شرح اموات میں اضافہ کیا، جس نے ابتدائی طور پر تجویز کیا کہ GSDMD کو حذف کرنے سے حفاظتی اثر پڑے گا اور متعلقہ بڑھتی ہوئی اموات کے ساتھ نظامی سوزش اور آٹو اینٹی باڈیز کی پیداوار۔ GSDMD کی کمی والے چوہے جنگلی قسم کے چوہوں کے مقابلے میں گردے کے نمونوں اور اعلیٰ پروٹینوریا میں گلومیرولر امیون کمپلیکس کا زیادہ نمایاں ذخیرہ تیار کرتے ہیں۔ ایکسٹرا سیلولر HMGB1 کا بڑھا ہوا سراو GSDMD-/lymphocytes میں بھی پایا گیا جو تجویز کرتا ہے کہ necrosis/pyroptosisاس وقت ہوا جب GSDMD غیر حاضر تھا۔

کیسپیس-1 محرکاتpyroptosisجی ایس ڈی ایم ڈی کلیویج کے ذریعے۔ اس کے برعکس، جی ایس ڈی ایم ڈی کی کمی یا جی ایس ڈی ایم ڈی کم خلیوں میں، کیسپیس-1 اپوپٹوس کو متحرک کرتا ہے اور پھر جی ایس ڈی ایم ای پر منحصر سیکنڈری نیکروسس اورpyroptosis. جب جی ایس ڈی ایم ڈی کی سرگرمی تھراپی کے بعد غائب ہوتی ہے، تو جی ایس ڈی ایم ای شاید کیسپیس کو بھی تبدیل کر سکتا ہے-3-ثالثی اپوپٹوسpyroptosis(35,36) اس کے علاوہ، کیسپیس کی ایکٹیویشن-8 میکروفیجز میں بہت زیادہ بڑھ گئی تھی جن میں GSDMD کی کمی تھی۔ TLR7-حوصلہ افزائی GSDMD-deficient LN (lupusورم گردہچوہے (34)۔ اس طرح، GSDMD کی غیر موجودگی میں، یہ امکان ہے کہ کیسپیس-1 کیسپیس کے ساتھ تعاون کرے-8 کیسپیس کا سبب بنے-3-جی ایس ڈی ایم ای میڈیٹڈ اپوپٹوس کو تبدیلpyroptosisLN میں (lupusورم گردہ)، ایک مفروضہ جو مزید تجرباتی تحقیقات کا مطالبہ کرتا ہے۔

موجودہ مطالعہ میں کئی حدود ہیں۔ سب سے پہلے، موجودہ اعداد و شمار کی بنیاد پر، ہم نے تصدیق کی کہ امتزاج تھراپی دبا سکتی ہے۔pyroptosis، لیکن دوسرے علاج جیسے سٹیرائڈز اور ایم ایم ایف کی دوہری تھراپی، سٹیرائڈز اور ٹیکرولیمس، یا اینٹی CD20 اینٹی باڈی کے بھی تقابلی اثرات ہو سکتے ہیں۔ دوسرا، کیسپیس-1 پر امتزاج تھراپی کے روک تھام کے اثر کے صحیح مالیکیولر میکانزم کو اچھی طرح سے دریافت نہیں کیا گیا ہے۔ آخری لیکن کم از کم، ہم SLE-DAI کے ساتھ پیریفرل خون میں کیسپیس-1/PI ڈبل پازیٹو خلیوں کے تعلق اور ایک سابقہ ​​LN میں امتزاج تھراپی کے علاج سے پہلے اور بعد میں تبدیلی کا مشاہدہ کرتے ہیں۔lupusورم گردہ) مریض کا گروپ۔ بیماریوں کی سرگرمی اور علاج کے ردعمل کے لیے کیسپیس-1/PI ڈبل پازیٹو سیلز کی طبی پیشین گوئی کی قدر کو ایک بڑے ممکنہ گروہ میں مزید تفتیش کرنے کی ضرورت ہے۔

مجموعی طور پر، ہم نے شناخت کیا کہ مرکب تھراپی نے کیسپیس کو دبا کر اپنے فائدہ مند اثرات مرتب کیے ہیں-1/GSDMD-InducedpyroptosisLN میں (lupusورم گردہ)، جس نے اس میں شامل سیلولر میکانزم کے بارے میں ایک نئی بصیرت فراہم کی۔ درحقیقت، مجموعہ تھراپی نے کیسپیس-1 اظہار کو خاص طور پر اور منفرد طور پر دبایا۔ NLRP3 اور کیسپیس-1 کی فارماسولوجیکل یا جینیاتی روک تھام نے گردوں کے فنکشن کو بہتر بنایا اور LN میں خود سے قوت مدافعت کو دبایا (lupusورم گردہ)۔ ایل این (lupusورم گردہ) مزید مطالعہ کے لائق ہے، اور LN کے مریضوں میں GSDMD کو نشانہ بنانے والے علاج (lupusورم گردہ) کو بہت احتیاط سے جانچنے کی ضرورت ہے۔

کے لیے علاج کا طریقہpyroptosis

حوالہ جات

1. سکسینہ آر، مہاجن ٹی، موہن سی۔لوپسورم گردہ: Current Update.Arthritis Res Ther (2011)13:240.doi: 10.1186/ar3378

2. ایک Y، Zhang H، Liu Z. Individualizing Therapy inلوپسورم گردہ. کڈنی انٹ ریپ (2019)4:1366-72.doi: 10.1016/j.ekir.2019.08.005

3. Bao H, Liu ZH, Xie HL, Hu WX, Zhang HT, LiLS۔ کلاس پنجم اور چہارم کا کامیاب علاجلوپسورم گردہملٹی ٹارگٹ تھراپی کے ساتھ۔ J Am Soc Nephrol (2008)19:2001-10.doi: 10.1681/ASN.2007121272

4. لیو زیڈ، ژانگ ایچ، لیو زیڈ، زنگ سی، فو پی، نی زیڈ، وغیرہ کے انڈکشن ٹریٹمنٹ کے لیے ملٹی ٹارگٹ تھراپیلوپسورم گردہ: ایک بے ترتیب آزمائش، این انٹرن میڈ (2015)162:18-26۔ DOI: 10.7326/M14-1030

5. Zhang H, Liu Z, Zhou M, Liu Z, Chen J, Xing C, et al. کی بحالی کے علاج کے لئے ملٹی ٹارگٹ تھراپیلوپسورم گردہ. J Am Soc Nephrol(2017)28:3671-8.doi:10.1681/ASN.2017030263

6. Fu J, Wang Z, Lee K, Wei C, Liu Z, Zhang M, et al. ٹرانسکرپٹومک تجزیہ کے لیے مجموعہ تھراپی میں نوول Synergistic میکانزم کا انکشافلوپسورم گردہ. کڈنی انٹ(2018)93:416-29.doi: 10.1016/j.kint.2017.08.031

7. عمرینو ڈی.لوپسورم گردہ: این ایل آر پی 3 انفلاماسوم پوڈوسائٹ کی خرابی کو بھڑکاتا ہے۔ Nat Rev Rheumatol(2017)13:451.doi: 10.1038/Orpheum۔ 2017.9