ویکسینز SARS-CoV-2 Omicron ویریئنٹ کے لیے انتہائی کراس ری ایکٹیو سیلولر امیونٹی حاصل کرتی ہیں

رابطہ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ای میل:audrey.hu@wecistanche.com

Jinyan Liu1*، Abishek Chandrashekar1*، Daniel Sellers1*، Julia Barrett1، Michelle Lifton1، Katherine McMahan1، Michaela Sciacca1،

Haley VanWyk1, Cindy Wu1, Jingyou Yu1, Ai-ris Y. Collier1, Dan H. Barouch1,2*

1 بیت اسرائیل ڈیکونس میڈیکل سینٹر، بوسٹن، ایم اے، امریکہ؛

2 Ragon Institute of MGH, MIT, and Harvard, Cambridge, MA, USA

انتہائی تبدیل شدہ SARS-CoV-2 Omicron (B.1.1.529) ویریئنٹ کو موجودہ ویکسینز کے ذریعے حاصل کیے گئے اینٹی باڈی ردعمل کو بے اثر کرنے کے کافی حصے سے بچنے کے لیے دکھایا گیا ہے جو WA1/2020 Spike immunogen1 کو انکوڈ کرتے ہیں، جس کے نتیجے میں بریک تھرو انفیکشن میں اضافہ ہوتا ہے۔ اور ویکسین کی افادیت میں کمی۔ سیلولر مدافعتی ردعمل، خاص طور پر CD8 پلس T سیل ردعمل، شدید SARS-CoV-2 بیماری2-6 سے تحفظ کے لیے ممکنہ طور پر اہم ہیں۔ یہاں ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ موجودہ SARS-CoV-2 ویکسینز کی وجہ سے سیلولر امیونٹی SARS-CoV-2 Omicron ویرینٹ کے خلاف انتہائی کراس ری ایکٹیو ہے۔ Ad26.COV2.S یا BNT162b2 ویکسین حاصل کرنے والے افراد نے پائیدار سی ڈی 8 پلس اور سی ڈی 4 پلس ٹی سیل ردعمل کا مظاہرہ کیا جس میں ڈیلٹا اور اومیکرون دونوں قسموں کے خلاف وسیع رد عمل ظاہر کیا گیا، بشمول سنٹرل اور انفیکٹر میموری سیلولر ذیلی آبادیوں میں۔ میڈین اومیکرون کے لیے مخصوص CD8 پلس T سیل جوابات WA1/2020- مخصوص CD8 پلس T سیل جوابات کا 82-84 فیصد تھے۔ یہ اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ موجودہ ویکسین SARS-CoV-2 Omicron ویرینٹ کے ساتھ شدید بیماری کے خلاف کافی تحفظ فراہم کر سکتی ہیں باوجود اس کے کہ اینٹی باڈی کے ردعمل کو بے اثر کرنے میں خاطر خواہ کمی واقع ہو جاتی ہے۔

cistanche صحت ​​کے فوائد: استثنیٰ کو بہتر بنائیں

حالیہ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ ویکسین سے حاصل شدہ نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈیز (NAbs) انتہائی تبدیل شدہ SARS-CoV-2 Omicron ویرینٹ میں کافی حد تک کم ہو گئی ہیں، جس کے نتیجے میں تیزی سے عالمی پھیلاؤ، بشمول مکمل طور پر ویکسین شدہ افراد میں پیش رفت انفیکشنز1۔ SARS-CoV-2 Omicron ویرینٹ کے خلاف ویکسین سے حاصل شدہ سیلولر مدافعتی ردعمل کی کراس ری ایکٹیویٹی کا جائزہ لینے کے لیے، ہم نے 51 افراد میں CD8 پلس اور CD4 پلس T سیل ردعمل کا اندازہ کیا جنہیں ایڈینو وائرس ویکٹر پر مبنی Ad26 کے ساتھ ٹیکہ لگایا گیا تھا۔ COV2.S ویکسین7 (جانسن اینڈ جانسن؛ N=20) یا mRNA پر مبنی BNT162b2 ویکسین8 (Pfizer; N=31)۔

BNT162b2 ویکسینیشن کے بعد، ہم نے ماہ 1 میں اعلی WA1/2020-مخصوص NAb ردعمل کا مشاہدہ کیا، اس کے بعد 8 ماہ میں تیزی سے کمی آئی، جیسا کہ توقع کی گئی9,10 (تصویر 1a)۔ Ad26.COV2.S ویکسینیشن کے بعد، ماہ 1 میں WA1/2020-مخصوص NAb جوابات کافی ابتدائی طور پر کم تھے، لیکن یہ جوابات زیادہ پائیدار تھے اور مہینوں 89,11 (تصویر 1a) میں برقرار رہے۔ تاہم، دونوں ویکسینز (تصویر 1a) کے لیے کم سے کم کراس ری ایکٹیو Omicron-specific NAbs کا مشاہدہ کیا گیا، جو کہ اضافی بوسٹنگ 1 کی عدم موجودگی میں حالیہ اعداد و شمار کے مطابق ہے۔ ریسیپٹر بائنڈنگ ڈومین (RBD) مخصوص بائنڈنگ اینٹی باڈی ردعمل کا اندازہ ELISA کے ذریعے کیا گیا اور کم سے کم کراس ری ایکٹیو Omicron-specific بائنڈنگ اینٹی باڈیز (تصویر 1b) کے ساتھ ملتے جلتے رجحانات دکھائے گئے۔ اینٹی باڈی ردعمل کے برعکس، سپائیک مخصوص سیلولر مدافعتی ردعمل کا تعین کرتا ہے۔ پولڈ پیپٹائڈ IFN-g ELISPOT assays نے Omicron پر کافی حد تک رد عمل ظاہر کیا (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 1)۔ اس کے بعد ہم نے انٹرا سیلولر سائٹوکائن اسٹیننگ اسسیس کے ذریعہ اسپائک سے متعلق CD8 پلس اور CD4 پلس T سیل ردعمل کا اندازہ کیا۔ Ad26.COV2.S کی حوصلہ افزائی میڈین اسپائک مخصوص IFN-g CD8 پلس T سیل کے جوابات 0۔{41}}61 فیصد، 0۔{54}}62 فیصد، اور {{ 72}}۔ BNT162b2 نے ویکسینیشن کے بعد 8 مہینے میں WA1/2020 اور Omicron کے خلاف بالترتیب 0.028 فیصد اور 0.023 فیصد کے درمیانی سپائیک-مخصوص IFN-g CD8 پلس T سیل جوابات (تصویر 2a) کی حوصلہ افزائی کی۔ یہ اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ Omicron-specific CD8 پلس T سیل کے جوابات WA1/2020-مخصوص CD8 پلس T سیل کے جوابات کے ساتھ 82-84 فیصد کراس ری ایکٹو تھے۔ Ad26.COV2.S کے ذریعے حاصل کردہ سپائیک مخصوص IFN-g CD4 پلس T سیل جوابات بالترتیب WA1/2020، Delta، اور Omicron کے مقابلے میں 0.026 فیصد، 0.030 فیصد، اور 0.029 فیصد کے درمیان تھے، اور BNT162 کے میڈیا کے ذریعے تھے۔ WA1/2020 اور Omicron کے خلاف بالترتیب 0.033 فیصد اور 0.027 فیصد، جو کہ CD4 پلس T سیل ردعمل کے ساتھ ساتھ کافی کراس ری ایکٹیویٹی کی نشاندہی کرتا ہے (تصویر 2b)۔ Spike-specific TNF-a اور IL-2 CD8 plus اور CD4 پلس T سیل کے ردعمل (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر 2) کے لیے بھی کافی اومیکرون کراس ری ایکٹیویٹی دیکھی گئی۔

لکیری ریگریشن تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ Omicron کے مخصوص CD8 پلس T سیل کے ردعمل کا تعلق WA1/2020-کے ساتھ مخصوص CD8 پلس T سیل ردعمل Ad26.COV2.S ویکسین کے لیے دونوں ٹائم پوائنٹس (R=0.78، P<0.0001, slope="" 0.75)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.56,"><0.0001, slope="" 0.81),="" although="" two="" individuals="" had="" undetectable="" omicron-specific="" cd8+="" t="" cell="" responses="" following="" bnt162b2="" vaccination="" (fig.="" 3a).="" similarly,="" omicron-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" correlated="" with="" wa1/2020-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" for="" both="" the="" ad26.cov2.s="" vaccine="" (r="0.79,"><0.0001, slope="" 0.83)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.90,"><0.0001, slope="" 0.88)="" (fig.3b).="" spike-specific="" ifn-g="" cd8+="" and="" cd4+="" t="" cell="" central="" memory="" and="" effector="" memory="" subpopulations="" elicited="" by="" ad26.cov2.s="" also="" showed="" extensive="" cross-reactivity="" to="" delta="" and="" omicron.="" at="" month="" 8,="" cd8+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.076%,="" 0.054%,="" and="" 0.075%,="" cd8+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.168%,="" 0.143%,="" and="" 0.146%,="" cd4+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.030%,="" 0.035%,="" and="" 0.038%,="" and="" cd4+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.102%,="" 0.094%,="" and="" 0.083%,="" against="" wa1/202,="" delta,="" and="" omicron,="" respectively="" (fig.="">

ہمارا ڈیٹا ظاہر کرتا ہے کہ Ad26.COV2.S اور BNT162b2 SARS-CoV-2 مختلف حالتوں بشمول Omicron کے خلاف وسیع پیمانے پر کراس ری ایکٹیو سیلولر استثنیٰ حاصل کرتے ہیں۔ دو مختلف ویکسین پلیٹ فارم ٹیکنالوجیز (وائرل ویکٹر اور ایم آر این اے) میں ان مشاہدات کی مستقل مزاجی ان نتائج کو عام کرنے کی تجویز کرتی ہے۔ Omicron-specific CD8 plus اور CD4 پلس T سیل ردعمل کی وسیع کراس ری ایکٹیویٹی واضح طور پر کم ہونے والے Omicron-specific neutralizing اور پابند اینٹی باڈی ردعمل کے ساتھ واضح طور پر متضاد ہے۔ یہ اعداد و شمار SARS-CoV-2 الفا، بیٹا، اور گاما کی مختلف حالتوں کے خلاف مزاحیہ مدافعتی ردعمل کے مقابلے ویکسین سے حاصل کردہ سیلولر مدافعتی ردعمل کی زیادہ کراس ری ایکٹیویٹی کو ظاہر کرنے والے سابقہ ​​مطالعات سے مطابقت رکھتے ہیں۔ Omicron پر CD8 پلس T سیل کے ردعمل کی 82-84 فیصد کراس ری ایکٹیویٹی Omicron mutations6 کی بنیاد پر نظریاتی پیشین گوئیوں سے مطابقت رکھتی ہے۔

طبی مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ CD8 پلس T خلیے SARS-CoV-2 کے خلاف rhesus macaques میں تحفظ فراہم کرتے ہیں، خاص طور پر جب اینٹی باڈی کے ردعمل سب سے زیادہ 5 ہوتے ہیں۔ پائیدار CD8 پلس اور CD4 پلس T سیل ردعمل بھی انفیکشن اور ویکسینیشن کے بعد رپورٹ کیے گئے ہیں{6}},6,9,11,13,14۔ وائرل انفیکشن کے خاتمے میں CD8 پلس T خلیات کے کردار کو دیکھتے ہوئے، یہ امکان ہے کہ سیلولر قوت مدافعت شدید SARS-CoV-2 بیماری کے خلاف ویکسین کے تحفظ میں خاطر خواہ تعاون کرتی ہے۔ یہ خاص طور پر Omicron کے لیے متعلقہ ہو سکتا ہے، جو اینٹی باڈی کے ردعمل کے کافی حصے سے بچتا ہے۔ ہمارے اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ موجودہ ویکسین SARS-CoV-2 Omicron ویرینٹ کی وجہ سے اینٹی باڈی کے ردعمل کو کم کرنے اور بریک تھرو انفیکشن میں اضافے کے باوجود شدید بیماری کے خلاف خاطر خواہ تحفظ فراہم کر سکتی ہیں۔

cistanche پاؤڈر

طریقے

آبادی کا مطالعہ کریں۔

بی این ٹی 162 بی 2 ویکسین حاصل کرنے والے افراد کے نمونے بیت اسرائیل ڈیکونس میڈیکل سینٹر (BIDMC) کے نمونے بائیو ریپوزٹری سے حاصل کیے گئے تھے۔ Ad26.COV2.S حاصل کرنے والے افراد کے نمونے COV1001 مطالعہ (NCT04436276) سے حاصل کیے گئے تھے۔ دونوں مطالعات کو BIDMC ادارہ جاتی جائزہ بورڈ نے منظور کیا تھا۔ تمام شرکاء نے باخبر رضامندی فراہم کی۔ افراد کو اس مطالعے سے خارج کر دیا گیا تھا اگر ان کی SARS-CoV- 2 انفیکشن کی تاریخ تھی، دوسری COVID-19 ویکسین لی گئی تھیں یا مدافعتی ادویات حاصل کی گئی تھیں۔

SARS-CoV-2 pseudoviruses جو ایک luciferase رپورٹر جین کا اظہار کرتے ہیں ان کا استعمال pseudovirus neutralizing antibodies کی پیمائش کے لیے کیا گیا تھا۔ مختصراً، پیکیجنگ psPAX2 (ایڈز ریسورس اینڈ ریجنٹ پروگرام)، luciferase رپورٹر پلاسمڈ pLentiCMV پورو-Luc (Addgene)، اور سپائیک پروٹین کا اظہار کرنے والا pcDNA3 بناتی ہے۔{6}SARS-CoV-2 SΔCT شریک تھے۔ لیپوفیکٹامین 2000 (تھرمو فشر سائنٹیفک) کے ساتھ HEK293T خلیات (ATCC CRL_3216) میں منتقل ہوا۔ SARS-CoV-2 متغیرات کے سیوڈو وائرس WA1/2020 سٹرین (Wuhan/WIV04/2019، GISAID الحاق ID: EPI_ISL_402124)، B.1.1.7 ویرینٹ کا استعمال کرتے ہوئے بنائے گئے تھے۔ (الفا، GISAID الحاق ID: EPI_ISL_601443)، B.1.351 متغیر (بیٹا، GISAID الحاق ID: EPI_ISL_712096)، B.1.617۔ 2 (ڈیلٹا، GISAID الحاق ID: EPI_ISL_2020950)، یا B.1.1.529 (Omicron، GISAID ID: EPI_ISL_7358094.2)۔ سیوڈوٹائپ وائرس پر مشتمل سپرنٹینٹس کو منتقلی کے 48 گھنٹے بعد جمع کیا گیا تھا۔ سیوڈوٹائپ وائرس کو 045-μm فلٹر کے ساتھ فلٹریشن کے ذریعے صاف کیا گیا تھا۔ انسانی سیرم کی نیوٹرلائزیشن سرگرمی کا تعین کرنے کے لیے، HEK293T-hACE2 خلیات کو رات بھر 1.75 × 104 خلیات کی کثافت پر 96-کنویں ٹشو کلچر پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا۔ گرمی سے غیر فعال سیرم کے نمونوں کے تین گنا سیریل ڈائیوشنز تیار کیے گئے اور 50 ul سیوڈو وائرس کے ساتھ ملا دیے گئے۔ مرکب کو HEK293T-hACE2 خلیوں میں شامل کرنے سے پہلے 1 گھنٹہ کے لئے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ 48 گھنٹے کے بعد، کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق سٹیڈی-گلو لوسیفریز آسے (پرومیگا) میں سیلز کیے گئے۔ SARS-CoV-2 نیوٹرلائزیشن ٹائٹرز کو نمونے کی کمزوری کے طور پر بیان کیا گیا تھا جس پر وائرس کنٹرول کنوؤں کی اوسط کے مقابلے میں متعلقہ روشنی کی اکائیوں میں 50 فیصد کمی (NT50) دیکھی گئی۔

انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ (ELISA)

SARS-CoV-2 سپائیک ریسیپٹر بائنڈنگ ڈومین (RBD) سیرم میں مخصوص بائنڈنگ اینٹی باڈیز کا اندازہ ELISA نے کیا۔ 96-کنویں کی پلیٹوں کو SARS-CoV کے 2 ug/mL کے ساتھ لیپت کیا گیا تھا-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta), B.1.351 (بیٹا)، یا B.1.1.529 (Omicron) RBD پروٹین 1× Dulbecco فاسفیٹ بفرڈ نمکین (DPBS) میں اور رات بھر 4 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔ انکیوبیشن کے بعد، پلیٹوں کو ایک بار واش بفر (0.05 فیصد ٹوین 20 in 1×DPBS) سے دھویا گیا اور کمرے کے درجہ حرارت پر 2 سے 3 گھنٹے کے لیے فی کنواں 350 μL کیسین بلاک محلول کے ساتھ بلاک کر دیا گیا۔ انکیوبیشن کے بعد، بلاک محلول کو ضائع کر دیا گیا اور پلیٹوں کو خشک کر دیا گیا۔ کیسین بلاک میں گھلائے گئے ہیٹ ان ایکٹیویٹیڈ سیرم کے سیریل ڈائیوشنز کو کنوؤں میں شامل کیا گیا تھا، اور پلیٹوں کو کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹے کے لیے انکیوبیشن کیا گیا تھا، اس سے پہلے کہ 3 مزید دھونے اور 1-گھنٹہ انکیوبیشن کے ساتھ 1:4000 اینٹی انکیوبیشن انسانی IgG ہارسریڈش پیرو آکسیڈیس (HRP) (انویٹروجن، تھرمو فشر سائنٹیفک) اندھیرے میں کمرے کے درجہ حرارت پر۔ پلیٹوں کو 3 بار دھویا گیا، اور ہر کنویں میں 100 μL SeraCare KPL TMB SureBlue Start سلوشن شامل کیا گیا۔ 100 μL SeraCare KPL TMB Stop سلوشن فی کنواں شامل کر کے پلیٹ کی ترقی کو روک دیا گیا۔ 450 nm پر جذب، 650 nm کے حوالہ کے ساتھ، ورسا میکس مائیکرو پلیٹ ریڈر (سالماتی آلات) کے ساتھ ریکارڈ کیا گیا۔ ہر ایک نمونے کے لیے، ELISA اینڈ پوائنٹ ٹائٹر کا حساب ایک 4-پیرامیٹر لاجسٹک کریو فٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تاکہ باہم سیرم ڈیلیشن کا حساب لگایا جا سکے جس سے 0.2 کی درست جاذب قدر (450 nm-650 nm) حاصل ہوتی ہے۔ انٹرپولیٹڈ اینڈ پوائنٹ ٹائٹرز کی اطلاع دی گئی۔

cistanche deserticola اقتباس: استثنیٰ کو بہتر بنائیں

انزائم سے منسلک امیونو سپاٹ (ELISPOT) پرکھ۔

ELISPOT پلیٹوں کو MabTech سے 1 µg/well پر ماؤس اینٹی ہیومن IFN- مونوکلونل اینٹی باڈی کے ساتھ لیپت کیا گیا تھا اور رات بھر 4 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ پلیٹوں کو DPBS کے ساتھ دھویا گیا تھا اور R10 میڈیا (RPMI 10 فیصد حرارت سے غیر فعال FBS کے ساتھ 100x پینسلن-اسٹریپٹومائسن، 1M HEPES، 100mM سوڈیم پائروویٹ، 200mM L-glutamine، اور 05M فیصد کے ساتھ بلاک کیا گیا تھا۔ 2-Mercaptoethanol) 37 ڈگری پر 2-4 گھنٹے کے لیے۔ SARS-CoV-2 نے SARS-CoV-2 WA1/2020، B.1.617.2 (Delta)، یا B.1.1.529 (Omicron) (21ویں صدی کے بائیو کیمیکل) سے S peptides کو تیار کیا اور 2 µg/کنویں کے ارتکاز پر چڑھایا گیا، اور 100،000 سیل/کنویں پلیٹ میں شامل کیے گئے۔ پیپٹائڈس اور خلیات کو 37 ڈگری پر 15-20 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ اس انکیوبیشن کے بعد تمام اقدامات کمرے کے درجہ حرارت پر کیے گئے تھے۔ پلیٹوں کو ELISPOT واش بفر سے دھویا گیا اور MabTech (1 µg/mL) سے بایوٹینیلیٹڈ ماؤس اینٹی ہیومن IFN- مونوکلونل اینٹی باڈی کے ساتھ 2-4 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ پلیٹوں کو دوسری بار دھویا گیا اور Rockland, Inc. (1.33 µg/mL) کے کنجوگیٹڈ گوٹ اینٹی بایوٹین اے پی کے ساتھ 2-3 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ فائنل واش کے بعد نائٹر بلیو ٹیٹرازولیئم کلورائیڈ/5-برومو-4-کلورو 3 'انڈولائل فاسفیٹ پی-ٹولوائڈائن نمک (NBT/BCIP کروماجن) سبسٹریٹ محلول کو 7 منٹ کے لیے شامل کیا گیا۔ کرومیجن کو ضائع کر دیا گیا اور پلیٹوں کو پانی سے دھو کر 24 گھنٹے کے لیے مدھم جگہ پر خشک کر دیا گیا۔ پلیٹوں کو سکین کیا گیا اور سیلولر ٹیکنالوجیز لمیٹڈ امیونو سپاٹ تجزیہ کار پر شمار کیا گیا۔

انٹرا سیلولر سائٹوکائن سٹیننگ (ICS) پرکھ

سی ڈی 4 پلس اور سی ڈی 8 پلس ٹی سیل کے ردعمل کو پولڈ پیپٹائڈ محرک انٹرا سیلولر سائٹوکائن اسٹیننگ (ICS) اسسیس کے ذریعہ مقدار میں طے کیا گیا تھا۔ پیپٹائڈ پولز میں 15 امینو ایسڈ پیپٹائڈز ہوتے ہیں جو SARS-CoV-2 WA1/2020، B.1.617.2 (Delta)، یا B.1.1 پر پھیلے ہوئے 11 امینو ایسڈز سے اوورلیپ ہوتے ہیں۔ .529 (Omicron) سپائیک پروٹین (21ویں صدی کے بایو کیمیکلز)۔ 106 پیریفرل بلڈ مونو نیوکلیئر سیلز کو 100 µL R10 میڈیا میں CD49d مونوکلونل اینٹی باڈی (1 µg/mL) اور CD28 مونوکلونل اینٹی باڈی (1 µg/mL) کے ساتھ دوبارہ معطل کیا گیا تھا۔ ہر نمونے کا اندازہ فرضی (R10 کا 100 µL پلس 0.5 فیصد DMSO؛ بیک گراؤنڈ کنٹرول)، پیپٹائڈس (2 µg/mL)، اور/یا 10 pg/mL فوربول مائرسٹیٹ ایسیٹیٹ (PMA) اور 1 µg/ml ionomycin (Sigma-) سے کیا گیا تھا۔ Aldrich) (100µL؛ مثبت کنٹرول) اور 1 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ انکیوبیشن کے بعد، R10 کے 50 µL میں گولگی اسٹاپ کا 0.25 µL اور گولگی پلگ کا 0.25 µL ہر کنویں میں شامل کیا گیا اور 37 ڈگری پر 8 گھنٹے تک انکیوبیشن کیا گیا اور پھر رات بھر 4 ڈگری پر رکھا گیا۔ اگلے دن، خلیات کو DPBS سے دو بار دھویا گیا، 10 منٹ تک ایکوا لائیو/ڈیڈ ڈائی سے داغ دیا گیا اور پھر CD279 (کلون EH12.1، BB700)، CD4 (کلون L200، BV711) کے خلاف مونوکلونل اینٹی باڈیز کے پہلے سے طے شدہ ٹائٹرز سے داغ دیا گیا۔ CD27 (کلون M-T271, BUV563), CD8 (clone SK1, BUV805), CD45RA (clone 5H9, APC H7) 30 منٹ کے لیے۔ اس کے بعد سیلز کو 2 فیصد FBS/DPBS بفر کے ساتھ دو بار دھویا گیا اور BD CytoFix/CytoPerm Fixation/Permeabilization سلوشن کے 200 µL کے ساتھ 15 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ سیلز کو 1X پرم واش بفر (BD Perm/WashTM Buffer 10X CytoFix/CytoPerm Fixation/ Permeabilization kit میں ملی کیو پانی سے ملا کر 0.22µm فلٹر سے گزر کر) کے ساتھ دو بار دھویا گیا اور انٹرا سیلولر کے ساتھ داغ دیا گیا (monoclonebo-7 کے خلاف anticlonebodies; BUV395)، اور CD3 (کلون SP34.2، Alexa 700)، 30 منٹ کے لیے۔ خلیوں کو 1X پرم واش بفر کے ساتھ دو بار دھویا گیا اور 250µL تازہ تیار کردہ 1.5 فیصد فارملڈہائڈ کے ساتھ فکس کیا گیا۔ فکسڈ سیلز کو ایک 96-کنویں گول نیچے پلیٹ میں منتقل کیا گیا اور BD FACSymphony™ سسٹم کے ذریعے تجزیہ کیا گیا۔ FlowJo v9.9 کا استعمال کرتے ہوئے ڈیٹا کا تجزیہ کیا گیا۔

cistanche ضمیمہ:قوت مدافعت کو بہتر بنائیں

حوالہ جات

1. Cele S, Jackson L, Khan K, et al. SARS-CoV-2 Omicron کے پاس Pfizer BNT162b2 کا وسیع لیکن نامکمل فرار ہے اور اسے انفیکشن کے لیے ACE2 کی ضرورت ہے۔ medRxiv 2021۔

2. ڈین JM، Mateus J، Kato Y، et al. SARS-CoV-2 کی امیونولوجیکل میموری کا اندازہ انفیکشن کے بعد 8 ماہ تک ہوتا ہے۔ سائنس 2021؛ 371۔

3. سیٹ A، Crotty S. SARS-CoV-2 اور COVID-19 کے لیے اڈاپٹیو استثنیٰ۔ سیل 2021؛184:861-80۔

4. گوئل آر آر، پینٹر ایم ایم، اپوسٹولیڈیس ایس اے، وغیرہ۔ mRNA ویکسینز SARS-CoV-2 اور تشویش کی مختلف حالتوں میں پائیدار مدافعتی یادداشت پیدا کرتی ہیں۔ سائنس 2021؛ 374: abm0829۔

5. McMahan K, Yu J, Mercado NB, et al. ریسس میکاک میں SARS-CoV-2 کے خلاف تحفظ کا باہمی تعلق۔ فطرت 2021؛590:630-4۔

6. Grifoni A، Weiskopf D، Ramirez SI، et al. SARS-CoV-2 کووڈ-19 بیماری والے انسانوں میں کورونا وائرس اور بے نقاب افراد کے لیے T سیل کے جوابات کے اہداف۔ سیل 2020؛181:1489-501 e15۔

7. Sadoff J، گرے G، Vandebosch A، et al. Covid-19 کے خلاف سنگل ڈوز Ad26.COV2.S ویکسین کی حفاظت اور افادیت۔ این انگل جے میڈ 2021؛ 384:2187-201۔

8. پولاک ایف پی، تھامس ایس جے، کیچن این، وغیرہ۔ BNT162b2 mRNA Covid-19 ویکسین کی حفاظت اور افادیت۔ این انگل جے میڈ 2020۔

9. کولیر اے وائی، یو جے، میک میہن کے، وغیرہ۔ Covid-19 ویکسینز کے ذریعے حاصل کردہ مدافعتی ردعمل کے مختلف حرکیات۔ این انگل جے میڈ 2021؛ 385:2010-2۔

10. Falsey AR, Frenck RW, Jr., Walsh EE, et al. SARS-CoV-2 BNT162b2 ویکسین کی خوراک کے ساتھ نیوٹرلائزیشن 3. N Engl J Med 2021۔

11. Barouch DH، Stephenson KE، Sadoff J، et al. Ad26.COV2.S ویکسینیشن کے 8 ماہ بعد پائیدار مزاحیہ اور سیلولر مدافعتی ردعمل۔ این انگل جے میڈ 2021؛ 385:951-3۔

12. الٹر جی، یو جے، لیو جے، وغیرہ۔ انسانوں میں SARS- CoV-2 مختلف حالتوں کے خلاف Ad26.COV2.S ویکسین کی مدافعتی صلاحیت۔ فطرت 2021؛596:268-72۔

13. Poon MML، Rybkina K، Kato Y، et al. SARS-CoV-2 انفیکشن انسانوں میں ٹشو لوکلائزڈ امیونولوجیکل میموری پیدا کرتا ہے۔ سائنس امیونولوجی 2021؛ 6: eabl9105۔

14. Vidal SJ، Collier AY، Yu J، et al. ابتدائی وبائی سیرا کے ذریعہ SARS-CoV کے خلاف غیرجانبداری کے باہمی تعلق-2 تشویش کی مختلف حالتیں۔ J Virol 2021;95:e0040421۔

cistanche سپلیمنٹ کا فائدہ:قوت مدافعت کو بہتر بنائیں