مکمل ٹرانسکرپٹوم تجزیہ سیپسس کے ساتھ شدید بیمار بزرگ مریضوں میں خراب مدافعتی خصوصیات کو دریافت کرنے کے لئے

خلاصہ

پس منظر

شدید بیمار مریضوں میں سیپسس ایک متواتر پیچیدگی ہے، انتہائی متفاوت ہے، اور اس کا تعلق اعلی بیماری اور اموات کی شرح سے ہے، خاص طور پر بزرگ آبادی میں۔ حیاتیاتی راستوں کا تجزیہ کرنے کے لیے آر این اے سیکوینسنگ (RNA-Seq) کا استعمال کلینیکل اور مالیکیولر جینیاتی مطالعات میں بڑے پیمانے پر استعمال ہوتا ہے، لیکن سیپسس کے بوڑھے مریضوں میں مطالعہ کا ابھی بھی فقدان ہے۔ لہذا، ہم نے بزرگ مریضوں میں اموات سے متعلقہ حیاتیاتی خصوصیات اور ٹرانسکرپٹومک خصوصیات کی چھان بین کی جنہیں سیپسس کے لیے انتہائی نگہداشت کے یونٹ (ICU) میں داخل کیا گیا تھا۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا

طریقے

ہم نے تائیچنگ ویٹرنز جنرل ہسپتال میں ICU سے سیپسس والے 37 بزرگ مریضوں کا اندراج کیا۔ دن 1 اور دن 8 پر، کلینیکل اور لیبارٹری ڈیٹا کے ساتھ ساتھ خون کے نمونے RNA-Seq تجزیہ کے لیے جمع کیے گئے۔ ہم نے DVID افزودگی تجزیہ اور جین سیٹ افزودگی تجزیہ کے ذریعے دن 8 اور دن 1 کے درمیان مختلف انداز میں اظہار شدہ جینوں کے متحرک ٹرانسکروم اور افزودہ راستوں کی نشاندہی کی۔ پھر، ٹی سیل کے ذخیرے کے تنوع کا MiXCR کے ساتھ تجزیہ کیا گیا۔

نتائج

مجموعی طور پر، 37 مریضوں کو سیپسس تھا، اور جواب دہندگان اور غیر جواب دہندگان کو پرنسپل جزو تجزیہ کے ذریعے گروپ کیا گیا تھا۔ 7 ویں دن، لمبے وینٹی لیٹر دن، ICU میں قیام کی مدت، اور ہسپتال میں ہونے والی اموات، جواب دہندگان کے گروپ کے مقابلے میں، غیر جواب نہ دینے والے گروپ میں نمایاں طور پر زیادہ SOFA اسکورز پائے گئے۔ سیپسس والے بزرگ ICU مریضوں میں آٹھویں دن، پیدائشی قوت مدافعت اور سوزش سے متعلق جینز، جیسے ZDHCC19، ALOX15، FCER1A، HDC، PRSS33، اور PCSK9، کو الگ کر دیا گیا تھا۔ امتیازی طور پر ظاہر کیے گئے جین (DEGs) کو نقل کے ضابطے، انکولی مدافعتی ردعمل، امیونوگلوبلین کی پیداوار، نقل کے منفی ضابطے، اور مدافعتی ردعمل میں افزودہ کیا گیا تھا۔ مزید یہ کہ، جواب دہندہ گروپ میں ٹی سیل ریسیپٹرز کا دن کے مقابلے میں زیادہ تنوع تھا .

نتیجہ

سیپسس کی اموات اور واقعات دونوں بزرگ افراد میں زیادہ تھے۔ ہم نے RNA-Seq ڈیٹا کی بنیاد پر فنکشنل پاتھ وے اور MiXCR تجزیوں کے ساتھ شرح اموات سے متعلقہ حیاتیاتی خصوصیات اور ٹرانسکرپٹومک خصوصیات کی نشاندہی کی۔ اور پایا کہ جواب دہندہ گروپ نے فطری قوت مدافعت کو بڑھا دیا ہے اور ٹی سیل تنوع میں اضافہ کیا ہے۔ جواب نہ دینے والے گروپ کے مقابلے۔ RNA-Seq علاج کے نتائج کی درست اور ابتدائی پیشین گوئی کے لیے اضافی اضافی معلومات پیش کرنے کے قابل ہو سکتا ہے۔

cistanche پلانٹ میں مدافعتی نظام میں اضافہ

مطلوبہ الفاظ

سیپسس، RNA-Seq، بزرگ ICU مریض، مختلف جینز، T-cell ریسیپٹر

تعارف

سیپسس ایک طبی سنڈروم ہے جو ممکنہ طور پر جان لیوا ہے۔ یہ انفیکشن کے خلاف میزبان کے بے ترتیب ردعمل سے پیدا ہوتا ہے اور یہ ایک انتہائی متفاوت اور مہلک عالمی صحت کا خطرہ ہے، خاص طور پر عمر رسیدہ آبادی میں [1، 2]۔ پچھلے مطالعات سے پتہ چلا ہے کہ بوڑھے مریضوں کو سیپسس کا زیادہ خطرہ ہوتا ہے اور ان میں بیماری کی شدت عام آبادی کے مقابلے زیادہ ہوتی ہے [3]۔ بوڑھے مریضوں کی تعداد جنہیں سیپسس کی وجہ سے انتہائی نگہداشت یونٹ (ICU) میں داخل کیا جاتا ہے گزشتہ دو دہائیوں میں بوڑھے افراد کی تعداد میں مسلسل اضافے کی وجہ سے مسلسل بڑھ رہی ہے [4]۔ خاص طور پر، دیکھ بھال کی زیادہ شدت کے باوجود، ICU میں داخل عمر رسیدہ مریضوں میں شرح اموات زیادہ رہتی ہے، لیکن سیپسس کے بوڑھے مریضوں میں علاج کے ردعمل سے متعلق حیاتیاتی راستوں کو حل کرنے والے مطالعات میں ابھی بھی کمی ہے [5]۔ عمر رسیدہ افراد کا مدافعتی نظام ان کی عمر کے ساتھ ساتھ متعدد حیاتیاتی تبدیلیوں سے گزرتا ہے، جو بزرگوں کے مدافعتی ردعمل کو متاثر کرتے ہیں، جس کے نتیجے میں مدافعتی نظام میں کمی کے امکانات بڑھ جاتے ہیں [6]۔ سمجھوتہ شدہ انکولی استثنیٰ کو بوڑھوں میں مدافعتی قوت کی ایک اہم خصوصیت سمجھا جاتا ہے [7، 8]، لیکن بوڑھوں میں سیپسس کے دوران ٹرانسکرپٹومک خصوصیات کی تلاش نہیں کی جاتی ہے۔ یہ تبدیلیاں نہ صرف بیکٹیریل انفیکشن کے لیے حساسیت کا تعین کرتی ہیں بلکہ سیپسس بڑھنے اور طبی نتائج کا بھی تعین کرتی ہیں [6]۔ لہذا، ICU [9، 10] میں داخل بزرگ مریضوں میں مختلف مدافعتی ردعمل اور شرح اموات سے متعلقہ حیاتیاتی خصوصیات کی چھان بین کرنا بہت ضروری ہے۔

سیپسس انتہائی متضاد ہے اور پیچیدہ اور متحرک امیونولوجک رد عمل کی خصوصیت ہے، جس میں ابتدائی ضرورت سے زیادہ اشتعال انگیز ردعمل شامل ہوتا ہے جس کے بعد غیر منظم/ختم شدہ انکولی قوت مدافعت ہوتی ہے [11]۔ کئی مطالعات نے سیپسس کے بعد بدلی ہوئی انکولی قوت مدافعت کو ظاہر کیا ہے۔ نام نہاد امیونوپرالیسس کلیدی امیونولوجیکل خصوصیات میں سے ایک معلوم ہوتا ہے جو سیپسس کے مریضوں میں مستقل سمجھوتہ شدہ قوت مدافعت کا باعث بنتا ہے [12]۔ RNA-Seq کو پچھلے مطالعات میں سیپسس کے مریضوں میں ٹرانسکرپٹومک دستخط، یا "سبینڈوٹائپ" تلاش کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ سیپسس کے ساتھ منسلک ذیلی جین ٹائپس سیپسس کے بعد اعضاء کی خرابی کی ابتدائی بہتری، امیونوکمپرومائزڈ مریضوں میں انکولی قوت مدافعت میں کمی، اور سیپٹک صدمے کے مریضوں میں سٹیرائڈز کے لیے ردعمل [13، 14] ہیں۔ RNA-Seq ڈیٹا کا استعمال کرتے ہوئے، تجزیاتی ٹولز، جیسے MiXCR، کو حال ہی میں T-cell ریسیپٹرز (TCRs) کے تنوع کو درست کرنے کے لیے تیار کیا گیا ہے [15, 16]۔ اس مطالعے میں، ہم نے دن 1 اور دن 8 سے جوڑ بنائے ہوئے نمونوں کی جانچ کرکے سیپٹک مریضوں کے متحرک ٹرانسکروم کی تحقیقات کیں اور پایا کہ امیونوکمپرومائزڈ سیپٹک مریضوں نے ٹی سیل کے تنوع میں کمی کی ہے اور ٹی سیل فنکشن سے سمجھوتہ کیا ہے۔ اس مطالعہ کا مقصد اموات سے متعلقہ حیاتیاتی خصوصیات اور ٹرانسکرپٹومک خصوصیات کو دریافت کرنا تھا، تاکہ ان بزرگ مریضوں میں انکولی قوت مدافعت سے وابستہ سگنلنگ کی بہتر تفہیم حاصل کی جا سکے جنہیں سیپسس کے لیے ICU میں داخل کیا گیا تھا۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا

Cistanche Enhance Immunity مصنوعات دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

مواد اور طریقے مطالعہ ڈیزائن اور ڈیٹا اکٹھا کرنا

مطالعہ کو TCVGH (IRB نمبر CE20069B) کے ادارہ جاتی جائزہ بورڈ نے منظور کیا، اور تمام شرکاء سے باخبر رضامندی حاصل کی گئی۔ تائیچنگ ویٹرنز جنرل ہسپتال (TCVGH) سے دسمبر 2018 سے جنوری 2022 تک سینتیس بزرگ ICU مریضوں کو بھرتی کیا گیا تھا۔ اندراج کے وقت، آبادیاتی معلومات اکٹھی کی گئی تھیں، اور پہلے اور آٹھویں دن خون کے بنیادی نمونے لیے گئے تھے۔ ٹرانسکرپٹوم، جراثیم سے پاک EDTA ویکیٹینرز میں خون کے دو 4 ملی لیٹر ایلی کوٹس جمع کیے گئے اور فوری طور پر 10.5 ملی لیٹر RNAlater® (TermoFisher, Waltham, MA, USA) پر مشتمل RNAse فری شیشیوں میں منتقل کیا گیا۔

آر این اے نکالنا اور ترتیب دینا

اس مطالعہ میں، ہم نے PAXgene Blood RNA Kit کے ساتھ RNA نکالا، اور اوسط RNA انٹیگریٹی نمبر (RIN) 8.31±0.58 تھا۔ لائبریری کی تعمیر کے دوران مینوفیکچرر کی ہدایات پر عمل کیا گیا، اور بعد کے تجربات میں 1،000 ٹکڑا RNA استعمال کیا گیا۔ RNA-Seq کے لیے NovaSeq پلیٹ فارم (Illumina, Inc., San Diego, CA, United States) پر بی پی پیئرڈ اینڈ ریڈز استعمال کیے گئے تھے اور ہر نمونے کی کم از کم 50-60 ملین ریڈز تھیں۔ RNA-seq ڈیٹاسیٹ کو الحاق نمبر GSE216902 کے تحت نیشنل سینٹر فار بائیو ٹیکنالوجی انفارمیشن (NCBI) Gene Expression Omnibus (GEO) میں جمع کیا گیا تھا۔ ڈیٹاسیٹ کو سیل کے تناسب اور راستے کے تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

ترتیب وار اعضاء کی ناکامی کی تشخیص (SOFA) سکور

سیکوینشل آرگن فیلیئر اسسمنٹ (SOFA) سکور سیپسس سے متعلقہ اعضاء کی ناکامی کی ایک عددی قدر ہے، یعنی یہ ناکام اعضاء کی تعداد اور شدت کا تعین کرتا ہے۔ ہر اسکور کی رینج 0 سے 4 تک ہوتی ہے، جس میں زیادہ اسکور ہوتا ہے جو اعضاء کی خرابی کو ظاہر کرتا ہے [17]۔ ہم نے جواب دہندگان (R) اور غیر جواب دہندگان (NR) کی وضاحت کرنے کے لئے SOFA سکور میں متحرک تبدیلی کا استعمال کیا، اور ایک شریک کو NR کے طور پر درجہ بندی کیا گیا تھا اگر دن 1 سے 7 ویں دن SOFA سکور میں کمی 2 سے کم تھی [13, 18, 19] .

RNA-Seq ڈیٹا کا بائیو انفارمیٹکس تجزیہ کرتا ہے۔ 

ترتیب اعلیٰ معیار کی تھی، 30 کے فریڈ اسکور استعمال کیے گئے تھے، اور HISAT2 نے حوالہ جینوم (GRCh38/hg38) [20] کے ساتھ ترتیب پڑھنے کو میپ کیا۔ آر پیکج DEseq2 [21] کا استعمال امتیازی طور پر اظہار کردہ جین (DEGs) کی شناخت کے لیے کیا گیا تھا، اور پڑھنے کی گنتی کو فیچر کاؤنٹ [22] کا استعمال کرتے ہوئے شمار کیا گیا تھا۔ اوسط نقشہ سازی کی شرح اور پڑھنے کی تعداد بالترتیب 87.6±4.8% اور 65.5±17.6 ملین پڑھی گئی۔ پروفائلر [23] آر پیکج کو جینومس (KEGG، https://www.genome.jp/kegg/) اور جین اونٹولوجی (GO، http://geneontology.org) پر مبنی فنکشنل افزودگی اور راستے کا تجزیہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ /) ڈیٹا بیس۔ 0.05 سے کم کی درست شدہ پی ویلیو کو نمایاں طور پر افزودہ سمجھا جاتا تھا۔ جین سیٹ افزودگی تجزیہ (GSEA) [24] کا استعمال کرتے ہوئے تمام تفریق ظاہر کیے گئے جینوں کو فعال طور پر بیان کیا گیا تھا، اور ایک Cytoscape 3.9.0 [25] بصری افزودگی کا نقشہ بنایا گیا تھا۔ ہم نے ایک افزودگی کا نقشہ استعمال کرکے GSEA کے نتائج کا تصور کیا، جو جین سیٹوں کو ایک مماثلت والے نیٹ ورک میں ترتیب دیتا ہے۔ نوڈ، لنک اور نوڈ کا رنگ بالترتیب جین سیٹ، ممبر جینز کے اوورلیپ اور افزودگی سکور [24] کی نمائندگی کرتے ہیں۔

TCR تجزیہ کا تنوع

RNA-Seq ڈیٹا کا استعمال MiXCR v3 میں کیا گیا تھا۔ VDJTools v 1.2.1 [26] سافٹ ویئر کو مقداری کلون ٹائپس کے حصول کے بعد تکمیلی تعین کرنے والے خطے-3 (CDR3) اور نمونے کے تنوع کی گنتی کے لیے استعمال کیا گیا۔

شماریاتی تجزیہ

ہم نے معمول کو جانچنے کے لیے کولموگوروف – سمرنوف ٹیسٹ کا استعمال کیا اور پایا کہ کئی متغیرات کی تقسیم، بشمول وینٹی لیٹر ڈے، آئی سی یو میں قیام کی طوالت، اور ہسپتال میں قیام کی لمبائی، بائیں جانب ترچھی تھی۔ ڈیٹا کو یونیفائیڈ فارمیٹ میں پیش کرنے کے لیے، ہم نے زمرہ واری ایبلز کی فریکوئنسی (فیصد) کو زمرہ واری ایبلز اور مسلسل متغیرات کو بطور میڈین (انٹرکوارٹائل رینج، IQR) پیش کیا۔ مسلسل متغیرات کے لیے مان – وٹنی یو ٹیسٹ اور متغیر متغیرات کے لیے فشر کے عین مطابق ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے دونوں گروہوں کے درمیان اختلافات کا تجزیہ کیا گیا۔ اہمیت کی سطح 0 پر سیٹ کی گئی تھی۔{6}}5، اور شماریاتی تجزیے دو طرفہ تھے۔ R ورژن 4.1.0 ڈیٹا کے تمام تجزیوں کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا

نتائج مریض کی خصوصیات اور SOFA سکور

اس مطالعہ میں، ہم نے سیپسس کے ساتھ 37 بزرگ مریضوں کا اندراج کیا [درمیانی عمر 83 سال (IQR: 79–87 سال)] (ٹیبل 1)۔ پرنسپل اجزاء کے تجزیے کے ساتھ، ہم نے مشاہدہ کیا کہ دن-1 اور دن-8 کے درمیان فرق جوابی مریضوں (جواب دینے والے گروپ، R) میں غیر ذمہ دار مریضوں (غیر جوابی گروپ، NR) کی نسبت بہتر تھا۔ امیونوکمپیٹنٹ گروپ میں سیپسس سے ریگولیٹڈ ریکوری کا اشارہ (اضافی فائل 1: تصویر S1)۔ مجموعی طور پر، 37 مریضوں میں، 23 ردعمل والے مریض (جواب دینے والے گروپ، R) تھے جن کی اوسط عمر 82 سال تھی (IQR: 79.5–86.5 سال) اور 14 غیر ذمہ دار مریض (نان ریسپانس گروپ، NR) تھے۔ اوسط عمر 84 سال (IQR: 79–88 سال)۔ جدول 1 اسٹڈی گروپ کی بنیادی خصوصیات کو ظاہر کرتا ہے۔ اعلی البومن (میڈین 3.3 mg/dl، IQR: 3–3.7 mg/dl) اور کم C-reactive پروٹین (میڈین 9.16 mg/dl، IQR: 3.9–17.5 mg/dl) ان کے ہم منصبوں کی نسبت علاج میں دیکھے گئے۔ جواب دہندگان کے گروپ کے مقابلے میں، جواب نہ دینے والے گروپ کے 7ویں دن، طویل وینٹی لیٹر دن، طویل ICU میں قیام، اور ہسپتال میں اموات کی شرح میں نمایاں طور پر زیادہ تھے۔

سیپسس والے بزرگ ICU مریضوں میں الگ متحرک ٹرانسکرپٹوم

جیسا کہ تصویر 1A میں واضح کیا گیا ہے، تمام نمونوں میں سے سرفہرست 500 متغیر جینوں پر پرنسپل اجزاء کے تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے، ہم نے دریافت کیا کہ انتہائی نگہداشت کے یونٹ میں بزرگ سیپسس کے مریضوں میں دن 1 اور دن 8 میں نمایاں طور پر مختلف ٹرانسکرپٹوم تھے۔ ڈی ای جیز) کی شناخت پھر دن 8 اور دن 1 کے درمیان جین ایکسپریشن پروفائلز کا موازنہ کرکے بزرگ ICU مریضوں میں پی کے معیار کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی۔<0.01 and log fold change>0.25 یا<− 0.25. Tree DEGs (two upregulated and one downregulated gene) were found in the R group, while the NR group only had 11 DEGs (five upregulated and six downregulated genes). We found that in elderly sepsis patients in the ICU, the top upregulated genes were innate immunity- and inflammation-relevant genes, namely, ZDHCC19, ALOX15, FCER1A, HDC, PRSS33, and PCSK9, which bind to low-density lipoprotein receptors (LDLRs), leading to LDLR degradation and increasing LDL cholesterol levels (Fig. 1B). 

DAVID متحرک ٹرانسکرپٹوم کی افزودگی کا تجزیہ

دن 8 اور دن 1 کے درمیان عمر رسیدہ ICU مریضوں میں حیاتیاتی راستے کی تبدیلی کو ظاہر کرنے کے لیے، ہم نے آن لائن DAVID v6.8 سرور کا استعمال کرتے ہوئے افزودہ راستے کا مظاہرہ کیا۔ جیسا کہ تصویر 2 میں دکھایا گیا ہے، ڈیٹاسیٹ سے سرفہرست 20 DEGs کے حیاتیاتی عمل کے لیے جین اونٹولوجی (GO) بلبلا پلاٹ بنائے گئے تھے۔ ہم نے پایا کہ سیپسس کے ساتھ بزرگ ICU مریضوں کے DEGs نقل کے ضابطے، انکولی مدافعتی ردعمل، امیونوگلوبلین کی پیداوار، نقل کے منفی ضابطے، اور مدافعتی ردعمل میں افزودہ تھے۔ DAVID فنکشنل GO تجزیہ تصویر 3 میں پیش کیا گیا ہے۔ جب کنٹرولز سے موازنہ کیا جائے تو DEGs میں جینز کے ذریعے انکوڈ شدہ پروٹینز کی فنکشنل تشریحات نمایاں طور پر ظاہر ہوئیں (P<0.05) increased or decreased enrichment. These annotations were categorized according to biological processes, cellular components, and molecular functions. There were significant differences between DEG-encoded proteins involved in the regulation of transcription, the immune response, protein phosphorylation, and Ras protein signal transduction at the level of biological processes (Fig. 3), whereas cellular component analysis revealed significant differences between the T-cell receptor complex, cytosol nucleoplasm, and nucleus (Fig. 3). Significant differences were found in the enrichment of encoded proteins associated with protein binding, metal ion binding, translation factor activity, or transcriptional activator activity according to molecular function analysis (Fig. 3). Ten, we used the Cytoscape ClueGO plugin to investigate the functional enrichment of the DEGs in the dataset to further refine the biological process from the analysis of DAVID-GO terms [27]. Additionally, the REACTOME pathway analysis from ClueGO revealed that cytokine signaling in the immune system, adaptive immune system, sensory perception, innate immune system, and immunoregulatory interactions between lymphoid and non-lymphoid cells were significantly enriched in many DEGs.

جدول 1 سیپسس والے بزرگ ICU مریضوں کی خصوصیات

تصویر 1 دن-1 اور دن-8 کے درمیان ٹرانسکرپٹوم کا پرنسپل جزو تجزیہ A اور آتش فشاں پلاٹ B

تصویر 2 ببل پلاٹ کے ذریعے DAVID کے ساتھ مختلف جینز کے فنکشنل اور پاتھ وے افزودگی کا تجزیہ

تصویر 3 DAVID فنکشنل جین آنٹولوجی (GO) حیاتیاتی عمل (BP)، سیلولر جزو (CC)، اور مالیکیولر فنکشن (MF) کا تجزیہ

ٹی سی آر سیپسس والے بزرگ ICU مریضوں میں MiXCR کے ساتھ تجزیہ کرتا ہے۔

اس بات پر غور کرتے ہوئے کہ R اور NR گروپس مخصوص T- سیل ریسیپٹر سگنلنگ پاتھ وے کے ذریعے سیپسس سے برآمد ہوئے، منفرد CDR3، ​​D50، اور الٹا سمپسن انڈیکس کی تعداد کو استعمال کرتے ہوئے، ہم نے MiXCR کا استعمال T- سیل ریسیپٹر (TCR) کے تنوع کا تعین کرنے کے لیے کیا۔ ) (تصویر 5A–C)۔ 8 ویں دن، R گروپ کا CDR3، ​​D50، اور الٹا سمپسن انڈیکس دن 1 کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھا۔ مزید یہ کہ، D50 انڈیکس R گروپ میں NR گروپ کے مقابلے میں دن 8 (تصویر 5B) میں نمایاں طور پر زیادہ تھا۔ آخر میں، ہم نے الٹا سمپسن انڈیکس کا استعمال کرتے ہوئے منفرد CDR3 کے تنوع کا اندازہ کیا، جو کہ وافر کلون ٹائپس کی عکاسی کرتا ہے۔ ہم نے اسی طرح کا نمونہ دیکھا، جس میں R گروپ میں TCR کے تنوع میں نمایاں اضافہ ہوا، خاص طور پر دن 8 (تصویر 5C) پر۔

بحث

یہ مطالعہ ظاہر کرتا ہے کہ شرح اموات سے متعلقہ حیاتیاتی خصوصیات اور انکولی استثنیٰ سے وابستہ سگنلنگ ٹرانسکرپٹومکس کا استعمال کرتے ہوئے، دن 1 اور دن 8 (اضافی فائل 1: تصویر S1) کے درمیان فرق کا موازنہ کرتے ہوئے، سیپسس کے ساتھ بزرگ ICU مریضوں کی قابل اعتماد طریقے سے شناخت کر سکتے ہیں اور غیر جوابی مریضوں میں فرق کر سکتے ہیں۔ . سیپسس بائیو مارکر کی تحقیقات کرنے والے پچھلے مطالعات کا انحصار علم پر مبنی طریقوں کا استعمال کرتے ہوئے معلوم حیاتیاتی افعال اور راستوں کے انتخاب پر تھا [28]، اور صرف بہت کم مطالعات نے براہ راست جینز کو نشانہ بنایا ہے جن کے افعال کو مکمل طور پر بیان نہیں کیا گیا ہے [29]۔ اس مطالعہ میں، ہم نے RNA-Seq کو اپنایا تاکہ سیپسس والے بزرگ ICU مریضوں میں حیاتیاتی اور امیونولوجیکل خصوصیات کی نشاندہی کی جا سکے جس میں پرنسپل اجزاء کے تجزیہ، امتیازی جین کے اظہار کے تجزیہ، اور MiXCR کے ذریعے۔ پیدائشی قوت مدافعت اور سوزش، جیسے ZDHCC19، ALOX15، FCER1A، HDC، PRSS33، اور PCSK9، کو سیپسس والے بزرگ ICU مریضوں میں الگ کر دیا گیا تھا۔ ZDHHC19 ایک palmitoyltransferase ہے اور RRAS کے palmitoylation میں ثالثی کرتا ہے، جس کی وجہ سے سیل کی قابل عملیت میں اضافہ ہوتا ہے [30]۔ جینوم وسیع جین ایکسپریشن تجزیہ کو فیکل پیریٹونائٹس [31] کی وجہ سے سیپسس والے ICU مریضوں میں اظہار میں اضافہ سے جوڑا گیا ہے۔ HDC (histidine decarboxylase, HDC) گروپ II decarboxylase خاندان کا ایک رکن ہے اور ایک ہوموڈیمر بناتا ہے جو L-histidine کو ہسٹامین میں تبدیل کرنے کے لیے پائریڈوکسل فاسفیٹ کا استعمال کرتا ہے۔ Hattori et al کے ذریعہ جانوروں کا ایک مطالعہ۔ [32] استعمال شدہ HDC جین ناک آؤٹ (HDC−/-) چوہے۔ cecal ligation اور puncture (CLP) کے ذریعے سیپسس کو دلانے کے بعد، HDC-ناک آؤٹ چوہوں نے پلازما ہسٹامائن کی سطح کو کم کیا، اور TNF، IL-1b، IL-6، اور MCP1 کی سطحوں میں اضافہ اس وقت کم ہوا جب پلازما کی کمی تھی۔ ہسٹامین [32]۔ ایچ ڈی سی ناک آؤٹ چوہوں میں ڈبلیو ٹی C57BL/6 J چوہوں کے مقابلے میں سیپسس کی وجہ سے غیر معمولی سائٹوکائن کی پیداوار اور متعدد اعضاء کی چوٹ (پھیپھڑے، جگر، اور گردے) میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ ایچ ڈی سی اظہار کی روک تھام نے سوزش کے بافتوں کی چوٹ کو روکا اور سی ایل پی [32] کے ذریعہ سیپسس کے ساتھ چوہوں میں بقا کو بہتر بنایا۔ اس کے علاوہ، ہسٹامین پروانفلامیٹری سائٹوکائنز کی پیداوار کو فروغ دے سکتی ہے، جو ٹرانسکرپشن فیکٹر NF-κB کے ذریعے منظم ہوتے ہیں۔ سی ایل پی کی حوصلہ افزائی سیپسس کے تحت، ایچ ڈی سی ناک آؤٹ چوہوں نے ڈبلیو ٹی چوہوں کے مقابلے میں نیوکلئس میں NF-κB کی سرگرمی میں نمایاں کمی کی تھی [32]۔ یہ نتیجہ ظاہر کرتا ہے کہ ہسٹامین NF-kB سرگرمی میں اضافہ کرکے پروانفلامیٹری سائٹوکائنز اور کیموکینز کی ترکیب کو اکساتا ہے۔

حالیہ تحقیق نے یہ ثابت کیا ہے کہ ALOX15 اور FCER1A بیکٹیریل سیپسس [33، 34] کے روگجنن کے لیے اہم ہیں۔ ALOX15، ایک لپڈ پیرو آکسائڈائزنگ انزائم، ایک فنکشنل lipoxygenase (LOX) جین ہے [35]، جو پولی انسیچوریٹڈ فیٹی ایسڈز کو آکسائڈائز کرتا ہے اور مختلف قسم کے جسمانی عملوں کے ساتھ ساتھ نیوروڈیجینریٹیو، سوزش اور ہائپرپروفیلیٹی بیماریوں کے روگجنن سے جڑا ہوا ہے۔ 36]۔ ALOX15 اور اس کے میٹابولائٹس متعدد سوزشی بیماریوں کی پیتھوفیسولوجی میں ملوث ہیں، جیسے سیپسس، آرتھرائٹس، دمہ، سسٹک فائبروسس، اور ایتھروسکلروسیس [36]۔ FCER1A (IgE ریسیپٹر Ia کا Fc ٹکڑا، FCER1A)، ایک مدافعتی سے متعلق پروٹین، الرجک رد عمل کا آغاز کرنے والا عنصر ہے اور الرجک سوزش میں ایک کردار ادا کرتا ہے [37، 38]۔ FCER1A کو پچھلے مطالعات میں میٹابولک عمل اور مدافعتی ضابطے کو منظم کرنے میں ملوث کیا گیا ہے۔ [38، 39]۔ مزید برآں، جب FCER1B اور دیگر امیونوگلوبلین سے متعلقہ سوزشی جینز تعامل کرتے ہیں تو دمہ ہونے کا زیادہ امکان ہوتا ہے [39]۔ مزید برآں، PCSK9 (proprotein convertase subtilisin/kexin type- 9, PCSK9) کی شناخت پلازما LDL-C کی سطح کے مرکزی ریگولیٹر کے طور پر اس کی LDL ریسیپٹر (LDLR) سے منسلک ہونے اور خلیات میں lysosomal انحطاط کے لیے اسے متحرک کرنے کی صلاحیت سے کی گئی ہے۔ ، جس سے LDLR تنزلی اور LDL کولیسٹرول کی سطح میں اضافہ ہوتا ہے [40]۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا

موجودہ مطالعے میں، ہم نے KEGG افزودگی اور GO کا استعمال ان جینوں کی فعال تشریح کا تعین کرنے کے لیے کیا تاکہ BP، MF، اور FH کے سالماتی راستوں میں سیپسس والے بزرگ ICU مریضوں سے DEGs کی شمولیت کی تحقیقات کی جا سکیں۔ یہ ڈی ای جی بنیادی طور پر نقل کے ضابطے، انکولی مدافعتی ردعمل، امیونوگلوبلین کی پیداوار، نقل کے منفی ضابطے، اور مدافعتی ردعمل (تصویر 2) میں افزودہ تھے۔ ہم نے Cytoscape پلگ ان ClueGO/CluePedia کا استعمال کرتے ہوئے GO/pathway اصطلاحات کا ایک فعال طور پر ترتیب دیا ہوا نیٹ ورک بنایا، جو حیاتیاتی اصطلاحات کی ایک بہتر تشریح ہے۔ اس پلگ ان نے ہمیں ان نیٹ ورکس کو دیکھنے میں بھی مدد کی جو بڑے جین کلسٹرز سے فعال طور پر گروپ کیے گئے ہیں [41]۔ ہم نے سیپسس میں شامل ڈی ای جی کی جامع تصویر حاصل کرنے کے لیے پی-ویلیوز اور کپا کے اعدادوشمار پر مبنی امتیازی طور پر منظم مالیکیولر راستوں اور ان کے اہم جین تعاملات کی شناخت کے لیے ClueGO پلگ ان کا استعمال کیا۔ مزید یہ کہ جب GO سے MF کا تجزیہ کیا گیا تو DEGs کو نقل کی سرگرمی اور پروٹین بائنڈنگ میں نمایاں طور پر افزودہ کیا گیا تھا (تصویر 3)۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ فنکشنل افزودگی کے تجزیے خاص طور پر امیونٹی سیل سگنلنگ پاتھ ویز کا حوالہ دیتے ہیں جو روگجنک شکلوں یا سائٹوکائنز کے سیلولر ردعمل سے متعلق ہیں۔ یہ ممکنہ طور پر سیپٹک مریضوں کے متوقع نتائج ہیں اور سیپسس کے راستوں کو واضح کرنے کے لیے مزید تفتیش کی ضرورت ہے۔ کاپا کے اعدادوشمار اور p-values ​​کی بنیاد پر، ہم نے پایا کہ افزودہ حیاتیاتی عمل اور سالماتی راستوں کے درمیان، مدافعتی نظام میں سائٹوکائن سگنلنگ، انکولی مدافعتی نظام، حسی ادراک، پیدائشی مدافعتی نظام، اور لیمفائیڈ اور غیر لیمفائیڈ کے درمیان مدافعتی تعامل۔ خلیات غیر منظم تھے اور سیپسس (تصویر 4) والے بزرگ ICU مریضوں میں سیپسس کے بڑھنے سے نمایاں طور پر وابستہ تھے۔

مزید برآں، ہم نے سیپسس کے بوڑھے مریضوں میں ٹی سیلز کا تنوع دکھایا اور TCRs کے کلونٹائپس کا تعین کرنے کے لیے RNA-Seq کی خام ترتیب کا تجزیہ کرنے کے لیے MiXCR کا استعمال کیا، جس سے ہمارے لیے بیک وقت TCRs کے تنوع اور پورے ٹرانسکرپٹوم کا جائزہ لینا ممکن ہوا۔ 15]۔ اس تحقیق میں RNA-Seq اور MiXCR کا استعمال T سیل سگنلنگ کی شناخت کے لیے کیا گیا اور نتائج سے پتہ چلا کہ R گروپ کا TCR تنوع دن-8 دن سے زیادہ تھا-1 (تصویر 5) . NR گروپ کے مقابلے میں، R گروپ کے پاس CDR3، ​​D50، اور الٹا سمپسن انڈیکس کی قدریں دن-8، دن-1 کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھیں۔ سیپسس کے ساتھ بزرگ ICU مریضوں میں TCRs کے حوصلہ افزائی تنوع کی اہمیت کو بھی اس ثبوت سے اجاگر کیا گیا ہے، جو سیپسس کے مریضوں میں TCRs کے تنوع کو حل کرنے کے لیے RNA-Seq اور MiXCR ڈیٹا کو استعمال کرنے کی قابل عملیت کو ظاہر کرتا ہے۔ ہمارے مطالعے میں کچھ حدود ہیں جن پر غور کرنا چاہیے۔ سب سے پہلے، اس مطالعہ میں تحقیقات کی گئی مریضوں کا گروپ چھوٹا تھا. لہذا، بڑے نمونے کے سائز کے ساتھ متنوع آبادیوں کی تحقیقات ہمارے ڈیٹا کی تصدیق میں معاون ثابت ہوں گی۔ دوسرا، ہم نے اس مطالعے میں بلک RNA-Seq کا استعمال کیا، اور مستقبل کے sc-RNA-Seq اور فنکشنل تجربات کی سیلولر سطح پر توثیق کی ضمانت دی گئی ہے۔ مزید یہ کہ، 5' سی ڈی این اے اینڈز (5'-RACE) کے تیز رفتار پروردن کو ٹی سیل کے ذخیرے کی چھان بین کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، جو ہمارے نتائج کی مزید تصدیق کر سکتا ہے۔ تیسرا، ہم نے RNA-Seq ڈیٹا کا استعمال کرتے ہوئے سیپسس کے مریضوں میں سوزش کے ردعمل کے حیاتیاتی اور سالماتی افعال کا اندازہ کیا۔ سیپسس میں کردار کو واضح کرنے کے لیے مزید عملی مطالعات کی ضرورت ہے۔

تصویر 4 جین آنٹولوجی (GO) کی اصطلاحات کی افزودگی کو Cytoscape سے ClueGO/CluePedia پلگ ان کا استعمال کرتے ہوئے تصور کیا گیا تھا۔

تصویر 5 دن-1 اور دن پر ٹی سیل ریسیپٹر کا تنوع-8۔ الٹا سمپسن انڈیکس کے شمار (A)، منفرد CDR3 (B)، D50، اور (C)۔ *<0.05, **<0.005

نتائج

سیپسس کے واقعات اور اموات دونوں بزرگ افراد میں زیادہ ہیں۔ ہمارے مطالعے نے سیپسس کے ساتھ شدید بیمار بزرگ افراد کا اندراج کیا اور RNA-Seq ڈیٹا کی بنیاد پر فنکشنل پاتھ وے اور MiXCR تجزیہ کے ساتھ اموات سے متعلقہ حیاتیاتی خصوصیات اور ٹرانسکرپٹومک خصوصیات کی نشاندہی کی۔ دن 1 کے مقابلے میں، ہم نے 8ویں دن ذمہ دار مریضوں میں غیر منظم شدہ فطری قوت مدافعت اور ٹی سیل تنوع میں اضافہ پایا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ غیر ذمہ دار مریضوں کے مقابلے میں ذمہ دار مریضوں کی سیپسس سے بہتر طور پر بحالی ہوئی ہے۔ درست اور ابتدائی پیشین گوئی کو لاگو کرنے کے لیے، RNA-Seq کے ٹیسٹ کا استعمال علاج کے نتائج کی ابتدائی پیشین گوئی کے لیے اضافی اضافی معلومات پیش کر سکتا ہے۔

حوالہ جات

1. سیمور CW، Kennedy JN، Wang S، Chang CH، Elliott CF، Xu Z، et al. سیپسس کے لیے نوول کلینیکل فینوٹائپس کے اخراج کی چھٹی، توثیق، اور ممکنہ علاج کے مضمرات۔ جما 2019;321(20):2003–17۔

2. Sweeney TE، Azad TD، Donato M، Haynes WA، Perumal TM، Henao R، et al. متعدد ڈیٹاسیٹس میں بیکٹیریل سیپسس میں ٹرانسکرپٹومکس کا غیر نگرانی شدہ تجزیہ تین مضبوط کلسٹرز کو ظاہر کرتا ہے۔ کریٹ کیئر میڈ۔ 2018؛ 46(6):915–25۔

3. de Lange DW، Brinkman S، Flaatten H، Boumendil A، Morandi A، Andersen FH، et al. ICU میں داخل ہونے والے 80 سال سے زیادہ عمر کے مریضوں میں اموات کی پیش گوئی کرنے والا مجموعی پروگنوسٹک اسکور۔ J Am Geriatr Soc. 2019؛67(6):1263–7۔

4. فلیٹن ایچ، ڈی لینج ڈی ڈبلیو، آرٹیگاس اے، بن ڈی، مورینو آر، کرسٹینسن ایس، وغیرہ۔ انتہائی نگہداشت کی ادویات کی تحقیق کی حیثیت اور آئی سی یو میں بہت پرانے مریضوں کے لیے مستقبل کا ایجنڈا۔ انتہائی نگہداشت کا میڈ۔ 2017؛43(9):1319–28۔

5. Guidet B، de Lange DW، Boumendil A، Leaver S، Watson X، Boulanger C، et al. کمزوری، ادراک، روزمرہ کی زندگی کی سرگرمی اور یورپی آئی سی یوز میں 80 سال سے زیادہ کے شدید طور پر داخل مریضوں کے نتائج پر کماربیڈیٹیز کی شراکت: VIP2 مطالعہ۔ انتہائی نگہداشت کا میڈ۔ 2020؛46(1):57–69۔

6. Stahl EC, Brown BN. امیونوجن سائنس کا مقابلہ کرنے کے لئے سیل تھراپی کی حکمت عملی۔ Organogenesis. 2015؛ 11(4):159–72۔

7. مارٹن ایس، پیریز اے، الڈیکو سی. سیپسس اور بوڑھے مریض میں مدافعتی نظام: ایک جائزہ۔ فرنٹ میڈ (لوزان)۔ 2017. https://doi.org/10۔ 3389/fmed.2017.00020۔

8. Rydyznski Moderbacher C، Ramirez SI، Dan JM، Grifoni A، Hastie KM، Weiskopf D، et al. شدید COVID-19 میں SARS-CoV-2 اور عمر اور بیماری کی شدت کے ساتھ وابستگی کے لیے اینٹیجن کے لیے مخصوص انکولی قوت مدافعت۔ سیل 2020؛183(4):996-1012 e1019۔

9. Leblanc G, Boumendil A, Guidet B. شدید بیمار بزرگ مریضوں کے بارے میں جاننے کے لیے دس چیزیں۔ انتہائی نگہداشت کا میڈ۔ 2017؛43(2):217–9۔

10. Guidet B، Vallet H، Boddaert J، de Lange DW، Morandi A، Leblanc G، et al. 80 سال سے زیادہ عمر کے شدید بیمار مریضوں کی دیکھ بھال: ایک بیانیہ جائزہ۔ این انتہائی نگہداشت۔ 2018؛ 8(1):114۔

11. بریڈی جے، ہوری ایس، لیفے جے جی۔ سیپسس میں انکولی مدافعتی ردعمل کا کردار۔ انتہائی نگہداشت کا میڈ ایکس۔ 2020؛ 8(1):20۔

12. مارٹن ایم ڈی، بدووینیک وی پی، گریفتھ ٹی ایس۔ CD4 T سیل کے ردعمل اور سیپسس سے متاثرہ امیونوپرالیسس حالت۔ فرنٹ امیونول۔ 2020۔ https://doi.org/10۔ 3389/fmmu.2020.01364۔

13. Barcella M، Bollen Pinto B، Braga D، D'Avila F، Tagliaferri F، Cazalis MA، et al. ابتدائی معاون تھراپی کے بعد سیپٹک صدمے کے مریضوں میں اعضاء کے افعال کی بہتری سے وابستہ ٹرانسکرپٹوم پروفائل کی شناخت۔ کریٹ کیئر۔ 2018؛ 22(1):312۔

14. Cheng PL، Chen HH، Jiang YH، Hsiao TH، Wang CY، Wu CL، et al. سیپسس کے ساتھ امیونوکمپرومائزڈ مریضوں میں مدافعتی میٹابولزم کی خصوصیات کی تحقیقات کے لیے RNA-Seq کا استعمال۔ فرنٹ میڈ (لوزان)۔ 2021۔ https://doi۔ org/10.3389/fmed.2021.747263۔

15. بولوٹین DA، Poslavsky S، Mitrophanov I، Shugay M، Mamedov IZ، Putint‑seva EV، et al. MiXCR: جامع انکولی مدافعتی پروفائلنگ کے لیے سافٹ ویئر۔ نیٹ کے طریقے۔ 2015؛12(5):380–1۔

16. بولوٹین ڈی اے، پوسلاسکی ایس، ڈیویڈوف اے این، فرینکل ایف ای، فانچی ایل، زولوتریوا او آئی، وغیرہ۔ RNA-seq ڈیٹا سے اینٹیجن ریسیپٹر ریپرٹوائر پروفائلنگ۔ نیٹ بائیو ٹیکنالوجی۔ 2017؛35(10):908–11۔

17. Vincent JL، de Mendonca A، Cantraine F، Moreno R، Takala J، Suter PM، et al. انتہائی نگہداشت کے یونٹوں میں اعضاء کی خرابی/ناکامی کے واقعات کا اندازہ لگانے کے لیے SOFA سکور کا استعمال: ایک ملٹی سینٹر کے نتائج، ممکنہ مطالعہ یورپی سوسائٹی آف انٹینسیو کیئر میڈیسن کے "سیپسس سے متعلقہ مسائل" پر ورکنگ گروپ۔ کریٹ کیئر میڈ۔ 1998؛26(11):1793–800۔

18. Garcia-Gigorro R، Saez-de la Fuente I، Marin Mateos H، Andres-Esteban EM، Sanchez-Izquierdo JA، Montejo-Gonzalez JC۔ ایمرجنسی ڈیپارٹمنٹ سے شدید بیمار مریضوں میں نتائج کی پیش گوئی کرنے کے لیے SOFA اور Delta-SOFA اسکورز کی افادیت۔ یور جے ایمرج میڈ۔ 2018؛ 25(6):387–93۔

19. جونز AE، Trzeciak S، Kline JA. ایمرجنسی ڈیپارٹمنٹ پریزنٹیشن کے وقت شدید سیپسس اور ہائپوپرفیوژن کے شواہد والے مریضوں میں نتائج کی پیشن گوئی کے لیے ترتیب وار اعضاء کی ناکامی کی تشخیص کا سکور۔ کریٹ کیئر میڈ۔ 2009؛37(5):1649–54۔

20. کم ڈی، لینگ میڈ بی، سالزبرگ ایس ایل۔ HISAT: کم میموری کی ضروریات کے ساتھ ایک تیز کٹا ہوا الائنر۔ نیٹ کے طریقے۔ 2015؛12(4):357–60۔

21. اینڈرس ایس، ہیوبر ڈبلیو. ترتیب شمار کے اعداد و شمار کے لیے تفریق اظہار تجزیہ۔ جینوم بائیول۔ 2010;11(10):R106۔

22. Liao Y، Smyth GK، Shi W. Feature Counts: جینومک خصوصیات کو ترتیب دینے کے لیے عام مقصد کا ایک موثر پروگرام۔ بائیو انفارمیٹ آئی سی۔ 2014؛30(7):923–30۔

23. Raudvere U, Kolberg L, Kuzmin I, Arak T, Adler P, Peterson H, et al. g: پروفائلر: فنکشنل افزودگی کے تجزیہ اور جین کی فہرستوں کے تبادلوں کے لیے ایک ویب سرور (2019 اپ ڈیٹ)۔ نیوکلک ایسڈ Res. 2019;47(W1):W191–8۔

24. Merico D، Isserlin R، Stueker O، Emili A، Bader GD. افزودگی کا نقشہ: ایک نیٹ ورک پر مبنی طریقہ برائے جین سیٹ افزودگی تصور اور انٹر پریڈیشن۔ پلس ون۔ 2010؛5(11):e13984۔

25. شینن پی، مارکیل اے، اوزیئر او، بالیگا این ایس، وانگ جے ٹی، رامج ڈی، وغیرہ۔ سائٹوسکیپ: بائیو مالیکولر انٹرایکشن نیٹ ورکس کے مربوط ماڈلز کے لیے ایک سافٹ ویئر ماحول۔ جینوم ریس 2003؛ 13(11):2498–504۔

26. اینڈرسن ای ایس۔ ڈی این اے اور آر این اے ڈھانچے کی پیشن گوئی اور ڈیزائن۔ این بائیو ٹیکنالوجی۔ 2010؛27(3):184–93۔

27. Le Gall JR، Lemeshow S، Saulnier F. ایک یورپی/شمالی امریکی ملٹی سینٹر اسٹڈی پر مبنی ایک نیا آسان ایکیوٹ فزیالوجی سکور (SAPS II)۔ جما 1993؛270(24):2957–63۔

28. سدرلینڈ اے، تھامس ایم، برینڈن آر اے، برینڈن آر بی، لپ مین جے، تانگ بی، وغیرہ۔ سیپسس کے ابتدائی پتہ لگانے کے لئے ایک ناول مالیکیولر بائیو مارکر تشخیصی ٹیسٹ کی ترقی اور توثیق۔ کریٹ کیئر۔ 2011;15(3):R149۔

29. Lukaszewski RA, Jones HE, Gersuk VH, Russell P, Simpson A, Brealey D, et al. جین اظہار کے دستخطوں کا استعمال کرتے ہوئے پوسٹ آپریٹو انفیکشن اور سیپسس کی پری علامتی تشخیص۔ انتہائی نگہداشت کا میڈ۔ 2022۔ https://doi۔ org/10.1007/s00134-022-06769-z.

30. Niu J، Sun Y، Chen B، Zheng B، Jarugumilli GK، Walker SR، et al. فیٹی ایسڈز اور کینسر میں اضافہ شدہ ZDHHC19 S-palmitoylation کے ذریعے STAT3 ایکٹیویشن کو فروغ دیتے ہیں۔ فطرت 2019؛573(7772):139–43۔

31. برنہم KL، Davenport EE، Radhakrishnan J، Humburg P، Gordon AC، Hutton P، et al. فیکل پیریٹونائٹس اور نمونیا کے لئے سیپسس ٹرانسکرپٹومک ردعمل کے مشترکہ اور الگ الگ پہلو۔ ایم جے ریسپر کریٹ کیئر میڈ۔ 2017؛ 196(3):328–39۔

32. Hattori M, Yamazaki M, Ohashi W, Tanaka S, Hattori K, Todoroki K, et al. سیپسس میں اینڈوجینس ہسٹامین کا آخری عضو کے ٹشو کی چوٹ کو فروغ دینے میں اہم کردار۔ انتہائی نگہداشت کا میڈ ایکس۔ 2016؛ 4(1):36۔

33. Reyes M, Filbin MR, Bhattacharya RP, Billman K, Eisenhaure T, Hung DT, et al. بیکٹیریل سیپسس کا ایک مدافعتی سیل دستخط۔ نیٹ میڈ. 2020؛26(3):333–40۔

34. Tang-Huau TL، Gueguen P، Goudot C، Durand M، Bohec M، Baulande S، et al. ویوو سے تیار کردہ مونوسائٹ سے ماخوذ ڈینڈریٹک خلیات اور میکروفیجز ایک ویکیولر پاتھ وے کے ذریعے کراس پریزنٹ اینٹیجنز میں انسان۔ نیٹ کمیون۔ 2018؛ 9(1):2570۔

35. ایوانوف I، Kuhn H، Heydeck D. arachidonic acid 15-lipoxygenase-1 (ALOX15) کی ساختی اور فعال حیاتیات۔ جین 2015؛573(1):1–32۔

36. سنگھ این کے، راؤ جی این۔ انسانی پیتھالوجیز میں 12/15-Lipoxygenase (ALOX15) کا ابھرتا ہوا کردار۔ Prog Lipid Res. 2019؛ 73:28-45۔

37. Baioumy SA, Esawy MM, Shabana MA. دائمی اچانک چھپاکی کے مریضوں میں گردش کرنے والی FCepsilonRIa کی تشخیص اور طبی اور امیونولوجیکل متغیرات کے ساتھ اس کا تعلق۔ امیونو بایولوجی۔ 2018؛ 223(12):807–11۔

38. Liao EC، Chang CY، Hsieh CW، Yu SJ، Yin SC، Tsai JJ. FcepsilonR1alpha اور Cepsilon کے اظہار کے ساتھ IgE کی ثالثی والی الرجک بیماریوں کے لیے جینیاتی مارکروں کا ایک تحقیقی پائلٹ مطالعہ۔ Int J Mol Sci. 2015;16(5):9504–19۔

39. Hua L, Zuo XB, Bao YX, Liu QH, Li JY, Lv J, et al. چینی ہان بچوں میں دمہ کے لیے IL13، IL4، FCER1B، اور ADRB2 کے درمیان چار لوکس جین کا تعامل۔ پیڈیاٹر پلمونول۔ 2016؛51(4):364–71۔

40. Kosenko T، Golder M، Leblond G، Weng W، Lagace TA. کم کثافت لیپو پروٹین انسانی پلازما میں پروٹین کنورٹیز سبٹیلیسن/کیکسین قسم-9 (PCSK9) سے منسلک ہوتا ہے اور PCSK9-ثالثی کم کثافت لیپو پروٹین ریسیپٹر کے انحطاط کو روکتا ہے۔ جے بائیول کیم۔ 2013؛ 288(12):8279–88۔

41. Bindea G، Mlecnik B، Hackl H، Charoentong P، Tosolini M، Kirilovsky A، et al. ClueGO: ایک Cytoscape پلگ ان فعال طور پر گروپ شدہ جین آنٹولوجی اور پاتھ وے تشریحی نیٹ ورکس کو سمجھنے کے لیے۔ بایو انفارمیٹکس۔ 2009؛25(8):1091–3۔