بھاپ اور خشک کرنے کے عمل کے دوران Cistanche Deserticola ایکٹو مرکبات کی تبدیلی کے طریقہ کار کو ظاہر کرنے کے لیے وسیع پیمانے پر ہدف شدہ میٹابولومکس تجزیہ

Cistanche deserticola سب سے قیمتی پودوں میں سے ایک ہے، روایتی طور پر چینی ادویات کے طور پر، اور حال ہی میں دواسازی اور صحت مند کھانے کی صنعتوں میں استعمال کیا گیا ہے۔ Cistanche deserticola کی پروسیسنگ میں بھاپ اور خشک کرنا دو اہم مراحل ہیں۔

بدقسمتی سے، تھرمل پروسیسنگ کے دوران Cistanche deserticola کی کیمیائی ساخت کی تبدیلیوں کی ایک جامع تفہیم محدود ہے۔ اس مطالعہ میں، الٹرا پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی-ٹینڈم ماس اسپیکٹومیٹری (UHPLC-MS/MS) پر مبنی وسیع پیمانے پر ٹارگٹڈ میٹابولومکس تجزیہ کو بھاپ اور خشک کرنے کے عمل کے دوران Cistanche deserticola فعال مرکبات کی تبدیلی کے طریقہ کار کی تحقیقات کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ تھرمل پروسیسنگ کے دوران Cistanche deserticola میں کل 776 میٹابولائٹس کی نشاندہی کی گئی تھی، جن میں سے، 77 میٹابولائٹس کو الگ الگ ریگولیٹ کیا گیا تھا (p < 0.05) جس میں 39 کو اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا (UR) اور 38 کو ڈاؤن ریگولیٹ کیا گیا تھا (DR)۔ بالترتیب بھاپ اور خشک کرنے کے دوران سینتالیس (17 UR، 30 DR) اور 30 ​​(22 UR، 8 DR) تفریق میٹابولائٹس کی نشاندہی کی گئی۔

کیمیکلز کی سب سے زیادہ تبدیلی بھاپ کے عمل کے دوران دیکھی گئی۔ میٹابولک پاتھ وے تجزیہ نے اشارہ کیا کہ فینائل پروپینائڈ، فلاوونائڈ بائیو سنتھیسز، اور الانائن میٹابولزم کو بھاپ کے دوران دیکھا گیا، جبکہ خشک ہونے کے دوران گلائسین، سیرین، اور تھرونائن میٹابولزم، تھامین میٹابولزم، اور غیر سیر شدہ فیٹی ایسڈ بائیو سنتھیسس کا مشاہدہ کیا گیا۔ کیوٹو انسائیکلوپیڈیا آف جینز اینڈ جینومز (KEGG) پاتھ وے تجزیہ کے ذریعے تھرمل پروسیسنگ کے دوران کیمیائی تبدیلیوں کے ممکنہ میکانزم بھی فراہم کیے گئے تھے۔ مزید برآں، Cistanche deserticola کی ظاہری شکل کا سیاہ ہونا بنیادی طور پر خشک ہونے کے بجائے بھاپ کے مرحلے میں ہوتا ہے، جس کا تعلق امینو ایسڈ کے میٹابولزم سے ہوتا ہے۔ تمام نتائج نے اشارہ کیا کہ Cistanche deserticola کی پروسیسنگ کے دوران فعال مرکبات کی تشکیل بنیادی طور پر بھاپ کے مرحلے میں واقع ہوئی ہے۔

کلک کریں cistanche tubulosa ضمنی اثرات کی مصنوعات

تعارف

Cistanche deserticola، Orobanchaceae خاندان سے تعلق رکھنے والی، ایک مشہور ٹانک دوائیوں میں سے ایک ہے اور یہ بنیادی طور پر دنیا کے اشنکٹبندیی اور ذیلی اشنکٹبندیی علاقوں میں تقسیم کی جاتی ہے، جیسے چین، ایران، ہندوستان، منگولیا، اور اسی طرح (1–3)۔ Cistanche deserticola گردے کی کمی، نامردی، خواتین کی بانجھ پن، مربیڈ لیکوریا، پرفیوز میٹروریاجیا، اور سینائل (4، 5) کے علاج کے لیے سب سے زیادہ استعمال ہونے والی جڑی بوٹیوں کی دوائیوں میں سے ایک کے طور پر کام کرتی ہے۔ جدید فارماسولوجیکل تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ Cistanche deserticola میں قوت مدافعت کو بہتر بنانے، تھکاوٹ کو روکنے، بڑھاپے کو روکنے اور سیکھنے اور یاد کرنے کی صلاحیت کو بڑھانے کے اثرات ہوتے ہیں (6)۔ صحت کے ان فوائد کی وجہ سے، اس کے تنے کے تنے سے بنی Cistanche deserticola چائے کو ایک غذائی سپلیمنٹ کے طور پر تیار کیا گیا ہے اور صارفین کی طرف سے اسے تیزی سے پسند کیا جا رہا ہے۔ Cistanche deserticola کے فعال اجزاء اس کے دواؤں کے افعال کے لیے ذمہ دار ہیں (7)۔ Cistanche deserticola میں کچھ فعال اجزاء، جیسے phenylpropanoids (مثال کے طور پر phenylethanoid glycosides)، flavonoids، polysaccharides، oligosaccharides، iridoids، اور lignans پچھلے مطالعات میں رپورٹ کیے گئے ہیں (6, 8).

خراب ہونے والی اور موسمی خصوصیات کی وجہ سے، تازہ Cistanche deserticola کی سارا سال سپلائی دستیاب نہیں ہے، اس کے مطابق پروسیس شدہ Cistanche deserticola استعمال کی اہم شکل بن جاتی ہے۔ Cistanche deserticola کا معیار بہت سے عوامل پر منحصر ہے، جیسے آب و ہوا، رہائش، میزبان، فصل کا وقت، پروسیسنگ ٹیکنالوجی، اور پودے کی پوزیشن، جن میں پروسیسنگ ٹیکنالوجی خاص طور پر اہم ہے (4)۔ Cistanche deserticola کی پروسیسنگ میں بھاپ اور خشک کرنا دو اہم مراحل ہیں۔ عام طور پر، کٹے ہوئے Cistanche deserticola rhizome کو 93◦C پر 30 منٹ کے لیے بھاپتے ہوئے بوائلر میں بھاپ دیا جاتا تھا اور پھر 60◦C پر خشک کیا جاتا تھا جب تک کہ گیلی بنیاد پر نمی کا تناسب 10 فیصد نہ ہو جائے (wb) (9)۔

پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ بھاپ لینے سے Cistanche deserticola میں فعال اجزاء، جیسے phenylethanoid glycosides، گھلنشیل شکر، اور polysaccharides کے جمع ہونے کو فروغ مل سکتا ہے، جس کے ساتھ ظاہری رنگ (9-11) کالا ہو جاتا ہے۔ تاہم، پچھلے مطالعے میں سے زیادہ تر کچھ مخصوص مرکبات پر توجہ مرکوز کرتے ہیں، اور بہت کم تحقیق تمام کیمیائی مرکبات میں تبدیلیوں اور پروسیسنگ کے دوران میٹابولائٹ کی تبدیلی کے طریقہ کار کے بارے میں ہے۔ لہذا، مختلف پروسیسنگ مراحل میں Cistanche deserticola کی میٹابولائٹ تبدیلیوں کو واضح کرنا ضروری ہے۔

میٹابولومکس کا اطلاق عام طور پر نمونے (12) میں پائے جانے والے تمام چھوٹے مالیکیولز (یعنی ٹارگٹڈ اور غیر ٹارگٹڈ مرکبات) کے گتاتمک اور مقداری تجزیہ پر کیا جاتا ہے۔ فوڈ پروسیسنگ کے دوران مختلف کیمیائی اجزاء میں ہونے والی تبدیلیوں کا تجزیہ فوڈ پروسیسنگ میں کیمیائی اجزاء کی تبدیلی کے طریقہ کار کی سمجھ کو گہرا کرنے میں مدد کرتا ہے (12)۔ حالیہ برسوں میں، میٹابولومکس کا اطلاق Cistanche deserticola کے مختلف حصوں (11) اور مختلف Cistanche deserticola پرجاتیوں (13) کے امتیاز کے لیے بھی کیا گیا ہے۔

ان مطالعات میں میٹابولائٹس کا پتہ لگانے کے طریقے زیادہ تر ہدف شدہ اور غیر ہدف شدہ میٹابولومکس پر مبنی تھے۔ ان میں سے، ہدف شدہ میٹابولومکس معیاری مصنوعات پر مبنی ہے، جس میں اعلیٰ ڈیٹا کی درستگی اور وشوسنییتا، تاہم، میٹابولائٹس کی محدود کوریج ہے۔ ٹارگٹڈ میٹابولومکس میٹابولومکس ریسرچ کا ایک اہم حصہ ہے، یہ نمونے میں موجود تمام اجزاء کی بجائے مخصوص میٹابولائٹ گروپس کا ہدف اور مخصوص پتہ لگانے اور تجزیہ کرنا ہے۔ غیر ھدف شدہ میٹابولومکس ٹیکنالوجی موجودہ ڈیٹا بیس کی بنیاد پر میٹابولائٹس کا معیار کے مطابق تعین کر سکتی ہے، تاہم مرکبات کی اعلی کوریج کے ساتھ، کم درستگی۔ کلیدی میٹابولائٹس کی تصدیق معیاری مصنوعات (14) سے ہونی چاہیے۔ وسیع پیمانے پر ٹارگٹڈ میٹابولومکس ایک نئی ٹیکنالوجی ہے جو وسیع کوریج، ہائی تھرو پٹ، اور حساسیت (15) حاصل کرنے کے لیے غیر ہدف اور ہدف شدہ میٹابولائٹ کا پتہ لگانے والی ٹیکنالوجیز کے فوائد کو مربوط کرتی ہے۔

اس کے نتیجے میں، اس ٹیکنالوجی کو پروسیسنگ کے دوران مختلف مواد میں اجزاء کی تبدیلیوں کے مطالعہ میں بڑے پیمانے پر استعمال کیا گیا ہے، جیسے کہ مختلف پروسیسنگ طریقوں کے ذریعے فعال غذاؤں میں فعال اجزاء (16)، چینی پانی کے شاہ بلوط میں فلاوونائڈز اور فینیلپروپینائڈز مرکبات مختلف طریقوں سے پروسیس کیے گئے (17) , پیلے ہونے کے عمل کے دوران چاول کے پیلے ہونے کا طریقہ کار (18)، اور خصوصیت والے غیر مستحکم کیمیکل کی تشکیل کا طریقہ کار اوولونگ چائے کی تیاری کے عمل کے دوران تشکیل پاتا ہے (19)۔ لہذا، Cistanche deserticola کی پروسیسنگ کے دوران فعال اجزاء کی تبدیلی کے طریقہ کار کا مطالعہ کرنے کے لیے وسیع پیمانے پر ٹارگٹڈ میٹابولائٹ ٹیکنالوجی کا استعمال نظریاتی طور پر ممکن ہے۔

اس طرح، موجودہ مطالعے کے مقاصد (1) الٹرا پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی-ٹینڈم ماس اسپیکٹومیٹری (UHPLC-MS/MS) کا استعمال کرتے ہوئے بھاپ اور خشک کرنے کے عمل کے دوران Cistanche deserticola میں کیمیائی تبدیلیوں کے بارے میں مفید معلومات فراہم کرنا تھا۔ نقطہ نظر (2) تفریق میٹابولائٹس اور ان کے ضابطے کے اصولوں کی شناخت کریں، اور پروسیسنگ کے دوران Cistanche deserticola میں ممکنہ تبدیلی کے راستوں کو ظاہر کریں۔ لہذا، اس مطالعہ سے توقع کی جاتی ہے کہ وہ اعلیٰ معیار کے Cistanche deserticola کی تشکیل کے طریقہ کار کے لیے ایک نظریاتی حوالہ فراہم کرے گا۔

مواد اور طریقے مواد اور کیمیکل

خام مال: تازہ Cistanche deserticola نمونے چین کے سنکیانگ صوبے میں Hetian علاقے سے حاصل کیے گئے تھے۔ نمونے احتیاط سے ایک ہی سائز کے ساتھ منتخب کیے گئے تھے (اوسط لمبائی، قطر، اور وزن 11.7 ± 1.1 سینٹی میٹر، 7۔{5}} ± 1.1 سینٹی میٹر، اور 360 ± 8.9 جی، بالترتیب)۔ نمونے کمرے کے درجہ حرارت پر تاریک ماحول میں 78.56 فیصد ± 3.47 فیصد کی ابتدائی نمی کے ساتھ محفوظ کیے گئے تھے۔ تجربات سے پہلے، Cistanche deserticola کے نمونوں کو نلکے کے پانی سے دھویا گیا تاکہ سطح پر موجود دھول کو دور کیا جا سکے۔ اس کی سطح پر موجود اضافی پانی کو بلاٹنگ پیپر کے ذریعے ہٹا دیا گیا۔

کیمیکل: میتھانول، ایسٹونائٹرائل، اور فارمک ایسڈ مائع-کرومیٹروگرافی ماس اسپیکٹومیٹری گریڈ (LC-MS) تھے اور مرک (Sigma Aldrich, MO, USA) سے خریدے گئے تھے۔ دیگر تجزیاتی معیارات نے 98 فیصد سے زیادہ پاکیزگی پیش کی (Sigma Aldrich, MO, USA)۔

تجرباتی نمونہ

پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ کیمیائی مرکبات Cistanche deserticola (1) کی طول بلد سمت میں غیر مساوی طور پر تقسیم ہوتے ہیں۔ لہذا، ہر نمونے میں کیمیائی مرکبات کے ایک جیسے ابتدائی مواد کو حاصل کرنے کے لیے، موجودہ تحقیق میں تمام منتخب کردہ Cistanche deserticola کو تازہ گروپ (A) کے لیے تین مساوی حصوں میں کاٹا گیا، بغیر خشک کیے ہوئے گروپ (B) کے لیے ابال کر، اور گروپ کو بھاپ کے بعد خشک کیا گیا۔ (C)، بالترتیب، طول البلد انقطاع کے ذریعے طول بلد توازن محور کے ساتھ مرکز کے طور پر (20)۔

گروپ بی کے لیے، ابتدائی تجربات کے مطابق نمونوں کو یکے بعد دیگرے 8 منٹ تک بھاپ میں ڈالا گیا۔ ایک پلسڈ ویکیوم سٹیمنگ کا سامان (خود تیار کردہ چائنا ایگریکلچرل یونیورسٹی، بیجنگ، چین) تازہ سیستانچ ڈیزرٹیکولا کے بھاپ کے علاج کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ابلی ہوئی نمونوں کو ویکیوم فریز ڈرائر (LGJ-25C, Si Huan Scientific Instrument Factory Co., Beijing, China) میں خشک کیا گیا تھا۔ حرارتی پلیٹ اور کولڈ ٹریپ کا درجہ حرارت بالترتیب 30 اور −60◦C تھا۔ گروپ سی کے لیے، نمونوں کو 8 منٹ کے لیے پلسڈ ویکیوم آلات کا استعمال کرتے ہوئے یکے بعد دیگرے بھاپ میں ڈالا گیا اور گرم ہوا کے امپنگمنٹ ڈرائر (چائنا ایگریکلچرل یونیورسٹی، بیجنگ، چین کے ذریعے خود تیار کردہ) میں 10 فیصد نمی کی حتمی مقدار (wb) تک خشک کیا گیا۔ Zou et al کے تحقیقی نتائج کا حوالہ دیتے ہوئے ہوا کے بہاؤ کی شرح اور درجہ حرارت کو بالترتیب 6 m/s اور 60◦C پر سیٹ کیا گیا تھا۔ (11)۔ تمام نمونے −20◦C پر مزید تجزیے سے 7 دن پہلے محفوظ کیے گئے تھے۔

Cistanche Deserticola کے ظاہری رنگ کا تعین

ہر تھرمل پروسیسنگ سے پہلے اور بعد میں Cistanche deserticola کے ظاہری رنگ کو رنگین میٹر (SMY2000SF، Shengming Yang Co., Beijing, China) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا، اور سیاہی L∗ قدر سے نمایاں تھی۔

نمونہ کی تیاری اور نکالنا

میٹابولائٹ نکالنا اس طریقہ کے مطابق کیا گیا تھا جس کی اطلاع پہلے چن ایٹ ال نے دی تھی۔ (21) کچھ معمولی ترمیم کے ساتھ۔ مختصراً، خشک نمونوں کو ایک مکسر مل (MM 400, Retsch Company, Haan, Germany) کا استعمال کرتے ہوئے زرکونیا مالا کے ساتھ 60 Hz پر 2 منٹ کے لیے کچل دیا گیا۔ پھر ہر نمونے کے 50 ملی گرام پاؤڈر (65 میش چھلنی کے ذریعے چھان لیا گیا) کا وزن ٹھیک سے کیا گیا، ایپنڈورف ٹیوب میں منتقل کیا گیا، اور 1 ملی لیٹر میتھانول/پانی کے مرکب (v:v=3:1) کے ساتھ نکالا گیا۔ 30 سیکنڈ کے بھنور کے بعد، مرکب کو 4 منٹ کے لیے 35 ہرٹز پر دو بار ہم آہنگ کیا گیا، برف کے پانی کے غسل میں 15 منٹ کے لیے سونیکیٹ کیا گیا، اور پھر رات بھر 4◦C پر ہلایا گیا۔ 12،000 rpm پر 15 منٹ کے لیے 4◦C پر سینٹرفیوگریشن کے بعد، سپرنٹنٹ کو 022-µm جھلی کے ذریعے اکٹھا کیا گیا اور فلٹر کیا گیا، پھر حاصل شدہ عرق کو 2 ملی لیٹر شیشے کی شیشیوں میں منتقل کر کے محفوظ کیا گیا۔ UHPLC-MS/MS تجزیہ تک −80◦C پر۔

UHPLC-MS UHPLC حالات کے ذریعہ میٹابولائٹس کا تجزیہ

UHPLC علیحدگی EXIONLC سسٹم (Sciex Technologies, Framingham, MA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی۔ تجزیاتی حالات حسب ذیل تھے: کالم: واٹر ACQUITY UHPLC HSS T3 C18 (1.8µm, 2.1 × 100 mm); سالوینٹ سسٹم: موبائل فیز A (0. پانی میں 1 فیصد فارمک ایسڈ) اور موبائل فیز B (ایسیٹونیٹرائل پر مشتمل)۔ گریڈینٹ پروگرام: 0 منٹ پر 98 فیصد A/2 فیصد B، 10 منٹ پر 50 فیصد A/50 فیصد B، 11 منٹ پر 5 فیصد A/95 فیصد B، 13.1 منٹ پر 98 فیصد A/2 فیصد B، اور 98 فیصد فیصد A/2 فیصد B 15 منٹ پر۔ بہاؤ کی شرح: 0.40 ملی لیٹر/منٹ؛ کالم درجہ حرارت: 40◦C؛ انجکشن کا حجم: 2 μl؛ خودکار انجکشن درجہ حرارت: 4◦C

ESI-QTRAP-MS/MS شرائط

ESI ٹربو آئن اسپرے انٹرفیس (Sciex Technologies, Framingham, MA, USA) سے لیس ایک ٹرپل کواڈروپول (QQQ) - لکیری آئن ٹریپ ماس اسپیکٹومیٹر (QTRAP, API 6500 QTRAP UHPLC-MS/MS) کے علاوہ QQQ سپیکٹرو میٹر کا اطلاق کیا گیا تھا۔ تجزیہ تجزیاتی حالات حسب ذیل تھے: آئن سپرے وولٹیج: پلس 5,500 V (مثبت آئن موڈ)/−4,500 V (منفی آئن موڈ)، پردے کی گیس: 35 psi، ماخذ درجہ حرارت: 400◦C، آئن سورس گیس 1: 60 psi، آئن سورس گیس 2: 60 psi، کمی کی صلاحیت: ±100 V. QQQ اسکینز کو متعدد ری ایکشن مانیٹرنگ (MRM) تجربات کے طور پر حاصل کیا گیا تھا جس میں تصادم گیس (نائٹروجن) کے ساتھ 5 psi پر سیٹ کیا گیا تھا۔

میٹابولائٹس کا معیار اور مقداری تجزیہ

میٹابولائٹس کے معیار اور مقداری تجزیے لیو ایٹ ال کے طریقوں کے مطابق کیے گئے تھے۔ (18)۔ پرائمری اور سیکنڈری ماس سپیکٹرو میٹری ڈیٹا کا خود ساختہ ہیومن میٹابولوم ڈیٹا بیس (MWDB) (Metware Biotechnology Co., Ltd. ووہان، چین) اور عوامی ڈیٹا بیس کی بنیاد پر قابلیت کے ساتھ تجزیہ کیا گیا۔ دریں اثنا، کچھ مادوں کے معیار کے تجزیے کی درستگی کو یقینی بنانے کے لیے، Na plus، NH plus 4، K plus، اور ions کے بار بار سگنلز سے مداخلت اور دوسرے نسبتاً بڑے مالیکیولز اور آاسوٹوپ سگنلز سے اخذ کردہ فریگمنٹ آئنوں کے بار بار سگنلز کو ہٹا دیا گیا۔ شناخت میٹابولائٹ ساختی تجزیہ عوامی ڈیٹا بیس (ماس بینک، KNApSAcK، HMDB، MoTo DB، اور METLIN) کے بارے میں کیا گیا تھا۔

میٹابولائٹ کوانٹیفیکیشن QQQ ماس اسپیکٹومیٹری کے MRM موڈ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ MRM موڈ میں، ہدف والے مادوں کے پیشگی آئنوں (والدین آئنوں) اور مختلف مالیکیولر وزن کے ساتھ دوسرے مادوں سے مماثل خارج آئنوں کو ابتدائی طور پر مداخلت کو ختم کرنے کے لیے کواڈروپول راڈ کا استعمال کرتے ہوئے پہلے اسکرین کیا گیا تھا۔ اس کے بعد پیشگی آئن تصادم کے چیمبر سے ٹوٹ کر آئنائزیشن کے بعد بہت سے فریگمنٹ آئرن بناتے ہیں، جنہیں QQQ کے ذریعے فلٹر کیا گیا تھا تاکہ مطلوبہ خصوصیات کے ساتھ سنگل فریگمنٹ آئنوں کو منتخب کیا جا سکے جبکہ غیر ہدف والے آئنوں سے مداخلت کو ختم کیا جا سکے۔ آخر میں، مختلف نمونوں کے میٹابولائٹ ماس سپیکٹرومیٹری ڈیٹا حاصل کرنے کے بعد، تمام مادوں کی ماس سپیکٹرم چوٹیوں کو مربوط کیا گیا، اور مختلف نمونوں میں ایک ہی میٹابولائٹ کی ماس سپیکٹرا چوٹیوں کو ملٹی کوانٹ ورژن 3 کا استعمال کرتے ہوئے مربوط اور درست کیا گیا۔0 .2 (ABSCIEX، Concord، Ontario، Canada)۔ متعلقہ میٹابولائٹ کے مشمولات کو کرومیٹوگرافک چوٹی ایریا انٹیگرلز کے طور پر پیش کیا گیا تھا۔

ڈیٹا پروسیسنگ اور تجزیہ

میٹابولک ڈیٹا پر آرتھوگونل جزوی کم سے کم مربع امتیازی تجزیہ (OPLS-DA) اور درجہ بندی کلسٹر تجزیہ (HCA) کا استعمال کرتے ہوئے کارروائی کی گئی۔ OPLS-DA کا استعمال ہر گروپ کے ساتھ امتیاز کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ یہ دیگر شماریاتی طریقوں سے کم ارتباط والے متغیرات کے لیے زیادہ حساس ہے (17)۔ OPLS-DA ماڈلز کی توثیق ایک ترتیب تجزیہ (200 بار) کے ذریعے کی گئی۔ ماڈل کو مستحکم سمجھا جاتا تھا جب ماڈل پیرامیٹرز (R2 اور Q2 ) دونوں 1 کے قریب تھے۔

میٹابولائٹس کی متغیر اہمیت پروجیکشن (VIP) اقدار کا حساب لگایا گیا۔ Cistanche deserticola کے مختلف تھرمل پروسیسنگ مراحل کے درمیان ہر جوڑے کے موازنہ کے لیے 10 سے زیادہ VIP اقدار اور 0.05 سے کم p-values ​​کے ساتھ کوئی بھی میٹابولائٹ منتخب کیا گیا تھا۔ مختلف میٹابولائٹس کی اسکریننگ کو آتش فشاں پلاٹ کی شکل میں دیکھا گیا تھا۔ R پیکیج (www.rproject.org/) کا استعمال کرتے ہوئے مختلف نمونوں کے درمیان میٹابولائٹ جمع کا تجزیہ کیا گیا۔ وین ڈایاگرام پروگرام ویب پر مبنی سمارٹ ڈایاگرام R (https://cloud.smartdraw.com/) کے مطابق بنایا گیا تھا۔ تجارتی ڈیٹا بیس، جیسا کہ کیوٹو انسائیکلوپیڈیا آف جینز اینڈ جینوم (KEGG) (https://www.kegg.jp/kegg/)، پب کیم (https://pubchem.ncbi.nlm. nih.gov/)، سمال مالیکیول پاتھ وے ڈیٹا بیس (SMPDB) (https://smpdb.ca/)، اور HMDB (https://hmdb.ca/)، تفریق میٹابولائٹس کی افزودگی کے تجزیہ اور میٹابولک راستے تلاش کرنے کے لیے استعمال کیے گئے تھے۔

نتائج اور بحث تھرمل پروسیسنگ کے دوران Cistanche Deserticola کے رنگ کی تبدیلیاں

تازہ، ابلی ہوئی اور خشک نمونوں کے درمیان Cistanche deserticola کے ظاہری رنگ میں فرق نمائندہ طور پر شکل 1 میں دکھایا گیا ہے۔ تازہ سے خشک نمونوں تک پروسیسنگ کے مرحلے میں، نمونوں کی ظاہری رنگت پیلے بھورے سے گہرے سیاہ میں بدل گئی۔ ، اور رنگ میں تاریکی زیادہ سے زیادہ واضح ہوتی گئی (متعلقہ L ∗ قدر 50.26 سے کم کر کے 24.90 کر دی گئی تھی)۔ Cistanche deserticola کی ظاہری تبدیلیاں بنیادی طور پر بھاپ کے عمل میں واقع ہوتی ہیں۔ میلارڈ کا رد عمل، جس کے دوران شکر تھرمل حالات میں امینو ایسڈ کے ساتھ رد عمل ظاہر کرتی ہے (22)، Cistanche deserticola کے پروسس شدہ rhizomes کے سیاہ رنگ کی ظاہری شکل کے لیے بہت زیادہ ذمہ دار ہوگی۔ پچھلی تحقیقی مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ میلارڈ ری ایکشن (23) میں پیشرو کو رنگین میں تبدیل کیا گیا تھا اور گہرے رنگ کے ساتھ مادے پیدا کیے گئے تھے۔ Polygonum multiflorum (24) اور Polygonatum cystoma (25) کے rhizomes کے بھاپ کے لیے پچھلے مطالعات میں بھی اسی طرح کے نتائج دیکھے گئے تھے۔ ابلی ہوئی نمونوں کی تاریکی خشک ہونے کے بعد مزید گہرا ہو گئی تھی۔ یہ رجحان شاید خشک کرنے کے عمل کے دوران روغن کی حراستی میں کمی کی وجہ سے تھا۔

خام اور تھرمل پروسیسڈ Cistanche Deserticola نمونوں میں میٹابولائٹس کا جائزہ

کوالٹی کنٹرول (QC) کے نمونے کا کل آئن کرومیٹوگرام (TIC) (تفتیش کیے گئے تمام نمونوں کا مرکب) اور اسی نمونے کے MRM موڈ میں کیمیکلز کے ملٹی پیک ڈٹیکشن پلاٹ کو ضمنی شکل 1 میں دکھایا گیا ہے۔ مختلف رنگوں کی چوٹیوں کی نمائندگی کی گئی ہے۔ نمونے میں مختلف اجزاء۔ جیسا کہ شکل 2 میں دکھایا گیا ہے، موجودہ مطالعہ (ضمنی جدول 1) میں Cistanche deserticola کے تازہ نمونوں میں کل 776 میٹابولائٹس کی نشاندہی کی گئی تھی، جنہیں 15 کلاسوں میں تقسیم کیا گیا تھا، جن میں 40 امینو ایسڈز اور مشتقات، 33 فینیلپروپینائڈز، 23 فلاوونائڈز، 68 فلیوون، 67 ٹیرپینز، 67 فینولز، 87 الکلائیڈز، 13 کاربوہائیڈریٹس، 28 نیوکلیوٹائیڈ، اور مشتقات، 5 الکوحل اور پولیول، 3 پیورین نیوکلیوسائیڈز، 15

کاربو آکسیلک تیزاب اور مشتقات، 14 نامیاتی تیزاب اور مشتقات، 12 فائٹو ہارمونز، اور 28 دیگر کیمیکل۔ ان میں، سب سے بڑا گروپ امینو ایسڈز اور ڈیریویٹوز کا تھا، جس کا متعلقہ مواد کل میٹابولائٹ مرکب کا 30.26 فیصد تھا۔ اس کے علاوہ، 10 قسم کے phenylethanoid glycosides، جیسے echinacoside اور verbascoside، کا پتہ چلا اور phenylpropanoids گروپ میں درجہ بندی کی گئی۔

HCA کے ذریعہ مختلف علاج گروپوں کے درمیان میٹابولائٹس کے جمع ہونے کے انداز کا تجزیہ کیا گیا۔ جیسا کہ شکل 3 میں دکھایا گیا ہے، Cistanche deserticola کے 107 شناخت شدہ میٹابولائٹس کو Euclidean فاصلے کی ریاضی کی بنیاد پر گرمی کے نقشوں میں کلسٹر کیا گیا تھا۔ تھرمل پروسیسنگ کے مختلف مراحل میں شناخت شدہ میٹابولائٹس کو ڈینڈرگرام کے مطابق تین کلسٹروں میں جمع کیا گیا تھا۔ روشن رنگ متعلقہ نمونے میں کسی خاص میٹابولائٹ کے اعلیٰ مواد کی نشاندہی کرتا ہے۔ HCA کے ہیٹ میپ نے تازہ اور ابلی ہوئی نمونوں کے درمیان ابلی اور خشک نمونوں کے مقابلے میں کثرت میں بڑے فرق کو ظاہر کیا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ Cistanche deserticola میں میٹابولائٹس بھاپ اور خشک ہونے کے مرحلے کے دوران مختلف تبدیلیاں کر سکتے ہیں، اور میٹابولائٹس کی اقسام اور مقداریں شامل ہیں۔ بھاپ کا عمل خشک کرنے والے عمل سے زیادہ ہے۔

مختلف تھرمل پروسیسنگ مراحل پر Cistanche Deserticola کا مختلف میٹابولائٹ تجزیہ

Cistanche deserticolas کے میٹابولائٹس پر ہر پروسیسنگ کے اثرات کی بہتر تفہیم کے لیے، OPLS-DA سکیٹر اسکورز جوڑے کے لحاظ سے موازنہ کرنے والے گروپس کو شکل 4A میں دکھایا گیا ہے، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ Cistanche deserticolas کو بھاپنے کے بعد تازہ، ابلی ہوئی اور خشک ہونے والی چیزیں نمایاں طور پر مختلف تھیں۔ مزید برآں، R2Y اور Q2 (جیسا کہ ضمنی شکل 2 میں دکھایا گیا ہے) اعلیٰ امتحانی اقدار کے ساتھ اشارہ کرتا ہے کہ یہ ماڈل اوور فٹنگ کے بغیر انتہائی قابل اعتماد تھا۔

Cistanche deserticola کو بھاپ لینے کے بعد تازہ، ابلی ہوئی اور خشک کے درمیان میٹابولائٹس کے اظہار کی سطح کو اسکرین کرنے کے لیے، آتش فشاں پلاٹ کا تجزیہ مزید تمام 776 میٹابولائٹس کے درمیان لاگو کیا گیا جو فولڈ چینج کے مطابق شناخت کیے گئے، VIP اقدار کے ساتھ مل کر تفریق کا اظہار کیا گیا۔ میٹابولائٹس اہم تفریق میٹابولائٹس کو اس معیار کے مطابق منتخب کیا گیا تھا کہ ایک گنا 2 سے زیادہ یا اس کے برابر یا اس سے کم یا اس کے برابر 0.5 کے ساتھ ایک VIP کے ساتھ 1 سے بڑا یا اس کے برابر ہوتا ہے۔ اسکریننگ کے نتائج کی وضاحت شکل 4B۔ آتش فشاں نقشے میں، ہر نقطہ ایک میٹابولائٹ کی نمائندگی کرتا ہے اور بکھرے ہوئے نقطوں کا رنگ حتمی اسکریننگ کے نتیجے کی نمائندگی کرتا ہے۔ سرخ رنگ ان میٹابولائٹس کی نمائندگی کرتا ہے جو نمایاں طور پر اپ ریگولیٹڈ (UR) ہیں، سبز رنگ ان نمایاں طور پر کم ریگولیٹڈ (DR) کی نمائندگی کرتا ہے، اور سرمئی ان غیر معمولی طور پر مختلف کی نمائندگی کرتا ہے۔ جیسا کہ شکل 4B میں دکھایا گیا ہے، تازہ بمقابلہ ابلی ہوئے گروپ میں 47 میٹابولائٹس (17 UR اور 30 ​​DR)، ابلی ہوئے بمقابلہ خشک گروپ میں 30 میٹابولائٹس (22 UR اور 8 DR)، اور تازہ بمقابلہ خشک گروپ میں 65 میٹابولائٹس۔ (29 UR اور 36 DR) کو نمایاں طور پر فرق کرنے کے لیے منتخب کیا گیا تھا۔ تازہ بمقابلہ ابلی ہوئے گروپ میں نمایاں طور پر مختلف میٹابولائٹس کی تعداد ابلی ہوئے بمقابلہ خشک گروپ میں ان سے زیادہ تھی، جو اس بات کی نشاندہی کرتی ہے کہ بھاپ کے عمل میں میٹابولائٹس پر اثر خشک کرنے کے عمل سے زیادہ ہے۔

Cistanche deserticola کے تھرمل پروسیسنگ کے دوران پیدا ہونے والے امتیازی میٹابولائٹس کو مزید درجہ بندی اور موازنہ کیا گیا۔ ان امتیازی طور پر ظاہر کردہ میٹابولائٹس کو 21 کلاسوں میں درجہ بندی کیا گیا تھا، بنیادی طور پر امینو ایسڈز اور ان کے مشتقات، flavonoids اور ان کے مشتقات، phenylpropanoids، alkaloids، terpenes، phenols، اور nucleotides اور ان کے مشتقات (ٹیبل 1)۔ تازہ بمقابلہ ابلی ہوئی گروپ میں، یہ پایا جا سکتا ہے کہ flavonoids (جیسے isoquercitrin، troxerutin، cyanidin، اور fisetin)، phenylpropanoids (جیسے کہ کلوروجینک ایسڈ، اور 3-(3,4-Dihydroxy4- {5}}میتھوکسی)-2-پروپینوک ایسڈ)، اور نیوکلیوٹائڈ اور ان کے مشتقات (uracil اور betaNicotinamide mononucleotide) نمایاں طور پر DR تھے، جبکہ امینو ایسڈ اور ان کے مشتقات (جیسے N6-Acetyl-L-lysine) , 1- Methy-L-histidine، اور L-Phenylalanine) نمایاں طور پر UR تھے۔

تاہم، ابلی ہوئی بمقابلہ خشک گروپ میں، اس قسم کے تفریق میٹابولائٹس کے اظہار کے رجحانات اس کے برعکس تھے۔ کچھ امینو اور ان کے مشتقات (جیسے N، N-Dimethylglycine)، نیوکلیوٹائڈ اور ان کے مشتقات (جیسے 2′ -Deoxyuridine؛ Deoxyuridine) نمایاں طور پر DR تھے، جب کہ زیادہ تر فینول (جیسے میتھائل گیلیٹ اور 4′ آکسائیل ریزورڈین)، flavonoids (جیسے isoquercitrin اور cyanidin)، phenylpropanoids (verbascoside)، اور terpenes (جیسے terpinolene اور furanone) نمایاں طور پر UR تھے۔ ان نتائج سے ظاہر ہوا کہ تھرمل پروسیسنگ کے دوران Cistanche deserticola کی کیمیائی ساخت میں تبدیلی آئی ہے، جو بنیادی طور پر flavonoids، phenylpropanoids، اور امینو ایسڈز کی تبدیلی میں جھلکتی ہے، اور ان اجزاء کے تبادلوں کا طریقہ کار مختلف پروسیسنگ مراحل میں مختلف ہوتا ہے۔

بھاپ اور خشک کرنے کے عمل کے دوران اعلی درجہ حرارت کا استعمال اس سے قبل ہائیڈرولیسس، ریڈوکس، آئیسومرائزیشن، متبادل، اور میٹابولائٹس کے دیگر تھرمو فزیکل اور کیمیائی رد عمل کو فروغ دینے کے لیے پایا گیا تھا (26)۔ اس تحقیق میں، یہ پایا گیا کہ میٹابولائٹس، جیسے کہ flavonoids اور phenylpropanoids، اپنے متعلقہ تازہ کے مقابلے ابلی ہوئی Cistanche deserticola میں نمایاں طور پر جمع تھے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ کچھ اہم جسمانی اور میٹابولک سرگرمیاں flavonoids اور phenylpropanoids کی ترکیب کا باعث بنتی ہیں۔ اعلی درجہ حرارت اور نمی کے تحت چالو. اس نتیجہ کی حمایت Peng et al کی رپورٹ سے بھی کی جا سکتی ہے۔ (10) جنہوں نے محسوس کیا کہ پی ایچ جی کے مواد (فینیلپروپینائڈز سے تعلق رکھتے ہیں) بھاپ لینے کے بعد بڑھ گئے۔ تاہم، بھاپ لینے کے بعد خشک نمونے میں ان اجزاء کے جمع ہونے سے نمایاں کمی واقع ہوئی، جس کی وجہ طویل مدتی خشک کرنے کے عمل کے دوران ان گرمی سے متعلق حساس اجزاء کے تھرمل انحطاط کو قرار دیا جا سکتا ہے۔ پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ فلیوونائڈ گلائکوسائڈز کو تھرمل حالات میں شوگر باڈیز اور فلاوونائڈ ایگلائیکونز میں گلایا جا سکتا ہے، اور خشک کرنے کے عمل کے دوران فلیوونائڈ کا نقصان مصنوعی طور پر درجہ حرارت اور خشک ہونے کے وقت سے متاثر ہوا تھا (26، 27)۔ امائنو ایسڈز اور ان کے مشتقات (N6-Acetyl-L-lysine، 1-Methy-L-histidine، اور phenylalanine) کی اپ گریجشن بھاپ کی پروسیسنگ کے دوران اعلی درجہ حرارت کو فروغ دینے والے پروٹین کی کمی سے منسوب ہے۔ اس کے علاوہ، یہ بھی دیکھا گیا کہ کچھ دیگر امینو ایسڈز اور ان کے ماخوذ N، N-Dimethylglycine، L-Kynurenine، glycine، serine، اور threonine DR تھے۔ ان امینو ایسڈز کے مواد میں کمی کا تعلق تھرمل انڈیسڈ میلارڈ ری ایکشن سے ہو سکتا ہے جس کے دوران شکر کو کم کرنا امینو ایسڈز کے ساتھ رد عمل ظاہر کرتا ہے جس سے 5-HMF پیدا ہوتا ہے، جس سے Cistanche deserticola (22) میں سیاہ رنگ کی شکل پیدا ہوتی ہے۔ .

تھرمل پروسیسنگ کے دوران cistanche deserticola کے سیکشن ظاہری رنگ کی تبدیلی کے نتائج نے اس مفروضے کی مزید تصدیق کی۔ لہذا، بھاپ کے دوران Cistanche deserticola کا سیاہ ہونا شاید امینو ایسڈ کے میٹابولزم سے متعلق تھا۔ وین ڈایاگرام کو تھرمل پروسیسنگ کے مختلف مراحل کے دوران Cistanche deserticola کے عام اور خصوصی میٹابولائٹس میں فرق کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ جیسا کہ شکل 4C میں دکھایا گیا ہے، مختلف موازنہ گروپوں کے درمیان مشترکہ اور منفرد دونوں میٹابولائٹس موجود ہیں۔ تازہ اور ابلی ہوئے گروپ کے درمیان اکیس مشترکہ میٹابولائٹس کا مشاہدہ کیا گیا، جبکہ تازہ اور خشک گروپ اور ابلی اور خشک گروپ کے درمیان بالترتیب صرف 5 اور 10 میٹابولائٹس مشترک پائے گئے۔ اس طرح، بالترتیب بھاپ اور خشک کرنے کے تھرمل پروسیسنگ مرحلے کے دوران Cistanche deserticola میں کل 23 اور 17 خصوصی میٹابولائٹس (p <0.05) دیکھے گئے۔ اس نتیجے نے مزید تصدیق کی کہ سٹینچ ڈیزرٹیکولا پروسیسنگ کے دوران میٹابولائٹس کی تبدیلی کے لیے بھاپ خاص طور پر اہم تھی۔

افزودگی کا تجزیہ اور کے ای جی جی پاتھ وے کے مختلف میٹابولائٹس کے اثرات کا تجزیہ

تازہ اور پروسیس شدہ نمونوں میں تفریق میٹابولائٹس (p < 0.05) کو KEGG، HMDB، اور PubChem آن لائن ڈیٹا بیس میں نقشہ بنایا گیا تھا، جس میں مالیکیولر تعامل، رد عمل، اور ریلیشن نیٹ ورکس، اور افزودگی کے نتائج کا علم ہوتا ہے۔ اور تفصیلی میٹابولک راستے ضمنی جدول 2 اور شکل 5 میں دکھائے گئے ہیں۔ جیسا کہ اعداد و شمار 5a1، اور a2 میں دکھایا گیا ہے، راستے کے اثرات سے فینیلپروپینائڈ بائیو سنتھیسس، فلاوونائڈ بایو سنتھیسس، ایلانائن میٹابولزم، ربوفلاوین میٹابولزم، ہائپو فلاوین میٹابولیزم، اور ٹاکورونائیڈ کی افزودگی کا پتہ چلتا ہے۔ Cistanche deserticola کی بھاپ کے دوران میٹابولزم۔ جبکہ، بھاپ کے بعد خشک ہونے کے عمل کے دوران، تفریق میٹابولائٹس کے میٹابولک راستے بنیادی طور پر گلائسین، سیرین، اور تھرونائن میٹابولزم، تھامین میٹابولزم، پیریمائڈائن میٹابولزم، اور غیر سیر شدہ فیٹی ایسڈ بائیو سنتھیسس پر مشتمل ہوتے ہیں۔

مزید برآں، ان دونوں جوڑے کے موازنہ کے درمیان کچھ میٹابولک راستے اوورلیپ ہوئے، جیسے نیکوٹینیٹ اور نیکوٹینامائڈ میٹابولزم، فینیلپروپینائڈ بایو سنتھیسس، اور فلاوونائڈ بائیو سنتھیسس، لیکن ان کی افزودگی کی سطح دونوں جوڑے کے مقابلے میں بہت مختلف تھیں۔ ان نتائج نے تجویز کیا کہ Cistanche deserticola کے بھاپ اور خشک کرنے کے عمل کے درمیان میٹابولائٹس کے تبادلوں کے راستے مختلف تھے، اور میٹابولک راستوں میں فرق تھرمل پروسیسنگ کے دوران امتیازی خصوصی میٹابولائٹس کی موجودگی میں فرق کی وضاحت کر سکتا ہے۔ یہ بائیو کیمیکل تبدیلیاں Cistanche deserticola کی ساخت پر تھرمل پروسیسنگ کے مراحل کے اثرات کو سمجھنے کے لیے استعمال کی جا سکتی ہیں۔

تھرمل پروسیسنگ کے دوران Cistanche deserticola کے اہم فعال اجزاء کی تبدیلی کو نمایاں کرنے کے لیے چار میٹابولک راستے (فینیلپروپینائڈ بائیو سنتھیسس، فلاوونائڈ بایو سنتھیسس، الانائن میٹابولزم، اور گلائسین، سیرین، اور تھرونائن میٹابولزم) کو کلیدی میٹابولائٹس کے طور پر منتخب کیا گیا تھا۔ موجودہ مطالعہ نے اشارہ کیا کہ فینیلپروپینائڈز اور فلیوونائڈز جمع ہوئے تھے لیکن تازہ اور خشک نمونوں کے مقابلے ابلی ہوئی سیستانچے ڈیزرٹیکولا میں امینو ایسڈ کو کم کیا گیا تھا۔ فینیلپروپینائڈ بائیو سنتھیٹک پاتھ وے فلاوونائڈز کے بائیو سنتھیٹک پاتھ وے کے اوپر کی طرف ہے۔ اسی طرح کے نتائج لیو ایٹ ال کے ذریعہ شائع کیے گئے تھے۔ (18) جنہوں نے بتایا کہ چاول کے پیلے ہونے کے عمل میں فینائل پروپینائیڈز کے جمع ہونے کی سطح میں عام چاول کے مقابلے میں نمایاں اضافہ ہوا ہے۔ Phenylpropanoids cinnamic acid سے ماخوذ ہیں، اور ان کا پیش خیمہ phenylalanine ہے، جسے گرم کرنے پر phenylalanine امونیا-lyase (PAL) کی سرگرمی کو چالو کرکے ترکیب کیا جا سکتا ہے (28)۔

پچھلے مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ فینیلپروپینائڈ راستہ coumarins، flavones، isoflavones، اور flavonols کی بایو سنتھیسز کی طرف لے جاتا ہے، جو پودوں کے دفاع کے لیے اہم ہتھیار ہیں (29)، اور بھاپ کے عمل میں شدید گرمی کے دباؤ کی وجہ سے سیل کی موت کو روکنے کے لیے، phenylpropanoid اعلی درجہ حرارت (30, 31) کی وجہ سے حیاتیاتی تناؤ کی وجہ سے راستے کو بڑھایا جاسکتا ہے۔ Flavonoids phenylpropanoids (32) سے ماخوذ اہم ثانوی میٹابولائٹس ہیں، اور ان کا جمع ہونا پودوں کو آکسیڈیٹیو نقصان سے بچا سکتا ہے جس سے پاک ریڈیکلز (33)۔ تازہ اور خشک Cistanche deserticola کے مقابلے میں، ابلی ہوئی Cistanche deserticola میں flavonoids کی اعلی بایو سنتھیسس بھاپ کے عمل کے دوران ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) (34, 35) کی حفاظت کے دوران گرمی کے بڑھتے ہوئے تناؤ سے منسلک ہو سکتی ہے۔ جیسا کہ اعداد و شمار 5b3، اور b4 میں دکھایا گیا ہے، امینو ایسڈ میٹابولزم نے Cistanche deserticola کی تھرمل پروسیسنگ میں اہم کردار ادا کیا۔ دواؤں کی جڑی بوٹیوں میں پائی جانے والی بھاپ کے بعد الانائن، گلائسین، سیرین، اور تھرونائن کے مواد کی تبدیلیوں کو میلارڈ ری ایکشن (36) کی موجودگی کی نشاندہی کرنے کے لیے استعمال کیا گیا ہے۔

اس کے باوجود، Cistanche deserticola steaming کے پیچیدہ عمل کی وجہ سے، Cistanche deserticola steaming کی ایک جامع تشخیص، جیسے کہ ظاہری شکل میں سیاہ ہونا، فعال مرکبات، اور میٹابولک بائیو مارکر، کی مزید تحقیق کی جانی چاہیے۔

نتیجہ

موجودہ مطالعے میں، Cistanche deserticola کے مختلف تھرمل پروسیسنگ مراحل میں فعال مرکبات کی تشکیل کے طریقہ کار کا مطالعہ کرنے کے لیے UHPLC-MS/MS پر مبنی وسیع پیمانے پر ہدف شدہ میٹابولومکس اپروچ کو استعمال کیا گیا تھا۔ موجودہ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ کچھ اہم میٹابولائٹس، جیسے فینیلپروپینائڈز اور فلاوونائڈز، کے بائیو سنتھیسز کو بھاپ کے عمل کے دوران نمایاں طور پر بڑھایا گیا تھا۔ ابلی ہوئی Cistanche deserticola میں امینو ایسڈ کے اظہار کی سطح کو بڑھایا گیا تھا، جو پرائمری اور سیکنڈری میٹابولائٹس کے درمیان تبدیلی کی نشاندہی کرتا ہے۔ اس کے علاوہ، Cistanche deserticola کی ظاہری شکل کا سیاہ ہونا بنیادی طور پر خشک ہونے کے بجائے بھاپ کے مرحلے میں ہوتا ہے، یہ خصوصیت امینو ایسڈ میٹابولزم کے راستے سے وابستہ ہے۔ تاہم، مندرجہ بالا میٹابولائٹس کی سطح خشک ہونے کے عمل کے دوران نمایاں طور پر کم ہو گئی، جس سے معلوم ہوتا ہے کہ فعال مرکبات کی تشکیل بنیادی طور پر Cistanche deserticola کے تھرمل پروسیسنگ کے دوران سٹیمنگ سٹیج میں ہوتی ہے۔ ہمارے بہترین علم کے مطابق، یہ پہلی بار ہے کہ تھرمل پروسیسنگ کے دوران فعال کمپاؤنڈ تبدیلیوں کے طریقہ کار اور Cistanche deserticola بلیکننگ میں ان کی اہم شراکت کو ظاہر کرنے کے لیے وسیع پیمانے پر ٹارگٹ میٹابولومک طریقہ استعمال کیا گیا۔ تاہم، فعال مرکبات کے بایو سنتھیسس اور تھرمل پروسیسنگ کے دوران ظاہری شکل کے سیاہ ہونے کے درمیان تعلق کی بہتر تفہیم کے لیے مزید تحقیقات کی ضرورت ہے۔

افزودگی کا تجزیہ اور کے ای جی جی پاتھ وے کے مختلف میٹابولائٹس کے اثرات کا تجزیہ

تازہ اور پروسیس شدہ نمونوں میں تفریق میٹابولائٹس (p < 0.05) کو KEGG، HMDB، اور PubChem آن لائن ڈیٹا بیس میں نقشہ بنایا گیا تھا، جس میں مالیکیولر تعامل، رد عمل، اور ریلیشن نیٹ ورکس، اور افزودگی کے نتائج کا علم ہوتا ہے۔ اور تفصیلی میٹابولک راستے ضمنی جدول 2 اور شکل 5 میں دکھائے گئے ہیں۔ جیسا کہ اعداد و شمار 5a1، اور a2 میں دکھایا گیا ہے، راستے کے اثرات سے فینیلپروپینائڈ بائیو سنتھیسس، فلاوونائڈ بایو سنتھیسس، ایلانائن میٹابولزم، ربوفلاوین میٹابولزم، ہائپو فلاوین میٹابولیزم، اور ٹاکورونائیڈ کی افزودگی کا پتہ چلتا ہے۔ Cistanche deserticola کی بھاپ کے دوران میٹابولزم۔ جبکہ، بھاپ کے بعد خشک ہونے کے عمل کے دوران، تفریق میٹابولائٹس کے میٹابولک راستے بنیادی طور پر گلائسین، سیرین، اور تھرونائن میٹابولزم، تھامین میٹابولزم، پیریمائڈائن میٹابولزم، اور غیر سیر شدہ فیٹی ایسڈ بائیو سنتھیسس پر مشتمل ہوتے ہیں۔ مزید برآں، ان دونوں جوڑے کے موازنہ کے درمیان کچھ میٹابولک راستے اوورلیپ ہوئے، جیسے نیکوٹینیٹ اور نیکوٹینامائڈ میٹابولزم، فینیلپروپینائڈ بایو سنتھیسس، اور فلاوونائڈ بائیو سنتھیسس، لیکن ان کی افزودگی کی سطح دونوں جوڑے کے مقابلے میں بہت مختلف تھیں۔ ان نتائج نے تجویز کیا کہ Cistanche deserticola کے بھاپ اور خشک کرنے کے عمل کے درمیان میٹابولائٹس کے تبادلوں کے راستے مختلف تھے، اور میٹابولک راستوں میں فرق تھرمل پروسیسنگ کے دوران امتیازی خصوصی میٹابولائٹس کی موجودگی میں فرق کی وضاحت کر سکتا ہے۔ یہ بائیو کیمیکل تبدیلیاں Cistanche deserticola کی ساخت پر تھرمل پروسیسنگ کے مراحل کے اثرات کو سمجھنے کے لیے استعمال کی جا سکتی ہیں۔

کے ای جی جی تشریح اور افزودگی کے تجزیے کی بنیاد پر، چار میٹابولک راستے (فینیلپروپینائڈ بائیو سنتھیسس، فلاوونائڈ بائیو سنتھیسس، ایلانائن میٹابولزم، اور گلائسین، سیرین، اور تھرونائن میٹابولزم) کو کلیدی میٹابولائٹس کے طور پر منتخب کیا گیا تھا تاکہ سی کے فعال ڈیسرٹونسٹانسٹول کے تبادلوں کو نمایاں کیا جاسکے۔ پروسیسنگ (اعداد و شمار 5b1، b2)۔ موجودہ مطالعہ نے اشارہ کیا کہ فینیلپروپینائڈز اور فلیوونائڈز جمع ہوئے تھے لیکن تازہ اور خشک نمونوں کے مقابلے ابلی ہوئی سیستانچے ڈیزرٹیکولا میں امینو ایسڈ کو کم کیا گیا تھا۔ فینیلپروپینائڈ بائیو سنتھیٹک پاتھ وے فلاوونائڈز کے بائیو سنتھیٹک پاتھ وے کے اوپر کی طرف ہے۔ اسی طرح کے نتائج لیو ایٹ ال کے ذریعہ شائع کیے گئے تھے۔ (18) جنہوں نے بتایا کہ چاول کے پیلے ہونے کے عمل میں فینائل پروپینائیڈز کے جمع ہونے کی سطح میں عام چاول کے مقابلے میں نمایاں اضافہ ہوا ہے۔ Phenylpropanoids cinnamic acid سے ماخوذ ہیں، اور ان کا پیش خیمہ phenylalanine ہے، جسے گرم کرنے پر phenylalanine امونیا-lyase (PAL) کی سرگرمی کو چالو کرکے ترکیب کیا جا سکتا ہے (28)۔

پچھلے مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ فینیلپروپینائڈ راستہ coumarins، flavones، isoflavones، اور flavonols کی بایو سنتھیسز کی طرف لے جاتا ہے، جو پودوں کے دفاع کے لیے اہم ہتھیار ہیں (29)، اور بھاپ کے عمل میں شدید گرمی کے دباؤ کی وجہ سے سیل کی موت کو روکنے کے لیے، phenylpropanoid اعلی درجہ حرارت (30, 31) کی وجہ سے حیاتیاتی تناؤ کی وجہ سے راستے کو بڑھایا جاسکتا ہے۔ Flavonoids phenylpropanoids (32) سے ماخوذ اہم ثانوی میٹابولائٹس ہیں، اور ان کا جمع ہونا پودوں کو آکسیڈیٹیو نقصان سے بچا سکتا ہے جس سے پاک ریڈیکلز (33)۔

تازہ اور خشک Cistanche deserticola کے مقابلے میں، ابلی ہوئی Cistanche deserticola میں flavonoids کی اعلی بایو سنتھیسس بھاپ کے عمل کے دوران ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں (ROS) (34, 35) کی حفاظت کے دوران گرمی کے بڑھتے ہوئے تناؤ سے منسلک ہو سکتی ہے۔ جیسا کہ اعداد و شمار 5b3، اور b4 میں دکھایا گیا ہے، امینو ایسڈ میٹابولزم نے Cistanche deserticola کی تھرمل پروسیسنگ میں اہم کردار ادا کیا۔ دواؤں کی جڑی بوٹیوں میں پائی جانے والی بھاپ کے بعد الانائن، گلائسین، سیرین، اور تھرونائن کے مواد کی تبدیلیوں کو میلارڈ ری ایکشن (36) کی موجودگی کی نشاندہی کرنے کے لیے استعمال کیا گیا ہے۔ اس کے باوجود، Cistanche deserticola steaming کے پیچیدہ عمل کی وجہ سے، Cistanche deserticola steaming کی ایک جامع تشخیص، جیسے کہ ظاہری شکل میں سیاہ ہونا، فعال مرکبات، اور میٹابولک بائیو مارکر، کی مزید تحقیق کی جانی چاہیے۔

نتیجہ

موجودہ مطالعے میں، Cistanche deserticola کے مختلف تھرمل پروسیسنگ مراحل میں فعال مرکبات کی تشکیل کے طریقہ کار کا مطالعہ کرنے کے لیے UHPLC-MS/MS پر مبنی وسیع پیمانے پر ہدف شدہ میٹابولومکس اپروچ کو استعمال کیا گیا تھا۔ موجودہ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ کچھ اہم میٹابولائٹس، جیسے فینیلپروپینائڈز اور فلاوونائڈز، کے بائیو سنتھیسز کو بھاپ کے عمل کے دوران نمایاں طور پر بڑھایا گیا تھا۔ ابلی ہوئی Cistanche deserticola میں امینو ایسڈ کے اظہار کی سطح کو بڑھایا گیا تھا، جو پرائمری اور سیکنڈری میٹابولائٹس کے درمیان تبدیلی کی نشاندہی کرتا ہے۔ اس کے علاوہ، Cistanche deserticola کی ظاہری شکل کا سیاہ ہونا بنیادی طور پر خشک ہونے کے بجائے بھاپ کے مرحلے میں ہوتا ہے، یہ خصوصیت امینو ایسڈ میٹابولزم کے راستے سے وابستہ ہے۔ تاہم، مندرجہ بالا میٹابولائٹس کی سطح خشک ہونے کے عمل کے دوران نمایاں طور پر کم ہو گئی، جس سے معلوم ہوتا ہے کہ فعال مرکبات کی تشکیل بنیادی طور پر Cistanche deserticola کے تھرمل پروسیسنگ کے دوران سٹیمنگ سٹیج میں ہوتی ہے۔ ہمارے بہترین علم کے مطابق، یہ پہلی بار ہے کہ تھرمل پروسیسنگ کے دوران فعال کمپاؤنڈ تبدیلیوں کے طریقہ کار اور Cistanche deserticola بلیکننگ میں ان کی اہم شراکت کو ظاہر کرنے کے لیے وسیع پیمانے پر ٹارگٹ میٹابولومک طریقہ استعمال کیا گیا۔ تاہم، فعال مرکبات کے بایو سنتھیسس اور تھرمل پروسیسنگ کے دوران ظاہری شکل کے سیاہ ہونے کے درمیان تعلق کی بہتر تفہیم کے لیے مزید تحقیقات کی ضرورت ہے۔

ڈیٹا کی دستیابی کا بیان

مطالعہ میں پیش کی گئی اصل شراکتیں مضمون/ضمنی مواد میں شامل ہیں، مزید استفسارات متعلقہ مصنفین کو بھیجے جا سکتے ہیں۔

مصنف کی شراکتیں۔

ZA نے تجرباتی ڈیزائن کیا، تجربات کیے، ڈیٹا تیار کیا، اور یہ مخطوطہ لکھا۔ YZ نے میٹابولومکس تجزیہ کیا۔ XL نے شماریاتی تجزیہ فراہم کیا۔ WS نے ڈیٹا پروسیسنگ اور تفتیش کی۔ فنڈنگ ​​کا حصول، مجموعی فریم ورک، اور تحریری جائزہ YL نے مکمل کیا۔ تمام مصنفین نے مضمون میں تعاون کیا اور پیش کردہ ورژن کی منظوری دی۔

فنڈنگ

اس کام کو گوانگ ڈونگ صوبے کے محکمہ سائنس اور ٹیکنالوجی (نمبر 2018B020241003) کی مالی مدد حاصل تھی۔

سپلیمنٹری میٹریل

اس مضمون کے لیے اضافی مواد آن لائن پایا جا سکتا ہے: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fnut.2021۔ 742511/مکمل#ضمنی مواد

حوالہ جات

1. وانگ ایکس، وانگ جے، گوان ایچ، سو آر، لوو ایکس، ایس یو ایم، وغیرہ۔ الٹرا پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی-کواڈروپول ٹائم آف فلائٹ ماس سپیکٹرومیٹری اور 1،1-ڈفینائل-2-پکریل ہائیڈرازیل پر مبنی پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے کاشت شدہ Cistanche deserticola کے مختلف حصوں کی کیمیائی پروفائلز اور اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں کا موازنہ۔ مالیکیولز۔ (2017) 22:2011۔ doi: 10.3390/molecules22112011

2. Fu Z، Fan X، Wang X، Gao X. Cistanches Herba: اس کی کیمسٹری، فارماکولوجی، اور فارماکوکینیٹکس پراپرٹی کا ایک جائزہ۔ جے ایتھنوفرماکول۔ (2018) 219:233–47۔ doi: 10.1016/j.jep.2017.10.015

3. Piwowarczyk R, Carlón L, Kasinska J, Tofil S, Furma ´nczyk P. ´ Iberian parasitic plant Cistanche phelypæa (Orobanchaceae) میں جرگوں کے لیے امرت گائیڈز اور لینڈنگ پلیٹ فارم کی مائکرو مورفولوجیکل انٹراسپیسیفک تفریق۔ بوٹ لیٹ۔ (2016) 163:47–55۔ doi: 10.1080/12538078.2015.1124287

4. جیانگ Y، Tu P. Cistanche پرجاتیوں میں کیمیائی اجزاء کا تجزیہ۔ J Chromatogr a. (2009) 1216:1970-9۔ doi: 10.1016/j.chroma.2008۔ 07.031

5. Li Z, Lin H, Gu L, Gao J, Tzeng C. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): روایتی چینی ادویات کے بہترین دوا ساز تحفوں میں سے ایک۔ فرنٹ فارماکول۔ (2016) 7:41۔ doi: 10.3389/fphar.2016.00041

6. سانگ Y، Zeng K، Jiang Y، Tu P. Cistanches Herba، ایک خطرے سے دوچار پرجاتیوں سے لے کر چینی ادویات کے ایک بڑے برانڈ تک۔ Med Res Rev. (2021) 5:1–39۔ doi: 10.1002/med.21768

7. Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T. Cistanche deserticola سے phenylethanoids کے اینٹی آکسیڈیٹیو اثرات۔ بائیول فارماک بیل۔ (1996) 19:1580–5۔ doi: 10.1248/bob.19.1580

8. وانگ ایل، ڈنگ ایچ، یو ایچ، ہان ایل، لائی کیو، ژانگ ایل، وغیرہ۔ Cistanches herba: کیمیائی اجزاء اور فارماسولوجیکل اثرات۔ چن ہربل میڈ۔ (2015) 7:135–42۔ doi: 10.1016/S1674-6384(15)60017-X

9. Peng F, Xu R, Wang X, Xu C, Liu T, Chen J. دھوپ میں خشک ہونے کے دوران دواؤں کے استعمال کے لیے پوسٹ ہارویسٹ Cistanche deserticola کے معیار پر بھاپ کے عمل کا اثر۔ بائول فارم بیل۔ (2016) 39:2066–70۔ doi: 10.1248/bob.b16- 00250

10. Peng F, Chen J, Wang X, Xu C, Liu T, Xu R. سٹیم پروسیسنگ کے ذریعے Cistanche deserticola کے ٹکڑوں میں phenylethanoid glycosides کی سطحوں، antioxidant کی سرگرمی اور دیگر کوالٹی خصوصیات میں تبدیلیاں۔ کیم فارم بیل۔ (2016) 64:1024–30۔ doi: 10.1248/CPB.c16-00033

11. Zou P, Song Y, Lei W, Li J, Tu P, Jiang Y. مختلف حصوں کی تفریق اور Cistanche deserticola کے لیے ایک نئے پروسیسنگ ورک فلو کی ترقی کے لیے 1 H NMR پر مبنی میٹابولومکس کا اطلاق۔ Acta Pharm Sin B. (2017) 7:647–56۔ doi: 10.1016/j.apsb.2017.07.003

12. Zheng J، Wu Z، Yang N، Zhou K، Hu W، Ou S، et al. پروسیسنگ کے دوران بلیو بیری سے بھری پیسٹری میں کیمیائی تغیرات پر وسیع پیمانے پر ہدف بنایا گیا UHPLC-MS/MS میٹابولومک تجزیہ۔ غذائیت میں فرنٹیئرز. (2020) 7:569172۔ doi: 10.3389/fnut.2020.569172

13. لیو ڈبلیو، گانا کیو، کاو وائی، ژی این، لی زیڈ، جیانگ وائی، وغیرہ۔ 1H NMR پر مبنی نان ٹارگٹڈ سے لے کر LC – MS پر مبنی ٹارگٹڈ میٹابولومکس کی حکمت عملی چار سیستانچے پرجاتیوں کے درمیان گہرائی سے کیمومائل موازنہ کے لیے۔ جے فارماسیوٹ بایومیڈ۔ (2019) 162:16–27۔ doi: 10.1016/j.jpba.2018.09.013

14. وانگ ایچ، ہوا جے، یو کیو، لی جے، وانگ جے، ڈینگ وائی، وغیرہ۔ وسیع پیمانے پر ہدف شدہ میٹابولومک تجزیہ سبز چائے کی پروسیسنگ کے دوران غیر مستحکم اور غیر مستحکم میٹابولائٹس میں متحرک تبدیلیوں کو ظاہر کرتا ہے۔ فوڈ کیم۔ (2021) 363:130131۔ doi: 10.1016/j.foodchem.2021.130131

15. Koistinen VM، Da Silva AB، Abrankó L، Low D، Villalba RG، Barberán FT، et al. پلانٹ فوڈ بائیو ایکٹیو مرکبات اور ان کے میٹابولائٹس پر انٹر لیبارٹری کوریج ٹیسٹ ماس اسپیکٹومیٹری پر مبنی غیر ہدف شدہ میٹابولومکس کے ذریعہ۔ میٹابولائٹس۔ (2018) 8:46۔ doi: 10.3390/metabo8030046

16. Santin M, Lucini L, Castagna A, Chiodelli G, Hauser M, Ranieri A. کٹائی کے بعد UV-B تابکاری آڑو کے پھل میں میٹابولائٹ پروفائل کو تبدیل کرتی ہے۔ پوسٹ ہارویسٹ Biol Tec. (2018) 139:127– 34. doi: 10.1016/j.postharvbio.2018.02.001

17. Nie H، Chen H، Li G، Su K، Song M، Duan Z، et al. چینی پانی کے شاہ بلوط میں فلیوونائڈز اور فینیلپروپینائڈ مرکبات کا موازنہ مختلف طریقوں سے کیا جاتا ہے۔ فوڈ کیم۔ (2021) 335:127662۔ doi: 10.1016/j.foodchem.2020.127662

18. Liu Y، Liu J، Wang R، Sun H، Li M، Strappe P، et al. چاول کے پیلے ہونے کے طریقہ کار کو سمجھنے کے لیے زرد ہونے کے عمل سے پیدا ہونے والے ثانوی میٹابولائٹس کا تجزیہ۔ فوڈ کیم۔ (2021) 342:128204۔ doi: 10.1016/j.foodchem.2020.128204

19. وو ایل، ہوانگ ایکس، لیو ایس، لیو جے، گوو وائی، سن وائی، وغیرہ۔ انٹیگریٹڈ وسیع پیمانے پر ٹارگٹڈ میٹابولوم اور ڈی آئی اے پروٹوم تجزیہ کا استعمال کرکے مینوفیکچرنگ کے عمل کے دوران اولونگ چائے کی خصوصیت والے غیر اتار چڑھاؤ والے کیمیکل کی تشکیل کے طریقہ کار کو سمجھنا۔ فوڈ کیم۔ (2020) 310:125941۔ doi: 10.1016/j.foodchem.2019.125941

20. Xie Y، Li X، Zhang Y، Zheng Z، Huang L، Liu D، et al. گیسٹروڈیا ایلاٹا پر تیز نمی والی گرم ہوا کے اثرات: بھاپ کی ڈگری، وزن میں کمی، ساخت، خشک کرنے والی حرکیات، مائیکرو اسٹرکچر، اور فعال اجزاء۔ فوڈ بائیو پروڈ پروسیس۔ (2021) 127:255–65۔ doi: 10.1016/j.fbp.2021.03.005

21. چن ڈبلیو، گونگ ایل، گوو زیڈ، وانگ ڈبلیو، ژانگ ایچ، لیو ایکس، وغیرہ۔ بڑے پیمانے پر ٹارگیٹڈ میٹابولائٹس کی بڑے پیمانے پر پتہ لگانے، شناخت کرنے اور مقدار درست کرنے کے لیے ایک نیا مربوط طریقہ: رائس میٹابولومکس کے مطالعہ میں اطلاق۔ مول پلانٹ۔ (2013) 6:1769–80۔ doi: 10.1093/mp/sst080

22. Arena S, Renzone GD, Ambrosio C, Salzano AM, Scaloni A. ڈیری مصنوعات اور میلارڈ کا رد عمل: مربوط پروٹومکس اسٹڈیز کے ذریعے خوراک کی وسیع خصوصیات کے لیے ایک امید افزا مستقبل۔ فوڈ کیم۔ (2017) 219:477–89۔ doi: 10.1016/j.foodchem.2016.09.165

23. Rizzi G P. رنگین میلارڈ ری ایکشن مصنوعات کی کیمیائی ساخت۔ فوڈ Rev Int. (1997) 13:1–28۔ doi: 10.1080/87559129709541096

24. لیو زیڈ، چاو زیڈ، لیو وائی، سونگ زیڈ، لو اے میلارڈ ری ایکشن پولی گونم ملٹی فلورم کی جڑ کے بھاپ کے عمل میں شامل ہے۔ پلانٹا میڈ۔ (2009) 75:84–8۔ doi: 10.1055/s-0028-1088349

25. جن جے، لاؤ جے، زو آر، ہی ڈبلیو، کن وائی، ژونگ سی، وغیرہ۔ HPLC–QTOF–MS/MS کے ذریعے Polygonatum cystoma کے rhizomes کی بھاپ پروسیسنگ کے دوران saccharides کی بیک وقت شناخت اور متحرک تجزیہ۔ مالیکیولز۔ (2018) 23:2855۔ doi: 10.3390/molecules23112855

26. وان ایکس سی۔ چائے کی بائیو کیمسٹری (تیسرا ایڈیشن)۔ بیجنگ: چائنا ایگریکلچرل پبلشنگ ہاؤس (2003)۔ ص 41–5۔

27. Xu Y، Xiao Y، Lagnika C، Li D، Liu C، Jiang N، et al. مختلف خشک کرنے والے طریقوں سے مشروط غذائیت کی خصوصیات، اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت، اور گوبھی کی جسمانی خصوصیات کا تقابلی جائزہ (Brassica oleracea var. Capitate var L)۔ فوڈ کیم۔ (2020) 309:124935۔ doi: 10.1016/j.foodchem.2019.06.002

28. Dixon RA، Paiva N L. تناؤ سے متاثرہ phenylpropanoid میٹابولزم۔ پلانٹ سیل۔ (1995) 7:1085-97۔ doi: 10.1105/tpc.7.7.1085

29. گپتا آر، من سی ڈبلیو، کم ایس ڈبلیو، وانگ وائی، اگروال جی کے، رکوال آر، وغیرہ۔ ایک مربوط پروٹومکس اور میٹابولومکس اپروچ کا استعمال کرتے ہوئے براؤن بمقابلہ پیلے رنگ کے سویا بین کے بیجوں کے بیجوں کی تقابلی تحقیقات۔ پروٹومکس۔ (2015) 15:1706–16۔ doi: 10.1002/pmic.201400453

30. Commisso M، Toffali K، Strasser P، Stocchero M، Ceoldo S، Baldan B، et al. گاجر کے خلیوں کی ثقافتوں میں گرمی کے تناؤ کی رواداری پر فینیلپروپینائڈ مرکبات کا اثر۔ فرنٹ پلانٹ سائنس (2016) 7:1439۔ doi: 10.3389/fpls.2016.01439

31. واحد اے، گیلانی ایس، اشرف ایم، فولاد ایم۔ پودوں میں حرارت کی رواداری: ایک جائزہ۔ Environ Exp Bot. (2007) 61:199–223۔ doi: 10.1016/j.envexpbot.2007.05.011

32. وو ایکس، یوآن جے، لوو اے، چن وائی، فین وائی۔ خشک سالی کا تناؤ اور دوبارہ پانی دینے سے ڈینڈروبیم مونیلیفارم میں ثانوی میٹابولائٹس اور انزائم کی سرگرمی میں اضافہ ہوتا ہے۔ Ind Crop Prod. (2016) 94:385–93۔ doi: 10.1016/j.indcrop.2016.08.041

33. وانگ وائی، رین ڈبلیو، لی وائی، سو وائی، ٹینگ وائی، کرسٹی پی، وغیرہ۔ الفالفا (میڈیکاگو سیٹیوا) کی جڑوں کے اخراج پر ڈی (2-ایتھیل ہیکسیل) فیتھلیٹ تناؤ کے اثرات کو کھولنے کے لیے غیر ہدف شدہ میٹابولومک تجزیہ۔ سائنس کل ماحول. (2019) 646:212– 9. doi: 10.1016/j.scitotenv.2018.07.247

34. جیا ایکس، سن سی، لی جی، لی جی، چن جی۔ فزیالوجی، اینٹی آکسیڈیٹیو انزائمز اور ریڈکس آسٹراگلی کے سیکنڈری میٹابولائٹس پر ترقی پسند خشک سالی کے دباؤ کے اثرات۔ ایکٹا فزیول پلانٹ۔ (2015)، 37:262۔ doi: 10.1007/s11738-015- 2015-4

35. Paupière MJ, Müller F, Li H, Rieu I, Tikunov YM, Visser R GF, et al. ٹماٹر کے جرگ کی نشوونما اور گرمی کے تناؤ کے ردعمل کا غیر ہدف شدہ میٹابولومک تجزیہ۔ پلانٹ Reprod. (2017) 30:81–94۔ doi: 10.1007/s00497-017-0301-6

36. چن جے، ہو سی. سیرین/تھریونائن/گلوٹامین-رائبوز/گلوکوز/فرکٹوز ماڈل سسٹمز میں اتار چڑھاؤ پیدا کرنے کا موازنہ۔ جے ایگر فوڈ کیم۔ (1999) 47:643–7۔ doi: 10.1021/jf980771a

مفادات کا تصادم:

مصنفین کا اعلان ہے کہ یہ تحقیق کسی تجارتی یا مالی تعلقات کی عدم موجودگی میں کی گئی تھی جسے مفادات کے ممکنہ تصادم کے طور پر سمجھا جا سکتا ہے۔

پبلیشر کا نوٹ:

اس مضمون میں بیان کیے گئے تمام دعوے صرف مصنفین کے ہیں اور ضروری نہیں کہ وہ ان کی وابستہ تنظیموں، یا ناشر، ایڈیٹرز اور جائزہ لینے والوں کی نمائندگی کریں۔ کوئی بھی پروڈکٹ جس کا اس مضمون میں جائزہ لیا جا سکتا ہے، یا دعویٰ جو اس کے مینوفیکچرر کے ذریعے کیا جا سکتا ہے، ناشر کی طرف سے اس کی ضمانت یا توثیق نہیں کی جاتی ہے۔

کاپی رائٹ © 2021 Ai, Zhang, Li, Sun, and Liu. یہ ایک کھلا رسائی والا مضمون ہے جسے Creative Commons Attribution License (CC BY) کی شرائط کے تحت تقسیم کیا گیا ہے۔ دوسرے فورمز میں استعمال، تقسیم، یا پنروتپادن کی اجازت ہے، بشرطیکہ اصل مصنف (مصنف) اور کاپی رائٹ کے مالک (مالک) کو کریڈٹ دیا گیا ہو اور اس جریدے میں اصل اشاعت کا حوالہ دیا گیا ہو، قبول شدہ تعلیمی مشق کے ذریعے۔ کسی بھی استعمال، تقسیم، یا پنروتپادن کی اجازت نہیں ہے جو ان شرائط کی تعمیل نہ کرتا ہو۔

For more information:1950477648nn@gamil.com