F344 چوہوں میں 2-(l-menthoxy) ایتھنول کا ایک 13-ہفتہ ذیلی دائمی زہریلا مطالعہ

تعارف

2-(1-مینتھوکسیایتھنول (CAS No. 38618-23-4) ایک واضح اور بے رنگ مائع ہے جس میں خصوصیت کی بو ہے اور اسے ذائقہ کے ایجنٹ کے طور پر بڑے پیمانے پر استعمال کیا جاتا ہے۔ مشترکہ FAO/WHO ماہرین کی کمیٹی برائے فوڈ ایڈیٹیو (JECFA) نے جائزہ لیا ہے 2-(ایل میتھوکسیایتھنول بطور ذائقہ پیدا کرنے والے ایجنٹ کے طور پر درجہ بندی کیا جاتا ہے ساختی طور پر مینتھول سے متعلق1. ذائقہ دار ایجنٹوں کی ساختی کلاس کی بنیاد پر، 2-(ایل میتھوکسیایتھنول کو کلاس I کو تفویض کیا گیا تھا۔ ریاستہائے متحدہ اور یورپ میں، انٹیک کی سطح 2-(ایل میتھوکسی)انسانوں کے ذریعہ ایتھنول کا تخمینہ بالترتیب 12 ug/person/day اور 0.01 ug/person/day تھا، دونوں 1,800 ug/person/day کی کلاس I کی حد سے نیچے۔ ان تخمینوں کی بنیاد پر، یہ سمجھا جاتا ہے کہ 2-(1-مینتھوکسی) ایتھنول ذائقہ دار ایجنٹ کے طور پر معمول کے استعمال کے دوران حفاظتی خدشات پیش نہیں کر سکتا۔

جنسی فعل کو بہتر بنانے کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا PHGS75% ECH 30% ACT 12%

As part of the risk assessment, it has been revealed that 2-(1-menthoxy)ethanol was not mutagenic in the Ames test, and the only in vivo study performed to date was an oral acute toxicity study in male and female rats (LD50: >2،000 mg/kg جسمانی وزن [BW])1۔ ذائقہ دار ایجنٹ کے طور پر 2-(1-مینتھوکسی) ایتھنول کے استعمال کے باوجود، اس مرکب کی بار بار خوراک کے زہریلے ہونے کے بارے میں محدود ڈیٹا دستیاب ہے۔ ہماری لیبارٹری نے چوہا ماڈل 2–7 میں ہر زمرے کے نمائندہ ذائقہ دار ایجنٹوں سمیت متعدد فوڈ ایڈیٹوز کی زہریلا کی تحقیقات کی ہیں۔ زہریلے پروفائل کو واضح کرنے اور غیر مشاہدہ شدہ منفی اثرات کی سطح (NOAEL) قائم کرنے کے لیے، ہم نے 2-(1-مینتھوکسی) ایتھنول کا ایک 13-ہفتہ ذیلی دائمی زہریلا مطالعہ کیا، جو زبانی طور پر گیویج کے ذریعہ F344 چوہوں کو دیا جاتا ہے۔

مواد اور طریقے

ٹیسٹ کیمیکل

2-(1-مینتھوکسی)ایتھنول (لاٹ نمبر 5I0002، پاکیزگی 99.9%) Takasago Int کے ذریعہ تیار کردہ۔ کارپوریشن (ٹوکیو، جاپان) کو معیارات اور تشخیص کے ڈویژن، فوڈ سیفٹی، وزارت صحت، محنت اور بہبود، جاپان نے جاپان فلیور اینڈ فریگرنس میٹریلز ایسوسی ایشن (ٹوکیو، جاپان) کے تعاون سے فراہم کیا تھا۔ اگرچہ ٹیسٹ مادہ آپٹیکل آئیسومر (CAS نمبر 38618-23-4) کے مرکب کے طور پر فراہم کیا گیا تھا، لیکن مینوفیکچرر کے ذریعہ اس کی تصدیق l-enantiomer (CAS No. 75443-64-0) ​​کے طور پر کی گئی تھی۔ مکئی کے تیل (واکو پیور کیمیکل انڈسٹریز، اوساکا، جاپان) کے ساتھ زبانی گیجج کو 2-(1-مینتھوکسی) ایتھنول کے پانی میں حل پذیری اور اتار چڑھاؤ کی وجہ سے انتظامیہ کے راستے کے طور پر منتخب کیا گیا تھا۔ 2-(1-مینتھوکسی) ایتھنول کے حل روزانہ تیار کیے جاتے تھے، انتظامیہ سے فوراً پہلے۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 2 گھنٹے کے لیے ذخیرہ کرنے کے بعد، 4، 40 اور 400 ملی گرام/ایم ایل محلول میں 2-(1-مینتھوکسی) ایتھنول کے بقایا تناسب کی تصدیق 96.8%، 99.8%، اور 96.5% کے طور پر ہوئی۔ بالترتیب، گیس کرومیٹوگرافی کے ذریعے (جاپان انسپیکشن ایسوسی ایشن آف فوڈ اینڈ فوڈ انڈسٹری انوائرمنٹ، ٹوکیو، جاپان)۔

تجرباتی جانور

مجموعی طور پر، 40 نر اور 40 خواتین مخصوص پیتھوجین سے پاک چوہے (F344/DuCrlCrlj، 5 ہفتے) چارلس ریور لیبارٹریز جاپان (یوکوہاما، جاپان) سے خریدے گئے تھے اور ایک ہفتے کے لیے اکلیمیشن کے بعد استعمال کیے گئے تھے۔ مطالعہ کے دوران، جانوروں کو پولی کاربونیٹ کے پنجروں میں نرم چپ بستر کے ساتھ رکھا گیا تھا، روشنی/تاریک چکر (12 گھنٹے)، وینٹیلیشن (ہوا کے تبادلے کی شرح 18 گنا/ گھنٹہ)، درجہ حرارت ( 24 ± 1 ڈگری)، اور رشتہ دار نمی (55 ± 5%)۔ پنجرے اور چپ بستر ہفتے میں دو بار تبدیل کیے جاتے تھے۔ ہر جانور کو نلکے کے پانی اور بنیادی خوراک (CRF-1; Oriental Yeast, Tokyo, Japan) تک مفت رسائی حاصل تھی۔ تجربے کے آغاز میں، جانوروں کو 10 نر اور مادہ چوہوں کے چار گروپوں میں تصادفی طور پر مختص کیا گیا تھا، جس کی بنیاد پر ٹیسٹ کیمیکل سے علاج شروع کرنے سے قبل جسمانی وزن کی پیمائش کی گئی تھی۔

مطالعہ ڈیزائن

ابتدائی {{0}} دن کے مطالعہ میں 2-(1-مینتھوکسی) ایتھنول کو 0، 200، 400، اور 800 ملی گرام/کلوگرام BW/ کی خوراکوں پر دیا گیا دن، دونوں جنسوں کے تمام علاج شدہ گروپوں میں مطلق اور رشتہ دار جگر کے وزن میں نمایاں اضافہ ہوا (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔ ان نتائج کی بنیاد پر، ہم نے موجودہ وقت میں نر اور مادہ دونوں چوہوں کے لیے 0، 15، 60، اور 250 mg/kg BW/day کی 2-(1-menthoxy) ایتھنول خوراکیں منتخب کیں۔ 13} ہفتہ زہریلا مطالعہ۔

عام حالات اور اموات کا روزانہ جائزہ لیا جاتا تھا۔ جسمانی وزن کے ساتھ ساتھ فراہم کردہ اور بقایا غذا کی مقدار، تجرباتی مدت کے دوران ہفتہ میں ایک بار ماپا گیا۔ علاج مکمل کرنے پر تمام چوہوں کو راتوں رات روزہ رکھا گیا، اور ہیماٹولوجی اور سیرم بائیو کیمسٹری کے لیے خون کے نمونے اسوفلورین کا استعمال کرتے ہوئے گہری سانس کی اینستھیزیا کے تحت پیٹ کی شہ رگ سے جمع کیے گئے۔ مطالعہ کا ڈیزائن خوراک کے اضافے کے لیے نامزد کردہ رہنما خطوط اور جاپان کے فوڈ ایڈیٹیو کے استعمال کے معیارات پر نظر ثانی کے لیے تھا (1996) اور اسے نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ سائنسز، جاپان کی اینیمل کیئر اینڈ یوٹیلائزیشن کمیٹی نے منظور کیا۔

ہیماتولوجی اور سیرم بائیو کیمسٹری

ProCyte Dx خودکار ہیماتولوجی تجزیہ کار (IDEXX لیبارٹریز، ویسٹ بروک، ME، USA) کا استعمال کرتے ہوئے مندرجہ ذیل ہیماتولوجیکل پیرامیٹرز کا تجزیہ کیا گیا: سفید خون کے خلیوں کی گنتی (WBC)، سرخ خون کے خلیوں کی گنتی (RBC)، ہیموگلوبن کا ارتکاز (HGB)، hematocrit (HCT)، مطلب کارپسکولر حجم (MCV)، مطلب کارپسکولر ہیموگلوبن (MCH)، مطلب کارپسکولر ہیموگلوبن کا ارتکاز (MCHC)، پلیٹلیٹ کاؤنٹ (PLT)، اور ڈیفرینشل لیوکوائٹ سیل، بشمول نیوٹروفیلز (Neut)، لیمفوسائٹس (Lymph)، monocytes (Mono)، eosinophils (Eosino)، اور basophils (Baso)۔ سیرم بائیو کیمیکل تجزیہ Oriental Yeast کے ذریعہ درج ذیل پیرامیٹرز کے لیے کیا گیا تھا: کل پروٹین (TP)، البومین (Alb)، البومین/گلوبلین تناسب (A/G)، کل بلیروبن (Bil)، گلوکوز، کل کولیسٹرول (T-Chol)، ٹرائگلیسرائڈ (TG)، یوریا نائٹروجن (BUN)، کریٹینائن (Cre)، کیلشیم (Ca)، غیر نامیاتی فاسفورس (IP)، سوڈیم (Na)، پوٹاشیم (K)، کلورین (Cl)، aspartate aminotransferase (AST)، الانائن امینوٹرانسفریز (ALT)، الکلائن فاسفیٹیس (ALP)، اور -glutamyl transpeptidase (-GTP)۔

اعضاء کا وزن اور ہسٹوپیتھولوجیکل تشخیص

تمام جانوروں کی مکمل نیکراپسی کی گئی اور دماغ، تھامس، پھیپھڑے، دل، تلی، جگر، ایڈرینل غدود، گردے، خصیے اور بیضہ دانی کا وزن کیا گیا۔ یہ اعضاء، نیز ریڑھ کی ہڈی کے ٹشوز، ٹرائیجیمنل اعصاب، پٹیوٹری غدود، ناک کی گہا، لعاب کے غدود، زبان، غذائی نالی، ٹریچیا، شہ رگ، تھائرائڈ گلینڈ، پیراتھائرائڈ گلینڈ، لبلبہ، معدہ، چھوٹی اور بڑی آنتیں اور ذیلی آنتیں لمف نوڈس، اندام نہانی، بچہ دانی، پیشاب کی مثانہ، پروسٹیٹ غدود، سیمینل ویسیکلز، ایپیڈیڈیمس، فیمر اور بون میرو کے ساتھ اسٹرنم، کشیرکا، کنکال کے پٹھے، اسکائیٹک اعصاب، جلد، اور ممری غدود، 10٪ میں مقرر کیے گئے تھے۔ اس کے بعد، پیرافین کے ایمبیڈڈ حصوں کو ہسٹوپیتھولوجیکل امتحان کے لیے ہیماتوکسیلین اور eosin کے ساتھ تیار اور داغ دیا گیا تھا۔ ہارڈیرین غدود کے ساتھ خصیے اور آنکھیں بالترتیب بوئن کے فکسٹیو اور ڈیوڈسن کے محلول میں طے کی گئیں۔ ہڈیوں کے ٹشوز، بشمول ناک کی گہا، کشیرکا، سٹرنم، اور فیمر، کو 10% فارمک ایسڈ اور 10% بفرڈ فارملین کے مرکب کا استعمال کرتے ہوئے 2 ہفتوں تک ختم کیا گیا۔ ہسٹوپیتھولوجیکل تشخیص کنٹرول گروپ میں جانوروں سے حاصل کردہ تمام ٹشوز کے لئے کیا گیا تھا اور گروپ نے سب سے زیادہ خوراک دی جب تک کہ علاج سے متعلق کوئی گھاووں کا مشاہدہ نہ کیا جائے۔

PHGS75% ECH 30% ACT 12% قوت مدافعت کو بہتر بنانے کے لیے قدرتی CISTANCHE TUBULOSA

2u-globulin کے لیے امیونو ہسٹو کیمسٹری

نر چوہوں میں، گردے میں 2u-globulin کے جمع ہونے کی جانچ پیرافین ایمبیڈڈ حصوں کے امیونو ہسٹو کیمیکل تجزیہ کے ذریعے کی گئی۔ اینٹیجن کی بازیافت کے لئے ، ہر گروپ میں 5 چوہوں سے حاصل کردہ حصوں کو کمرے کے درجہ حرارت پر 1 منٹ کے لئے پروٹینیس K (DAKO، Glostrup، ڈنمارک) کے ساتھ لگایا گیا تھا۔ اینڈوجینس پیرو آکسیڈیز سرگرمی کو غیر فعال کرنے کے لیے تمام حصوں کو کمرے کے درجہ حرارت پر 10 منٹ کے لیے 3% H2O2/ میتھانول محلول میں ڈبو دیا گیا۔ 10% نارمل خرگوش سیرم کے ساتھ غیر مخصوص رد عمل کو روکنے کے بعد، حصوں کو 2uglobulin کے لیے ایک بنیادی اینٹی باڈی کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا (1:400؛ اینٹی rat 2u-globulin اینٹی باڈی؛ R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) راتوں رات 4 ڈگری 8 پر۔ اینٹی باڈی بائنڈنگ کا تصور VectaStain Elite ABC Kit (ویکٹر لیبارٹریز، برلنگیم، CA، USA) اور 3,3′-diaminobenzidine کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ تمام حصوں کا مقابلہ ہیماتوکسیلین سے کیا گیا تھا۔

شماریاتی تجزیہ

تجرباتی مدت کے دوران جسمانی وزن کے اعداد و شمار کی قدروں میں تغیرات کے ساتھ ساتھ ہیماتولوجی، سیرم بائیو کیمسٹری اور اعضاء کے وزن کے لیے بارٹلیٹ کے ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے یکسانیت کا اندازہ لگایا گیا۔ تغیرات کا یک طرفہ تجزیہ اور بالترتیب کرسکل والس ٹیسٹ کو یکساں اور متضاد ڈیٹا کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ اعداد و شمار کے لحاظ سے اہم اختلافات کا تعین کرنے میں، ڈنیٹ کے متعدد موازنہ ٹیسٹ کو کنٹرول اور علاج کے گروپوں کا موازنہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا۔ ہسٹوپیتھولوجیکل واقعات اور درجات کے موازنہ کا تجزیہ بالترتیب فشر کے عین امکانی ٹیسٹ اور مان-وٹنی کے یو ٹیسٹ کو استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ P اقدار<0.05 were considered statistically significant.

نتائج

زندگی میں پیرامیٹرز، ہیماتولوجی، اور سیرم بائیو کیمسٹری

تجرباتی مدت کے دوران کوئی اہم طبی علامات نوٹ نہیں کی گئیں، اور تمام جانور طے شدہ نیکروپسی تک زندہ رہے۔ مزید برآں، نر اور مادہ چوہوں (تصویر 1A اور B) میں جسمانی وزن اور روزانہ کھانے کی مقدار میں کوئی خاص فرق نہیں دیکھا گیا۔

ہیماتولوجی اور سیرم بائیو کیمسٹری کا ڈیٹا بالترتیب ٹیبلز 1 اور 2 میں دکھایا گیا ہے۔ ہیماتولوجیکل تجزیوں سے پتہ چلتا ہے کہ HGB، HCT، MCV، اور MCH میں نمایاں کمی واقع ہوئی ہے اور نر چوہوں میں PLT میں اضافہ ہوا ہے جو 250 mg/kg BW/day 2-(1-menthoxy) ایتھنول (ٹیبل 1) کے زیر انتظام ہیں۔ سیرم بائیو کیمسٹری میں، TP، T-Col، اور Ca میں نمایاں اضافہ اور Bil اور ALP میں کمی 250 mg/kg گروپ (ٹیبل 2) کے مردوں میں نوٹ کی گئی۔ 60 اور 250 mg/kg گروپ کے مردوں میں Cre میں نمایاں اضافہ اور A/G میں کمی نوٹ کی گئی۔ خواتین میں، Ca میں نمایاں اضافہ اور ALP میں کمی 60 اور 250 mg/kg گروپوں میں ریکارڈ کی گئی، جب کہ 250 mg میں T-Col اور کم A/G، Bil، TG، AST، اور ALT کا پتہ چلا۔ /کلوگرام گروپ۔ اگرچہ TG میں نمایاں اضافہ اور Cl میں کمی 60 mg/kg کے زیر انتظام مردوں میں دیکھی گئی، لیکن خوراک کے کسی بھی تعلق کی کمی نے تجویز کیا کہ یہ اختلافات ٹیسٹ مادہ کی نمائش سے وابستہ نہیں تھے۔

اعضاء کا وزن

اعضاء کے وزن کے اعداد و شمار کا خلاصہ جدول 3 میں دیا گیا ہے۔ 250 ملی گرام/کلوگرام گروپ (ٹیبل 3) کی دونوں جنسوں میں مطلق اور متعلقہ جگر کے وزن میں نمایاں اضافہ ہوا ہے۔ 60 mg/kg گروپ کے مردوں میں جگر کے رشتہ دار وزن میں نمایاں اضافہ دیکھا گیا۔ مردوں میں، مطلق اور رشتہ دار گردے کے وزن میں 60 اور 250 mg/kg گروپوں میں نمایاں اضافہ ہوا ہے۔ مرد 250 ملی گرام/کلوگرام گروپ میں، ایڈرینل غدود کے مطلق اور رشتہ دار وزن اور تلی اور خصیوں کے رشتہ دار وزن میں نمایاں اضافہ نوٹ کیا گیا۔

ہسٹوپیتھولوجی اور امیونو ہسٹو کیمسٹری

ہسٹوپیتھولوجیکل اور امیونو ہسٹو کیمیکل نتائج کے لئے ڈیٹا کا بالترتیب ٹیبلز 4 اور 5 میں خلاصہ کیا گیا ہے۔ ہسٹوپیتھولوجیکل نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ eosinophilic granules (Fig. 2A–D)، بیسوفیلک ٹیوبلز، اور ہائیلین کاسٹ کے ساتھ ساتھ گردے میں فوکل انٹرسٹیشل سوزش کے جمع ہونے کی فریکوئنسی، تمام مرد علاج گروپوں میں جب کنٹرول کے مقابلے میں نمایاں طور پر بڑھ گئی تھی۔ گروپ (ٹیبل 4)۔ امیونو ہسٹو کیمیکل تجزیوں کی بنیاد پر، ٹیسٹ مادہ کے ساتھ علاج کیے گئے نر چوہوں نے قربت والے نلیوں کے اپکلا خلیات میں 2u-globulin immunoreactivity میں اضافہ پیش کیا، جس سے خوراک پر انحصار کا واضح مظاہرہ ہوتا ہے (تصویر 2E–H) (ٹیبل 5)۔

necropsy میں، 250 mg/kg گروپ میں ایک نر چوہے نے ہسٹولوجیکل طور پر خصوصیت والے نیفروبلاسٹوما کی وجہ سے دائیں گردے میں شدید اضافہ دکھایا۔ اگرچہ زیادہ تر چوہوں کے تناؤ میں نیفروبلاسٹوما غیر معمولی ہے9، اس معاملے کو اتفاقی سمجھا جاتا تھا، کیونکہ کسی دوسرے جانور نے اس طرح کے زخم نہیں پیش کیے تھے۔ اس کے علاوہ، زبانی سرطان پیدا کرنے والے مطالعے میں، مرد F344/DuCrlCrlj چوہوں میں اچانک نیفروبلاسٹوما کے واقعات مبینہ طور پر 0–2.0%10 کے درمیان تھے۔ اگرچہ دوسرے اعضاء میں متعدد گھاووں کا وقفے وقفے سے پتہ چلا تھا، لیکن ان گھاووں کے واقعات میں علاج پر منحصر کوئی اہم تبدیلیاں ظاہر نہیں ہوئیں۔

بحث

آج تک، 24 ذائقہ دار ایجنٹس، بشمول 2-(1-مینتھوکسی) ایتھنول، کو JECFA نے ساختی طور پر مینتھول سے متعلق مادوں کے طور پر جانچا ہے، اور سبھی کو موجودہ تخمینی سطحوں پر "کوئی حفاظتی تشویش نہیں" کے طور پر درج کیا گیا ہے۔ انٹیک 1، 11۔ 2-(1-مینتھوکسی) ایتھنول کو ایلی سائکلک الکوحل یا ایتھرز کے ذیلی گروپ میں درجہ بندی کیا جاتا ہے اور اسے بنیادی طور پر گلوکورونک ایسڈ کے ساتھ جوڑا جاتا ہے، جس کے بعد پیشاب کا اخراج ہوتا ہے۔ اگرچہ چوہوں میں ان مادوں کی زبانی LD50 قدریں نسبتاً زیادہ ہیں، تاہم بار بار خوراک کے زہریلے مطالعہ کے اعداد و شمار محدود ہیں۔ ایک 13-ہفتے کی بار بار خوراک کے زہریلے مطالعہ سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ مینتھائل پائرولائڈون کاربو آکسیلیٹ (CAS نمبر 68127-22-0)، ایک مرکب ساختی طور پر مینتھول سے متعلق ہے، جو مرد اور عورت میں جگر اور گردے کے بڑھتے ہوئے وزن سے منسلک ہو سکتا ہے۔ وستار چوہے ۔ نر چوہوں کے قریبی نلیوں میں 2u-globulin کا ​​جمع ہونا بھی 1,111 mg/kg BW/day کی خوراک پر دیکھا گیا، اور NOAEL کا تعین 109 mg/kg BW/day1 کے طور پر کیا گیا۔

موجودہ 13-ہفتہ 2-(1-مینتھوکسی) ایتھنول کے ذیلی دائمی زہریلے مطالعہ میں، عام حالت، جسمانی وزن، اور کھانے کی مقدار میں کوئی زہریلا تبدیلیاں نہیں دیکھی گئیں۔ ہیماتولوجیکل تشخیص کے بعد، ہم نے HGB میں کمی (96.6% کنٹرول اوسط اقدار)، HCT (96.3%)، MCV (98.4%)، اور MCH (98.2%) اور مردوں میں PLT (111%) میں اضافہ دیکھا۔ 250 ملی گرام/کلو گرام گروپ، جسے 2-(1-مینتھوکسی) ایتھنول علاج کے زہریلے اثرات سمجھا جاتا تھا۔ دونوں مطلق (دونوں جنسوں میں 115٪) اور رشتہ دار (مردوں میں 119٪ اور خواتین میں 111٪) جگر کے وزن میں 250 ملی گرام / کلوگرام گروپوں میں دونوں جنسوں میں نمایاں اضافہ ہوا۔ اگرچہ جگر میں کوئی ہسٹوپیتھولوجیکل تبدیلیاں نہیں ہوئیں، سیرم T-Col کی بڑھتی ہوئی سطح (مردوں میں 110% اور خواتین میں 121%) اور TP (مردوں میں 105%) اور TG میں کمی (خواتین میں 60.1%) 250 میں۔ mg/kg گروپس جگر میں لپڈ میٹابولزم اور پروٹین کی ترکیب سے وابستہ زہریلے تبدیلیوں کی نشاندہی کرتے ہیں۔ HGB اور MCH میں کمی اور مردوں میں PLT، T-Chol، اور TP میں کمی اور TG میں کمی اور دونوں جنسوں میں مطلق اور رشتہ دار جگر کے وزن میں اضافہ کا بھی پتہ چلا، 28- دن کے ابتدائی مطالعہ میں شماریاتی اہمیت کے ساتھ (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا )، اس بات کی تصدیق کرتے ہوئے کہ یہ تبدیل شدہ ہیماتولوجیکل اور سیرم بائیو کیمیکل پیرامیٹرز، نیز جگر کے وزن، واقعاتی نہیں تھے بلکہ مادہ سے متعلق اثرات کی جانچ کرتے تھے۔ اس کے برعکس، موجودہ مطالعہ میں مرد 60 ملی گرام/کلو گرام گروپ میں جگر کے رشتہ دار وزن میں نمایاں اضافہ مطلق وزن میں اضافے یا متعلقہ بائیو کیمیکل پیرامیٹرز میں تبدیلی کے ساتھ نہیں تھا، یہ تجویز کرتا ہے کہ یہ اضافہ ایک انکولی تبدیلی تھی۔

جنسی فعل کو بہتر بنانے کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا PHGS75% ECH 30% ACT 12%

مردانہ 250 ملی گرام/کلوگرام گروپ میں ایڈرینل غدود کے مطلق (120%) اور رشتہ دار (118%) وزن کو ٹیسٹ کیمیکل سے وابستہ سمجھا جاتا تھا۔ مزید برآں، دونوں جنسوں میں ایڈرینل غدود کے بڑھے ہوئے مطلق اور رشتہ دار وزن نے 28- دن کے ابتدائی مطالعے میں واضح خوراک پر انحصار ظاہر کیا (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)، جو ٹیسٹ کیمیکل ٹریٹمنٹ کے ساتھ تعلق کی نشاندہی کرتا ہے۔ اگرچہ ایڈرینل ہائپر ٹرافی تناؤ کے نتیجے میں ہو سکتا ہے، لیکن موجودہ اور ابتدائی دونوں مطالعات میں تناؤ کا کوئی نتیجہ نہیں ملا، جیسا کہ جسمانی وزن میں کمی یا تھائمس اور دیگر لمفائیڈ اعضاء کی ایٹروفی۔ چونکہ steroidogenesis سے متعلق خامروں کی روک تھام کے معاملات میں خراب گلوکوکورٹیکائیڈ کی پیداوار کے ساتھ بھی ایڈرینل غدود میں کوئی ہسٹوپیتھولوجیکل تبدیلیاں نہیں ہوسکتی ہیں، اس امکان کو خارج نہیں کیا جاسکتا کہ ایڈرینل غدود کے وزن میں اضافہ ایک زہریلا نتیجہ ہے۔ اس کے برعکس، مردانہ 250 ملی گرام/کلو گرام گروپ میں تلی اور خصیوں کے بڑھے ہوئے رشتہ دار وزن، جو ابتدائی مطالعہ میں نہیں دیکھے گئے، ہسٹوپیتھولوجیکل زخموں کی عدم موجودگی یا مطلق وزن میں نمایاں طور پر اضافہ کی وجہ سے زہریلے طور پر غیر اہم سمجھا جاتا تھا۔ اسی طرح، سیرم بائیو کیمسٹری نے A/G میں کمی اور دونوں جنسوں میں Ca میں اضافے کا انکشاف کیا، جس کو کوئی زہریلا اہمیت نہیں سمجھا جاتا تھا، اس بات پر غور کرتے ہوئے کہ متعلقہ پیرامیٹرز میں کوئی اسامانیتا نہیں پائی گئی۔ مزید برآں، دونوں جنسوں میں Bil اور ALP کی سطح میں کمی اور خواتین میں AST اور ALT میں کمی متوقع زہریلے اثرات کے برعکس تھی اور اسے معنی خیز نہیں سمجھا جاتا تھا۔

دائمی نیفروپیتھی جس کی خصوصیات بیسوفیلک نلیاں، ہائیلین کاسٹ، اور فوکل بیچوالا سوزش تمام علاج شدہ گروہوں کے مردوں میں شماریاتی اہمیت کے ساتھ دیکھی گئی۔ اس کے علاوہ، مردانہ 60 اور 250 mg/kg گروپوں میں سیرم کری اور مطلق اور رشتہ دار گردے کے وزن کا پتہ چلا۔ خواتین کے علاج کے گروپوں میں یہ تبدیلیاں نہیں دیکھی گئیں۔ ان صورتوں میں، proximal tubular epithelial خلیات میں eosinophilic granules کے جمع ہونے کی ڈگری کو خوراک پر منحصر انداز میں بڑھایا گیا تھا۔ ان دانے داروں کی تصدیق امیونو ہسٹو کیمسٹری کے ذریعہ 2u-globulin کے طور پر کی گئی تھی، جو 2u-globulin nephropathy کی موجودگی کی نشاندہی کرتی ہے۔ 2u-Globulins بعض کیمیکلز، جیسے d-limonene سے منسلک ہوتے ہیں، lysosomes میں جمع ہوتے ہیں اور proximal tubules میں eosinophilic یا hyaline granules9 کے طور پر دیکھے جاتے ہیں۔ یہ جمع اپکلا خلیوں کو نقصان پہنچا سکتا ہے، جس سے دائمی ترقی پسند نیفروپیتھی اور اس کے نتیجے میں ٹیومر کی تشکیل ہوتی ہے۔ اس طرح، اگرچہ نر چوہوں کے گردوں میں 2u-globulin nephropathy سے وابستہ 2-(1-menthoxy) ایتھنول کے لیے NOAEL کی شناخت نہیں کی گئی تھی، لیکن اس قسم کی نیفروپیتھی مبینہ طور پر نر چوہوں کے لیے مخصوص ہے اور اس طرح انسان سے متعلق نہیں ہے۔ خطرے کی تشخیص 13. 2u-globulin کے جمع ہونے سے متعلق میکانزم کے ذریعے ثالثی کے ذریعے گردوں کی ناکامی کا بڑھتا ہوا خطرہ انتہائی ناممکن ہے، کیونکہ یہ پروٹین انسانوں میں غائب ہے14۔ لہذا، مردوں میں دائمی نیفروپیتھی سے وابستہ تبدیلیوں کو NOAEL کے تعین سے خارج کرنا مناسب سمجھا گیا۔

آخر میں، موجودہ 13-ہفتے کے ذیلی دائمی زہریلے مطالعہ نے یہ ظاہر کیا کہ 250 ملی گرام/کلوگرام BW/دن 2-(1-مینتھوکسی) ایتھنول کے علاج سے ہیماتولوجی، سیرم بائیو کیمسٹری، اور اعضاء کے وزن میں زہریلی تبدیلیاں ہوئیں۔ نر اور مادہ F344 چوہوں میں۔ مشاہدہ شدہ نتائج کی بنیاد پر، 2-(1-مینتھوکسی) ایتھنول کا NOAELدونوں جنسوں کے لیے 60 mg/kg BW/day کے طور پر جانچا گیا۔

جنسی فعل کو بہتر بنانے کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا PHGS75% ECH 30% ACT 12%