Fibrosis میں Interleukin (IL) کے لیے ایک نیا کردار

رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

حصہ Ⅰ: نیوکلیئر IL‑33 فبرو بلاسٹس کی ابتدائی تبدیلی کو ایکسٹرا سیلولر میٹرکس سیکریٹنگ فینو ٹائپ میں روکتا ہے۔

FrancescaGatti، Sobuj Mia، Clara Hammarström & et al.

انٹرلییوکن(IL)-33 ایک سائٹوکائن ہے جو ثالثی کرتی دکھائی دیتی ہے۔فائبروسساس کے رسیپٹر ST2 (IL(انٹرلییوکن){{0}R/ILiRL1)۔ تاہم، یہ ایک پروٹین بھی ہے جسے ترکیب کے بعد سیل نیوکلئس میں ترتیب دیا جاتا ہے، جہاں یہ کرومیٹن فولڈنگ کو متاثر کرتا دکھائی دیتا ہے۔ یہاں ہم نیوکلیئر IL کے لیے ایک نیا کردار بیان کرتے ہیں۔(انٹرلییوکن)-مورین میں فبروبلاسٹ فینوٹائپ کو منظم کرنے میں 33گردہفائبروسسیکطرفہ ureteral رکاوٹ کے ذریعہ کارفرما۔ IL کی نقلی پروفائلنگ(انٹرلییوکن)-33-لگیشن کے 24 گھنٹے بعد گردے کی کمی سے فائبروجینک جینز کے بہتر اظہار اور ایکسٹرا سیلولر میٹرکس کی تشکیل اور دوبارہ تشکیل میں شامل جین سیٹوں کی افزودگی کا انکشاف ہوا۔ یہ تبدیلیاں IL کے انٹرا سیلولر اثرات پر انحصار کرتی ہیں۔(انٹرلییوکن)-33 کیونکہ انہیں L.33 کو غیر جانبدار کرنے والے اینٹی باڈی کے ساتھ علاج کے ذریعے دوبارہ نہیں بنایا گیا جو IL کو روکتا ہے(انٹرلییوکن)-33R/ST2L رسیپٹر سگنلنگ اور نہ ہی انہیں L-33R/ST2-گردوں کی کمی میں دیکھا گیا۔ lL-33 کے انٹرا سیلولر فنکشن کو مزید دریافت کرنے کے لیے، ہم نے انسانی فبرو بلاسٹس کے ٹرانسکرپشن پروفائلز قائم کیے، یہ مشاہدہ کرتے ہوئے کہ IL-33 کے دستک نے ٹرانسکرپشن پروفائل کو سوزش سے ایک myofibroblast فینوٹائپ کی طرف متوجہ کیا، جو COL3Al کی اعلی سطحوں میں جھلکتا ہے۔ ، COL5A1 اور ٹرانسجیلن پروٹین، نیز IL6، CXCL8، CLL7، اور CCL8 کے نچلے اظہار کی سطح۔ آخر میں، ہمارے نتائج بتاتے ہیں کہ جوہری IL(انٹرلییوکن)-فبرو بلوسٹس میں 33 ابتدائی منافع بخش ردعمل کو کم کرتا ہے جب تک کہ مستقل محرکات، جیسا کہ UUO کے ذریعہ نافذ کیا گیا ہے، اس حفاظتی طریقہ کار کو اوور رائیڈ نہیں کر سکتا۔

انٹرلییوکن-33 (IL-33/IL(انٹرلییوکن)1F1l) کا رکن ہے۔interleukin-1 انتہائی خاندان جس نے ایک قابل ثالث کے طور پر کافی توجہ حاصل کی ہے۔فائبروسسترقی اس دلچسپی کا زیادہ تر حصہ IL کے بار بار لگائے جانے والے انجیکشن کو دیکھ کر بڑھایا گیا۔(انٹرلییوکن)-33، ٹرانس میبرن ریسیپٹر ST2 (IL(انٹرلییوکن)33RJ/IL(انٹرلییوکن)1RL1)، حوصلہ افزائی کیٹینیئسفائبروسس' اور اس IL کا مشاہدہ کرکے(انٹرلییوکن)-33-کی کمی نے کاربن ٹیٹراکلورائڈ سے متاثرہ جگر کو کافی حد تک کم کر دیافائبروسس. درحقیقت، IL(انٹرلییوکن)-33 فروغ دے سکتا ہے۔فائبروسسمنافع بخش IL پیدا کرکے(انٹرلییوکن)-13 قسم 2 کے پیدائشی لمفائیڈ خلیات (ILC2) اور T مددگار 2 لیمفوسائٹس سے۔

رینل انٹرسٹیشلفائبروسساور parenchymal نلی نما خلیوں کا نقصان دائمی گردوں کی بیماریوں کے عام نتائج اور بیماری کے بڑھنے کے اچھے پیش گو ہیں۔ دو مختلف ماؤس ماڈلز سے تیار کردہ موجودہ ڈیٹا اس مفروضے کی تائید کرتا ہے کہ IL(انٹرلییوکن)-33 گردوں کی پیتھالوجی میں بھی حصہ ڈالتا ہے۔فائبروسس: یکطرفہ ureteral obstruction (UUO) میں، چن ایٹ ال نے دونوں IL میں پیرنچیمل نقصان اور بڑھا ہوا اپیتھیلیل پھیلاؤ کی اطلاع دی۔(انٹرلییوکن)-33- اور ST2-کمی والے چوہوں'، اور رینل اسکیمیا ریپرفیوژن میں، لیانگ ایٹ ال۔ IL کی روک تھام کو ظاہر کیا۔(انٹرلییوکن)گھلنشیل IL کی انتظامیہ کے ذریعہ -33 سگنلنگانٹرلییوکن)-33 رسیپٹر (sST2) بھی کم ہو گیا۔فائبروسس.

رپورٹس جنہوں نے IL کی فائبروجینک خصوصیات کو حل کیا ہے۔(انٹرلییوکن)-33 کو عام طور پر ایک طریقہ کار کے پیش نظر انجام دیا جاتا ہے اور اس کی تشریح کی جاتی ہے جس کے ذریعے IL(انٹرلییوکن)-33، دباؤ والے یا خراب خلیوں سے نکلا، اس کے رسیپٹر کے ایکسٹرا سیلولر ڈومین سے منسلک ہوتا ہے۔ اس کے برعکس، IL کی چھانٹی۔(انٹرلییوکن)-33 ترکیب کے بعد سیل نیوکلئس تک- اور ریسیپٹر سے آزاد کرومیٹن فولڈنگ کو متاثر کرنے کی اس کی صلاحیت سے پتہ چلتا ہے کہ IL-33 بھی ٹرانسکرپشن فیکٹر کی طرح، رسیپٹر سے آزاد فنکشنز کا استعمال کر سکتا ہے، عمل کا ایک ایسا طریقہ جس پر بہت کم تجرباتی توجہ حاصل ہوئی ہے۔ . IL کی جوہری لوکلائزیشن کی حقیقت کے پیش نظر یہ تحفظات اور زیادہ دلچسپ ہیں۔(انٹرلییوکن)-33 اہم ہے، جیسا کہ ایک مہلک، غیر حل نہ ہونے والی سوزش سے ظاہر ہوتا ہے جب جوہری لوکلائزیشن سگنل میں خلل پڑتا ہے'۔

کا کلیدی سیلولر ثالثفائبروسسmyofibroblast ہے، جو چالو ہونے پر ٹشو کی مرمت کے بنیادی کولیجن پیدا کرنے والے اور سکڑنے والے سیل کے طور پر کام کرتا ہے۔ Myofibroblasts ایک-ہموار پٹھوں کے ایکٹین (a-SMAACTA2) کے اظہار کی طرف سے خصوصیات ہیں جو ان کے سکڑنے کے کام کو قابل بناتا ہے اور اس کے تباہ کن اثر میں حصہ ڈالتا ہے۔فائبروسسترقی، ہم نے پہلے یہ ظاہر کیا ہے کہ جوہری I-33 تجرباتی زخموں کی شفا یابی کے دوران، معدے کے السر اور السرٹیو کولائٹس میں myofibroblasts میں تیزی سے اور مضبوطی سے متاثر ہوتا ہے۔ درحقیقت، IL کا اظہار(انٹرلییوکن)-33 A-SMA-مثبت myofibroblasts کی ایک عام خصوصیت معلوم ہوتی ہے، کیونکہ یہ لبلبے میں بھی پایا جاتا ہے۔فائبروسساور جگر کے myofibroblast جیسے سٹیلیٹ سیلز میں۔ ایک ساتھ لے کر، یہ نتائج یہ پوچھنا دلچسپ بناتے ہیں کہ آیا IL(انٹرلییوکن)-33 کا myofibroblast فعل اور تفریق کے ضابطے میں کردار ہو سکتا ہے۔

ہم یہاں myofibroblast phenotype کو منظم کرنے میں جوہری lL-33 کے لیے ایک نئے کردار کی وضاحت کرتے ہیں۔ جینیاتی حذف یا IL کے فارماسولوجیکل روکنا کے ذریعہ(انٹرلییوکن)UUO ماڈل میں -33، نیز IL کی کمی(انٹرلییوکن)-33 فعال انسانی بنیادی کلچرڈ ڈرمل فائبرو بلاسٹس میں، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ جوہری IL(انٹرلییوکن)-33 ایک مکمل طور پر تیار شدہ myofibroblastic فینوٹائپ میں ابتدائی تبدیلی کو روکتا ہے اور ایک سوزش والی فینوٹائپ کی حمایت کرتا ہے۔ IL کی کمی(انٹرلییوکن)-33 نے ایکسٹرا سیلولر میٹرکس اجزاء COL1Al, COL1A2, COL3A1, COL5A1 اور ٹرانسجیلین کے اظہار کو بڑھایا، لیکن proinflammatory cytokine IL کے اظہار کو روک دیا۔(انٹرلییوکن)-6 اور کیموکینز CXCL8 CCL7 اور CCL8۔ اس لیے ہماری تلاشیں IL-33 کے کردار کو سمجھنے کے لیے ایک نیا تناظر پیش کرتی ہیں۔فائبروسسترقی اور ٹشو ہومیوسٹاسس.

Cistanchetubulosaروکتا ہےگردہبیماری، نمونہ حاصل کرنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

نتائج

Myofibroblasts غالب IL ہیں(انٹرلییوکن)-33- murine UUO میں خلیات کا اظہار۔چن اور ساتھیوں کی ایک حالیہ تحقیق میں آئی ایل کے اظہار میں اضافہ ہوا ہے۔(انٹرلییوکن)یکطرفہ ureteral رکاوٹ کے بعد 4 دن میں -33 اور ST2۔ ہم نے IL میں مسلسل اضافے کا مشاہدہ کرتے ہوئے C57BL/6J چوہوں میں UUO کے بعد 1,7، اور 21 دن پر گردے جمع کرکے ان کے تجربے سے رجوع کیا۔(انٹرلییوکن)33 mRNA ٹرانسکرپٹس (تصویر 1A) اور جوہری IL کا اظہار کرنے والے خلیوں کی بڑھتی ہوئی تعداد(انٹرلییوکن)-33(تصویر 1B)۔ ہم نے ٹائپ I کولیجن کے ٹرانسکرپشن اور پروٹین ایکسپریشن کا بھی مشاہدہ کیا جو کی ترقی کی عکاسی کرتا ہے۔فائبروسس(تصویر آئی سی، ڈی)۔ اس کے بعد ہم نے IL کے فینوٹائپ کا تجزیہ کیا۔(انٹرلییوکن)-33-خلیات کا اظہار۔ چن وغیرہ کی طرح، ہم نے مشاہدہ کیا کہ IL(انٹرلییوکن)-33-اظہار سیل سبسیٹ دن 2 میں دیکھا گیا بنیادی طور پر a-SMA- مثبت myofibroblasts پر مشتمل تھا، تاہم، ہمیں IL کے لیے کوئی سگنل نہیں ملا(انٹرلییوکن)-33 CD میں31-مثبت اینڈوتھیلیل سیلز اور نہ ہی CD45-مثبت لیوکوائٹس میں (تصویر IE اور Figure S1)۔ ہم نے IL کا بھی مشاہدہ کیا۔(انٹرلییوکن)بکھرے ہوئے پیریسیٹس میں -33 (تصویر 1A، دن 21 پینل میں سرخ تیر کا نشان)۔ پی ڈی جی ایف آر بی کے لیے ایک جوڑی والی امیونوسٹیننگ، جو میوفائبرو بلاسٹس اور پیریسیٹس کے لیے ایک اور نشان ہے، نے وسیع پیمانے پر اجتماعیت کا انکشاف کیا (تصویر IE) مزید، ہم نے اندازہ کیا کہ آیا IL(انٹرلییوکن)33 کو فبروبلاسٹ ایکٹیویشن کے معلوم مارکروں کے ساتھ اجتماعی شکل دی گئی، یہ معلوم ہوا کہ S100A4 (جسے فائبرو بلاسٹ مخصوص پروٹین، FSP-1 بھی کہا جاتا ہے) کا اظہار بلکہ کیپلیریوں اور درمیانے درجے کے برتنوں کے اینڈوتھیلیل خلیوں میں ظاہر کیا گیا تھا (تصویر IE) . اسی طرح، VIM/vimentin بھی بنیادی طور پر endothelial خلیوں میں پایا گیا، خاص طور پر glomeruli اور درمیانے درجے کے برتنوں میں، اور IL میں کوئی واضح مشترکہ اظہار نہیں تھا۔(انٹرلییوکن){0}}مثبت خلیات (تصویر 1E)۔ IL کا مزید تجزیہ(انٹرلییوکن)-33-دن 7 پر myofibroblasts کا اظہار کرنے سے یہ بات سامنے آئی کہ وہ بنیادی طور پر پرانتستا اور کورٹیکومیڈولری جنکشن میں مقامی تھے۔ اور میڈولا اور پیپلا (تصویر 1 ایف) میں کم بکثرت۔

شکل 1. یکطرفہ ureteral رکاوٹ IL کی حوصلہ افزائی کرتی ہے۔(انٹرلییوکن)ماؤس کے گردوں میں -33 اظہار۔

(A,C) صحت مند کنٹرول والے چوہوں (n=2) یا l,7, یا 21 دنوں کے بعد UUO (n=1) یا UUO سے گردے میں 33 اور کولال کا رشتہ دار اظہار (n=3 ہر ٹائم پوائنٹ پر)۔ نقل کی سطحوں کو qRT-PCR کے ذریعہ مواد اور طریقوں میں تفصیل کے مطابق مقدار میں طے کیا گیا تھا۔ ڈیٹا پوائنٹس انفرادی چوہوں کی نمائندگی کرتے ہیں۔(انٹرلییوکن)-33 [براؤن سگنل (B) اور (F)، براؤن یا ٹیل سگنل (E) میں]، COL1 (پینل D میں براؤن سگنل)، اسماء (سرخ، ای، ایف)، CD31 (جامنی، ای) )PDGFRB(teal,E)، Vimentin (teal,E) اور S100A4(جامنی،E) صحت مند کنٹرول والے چوہوں یا چوہوں کے گردوں میں UUO2 دن (E)، 7 دن (B,D,F) یا 21 دن (بی، ڈی) پہلے۔ پینل （F） لیبل کے طور پر گردے کے مختلف علاقوں کو دکھاتا ہے۔ اسکیل بارز=20 μm۔

I-33 کے جینیاتی حذف ہونے کا UUO میں فبروسس کے بڑھنے پر نہ ہونے کے برابر اثر پڑتا ہے لیکن کولیجن کی ترکیب کے ابتدائی فروغ میں ثالثی ہوتی ہے۔اس کے بعد ہم نے IL کے اہم کردار کا اندازہ کیا۔(انٹرلییوکن)IL میں گردوں کی رکاوٹ کے ردعمل کا موازنہ کرکے -33(انٹرلییوکن)-33 اور جنگلی قسم کے چوہے۔ چن اور ساتھیوں کے برعکس، جنہوں نے کم کی اطلاع دی۔فائبروسسIL میں ترقی(انٹرلییوکن)-33-کمی والے چوہوں کو UUO کا نشانہ بنایا گیا، ہم نے IL کے درمیان کوئی فرق نہیں دیکھا(انٹرلییوکن)33--اور WT'چوہوں میں فبروسس کی نشوونما میں UUO کے بعد 7 یا 21 قسم I کولیجن (تصویر 2A، B) کے امیونو ہسٹو کیمیکل تجزیہ کے ذریعے۔ تاہم، کولیجن ٹرانسکرپٹس کا جائزہ لے کر ٹرانسکرپشنی سطح پر فبروٹک ردعمل کو الگ کرتے ہوئے، ہم نے کولال ٹرانسکرپٹس کی دو گنا اعلیٰ سطحوں میں ابتدائی، نمایاں اپ گریجشن اور IL کا موازنہ کرتے وقت Col3al میں اضافے کا رجحان دیکھا۔(انٹرلییوکن)-33-کی کمی اور جنگلی قسم کے گردے دن 1 میں (تصویر 2C، D)۔ لہذا، ہم نے چن ایٹ ال کے تجرباتی ڈیزائن کو نقل کرنے کا فیصلہ کیا۔ UUO کے بعد 4 دن کے نمونوں کا تجزیہ کرکے اور ST2-کی کمی والے چوہوں سمیت، ان کا IL سے موازنہ کرکے(انٹرلییوکن)-33-کمی والے اور WT چوہے۔ ان تجزیوں سے IL میں Colla2 میں خاطر خواہ اضافہ ہوا ہے۔(انٹرلییوکن). 4 دن میں جین ٹائپس کے درمیان کالر اور کول3ال ٹرانسکرپٹ کی سطح میں کوئی واضح فرق نہیں تھا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ ان جینز پر اثر کم دیرپا ہوتا ہے (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا اور تصویر 2 ایف)۔

شکل 2. IL میں کولیجن اظہار(انٹرلییوکن)UUO کے دوران -33-/اور جنگلی قسم کا گردہ۔

I آئی ایل(انٹرلییوکن)-33--اور ڈبلیو ٹی چوہے، صحت مند کنٹرول والے چوہے (n=2)، شرم سے چلنے والے چوہے (n=1) اور چوہوں کو UUO1,7، یا 21 دن پہلے دکھا رہے ہیں (n{{ 7}} ہر ٹائم پوائنٹ اور ہر جین ٹائپ پر۔(انٹرلییوکن)-33-,ST2-اور WT چوہوں کے 4 دن بعد شیم آپریشن (n=5 فی جین ٹائپ) یا UUO(n=10فی جین ٹائپ)۔ mRNA کے qRT-PCR کے ذریعہ نقل کی سطح کی مقدار درست کردی گئی۔ ڈیٹا پوائنٹس انفرادی چوہوں کی نمائندگی کرتے ہیں، سلاخیں اوسط قدریں دکھاتی ہیں۔*p<><><>

آئی ایل(انٹرلییوکن)-33 UUO کے ابتدائی مرحلے میں منافع بخش جینوں کے اظہار کو کم کرتا ہے۔IL میں دن 1 (تصویر 1CD) اور کولا 2 دن 4 (تصویر 2E) میں کالر اور کول31 کا بڑھتا ہوا اظہار۔(انٹرلییوکن){0}}کمی والے چوہوں نے IL کے کردار کی نشاندہی کی۔(انٹرلییوکن)-33 چوٹ کے ابتدائی جواب میں۔ ہم نے IL میں کالر، Colla2 اور Col3al کی بڑھتی ہوئی نقل کی سطحوں کا مشاہدہ کرتے ہوئے، توسیع شدہ تجربے میں مزید جانوروں کو شامل کرکے اس امکان کو تلاش کیا۔(انٹرلییوکن){0}} دن 1 میں چوہوں کی کمی (تصویر 3A-C)۔

مشاہدہ کرنے کے بعد کہ IL(انٹرلییوکن)-33 چوہوں کے گردے کے ٹشوز میں UUO کے تحت سیل نیوکلی میں مقامی، ہم نے اگلا پوچھا کہ کیا IL میں تبدیل شدہ جین کا اظہار دیکھا گیا(انٹرلییوکن)-33-UUO کے جاری ہونے کے بعد 1 دن میں چوہوں کی کمی متاثر کن، جوہری IL-33 فنکشن یا ایکسٹرا سیلولر IL کی عدم موجودگی کی وجہ سے تھی۔(انٹرلییوکن)-33. ہم نے IL کو نشانہ بنانے والے ایک غیر جانبدار اینٹی باڈی کی انتظامیہ کے ذریعہ مؤخر الذکر آپشن پر توجہ دی۔(انٹرلییوکن)-33 سے جنگلی قسم کے چوہوں سے پہلے UUO(تصویر 3D)۔ اس علاج نے IL کے fibrogenic فینوٹائپ کو دوبارہ نہیں بنایا(انٹرلییوکن)33 اتپریورتی، اس مفروضے کو مضبوط کرتے ہوئے کہ IL کی غیر موجودگی میں منافع بخش جین کے اظہار میں اضافہ دیکھا گیا(انٹرلییوکن)-33 ایکسٹرا سیلولر IL کے بجائے جوہری کی کمی کی وجہ سے تھا۔(انٹرلییوکن)-33.

شکل 3.IL(انٹرلییوکن)-33 UUO کے ابتدائی مرحلے میں کولیجن کے اظہار کو کم کرتا ہے۔

(AC) IL سے گردوں میں Collal,Colla2, اور Col3al کی نقل(انٹرلییوکن)-33-/اور WT چوہوں کو شام کے آپریشن کے ایک دن بعد (n=5 فی جین ٹائپ) یا UUO(n=10فی جین ٹائپ)۔ (D) اینٹی IL کے ساتھ علاج کیے جانے والے WT چوہوں سے گردوں میں Col3al کی نقل(انٹرلییوکن)-33، آئسو ٹائپ کنٹرول اینٹی باڈیز یا UUO سے پہلے کی گاڑی۔ گردوں کی کٹائی 24 گھنٹے UUO(n=10 فی ٹریٹمنٹ گروپ) یا شیم آپریشن (n=5) کے بعد کی گئی تھی۔ نقل کی سطح کو QRT-PCR کے ذریعہ مقدار میں طے کیا گیا تھا۔ ڈیٹا پوائنٹس انفرادی چوہوں کی نمائندگی کرتے ہیں، سلاخیں اوسط اقدار کو ظاہر کرتی ہیں۔**p<><>

IL کا ٹرانسکرپٹوم تجزیہ(انٹرلییوکن)-33-گردوں کی کمی ایکسٹرا سیلولر میٹرکس کی تنظیم نو اور کولیجن کی تشکیل کا پتہ دیتی ہے۔ٹرانسکریشنل پروفائلنگ کے ذریعہ UUO کے ابتدائی ردعمل کی مزید تفصیل سے تحقیقات کرنے کے لئے، RNA کو IL کے گردوں سے نکالا گیا تھا۔(انٹرلییوکن)-33-کی کمی اور جنگلی قسم کے چوہے UUO کے 24 گھنٹے بعد۔ WT اور IL کے درمیان سب سے اوپر 5 فیصد (200 جینز) کی شناخت کرنے کے لیے جوڑے کے حساب سے فشر کا لکیری امتیاز 24 استعمال کیا گیا تھا۔(انٹرلییوکن)-33-گردوں کی کمی جو ایک بنیادی جزو کے تجزیہ میں جین ٹائپس کے درمیان واضح علیحدگی کو ظاہر کرتی ہے (تصویر 4A)۔ ایک غیر سخت نقطہ نظر (p<0.05,><0.25, and="" fold="" change="">1.3) اس کے برعکس IL میں 134 ڈاؤن ریگولیٹڈ اور 46 اپ ریگولیٹڈ تحقیقات کی نشاندہی کی(انٹرلییوکن)33−/− (n=5) بمقابلہ WT (n=4) (Suppl. Table S1)، بعد میں خاص طور پر Col1a1، Col1a12 اور Col3a1 کے ساتھ ساتھ myofibroblast سے وابستہ Acta2 (تصویر 4B) . اس کے علاوہ، DAVID انوٹیشن کلسٹرنگ (ٹیبل S2) کا استعمال کرتے ہوئے امتیازی طور پر ظاہر کیے گئے جینوں کے جین آنٹولوجی کے تجزیے سے کولیجنز اور پروٹیز انحیبیٹرز سے وابستہ GO اصطلاحات کے ساتھ ساتھ PDGF بائنڈنگ اور ECM-رسیپٹر تعامل، اور GO- کے لیے منفی افزودگی کا انکشاف ہوا۔ oxidoreductase سرگرمی اور سوڈیم سے آزاد anion ٹرانسپورٹرز سے وابستہ شرائط۔

شکل 4. IL کے درمیان نقلی اختلافات کا خلاصہ(انٹرلییوکن)-33-کی کمی اور جنگلی قسم کے چوہے UUO کے 24 گھنٹے بعد۔

(A) 3D سکیٹر پلاٹ 200 جینوں کے پرنسپل جزو کے تجزیہ کی بنیاد پر نمونوں کی تقسیم کو ظاہر کرتا ہے۔ (B) اوپری تفریق والے جینوں کا حرارت کا نقشہ۔

fibroblast IL.33 کی کمی ایک جین کے دستخط کو فروغ دیتی ہے جو ایکسٹرا سیلولر میٹرکس جمع ہونے کے ساتھ مطابقت رکھتا ہے۔IL کے فنکشن کو دریافت کرنے کے لیے(انٹرلییوکن)-33 غالب IL میں(انٹرلییوکن)-33-رکاوٹ شدہ گردوں کی سیل کی آبادی کا اظہار کرتے ہوئے، ہم نے 24 گھنٹہ تک I-33 کے siRNA ثالثی ناک ڈاؤن کے بعد IFN-y اور TGF- کے سامنے لا کر ثقافتی انسانی فبرو بلاسٹس کو myofibroblast فینوٹائپ کی طرف موڑ دیا۔ موثر ناک ڈاؤن کی تصدیق پروٹین اور ٹرانسکرپٹ لیولز (Fig.5A) دونوں پر کی گئی تھی اور اس کے ساتھ منافع بخش COL3A1، COL5A1 اور TAGLN (Fig. 5B-D) کے mRNA اور پروٹین کی سطح میں اضافہ ہوا تھا۔ ابتدائی تجزیوں نے TGF- کی شمولیت کی نشاندہی کی اور ہمیں نقلی پروفائل پولڈ، کلچرڈ انسانی فائبرو بلاسٹس کو siRNA سے IL کے ساتھ علاج کرنے کی ترغیب دی۔(انٹرلییوکن)-33 اور IFN-y کے ذریعے چالو کیا گیا(IL کو دلانے کے لیے(انٹرلییوکن)-33 اظہار) یا 24 گھنٹے کے لیے IFN-y اور TGF-B کے امتزاج سے اس تجزیہ نے IL کی کمی سے وابستہ 64 مختلف جینز کی نشاندہی کی۔(انٹرلییوکن)-33 (صفحہ<0.05 and="" fold="" change="">1.5، Fig.5E)، جن میں سے 35 دونوں سائٹوکائن علاج کے لیے عام تھے (تصویر 5E، F)۔ مزید برآں، زیادہ تر جینوں نے دونوں حالتوں میں یکساں رجحانات دکھائے، چاہے وہ ان میں سے صرف ایک کے تحت تفریق اظہار کے لیے منتخب حد تک پہنچ گئے ہوں (تصویر 5F)، اس مفروضے کی تائید کرتے ہوئے کہ IL کو روکنے کا اثر(انٹرلییوکن)-33 دونوں حالات میں ایک جیسا تھا۔ جین آنٹولوجی تجزیہ کے لیے، اس لیے، ہم نے ان جینوں پر غور کیا جن کا اظہار IL کے ذریعے کیا گیا تھا۔(انٹرلییوکن)کم از کم ایک شرط کے تحت -33 کمی اور تشریح کلسٹرنگ (ٹیبل S3) کی گئی، UUO-ایکسپوزڈ، IL میں ہماری تلاش کے ساتھ اتفاق میں(انٹرلییوکن)-33-گردوں کی کمی، ہمیں IL کی روک تھام کا پتہ چلا(انٹرلییوکن)فائبرو بلاسٹس میں -33 کی وجہ سے کولیجن اور ایکسٹرا سیلولر میٹرکس اجزاء سے وابستہ GO اصطلاحات کے لیے افزودہ جینوں کے اظہار میں اضافہ ہوا۔ مزید برآں، I-33 کی کمی سے دبے ہوئے جینوں کو اشتعال انگیز محرک کے ردعمل سے وابستہ GO- اصطلاحات کے لیے افزودہ کیا گیا تھا۔ ایک ساتھ، ہمارے ڈیٹا کا مطلب ہے کہ IL(انٹرلییوکن)فبرو بلوسٹس میں -33 اظہار ایکسٹرا سیلولر میٹرکس ڈپازیشن اور میوفائبروبلاسٹ ایکٹیویشن سے متعلق ٹرانسکرپٹس کے اپ گریجولیشن کو کم کرنے کا کام کرتا ہے، جب کہ کچھ حد تک اشتعال انگیز ٹرانسکرپٹس کو IL کی حمایت حاصل ہے۔(انٹرلییوکن)-33.

شکل 5. فبروبلاسٹ IL کی کمی(انٹرلییوکن)-33ایک جین کے دستخط کو نافذ کرتا ہے جو ایکسٹرا سیلولر میٹرکس جمع کرنے کے ساتھ مطابقت رکھتا ہے۔

IL کا اظہار(انٹرلییوکن)IL کے ساتھ علاج کیے جانے والے انسانی فائبرو بلاسٹس میں 33(A)، COL5A1(B)، FIBL5(C) اور TGLN(D) اظہار(انٹرلییوکن)-33-مخصوص اور سکیمبلڈ siRNA کی پیمائش gRT-PCR (ٹاپ پینلز) اور ویسٹرن بلاٹ (نیچے پینل) سے کی گئی۔ بارز 4 آزاد تجربوں کی اوسط قدریں دکھاتی ہیں،*p<0.05.(e)venn diagram="" comparing="" differential="" expression="" of="" transcripts="" in="" response="" to="" the="" silencing="" of="">(انٹرلییوکن)کنٹرول اور چالو خلیوں کے درمیان 33۔

(F) ہیٹ میپ جس میں IL کے siRNA-خاموش ہونے کے جواب میں مختلف طریقے سے اظہار کردہ نقلیں دکھائی جاتی ہیں۔(انٹرلییوکن)-33 کنٹرول اور فعال سیلز میں۔

IL کی کمی(انٹرلییوکن)فعال فائبرو بلاسٹس میں -33 ایک سوزش والی فینوٹائپ کے مقابلے میں ایک myofibroblastic کی حمایت کرتا ہے۔ہمارے مشاہدے کی بنیاد پر کہ I-33 کا اثر برقرار رہتا ہے اور وقت کے ساتھ ساتھ زیادہ نمایاں ہوتا دکھائی دیتا ہے حالانکہ IL(انٹرلییوکن)-33 اظہار میں کمی (شکل S2A, B)، ہم نے اگلا پوچھا کہ کیا IL کا بنیادی جوہری فعل(انٹرلییوکن)-33 پرو فبروٹک اثر کرنے والوں کے براہ راست ضابطے کے بجائے فائبروبلاسٹ تفریق کا ضابطہ ہوسکتا ہے۔ محرک ہونے پر، خاموش فائبرو بلاسٹس اور دیگر mesenchymal خلیات سوزش اور/یا سنکچن کے افعال تیار کرتے ہیں۔ سوزشی فبرو بلوسٹس اور کانٹریکٹائل میوفائبرو بلاسٹس کے درمیان سپیکٹرم کی اچھی طرح سے وضاحت نہیں کی گئی ہے اور شاید دو الگ الگ فینوٹائپس کی بجائے سلائیڈنگ ٹرانزیشن کی نمائندگی کرتا ہے۔ تاہم، Ohlund et al.23 کی ایک حالیہ اشاعت نے کینسر سے وابستہ فائبرو بلاسٹس (CAFs) کا موازنہ لبلبے کے اسٹیلیٹ خلیات سے کیا ہے، جس میں ایک سوزشی فینوٹائپ کی نشاندہی کی گئی ہے جسے iCAFs کہا جاتا ہے (ٹرانس ویلز میں سائٹوکائن سیکریٹنگ ٹیومر آرگنائڈز کے ساتھ مشترکہ ثقافت اور اعلی اور نچلی سطح کا اظہار کرتا ہے۔ آئی ایل(انٹرلییوکن)6 اور SMA، بالترتیب [IL(انٹرلییوکن).dPa-SMAL]) اور ایک کنٹریکٹائل myofibroblastic phenotype، myCAFs (IL)(انٹرلییوکن)6"a-SMA-، گھنے monolayers میں مہذب)، نقلی پروفائلنگ اور iCAFs اور mvCAFs کا موازنہ خصوصیت کے ٹرانسکرپشن پروفائلز کی نشاندہی کرتا ہے۔interleukinsاور کیموکائنز، جو myofibroblastic phenotype (myCAFs) کے ساتھ TGF- رسپانس جینز اور ایکسٹرا سیلولر میٹرکس اجزاء بشمول کولیجن 3 کے بڑھے ہوئے اظہار کی خصوصیت رکھتے تھے۔ ہم نے اس ڈیٹا سیٹ کو دستخطی فہرستیں تیار کرنے کے لیے استعمال کیا جس میں فینوٹائپس کے درمیان سرفہرست تفریق والے ریگولیٹڈ جین شامل ہیں اور GSEA سافٹ ویئر میں جین سیٹ افزودگی کا تجزیہ کیا گیا ہے۔ نتائج نے اشارہ کیا کہ I-33 کی روک تھام نے ایک کانٹریکٹائل myofibroblastic phenotype (myFBL) کو سپورٹ کیا اور انسانی فبرو بلاسٹس (تصویر 6A, B, Table S4) میں ایک سوزشی فینوٹائپ (iFBL) کو روکا، اس طرح ہمارے جینی آنٹولوجی کے نتائج سے اتفاق کرتے ہوئے . اس مقام پر، ہم نے اپنی توجہ IL کی طرف موڑ دی۔(انٹرلییوکن)6 اور CXCL8، سائٹوکائنز جنہیں iCAFs کے لیے مارکر کے طور پر تجویز کیا گیا ہے، یہ معلوم کرتے ہوئے کہ اگرچہ یہ جین ہمارے ٹرانسکرپٹوم تجزیہ میں امتیازی اظہار کے معیار کو پورا نہیں کرتے ہیں، لیکن IL کی کمی کے بعد QRT-PCR کے ذریعے ان کے اظہار کی سطح میں کمی کا پتہ لگایا جا سکتا ہے۔(انٹرلییوکن)-33(تصویر 6C، D)۔ ہمارے ٹرانسکرپٹوم تجزیہ (تصویر 5 ایف) میں اشتعال انگیز ثالثوں کو کم کیا گیا ہے، ہم نے اینٹی IL کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیوں میں CCL7 اور CCL8 کے اظہار میں کمی کی بھی تصدیق کی۔(انٹرلییوکن)-33 siRNA (تصویر 6E، F)۔

ان مشاہدات نے ہمیں یہ تحقیق کرنے پر آمادہ کیا کہ آیا ہمارے نتائج کو مورین UUO ماڈل میں 1 دن میں ترجمہ کیا جا سکتا ہے۔ امیونو ہسٹو کیمیکل تجزیہ (Fg.6G) اور کوانٹیفیکیشن (تصویر 6H) نے IL کی شمولیت کا انکشاف کیا۔(انٹرلییوکن)6-جنگلی قسم کے گردوں میں خلیات کا اظہار کرنا، جیسا کہ نقل کی سطح پر Chen et al4 کے مشاہدات کی طرح۔ اس کے برعکس، ہم نے IL کی نمایاں طور پر کم تعداد کا مشاہدہ کیا۔(انٹرلییوکن)IL میں -6-مثبت خلیات(انٹرلییوکن)-33- چوہے، ہمارے وٹرو سے تیار کردہ انسانی فبرو بلاسٹ ڈیٹا کے ساتھ اچھے معاہدے میں۔

شکل 6. IL کی کمی(انٹرلییوکن)-33 fibroblasts کو ایک myofibroblastic phenotype کی طرف جھکا دیتا ہے۔

(A، B) جین سیٹ افزودگی کے تجزیے سے پتہ چلتا ہے کہ خلیات کا علاج IL سے کیا جاتا ہے۔(انٹرلییوکن)-33-مخصوص siRNA کو myofibroblast (myFBL) بمقابلہ سوزش والی fibroblast (iFBL) دستخط کے لیے مثبت طور پر افزودہ کیا گیا تھا اور ایک سوزش بمقابلہ خاموش فائبروبلاسٹ دستخط کے لیے منفی طور پر افزودہ کیا گیا تھا۔ (CF) IL کی نقل(انٹرلییوکن)6(C)، IL(انٹرلییوکن)8(D)، CCL7(E) اور CCL8(F) انسانی فائبرو بلاسٹس میں IL کے ساتھ علاج کیا جاتا ہے۔(انٹرلییوکن)33-مخصوص یا سکیمبلڈ siRNA کی پیمائش gRT-PCR سے کی گئی۔ ہر ڈیٹا پوائنٹ آزاد تجربات سے تکنیکی ٹرپلیکیٹس کی اوسط قدروں کو ظاہر کرتا ہے۔(انٹرلییوکن)-33-/- چوہے اور IL کے لیے مدافعتی نظام(انٹرلییوکن)-6(براؤن سگنل)۔ اسکیل بارز=100 um.(H)ہائی پاور ویژول فیلڈ میں مثبت سیلز کی اوسط تعداد کو شمار کرنے والے سگنل کی اندھی مقدار۔ انفرادی ڈیٹا پوائنٹس ایک ماؤس میں مثبت خلیوں کی اوسط تعداد کو ظاہر کرتے ہیں، سب سے زیادہ کثافت والے علاقوں میں 3 ہائی پاور فیلڈز گنتے ہیں۔ *p<>

حصہ Ⅱ کے لیے یہاں کلک کریں۔