الزائمر کی بیماری کے علاج کے طور پر C-Jun N-terminal Kinase inhibitors کی ترقی پر ایک نقطہ نظر: ڈاکنگ اسٹڈیز کے ذریعے ساخت کی تحقیقات

خلاصہ:

c-Jun N-terminal kinase (JNK) مختلف محرکات کی وجہ سے سیل کی موت میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ چونکہ isoform JNK3 بنیادی طور پر دماغ میں ظاہر ہوتا ہے، اس لیے خیال کیا جاتا ہے کہ یہ مختلف نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں میں اہم کردار ادا کرتا ہے، بشمول الزائمر کی بیماری (AD) اور پارکنسنز کی بیماری (PD)، جن میں ابھی تک قابل علاج علاج کی کمی ہے۔ ایک ناول اور منتخب JNK3 روکنے والے کو تیار کرنے کے لیے، ہم نے JNK inhibitors پر شائع ہونے والے مضامین کا ایک دہائی کا جائزہ لیا (2011 سے 2021)، خاص طور پر وہ جو ساختی تناظر اور ڈاکنگ بصیرت پر توجہ مرکوز کرتے ہیں۔ ہم نے JNK کے تین isoforms کے ڈھانچے کا مشاہدہ کیا، یعنی ہولو-پروٹینز اور کو-کرسٹل ڈھانچے، JNK3 inhibitors کے ساتھ اور AD علاج کے طور پر منتخب JNK3 inhibitors کے اہم ساختی پہلوؤں کا خلاصہ کیا۔

پارکنسنز کی بیماری اعصابی نظام کی ایک عام انحطاطی بیماری ہے، اور اس کی اہم علامات میں جھٹکے، سختی، سست حرکت، توازن کی خرابی، وغیرہ شامل ہیں۔ تاہم، پارکنسنز کی بیماری کی علامات سے وابستہ یادداشت کے کام کے مسائل پر توجہ دی جا رہی ہے۔

مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ پارکنسنز کے مرض میں مبتلا مریضوں کی یادداشت علمی کاموں کو انجام دیتے وقت نمایاں طور پر متاثر ہوتی ہے، اور ان میں سے کچھ علمی افعال کی خرابی کو بھی ظاہر کرتے ہیں جیسے توجہ کی کمی اور علمی حساسیت میں کمی۔ تاہم، اس کا مطلب یہ نہیں ہے کہ پارکنسنز کے مرض میں مبتلا افراد کی یادداشت اچھی نہیں ہوتی۔

پارکنسنز کی بیماری میں مبتلا افراد مستقل مشق اور تربیت کے ذریعے اپنی یادداشت کی صلاحیتوں کو بہتر بنا سکتے ہیں، خاص طور پر یادداشت کی کچھ تربیت اور مشقیں کر کے۔ یہ مشقیں پارکنسنز کے مرض میں مبتلا لوگوں کو ان کی علمی صلاحیتوں کو بہتر بنانے، زیادہ مثبت خود اعتمادی پیدا کرنے، ان کے معیار زندگی کو بہتر بنانے اور ان کی خود اعتمادی کو بہتر بنانے میں مدد کر سکتی ہیں۔

ان میں، یادداشت کی کچھ آسان مشقیں، جن میں بہت زیادہ پڑھنا، لکھنا، ریاضی کا حساب، ڈرائنگ، اور دیگر سرگرمیاں شامل ہیں، پارکنسنز کے مرض میں مبتلا مریضوں کی علمی صلاحیت کو مؤثر طریقے سے بہتر بنا سکتی ہیں اور انہیں زندگی کا زیادہ مثبت اور اعتماد کے ساتھ سامنا کر سکتی ہیں۔ اس کے علاوہ میموری کی کچھ تربیت جن میں لوکیشن میموری، نمبر میموری، لیٹر میموری، ایونٹ سیکوئنس میموری وغیرہ شامل ہیں بھی بہت موثر ہے۔ یہ تربیت پارکنسنز کی بیماری میں مبتلا لوگوں کو بہتر انداز میں سامنا کرنے اور مختلف مسائل سے نمٹنے اور اپنی زندگی کی نئی صورت حال کے مطابق بہتر انداز میں ڈھالنے کے قابل بناتی ہیں۔

مجموعی طور پر، اگرچہ پارکنسن کی بیماری مریضوں کی توجہ اور یادداشت کی صلاحیت کو متاثر کر سکتی ہے، لیکن مناسب علمی تربیت اور ورزش مریضوں کو ان کے علمی فعل کو بہتر بنانے اور اپنی نئی زندگی کی حالت کے مطابق بہتر انداز میں ڈھالنے میں مدد کر سکتی ہے۔ اس لیے پارکنسنز کے مرض میں مبتلا مریضوں کو یادداشت کے مسائل سے گھبرانے کی ضرورت نہیں ہے، جب تک وہ زندگی کا مثبت اور مثبت رویہ کے ساتھ سامنا کریں گے، وہ یقیناً خوشگوار اور فعال زندگی گزاریں گے۔ یہ دیکھا جا سکتا ہے کہ ہمیں اپنی یادداشت کو بہتر بنانے کی ضرورت ہے۔ Cistanche یادداشت کو نمایاں طور پر بہتر بنا سکتا ہے کیونکہ گوشت کا پیسٹ ایک روایتی چینی ادویاتی مواد ہے جس میں بہت سے منفرد اثرات ہیں، جن میں سے ایک یادداشت کو بہتر بنانا ہے۔ کیما بنایا ہوا گوشت کی افادیت مختلف فعال اجزاء سے آتی ہے، جن میں کاربو آکسیلک ایسڈ، پولی سیکرائڈز، فلیوونائڈز وغیرہ شامل ہیں۔ یہ اجزاء مختلف ذرائع سے دماغی صحت کو فروغ دے سکتے ہیں۔

دماغی افعال کو بہتر بنانے کے طریقے جاننے پر کلک کریں۔

مطلوبہ الفاظ:

ایک دماغی مرض کا نام ہے؛ c-Jun N-ٹرمینل کناز؛ چھوٹے مالیکیول پروٹین کناز روکنے والا؛ JNK3; انتخاب

1. تعارف

پروٹین کناسز 65 سال سے زیادہ پہلے دریافت ہوئے تھے، لیکن وہ 30 سال سے بھی کم عرصے سے علاج کے اہداف رہے ہیں [1,2]۔ بہت ساری بیماریوں میں پروٹین کنیزوں کی شمولیت کو بہت سارے مطالعات کی بنیاد پر قائم کیا گیا ہے، اور اس طرح کے کنیز طویل عرصے سے ایک امید افزا مالیکیولر ٹارگٹ گروپ رہے ہیں۔ انسانی جینوم میں 518 معروف پروٹین کناز انکوڈ شدہ ہیں، اور پروٹین کنیز فاسفوریلیٹ تمام پروٹینوں کا تقریباً ایک تہائی [3,4]۔ فارماسیوٹیکل کمپنیوں اور اکیڈمی کے بہت سے محققین نے اس شعبے میں سخت محنت کی ہے، اور اس کے نتیجے میں، 2021 تک 67 چھوٹے مالیکیول کناز روکنے والی ادویات کو امریکی FDA نے منظور کیا ہے [5]۔

Gleevec، دائمی مائیلوڈ لیوکیمیا کے لئے ایک اچھی طرح سے قائم علاج، 2001 میں نووارٹیس کی طرف سے تیار کیے جانے کے بعد شروع کیا گیا تھا، جس نے پروٹین کناز روکنے والے دور کا آغاز کیا تھا۔ یہ علاج اب بھی اپنی درخواستوں کی حد کو بڑھا رہا ہے۔ اس کے بعد، نو چھوٹے مالیکیول پروٹین کناز انحیبیٹرز کو 2011 میں یو ایس ایف ڈی اے نے منظور کیا تھا، اور انہوں نے خصوصی طور پر کینسر جیسی پھیلاؤ والی بیماریوں کو نشانہ بنایا تھا۔ اسی طرح، اب تک منظور شدہ زیادہ تر پروٹین کناز انحیبیٹرز آنکولوجی میں استعمال ہوتے ہیں۔ تاہم، پروٹین کنیز بہت سی دوسری بیماریوں میں بھی ملوث ہیں، جن میں سوزش، امیونولوجیکل اور قلبی امراض کے ساتھ ساتھ مرکزی اعصابی نظام (سی این ایس) کے امراض جیسے الزائمر کی بیماری (AD) اور پارکنسنز کی بیماری (PD) [6] شامل ہیں۔ 2011 میں، ruxolitinib، جو کہ JAK1 اور JAK2 inhibitor ہے، کو myelofibrosis کے علاج کے ایجنٹ کے طور پر منظور کیا گیا تھا۔ اس منظوری کے ساتھ ہی، نان آنکولوجی کناز انحیبیٹرز کے شعبے میں تحقیق تیزی سے فعال ہو گئی [7]۔ 67 ایف ڈی اے سے منظور شدہ پروٹین کناز انحیبیٹرز میں سے زیادہ سے زیادہ 10 دوائیں ہیں جو آنکولوجی سے باہر بیماریوں کو نشانہ بناتی ہیں، لیکن ابھی تک CNS کی خرابیوں کے لیے کوئی پروٹین کناز روکنے والی دوا نہیں ہے۔

AD کو 1906 میں دریافت کیا گیا تھا، اور پوسٹ مارٹم کے امتحان میں دو واضح بائیو مارکر، یعنی ٹاؤ ٹینگل اور امائلائیڈ بیٹا (A) تختی کا مشاہدہ کیا گیا، لیکن 2021 تک، ابھی تک واضح علاج کے ہدف کی شناخت نہیں ہو سکی ہے۔ عالمی آبادی کی تیزی سے بڑھتی عمر کے ساتھ، AD جیسی اعصابی بیماریاں ایک بڑا سماجی مسئلہ بن چکی ہیں اور نہ صرف مریضوں پر بلکہ مریضوں کے آس پاس کے دیگر افراد پر بھی اس کا نمایاں اثر پڑتا ہے [8,9]۔ چونکہ چھوٹے مالیکیول پروٹین کناز انحیبیٹرز کو بیماریوں کی ایک وسیع رینج کے لیے استعمال کیا جا رہا ہے، اس لیے مالیکیولر اہداف نے سی این ایس کے عوارض کے علاقے میں خاصی توجہ مبذول کرائی ہے۔ بہت سے ممکنہ CNS پروٹین کناز میں سے، ہم نے c-Jun N-terminal kinase (JNK) کا انتخاب کیا، جو mitogen-activated protein kinase خاندان کا ایک رکن ہے۔ JNKs فاسفوریلیٹ ایک سے زیادہ اپوپٹوس سے متعلق ٹرانسکرپشن عوامل، بشمول سی-جون، اے ٹی ایف، اے پی پی، اور تاؤ، اور سیلولر اپوپٹوس کو دلاتے ہیں [10]۔

JNKs مختلف محرکات کا جواب دیتے ہیں جیسے سائٹوکائنز، نیوروٹوکسنز، آکسیڈیٹیو تناؤ، اور فیٹی ایسڈ۔ جب محرکات پہلے خلیے کی جھلی تک پہنچتے ہیں، سگنلز فاسفوریلیشن کے ذریعے مائٹوجن ایکٹیویٹڈ پروٹین کناز (MAPKKK)، MAPKK4، اور MAPKK7 میں منتقل ہوتے ہیں۔ اس کے بعد، دو مختلف سائٹوں پر چالو MAPKK4 اور MAPKK7 فاسفوریلیٹ JNK، اور فاسفوریلیٹ JNK پھر سی-جون کے N-ٹرمینل کو فاسفوریلیٹ کرتا ہے تاکہ اپوپٹوٹک سگنل [11] کو آمادہ کیا جا سکے۔ مزید برآں، JNK اپوپٹوٹک پروٹین جیسے BIM اور BMF کو براہ راست فاسفوریلیٹ کرتا ہے اور انہیں کیسپیسز کو چالو کرنے کے لیے متحرک کرتا ہے [12]۔ مجموعی طور پر، JNKs apoptosis کے جسمانی عمل میں بہت زیادہ ملوث ہیں۔ تین مختلف انسانی JNK جین ہیں، یعنی jnk1، jnk2، اور jnk3 جو JNK مختلف حالتوں کے 10 مختلف حصوں کو انکوڈ کرتے ہیں (4 JNK1/2 homozygous اور 2 JNK3 homologous)، جن میں JNK1 اور JNK2 سب سے زیادہ وسیع پیمانے پر ظاہر کیے گئے ہیں (شکل 1)۔

JNK1 اور JNK2 کے برعکس، JNK3 زیادہ تر دماغ میں ظاہر ہوتا ہے، اور دل اور خصیوں میں صرف ایک چھوٹا سا حصہ ظاہر ہوتا ہے۔ JNK3 کو نیورونل سیل کی موت سے وابستہ نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں کے لیے ممکنہ علاج کا ہدف سمجھا جاتا ہے۔ جب سی-جون کو JNK3 کے ذریعے فاسفوریلیٹ کیا جاتا ہے، تو یہ تاؤ ٹینگل کی پختگی میں بھی سہولت فراہم کرتا ہے۔ مزید برآں، JNK3 کو براہ راست فاسفوریلیٹ ٹاؤ پروٹین کے لیے جانا جاتا ہے، جس سے تاؤ ٹینگلز کی تشکیل ہوتی ہے۔

AD پیتھالوجی کا ایک اور بائیو مارکر، یعنی amyloid beta، بھی JNK3 سے متعلق ہے۔ T688 پر JNK3 فاسفوریلیٹس امائلائیڈ پرکرسر پروٹین (اے پی پی)، اے پی پی اینڈوسیٹوسس کا باعث بنتا ہے، جو کہ امائلائیڈ-بیٹا کی تشکیل کے پورے عمل میں سب سے اہم قدم کے طور پر جانا جاتا ہے [13]۔

ایک تختی سے متاثرہ اپوپٹوسس کا طریقہ کار ابھی تک واضح نہیں ہے۔ ایک تختی AMP- ایکٹیویٹڈ پروٹین کناز (AMPK) کے فاسفوریلیشن کو آمادہ کرتی ہے، اور S1387 اور S792 پر AMPK فاسفوریلیٹس TSC2 اور Raptor کو چالو کرتی ہے۔ یہ عمل ایم ٹی او آر پاتھ وے اور نمائندہ سیل ریسکیو سسٹم کو روکتا ہے اور ایک ٹرانسلشنل بلاک کو اکساتا ہے جو پروٹین کے اظہار کو روکتا ہے [14]۔ یہ رجحان بڑے پیمانے پر آکسیڈیٹیو اینڈوپلاسمک ریٹیکولم تناؤ کو اکساتا ہے، جس کے ساتھ پروٹین کا ایک کھلا ردعمل ہوتا ہے جو ثانوی رد عمل جیسے کہ اشتعال انگیز ردعمل کو جنم دیتا ہے، جو JNK3 کو دوبارہ متحرک کرتا ہے۔ یہ پیش گوئی کرنے کے لیے ایک اور دلیل کہ AD کے مریضوں کے دماغوں میں نیورونل سیل کی موت کم ہو جائے گی جب JNK3 کو روکا جائے گا وہ یہ ہے کہ JNK3 ناک آؤٹ FAD ماؤس ماڈل [15] میں نیورونل سیل کی موت اور علمی کمی کو بھی کم کیا گیا تھا (شکل 2)۔

2. JNK روکنے والوں کی موجودہ ترقی کی حیثیت

2.1 پین-جے این کے روکنے والے

SP600125 (شکل 3) پہلا معلوم پین-JNK روکنے والا ہے جس کی IC50 قدریں بالترتیب JNK3، JNK2، اور JNK1 کے لیے 90، 40، اور 40 nM ہیں۔ یہ کمپاؤنڈ پہلا JNK روکنے والا تھا جس کا مطالعہ کیا گیا تھا، اور JNK کے انٹرا سیلولر سگنلنگ پاتھ وے کی سمجھ کو بڑھا دیا گیا ہے۔ ابتدائی طور پر، اسے کینسر کے خلیوں کا استعمال کرتے ہوئے apoptotic سیل کی موت کے اشارے کے طور پر تیار کیا گیا تھا، لیکن بعد میں، اس مرکب نے MPTP-حوصلہ افزائی PD جانوروں کے ماڈلز میں نیوروپروٹیکٹو اثر کا مظاہرہ کیا۔ اس نے AD جانوروں کے ماڈلز [16-18] میں نیوروفائبریلری الجھن اور A تختیوں کو بھی کم کیا۔ SP600125 کی طاقت اور انتخاب منشیات کی نشوونما کا باعث نہیں بنی، لیکن یہ ایک ایسا مرکب ہے جس نے بہت سے سائنسدانوں کو JNK کو منشیات کا ایک پرکشش ہدف سمجھا ہے۔

AS602801 (شکل 3) زبانی طور پر ایکٹو پین-JNK روکنے والا ہے۔ بالترتیب JNK3، JNK2، اور JNK1 کے لیے 230، 90، اور 80 nM کی IC50 اقدار کی نمائش کی گئی ہے۔ اس نے اینڈومیٹرائیوسس پر ایک اہم اثر ظاہر کیا جب اسے ہارمونز کے ساتھ امتزاج تھراپی میں یا بابون اور چوہا ماڈلز میں مونو تھراپی کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ اگرچہ AS602801 ایک منتخب روکنا نہیں ہے، لیکن SP600125 کے برعکس، AS602801 کے علاج سے مدافعتی امراض کو نشانہ بنانے کی کوشش کی گئی۔ یہ کمپاؤنڈ 2012 میں اینڈومیٹرائیوسس کے ساتھ مرحلے II کے کلینیکل ٹرائلز میں داخل ہوا [19,20]۔

تنزیسرٹیب (شکل 3) تیسرا زبانی طور پر فعال پین-JNK روکنے والا ہے، جس کی IC50 قدریں بالترتیب JNK3، JNK2، اور JNK1 کے لیے 6، 7، اور 61 nM ہیں۔ تنزیسرٹیب جانوروں کے تجربات میں بلیومائسن انڈسڈ پلمونری فائبروسس ماڈل کو idiopathic pulmonary fibrosis کے لیے ایک ہدف کی بیماری کے طور پر استعمال کرتے ہوئے کارآمد ثابت ہوا تھا۔ تجربات نے یہ بھی ثابت کیا ہے کہ یہ TNF- کی پیداوار کو ایک شدید چوہا LPS-حوصلہ افزائی TNF- پیداوار PK-PD ماڈل میں کم کرتا ہے۔ یہ ایک اشارے کے طور پر idiopathic pulmonary fibrosis کے ساتھ فیز II کے کلینکل ٹرائلز میں داخل ہوا، لیکن ٹرائلز کو نامعلوم وجوہات کی بنا پر روک دیا گیا ہے [21]۔

2.2 منتخب JNK روکنے والے

کمپاؤنڈ 1 (شکل 4) ایک منتخب JNK3 روکنے والا ہے جس کی سرگرمی کی سطح ہے۔<1 nM for JNK3, 210 nM for JNK2, and 518 nM for JNK1. Unlike the pan-JNK inhibitors, it is characterized by isoform selectivity toward JNK3, which is mainly expressed in the brain. Therefore, it was developed to target Parkinson's disease [22]. Compound 2 (Figure 4) was synthesized from compound 1. It has a thiophenyl pyrazolone scaffold and selectivity for other kinases, as well as JNK1 and JNK2 isoforms. Its activity on JNK3 has an IC50 of 35 nM, and it exhibits a much better DMPK profile in vivo compared to previously reported JNK3 inhibitors (1 in Figure 4). It has also been demonstrated that this compound could be an orally available and blood-brain barrier (BBB)-penetrable [23].

کمپاؤنڈ 3 (شکل 4) ملٹی اسٹیج ڈھانچے پر مبنی ورچوئل اسکریننگ کے ذریعے دریافت کیا گیا تھا۔ یہ JNK3 کے لیے 40 nM IC50 اور JNK1 اور JNK2 پر 2500- فولڈ آئسوفارم سلیکٹیوٹی، نیز 398 کنیز کے لیے ایک اچھی سلیکٹیوٹی پروفائل کی نمائش کرتا ہے۔ یہ LiCl کے مقابلے SH-SY5Y خلیوں میں A-حوصلہ افزائی سیلولر زہریلا کے خلاف زیادہ نیورو پروٹیکٹو سرگرمی کی نمائش کرتا ہے، جو وٹرو میں AD کے لیے ممکنہ علاج کا ایجنٹ ہے۔ چوہوں کا استعمال کرتے ہوئے جانوروں کے مطالعے سے معلوم ہوا کہ سیکھنے اور یادداشت کی صلاحیتوں میں اضافہ ہوا ہے اور بنیادی میکانزم کے مطالعے سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ یہ مرکب کارٹیکس اور ہپپوکیمپس میں اے پی پی اور ٹاؤ پروٹین کے فاسفوریلیشن میں کمی کے بعد JNK کی روک تھام کے ذریعے فائبرلر A تختیوں کے پھیلاؤ کو نمایاں طور پر کم کر سکتا ہے۔ [24]۔

کمپاؤنڈ 4 (شکل 4) ایک JNK2- اور JNK3-منتخب روکنے والا ہے جس کی IC50 قدریں JNK3 کے لیے 16 nM، JNK2 کے لیے 97 nM، اور JNK1 کے لیے 420 nM ہیں۔ JNK2 isoform سلیکٹیوٹی حاصل نہیں کی گئی تھی، لیکن کمپاؤنڈ نے MAPK کے دیگر خاندانوں اور JNK1 isoforms کے مقابلے میں اعلیٰ سلیکٹیوٹی کا مظاہرہ کیا۔ neurodegenerative بیماری کے علاج کے لیے JNK3 روکنے والے کے طور پر، اس کمپاؤنڈ نے BBB کے موافق پارگمیتا کی نمائش کی [25]۔

3. JNK کی فعال سائٹ کا ساختی تناظر کا تجزیہ

3.1 JNK1، JNK2، اور JNK3 کرسٹل ڈھانچے کی سپرمپوزیشن

JNK1 اور JNK3 کے ڈھانچے کا موازنہ کرنے کے لیے، کمپاؤنڈ 3 کو JNK3 (پروٹین ڈیٹا بینک (PDB) ID: 4WHZ) میں بند کیا گیا تھا۔ انڈولن-2-ایک جزو قبضہ کے علاقے میں واقع ہے اور NH کے ہائیڈروجن اور Met149 کی ریڑھ کی ہڈی میں کاربونیل آکسیجن کے ساتھ تعامل کرتا ہے۔ تھیازول کا نائٹروجن-4-ایک پانی کے پل کے ذریعے Lys93 کے ساتھ ایک ہائیڈروجن بانڈ بناتا ہے، اور 2-کلورو-فینائل گروپ ہائیڈروفوبک جیب میں دفن ہوتا ہے جس میں Ile124, Leu126, Leu144, Val145, Met146, اور Leu206، جو گیٹ کیپر کی باقیات Met146 سے آگے ایکٹو سائٹ کے پچھلے حصے پر واقع ہے۔ Met146 JNK3 میں ایک خوشبو دار انگوٹھی (کمپاؤنڈ 3 میں، 2-کلورو-فینائل گروپ) کے ساتھ تعامل کرتا ہے۔

جب JNK3 کے ساتھ کمپاؤنڈ 3 کے ڈاک شدہ پوز کو JNK1 (PDB ID: 3PZE, 2XRW, 4QTD, 3ELJ, 4AWI، اور 4L7F) (شکل 5) کے کرسٹل ڈھانچے پر سپرد کیا گیا تو ایسا لگتا تھا کہ ہر Met108 نے JNK1 کی ساخت کا مشاہدہ کیا ہے۔ JNK3 [26] کے methionine146 کے برعکس 2-کلورو-فینائل گروپ جو سلیکٹیویٹی جیب پر قابض ہے سے متصادم ہوسکتا ہے۔ یہ میتھیونین تنازعہ JNK3 کے لیے JNK1 پر کمپاؤنڈ 3 کی سلیکٹیوٹی کی وضاحت کر سکتا ہے۔

اس بات کا تعین کرنے کے لیے کہ گیٹ کیپر ریزیڈیو میتھیونین 108 JNK2 کی فعال سائٹ میں کیسے کام کرتا ہے، کمپاؤنڈ 3 کے ڈاک شدہ پوز کو JNK2 (PDB ID: 3E7O، 7CML، اور 3NPC) کے تین شائع شدہ کرسٹل ڈھانچے پر سپرد کیا گیا تھا (شکل 6)۔ اگرچہ 3E7O میں Met108 انتخابی جیب پر قابض 2-کلورو-فینائل گروپ سے متصادم ہے، لیکن 7CML اور 3NPC سے Met108 سلفر-pi تعاملات کے ذریعے 2-کلورو-فینائل گروپ کے ساتھ تعامل کرتا ہے، جیسا کہ Met146 میں JNK3 کی فعال سائٹ [32]۔ یا تو سلفر – پائی کے تعامل کو تشکیل دینے والی دو ساختیں ہولوئنزائمز ہیں بغیر شریک کرسٹلائزڈ لیگنڈز کے، یا کو-کرسٹالائزڈ لیگنڈس میں پہلے سے ہی خوشبودار حلقے ہیں جو سلیکٹیوٹی جیب پر قابض ہیں۔ کمپاؤنڈ 4 کے کرسٹل ڈھانچے میں، جس میں صرف JNK1 کے لیے isoform سلیکٹیوٹی ہے، نیفتھلین موئیٹی کا JNK3 کے Met146 باقیات کے ساتھ سلفر-pi تعامل ہے اور JNK2 کا IC50 97 nM ہے، جو کہ ایک معقول سرگرمی کی سطح ہے۔ alisertib کے معاملے میں، JNK3 پر alisertib کے کرسٹل ڈھانچے پر غور کریں (نہیں دکھایا گیا)، ٹرائی فلوروفینائل گروپ سلیکٹیویٹی جیب پر قبضہ کرتا ہے اور Met146 کے ساتھ تعامل کرتا ہے، لیکن JNK2 کی سرگرمی تقریباً JNK3 جیسی ہی ہے۔ ان مشاہدات کو یکجا کرکے، ہم نے یہ نتیجہ اخذ کیا کہ کمپاؤنڈ 4 JNK2 کے گیٹ کیپر کی باقیات Met108 کو JNK3 کی طرح ہائیڈروفوبک جیب بنانے کے لیے کافی حد تک حرکت کرنے پر آمادہ کرتا ہے۔

JNK3 کی فعال سائٹ میں گیٹ کیپر کی باقیات Methionine146 کے سلوک کو اوپر بیان کردہ اسی طریقہ کا استعمال کرتے ہوئے دیکھا گیا (شکل 7)۔ JNK3 (PDB ID: 4WHZ, 4W4W, 3OY1, 7KSI) کے چار کرسٹل ڈھانچے میں Met146 گروپس دو کرسٹل ڈھانچے (PDB ID: 6QE9، 6QE9) کو چھوڑ کر، 2-کلورو-فینائل گروپس کے ساتھ سلفر-pi تعاملات کی نمائش کرتے ہیں۔ ) جس میں شریک کرسٹلائزڈ لیگنڈس ہائیڈروفوبک جیب پر قبضہ نہیں کرتے ہیں [26–32]۔ JNK2 ڈھانچے میں میتھیونین کی باقیات کی کمپاؤنڈ حوصلہ افزائی حرکت اور ہائیڈروفوبک جیب کی تشکیل JNK3 ڈھانچے میں زیادہ عام ہے۔ یہ رجحان JNKs کی isoform سلیکٹیوٹی کی وضاحت کرسکتا ہے۔ JNK1 کے مشاہدہ شدہ کرسٹل ڈھانچے میں Met108 کی باقیات میں سے کوئی بھی ہائیڈروفوبک جیب بنانے کے لیے کافی حد تک حرکت نہیں کرتی ہے، لیکن JNK2 اور JNK3 کے کرسٹل ڈھانچے میں، میتھیونین کی باقیات انابیٹرز کے ساتھ ہائیڈروفوبک جیب بنانے کے لیے کافی حد تک حرکت کرتی ہیں۔ لہذا، JNK1 کے لیے سلیکٹیوٹی ہائیڈروفوبک پاکٹ قبضے کے ذریعے حاصل کی جا سکتی ہے، لیکن JNK2 کی سلیکٹیوٹی اضافی وضاحت کی ضرورت ہے۔

3.2 JNK1 اور JNK3 کے درمیان مختلف باقیات

JNK3 کی فعال سائٹ پر مشتمل باقیات کی چھان بین کرنے کے لیے، ہم نے JNK3 کے 45 سے 400 تک کے باقیات کے سلسلے کا مشاہدہ کیا اور پایا کہ Leu144 باقیات فعال سائٹ میں سلیکٹیویٹی جیب میں ایک عنصر کے طور پر موجود ہیں۔ Leu144 JNK3 (PDB ID: 3OY1) (شکل 8a) کے کرسٹل ڈھانچے میں کمپاؤنڈ 4 کے نیفتھلین رنگ کے ساتھ ہائیڈروفوبک تعاملات تشکیل دیتا ہے۔ تاہم، جب JNK1 (PDB ID: 3PZE) کے کرسٹل ڈھانچے کو 3OY1 (شکل 8b) کے شریک کرسٹلائزڈ لیگنڈ پر سپرد کیا جاتا ہے، Ile106 اسی جگہ پر Leu144 باقیات کی جگہ پر موجود ہوتا ہے اور کمپاؤنڈ 4 کے نیفتھلین رنگ سے متصادم ہوتا ہے۔ [37]۔ JNK3 کے کرسٹل ڈھانچے میں Leu144 اور نیفتھلین رنگ کے درمیان فاصلہ 3.53 Å پر برقرار ہے، لیکن JNK1 کے کرسٹل ڈھانچے سے Ile106 نیفتھلین رنگ کے ساتھ خراب رابطے کا سبب بنتا ہے کیونکہ یہ 2.26 Å کے فاصلے پر بہت قریب ہے۔ چونکہ JNK2 میں بھی JNK3 کے طور پر اسی مقام پر Leu144 ہے، اس لیے ہم یہ نتیجہ اخذ کر سکتے ہیں کہ JNK1 اور JNK2 کے لیے سلیکٹیوٹی حاصل کرنے کے لیے سلیکٹیویٹی جیب پر قبضہ کرنا قطعی شرط نہیں ہے۔

4. ہر کمپاؤنڈ میں فنکشنل گروپس جو Isoform سلیکٹیوٹی میں حصہ ڈالتے ہیں۔

بائنڈنگ موڈ میں سلیکٹیو انحیبیٹر کمپاؤنڈ 1 کے لیے ساختی اشارے کا تعین کرنے کے لیے، ہم نے کمپاؤنڈ 1-JNK3 کو-کرسٹل کمپلیکس کا تفصیل سے تجزیہ کیا (شکل 9)۔ Met149 قبضے والے علاقے میں ہائیڈروجن بانڈز کا ایک جوڑا بنتا ہے، بینزامائیڈ کا NH گروپ ہائیڈروجن بانڈ کے عطیہ دہندہ کے طور پر کام کرتا ہے، اور پائرازول رنگ میں 2-نائٹروجن ہائیڈروجن بانڈ قبول کرنے والے کے طور پر کام کرتا ہے۔ پانی کے پل کے ذریعے یوریا گروپ اور Lys93 کے درمیان ایک اور ہائیڈروجن بانڈ بنتا ہے، اور 2-کلورو-فینائل گروپ ہائیڈروفوبک جیب میں گہرائی میں واقع ہے، جو Met146 گیٹ کیپر کی باقیات کے ساتھ سلفر-پائی تعامل کی تشکیل کرتا ہے۔ آرتھو متبادل کلورائد کا تعارف سلیکٹیوٹی کے لحاظ سے اہم معلوم ہوتا ہے کیونکہ یہ کنفارمیشن کے لحاظ سے دو حلقوں کے زاویہ کو تبدیل کرتا ہے اور فینائل گروپ کو سلیکٹیوٹی جیب میں فٹ کرنے کا سبب بنتا ہے [22]۔ سالوینٹ ایکسپوژر ایریا میں پروٹونیٹڈ پائرولائڈین ایکٹیو سائٹ کے اوپری حصے میں Asn89 کے ساتھ ایک ہائیڈروجن بانڈ بناتا ہے۔ کمپاؤنڈ 1 JNK3 کے لیے JNK2 کے مقابلے میں 210-فولڈ سلیکٹیوٹی کو ظاہر کرتا ہے، جو کہ جانچے گئے دیگر منتخب JNK3 روکنے والوں سے بہت زیادہ ہے۔ pyrrolidine اور Asn89 کے درمیان ہائیڈروجن بانڈ اس رجحان کی سب سے معقول وضاحت ہے۔

اسی طرح کا مشاہدہ کمپاؤنڈ 2-JNK3 کو-کرسٹل ڈھانچے (شکل 10) کے لیے کیا گیا تھا۔ کمپاؤنڈ 2 کے قبضے کے علاقے میں Met149 کے ساتھ دو ہائیڈروجن بانڈز بھی ہیں، جو کہ NH گروپ کے ذریعے امائیڈ اور 2-نائٹروجن پائرازول رِنگ سے بنتے ہیں۔ پانی کے پل کے ذریعے Lys93 کے ساتھ یوریا موئیٹی میں ایک اضافی ہائیڈروجن بانڈ پایا گیا۔ یوریا سے منسلک 2-کلورو فینائل گروپ نے سلفیوٹی جیب کے اندر Met146 گیٹ کیپر کی باقیات کے ساتھ سلفر-pi تعامل کی نمائش کی، اور آرتھو کلورائد کے متبادل نے اس تعامل کو مزید سازگار بنا دیا۔ یہ تمام تعاملات JNK3 کے ساتھ کمپاؤنڈ 1 کے تعلقات سے بہت ملتے جلتے تھے۔ کمپاؤنڈ 1 بائنڈنگ موڈ کے مقابلے میں صرف فرق یہ تھا کہ سالوینٹ ایکسپوژر جزو میں ہائیڈروجن بانڈز کا نقصان، جو کہ JNK3 کی سرگرمی میں تبدیلی کی وجہ معلوم ہوتا ہے۔<1 nM to 35 nM) and the decrease in selectivity compared to JNK2 (from 210- to 39-fold) [23]. However, compound 2 showed a superior pharmacokinetic profile in vivo compared to compound 1. Regardless, we believe that it is advantageous to maintain the hydrogen bond donor property in the solvent exposure component for the future design of selective JNK3 inhibitors.

کمپاؤنڈ 3 کے بائنڈنگ موڈ کو JNK2 (شکل 11) پر 2500- فولڈ سلیکٹیوٹی کی نمائش کرنے والے کمپاؤنڈ 3 کی دلیل کو تلاش کرنے کے لیے جانچا گیا تھا۔ کمپاؤنڈ 3 کے لیے ایک شریک کرسٹل ڈھانچہ دستیاب نہیں تھا، اور ہم نے ڈاکنگ سمیلیشنز کے ذریعے بائنڈنگ موڈ کی نگرانی کی۔ جیسا کہ شکل 5 میں دکھایا گیا ہے، انڈولن-2-ایک جزو قبضہ والے علاقے میں واقع ہے، جہاں Met149 کے ساتھ دو ہائیڈروجن بانڈ ہیں، پانی کے پل کے ذریعے Lys93 کے ساتھ ایک ہائیڈروجن بانڈ، اور ہائیڈرو فوبک تعامل {{11} کلورو فینائل گروپ [24]۔ ان تعاملات کے علاوہ، ہم نے پایا کہ 5-انڈولین کا فلورین-2-ایک F-بانڈنگ کے ذریعے Asn152 اور Gln155 باقیات (بالترتیب 4.69 Å اور 3.41 Å کا فاصلہ) کے ساتھ قریبی تعامل کرتا ہے۔ یہ تعاملات فلورین کے متبادل کے ساتھ اور اس کے بغیر سرگرمی میں فرق کی بنیاد پر واضح ہیں۔ مزید برآں، Asn152 کی سائیڈ چین تھیازول-4-ایک کے کاربونیل گروپ کے ساتھ ایک ڈوپول تعامل کو ظاہر کرتی ہے۔ ایف بانڈ اور ڈوپول تعامل دونوں JNK2 کے لئے کمپاؤنڈ 3 کی اعلی انتخابی صلاحیت کی وضاحت کر سکتے ہیں۔

کمپاؤنڈ 3 کی سلیکٹیوٹی کے برعکس، ہم نے کمپاؤنڈ 4 کی کم سلیکٹیوٹی کا جائزہ لیا تاکہ اس کے بائنڈنگ موڈ کی شناخت کی جا سکے (شکل 12)۔ اس کے قبضے کے علاقے میں دو ہائیڈروجن بانڈ ہیں، اور ٹرائیازول کا کاربونیل گروپ-3-ایک براہ راست Lys93 کے ساتھ ہائیڈروجن بانڈ بناتا ہے، پچھلے مرکبات کے برعکس۔ نیفتھلین کی انگوٹھی سلیکٹیویٹی جیب میں داخل ہوتی ہے تاکہ اوپر بیان کی گئی باقیات کے ساتھ ہائیڈرو فوبک اور سلفر – پائی کے تعاملات پیدا ہو سکیں [25]۔ اگرچہ سائکلوہیکسین گروپ کو سالوینٹس کی نمائش کے جزو میں تبدیل کیا گیا تھا، لیکن کوئی اضافی تعامل نہیں دیکھا گیا۔ آخر میں، JNK2 کے لیے سلیکٹیوٹی والے مرکبات عام طور پر اضافی تعاملات کو ہائیڈروجن بانڈز، Fbonds، یا سالوینٹ کی نمائش میں ڈوپول تعاملات کی شکل میں ظاہر کرتے ہیں۔

5. نتائج

نیوروڈیجینریٹیو بیماریاں جیسے کہ AD تیزی سے بڑھتی ہوئی عالمی آبادی کی بنیاد پر تیزی سے سنگین سماجی مسائل بنتے جا رہے ہیں۔ AD ایک ایسی بیماری ہے جس میں بہت زیادہ علاج کی ضروریات پوری نہیں ہوتی ہیں جن کے لیے علاج کے نئے مالیکیولر اہداف کی ضرورت ہوتی ہے۔ نئے علاج کے اہداف کے بارے میں، ہم نے c-Jun N-terminal-kinase 3 کی تحقیقات کی، جو نیورونل اپوپٹوٹک عمل میں ایک اہم پروٹین کناز ہے۔ JNK MAPK پاتھ وے کے ٹرمینل پر apoptotic عمل میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے، اور isoform JNK3 بنیادی طور پر دماغ میں ظاہر ہوتا ہے۔ لہذا، یہ neurodegenerative بیماریوں کے لئے ایک ہدف سمجھا جاتا ہے، جس میں neuronal apoptosis ایک اہم واقعہ ہے. مزید برآں، چونکہ JNK3 AD کے متعدد پیتھولوجیکل راستوں میں بار بار ظاہر ہوتا ہے، اس لیے ہم نے اسے اس بیماری پر قابو پانے کے لیے ایک امید افزا ہدف سمجھا۔

لہذا، موجودہ پین-JNK inhibitors اور سلیکٹیو JNK3 inhibitors کی ایک جامع فہرست کو جمع کیا گیا، اور ان کے پابند طریقوں کی جانچ کی گئی۔ سلیکٹیو JNK3 روکنے والے عام طور پر ایک ہائیڈروفوبک علاقے (Ile124, Leu126, Leu144, Val145, Met146, اور Leu206) پر قبضہ کرتے ہیں جنہیں JNK3 inhibitor میں ایک خوشبو دار انگوٹھی داخل کر کے سلیکٹیوی جیب کہا جاتا ہے تاکہ یہ JNK3 کے فعال ہائیڈرو فوبک علاقے میں داخل ہو سکے۔ . JNK1 isoform کے لیے سلیکٹیوٹی ہائیڈروفوبک تعاملات اور سلفر – pi تعاملات کی اجازت دے کر حاصل کی گئی تھی۔ چھ JNK1، تین JNK2، اور چھ JNK3 کرسٹل ڈھانچے کا انتخاب ان کی قراردادوں کے مطابق کیا گیا تاکہ گیٹ کیپر میٹ کی باقیات کی ligand-حوصلہ افزائی کی نقل و حرکت کا موازنہ کیا جا سکے۔ چھ JNK1 شریک کرسٹل میں سے ہر ایک میں، میتھیونین سلیکٹیو JNK3 روکنے والے میں خوشبو دار انگوٹھی سے ٹکرا گیا، اور شریک کرسٹلائزڈ لیگنڈز میں سے کوئی بھی ہائیڈروفوبک جیب میں فٹ نہیں ہو سکا۔ خوشبو دار انگوٹھی کے ساتھ گیٹ کیپر میتھیونائن کا تصادم JNK2 کے شریک کرسٹل میں بھی دیکھا گیا تھا، لیکن اگر شریک کرسٹلائزڈ لیگنڈ ہائیڈروفوبک علاقے پر قبضہ کرتا ہے، تو JNK2 کی میتھیونین لیگینڈ سے متاثر ہوتی ہے اور ایک جیب بن سکتی ہے۔

چھ مشاہدہ شدہ انحیبیٹر-JNK3 کو-کرسٹل ڈھانچے میں، اس سلیکٹیوٹی کو کنٹرول کرنے والے ہائیڈروفوبک جیب پر قابض ligands کے زیادہ کیس تھے۔ چار کوکرسٹلائزڈ لیگنڈس نے ہائیڈروفوبک جیب پر قبضہ کیا اور دو نے ہائیڈروفوبک جیب پر قبضہ نہیں کیا۔ اگرچہ چار ligands کی شکلوں کے لحاظ سے مختلف قبضے کی سطحوں کا مشاہدہ کیا گیا تھا، تمام methionines نے ایک ہائیڈروفوبک جیب بنائی۔

فعال سائٹ میں گہرائی میں ہائیڈروفوبک جیب پر مشتمل باقیات کی ضمنی وضاحت کے طور پر، JNK3 کے Leu اور JNK1 کے Ile کے درمیان فرق ہے۔ نسبتاً مختصر Leu کے برعکس، JNK1 کی Ile باقیات درمیانے سے بڑے خوشبو دار حلقوں کو ہائیڈروفوبک جیب میں داخل ہونے سے روکتی ہے۔

چونکہ لیوسین کی باقیات JNK2 کے ساتھ ساتھ JNK3 کی ہائیڈروفوبک جیب میں واقع ہے، ہائیڈروفوبک خطے میں خوشبو دار انگوٹھی JNK2 پر سلیکٹیوٹی پر کوئی خاص اثر نہیں رکھتی ہے۔ ان نتائج کے مطابق، کوئی یہ دیکھ سکتا ہے کہ JNK2 کے لیے isoform سلیکٹیوٹی حاصل کرنے کے لیے اضافی عناصر کی ضرورت ہے، اور یہ سمجھا جا سکتا ہے کہ ابھی تک اس رکاوٹ کو دور کرنے والے بہت سے رکاوٹیں نہیں ہیں۔
سلیکٹیو JNK3 inhibitors کے ڈھانچے کے بارے میں جو JNK2 کے لیے بھی سلیکٹیو ہیں، ان سب کو سالوینٹس سے بے نقاب موئٹی میں اضافی پابندی کی نمائش کے لیے دیکھا گیا۔ ایک سلیکٹیو JNK3 روکنے والا، یعنی کمپاؤنڈ 1 (شکل 9)، پروٹونیٹڈ پائرولائڈائن اور Asn89 کے درمیان ایک H-بانڈ بناتا ہے، اور ایک اور سلیکٹیو JNK3 انحیبیٹر، یعنی کمپاؤنڈ 3، انڈولین میں متبادل فلورین کے درمیان بھی F-بانڈ بناتا ہے{{11 }}ایک گروپ اور Asn152/Gln155۔ یہ بانڈ سالوینٹ کی نمائش کے علاقے میں تمام اضافی تعاملات ہیں۔ مزید برآں، کمپاؤنڈ 3 میں سے ایک تھیازول کا کاربونیل گروپ Asn152 باقیات کے قریب تھا، جس کی پیش گوئی ایک ڈوپول تعامل کے طور پر کی گئی تھی۔

ایک بار جب آئسفارم سلیکٹیوٹی حاصل ہو جاتی ہے، اب بھی بہت سی رکاوٹوں کو دور کرنا باقی ہے۔ سب سے پہلے، اے ٹی پی بائنڈنگ جیبوں کی ان مماثلتوں کی وجہ سے جنہیں زیادہ تر پروٹین کناز روکنے والے نشانہ بناتے ہیں، JNK1/2 کے علاوہ کسی پروٹین کنوم پر عمومی انتخاب ترجیحی طور پر حاصل کیا جانا چاہیے۔ دوسرا، ایک اعلی طاقت کی ضرورت ہوگی کیونکہ علاج کے جسمانی ارتکاز کو اے ٹی پی کے ساتھ مقابلہ کرنا چاہئے، جو خلیوں میں ملیمولر رینج میں موجود ہے۔ تیسرا، بڑے ضمنی اثرات پیدا کیے بغیر بی بی بی کی رسائی کی ضرورت ہوگی، جو کہ AD کے بعد سے سب سے مشکل چیلنج ہے، جس بیماری پر ہم قابو پانے کی کوشش کر رہے ہیں، ایک دائمی بیماری ہے، اور طویل مدتی علاج کے لیے علاج کی ضرورت ہے۔ لہذا، اتنی طویل خوراک کی مدت کے اشارے میں، ایک وسیع حفاظتی پروفائل ایک بہت اہم مسئلہ بن جاتا ہے۔ اگرچہ نیوروڈیجینریٹیو بیماری کے علاج کے طور پر JNK3 روکنے والوں کی ترقی ابھی تک کامیاب نہیں ہوئی ہے، لیکن یہ واضح ہوتا جا رہا ہے کہ JNK3 ایک امید افزا علاج کا ہدف ہے۔

JNK3 AD کے علاج کے ہدف کے طور پر زیادہ سے زیادہ توجہ مبذول کر رہا ہے۔ نئے JNK3 روکنے والوں کے ڈیزائن میں ان خصوصیات پر غور کیا جانا چاہئے، جو جلد ہی AD کے علاج کے طور پر طاقتور اور منتخب JNK3 روکنے والوں کی ترقی میں سہولت فراہم کر سکتے ہیں۔

فنڈنگ:

اس تحقیق کو نیشنل ریسرچ فاؤنڈیشن آف کوریا نے NRF-2020R1A6A1A03042854 (سینٹر فار پروٹینوپیتھی) اور NRF-2021R1A2C2007159 (J.-M. Hah) گرانٹس کے ذریعے فنڈ کیا تھا۔

ادارہ جاتی جائزہ بورڈ کا بیان:

قابل اطلاق نہیں۔
باخبر رضامندی کا بیان:

قابل اطلاق نہیں۔

مفادات میں تضاد:

مصنفین کے پاس اعلان کرنے کے لیے دلچسپی کا کوئی تنازعہ نہیں ہے۔

حوالہ جات

1. برنیٹ، جی؛ کینیڈی، ای پی پروٹین کا انزیمیٹک فاسفوریلیشن۔ J. Biol کیم 1954، 211، 969-980۔ [کراس ریف]

2. یو ایس فوڈ اینڈ ڈرگ ایڈمنسٹریشن۔ آن لائن دستیاب: https://www.fda.gov/drugs/drug-approvals-and-databases/compilationcder-new-molecular-entity-nme-drug-and-new-biologic-approvals (14 ستمبر 2021 کو رسائی حاصل کی گئی)۔

3. فکاررو، ایس بی؛ میک کلیلینڈ، ایم ایل؛ Stukenberg, PT; برک، DJ؛ راس، ایم ایم؛ شبانووٹز، جے؛ ہنٹ، ڈی ایف؛ وائٹ، ایف ایم فاسفوپروٹیوم تجزیہ بذریعہ ماس اسپیکٹومیٹری اور اس کا سیکرومائسس سیریویسیا پر اطلاق۔ نیٹ بائیو ٹیکنالوجی 2002، 20، 301–305۔ [کراس ریف]

4. کوہن، P. ملٹی سائٹ فاسفوریلیشن کے ذریعے پروٹین کے فنکشن کا ضابطہ—ایک 25-سال کی تازہ کاری۔ ٹرینڈز بائیو کیم۔ سائنس 2000، 25، 596–601۔ [کراس ریف]

5. Roskoski، FDA سے منظور شدہ چھوٹے مالیکیول پروٹین kinase inhibitors کے RJ پراپرٹیز: A 2021 اپ ڈیٹ۔ فارماکول۔ Res. 2021، 165، 105463۔ [کراس ریف]

6. مولر، ایس. Chaikuad, A.; گرے، این ایس؛ کناپ، ایس سلیکٹیو کناز انحیبیٹر کی نشوونما کے اندر اور نتائج۔ نیٹ کیم بائول 2015، 11، 818–821۔ [کراس ریف]

7. کوہن، پی. ایلیسی، ڈی آر کناز منشیات کی دریافت — اس میدان میں آگے کیا ہے؟ اے سی ایس کیم۔ بائول 2013، 8، 96–104۔ [کراس ریف]

8. چھوٹا، ڈی ایچ؛ Cappai، R. Alois Alzheimer and Alzheimer's disease: A صد سالہ تناظر۔ J. نیورو کیم۔ 2006، 99، 708-710۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

9. نکولس، ای. Szoeke، CEI؛ Volset, SE; عباسی، ن. عبد اللہ، ایف. عبدیلا، جے؛ ایچور، ایم ٹی ای؛ اکینیمی، RO؛ الاحداب، ایف. Asgedom, SW; ET رحمہ اللہ تعالی. الزائمر کی بیماری اور دیگر ڈیمینشیا کا عالمی، علاقائی اور قومی بوجھ، 1990–2016: بیماری کے عالمی بوجھ کے لیے ایک منظم تجزیہ 2016. لینسیٹ نیورول۔ 2019، 18، 88-106۔ [کراس ریف]

10. ڈیرجارڈ، بی. ہیبی، ایم. وو، آئی ایچ؛ بیریٹ، ٹی. Su, B.; ڈینگ، ٹی. کیرن، ایم؛ ڈیوس، آر جے جے این کے 1: یووی لائٹ اور ہا-راس سے متحرک پروٹین کناز جو سی-جون ایکٹیویشن ڈومین کو باندھتا اور فاسفوریلیٹ کرتا ہے۔ سیل 1994، 76، 1025–1037۔ [کراس ریف]

11. جانسن، جی ایل؛ ناکامورا، K. دی سی-جون کناز/ تناؤ سے چلنے والا راستہ: انسانی بیماری میں ضابطہ، فعل، اور کردار۔ بائیوکیم۔ بائیوفیس۔ ایکٹا مول۔ سیل ریس 2007، 1773، 1341–1348۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

12. اوکازاوا، ایچ. ایسٹس، ایس دی جے این کے/سی-جون کیسکیڈ اور الزائمر کی بیماری۔ ایم۔ J. الزائمر ڈس۔ دیگر ڈیمنٹ۔ 2002، 17، 79-88۔ [کراس ریف]

13. برکنر، ایس آر؛ تماریلو، ایس پی؛ کوان، سی وائی؛ Flavell, RA; Rakic، P.؛ Estus, S. JNK3 c-Jun ایکٹیویشن اور apoptosis میں حصہ ڈالتا ہے لیکن اعصاب کی نشوونما کے عنصر سے محروم ہمدرد نیوران میں آکسیڈیٹیو تناؤ نہیں۔ J. نیورو کیم۔ 2001، 78، 298–303۔ [کراس ریف]

14. Gwinn, DM; شیکلفورڈ، ڈی بی؛ ایگن، ڈی ایف؛ میہائیلووا، ایم ایم؛ میری، اے. Vasquez, DS; ترک، BE؛ شا، RJ AMPK فاسفوریلیشن آف ریپٹر ایک میٹابولک چیک پوائنٹ میں ثالثی کرتا ہے۔ مول سیل 2008، 30، 214–226۔ [کراس ریف]

15. یون، ایس او؛ پارک، DJ؛ Ryu, JC; اوزر، ایچ جی؛ ٹیپ، سی. شن، وائی جے؛ لم، ٹی ایچ؛ Pastorino, L.; کنور، اے جے؛ والٹن، جے سی؛ ET رحمہ اللہ تعالی. JNK3 پیپٹائڈس کے ذریعہ میٹابولک تناؤ کو برقرار رکھتا ہے۔ نیوران 2012، 75، 824–837۔ [کراس ریف]

For more information:1950477648nn@gmail.com