الکحل کے لیے مخصوص نقلی حرکیات کی یادداشت کی بحالی اور دوبارہ لگنا حصہ 4

آرک کے علاوہ، ہم نے پایا کہ Egr1 کی mRNA کی سطح، لیکن Bdnf نہیں، DH اور mPFC میں الکحل کی یادداشت کی بازیافت کے ذریعہ بڑھائی گئی تھی۔

جیسے جیسے وقت گزرتا ہے، لوگ رفتہ رفتہ بھولنے کے اسرار کی نئی سمجھ حاصل کرتے ہیں۔ اس عمل میں، ایک نئی ٹیکنالوجی میموری کی بازیافت آہستہ آہستہ ایک تحقیقی ہاٹ سپاٹ بن گئی ہے۔

تو کیا الکحل میموری کی بازیافت اور میموری کی کارکردگی کے درمیان کوئی تعلق ہے؟ آؤ اب ایک نظر ڈالیں! سب سے پہلے، ہمیں واضح ہونے کی ضرورت ہے: الکحل میموری کی بازیافت کوئی الگ ٹیکنالوجی نہیں ہے۔ یہ ایک ایسی ٹیکنالوجی ہے جو الکحل کے ذریعے دماغ کے نیوران کو متاثر کرتی ہے۔ یہ عمل دماغ میں کچھ "سونے والی" یادوں کو متحرک کر سکتا ہے، جس سے ہم ان یادوں کو تازہ کر سکتے ہیں۔

دوم، ہمیں یہ جاننے کی ضرورت ہے کہ یادداشت کو بہتر بنانا ہمیں مزید چیزوں کو "یاد رکھنے" کی اجازت نہیں دیتا بلکہ مختلف طریقوں سے یادوں کو دوبارہ حاصل کرنے اور دوبارہ تشکیل دینے کا عمل ہے۔ یہ عمل ہمیں اس علم کو بہتر طور پر مضبوط کرنے اور سمجھنے میں مدد دے سکتا ہے جو ہم نے سیکھا ہے، اس طرح ہماری یادداشت بہتر ہوتی ہے۔

لہذا، ہم یہ نتیجہ اخذ کر سکتے ہیں کہ الکحل میموری کی بازیافت اور میموری کی کارکردگی کے درمیان تعلق ہے۔ جب ہم شراب پینے کے بعد پچھلی یادوں کو دوبارہ نکالنے کے لیے اس ٹیکنالوجی کا استعمال کرتے ہیں، تو ہم ان یادوں کو دوبارہ مضبوط کرنے کے عمل سے گزر رہے ہوتے ہیں، اس طرح ہماری یادداشت ایک خاص حد تک بہتر ہوتی ہے۔

یقینا، ہمیں یہ بھی یاد رکھنا چاہیے کہ الکحل کی یادداشت کی بازیافت یادداشت کو بہتر بنانے کے لیے دیرپا اور قابل اعتماد تکنیک نہیں ہے۔ اگر ہم طویل عرصے تک بہترین یادداشت رکھنا چاہتے ہیں تو ہمیں روزانہ مطالعہ اور زندگی کے ذریعے یادداشت کی تربیت کی دیگر تکنیکوں کے ساتھ مل کر اپنی یادداشت کو مسلسل مضبوط اور بہتر کرنے کی ضرورت ہے۔

اس عمل میں، ہمیں اپنے سیکھنے کی حوصلہ افزائی اور یادداشت کی صلاحیت کو بہتر طور پر متحرک کرنے کے لیے ہر وقت ایک پرامید رویہ برقرار رکھنے کی ضرورت ہے۔ لہٰذا، آئیے ہم یادداشت کی تربیت کا فعال طور پر سامنا کریں، خود کو غیر متزلزل بنائیں، اور یادداشت کو مسلسل بہتر بنانے کے راستے پر ہمت سے آگے بڑھیں! یہ دیکھا جا سکتا ہے کہ ہمیں یادداشت کو بہتر بنانے کی ضرورت ہے، اور Cistanche deserticola نمایاں طور پر یادداشت کو بہتر بنا سکتا ہے، کیونکہ Cistanche deserticola نیورو ٹرانسمیٹر کے توازن کو بھی کنٹرول کر سکتا ہے، جیسے کہ acetylcholine کی سطح میں اضافہ اور ترقی کے عوامل۔ یہ مادے یادداشت اور سیکھنے کے لیے بہت اہم ہیں۔ اس کے علاوہ، گوشت خون کے بہاؤ کو بھی بہتر بنا سکتا ہے اور آکسیجن کی ترسیل کو فروغ دیتا ہے، جو اس بات کو یقینی بنا سکتا ہے کہ دماغ کو کافی غذائی اجزاء اور توانائی ملے، اس طرح دماغی قوت اور برداشت کو بہتر بنایا جا سکتا ہے۔

قلیل مدتی میموری کو بہتر بنانے کے لیے ابھی کلک کریں۔

Egr1 mRNA اظہار میں اضافہ پہلے خوف اور منشیات کی یادوں کی بحالی میں شامل کیا گیا ہے [19, 21, 48, 61]، اس امکان کو بڑھاتا ہے کہ یہ نقل کا عنصر بھی الکحل کی یادوں کی بحالی میں ایک کردار ادا کرتا ہے۔

جبکہ میموری کی بحالی میں Bdnf کا کردار متنازعہ ہے [19, 49]، Bdnf انڈکشن کو ایک اہم فارموری حصول اور معدومیت سیکھنے کے طور پر جانا جاتا ہے [19, 62]۔ اس طرح، ہمارے مطالعے میں Bdnf اظہار میں تبدیلی کی کمی یہ تجویز کر سکتی ہے کہ ہماری یادداشت کی بازیافت کے طریقہ کار نے میموری کی بازیافت کے متوازی طور پر معدومیت کے سیکھنے کا آغاز نہیں کیا۔

مزید برآں، ہم نے حال ہی میں اطلاع دی ہے کہ اگرچہ DH میں Bdnf کی mRNA کی سطح الکحل میموری کی بازیافت سے نہیں بڑھی ہے، لیکن گروتھ فیکٹر کا اظہار اس وقت بلند ہوا جب دوبارہ حاصل کرنے کے بعد مکروہ کاؤنٹر کنڈیشننگ کی جاتی ہے جس نے دوبارہ گرنے سے روکا [44]، Bdnf کے پیچیدہ کردار کی تجویز کرتا ہے۔ الکحل میموری کی حرکیات میں۔

ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ IEG اظہار میں اضافہ الکحل سے متعلق یادوں کی بحالی کے لیے منفرد نہیں ہے۔

درحقیقت، اے آر سی اور ای جی آر 1 پہلے کئی قسم کی یادوں کو مضبوط کرنے میں ملوث تھے، جن میں خوف کی یادیں [19، 46، 47، 62]، شناخت کی یادیں [21]، اور مختلف منشیات کے استعمال سے وابستہ یادیں [20، 22، 61] شامل ہیں۔

تاہم، اس بات کے بڑھتے ہوئے شواہد بھی موجود ہیں کہ الکحل کی تلاش کے کچھ طریقہ کار قدرتی انعام کی تلاش پر قابو پانے والوں سے مختلف ہو سکتے ہیں [5, 27, 28, 63]۔ اس کے علاوہ، اس بات کا ثبوت موجود ہے کہ مختلف انعامات (اور مختلف ادویات کے لیے، خاص طور پر) کی یادوں کو مختلف طریقے سے پروسیس کیا جاتا ہے [29-32]۔ ہمارے RNAseq تجزیہ کے نتائج نے واقعی الکحل میموری کی بازیافت کے ذریعہ انوکھا ٹرانسکرپٹومکس دستخط کا انکشاف کیا۔

خاص طور پر، ڈی ایچ میں 44 جین اور ان میں پی ایف سی میں 9 جینز کا ایک مختلف سیٹ ملا، جس نے الکحل کی یادداشت کی بازیافت کے بعد اہم تبدیلیاں ظاہر کیں۔ مزید ڈیٹا کی توثیق کے بعد، ہم نے mPFC (Fkbp5) میں ایک جین اور DH (Adcy8، Scl8a3، اور Neto1) میں تین جینوں پر توجہ مرکوز کی اور پایا کہ ان کا اظہار سوکروز سے وابستہ یادوں کی بازیافت سے متاثر نہیں ہوا تھا۔

اس سے پتہ چلتا ہے کہ آرک اور ای جی آر 1 کے برعکس، یہ 4 مخصوص جین ممکنہ طور پر انعامی یادوں کی پروسیسنگ میں عام کردار ادا نہیں کرتے، پھر بھی الکحل کی یادوں کی پروسیسنگ میں انتخابی کردار ادا کر سکتے ہیں۔

دلچسپ بات یہ ہے کہ یہ چار جین پہلے الکحل کے استعمال کی خرابی اور سیکھنے اور یادداشت میں ملوث تھے۔ اس طرح، Fkbp5 FK506 بائنڈنگ پروٹین 5 کو کوڈ کرتا ہے، جو تناؤ کے نیورو اینڈوکرائن سسٹم کا ایک ریگولیٹر ہے [64]۔

FKBP5 مختلف حالتیں الکحل نکالنے کے سنڈروم کی شدت کو تبدیل کرتی ہیں [65] اور انسانوں میں بھاری شراب نوشی کے رجحان کی پیش گوئی کرتی ہیں [66-68]۔ Fkbp5 کو حذف کرنے سے چوہوں میں الکحل کی واپسی کی شدت [65] اور الکحل پینے [67] کو بڑھایا گیا، جب کہ پروٹین کی فارماسولوجیکل روکنا نے الکحل کے اعتدال پسند استعمال کو کم کیا، اور چوہوں میں CPP کی بحالی [69] اور تناؤ والے چوہوں میں شراب نوشی کو کم کیا [70]۔

Adcy8 mRNA کی سطح، adenylatecyclase 8 (AC8) کو انکوڈنگ کرتی ہے جو کیلشیم کی آمد کے جواب میں CAMP کی تشکیل کو اتپریرک کرتی ہے اور حال ہی میں الکحل کی انٹیک کے ممکنہ ریگولیٹر کے طور پر نشان زد کیا گیا ہے [28, 71]، طویل مدتی پرہیز کرنے والے شرابی [72] سے خون کے خلیوں میں کمی واقع ہوئی تھی۔

ایڈسی 8 کو حذف کرنا پہلے شراب پینے کو کم کرنے اور چوہوں میں الکحل کے ان مضر اثرات کی حساسیت کو بڑھانے کے لئے دکھایا گیا تھا [73]۔ اس کے علاوہ، چوہوں میں الکحل کی دائمی نمائش نے محلول کیریئر فیملی 8 (سوڈیم/کیلشیم ایکسچینجر)، ممبر 3 (NCX3)، Scl8a3 [74، 75] کے ذریعہ انکوڈ شدہ پروٹین کے دماغی اظہار کو بڑھا دیا۔

چوہوں میں الکحل کا استعمال Neto1[76] کے دماغی نظام کے کم اظہار سے بھی وابستہ ہے، جو کہ NMDA-رسیپٹر کمپلیکس [77] کا ایک جزو نیوروپیلن ٹولائیڈ نما 1 (NRP1) کو انکوڈنگ کرتا ہے۔

یہ پروٹین ہپپوکیمپس [78] میں Synaptic reorganization اور ٹرانسمیشن میں شامل ہے اور مقامی سیکھنے اور میموری کے لیے ضروری ہے [77]۔

اس طرح، ہمارے نتائج یہ ظاہر کرتے ہیں کہ الکحل کی یادوں کی محض بازیافت، یہاں تک کہ الکحل کے فارماسولوجیکل اثرات کے بغیر، ان جینز کے اظہار کو متاثر کرتی ہے۔ تاہم، الکحل کی یادداشت کی بحالی اور دوبارہ لگنے میں ان کے مخصوص کردار کی جانچ کرنا باقی ہے۔

موجودہ مطالعے کی ایک حد یہ ہے کہ RNA-seq پرکھ بلک ایم پی ایف سی اور ڈی ایچ ٹشوز پر کی گئی تھی، بجائے اس کے کہ میموری کی بازیافت کے ذریعے چالو ہونے والے انفرادی خلیوں پر۔ خاص طور پر، حالیہ مطالعات نے تجویز کیا ہے کہ عام طور پر یادیں [79, 80]، اور خاص طور پر الکحل سے متعلق یادیں [32, 81, 82]، نیورون کی ایک چھوٹی تعداد پر مشتمل نیورونل انسیبلز کی ایکٹیویشن کے ذریعے انکوڈ کی جاتی ہیں، جن کی شناخت نیورون ایکٹیویشن مارکرز کے ذریعے کی جا سکتی ہے۔ مثال کے طور پر، cFOS) [80].

درحقیقت، آپریٹ کنڈیشنڈ الکحل اور میٹھی انعامی یادوں کی بازیافت کے ذریعہ اسی طرح کے IEG (cFOS) ایکٹیویشن پیٹرن ایم پی ایف سی اور چوہے کے دماغ میں اضافی میسولمبک علاقوں میں پائے گئے [32، 81]۔ اس طرح، یہ ممکن ہے کہ RNA-seq پرکھ کو منتخب طور پر یادداشت کی بازیافت کے ذریعہ چالو کردہ نیورونالنسبل پر کرنے سے زیادہ درست نتائج برآمد ہوتے۔

خلاصہ طور پر، ہمارے نتائج یہ بتاتے ہیں کہ الکحل میموری کی بازیافت دو متوازی ٹرانسکرپشن پروگراموں کو حاصل کرتی ہے۔ IEGs Arc اور Egr1 سمیت سیکھنے اور یادداشت کے عام مالیکیولر میکانزم کے ذریعے پہنچایا جانے والا ایک پروگرام، عام طور پر یادوں کو یکجا کرنے میں مصروف ہے۔

دوسرا ٹرانسکرپشن پروگرام، جو الکحل میموری کی بازیافت کے ذریعے شروع کیا گیا ہے، ان جینز کے ذریعے کنٹرول کیا جاتا ہے جو خاص طور پر الکحل سے متعلق رویوں کو فروغ دیتے ہیں۔ الکحل کی یادوں کے لیے یہ دوہری پروسیسنگ ماڈل اس امکان کو بڑھاتا ہے کہ مختلف یادوں کے لیے میموری کی بحالی میں ایک جیسے دوہری پروسیسنگ مالیکیولر میکانزم ہو سکتا ہے، جس میں کچھ اجزاء ایک سے زیادہ یادوں کے ذریعے شیئر کیے جاتے ہیں، اور باقی ہر قسم کی یادوں کے لیے منفرد ہوتے ہیں۔

اس فرضی ماڈل کی جانچ پڑتال کرتے ہوئے جانچنا باقی ہے کہ آیا ان جینوں کو جوڑنا الکحل اور سوکروز میموری کی بحالی کو فرق سے متاثر کرتا ہے۔ اگر ایسا ہے تو، یہ تجویز کرے گا کہ پیتھوجینک یادوں سے متعلق عوارض کا علاج کرنے کے لیے انعام کے مخصوص مالیکیولر اہداف کو نشانہ بنانا ممکن ہو سکتا ہے، نہ کہ الکحل کی یادداشت کی بحالی سے آگے بہت سے افعال کے لیے ضروری بڑے مالیکیولر میکانزم میں خلل ڈالنے کی بجائے۔

مواد اور طریقے

اپریٹس، ادویات اور ریجنٹس، oligodeoxynucleotide (ODN) ڈیزائن اور تیاری، ویسٹرن بلوٹ اور qRT-PCR کے تجزیوں، اور RNA-seq لائبریری کی تیاری کے بارے میں تفصیلات کے لیے اضافی معلومات دیکھیں۔

جانور

نر اور مادہ C57BL/JRccHsd چوہے (25–30 g)، 3–4/پنجرے میں رکھے گئے جنہیں تل ابیب یونیورسٹی اینیمل فیسٹیلیٹی (اسرائیل) میں پالا گیا، اور انہیں 12 گھنٹے کے لائٹ ڈارک سائیکل کے تحت رکھا گیا (صبح 7 بجے روشنیاں)، خوراک اور پانی دستیاب ایڈلیبیٹم کے ساتھ۔

سوکروز پلیس کنڈیشننگ کے تجربات میں، چوہوں کی سوکروز کی گولیاں جمع کرنے کی حوصلہ افزائی کے لیے تربیتی سیشن سے پہلے 6 گھنٹے تک خوراک تک رسائی پر پابندی تھی۔ خوراک کی کمی کا یہ مختصر دورانیہ ان نتائج پر مبنی ہے کہ دن کے وقت، 2-6 گھنٹے کا روزہ کھانا کھلانے کے رویے کو متاثر نہیں کرتا ہے [83]، اور ایک اہم شفٹ انمیٹابولک مارکروں کو متحرک نہیں کرتا ہے [84]، اس طرح خوراک کی پابندی کے اثرات کو کم کیا جاتا ہے۔ .

وزن کم کرنے کے لیے چوہوں کا ہفتے میں دو بار وزن کیا گیا۔ تمام تجرباتی پروٹوکولز Tel AvivUniversity کی ادارہ جاتی جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کمیٹی کے رہنما خطوط اور NIH رہنما خطوط (جانوروں کی بہبود کی یقین دہانی نمبرA5010-01) کے ذریعہ منظور اور ان کے مطابق تھے۔ استعمال شدہ جانوروں کی تعداد کو کم سے کم کرنے کی تمام کوششیں کی گئیں۔

سلوک کے طریقہ کار

جگہ کنڈیشنگ

الکحل کنڈیشنڈ جگہ کی ترجیح (سی پی پی): تمام چوہوں کو 3 دن تک روزانہ آئی پی نمکین انجیکشن کی عادت ڈالی گئی تھی۔

بیس لائن ٹیسٹ (دن 1): پہلے دن، سلائیڈنگ ڈور واپس لے لیا گیا اور چوہوں کو 30 منٹ تک پورے آلات کو آزادانہ طور پر دریافت کرنے کی اجازت دی گئی۔ الکحل پلیس کنڈیشنگ (دن 2-9): ایک سیشن کے ساتھ بیس لائن ٹیسٹ کے 24 گھنٹے بعد ٹریننگ شروع ہوئی۔ سلائڈنگ دروازے بند ہونے کے ساتھ، 8 دنوں میں فی دن زیر انتظام۔ 3، 5، 7 اور 9 دنوں میں، چوہوں کو الکحل ملا (1.8 گرام/کلوگرام، 20٪ v/v؛ ip) اور فوری طور پر 5 منٹ کے لیے جوڑی والے ٹوکری تک محدود رہے۔

یہ خوراک اور کنڈیشنگ کا دورانیہ پہلے الکحل سے متاثرہ CPP پیدا کرنے کے لیے دکھایا گیا تھا [42، 85]۔ متبادل دنوں میں (یعنی دن 2، 4،6، اور 8)، چوہوں کو نمکین محلول ملا اور وہ الکحل کنڈیشنگ کے دن کی طرح اسی مدت کے لیے بغیر جوڑی والے ڈبے تک محدود رہے۔

جوڑا بنائے گئے کمپارٹمنٹس کو متوازن نہیں رکھا گیا۔ جگہ کی ترجیحی ٹیسٹ 1 (دن 10): جگہ کی ترجیحی جانچ جیسا کہ بیس لائن ٹیسٹ کے لیے بیان کیا گیا تھا، اور الکحل-سی پی پی کو انڈیکس کرنے کے لیے پیش کیا گیا تھا [41]۔ ترجیح کی تعریف بیس لائن ٹیسٹ کے مقابلے میں جگہ کی ترجیحی ٹیسٹ 1 کے دوران الکحل کے جوڑے والے کمپارٹمنٹ میں گزارے گئے وقت کے فیصد میں اضافے کے طور پر کی گئی تھی۔

یادداشت کی بازیافت (دن 11): اس مرحلے سے پہلے، چوہوں کو مختلف تجرباتی حالات (سی پی پی سکور اور جنس کے لیے مماثل) تفویض کیے گئے تھے۔ یادداشت کی بازیافت کے سیشن کے دوران ، چوہوں کو 3 منٹ تک الکحل کے جوڑے والے کمپارٹمنٹ تک محدود رکھا گیا اور پھر وہ اپنے گھر کے پنجروں میں واپس آگئے۔ کنٹرول مائس کو مختصراً ہینڈل کیا گیا۔ جگہ کی ترجیحی ٹیسٹ 2 (دن 12): چوہوں کو پلیس پریفرنس ٹیسٹ کا نشانہ بنایا گیا جو کہ ترجیحی ٹیسٹ 1 کی طرح ہے۔

سوکروز سی پی پی: سوکروز پری ٹریننگ (دن 1–6): 1–3 دنوں میں، چوہوں کو گھر کے پنجروں میں 5–6 سوکروز گولیاں (45 ملی گرام، ڈسٹ لیس پریسیشن پیلٹس، بائیو سرو، فرنچ ٹاؤن، این جے، یو ایس اے) جمع کرنے کی عادت ڈالی گئی۔ . 4–6 دنوں میں، چوہوں کو 30- منٹ کے سیشنوں کے دوران ایک خالی Plexiglas باکس میں 3 گولیاں جمع کرنے کی تربیت دی گئی۔ وہ چوہوں جنہوں نے سوکروز کی تربیت کے دوران چھ سے کم چھرے (3 دنوں میں کل نو چھروں میں سے) اکٹھے کیے انہیں تجربے سے خارج کر دیا گیا (32 میں سے 2 چوہوں)۔

بیس لائن ٹیسٹ (دن 7): ساتویں دن، ایک سی پی پی چیمبر میں سلائڈنگ ڈور واپس لے لیا گیا اور چوہوں کو 30 منٹ تک پورے آلات کو تلاش کرنے کی اجازت دی گئی۔ ایک غیر جانبدارانہ اپریٹس/غیرجانبدار تفویض کرنے کا طریقہ، جیسا کہ الکحل-CPP طریقہ کار میں بیان کیا گیا ہے، یہاں بھی اپنایا گیا تھا۔ سوکروز پلیس کنڈیشننگ (دن 8-15): بیس لائن ٹیسٹ کے 24 گھنٹے بعد ٹریننگ کا آغاز 8 دنوں میں روزانہ ایک سیشن کے ساتھ ہوا، سلائیڈنگ کے ساتھ۔ دروازہ بند دن 9، 11، 13 اور 15 کو چوہوں کو جوڑے والے کمپارٹمنٹ میں رکھا گیا تھا، اور ایک منٹ بعد، تین سوکروز کے گولے فرش پر بکھرے ہوئے تھے۔
چوہوں کو 15 منٹ بعد ان کے گھر کے پنجروں میں واپس کردیا گیا۔ متبادل دنوں پر (یعنی دن 8، 10، 12 اور 14)، چوہوں کو بغیر جوڑی والے ڈبے میں 15 منٹ تک بغیر کسی مداخلت کے رکھا گیا تھا۔

جوڑے والے کمپارٹمنٹس کو متوازن نہیں رکھا گیا۔ جگہ کی ترجیحی ٹیسٹ 1 (دن 16): جگہ کی ترجیحی جانچ جیسا کہ بیس لائن ٹیسٹ کے لیے بیان کیا گیا تھا، اور انڈیکس سوکروز-CPP کے لیے پیش کیا گیا تھا۔ ترجیح کو بیس لائن ٹیسٹ کے مقابلے میں جگہ کی ترجیحی ٹیسٹ 1 کے دوران سوکروز کے جوڑے والے کمپارٹمنٹ میں گزارے گئے وقت کے فیصد میں اضافے کے طور پر بیان کیا گیا تھا۔ میموری کی بازیافت (دن 17): سوکروز میموری کی بازیافت کا طریقہ کار الکحل میموری کی بازیافت کے طریقہ کار سے مماثل تھا (اوپر دیکھیں۔ )۔

Oligodeoxynucleotide (ODN) کی توثیق

آرک اینٹی سینس ODN (AS-ODN) اور scrambled ODN (SCR-ODN) (Sigma-Aldrich, Rehovot, Israel) ڈیزائن نے پہلے بیان کردہ رہنما خطوط پر عمل کیا [56, 86]۔

آرک AS-ODN فنکشنل توثیق۔ Arc AS-ODN (2 nmol/µl, 0.5 µl, 0.25 µl/min) ایک نصف کرہ میں DH میں داخل کیا گیا تھا، اور SCR-ODN (2 nmol/µl، { {9}}.5 µl، 0.25 µl/منٹ) دوسرے نصف کرہ میں داخل کیا گیا تھا (سائیڈز متوازن نہیں تھیں)۔ دو یا چار گھنٹے بعد، علاج شدہ چوہوں نے 5 منٹ تک غیر مانوس سیاق و سباق (سی پی پی کمپارٹمنٹ، اوپر اپریٹس کی تفصیل دیکھیں) دریافت کیا تاکہ نیاپن پر منحصر اے آر سی اظہار پیدا کیا جا سکے۔ چوہوں کو ایک گھنٹہ بعد (یعنی، ODN انفیوژن کے 3 یا 5 گھنٹے بعد)، دماغ کے ٹشوز جمع کیے گئے، اور ARC پروٹین کی سطح کا اندازہ مغربی بلوٹانالیسس (فگر S4) کے ذریعے کیا گیا۔

سرجری اور انٹرا ہپپوکیمپل مائیکرو انفیوژن سرجری اور مائیکرو انفیوژن کا انعقاد کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے[42, 87]۔

سرجری. سٹیریوٹیکسک سرجری isoflurane اینستھیزیا کے تحت کی گئیں۔ چوہوں کو ایک سٹیریوٹیکسک فریم میں رکھا گیا تھا (RWD Life Science, Shenzhen, China)، اور دو طرفہ گائیڈ کینول (C235G-2.6, 26G; Plastics One Inc., Roanoke, VA, USA) کا مقصد تھا DH مندرجہ ذیل کوآرڈینیٹ (−2 ملی میٹر کے پیچھے بریگما، ±1.3 ملی میٹر درمیانی سطح، −1.45 ملی میٹر وینٹرل سے کھوپڑی کی سطح)۔ کینول کو دانتوں کے ایکریلک سے محفوظ کیا گیا تھا۔ مماثل ڈمی کینولے (Plastics One Inc., Roanoke, VA, USA) کو گائیڈ کینول میں داخل کیا گیا تھا اور انجیکٹر کی جگہ کو ڈھانپنے اور ملبے سے صاف رکھنے کے لیے ڈسٹ کپ کے ساتھ ٹاپ کیا گیا تھا۔ چوہوں کو الکحل سی پی پی کی تربیت سے پہلے 7-10 دن تک صحت یاب ہونے کی اجازت تھی۔

انٹرا ہپپوکیمپل انفیوژن۔ ایکٹینومائسن ڈی (4 µg/µl، 0.5 µl فی سائیڈ،0.25 µl/منٹ، DMSO میں) [19] یا میموری کی بازیافت کے فوراً بعد گاڑی کے مساوی حجم کو DH میں مائیکرو انجیکٹ کیا گیا . اسی طرح کے ارتکاز میں ہپپوکیمپس میں ایکٹینومائسن ڈی کا انفیوژن میموری کی بحالی میں خلل ڈالنے کے لیے دکھایا گیا تھا [19]۔ آرک AS-ODN یا کنٹرول SCR-ODN (2nmol/µl, 0.5 µl/side, 0.25 µl/min; PBS میں) کو DH میں 4 گھنٹے 2 گھنٹے پہلے یا مائیکرو انجیکٹ کیا گیا تھا۔ میموری کی بازیافت کے بعد 4 گھنٹے۔

ڈسٹ کپ اور ڈمی کینولے کو ہٹانے کے بعد، انجیکشن کینول (33 جی؛ پلاسٹک ون انکارپوریٹڈ، روانوک، VA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے بیداری سے روکے ہوئے چوہوں کے لیے 2 منٹ سے زیادہ مائیکرو انفیوژن کیا گیا جو گائیڈ سے آگے 0.5 ملی میٹر تک پھیلا ہوا تھا۔ cannula tip.Injection cannulae کو اضافی 2 منٹ کے لیے جگہ پر چھوڑ دیا گیا۔ انفیوژن کے بعد، ڈمی کینولے کو گائیڈ کینول میں داخل کیا گیا، اسے ڈسٹ کپ سے محفوظ کیا گیا، اور جانور اپنے گھر کے پنجروں میں واپس چلے گئے۔ کریسائل وایلیٹ سے داغے ہوئے پیرافارمیلڈہائڈ فکسڈ ٹشو کے 30 μm-موٹے کورونل حصوں میں کینول کے مقامات کی تصدیق کی گئی۔

ڈیٹا کا تجزیہ

Place preference was assessed as the percentage of time spent in the alcohol/sucrose-paired compartment, relative to the total test time. Mice that spent >بیس لائن ٹیسٹ کے دوران کسی بھی کمپارٹمنٹ میں 75% وقت کو مطالعہ سے خارج کر دیا گیا تھا (267 میں سے 9)۔ بیس لائن اور سی پی پی ٹیسٹ 1 کے درمیان سی پی پی اسکورز کا موازنہ کرکے سی پی پی اسٹیبلشمنٹ کی تصدیق کی گئی تھی اور اس کا تجزیہ ایک جوڑے والے ٹی ٹیسٹ سے کیا گیا تھا۔ چونکہ میموری کی بازیافت کے لیے CPP کا اظہار (یعنی میموری کی تشکیل) کی ضرورت ہوتی ہے، اس لیے چوہوں کا ڈیٹا جو CPP نہیں دکھاتا تھا (بیس لائن اور ٹیسٹ 1 کے درمیان ترجیح میں کم از کم 5% اضافہ) کو تجربے سے خارج کر دیا گیا تھا (258 میں سے 48)۔

الکحل-سی پی پی کے بعد میموری کی بحالی میں مداخلت کا ایک مخلوط ماڈل انووا کے ذریعہ علاج کے درمیان مضامین کے عنصر (ایکٹینومائسن D یا ODN) اور ٹیسٹ کے اندر مضامین کے عنصر (CPP ٹیسٹ 1، CPP ٹیسٹ 2) کے ساتھ تجزیہ کیا گیا۔ اہم تعاملات کا تجزیہ aStudent–Newman–Keuls post hoc test کے ذریعے کیا گیا۔ ویسٹرن بلوٹیمونوریکٹیو اے آر سی پروٹین کی سطحوں کی کثافت کو ان GAPDH کے لیے معمول بنایا گیا تھا اور علاج کے درمیان مضامین کے عنصر کے ساتھ یک طرفہ انووا کے ذریعے تجزیہ کیا گیا تھا، جس کے بعد ڈنیٹ کا پوسٹ ہاک ٹیسٹ کیا گیا تھا۔ qRT-PCR mRNA اظہار ڈیٹا کو Gapdh میں معمول بنایا گیا تھا اور اسے کنٹرول گروپ کے اظہار کے فیصد کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔

دماغ کے ہر علاقے کے تمام جینوں کے ڈیٹا کا ایک طرفہ ANOVA کے ذریعے علاج کے درمیان مضامین کے عنصر کے ساتھ تجزیہ کیا گیا، اس کے بعد ہر جین کے لیے ڈنیٹ کا ٹیسٹ، کنٹرول (کوئی بازیافت) گروپ سے حاصل کردہ ڈیٹا کے مقابلے کے لیے۔ RNA-seq کے لیے، ہم نے ہر ایک نقل کے لیے 3 جانوروں سے ٹشوز جمع کیے اور درج ذیل تعداد میں نقل تیار کی: 3 ڈورسل ہپپوکیمپس (DH) کے لیے نہیں، 2 DH- بازیافت کے لیے، 3 prefrontal cortex (PFC) کے لیے - کوئی بازیافت نہیں، اور 2 کے لیے ( پی ایف سی - بازیافت۔ Trizol کے ساتھ مکمل RNA تنہائی کے بعد، ترتیب دینے والی لائبریریاں اس طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے تیار کی گئیں جو ہم نے تیار کیں [88]۔

لائبریریوں کو IlluminaHiseq 2000 کے ساتھ 50 bp سنگل اینڈ سیکوینسنگ کا نشانہ بنایا گیا۔ فاسٹ کیو سی کے ذریعہ ڈیٹا کو ترتیب دینے کے معیار کی تصدیق کرنے کے بعد، Bowtie2 [89] کا استعمال کرتے ہوئے ریڈز کو mm9 حوالہ جینوم میں میپ کیا گیا اور Tophat2 [90] کے ساتھ تشریح کی گئی۔

جینوں کے ساتھ نقشہ بنائے گئے ریڈز کو فیچر کاؤنٹ [91] کے ذریعہ مقدار میں طے کیا گیا تھا۔ ہم نے Rn45s، Lars2، Rn4.5s، Cdk8، Zc3h7a، اور تھیمیٹوکونڈیریل کروموسوم کو خارج کر دیا تاکہ اوور ایمپلیفائیڈ جینز کی گنتی سے بچا جا سکے جو لائبریری کو معمول پر لانے کو روک سکتے ہیں جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [92]۔ DESeq2 [58] کو بازیافت گروپ میں امتیازی طور پر ظاہر کردہ جین (DEG) کی شناخت کے لیے استعمال کیا گیا تھا، کوئی بازیافت کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، ایک اہم کٹ آف ایڈجسٹڈ p-value (p(adj) < 0.05) کے ساتھ۔

DATA AVAILABILITYRNA-seq ڈیٹا NCBI Gene Expression Omnibus پر https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi (GSE205586) پر ایک جائزہ لینے والے ٹوکن:knyfwwiorbutvuv کے ساتھ دستیاب ہے۔

حوالہ جات

1. کولنز پی وائی، پٹیل وی، جوسٹل ایس ایس، مارچ ڈی، انسل ٹی آر، ڈار اے ایس، وغیرہ۔ عالمی ذہنی صحت کو بڑے چیلنجز۔ فطرت 2011؛ ​​475:27-30۔

2. ہیلیگ ایم، ایگلی ایم۔ الکحل پر انحصار کا فارماسولوجیکل علاج: ہدف کی علامات اور ہدف کے طریقہ کار۔ فارماکول تھراپی۔ 2006؛ 111:855-76۔

3. سنہا آر. حیاتیاتی عوامل پر نئی دریافتیں جو نشے کے دوبارہ لگنے کے خطرے کی پیش گوئی کرتی ہیں۔ کرر سائیکاٹری ریپ. 2011؛ ​​13:398۔

4. Litt MD، Cooney NL، Morse P. لیبارٹری اور فیلڈ میں الکحل سے متعلق محرکات پر رد عمل: علاج شدہ شراب نوشیوں میں خواہش کے پیش گو۔ نشہ۔2000;95:889–900۔

5. بارک ایس، لیو ایف، بین حمیدہ ایس، یوویل کیو وی، نیستا جے، خرازیا وی، وغیرہ۔ ایم ٹی او آر سی 1 کی روک تھام کے ذریعہ الکحل سے متعلق یادوں میں خلل دوبارہ لگنے سے روکتا ہے۔ Nat Neurosci.2013؛ 16:1111–7۔
6. ملٹن AL. مشروبات، منشیات، اور رکاوٹ: نشے کے علاج کے لئے میموری ہیرا پھیری. کر اوپین نیوروبیول۔ 2013؛ 23:706–12۔

7. نادر K، Hardt O. میموری کے لیے ایک واحد معیار: دوبارہ تشکیل دینے کا معاملہ۔ نیٹ ریو نیوروسکی۔ 2009؛ 10:224-34۔

8. Dudai Y. Reconsolidation: دوبارہ توجہ مرکوز کرنے کا فائدہ۔ کر اوپین نیوروبیول۔ 2006؛ 16:174-8۔

9. Przybyslawski J, Sara SJ. اس کے دوبارہ فعال ہونے کے بعد میموری کی بحالی۔ Behav.Brain Res. 1997؛ 84:241–6۔

10. نادر کے، شیفے جی ای، لی ڈوکس جے ای۔ خوف کی یادوں کو تھیمیگڈالا میں پروٹین کی ترکیب کی ضرورت ہوتی ہے تاکہ بازیافت کے بعد دوبارہ بحال کیا جاسکے۔ فطرت 2000؛406:722–6۔

For more information:1950477648nn@gmail.com