خلاصہ
مقصد: یہ مطالعہ ایک مخلوط جڑی بوٹیوں کے عرق (MHE) کے بطور لاگو ہونے کی تصدیق کے لیے کیا گیا تھا۔اینٹی ایجنگ کاسمیٹکاس کی چھان بین کرکے اجزاءجلد مخالف عمروٹرو اور ویوو میں سرگرمیاں۔ طریقے: اس مطالعہ میں، ہم نے MHE کو الٹراسونک نکالنے کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا جس میں Forsythiae fructus، Tribuli fructus، Solomon's seal، Siberian ginseng، Ponciri Fructus اور Ginseng شامل ہیں۔ ہم نے تفتیش کی۔ڈرمل فائبرو بلاسٹس میں جلد کے لئے MHE کا عمر مخالف اثر. دیمخالف عمر کی سرگرمیقسم I کولیجن کی ترکیب کی سطح سے طے کیا گیا تھا۔ میٹرکس میٹالوپروٹینیز-1 (MMP1) اور میٹالوپروٹینیسز 1 (TIMP1) کے ٹشو انحیبیٹر mRNA کی سطحوں کی پیمائش qRT-PCR سے کی گئی۔ ایم ایم پی 1 پروٹین کی سطح کو بلوٹنگ تجزیہ کے ذریعہ جانچا گیا۔ جلد کی نمی، لچک، ساخت، اور جھریوں کے کلینیکل ٹیسٹ 1 فیصد MHE پر مشتمل کاسمیٹکس کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے۔ نتائج: MHE نے پرو کولیجن قسم I کی ترکیب اور TIMP1 mRNA اظہار کی اپ گریجشن کی حوصلہ افزائی کی۔ MHE کی وجہ سے MMP1 mRNA کی سطح اور پروٹین کی سطح میں کمی واقع ہوئی۔ مزید برآں، 1 فیصد ایم ایچ ای پر مشتمل کاسمیٹکس کی جلد کے استعمال کے بعد، علاج کے 4 ہفتے بعد جلد کی ہائیڈریشن، لچک، ساخت اور کوے کے پاؤں میں بہتری آئی۔ نتیجہ: MHE کولیجن کی ترکیب کو فروغ دے کر اور وٹرو میں MMP1 جین کے اظہار کو دبا کر بڑھاپے کا مخالف اثر رکھتا ہے، اور اس کا Vivo میں جلد کی بہتری کا اثر ہوتا ہے۔ لہذا، MHE کو ایک فنکشنل کاسمیٹک جزو کے طور پر قدر کے طور پر دکھایا گیا تھا۔
مطلوبہ الفاظ:جلد کی دیکھ بھال, مخالف عمر, جھوریاں کو ختم کرنے والیقدرتی کاسمیٹکس، ہربل ادویات
اینٹی ایجنگ کے لیے ہربل سپلیمنٹس Cistanche
تعارف
جلد ایک ایسا عضو ہے جو بیرونی ماحول کے ساتھ رابطے میں آتا ہے اور ہماری بقا کے لیے اہم ہے، بنیادی رکاوٹ کے طور پر کام کرتا ہے۔بیرونی حملوں کے خلافجیسے متعدی ایجنٹ اور جسمانی چوٹ؛ اس کے علاوہ، یہ کئی اہم جسمانی کرداروں کو پورا کرتا ہے (Slominski et al.، 2004؛ Volmer et al.، 2018)۔ جیسے جیسے ہماری عمر،جلد کی تقریبالٹرا وائلٹ (UV) شعاعوں، آلودگی اور تناؤ کی وجہ سے اور جلد کی عمر بڑھنے سے جو جلد کے خلیات کی تعداد اور جلد کی موٹائی میں کمی کے ساتھ بتدریج ایٹروفک تبدیلیوں کے ساتھ بگڑتی ہے (Farage et al.، 2013)۔
جلد کی عمر بڑھنےendogenous عمر بڑھنے اور exogenous عمر بڑھنے میں تقسیم کیا جا سکتا ہے. بیرونی اثرات سے قطع نظر وقت کے ساتھ ساتھ جلد کی بڑھتی عمر قدرتی طور پر ہوتی ہے۔ Dermal-Epidermalجنکشن (DEJ) ہم آہنگی کمزور ہوتی ہے، اور تفریق کے ساتھkeratinocytes کی، لپڈ کی تشکیل میں کمی (MakrantonakiET رحمہ اللہ تعالی., 2007)۔ دوسری طرف، خارجی عمر بڑھنے کی وجہ بیرونی ہے۔عوامل جیسے UV شعاعیں، انفراریڈ شعاعیں (IR)، تمباکو نوشی، ٹھیکدھول، اور طرز زندگی. ان میں سے، فوٹو گرافی UV کی وجہ سے ہوتی ہے۔شعاعیں جلد میں داخل ہوتی ہیں اور کولیجن اور ایلسٹن کو نقصان پہنچاتی ہیں۔dermis میں. اس عمل میں، لچکدار ریشے اور کولیجنجلد کے ریشے بگڑ جاتے ہیں، جس کے نتیجے میں لچک میں کمی واقع ہوتی ہے۔اور sagging. کولیجن ایکسٹرا سیلولر کا ایک اہم جزو ہے۔میٹرکس اور ٹشو فنکشن کا تعین کرنے میں ایک اہم کردار ہے۔
کولیجن کی مختلف اقسام میں، قسم 1 کولیجن کل کولیجن کا تقریباً 75-80 فیصد بنتا ہے (Landau, 2007; Lovell et al., 1987; Mays et al., 1988)۔ جب جلد کو بے نقاب کیا جاتا ہےطویل عرصے تک UV شعاعوں سے آزاد ریڈیکلز پیدا ہوتے ہیں۔ یہ مفتریڈیکلز میٹرکس میٹالوپروٹینیز کے اظہار کو متحرک کرتے ہیں-1(MMP1) جو کولیجن کے انحطاط کو فروغ دیتا ہے اور کولیجن کو روکتا ہے۔ترکیب جو جلد کی لچک کو کم کرتی ہے اور اس کے نتیجے میں جھریاں پڑتی ہیں۔لہذا، کی وجہ سے جلد کی جھریوں کو روکنے اور بہتر بنانے کے لئےعمر بڑھنے کے ساتھ، یہ ایک جزو تیار کرنے کے لئے ضروری ہے جو فروغ دیتا ہےکولیجن کی پیداوار اور اظہار اور سرگرمی کو روکتا ہے۔MMP1 (WlaschekET رحمہ اللہ تعالی., 2001).
جلد کی عمر بڑھنےمعیار زندگی سے گہرا تعلق ہے۔ کیونکہ جلد سب سے زیادہ نظر آنے والا عضو ہے، یہ ہمیں عمر بڑھنے کے عمل سے آگاہ کرتا ہے (Binic et al.، 2013)۔ طب، ادویہ سازی اور کاسمیٹکس کے شعبوں میں مختلف کوششیں جاری ہیں۔جلد کی عمر کو روکنے اور بہتر بنانے کے. دیمخالف عمر کے اجزاء کی ترقیسب سے اہم انسداد عمر رسیدہ حکمت عملیوں میں سے ایک ہے۔
ہم نے الٹراسونک ایکسٹرکشن کا استعمال کرتے ہوئے جڑی بوٹیوں کے عرق تیار کیے ہیں جن میں Forsythiae fructus، Tribuli fructus، Solomon's seal، Siberian ginseng، Ponciri fructus، اور Ginseng شامل ہیں۔
مختلف طبی اور جلد کے اثرات والے پودوں سے چھ جڑی بوٹیوں کی دوائیں منتخب کی گئیں۔ Forsythiae fructus، Forsythia suspense (فیملی Oleaceae) کا خشک پھل، جسے Lian Qiao کہا جاتا ہےچین میں، سب سے پہلے شینونگ بینکاو جینگ میں ریکارڈ کیا گیا تھا، ایکروایتی چینی طب پر مائشٹھیت مونوگراف (TCM)(ڈونگET رحمہ اللہ تعالی.، 2017)۔ یہ گرمی صاف کرنے کے طور پر استعمال کیا گیا ہے اورمتعدی بیماریوں کے علاج کے لیے TCM کو detoxifying، جیسےشدید ورم گردہ، erysipelas، اور السر (WangET رحمہ اللہ تعالی.، 2018)۔ یہ ہےکلینک میں ایک ہی دوا یا مرکب نسخے کے طور پر بڑے پیمانے پر استعمال کیا جاتا ہے۔جدید فارماسولوجی نے اسے مختلف قسم کے ہوتے دکھایا ہے۔حیاتیاتی سرگرمیاں، بشمول سوزش، اینٹی بیکٹیریل، اینٹیوائرل، اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی ٹیومر، اینٹی ذیابیطس، اینٹی ہائپرلیپیڈیمک،antiandrogenic alopecia، مخالف الٹی، مخالف عمر رسیدہ، اور مخالفموٹاپا کی سرگرمیاں اور نیورو پروٹیکٹو، ہیپاٹو پروٹیکٹیو، اورvasorelaxant اثرات (DongET رحمہ اللہ تعالی.، 2017)۔ اس کے علاوہ، یہ کیا گیا ہےاطلاع دی کہForsythiae fructusجلد کو سفید کرتا ہے، اینٹیatopic dermatitis، اور مخالف عمر کے اثرات. تائیوان کے مطابقملک بھر میں نسخے کا ڈیٹا بیس،Forsythia Fructusکیا گیاسب سے اوپر 10 جڑی بوٹیوں میں شامل ہیں جو عام طور پر ایٹوپک کے علاج کے لئے استعمال ہوتے ہیں۔جلد کی سوزش (15.9 فیصد)، چھپاکی (11۔{3}}.4 فیصد)، اور مہاسے (22.3 فیصد)(ڈونگET رحمہ اللہ تعالی., 2017). Forsythiae fructussaponins پر مشتمل ہے,flavonoidsاور alkaloids اور oleanolic ایسڈ جو ایک مفید ہےفارماسولوجیکل کارروائی. مزید برآں، اس میں آرکٹیجینن اورmatairesinol. جسمانی طور پر فعال جلد کے اجزاء کے طور پر، وہٹائروسینیز روکنے والے ہیں جو میلانین میٹابولزم پر کام کرتے ہیں۔راستہ کی طرف سے حوصلہ افزائی میلانوسائٹ محرک ہارمون ( -MSH)اور کاسمیٹک سفید کرنے والے مواد کے طور پر توجہ مبذول کر رہے ہیں۔(یانگ اینڈ چو، 2011)۔Tribuli fructus، جس کا خشک میوہ ہے۔Tribulus terrestrisL، فارماسولوجیکل ہونے کی اطلاع دی گئی ہے۔جنسی فعل کو بہتر بنانے، روک تھام اور علاج کی سرگرمیاںدل کی بیماری، اور neuroprotection کو بہتر بنانے اوریاداشت. اس میں اینٹی ذیابیطس، اینٹی انفلامیٹری، اوراینٹی آکسیڈینٹ اثرات (چھترET رحمہ اللہ تعالی، 2014)۔ Tribuli fructusنچوڑ diosgenin، tigogein، مختلف کی بڑی مقدار پر مشتمل ہےsaponins، وغیرہ. یہ saponins سب سے اہم bioactive ہیںمختلف حیاتیاتی اثرات کے لیے ذمہ دار اجزاء جیسےaphrodisiac اثر، antihypertensive اثر اور حفاظتیاسکیمیا ریپرفیوژن چوٹ اور اینٹی کینسر کے خلاف اثر،اینٹی بیکٹیریل اور اینٹی فنگل سرگرمیاں (چھترET رحمہ اللہ تعالی., 2014).
دیگر اجزاء میں furostanol اور spirostanol saponins، polysaccharides، flavonoid glycosides، alkaloids اور amides شامل ہیں۔ اس کے علاوہ، یہ چوہوں میں ایٹوپک ڈرمیٹائٹس کے خلاف موثر ہے اور اس میں سوزش کے اثرات ہیں (Chhatre et al.، 2014)۔ یہ بتایا گیا ہے کہ ٹریبولی فریکٹس ایکسٹریکٹ کا اینٹی ایجنگ اثر HS68 خلیوں میں قسم I پرو کولیجن اور ایلاسٹن کی پیداوار کو بڑھاتا ہے، ایڈیپوسائٹس کے لپڈ جمع کو فروغ دیتا ہے، اور بالآخر جلد کی جھریوں اور لچک کو بہتر بناتا ہے (Kim et al.، 2016) )۔ سائبیرین ginseng (Acanthopanax senticosus) ginseng اور جنگلی ginseng کے ساتھ خاندان Oga سے تعلق رکھنے والی ایک پرنپاتی جھاڑی ہے۔ سائبیرین ginseng کی ginseng کے ساتھ بہت سی مماثلتیں ہیں اور اسے فالج، ہائی بلڈ پریشر اور ذیابیطس کے لیے جڑی بوٹیوں کی دوا کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ سائبیرین ginseng کا عرق ایک طویل عرصے سے مشرقی ادویات میں استعمال ہوتا رہا ہے، اور فارماسولوجیکل اور فزیولوجیکل نتائج حال ہی میں مختلف مطالعات میں رپورٹ کیے گئے ہیں۔ سائبیرین ginseng اجزاء جن کی اب تک نشاندہی کی گئی ہے ان میں eleuthero sides A, B, C, D, E, I, K, L, M, اور sesamin, chiisanoside, caffeic acid, chlorogenic acid, campesterol, Vitamins, and Minerals (Park) وغیرہ، 2010)۔
اس میں triterpenoid saponins، lignans، coumarins اورflavonoids، جن میں فینولک مرکبات کو سب سے زیادہ فعال اجزاء سمجھا جاتا ہے (Huang et al.، 2011)۔ جلد پر سائبیرین ginseng کے عرق کی تاثیر کے بارے میں بہت سی رپورٹس موجود ہیں۔اینٹی شیکن اثر,اینٹی آکسیڈینٹ اثر,کولیجن کی ترکیب، اور فوٹو گرافی کے خلاف کولیگنیس روکنے والی سرگرمی کی اطلاع دی گئی ہے (پارک ایٹ ال۔، 2010)۔ یہ بتایا گیا ہے کہ سائبیرین ginseng اقتباس قسم IV کولیجن کی ترکیب کو منظم کرتا ہے، ایپیڈرمل اسٹیم سیلز کی افزائش کی صلاحیت کو متاثر کرتا ہے اور ایپیڈرمس کو گاڑھا کرتا ہے (Choi et al.، 2016)۔ Solomon's seal Polygonatum odoratum (مترادف: P.officinale) کا ایک rhizome ہے جس کا ٹانک اثر ہوتا ہے اور اسے مشرقی طب میں دل کی خرابی اور ذیابیطس کے علاج کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ سلیمان کی مہر اینٹی سائیکل اور antitussive ہے؛ یہ دل کے تناؤ کو دور کرتا ہے، اور ایک موتر آور، توانائی بخش، ہائپوگلیسیمیک، سکون آور اور ٹانک ہے۔ اسے پھیپھڑوں کی بیماریوں کے علاج کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، بشمول تپ دق اور معدے کے امراض (ہارون ایٹ ال۔، 2012)۔ اس کے علاوہ، یہ خون کی خرابیوں کے علاج میں بڑے پیمانے پر استعمال کیا جاتا ہے؛ یہ گردے کی نالیوں پر فائدہ مند اثرات مرتب کرتا ہے اور بالوں کو سفید ہونے، بینائی کے مسائل، چکر اور داد کو روکتا ہے۔ یہ اعصابی ٹانک ہے اور ذیابیطس کے علاج میں استعمال ہوتا ہے (ہارون ایٹ ال۔، 2012)۔ سلیمان کی مہر ایک اعلی فینول مواد اور اینٹی آکسائڈنٹ سرگرمی ہے. سلیمان کی مہر سے Homoisoflavanones اعلی درجے کی glycosylation اختتامی مصنوعات کی تشکیل کو روکتا ہے۔ سلیمان کی مہر نے ایک مضبوط آنتوں کے مدافعتی نظام کی ریگولیٹری سرگرمی اور آسٹیوکلاسٹ تفریق اور لیکٹین-حوصلہ افزائی اپوپٹوس کو دلانے کی صلاحیت ظاہر کی ہے۔ P. odoratum پتی کے عرق کے معاملے میں، زخم بھرنے کے فعل کو ایک مثال کے طور پر رپورٹ کیا جاتا ہے (Fathi et al., 2014)۔ Ponciri fructus immatures Poncirus trifoliata Rafinesque کا کچا پھل ہے، جو Rutaceae خاندان سے تعلق رکھتا ہے (Jung et al., 2016)۔ حال ہی میں، سوزش اور مخالف انتہائی حساسیت کے اثرات کی اطلاع دی گئی ہے، اور چربی کی گاد کے نچوڑ کے اثر کی اطلاع دی گئی ہے کہ وہ کینسر کے خلیوں کے اپوپٹوس کو دلاتے ہیں (لی ایٹ ال۔، 2008)۔ Ponciri fructus atopic dermatitis کے علاج میں مؤثر ثابت ہوتا ہے۔ Ponciri fructus extract کے جلد پر استعمال کے ذریعے، atopic dermatitides کے خلاف اس کے اثرات، جیسے epidermal hyperkeratosis، dermal edema، اور cytokines کے بارے میں بتایا گیا ہے۔ خاص طور پر، خارش، مستول خلیات کی تعداد، IgE کی پیداوار، اور اعصاب کی نشوونما کے عنصر کے اظہار میں نمایاں کمی کی اطلاع ملی ہے۔ Ponciri fructus کے عرقوں نے مدافعتی میکانزم کو ریگولیٹ کرکے atopic dermatitis اور antipruritic افادیت کے خلاف ایک موثر سوزش اثر دکھایا ہے۔ اس کے علاوہ، Ponciri fructus extract کی زبانی انتظامیہ الرجی کی بیماریوں کے علاج اور روک تھام کے لیے مددگار ثابت ہوتی ہے (Hwang et al., 1997)۔ Ginseng ایک وسیع پیمانے پر استعمال ہونے والی روایتی جڑی بوٹیوں کی دوا ہے جس میں کثیر العملی سرگرمیاں ہیں۔ Ginseng کو اس کی سوزش، اینٹی آکسیڈینٹ، اینٹی ٹیومر، اور اینٹی ایجنگ سرگرمیوں کے لیے استعمال کیا گیا ہے (چوئی، 2008؛ کم اینڈ کو، 2020)۔ جلد پر ginseng کی افادیت پر بہت سے مطالعات کیے گئے ہیں (He et al.، 2018)۔ ان میں سیپوننز اور ginsenosides کے بارے میں بہت سی رپورٹس موجود ہیں، جو ginseng کے نمائندہ اجزاء ہیں۔ Saponins وہ مرکبات ہیں جو زیادہ تر پودوں میں بڑے پیمانے پر پائے جاتے ہیں اور مختلف شکلوں میں موجود ہیں۔ Saponins مختلف حیاتیاتی سرگرمیوں کو تیز کر سکتے ہیں جیسے ہیمولیسس، اور اینٹی بیکٹیریل، اینٹی وائرل، اور اینٹی آکسیڈینٹ افعال۔ اس کے علاوہ، saponins میں سوزش کی خصوصیات ہیں جو سوجن اور جلد کی سوزش کو کم کر سکتی ہیں۔ Ginsenosides interleukin (IL)-1 کو بڑھاتے ہیں، جو کہ سوزش والی سائٹوکائنز میں سے ایک ہے جو انجیوجینیسیس کو فروغ دینے اور عروقی اینڈوتھیلیل گروتھ فیکٹر اور جمع ہونے کے لیے جانا جاتا ہے۔چوہوں میں جلد کے جلنے والے مقامات پر۔ جلد کے زخموں سے میکروفیجز کو ہٹانے اور زخموں کی تندرستی کو فروغ دینے کے ان کے اثر کی بھی اطلاع دی گئی ہے (Kim et al.، 2011)۔
اس مطالعے کا مقصد وٹرو اور ویوو میں مخلوط جڑی بوٹیوں کے عرق (MHE) کے جلد کی عمر مخالف اثر کو واضح کرنا تھا۔
طریقے
1. ان وٹرو افادیت کی تشخیص
1) MHE کی تیاری
Forsythia سسپینس کا خشک پھل، Tribulus Terrestris L. کا خشک میوہ، سائبیرین ginseng (Acanthopanax senticosus (Eleuthero) جڑ)، سلیمان کی مہر (Rhizome اور Polygonatum Officinale کی جڑ)، Poncirus Trifoliata Rafinesque (Poncirus Trifoliata Rafinesque) کا پھل۔ ایک مقامی مارکیٹ سے خریدا. روایتی چینی طب (TCM) کے "Yin-Yang" اور "پانچ عناصر" کے نظریہ کی بنیاد پر، Forsythia suspensa، Tribulus terrestris L.، اور Poncirus trifoliata Rafinesque جو "Yang" اور سائبیرین ginseng، ginseng، اور Solomon's corresponding seal کے مطابق ہیں۔ "ین" کو منتخب کیا گیا تھا۔ چھ دواؤں کی جڑی بوٹیوں کو دوبارہ پانچ عناصر (لکڑی، آگ، پانی، دھات یا سونا، اور زمین یا مٹی) کے مطابق خصوصیات میں تقسیم کیا گیا تھا۔ ان دواؤں کی جڑی بوٹیوں کو ہر عنصر کے توازن کے لیے ایک ہی تناسب میں ملایا گیا تھا، اور زمین سے مطابقت رکھنے والے Poncirus trifoliata اور ginseng کو دوسرے عناصر کے ساتھ ملایا گیا تھا تاکہ تناسب کو پورا کیا جا سکے (ٹیبل 1)۔ چھ دواؤں کے پودوں کو الٹرا سونیکیشن (20 kHz، 2 h) کے ذریعے 30 فیصد ایتھنول میں نکالا گیا تھا۔ روٹری ایوپوریٹر کے ساتھ توجہ مرکوز کرنے کے بعد، 30 فیصد (v/v) بیوٹیلین گلائکول شامل کیا گیا، اور محلول کو 1 فیصد ٹھوس مواد پر مشتمل ایک عرق تیار کرنے کے لیے پتلا کر دیا گیا۔
جدول 1۔ مخلوط جڑی بوٹیوں کی ترکیب
2) سیل کلچرز اور ری ایجنٹس
ہیومن پرائمری فبروبلاسٹ سیلز (HDFn) PromoCell سے حاصل کیے گئے تھے (نارمل ہیومن ڈرمل فبروبلاسٹ جووینائل فارسکن، C-12300؛ پرومو سیل، جرمنی)۔ Dulbecco کے ساتھ سیل ثقافتیںترمیم شدہ ایگلز میڈیم ہائی گلوکوز (DMEM ہائی گلوکوز، SH30243.01، Hyclone، Cytiva) جس میں 10 فیصد (v/v) فیٹل بوائین سیرم (FBS، SH30084.03، Hyclone) اور 1 فیصد اینٹی بائیوٹک ہے۔antimycotic ایجنٹس (Anti-anti, 15240-062, Gibco, USA) کو 5 فیصد CO2 انکیوبیٹر میں 37 ڈگری پر کلچر کیا گیا تھا۔
3) سیل وائبلٹی پرکھ (MTT پرکھ)
ایم ٹی ٹی پرکھ نے سیل کی عملداری کی پیمائش کی اور MHE کی سائٹوٹوکسیٹی کا تعین کیا۔ سیلز کو 5×103 سیلز/کنویں پر ایک 96-کنویں پلیٹ پر سیڈ کیا گیا تھا اور سیل کلچر کے تحت 24 گھنٹے تک کلچر کیا گیا تھا۔حالات پھر، ہم نے میڈیم کو ضائع کر دیا، خلیات کو فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS, 21-040-CV; Corning, USA) کے محلول سے دھویا، خلیات کو نئے سیرم فری میڈیا میں رکھا، اور{{0}} کے ارتکاز کے ساتھ خلیوں کا علاج کیا۔{4}}1، 0۔{8}}25، {{10}}.05۔ 0.10، 0.25، 0.50، 0.75، اور 1. پھر، ہم نے 100 μL MTT حل شامل کیا۔(0.5 فیصد، 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl-2H tetrazolium bromide) ہر ایک میں اچھی طرح سے اور خلیات کو مزید 2 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا۔ کلچر میڈیا کو ہٹانے کے بعد، ہم نے 100 فیصد ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ (DMSO) کا 100 μL شامل کیا، خلیوں کو 10 منٹ تک ہلایا، اور مائکروپلیٹ ریڈر (ایپوچ 2 مائکروپلیٹ ریڈر، بائیو ٹیک، USA) کے ساتھ 590 nm پر جاذبیت کی پیمائش کی۔
4) پرو کولیجن قسم I نسل کی پیمائش
سیل کلچر میڈیم میں پرو کولیجن ٹائپ I کا ارتکاز تجارتی طور پر دستیاب ELISA کٹ (Procollagen type I C-peptide EIA Kit, MK101, TaKaRa) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیابائیو، جاپان) کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق۔ ہر نمونے کا تین نقلوں میں تجزیہ کیا گیا۔
5) مقداری استعمال کرتے ہوئے mRNA اظہار کی سطحوں کی پیمائش
ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن (qRT PCR) سیلز کو 1×105 سیلز/کنویں 6-کنویں پلیٹوں پر سیڈ کیا گیا تھا۔ ایچ ڈی ایف این سیلز کو 24 گھنٹے کے لیے کلچر کیا گیا تھا۔ پھر، خلیوں کو DMEM ہائی گلوکوز کے ساتھ FBS کے بغیر 24 گھنٹے کے لیے ہم آہنگ کیا گیا۔ میڈیم کو سیرم فری میڈیا سے تبدیل کیا گیا تھا اور 0 کے ارتکاز کے ساتھ علاج کیا گیا تھا۔ 24 اور 48 گھنٹے کے لیے۔ RNA نکالنے کو HDFn خلیوں کے ساتھ RNA نکالنے والی کٹ (TaKaRa MiniBEST Universal RNA ایکسٹرکشن کٹ، 9767A، Takara Bio، USA) کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا تھا، اور مینوفیکچرر کے پروٹوکول کے بعد نمونے صاف کیے گئے تھے۔ الگ تھلگ RNA (1 ug) کو TR ریجنٹ کٹ (PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser, RR047A, Takara Bio, USA) کا استعمال کرتے ہوئے cDNA میں ترکیب کیا گیا تھا۔ ایس وائی آر بی گرین ریئل ٹائم پی سی آر ماسٹر مکس (پاور ایس وائی بی آر ٹی ایم گرین پی سی آر ماسٹر مکس، 4367659، اپلائیڈ بایو سسٹم، یو ایس اے) اور کوانٹ اسٹوڈیو ٹی ایم 3 (کوان اسٹوڈیو ٹی ایم 3 ریئل ٹائم پی سی آر انسٹرومنٹ، اے 28132، تھرمو فشر سائنسی، یو ایس سی آر) کا استعمال جین کے اظہار کی سطحوں کو ہاؤس کیپنگ جین گلیسرالڈہائڈ 3-فاسفیٹ ڈیہائیڈروجنیز (GAPDH) کے مطابق معیاری بنایا گیا تھا۔ اس مطالعے میں استعمال ہونے والے پرائمر ٹیبل 2 میں پیش کیے گئے ہیں۔ تجربات تین آزاد دہرانے کے لیے ڈپلیکیٹ میں کیے گئے۔ پگھلنے والی وکر کا تجزیہہر پرائمر سیٹ کے لیے انجام دیا گیا تھا۔
6) مغربی دھبے کا تجزیہ
فائبروبلاسٹ خلیوں سے پروٹین لائسیٹس کو لیسیز بفر (EzRIPA Lysis Kit, WSE-7420; ATTO کارپوریشن، جاپان) کے ساتھ نکالا گیا تھا۔ بریڈ فورڈ کا طریقہ پروٹین کی مقدار درست کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔پروٹین کی مساوی مقدار کو 5X نمونہ بفر (TLP-102-01، TransLab، Korea) کے ساتھ ملایا گیا اور 10 منٹ کے لیے 99 ڈگری پر ڈینیچر کیا گیا۔ پروٹین کو 10 فیصد SDS-PAGE کے ذریعہ 150 V پر 150 منٹ کے لئے الگ کیا گیا تھا اور PVDF جھلیوں (کلیئر بلاٹ میمبرین، 3322546، ATTO کارپوریشن، جاپان) میں منتقل کیا گیا تھا۔ جھلیوں کو 0.5 فیصد بوائین سیرم البومین (BSA, A4503-10G; Sigma) کے ساتھ 1 گھنٹے کے لیے بلاک کیا گیا تھا اور Tris-buffered saline کے ساتھ دھویا گیا تھا جس میں Tween-20 (10X TBS with Tween 30, TR{ {17}}؛ بائیوسیانگ، کوریا) تین بار؛ اس کے بعد جھلیوں کو MMP-1 (Recombinant Anti-MMP1 antibody [EP1249Y], ab134184, Abcam, USA)، -Actin (Anti- -Actin (N-tern) اور PA0207 (Abfrontier) کے خلاف بنیادی اینٹی باڈیز کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ , کوریا) راتوں رات 4 ڈگری پر۔ کلی کرنے کے بعد، جھلیوں کو اینٹی خرگوش IgG-horseradish peroxidase (HRP) (Anti-rabbit IgG، HRP سے منسلک اینٹی باڈی، #7074؛ سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی، USA) کے ساتھ سیکنڈری اینٹی باڈی کے طور پر علاج کیا گیا۔ 1 گھنٹے کے لیے۔ کیمیلومینیسینس کا پتہ لگانا ECL پرائم ویسٹرن بلاٹنگ ڈیٹیکشن ریجنٹ (GE Healthcare, USA) اور ATTO WSE-6100 LuminoGraph (ATTO کارپوریشن، جاپان) کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا۔ مقداری تجزیہ کے لیے، کیپچر کی گئی تصاویر کا تجزیہ تصویر کے ساتھ کیا گیا۔ سافٹ ویئر (CS تجزیہ کار 4، ATTO کارپوریشن، جاپان)۔
7) شماریاتی تجزیہ
اعداد و شمار کا تجزیہ ونڈوز (گراف پیڈ سافٹ ویئر، USA) کے لیے گراف پیڈ پرزم ورژن 3.03 کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ نتائج 3 تجربات کے اوسط ± SD کے طور پر پیش کیے جاتے ہیں۔ ایک غیر جوڑاطالب علم کا ٹی ٹیسٹ استعمال کیا گیا تھا، اور p اقدار<0.05 were considered statistically significant.
2. Vivo کی افادیت کی تشخیص میں
1) ری ایجنٹس اور کاسمیٹک مصنوعات
ٹیسٹ کی مصنوعات سکن لوشن، ایسنس کریم، اور آئی کریم تھیں۔ ان کریموں میں ٹیبل 3 میں دکھایا گیا فعال جزو کے طور پر MHE کا 1 فیصد ہوتا ہے۔
2) انسانی شرکاء
تمام رضاکاروں نے ٹیسٹ کے مقصد اور مواد سے اتفاق کیا اور ٹیسٹ شروع کرنے سے پہلے تحریری باخبر رضامندی کے فارم پر دستخط کیے۔ انہیں سکن کیئر پروڈکٹس کا استعمال کرنے کی اجازت نہیں تھی، اور ٹیسٹ پروڈکٹس کو چہرے پر جلد کی آنکھوں کی کریم (صرف کوے کے پاؤں پر) ایسنس کریم لوشن کریم کی ترتیب سے لگایا گیا تھا۔ یہ مطالعہ ہیلسنکی کے اعلامیے کے رہنما خطوط کے مطابق کیا گیا تھا اور کوریا نیشنل انسٹی ٹیوٹ برائے بایو ایتھکس پالیسی (#P01-202108-13-001) کے ادارہ جاتی جائزہ بورڈ نے منظور کیا تھا۔
3) افادیت ٹیسٹ
45 اور 55 کے درمیان عمر کی اکیس خواتین مضامین (مطلب ±SD 50.81±2۔{6}}) سال کی عام جلد والی اس تحقیق میں حصہ لیا۔ ٹیسٹ پروڈکٹس کو روزانہ دو بار (صبح اور شام) 4 ہفتوں تک لاگو کیا گیا۔ شرکاء نے ہر 2 ہفتے بعد تحقیقی مرکز کا دورہ کیا، اور ٹیسٹ کی جگہوں کو لیبارٹری میں ماپا گیا، جہاں محیطی درجہ حرارت اور نسبتاً نمی کو بالترتیب 22±2 ڈگری اور 50±5 فیصد پر برقرار رکھا گیا۔ شرکاء نے اپنے چہرے دھونے کے بعد لیبارٹری میں 20 منٹ تک اکیلیمائز کیا اور ان کی جلد کی ہائیڈریشن، لچک، ساخت اور کوے کے پاؤں کا جائزہ لیا گیا۔ جلد کی ہائیڈریشن کو Corneometer® CM825 (C plus K الیکٹرانک GmbH، کولون، جرمنی) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ لچک کو Cutometer® MPA 580 (C plus K الیکٹرانک GmbH، کولون، جرمنی) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا، اور بناوٹ اور کوے کے پاؤں کی پیمائش DermaTOP 3D-HE (EOTECH SAS، فرانسیسی) کے ذریعے کی گئی۔
4) جلد کے منفی ردعمل کا اندازہ
سوالنامے اور مشاہدے کے ذریعہ ہر دورے پر منفی ردعمل کی جانچ کی گئی۔ تشخیص میں، موضوعی پیرامیٹرز کو خارش، کانٹے دار، گدگدی، جلن، ڈنکنے، کے طور پر درجہ بندی کیا گیا تھا۔سختی، اور سختی، اور معروضی پیرامیٹرز کو erythema، edema، پیمانے، اور papule کے طور پر درجہ بندی کیا گیا تھا۔
5) شماریاتی تجزیہ
SPSS® سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے ڈیٹا کا تجزیہ کیا گیا۔ ٹائم پوائنٹس کے درمیان فرق کی شماریاتی اہمیت کا تعین بار بار اقدامات کے تجزیے کے ذریعے کیا گیا تھا۔ ایک پی ویلیو<0.05 شماریاتی لحاظ سے اہم سمجھا جاتا تھا۔ بیس لائن ویلیو سے تبدیلی کی شرح ( فیصد ) کا حساب اس طرح لگایا گیا:
تبدیلی کی شرح=((علاج-بیس لائن کے بعد)/بیس لائن)×100 فیصد
