ٹرانسکرپٹوم پروفائلنگ کے ذریعے لیونٹوپوڈیم الپینم (ایڈلوائس) کالس کلچر ایکسٹریکٹ کے اینٹی ایجنگ اثرات حصہ 3

براہ کرم کلک کریں۔oscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

3.4 موئسچرائزنگ اثر کے ساتھ منسلک LACCE ایکسٹریکٹ کی وٹرو تشخیص میں

ہم نے Aquaporin 3 (AQP3) کے اظہار کا استعمال کرتے ہوئے HaCaT خلیات پر LACCE کے موئسچرائزنگ اثر کی جانچ کی، جو ریئل ٹائم RT-PCR (Figure 3C) کے ذریعے جلد کے خلیوں میں ظاہر ہونے والے پانی اور گلیسرول-ٹرانسپورٹنگ پروٹین کو انکوڈ کرتا ہے۔ منفی کنٹرول کے مقابلے میں، AQP3 جین کو LACCEextract کے اضافے سے نمایاں طور پر اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا۔cistanche tubulosa فوائد اور ضمنی اثراتدلچسپ بات یہ ہے کہ جیسے جیسے LACCEextract کا ارتکاز بڑھتا گیا، AQP3 کا اظہار بتدریج 3.19 (0.1 فیصد LACCE) سے بڑھ کر 4.5 (1 فیصد LACCE) ہو گیا۔

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

3.5. اینٹی رنکل ایجنٹ کے طور پر ایل اے سی سی ای ایکسٹریکٹ کی وٹرو تشخیص

ہم نے مارکر جین انکوڈنگ میٹرکس میٹالوپروٹینیز-2(MMP-2) کا استعمال کرتے ہوئے LACCE کے اینٹی شیکن اثر کا تجربہ کیا، جو کہ سیل کی نشوونما کو فروغ دیتا ہے، ریئل ٹائم RT-PCR (Figure3D) کے ذریعے۔ بغیر کسی UVB شعاع ریزی کے منفی کنٹرول کے مقابلے میں UVB شعاع ریزی نے MMP-2کے اظہار میں نمایاں اضافہ کیا (0 سے کم قیمت کے ساتھ فولڈ تبدیلی 0.67۔{15}}5) UVB شعاع ریزی کے خلاف LACCE کے اضافے سے MMP-2 کے اظہار کو نیچے سے منظم کیا گیا تھا۔ عام طور پر، MMP-2 کا اظہار آہستہ آہستہ کم ہوتا گیا کیونکہ LACCE کے ارتکاز میں اضافہ ہوا تھا۔ بغیر کسی UVB شعاع ریزی کے عام حالات میں MMP-2 کا اظہار UVB شعاع ریزی کے ساتھ 0.5 فیصد LACCE میں موازنہ تھا۔

3.6. چہرے کو اٹھانے اور Periorbital جھریوں، جلد کی لچک، جلد کی کثافت، اور جلد کی موٹائی کو بہتر بنانے پر LACCE کا طبی جائزہ

Vivo میں LACCE کے اثر کو جانچنے کے لیے، ہم نے LACCE کا کلینیکل جائزہ لیا جو چہرے کی جھریوں کو اٹھانے اور periorbital جھریوں، جلد کی لچک، جلد کی کثافت، اور جلد کی موٹائی کو بہتر بنانے سے وابستہ ہے۔ اس کے لیے 21 خواتین رضاکاروں نے، جنہیں مزید 40 کی دہائی میں 12 اور 50 کی دہائی میں نو میں تقسیم کیا گیا تھا، نے چار ہفتوں کے دوران کلینیکل تشخیص میں حصہ لیا۔

Cistanche مخالف عمر رسیدہ کر سکتے ہیں

سب سے پہلے، ہم نے PRIMOS ہائی ریزولوشن سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے LACCEon periorbital جھریوں کے اثر کا جائزہ لیا۔ دو مختلف کھردری پیرامیٹرز، کھردری اوسط (Ra) (شکل 4A) اور جڑ کا مطلب مربع کھردری (Rq) (شکل 4B) کا تجزیہ کیا گیا۔ LACCE اور پلیسبو کے ساتھ علاج کے چار ہفتوں بعد، دونوں نمونوں میں Ra اور Rq کی قدروں میں کمی واقع ہوئی۔cistanche tubulosa اقتباس،تاہم، Ra اور Rq قدروں میں کمی کی شرح LACCE سے علاج شدہ نمونے میں پلیسبو سے علاج شدہ نمونے (ٹیبل 2) کی نسبت بہت زیادہ تھی۔ مثال کے طور پر، Ra قدر میں کمی کی شرح دو اور چار ہفتوں میں بالترتیب 3.654 فیصد اور 6.118 فیصد تھی، شماریاتی اہمیت کے ساتھ (p<0.05). similarly,="" the="" decrease="" rate="" for="" the="" rq="" value="" was="" 3.583%and="" 6.189%="" at="" two="" and="" four="" weeks,="" respectively,="" with="" statistical="" significance=""><0.05). moreover,="" the="" ratio="" of="" volunteers="" who="" displayed="" a="" reduction="" in="" the="" roughness="" parameters="" for="" the="" lacce-treated="" sample="" was="" much="" higher="" than="" that="" for="" the="" placebo-treated="" sample.="" for="" example,="" at="" four="" weeks,="" the="" ratios="" of="" volunteers="" showing="" a="" decrease="" in="" ra="" and="" rq="" values="" were="" 90.476%="" in="" the="" lacce-treated="" sample="" and="" 57.142%="" in="" the="" placebo-treated="">

شکل 4. چہرے کی جھریوں کو اٹھانے اور بہتر کرنے کے لیے LACCE کے Vivo کلینیکل ٹیسٹوں میں، جلد کی لچک، جلد کی کثافت، اور جلد کی موٹائی۔ Ra (A) اور Rq (B) اقدار کو PRIMOs ہائی ریزولوشن سسٹم کے ذریعہ LACCE (1 فیصد) کے پیریوربیٹل شیکن اثر کو دیکھنے کے لئے تین مختلف ٹائم پوائنٹس پر ماپا گیا۔ مجموعی لچک (R2) (C)، خالص لچک (R5) (D)، اور حیاتیاتی لچک (R7) (E) اقدار کو LACCE کے ساتھ جلد کی لچک کا مشاہدہ کرنے کے لیے ماپا گیا۔ جلد کی کثافت (F) اور جلد کی موٹائی (G) کی پیمائش۔ منہ کے کونے میں R کی پیمائش<><><0.001).lacce lacebo="" b:="" probability="" p(repeated="" measures="" anova,="" significant∶="" 十="" p=""><>

ہم نے Cutometer کا استعمال کرتے ہوئے گال کی جلد کی لچک پر LACCE کے اثر کا جائزہ لیا۔ تین مختلف پیرامیٹرز، مجموعی لچک (R2)، خالص لچک (R5)، اور حیاتیاتی لچک (R2) (R7)، کی پیمائش کی گئی (شکل 4C-E)۔ چار ہفتوں کے دوران LACCE- اور پلیسبو سے علاج شدہ حالات دونوں کے لیے R2، R5، اور R7 کی قدروں میں اضافہ ہوا۔cistanche tubulosa کے جائزے،مثال کے طور پر، LACCE سے علاج شدہ نمونے کے لیے R2 ویلیو 0.728 سے بڑھ کر 0.752 ہو گئی ہے، جب کہ پلیسبو کے علاج شدہ نمونے کے لیے R2 ویلیو 0.74{ سے بڑھ گئی ہے۔ {10}} سے 0.752 (شکل 4C)۔ مزید یہ کہ LACCE سے علاج شدہ نمونے میں اضافے کی شرح پلیسبو سے علاج شدہ نمونے (ٹیبل 3) سے کہیں زیادہ تھی۔ مثال کے طور پر، LACCE سے علاج شدہ نمونے میں اضافے کی شرحیں 3.296 (R2)، 5.816 (R5)، اور 6.756 (R7) تھیں، جبکہ پلیسبو سے علاج کیے گئے نمونے میں اضافے کی شرحیں 1.621 (R2)، 2.895 (R5)، تھیں۔ اور 3.378 (R7) چار ہفتوں میں۔ تاہم، دونوں نمونوں کے درمیان جلد کی لچک میں اضافہ ظاہر کرنے والے رضاکاروں کے تناسب میں کوئی فرق نہیں تھا۔

ہم نے Dermascan-C کا استعمال کرتے ہوئے جلد کی کثافت اور جلد کی موٹائی پر LACCE کے اثر کی جانچ کی۔ دونوں نمونوں نے علاج کے چار ہفتے بعد جلد کی کثافت اور جلد کی موٹائی میں اضافہ دکھایا (شکل 4F,G)۔ مثال کے طور پر، LACCE سے علاج شدہ نمونے میں جلد کی کثافت 26.708 سے بڑھ کر 28.168 ہو گئی، جب کہ پلیسبو سے علاج کیے گئے نمونے میں جلد کی کثافت میں اضافہ ہوا۔ 26.936 سے 28.168 (شکل 4F)۔ جلد کی کثافت میں اضافے کی شرح LACCE نمونے (5.466 فیصد) میں پلیسبو سے علاج کیے گئے نمونے (3.118 فیصد) علاج کے چار ہفتے بعد (ٹیبل 4) کے مقابلے بہت زیادہ تھی۔ ایک بار پھر، LACCE نمونے (10.192 فیصد) میں جلد کی موٹائی میں اضافے کی شرح علاج کے چار ہفتوں بعد پلیسبو سے علاج شدہ نمونے (4.829 فیصد) کی نسبت بہت زیادہ تھی۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ بہت سے رضاکاروں نے LACCE علاج کے چار ہفتوں کے بعد جلد کی کثافت (90.476 فیصد) اور جلد کی موٹائی (100 فیصد) میں زبردست اضافہ دکھایا۔

ہم نے Moireé تجزیہ کا استعمال کرتے ہوئے منہ کے کونے میں چہرے کو اٹھانے پر LACCE کے اثر کا جائزہ لیا۔ LACCE- اور پلیسبو سے علاج شدہ دونوں نمونوں نے چہرے کو اٹھانے میں کمی ظاہر کی (شکل 4H)؛ تاہم، LACCE نمونے (2.541 فیصد) میں چہرے کو اٹھانے کی شرح میں کمی کی شرح چار ہفتوں کے علاج کے دوران پلیسبو نمونے (0.437 فیصد) سے کہیں زیادہ تھی۔ چہرے کو اٹھانے میں کمی کو ظاہر کرنے والے رضاکاروں کا تناسب پلیسبو (57.142 فیصد) کے مقابلے LACCE (85.714 فیصد) کے ساتھ زیادہ تھا۔

3.7.RNA-Seq کے ذریعے LACCE کے جواب میں HaCaT سیلز کا ٹرانسکرپٹوم تجزیہ

اگرچہ LACCE ایکسٹریکٹ نے کاسمیٹک ایجنٹ کے طور پر کئی مثبت اثرات دکھائے، لیکن LACCE کے جواب میں انسانی ٹرانسکرپٹوم میں تبدیلی کا جائزہ لینا قابل ذکر ہو سکتا ہے۔ اس کے لیے، ہم نے کم ارتکاز کے بجائے 1 فیصد LACCE اقتباس استعمال کیا کیونکہ ہم نے فرض کیا تھا کہ keratinocyte خلیات پر LACCE کے کم ارتکاز کا ممکنہ اثر چھوٹا ہو سکتا ہے۔ HaCaT خلیوں کا علاج 1 فیصد LACCE (علاج) کے ساتھ کیا گیا تھا، جبکہ کنٹرول HaCaT خلیوں کو جراثیم سے پاک پانی سے علاج کیا گیا تھا۔ RNA-Seg کے لئے تین حیاتیاتی نقلیں لگائی گئیں۔ ترتیب پڑھنے کی تعداد 32.776,672 سے 42,640،000(ٹیبل 5) تک ہے۔ تمام چھ نمونوں میں 90 فیصد سے زیادہ پڑھنے کو انسانی حوالہ کی نقلوں پر نقشہ بنایا گیا تھا جس میں 159,998 ٹرانسکرپٹس (شکل 5A) تھے۔ جین کے اظہار کے تجزیے کے لیے، ہم نے فی ملین (FPKM) قدروں کی نقل کے فی کلو بیس کے ٹکڑے کا حساب لگایا۔ جیسا کہ شکل 5B میں دکھایا گیا ہے، تین علاج شدہ نمونوں کی FPKM قدریں تینوں کنٹرول کے نمونوں سے زیادہ تھیں۔ بے کار ٹرانسکرپٹس کو ہٹانے کے بعد، 68،158 ٹرانسکرپٹس میں سے صرف 11,290 ٹرانسکرپٹس ہیومن کیریٹنوسائٹ سیلز (ٹیبل S1) میں ظاہر کی گئیں۔

تصویر 5. نقشہ سازی کے نتائج، ٹکڑوں کی تقسیم فی کلو بیس فی ملین ٹرانسکرپٹ (FPKM) ویلیوز، اور مختلف جینز کا تصور۔ (A) میپ شدہ (نارنجی) اور بغیر نقشے والے (گرے) کا ایک حصہ انسانی حوالہ ٹرانسکروم پر پڑھتا ہے۔ (B)باکس پلاٹ ہر لائبریری میں FPKM اقدار کی تقسیم کو ظاہر کرتا ہے۔ پیڈ اور ایف سی انڈیکیٹ ایڈجسٹ شدہ پی ویلیو اور فولڈ تبدیلی، بالترتیب۔ دس شناخت شدہ ڈی ای جی نیلے (ڈاؤن ریگولیٹڈ جینز، ڈاون)، سرخ (اپ ریگولیٹڈ جینز، اوپر) اور گرے (نمایاں طور پر ظاہر نہیں کیے گئے جینز، این ایس) نقطوں سے اشارہ کیے گئے ہیں۔

اگرچہ ہم نے LACCE (1 فیصد) کا زیادہ ارتکاز استعمال کیا جو کہ کاسمیٹکس کے لیے استعمال ہونے والے عام LACCE (0.1 فیصد) سے 10 گنا زیادہ تھا، لیکن LACCE کے علاج کے جواب میں انسانی کیراٹینوسائٹ سیلز کا ٹرانسکرپٹوم نمایاں طور پر تبدیل نہیں ہوا، جیسا کہ آتش فشاں پلاٹ (ٹیبل S1 اور شکل 5C) میں دکھایا گیا ہے۔cistanche UK0.001 سے کم کی ایڈجسٹ شدہ p- ویلیو اور 1 سے زیادہ کی لاگ 2 (فولڈ چینج) کی بنیاد پر، ہم نے LACCE (ٹیبل 6) پر کل 10 امتیازی اظہار شدہ جینز (DEGs) کی نشاندہی کی۔ 10 ڈی ای جیز میں سے،

چار ڈاون ریگولیٹڈ جینز ڈی این اے بائنڈنگ 3، اینکیرین ریپیٹ ڈومین 1، Rho سے متعلق BTB ڈومین پر مشتمل 3، اور 18S رائبوسومل N5 کو روکنے والے جینز تھے۔ چھ ریگولیٹڈ جینز انکوڈنگ کاربونک اینہائیڈریس 2، انسولین نما گروتھ فیکٹر بائنڈنگ پروٹین 3، کیراٹین 15، BCL2-انٹریکٹنگ پروٹین 3، فبروبلاسٹ گروتھ فیکٹر بائنڈنگ پروٹین 1، اور DNA کو نقصان پہنچانے والے ٹرانسکرپٹ4 تھے۔

3.8۔ LACCE کے جواب میں اپ ریگولیٹڈ جینز کے فنکشنل رولز

keratinocyte transscriptome پر LACCE کا اثر دیگر تناؤ کے علاج سے ہلکا تھا۔ اپ ریگولیٹڈ اور ڈاون ریگولیٹڈ جینز کا ایک فعال جائزہ حاصل کرنے کے لیے، ہم نے GO افزودگی کا تجزیہ کیا۔ تاہم، ہم نے GO کی افزودہ اصطلاحات کے لیے کوئی خاص نتائج حاصل نہیں کیے جس کی وجہ سے ایک چھوٹے سے الگ الگ اظہار کیا گیا ہے۔ لہٰذا، ہم نے 0 سے کم کی ایڈجسٹ شدہ p-ویلیو کو لاگو کر کے مختلف اظہار شدہ جینوں کی تعداد میں اضافہ کیا۔ نتیجے کے طور پر، ہم نے 22 اپ ریگولیٹڈ جینز اور 13 ڈاؤن ریگولیٹڈ جینز (ٹیبل S1) کی نشاندہی کی۔ GO افزودگی کے تجزیے میں 36 افزودہ GO اصطلاحات کی نشاندہی کی گئی جو 21 GO اصطلاحات (حیاتیاتی عمل)، دو GO اصطلاحات (مالیکیولر فنکشن) اور 13 GO اصطلاحات (سیلولر جزو) پر مشتمل ہیں۔ اس کے برعکس، 13 ڈاؤن ریگولیٹڈ جینز (ٹیبل S2) میں حیاتیاتی عمل کے لیے صرف 12 افزودہ GO شرائط کی نشاندہی کی گئی۔

حیاتیاتی عمل کے مطابق، کیراٹینائزیشن، کارنیفیکیشن، پروگرامڈ سیل ڈیتھ، سیل جنکشن آرگنائزیشن، ترقیاتی عمل کے مثبت ریگولیشن، اور جلد کی رکاوٹ کے قیام میں شامل جینز انتہائی اپ ریگولیٹڈ تھے (شکل 6A)۔cistanche wirkungمالیکیولر فنکشن کے لیے، سائٹوسکلٹن کے ساختی جزو اور ساختی مالیکیول کی سرگرمی کا بہت زیادہ اظہار کیا گیا (ٹیبل S2)۔ سیلولر جزو کے معاملے میں، انٹرمیڈیٹ فلیمینٹ، ایکسٹرا سیلولر ایکزووم، اور کیراٹین فلیمینٹ میں جینز کا بہت زیادہ اظہار کیا گیا تھا (شکل 6B)۔ 12 GO شرائط میں سے 13 ڈاؤن ریگولیٹڈ جینز کے لیے، زنک آئن کے ردعمل سے متعلق جینز، اوسیفیکیشن کا ضابطہ، اور حیاتیاتی عمل کے منفی ضابطے کو اکثر نیچے ریگولیٹ کیا جاتا تھا۔

شکل 6. LACCE کے جواب میں اپ ریگولیٹڈ انسانی جینز کے لیے شناخت شدہ افزودہ GO اصطلاحات کا درجہ بندی کا ڈھانچہ۔ ڈائریکٹڈ ایسکلک گرافس (DAGs) حیاتیاتی عمل (A) اور سیلولر جزو (B) کے مطابق LACCE کے علاج پر اپ ریگولیٹڈ جینز کے لیے شناخت شدہ افزودہ GO اصطلاحات کے درجہ بندی کی ساخت کا تصور کرتے ہیں۔ ہر GO کی اصطلاح p-value کی بنیاد پر مختلف باکس کے رنگ سے ظاہر ہوتی ہے۔ شناخت شدہ GO شرائط کے لیے تفصیلی معلومات ٹیبل S2 میں مل سکتی ہیں۔

4. بحث

کاسمیٹکس کو کلاسیکی طور پر کسی بھی تیار شدہ مصنوعات کے طور پر بیان کیا جاتا ہے جو انسانی جسم پر لاگو کیا جا سکتا ہے، بشمول چہرہ، جلد، بال، منہ اور آنکھیں، انسانی جسم کی ظاہری شکل کو تبدیل کرنے یا مضبوط کرنے کے لئے [21]۔ اس کے علاوہ، کاسمیٹکس کو صاف کرنے، خوشبو فراہم کرنے اور تحفظ فراہم کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ زیادہ تر کاسمیٹکس کیمیائی مرکبات پر مشتمل ہوتے ہیں جو قدرتی ذرائع یا مصنوعی اشیاء سے حاصل کیے جاسکتے ہیں [22]۔

اس مطالعے میں، ہم نے وٹرو اور ویوو میں متنوع اسسیس کے ذریعے کاسمیٹکس کے لیے قدرتی مرکب کے طور پر LACCE کے ممکنہ اثرات کا جائزہ لیا۔ وٹرو پرکھ کے کئی نتائج نے UVB علاج کے جواب میں LACCE کی مضبوط اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کو ظاہر کیا۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ LACCEasan antioxidant کا اثر LACCE کے ارتکاز سے منسلک تھا۔ LACCE کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی (1 فیصد) NAC کے مقابلے یا وٹامن C سے بہت زیادہ تھی۔ LACCE میں کلوروجینک ایسڈ، 3،5-Dicaffeoylquinic acid، leontopodic acid B، اور leontopodic acid A کی زیادہ مقدار ہوتی ہے۔ عام ایڈلوائس کالس ثقافتیں، جیسا کہ پچھلے مطالعہ میں دکھایا گیا ہے [4]۔ خاص طور پر، ایڈیل ویز سے دو لیونٹوپوڈک ​​ایسڈز کی نشاندہی کرنے والے پچھلے مطالعے نے LACCE کے ایک اینٹی آکسیڈینٹ ایجنٹ کے طور پر فعال کردار کو ظاہر کیا [23]۔

دو سوزشی جینوں کے اظہار کو LACCE کے علاج سے دبا دیا گیا تھا، جو کہ سوزش مخالف سرگرمی میں LACCE کے ممکنہ کردار کی تجویز کرتا ہے، جیسا کہ پہلے دکھایا گیا ہے [7,24]۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ مختلف LACCE ارتکاز کے درمیان سوزش مخالف اثر میں کوئی خاص فرق نہیں تھا، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ 1 فیصد LACCE کاسمیٹکس میں سوزش مخالف ایجنٹ کے طور پر استعمال کرنے کے لیے کافی ہو سکتا ہے۔ اس کے برعکس، بالترتیب موئسچرائزنگ اور جھریوں کے لیے درکار AQP3 اور MMP2 کے تاثرات مختلف LACCE ارتکاز کے ساتھ علاج کے بعد ڈرامائی طور پر تبدیل ہو گئے۔

ایک کاسمیٹک ذریعہ کے طور پر پودوں کے عرق کو استعمال کرنے کے لیے کلینکل ٹیسٹ سب سے اہم مرحلہ ہے۔ اس مطالعہ میں، ہم نے 21 رضاکاروں کے ساتھ LACCE کے Vivo اثرات کا جائزہ لیا۔ چہرے اور جلد کے بافتوں پر LACCE کے اطلاق سے پلیسبو کے مقابلے میں چار مختلف عوامل (پیریوربیٹل جھریوں میں بہتری، جلد کی لچک، جلد کی کثافت، اور جلد کی موٹائی) میں نمایاں اضافہ ہوا۔ خاص طور پر، LACCE کے مسلسل استعمال سے چہرے اور جلد کے ٹشوز میں نمایاں بہتری آئی۔ اگرچہ ایڈلوائس کے نچوڑوں کو کاسمیٹکس کے ذریعہ کے طور پر جانا جاتا ہے، یہ پہلی رپورٹ ہے جس میں LACCE کا ایک کاسمیٹک مواد کے طور پر کامیاب اطلاق کا مظاہرہ کیا گیا ہے۔

وٹرو میں ایک کاسمیٹک یا دواؤں کے ماخذ کے طور پر پودوں کے نچوڑ کا جائزہ لینے کے لیے، مارکر جینز کے اظہار کی جانچ ایک مقبول تجرباتی طریقہ ہے۔ تاہم، جین کے اظہار کے تجزیہ کے لیے صرف منتخب جینوں کے اطلاق میں کئی حدود ہیں۔ اگلی نسل کی ترتیب کی حالیہ تیز رفتار ترقی جینوم کے وسیع پیمانے پر جین کے اظہار کے تجزیہ میں سہولت فراہم کرتی ہے۔ اس مطالعے میں، ہم نے LACCE کے جواب میں انسانی keratinocyte خلیات میں ٹرانسکرپٹوم وسیع تبدیلیوں کی جانچ کرنے کے لیے RNA-Seq کا استعمال کیا۔ ہمارے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ انسانی جینوں کا کم از کم 16.56 فیصد keratinocyte خلیات میں ظاہر ہوتا ہے، جو انسانی جینوں کے ٹشو کے مخصوص اظہار کی نشاندہی کرتا ہے۔ LACCE نے متعدد جینوں کے اظہار کو متاثر کیا۔ تاہم، LACCE کے ذریعے انسانی ٹرانسکروم میں عالمی تبدیلی دیگر تناؤ کے حالات کے مقابلے میں ہلکی تھی۔ یہ نتیجہ انسانی بافتوں میں اطلاق کے لیے LACCE کی حفاظت کو یقینی بناتا ہے۔

افزودگی کے تجزیے سے یہ بات سامنے آئی کہ کیریٹن 5 (KRT5)، KRT19، KRT6A، KRT15، KRT14، KRT17، اور جنکشن پلاکوگلوبن (JUP) کو انکوڈنگ کرنے والے اپ ریگولیٹڈ جینز کیراٹینائزیشن اور کارنیفیکیشن میں شامل تھے۔ Epidermal keratinocytes متنوع ماحولیاتی عوامل کے خلاف رکاوٹ کے طور پر ایک اہم کردار ادا کرتے ہیں [25]۔ خاص طور پر، ٹرمینل تفریق والے ایپیڈرمل خلیے مردہ کیراٹینوسائٹس میں پروگرمڈ سیل ڈیتھ کے ذریعے تیار ہوتے ہیں جسے کارنیفیکیشن کہا جاتا ہے، جو ایک مضبوط ایپیڈرمل رکاوٹ بناتا ہے [26]۔ خلیوں کی موت کے بعد، جلد کی جلد کی تہہ چہرے اور بافتوں کو بہت سے فوائد فراہم کرتی ہے، جس میں لچک، استحکام، موئسچرائزنگ، اور مکینیکل مزاحمت میں اضافہ شامل ہے [25]۔ شناخت شدہ KRT جینوں میں سے، کیراٹین جین فیملی کا ایک رکن، کیراٹین 15 (KRT15) کو انکوڈنگ کرنے والا جین، ہیئر فولیکل اسٹیم سیل مارکر کے طور پر جانا جاتا ہے جو جلد کے ٹشوز میں بہت زیادہ ظاہر ہوتا ہے[27,28]۔ ایک حالیہ مطالعہ نے تجویز کیا ہے کہ KRT15 تابکاری اور زخم کی مرمت کے خلاف اپکلا کی تخلیق نو میں کام کرتا ہے [29,30]۔

KRT پروٹین کو انکوڈنگ کرنے والے کئی جینز کے علاوہ، DDIT4، BNIP3، اور IGFBP3 کو پروگرام شدہ سیل ڈیتھ میں انکوڈنگ کرنے والے جین۔ مثال کے طور پر، ڈی این اے ڈیمیج-انڈیکیبل ٹرانسکرپٹ 4 (DDIT4) کا اظہار مختلف دباؤ سے ہوتا ہے اور کینسر کے علاج سے وابستہ rapamycin کمپلیکس 1 (mTORC1) راستے کے ممالیہ ہدف کو روکتا ہے [31]۔ پچھلے مطالعات میں ڈی ڈی آئی ٹی 4 جین کی نشاندہی کی گئی ہے، جس کا اظہار ڈیکسامیتھاسون نے کیا تھا، جو کہ ایک کیموتھراپیٹک ایجنٹ ہے جو لیمفوسائٹس میں آٹوفجی پیدا کرتا ہے، جو کہ خلیوں کی نشوونما، پھیلاؤ اور بقا کے ضابطے میں اس کے ممکنہ کردار کی تجویز کرتا ہے [32,33]۔ LACCE نے dexamethasone کے ساتھ ملتے جلتے اثرات کو ایک اینٹی سوزش ایجنٹ کے طور پر دکھایا۔ Bcl-2/adenovirus E1B 19-kDa- انٹرایکٹنگ پروٹین (BNIP3) ایک پرو اپوپٹوسس پروٹین فیملی کا رکن ہے جو سیلولر پھیلاؤ کو منظم کرتا ہے[34] . اس کے علاوہ، BNIP3 اپنے جین کے اظہار کو ریگولیٹ کرکے UVB حوصلہ افزائی apoptosis سے keratinocytes کے تحفظ میں شامل ہے [35]۔ کئی مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ انسولین کی طرح گروتھ فیکٹر بائنڈنگ پروٹین 3 (IGFBP-3) کا اظہار سیلولر سنسنی [36,37] سے متعلق ہے۔ IGFBP-3 کا اضافہ سیل کی اقسام کے لحاظ سے apoptosis کو اکساتا ہے یا روکتا ہے [37]۔ مثال کے طور پر، IGFBP-3 کو ہیومن پیپیلوما وائرس سے لافانی سروائیکل سیلز میں ریگولیٹ کیا گیا تھا، جس کے نتیجے میں IGF-1-حوصلہ افزائی مائٹوجینیسیس [37] میں اضافہ ہوا تھا۔ ایک حالیہ مطالعہ نے IGFBP-3 کو سینسنٹ اور H, O2- میں جوان خلیات کے مقابلے پرانے خلیات میں کمی کو ظاہر کیا ہے، جو عمر بڑھنے کے نشان کے طور پر اس کے ممکنہ کردار کی تجویز کرتا ہے [36]۔

BNIP3، IGFBP3، stratifin (SFN)، CA2، FGFBP1، KRT17، اور JUP ترقیاتی عمل کے مثبت ضابطے میں شامل ہیں۔ ان میں سے، کاربونک اینہائیڈریز ہر جگہ موجود انزائمز ہیں جو پروکیریٹس اور یوکرائٹس میں موجود ہیں، بشمول جانور اور پودے [38]۔ انسانوں میں، کاربونک اینہائیڈریز پانی اور کاربن ڈائی آکسائیڈ (CO،) سے کاربونک ایسڈ کی تشکیل کو اتپریرک کرتی ہے، جو دماغ، گردے، اور ہڈیوں کی فزیالوجی [39] کے لیے ضروری ہیں۔ پچھلے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ CA4 اور CA9 کو RNA-Seq [40] کے ذریعہ زخم ہائپوکسک مدت کے دوران ایک ماؤس میں اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا۔ اس کے علاوہ، ریکومبیننٹ CA9 انزائم کے اضافے نے زخم کے دوبارہ اپکلا کو فروغ دیا [40]۔ مزید برآں، ایک پروٹوم مطالعہ نے ماؤس میں عمر بڑھنے اور نیوروڈیجنریشن میں CA2 پروٹین کی شمولیت کا بھی انکشاف کیا [41]۔ یہاں ، ہم نے یہ ظاہر کیا کہ LACCE نے CA2 اظہار کو ریگولیٹ کرکے انسانی کیریٹنوسائٹ خلیوں کی تخلیق نو کو فروغ دیا۔ فبروبلاسٹ گروتھ فیکٹر بائنڈنگ پروٹین 1 (FGFBP1) ایک ایکسٹرا سیلولر سیکریٹڈ چیپیرون ہے جو FGFs کا پابند ہے اور یہ FGF سگنلنگ J42 کو موڈیلیٹ کرتا ہے۔ کئی مطالعات سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ FGFBP1 انجیوجینیسیس کے دوران بہت زیادہ ظاہر ہوتا ہے اور جلد کے سرطان پیدا کرنے، سوزش اور زخم کو بھرنے میں اہم کردار ادا کرتا ہے [42-44]۔ مزید برآں، vesicle، extracellular exosome، intermediate filament، اور keratin filament میں اپ ریگولیٹڈ جینز کی سیلولر لوکلائزیشن سے پتہ چلتا ہے کہ یہ پروٹین سائٹوسکلٹن کا بنیادی جزو ہیں۔

ڈاون ریگولیٹڈ جینز میں، زیادہ تر جین مختلف تناؤ سے متاثر ہوتے ہیں۔ مثال کے طور پر، میٹالوتھیونین 2a (MT2A) اور میٹالوتھیونین لی (MT1E) کو انکوڈنگ کرنے والے دو جین دھاتی تناؤ کے حالات میں شامل ہوتے ہیں، بشمول زنک آئن، کاپر آئن، اور کیڈمیم آئن، اور آکسیڈیٹیو تناؤ، جیسے UVB [45,46]۔ مزید برآں، ڈی این اے بائنڈنگ 3 (ID3) کا ایک روکنے والا، ہیلکس-لوپ-ہیلکس پروٹین کا ایک رکن، مائٹوجینک سگنلز اور آکسیڈیٹیو تناؤ کے جواب میں فوری طور پر ابتدائی جین ہے [47]۔ اینکیرین ریپیٹ ڈومین 1 (ANKRD1)، جسے کارڈیک اینکیرین ریپیٹ پروٹین (CARP) بھی کہا جاتا ہے، ایک ٹرانسکریشنل کوفیکٹر ہے جو زخم بھرنے کے دوران اپ ریگولیٹ ہوتا ہے اور انجیوجینیسیس [48] کو آمادہ کرتا ہے۔ ID3 اور ANKRD1 دونوں حیاتیاتی عمل کے منفی ضابطے میں شامل ہیں۔ ID3 ایک ٹرانسکرپشن ریگولیٹر کے طور پر کام کرتا ہے جو اسٹیم سیل کی تفریق کو روکتا ہے اور سیل سائیکل کی ترقی کو فروغ دیتا ہے [47]۔ اس کے علاوہ، ایک حالیہ تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ چوہوں میں ANKRD1 فنکشن کے نقصان کے نتیجے میں زخم بھرنے میں تاخیر ہوتی ہے، جو زخم اور ٹشو کی چوٹ میں اس کے کردار کی تجویز کرتی ہے۔ ] مزید برآں، Rho سے متعلق BTB ڈومین پر مشتمل 3 (RHOBTB3) ہائپوکسیا-انڈیکیبل فیکٹرز (HIFs) کے پروٹیزومل انحطاط کو فروغ دینے کے لیے کام کرتا ہے، جو کم آکسیجن کے لیے انکولی ردعمل کے اہم ریگولیٹرز ہیں [50]۔ اس کے علاوہ، انٹرفیرون سے متاثرہ ٹرانس میمبرن پروٹین 1 (IFITM1) میزبان سیل میں بہت سے وائرسوں کے داخلے کو روکتا ہے [51]۔ اسی طرح، جین انکوڈنگ انٹرفیرون الفا-انڈیکیبل پروٹین 6 (IFI6) انٹرفیرون کے ذریعہ حوصلہ افزائی کرتا ہے اور اپوپٹوسس اور اینٹی وائرل پیدائشی قوت مدافعت کو منظم کرتا ہے [52,53]۔ ایل اے سی سی ای کے علاج کے ذریعے تناؤ کے لیے جواب دینے والے جینز کے ڈاون ریگولیشن سے پتہ چلتا ہے کہ ایل اے سی سی ای انسانی کیراٹینوسائٹ خلیوں میں تناؤ کا سبب نہیں بنتا ہے۔

5. نتائج

یہاں، ہم نے LACCE کو ایک قدرتی کاسمیٹک مواد کے طور پر کئی ان وٹرو اور Vivo Assays کے ذریعے جانچا، جو چہرے اور جلد کے ٹشوز کی بہتری پر اس کے مضبوط اثرات کی تجویز کرتا ہے۔ خاص طور پر، RNA-Seg پر مبنی ٹرانسکرپٹوم تجزیہ نے LACCE کے جواب میں انسانی keratinocyte خلیات میں مالیکیولر میکانزم کا انکشاف کیا۔ LACCE نے کیراٹینائزیشن اور کارنیفیکیشن میں شامل جین کو اپ ریگولیٹ کیا، جلد کی رکاوٹ فراہم کرتا ہے، جو پروگرام شدہ سیل کی موت کے لیے ضروری جینز کے ذریعے فروغ پاتا ہے۔ ترقیاتی عمل کے بہت سے مثبت ریگولیٹرز کو اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا، جبکہ متنوع تناؤ سے متاثرہ جینوں کو LACCE علاج کے ذریعے نیچے ریگولیٹ کیا گیا تھا۔ ایک ساتھ لے کر، ہمارے مطالعہ نے یہ ظاہر کیا کہ LACCE اینٹی ایجنگ کاسمیٹکس یا کاسمیٹکس کے لیے ایک ایجنٹ ہے۔

یہ مضمون جینز 2020، 11، 230 سے ​​لیا گیا ہے۔ doi:10.3390/genes11020230 www.mdpi.com/journal/genes