اینٹی آکسیڈینٹ اور سٹارچ ہائیڈرولائزنگ انزائمز روک تھام کے خواص سٹریگا مزاحم پیلے اورنج مکئی کے ہائبرڈز

مزید معلومات کے لیے رابطہ کریں:tina.xiang@wecistanche.com

خلاصہ: اناج سے حاصل ہونے والے زیادہ تر صحت کے فوائد ان کے حیاتیاتی مرکبات سے منسوب ہیں۔ اس مطالعہ نے بائیو ایکٹیو مرکبات کی سطحوں کا جائزہ لیا اوراینٹی آکسیڈینٹاور نشاستہ ہائیڈولائزنگخامروںوٹرو میں چھ پائپ لائن اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز (کوڈڈ AS1828-1, 4, 6,8, 9, 11) کی روک تھام کی خصوصیات۔ مکئی کے ہائبرڈ کو انٹرنیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ٹراپیکل ایگریکلچر (ITA)، نائیجیریا میں اگایا گیا تھا۔ حیاتیاتی مرکبات (کل فینولکس، ٹیننز،flavonoids، اور فائیٹیٹ) کی سطح، اینٹی آکسیڈینٹ (DPPH" اور ABTS سکیوینگنگ کی صلاحیت اور طاقت کو کم کرنے)، اور نشاستہ ہائیڈولائزنگخامروں(-amylase اور x-glucosidase) مکئی کے ہائبرڈز کی روک تھام کی سرگرمیوں کا تعین سپیکٹرو فوٹومیٹری کے ذریعے کیا گیا تھا۔ ایک ہی وقت میں، ریورس فیز HPLC سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے کیروٹینائڈز کی مقدار درست کی گئی۔ بائیو ایکٹیو مرکبات کی رینجز یہ تھیں: 11۔{4}}.14 ملی گرام GAE/g (کل فینولکس)،3۔{7}}.67 mg QE/g (کل flavonoids)، 3۔{1{ {34}}}.29 mg/g (tannins)،3۔{13}}.31 فیصد (فائٹیٹ)،8۔{16}}.11ug/g (کل xanthophylls)،2۔{19} }}.89 ug/g (کل -کیروٹین)، اور 3۔{23}}.77ug/g(کل پرووٹامن اے کیروٹینائڈز)۔ مکئی کے ہائبرڈز کے نچوڑ DPPH"(SC50: 9۔ 07-26.35 mg/mL) اور ABTS*(2.{{30}}.68 TEACmmol/g)، Fe3 پلس کو Fe2 پلس (0.25±0 سے کم کر دیا۔{37}} .43±0.01 mg GAE/g)، اور inhibited -amylase اور -glucosidase، IC50 رینجز کے ساتھ بالترتیب 26۔{45}}.55 mg/mL اور 47.{48}}.98 mg/mL، بالترتیب۔ مکئی کے ہائبرڈ کے چھ کلون میں، AS1828-9 سب سے زیادہ (p<0.05)levels of="" tannins="" and="" phytate="" and="" the="" strongest="">اینٹی آکسیڈینٹاور نشاستہ ہائیڈولائزنگ انزائمز روکتی سرگرمیاں۔ کل فینولکس اور درج ذیل کے درمیان اہم ارتباط دیکھے گئے: ABTS*(p<0.01, r="0.757)," dpph"sc50=""><0.01,r=-0.867), reducing=""><0.05,r=0.633), α-amylase=""><0.01,r=-0.836) and="" α-glucosidase=""><0.05, r="-0.582).Hence," the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids(especially="" as1828-9)="" may="" be="" beneficial="" for="" alleviating="" oxidative="" stress="" and="" postprandial="">

مطلوبہ الفاظ: کل فینولکس؛ کل flavonoids؛ ٹیننز؛ کیروٹینائڈز؛ فائیٹک ایسڈ؛ الفا-گلوکوسیڈیس روکنا پرکھ؛ الفا امائلیس روکنا پرکھ

1. تعارف

غذائیت کی کمی اور اس سے جڑی بیماریوں سے پیدا ہونے والے چیلنجوں سے نمٹنے کے لیے اعلیٰ پیداواری، غذائیت سے بھرپور اور صحت مند غذائی فصلوں کی فراہمی ضروری ہے۔ لہٰذا، تیزی سے بڑھتی ہوئی عالمی آبادی کی غذائی ضروریات کو پورا کرنے کے لیے پودوں کی افزائش کے تحقیقی پروگراموں میں بہتر غذائی معیار کے ساتھ بیماریوں سے بچنے والے اسٹیپلز کی افزائش جیسے مختلف منظم طریقے استعمال کیے گئے ہیں۔ ماحولیاتی آلودگی، گلوبل وارمنگ، اور اس کی ترقی کی وجہ سے عالمی خوراک کی فراہمی کی مقدار اور معیار میں زبردست کمی کو دیکھتے ہوئے یہ زیادہ ضروری ہو گیا ہے۔

بائیو فیول کے نئے ذرائع [1]۔ ذیلی صحارا افریقہ میں، مکئی (Zea mays L.) کو کم آمدنی والے خاندانوں میں غذائی تحفظ اور غربت میں کمی میں کردار ادا کرنے کے لیے دکھایا گیا ہے [2]۔

پیلے نارنجی مکئی کے جین ٹائپس اپنی بہترین غذائیت اور صحت کو فروغ دینے والی خصوصیات کے لیے مشہور ہیں کیونکہ ان میں موجود حیاتیاتی مرکبات، بشمول کیروٹینائڈز، پولی فینولک مرکبات، فائیٹک ایسڈ [3-5]، اور ٹوکوفیرولز [6]۔ تاہم، سب صحارا افریقہ میں مکئی کی بڑھتی ہوئی پیداوار کے ذریعے غذائی تحفظ اور بہتر غذائیت کے امکانات کو جڑ ہیمی پاراسٹک پلانٹ، اسٹریگا ہرمونتھیکا (ڈیل) بینتھ سے خطرہ ہے، پانی کی کمی کی وجہ سے شدید انفیکشن کے تحت پیداوار میں 100 فیصد تک زیادہ نقصان ہوتا ہے۔ اور پرجیوی کے ذریعے غذائی اجزاء [7,8]۔ نتیجتاً، S. hermonthica نے سب صحارا افریقہ میں مکئی کی پیداوار کے لیے ایک ابیوٹک حد بندی کی ہے، جو کہ اناج کے کاشتکاری کے روایتی نظام سے ایک مثالی تبدیلی سے نکلتی ہے جس میں فالتو مدت کی توسیع ہوتی ہے۔ کاشتکاری کے اناج کے اس طرح کے روایتی نظام نے اس بات کو یقینی بنایا کہ مٹی میں اسٹریگا سیڈ بینک کی سطح پودوں کے لیے قابل برداشت تھی۔ S.hermonthica infestation کی وجہ سے مکئی کی پیداوار اور کوالٹی میں ہونے والے نقصانات کو کم کرنے کے لیے، بہترین کنٹرول کا طریقہ یہ ہے کہ Striga مزاحم مکئی کے جین ٹائپس کاشت کریں۔ یہ حکمت عملی آسانی سے قابل اطلاق ہے، خاص طور پر دیگر انتظامی طریقوں کے ساتھ مل کر [10]۔

ہمارے حالیہ مطالعے سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈ میں کیروٹینائڈز، پولیفینول اور فائیٹک ایسڈ ہوتے ہیں [3]۔ یہ بایو ایکٹیو مرکبات اینٹی آکسیڈنٹ کے طور پر کام کرتے ہیں اور صحت کے دیگر فوائد کے علاوہ ہائپرگلیسیمیا کو دباتے ہیں [4,5,11,12]۔ نارنجی مکئی کے دانے میں موجود حیاتیاتی مرکبات میں سے، اینٹی آکسیڈینٹ [13,14] اور ہاضمے کے خامروں کی روک تھام کی سرگرمیاں [15] فینولک مرکبات پر منحصر ہیں، جو بنیادی طور پر پابند شکل میں موجود ہیں۔ اس کے علاوہ، فینولک مرکبات کئی دیگر بایو ایکٹیویٹیز رکھنے کے لیے جانے جاتے ہیں جیسے کہ xanthine oxidase اور angiotensin 1- کو تبدیل کرنے والے خامروں کی روک تھام، جو بالترتیب گاؤٹ اور رینن پر منحصر ہائی بلڈ پریشر کے روگجنن میں ملوث ہیں [11]، اور اینٹی اینٹی دیگر حیاتیاتی سرگرمیوں میں سوزش، اینٹی مائکروبیل، اینٹی کینسر، اینٹی الزائمر، اور اینٹی الرجک خصوصیات[16]۔ لہذا، غذائی ذرائع سے فینولک مرکبات سائنس دانوں اور صارفین دونوں کی طرف سے بہت زیادہ توجہ مبذول کر رہے ہیں کیونکہ ان کے انسانی صحت کے لیے فوائد ہیں [16]۔

اس مطالعے کا مقصد بائیو ایکٹیو مرکبات کی سطحوں کا جائزہ لینا تھا، اور وٹرو میں چھ پائپ لائن اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز کے اینٹی آکسیڈینٹ اور سٹارچ ہائیڈرولائزنگ انزائمز روکنے والی خصوصیات کا جائزہ لینا تھا۔ اس مطالعہ نے بائیو ایکٹیو اجزاء کے درمیان ایسوسی ایشن کا بھی تجربہ کیا، اوراینٹی آکسیڈینٹاور سٹارچ ہائیڈرولائزنگ انزائمز کی روک تھام کی سرگرمیاں چھ پائپ لائن سٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز۔

2. نتائج اور بحث

2.1. چھ پائپ لائن اسٹریگا مزاحم پیلے اورنج مکئی کے ہائبرڈز میں بائیو ایکٹیو اجزاء

بائیو ایکٹیو اجزاء کا تعین چھ پائپ لائنوں میں اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز(AS1828-1(AS1), AS1828-4(AS4), AS1828-6(AS6), AS{{ 8}} (AS8)، AS1828-9(AS9)، AS1828-11(AS11)) اس مطالعے میں کل فینولک شامل تھے،flavonoids، ٹیننز، کیروٹینائڈز، اور فائیٹک ایسڈ۔ کل فینولکس، کل فلیوونائڈز، ٹیننز، اور فائیٹک ایسڈ کی سطحیں جدول 1 میں پیش کی گئی ہیں۔ AS4 اور AS9 میں کل فینولک بالترتیب 11.25 سے 14.14 mg GAE/g کے درمیان ہیں۔ کل flavonoids AS11 اور AS6 میں بالترتیب 3.62 سے 4.67 mg QE/g تک؛ ٹینن کا مواد AS1 اور AS9 میں بالترتیب 3.64 سے 6.29 mg/g تک تھا۔ اور فائٹک ایسڈ کا مواد AS6 میں 3.66 فیصد سے AS1 میں 4.47 فیصد تک تھا۔

اس طرح، AS9 میں سب سے زیادہ (p<0.05)total phenolics="" and="" tannin="" levels,="" while="" as6="" had="" the="" highest="" total="" flavonoids="" content.="" the="" total="" phenolic="" concentrations="" detected="" in="" the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids="" are="" higher="" than="" the="" values="" previously="" reported="" in="" yellow="" maize="" hybrids,="" including="" 2.15="" mg="" gae/g[15]and="" 2.08="" mg="" gae/g[17].="" similarly,="" the="" levels="" of="" total="" flavonoids="" detected="" in="" the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids="" in="" this="" study="" are="" higher="" than="" the="" 0.93±="" 0.03="" mg="" oqe/g="" recently="" reported="" in="" provitamin="" a="" yellow="" maize="" flour="" [17].="" although="" the="" tannin="" levels="" are="" within="" the="" range(2.1-7.3="" mg/g)previously="" reported="" in="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids="" [3],="" the="" values="">

گاڑھا ٹیننز کی حد سے نسبتاً زیادہ (33.70 سے 158.55 ملی گرام/100 گرام، 0.34 سے 1.59 ملی گرام/گرام کے برابر) مکئی کی رنگت والے جین ٹائپس میں رپورٹ کیا گیا ہے [13]۔

چھ پائپ لائنوں میں مشاہدہ شدہ کل فینولکس، کل فلاوونائڈز، اور ٹینن کی اعلیٰ سطحیں اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز، غیر اسٹریگا مزاحم پیلے مکئی کے جین ٹائپس میں ان پولی فینولک کے لیے موجودہ لٹریچر میں قدروں کے نسبت ممکنہ طور پر منسلک ہوسکتی ہیں۔ ان کے جینیاتی میک اپ میں فرق [3]۔ یہ بات مشہور ہے کہ پولی فینولکس اور دیگر پودوں کے ثانوی میٹابولائٹس کی بایو سنتھیسز تناؤ کی موجودگی میں سیلولر ڈیفنس اور/یا انکولی میکانزم کے طور پر پودوں کے ناموافق حالات کا مقابلہ کرنے کے لیے بڑھ جاتی ہے [16,18]۔ مزید برآں، اسٹریگا کے بیج کے انکرن کو مکئی کے پودے کی جڑوں میں اسٹرائیگولاکٹونز (پودے کے ہارمونز) کی پیداوار سے تحریک ملتی ہے، جسے پودا تناؤ میں چھوڑتا ہے [19]۔ اس طرح، یہ ممکن ہے کہ S. hermonthica کے خلاف مزاحمت کی خاصیت نے پرجیوی کا مقابلہ کرنے کے لیے مکئی میں پولی فینولک مرکبات کے حیاتیاتی ترکیب کو بہتر بنایا ہو۔ اس کی تائید ایک سابقہ ​​رپورٹ سے ہوتی ہے کہ ایس ہرمونتھیکا کے ساتھ منسلک ہونے کے بعد کی مزاحمت میں پودوں کے خلیے کی دیوار کا گاڑھا ہونا اور بہت سے چھوٹے ویکیولز اور فینولک ذخائر کا جمع ہونا شامل ہے جو پودوں کے خلیے کے اندر گھنے داغ دار ہیں [20]۔

فینولک مرکبات اپنی ریڈوکس خصوصیات کی وجہ سے ان کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کے لیے قابل ذکر ہیں، جو انہیں سنگلٹ آکسیجن بجھانے، ہائیڈروجن کے عطیہ دہندگان اور کم کرنے والے ایجنٹوں کے طور پر کام کرنے کے قابل بناتے ہیں [21]۔ اس کے علاوہ، فینولک مرکبات کو بھی ہضم کے خامروں کو غیر فعال کرنے کی اطلاع ملی ہے، بشمول لبلبے کی لپیس، -امیلیس، اور اے-گلوکوسیڈیز کو انفرادی خامروں سے غیر مخصوص پابند کرنے کے ذریعے [22]۔ جیسا کہ پہلے Villiger et al [23] کے ذریعہ رپورٹ کیا گیا تھا فینولک مرکبات ہائیڈروجن اور ہائیڈروفوبک بانڈنگ کے ذریعے پروٹین کے ساتھ اعلی تعلق رکھتے ہیں، جو کہ انزائمز جیسے کہ -امیلیس اور -گلوکوسیڈیس کو پروٹین کی کمی سے روکنے کی صلاحیت کو بڑھاتے ہیں۔

The phytic acid contents were comparable (p>0.05) چھ پائپ لائنوں میں اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈ۔ یہ رینج اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈ [3] کے فائیٹک ایسڈ مواد پر ہماری پچھلی رپورٹ سے متفق ہے۔ فائٹک ایسڈ میں اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی ہوتی ہے، اس کے علاوہ گردے کی پتھری کی نشوونما کے خلاف اس کے روکنے والے اثر کے ساتھ ساتھ کینسر کے خلاف خصوصیات بھی ہوتی ہیں [25]۔ بائیو ایکٹیو اجزاء کی اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات، خاص طور پر اسٹریگا سے مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈ میں فینولک اجزاء (فلیونائڈز اور ٹیننز)، مکئی میں موجود بعض انڈوجینس غذائی اجزاء کے آکسیڈیٹیو انحطاط کو بھی روک سکتے ہیں اور/یا اس کو کم کرسکتے ہیں جو کہ بہت زیادہ نقصان دہ ہیں۔ آکسیکرن، جیسے غیر سیر شدہ فیٹی ایسڈز اور وٹامنز [16]۔ مزید برآں، اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز میں موجود حیاتیاتی اجزاء اس شرح کو کم کر سکتے ہیں جس پر کچھ زہریلے آکسیڈیٹیو مصنوعات بنتی ہیں، اس طرح غذائیت کے معیار کو برقرار رکھا جاتا ہے اور ان سے بنی کھانے کی مصنوعات [26] کی شیلف لائف کو بڑھاتا ہے۔

The carotenoid content in the Striga-resistant yellow-orange maize hybrids is presented in Table 2. Total β-carotene (9-cis-β-carotene + 13-cis-β-carotene + all-trans-β-carotene) ranged from 2.42 to 2.89ug/g; total xanthophylls (lutein+zeaxanthin) ranged from8.92 to 12.11l ug/g; and total provitamin A carotenoids(β-cryptoxanthin+β-carotene+α-carotene） ranged from 3.17 to 3.77 μg/g,in AS6 and AS9,respectively. There were no significant differences(p>0.05) اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی کے کیروٹینائڈ مواد میں

مکئی کے ہائبرڈ اس مطالعے میں حاصل کی گئی کیروٹینائڈز کی رینجز ان کی تصدیق کرتی ہیں جو پہلے الامو ایٹ ال کے ذریعہ رپورٹ کیے گئے تھے پروویٹامین اے بائیوفورٹیفائیڈ پیلے مکئی کے ہائبرڈز [27]۔ مزید برآں، کل xanthophylls اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز میں کل پرووٹامن A کیروٹینائڈز سے زیادہ قیمت میں تھے، جو Ortiz et al کے نتائج کی تصدیق کرتے ہیں۔ [28]۔

ہو سکتا ہے کہ کیروٹینائڈز نے اینٹی آکسیڈینٹ اور سٹارچ ہائیڈرولائزنگ انزائمز کی فینولک مرکبات کی روک تھام کی سرگرمیوں کو اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈ میں، ان کی رپورٹ کردہ بایو ایکٹیویٹی کے مطابق مکمل کیا ہو۔ مثال کے طور پر، کیروٹینائڈز کے بارے میں بتایا گیا ہے کہ وہ اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی رکھتے ہیں جو ان کے صحت کے فوائد کو بنیادی طریقہ کار کے طور پر رکھتے ہیں [29]۔ وہ غیر متعدی دائمی بیماریوں جیسے کینسر[30] اور قلبی امراض [31] کے خلاف حفاظتی اثرات بھی فراہم کرتے ہیں۔ اس کے علاوہ، -cryptoxanthin ٹائپ 2 ذیابیطس (T2D) کے خطرے کو نمایاں طور پر کم کرنے اور انسولین کے خلاف مزاحمت کو کم کرنے کی اطلاع دی گئی ہے [32,33]۔

2.2 چھ پائپ لائن اسٹریگا مزاحم پیلے اورنج مکئی ہائبرڈز کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی

اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز (ٹیبل 3) کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی نے انکشاف کیا کہ چھ پائپ لائن کلون تمام فری ریڈیکلز (ABTS ڈگری پلس اور DPPH*) کو ختم کرکے اور فیرک آئنوں (Fe3 پلس) کو فیرسینس تک کم کرکے اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کو ظاہر کرتے ہیں۔ (Fe2 پلس) اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی نمایاں طور پر مختلف ہوتی ہے (p<0.05) among="" the="" hybrids,="" with="" as9="" having="" the="" strongest=""><0.05) free="" radicals="" scavenging="" abilities(7.28="" teac="" mmol/g="" and="" sc50,="" 9.07±="" 0.27="" mg/ml="" for="" abts+="" and="" dpph,="" respectively)and="" ferric-reducing="" power="" (0.43="" mg="" gae/g).="" it="" is="" pertinent="" to="" recall="" that="" as9-9="" also="" had="" the="" highest="" level="" of="" total="" phenolics="" and="" tannins,="" as="" presented="" earlier="" in="" table="" 1.="" the="" dpph°scavenging="" abilities="" of="" the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids="" obtained="" in="" this="" study="" (sc50:="" 9.07="" to="" 26.35="" mg/ml)="" are="" more="" potent="" than="" those="" reported="" by="" rodriguez-salinas="" et="" al.="" [13]="" for="" pigmented="" maize="" genotypes(ic50:="" 31="" to="" 52="" mg/ml)="" since="" a="" lower="" sc50="" or="" ic50="" is="" indicative="" of="" a="" stronger="" activity="" [34].="" however,="" vitamin="" c,="" a="" standard="" antioxidant="" with="" a="" lower="" sc50(4.63±0.28="" mg/ml),="" had="" a="" stronger="" dpph*scavenging="" activity="" than="" all="" of="" the="" six="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids.="" similarly,="" the="" abts·+="" scavenging="" activity="" of="" the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids="" (2.65-7.68="" teac="" mmol/g)is="" higher="" than="" the="" value="" (294.81±="" 2.23="" umol="" teac/g)reported="" by="" irondi="" et="" al.[17]="" for="" provitamin="" a="" yellow="" maize="" flour.="" the="" stronger="" antioxidant="" activity="" of="" the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids="" over="" the="" non-striga-resistant="" pigmented="" maize="" genotypes="" may="" be="" attributed="" to="" the="" increased="" deposition="" of="" polyphenolic="" compounds="" in="" their="" defense="" against="" s.="" hermonthica="" [20],="" which="" may="" have,="" consequently,="" enhanced="" the="" antioxidant="" capacity="" of="" the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="">

اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز کی فری ریڈیکلز سکیوینگنگ کی صلاحیت اور فیرک کو کم کرنے کی طاقت بتاتی ہے کہ یہ آزاد ریڈیکلز اور ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں کی طرف سے پیدا ہونے والے آکسیڈیٹیو حملوں سے جسم کو بچانے میں فائدہ مند ثابت ہو سکتے ہیں۔ اس طرح، Striga مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈ جسم میں بائیو مالیکیولز کے آکسیڈیٹیو نقصان کے خلاف حفاظتی اثر رکھتے ہیں، بشمول نیوکلک ایسڈ، پروٹین، لپڈز، اور کاربوہائیڈریٹ [35] اور آکسیڈیٹیو تناؤ سے متعلق دائمی بیماریوں [36]۔ .

2.3. سٹارچ-ہائیڈرولائزنگ انزائمز کی چھ پائپ لائن اسٹریگا مزاحم بائیوفورٹیفائیڈ پیلے اورنج مکئی کے ہائبرڈز کی روک تھام کی سرگرمیاں

سٹارچ ہائیڈولائزنگ انزائمز (-amylase اور -glucosidase) چھ پائپ لائنوں کی روک تھام کرنے والی سرگرمی Striga-resistant پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز، جس کا اظہار IC50 کے طور پر کیا گیا ہے (ایکسٹریکٹ ارتکاز جو انزائم کی سرگرمی کو 50 فیصد روکتا ہے)، ٹیبل 4 میں پیش کیا گیا ہے۔ IC50 -امیلیس اور -گلوکوسیڈیس پر اسٹریگا مزاحم پیلے اورنج مکئی کے ہائبرڈز کی قدریں بالترتیب AS9 اور AS4 میں 26.28 سے 52.55 mg/mL اور 47.72 سے 63.98 mg/mL تک ہیں۔ اس طرح، چھ پائپ لائنوں میں اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز میں، AS9 سب سے کم IC50 اقدار کے ساتھ -amylase اور -glucosidase دونوں کے لیے، سب سے مضبوط (p<0.05)inhibitory activity="" on="" these="" two="" enzymes.="" interestingly,="" there="" was="" no="" significant="" (p="">0.05) -amylase پر AS9 اور acarbose کی IC50 قدروں میں (ایک معیاری اینٹی ذیابیطس دوائی) کا فرق، اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ AS9 اور acarbose کی -amylase روکنے والی صلاحیتوں کا موازنہ کیا جا سکتا ہے۔ تاہم، سوائے AS9 کی -amylase روکنے کی صلاحیت کے جو کہ acarbose کے مقابلے میں تھی، acarbose کی -amylase اور -glucosidase روکنے والی سرگرمیاں Striga مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز سے زیادہ مضبوط تھیں۔ فابیلا-گارسیا ایٹ ال نے نشاستہ ہائیڈولائزنگ انزائم (-گلوکوسیڈیس) کی سرگرمی کو روکنے کے لیے مختلف روغن (پیلا، جامنی، سرخ اور سیاہ) مکئی کے جین ٹائپ کی صلاحیت کی اطلاع دی۔ [15]۔ ان کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ پیلے مکئی کے عرق میں سب سے زیادہ گلوکوسیڈیز روک تھام کی سرگرمی تھی، جس کا اظہار مکئی کے جین ٹائپز میں فیصد (69.8 فیصد) کے طور پر ہوتا ہے۔ اس کے علاوہ، Irondi et al. [17] حال ہی میں پروویٹامین A پیلے مکئی کے آٹے کے لیے بالترتیب 237.12± 2.60 اور 157.18±1.05 ug/mL کی o-amylase اور -glucosidase IC50 اقدار کی اطلاع دی گئی۔ مکئی کے ریشم کے عرق سے متعلق، جو بالترتیب 218.4 اور 221.4 ug/mL کی اوسط IC50 قدروں کے ساتھ a-amylase اور -glucosidase کو روکنے کی اطلاع دی گئی ہے، چھ پائپ لائن Striga-مزاحم پیلے اورنج مکئی کے ہائبرڈز کا کمزور روک تھام کا اثر تھا۔ c-amylase اور x-glucosidase پر۔

سی-امیلیس اور او-گلوکوسیڈیس دونوں غذائی کاربوہائیڈریٹ کے عمل انہضام میں شامل ہیں۔ جبکہ چھوٹی آنت میں امائلیز نشاستہ کو ہائیڈولائز کرتا ہے -1، 4 بانڈز کو اولیگوساکرائڈز اور ڈساکرائڈز کو جاری کرنے کے لیے، -چھوٹی آنت کے برش بارڈر میں موجود گلوکوسیڈیز oligosaccharides اور disaccharides کو مزید ہائیڈولائز کر کے ہاضمے کو مکمل کرتا ہے، اور fructose [38]. لہذا، ان دو ہاضمہ خامروں کی روک تھام T2D مینجمنٹ میں پوسٹ پرانڈیل ہائپرگلیسیمیا کے خاتمے کے لئے ایک اچھی طرح سے قائم شدہ علاج کا طریقہ ہے اور عمل کا ایک اہم طریقہ کار ہے۔

بہت سے اینٹی ذیابیطس ایجنٹوں میں سے [39]، بشمول ادویات، قدرتی مصنوعات، اور فعال غذائیں۔ مزید برآں، Striga مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈ کا -amylase پر -glucosidase کے مقابلے میں کافی حد تک روک تھام کا اثر تھا۔ سٹارچ ہائیڈولائزنگ انزائمز کی روک تھام کا یہ نمونہ فائدہ مند علاج کے مضمرات رکھتا ہے اور پچھلے مطالعات میں رپورٹ کردہ پیٹرن سے متفق ہے [17,A0]۔ اس طرح، چھ پائپ لائن Striga مزاحم پیلے نارنجی مکئی ہائبرڈ، خاص طور پر AS9، پوسٹ پرانڈیل ہائپرگلیسیمیا کو کنٹرول کرنے میں کچھ فوائد حاصل کر سکتے ہیں۔

2.4 بائیو ایکٹیو اجزاء، اینٹی آکسیڈینٹ اور سٹارچ ہائیڈرولائزنگ انزائمز کی چھ پائپ لائن اسٹریگا مزاحم پیلے اورنج مکئی کے ہائبرڈز کی روک تھام کی سرگرمیوں کے درمیان ارتباط

بائیو ایکٹیو اجزاء میں، کل فینولک نمایاں طور پر ABTS· پلس (p<><0.01,r=-0.867), reducing=""><0.05,r=0.633), α-amylase="" ic50=""><0.01,r=-0.836)and α-glucosidase="" ic50=""><0.05,r=-0.582) (table="" 5).="" as="" earlier="" stated,="" lower="" dpph"="" scs0="" and="" enzyme="" ics0="" values="" are="" indicative="" of="" stronger="" scavenging="" and="" inhibitory="" activities="" of="" a="" given="" sample="" on="" dpph*="" and="" enzymes,="" respectively="" [34].="" thus,="" when="" taken="" together,="" the="" negative="" correlations="" between="" total="" phenolics="" and="" dpph·sc50,="" α-amylase="" ic50="" and="" α-glucosidase="" ic50,="" as="" well="" as="" the="" positive="" correlations="" between="" total="" phenolics="" and="" abts="" scavenging="" ability="" and="" reducing="" power,="" suggest="" that="" phenolic="" compounds="" may="" have="" contributed="" majorly="" to="" the="" observed="" antioxidant="" and="" starch-hydrolyzing="" enzymes="" inhibitory="" activities="" of="" the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="">

3. مواد اور طریقے

3.1 کیمیکل اور ری ایجنٹس

Trolox، quercetin، L-ascorbic acid، gallic acid، ABTS (2,2'-azino-bis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid)), DPPH(2,2-diphenyl -2-picrylhydrazyl)، -Bacillus stearothermophillus سے glucosidase، p-nitrophenylglucopyranoside (PNPG)، -amylase، حل پذیر نشاستہ، اور acarbose سگما (سینٹ لوئس) سے خریدے گئے تھے۔ دیگر تمام کیمیکلز اور سالوینٹس کے تجزیاتی درجات استعمال کیے گئے۔

3.2 نمونے کا مجموعہ

چھ پائپ لائن اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی ہائبرڈز کے خشک بیجوں کے نمونے (کوڈڈ AS1828-1,4,6,8,9,11) سبھی سمیناکا (8 ڈگری 39'E، 10 میں اگائے گئے ڈگری 34' N؛ 760 میٹر کی اونچائی؛ 1149 ملی میٹر کی سالانہ بارش؛ 18 کا درجہ حرارت۔ ؛ 622 میٹر کی اونچائی؛ 1076 ملی میٹر سالانہ بارش؛ اوسط درجہ حرارت 13۔ عبادان، نائیجیریا۔ ہائبرڈز مئی میں دو موسموں کے لیے لگائے گئے تھے، بارش کے موسم میں تین نقلوں میں بے ترتیب مکمل بلاک ڈیزائن میں۔ نمونوں کو پرٹین لیبارٹری ہتھوڑا مل (3102، USA) کے ساتھ آٹے (0.50 ملی میٹر چھلنی سائز) میں ملایا گیا اور مزید لیبارٹری تجزیوں کے لیے مبہم نمونوں کے تھیلوں میں ہرمیٹک طریقے سے پیک کیا گیا۔

3.3 نمونے کے نچوڑ کی تیاری 1

اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈ آٹے سے ایک نچوڑ تیار کرنے کے لیے، 1 گرام آٹے کو 10 ملی لیٹر میتھانول میں ڈھکی ہوئی 50 ملی لیٹر سینٹری فیوج ٹیوب میں رات بھر (12 گھنٹے) وقفے وقفے سے ہلانے کے ساتھ بھگو دیا گیا۔ اس کے بعد، مرکب کو 10 منٹ کے لیے 3000 rpm پر سینٹرفیوج کیا گیا، اور پھر سپرنٹنٹ (میتھانولک ایکسٹریکٹ) کو اکٹھا کیا گیا اور تجزیہ تک -4 ڈگری C پر ذخیرہ کیا گیا [41]۔

3.4. کل فینولکس مواد کا تعین

سنگلٹن ایٹ ال کے ذریعہ بیان کردہ Folin-Ciocalteu طریقہ۔ [42] اسٹریگا مزاحم پیلے اورنج مکئی کے ہائبرڈز کے آٹے کے عرق کے کل فینولک مواد کا تعین کرنے کے لیے اپنایا گیا تھا، اس عرق کا ایک حصہ (300 uL) ایک ٹیسٹ ٹیوب میں (ٹرپلیکیٹس میں) تقسیم کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، 1.5 ملی لیٹر Folin-Ciocalteu reagent (اسٹاک Folin-Ciocalteu reagent کو 10 بار ڈسٹلڈ واٹر سے پتلا کیا گیا) اور 1.2 mL Na2CO3 محلول (7.5 فیصد w/v) شامل کیا گیا، اور اس مرکب کو اندھیرے میں 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ کمرے کے درجہ حرارت. اس کے بعد، جاذب کو خالی جگہ کے خلاف 765 nm پر پڑھا گیا۔ کل فینولک مواد کا حساب ایک گیلک ایسڈ کیلیبریشن وکر کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا اور ایک mg/g نمونے میں گیلک ایسڈ مساوی (GAE) کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔

3.5 فلاوونائڈز کے کل مواد کا تعین

Kale et al کے ذریعہ بیان کردہ پروٹوکول۔ [43] اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی ہائبرڈز کے آٹے کے عرق کے کل flavonoids کے مواد کا تعین کرنے کے لیے کام کیا گیا تھا۔ مختصراً، 0.5 ملی لیٹر عرق ٹیسٹ ٹیوبوں میں تقسیم کیا گیا تھا۔ اس کے بعد 1.5 ملی لیٹر میتھانول، 0.1 ملی لیٹر ایلومینیم کلورائڈ (10 فیصد)، 0.1 ملی لیٹر 1 ایم پوٹاشیم ایسیٹیٹ، اور 2.8 ملی لیٹر آست پانی شامل کیا گیا۔ رد عمل کا مرکب 30 منٹ کے لئے کمرے کے درجہ حرارت پر گھماؤ اور انکیوبیٹ کیا گیا تھا ، جس کے بعد جاذب 514 nm پر پڑھا گیا تھا۔ نچوڑ کے کل flavonoids کے مواد کو mg/g نمونے میں quercetin مساوی (QE) کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔

3.6۔ Tan1nin مواد کا تعین

اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز کے آٹے کے نچوڑوں کے ٹینن کے مواد کی مقدار کو رنگین میٹرک طریقہ سے پہلے جوسلین [44] کے ذریعہ بیان کیا گیا تھا، تھوڑی سی ترمیم کے ساتھ۔ نمونے کا ایک حصہ (0.5 جی) میتھانول میں 1 فیصد HCl کے 5 ملی لیٹر میں منتشر ہوا اور 15 منٹ کے لیے چھوڑ دیا گیا۔ اس کے بعد، مرکب کو 10 منٹ کے لیے 3{{10}}00 rpm پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ سپرناٹینٹ کے 0.1 ملی لیٹر کا ایک حصہ ٹیسٹ ٹیوب میں 7.5 ملی لیٹر ڈسٹل واٹر پر مشتمل تھا، جس کے بعد 0.5 ملی لیٹر فولن ڈینس ریجنٹ اور 1 ملی لیٹر Na2CO3 (35 فیصد) محلول شامل کیا گیا، اور حجم کو 0.9 ملی لیٹر آست پانی کے ساتھ 10 ملی لیٹر مکس کرنے کے بعد، رد عمل کے مرکب کو کمرے کے درجہ حرارت پر 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا، اور جاذبیت 760 nm پر پڑھی گئی۔ ٹینن کا مواد، جس کا اظہار mg/g نمونے میں tannic ایسڈ مساوی (TAE) کے طور پر کیا جاتا ہے، کا حساب ٹینک ایسڈ معیاری وکر سے کیا گیا تھا۔

3.7 نمونے کے کیروٹینائڈ مواد کی مقدار

اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈ آٹے کے کیروٹینائڈ مواد کا تعین ہووے اور تنومی ہارڈو [45] کے بیان کردہ طریقہ کو اپنا کر کیا گیا تھا۔ کیروٹینائڈز نمونے کے 0.6 جی کو 6 ملی لیٹر ایتھنول کے ساتھ ملا کر آٹے سے نکالے گئے تھے (جس میں 0.1 فیصد بٹیلیٹڈ ہائیڈروکسیل ٹولین شامل تھے)۔ مرکب کو 5 منٹ کے لئے 85 ڈگری پر پانی کے غسل میں رکھا گیا تھا۔ اس کے بعد، مکسچر میں مداخلت کرنے والے تیل کو پوٹاشیم ہائیڈرو آکسائیڈ (80 فیصد w/v) کے ساتھ 85 ڈگری پر 5 منٹ کے لیے پانی کے غسل میں ڈالا گیا۔ اس کے بعد معطلی کو بھنور مشین کا استعمال کرتے ہوئے ملایا گیا اور مزید 5 منٹ کے لئے پانی کے غسل میں واپس آ گیا۔ اسے فوری طور پر برف کے غسل میں منتقل کیا گیا، اور 3 ملی لیٹر ٹھنڈا ڈیونائزڈ پانی شامل کیا گیا مرکب سے کیروٹینائڈ مواد کو 3 ملی لیٹر n-ہیکسین کے ساتھ 10 s کے لیے 1000 rpm پر سینٹرفیوگ کرکے لگاتار تین بار الگ کیا گیا۔ مکسچر کی اوپری پرت کو 50 ملی لیٹر کنسنٹریٹر ٹیوب میں تقسیم کیا گیا تھا۔ مشترکہ ہیکسین فریکشن کو تین بار ڈیونائزڈ پانی سے دھویا گیا، بھنور بنایا گیا، اور 1000 rpm پر 10 سیکنڈ کے لیے سینٹرفیوج کیا گیا۔ 25 منٹ تک نائٹروجن گیس کے تحت ٹربو ویپ (LIV) کنسنٹریٹر کا استعمال کرتے ہوئے این-ہیکسین فریکشن کو خشک کیا گیا۔ خشک عرق کو میتھانول/ڈیکلورومیتھین (1 ملی لیٹر، 50:50 v/v) کے ساتھ دوبارہ تشکیل دیا گیا تھا، اور کیروٹینائڈز کی مقدار درست کرنے کے لیے HPLC سسٹم میں 100 μL ایلی کوٹ لگایا گیا تھا۔ HPLC سسٹم (واٹر کارپوریشن، ملفورڈ، MA، USA) میں ایک گارڈ کالم، C30 YMC کیروٹینائڈ کالم（4.6×250 ملی میٹر، 3 μM）، بائنری HPLC پمپ（Waters 626）، آٹو سیمپلر (Waters a) اور 717 پر مشتمل تھا۔ فوٹوڈیوڈ سرنی کا پتہ لگانے والا (واٹر 2996)۔ یہ سسٹم ایمپاور 1 سافٹ ویئر (واٹر کارپوریشن) کے ساتھ چلتا ہے۔ موبائل فیز میں سالوینٹ A، میتھانول پر مشتمل تھا: پانی (92:8 v/v) 10 mmol/L امونیم ایسیٹیٹ کے ساتھ، اور سالوینٹ B، جس میں 100 فیصد میتھائل ٹرٹیری-بوٹائل ایتھر شامل ہے۔ تدریجی اخراج 1 ملی لیٹر فی منٹ کے بہاؤ کی شرح پر درج ذیل شرائط کے تحت انجام دیا گیا: 29 منٹ لکیری میلان 83 فیصد سے 59 فیصد A؛ 6 منٹ لکیری میلان 59 فیصد سے 30 فیصد A؛ 30 پر 1 منٹ ہولڈ فیصد A؛ 4 منٹ لکیری گریڈینٹ 30 فیصد سے 83 فیصد A اور ایک 4- منٹ ہولڈ 83 فیصد پر۔ کیروٹینائڈز کے کرومیٹوگرامس 450 nm پر تیار کیے گئے تھے، اور مخصوص کیروٹینائڈز کی نشاندہی کی گئی تھی اور خالص معیارات سے انشانکن منحنی خطوط پر مبنی بیرونی معیار کے طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے اور معیاری کیروٹینائڈز کے ساتھ جذب سپیکٹرم اور کو-ایلیوشن کا موازنہ کیا گیا تھا۔

3.8۔ فائیٹک ایسڈ مواد کا تعین

وہیلر اور فیرل [46] کا طریقہ آٹے میں فائیٹک ایسڈ کی مقدار کا تعین کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ 1 گرام آٹے اور 25 ملی لیٹر 3 فیصد ٹرائکلورواسیٹک ایسڈ (TCA) کے مکسچر کو 1 گھنٹہ کے لیے مکینیکل طور پر ہلا کر نکالا گیا اور معطلی کو 3500 rpm پر 15 منٹ کے لیے سینٹری فیوج کیا گیا۔ سپرنٹنٹ کے 10 ملی لیٹر ایلی کوٹ کو 4 ملی لیٹر فیرک کلورائد محلول کے ساتھ ملایا گیا، اور اس مرکب کو ابلتے ہوئے پانی کے غسل میں 45 منٹ تک گرم کیا گیا۔ نتیجے میں معطلی کو 15 منٹ کے لئے 3500 rpm پر سینٹرفیوج کیا گیا تھا اور سپرنٹنٹ کو احتیاط سے صاف کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، 3 فیصد TCA کے 25 ملی لیٹر میں منتشر کرکے، 10 منٹ کے لیے ابلتے ہوئے پانی کے غسل میں گرم کرکے، اور 10 منٹ کے لیے 3500 rpm پر سینٹری فیوگ کرکے، پریسیپیٹیٹ کو دو بار دھویا گیا۔ آست پانی کے ساتھ 30 ملی لیٹر تک تیز رفتار کا حجم بنایا گیا تھا، اور مرکب کو ابلتے ہوئے پانی کے غسل میں 30 منٹ تک گرم کیا گیا تھا۔ ہاٹ سسپنشن کو واٹ مین فلٹر پیپر (نمبر 2) کی مدد سے فلٹر کیا گیا تھا، اور مکمل فلٹریشن کو یقینی بنانے کے لیے 60 ملی لیٹر گرم ڈسٹل واٹر سے پریپیٹیٹ کو دھویا گیا تھا۔ اس کے بعد، فلٹر پیپر پر رکھا ہوا 40 ملی لیٹر گرم 3.2 M HNO3 کے ساتھ 100 ملی لیٹر والیومیٹرک فلاسک میں تحلیل کر دیا گیا۔ ایک 0.5 ایم ایل ایلی کوٹ کو سینٹری فیوج ٹیوب میں منتقل کیا گیا اور اسے 7 ملی لیٹر ڈسٹل واٹر سے ملایا گیا، جس کے بعد 1.5 ایم کے ایس سی این کا 2 ایم ایل شامل کیا گیا، اور حجم کو 0.5 ملی لیٹر ڈسٹل واٹر کے ساتھ 10 ایم ایل کر دیا گیا۔ جاذبیت (1 منٹ کے اندر) 480 nm پر پڑھی گئی۔ آٹے کے فائیٹک ایسڈ کے مواد کو 4:6 کے Fe/P جوہری تناسب کا استعمال کرتے ہوئے شمار کیا گیا تھا۔

3.9 2،2-Azinobis(3-ethyl-benzothiazoline-6-sulfonic acid) Radical Cation(ABTS· علاوہ )ScaOenging Assay/

اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز کے آٹے کے نچوڑوں کی اے بی ٹی ایس کو صاف کرنے کی صلاحیت کی جانچ ریت ال کے ذریعہ بتائے گئے طریقہ کار کو اپنا کر کی گئی تھی۔ ABTS پلس (7 ملیمول/L) اور K2S2Os (2.45 ملیمول/L) اور مرکب کو انکیوبیٹ کرنا

کمرے کے درجہ حرارت پر ایک سیاہ الماری میں 16 گھنٹے کے لیے۔ اس کے بعد، ریجنٹ کے جذب کو 0.70±0 میں ایڈجسٹ کیا گیا۔{10}}2 ایتھنول (95 فیصد) کے ساتھ 734 nm پر۔ پھر 0.2 ملی لیٹر ایکسٹریکٹ اور 2.0 ملی لیٹر ABTS* ری ایجنٹ کو ٹیسٹ ٹیوب میں ڈالا گیا، اچھی طرح مکس کیا گیا، اور تاریک حالت میں کمرے کے درجہ حرارت پر 15 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ آخر میں، جاذبیت کو UV-visible spectrophotometer (Milton Roy Company, USA) میں 734 nm پر پڑھا گیا۔ آٹے کے نچوڑوں کی ABTSe ​​پلس اسکیوینگنگ کی صلاحیت کو بعد میں Trolox معیاری منحنی خطوط سے شمار کیا گیا اور اسے Trolox مساوی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت (TEAC) کے طور پر ظاہر کیا گیا۔

3.10 2،2-Diphenyl-2-picrylhydrazyl Radical (DPPH") سکیوینگنگ پرکھ

Cervato et al کے ذریعہ رپورٹ کردہ پروٹوکول۔ وٹامن C (ascorbic acid) کو بطور حوالہ اینٹی آکسیڈینٹ استعمال کرتے ہوئے آٹے کے عرقوں کی ڈی پی پی ایچ کو نکالنے کی صلاحیت کا تعین کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ مختصراً، ایک رد عمل کا مرکب جس میں مختلف ارتکاز کا 10 mL ہوتا ہے (8, 16) 24, 32 mg/mL） extract ） (یا وٹامن C）) اور DPPH ڈگری محلول کے 3. 517 nm پر پڑھا گیا تھا، اور DPPH" نچوڑ کی صفائی کی صلاحیت ( فیصد ) کا حساب لگایا گیا تھا اور اس کا اظہار نچوڑ کے ارتکاز کے طور پر کیا گیا تھا جس نے DPPH کے 50 فیصد کو صاف کیا تھا" (SC50)۔

3.11۔ پاور پرکھ کو کم کرنا

Oyaizu [49] کے بیان کردہ پروٹوکول کو اپنا کر Fe3 پلس کو Fe2 پلس تک کم کرنے کے لیے آٹے کے عرق کی صلاحیت کو جانچا گیا۔ مختصراً، ایکسٹریکٹ (2.5 ملی لیٹر)، 200 ایم ایم سوڈیم فاسفیٹ بفر (پی ایچ 6.6) (2.5 ملی لیٹر)، اور 1 فیصد پوٹاشیم فیریکیانائیڈ (2.5 ملی لیٹر) کو 50 ڈگری پر 20 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ ، جس کے بعد 2.5 ملی لیٹر 10 فیصد ٹرائکلورواسیٹک ایسڈ شامل کیا گیا۔ اس کے بعد، مرکب کو 10 منٹ کے لیے 650×g پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ سپرنیٹنٹ کے 2.5 ملی لیٹر کا ایک حصہ ایک ٹیسٹ ٹیوب میں تقسیم کیا گیا تھا، اور 2.5 ملی لیٹر آست پانی اور 1 ملی لیٹر 0.1 فیصد فیریک کلورائڈ شامل کیا گیا تھا اور اچھی طرح ملایا گیا تھا، اور جاذبیت کو 700 nm پر پڑھا گیا تھا۔ آخر میں، عرقوں کی کم کرنے والی طاقت کا حساب لگایا گیا اور اس کا اظہار ملیگرام گیلک ایسڈ کے برابر فی گرام نمونہ میں کیا گیا۔

3.12۔ الفا امائلیز روکنا پرکھ

الفا-امیلیس روکنا پرکھ Kwon et al کے بیان کردہ طریقہ کار کو اپناتے ہوئے کیا گیا تھا۔ [50]۔ اس پرکھ میں پورسائن لبلبہ -امیلیس (EC3.2.1.1) اور حل پذیر نشاستہ (سبسٹریٹ) استعمال کیا گیا تھا۔ آٹے کے عرق کے مختلف اختلاط، کل 500μL، اور 500μL کا 0.02 M سوڈیم فاسفیٹ بفر (pH6.9) 0.006 M NaCl) کے ساتھ 0.5 mg/mL -amylase محلول کو ملایا گیا اور 37 ڈگری پر 10 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، 0.02 M سوڈیم فاسفیٹ بفر میں 1 فیصد نشاستے کے محلول کا 500 μL شامل کیا گیا، اور رد عمل کے مرکب کو 37 ڈگری پر 15 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، نشاستے کے -amylase-catalyzed hydrolysis کو 1.0 mL DNSA کلر ری ایجنٹ (1 فیصد 35- dinitro salicylic acid، اور 0.4 M NaOH میں 12 فیصد سوڈیم پوٹاشیم ٹارٹریٹ) شامل کر کے ختم کر دیا گیا۔ رد عمل کے مرکب کو بعد میں ابلتے ہوئے پانی کے غسل میں 5 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا، کمرے کے درجہ حرارت پر ٹھنڈا کیا گیا، اور 10 ملی لیٹر آست پانی سے پتلا کیا گیا۔ مرکب کی جاذبیت 540 nm پر پڑھی گئی۔ ایک حوالہ ٹیسٹ جس میں آٹے کے عرق کو خارج کیا گیا تھا اس تجربے میں شامل کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، فیصد -amylase روکنا مندرجہ ذیل کے طور پر شمار کیا گیا تھا:

(A540R - A540S)× 100 فیصد روکنا =A540R

جہاں A540R ریفرنس کی جاذب ریڈنگ ہے۔ A540S نمونے کی جاذبیت پڑھنا ہے۔

3.13۔ الفا-گلوکوسیڈیس روکنا پرکھ

Alpha-glucosidase inhibitory activity of the flours extracts was conducted by adopting the procedure reported by Kim et al. [39], using Bacillus stearothermophillus α-glucosidase (EC3.2.1.20) and para-nitrophenylglucopyranoside (PNPG) as the substrate. Five (5)units of an aliquot of α-glucosidase were incubated with 20 μg/mL of the extract for 15 min. The hydrolytic reaction was initiated by adding 3 mM PNPG prepared in 20 mM phosphate buffer, pH6.9, which served as a substrate. The hydrolytic reaction was allowed to proceed for 20 min at37°C, after which 2 mL of 0.1 M Na>CO: رد عمل کو ختم کرنے کے لیے شامل کیا گیا تھا۔ تجربے میں آٹے کے عرق کے بغیر ایک حوالہ ٹیسٹ شامل کیا گیا تھا۔ PNPG کے -glucosidase-catalyzed hydrolysis سے جاری پیلے p-nitrophenol کے جذب کو 400 nm پر پڑھا گیا اور فیصد o-glucosidase inhibition کا حساب اس طرح کیا گیا:

(A400R - A400S) × 100 فیصد روکنا =A400R

جہاں A400R ریفرنس کی جاذبیت پڑھنا ہے۔ A400 نمونے کی جاذبیت پڑھنا ہے۔

3.14 ڈیٹا تجزیہ

اس مطالعے میں حاصل کردہ اعداد و شمار (سہرے تعین سے) کو اوسط اقدار ± معیاری انحراف (SD) کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ SPSS شماریاتی سافٹ ویئر پیکج (16 واں ورژن) کا استعمال کرتے ہوئے، ڈیٹا پر تغیر (ANOVA) کا یک طرفہ تجزیہ کیا گیا، اور اوسط قدروں کا موازنہ ٹکی کے پوسٹ ہاک ٹیسٹ کے ذریعے کیا گیا۔<0.05. the="" associations="" between="" the="" bioactive="" components,="" the="" antioxidant,="" and="" the="" starch-hydrolyzing="" enzymes="" inhibitory="" activities="" were="" calculated="" using="" the="" pearson="" correlation="" test.="" column="" representations="" of="" the="" mean="" values="" were="" done="" using="" graphpad="" prism="" (5th="">

4. نتائج

چھ پائپ لائن اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز میں اہم بایو ایکٹیو اجزاء (کل فینولکس، کل فلیوونائڈز، ٹیننز، فائٹک ایسڈ، اور کیروٹینائڈز) شامل ہیں۔ ان کے نچوڑوں میں مضبوط اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کی نمائش ہوتی ہے اور نشاستے کی ہائیڈرولائزنگ انزائمز ( -امیلیس اور -گلوکوسیڈیس) کو روکا جاتا ہے۔ اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز میں، AS1828-9 میں سب سے زیادہ طاقتور اینٹی آکسیڈینٹ اور نشاستہ ہائیڈولائزنگ انزائم روکنے والی سرگرمیاں تھیں۔ کل فینولک مواد اور اے بی ٹی ایس* پلس، ڈی پی پی ایچ ڈگری سکیوینجنگ کی صلاحیت، طاقت کو کم کرنے، -امیلیس، اور اسٹریگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈز کی گلوکوسیڈیس روکنے والی سرگرمی کے درمیان اہم ارتباط دیکھے گئے۔ اینٹی آکسیڈینٹ اور سٹارچ ہائیڈرولائزنگ انزائمز کی روک تھام کی سرگرمیاں تجویز کرتی ہیں کہ اسٹرائگا مزاحم پیلے نارنجی مکئی کے ہائبرڈ (خاص طور پر AS1828-9) آکسیڈیٹیو تناؤ اور پوسٹ پرانڈیل ہائپرگلیسیمیا کو روکنے اور/یا کم کرنے میں فائدہ مند ہو سکتے ہیں۔