انفرادی اعضاء کے نظام میں جسمانی افعال میں کمی کی طرف سے خصوصیات

مزید معلومات کے لیے رابطہ کریں۔

خلاصہ

کالی چائے دنیا میں سب سے زیادہ استعمال کی جانے والی چائے کا مشروب ہے اور اسے بڑھاپے کو روکنے کے فوائد کے بارے میں مسلسل بتایا جاتا رہا ہے۔ تاہم، آیا تھیافلاوین، جو کہ کالی چائے کے عرقوں میں ایک قسم کی خصوصیت والی فائٹو کیمیکل ہے، صارفین میں عمر رسیدگی اور عمر کو کنٹرول کرنے میں ملوث ہے یا نہیں، یہ کافی حد تک نامعلوم ہے۔ اس مطالعے میں، ہم یہ ظاہر کرتے ہیں کہ تھیافلاوین عمر کے آغاز سے آنتوں کے رساو اور ڈیسبیوسس کو روکنے میں فائدہ مند کردار ادا کرتے ہیں، اس طرح ڈروسوفلا میں عمر بڑھنے میں تاخیر ہوتی ہے۔ میکانکی طور پر، تھیافلاوین پھلوں کی مکھیوں کی آنتوں میں Imd سگنلز کے زیادہ ایکٹیویشن کو منفی طور پر کنٹرول کرنے کے لیے Imd کی کنڈینسیٹ اسمبلی کو منظم کرتے ہیں۔ اس کے علاوہ، تھیافلاوین چوہوں میں ڈی ایس ایس سے متاثرہ کولائٹس کو روکتے ہیں، تجویز کرتے ہیں کہ تھیافلاوین آنتوں کی سالمیت کو ماڈیول کرنے میں کردار ادا کرتے ہیں۔ مجموعی طور پر، ہمارا مطالعہ ایک مالیکیولر میکانزم کا انکشاف کرتا ہے جس کے ذریعے تھیفلاوین ممکنہ طور پر آئی ایم ڈی کولیسنس کو کنٹرول کرنے کے ذریعے گٹ ہومیوسٹاسس کو منظم کرتے ہیں۔

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

تعارف

بڑھتی عمر، انفرادی اعضاء کے نظاموں میں جسمانی افعال میں کمی اور بیماری اور موت کے بڑھتے ہوئے خطرے کی خصوصیت میں مالیکیولز، خلیات اور بافتوں کو پہنچنے والے نقصان کا جمع ہونا شامل ہے (Alavez et al.، 2011؛ ​​Bartke et al. al.، 2017)۔ عمر بڑھنے کے عمل میں تاخیر اور عمر کو طول دینے کے لیے حیاتیاتی بگاڑ کو روکنے والے فعال مواد یا کیمیکلز کی شناخت بلاشبہ اہم ہے (Bar-ardo et al., 2017; Kapahi et al.,2017)۔ پچھلے مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ کالی چائے، جو دنیا میں سب سے زیادہ پیی جانے والی چائے ہے، میں اہم سرگرمیاں ہیں جو عمر بڑھنے میں تاخیر کرتی ہیں (کیمرون ایٹ ال۔ ؛ Peng et al.,2009; Xiao et al.,2020)۔ کالی چائے کے عرق کے ساتھ غذائی ضمیمہ تجرباتی جانوروں کی عمر کو موثر طریقے سے بڑھاتا ہے جیسے کیڑے (فیٹ ال، 2017)، فروٹ فلائیز (پینگ ایٹ ال، 2009؛ سائٹ ال، 2011)، چوہوں (سائٹ ال، 2011) ؛ Xiao et al., 2020)، اور چوہے (کمار اور رضوی، 2017)۔

یہ بات مشہور ہے کہ کالی چائے کے عرق میں بنیادی طور پر دو قسم کے فائٹو کیمیکل ہوتے ہیں، یعنی کیٹیچنز اور تھیافلاوین (TFs) (کیمرون ایٹ ال، 2008؛ کونڈو ایٹ ال، 2019؛ لی ایٹ ال، 2013)، جن میں سے آخری کالی چائے کی پیداوار (Li et al. مطالعات کی ایک سیریز نے آکسیڈیٹیو تناؤ اور عمر سے وابستہ سوزش کو بہتر بنانے اور بافتوں کو پہنچنے والے نقصان کو کم کرنے کے ذریعے کیٹیچنز کے اینٹی ایجنگ کردار کی نشاندہی کی ہے (کیمرون ایٹ ال۔ 2008؛ نیو ایٹ ال۔ .2011؛ ​​Waaner et al.,2015)۔ تاہم، عمر بڑھنے میں TFs کے تعاون کے بارے میں فعال مطالعہ کیٹیچنز پر بہت پیچھے رہ گئے ہیں، کیونکہ طبی مطالعات کے لیے کالی چائے کی پتیوں سے TFs کی کافی مقدار نکالنا مشکل ہے (Takemoto and Takemoto, 2018)۔ حال ہی میں، TFs (Takemoto and Takemoto,2018) کی بڑے پیمانے پر پیداوار کے لیے کئی بائیو سنتھیٹک طریقے تیار کیے گئے ہیں، جس سے TFs کے صحیح حیاتیاتی اثرات اور بنیادی ریگولیٹری میکانزم کو تلاش کرنا ممکن ہو گیا ہے۔

حال ہی میں، اعداد و شمار کے بڑھتے ہوئے سیٹوں نے بڑھاپے اور عمر کے ماڈیولیشن میں آنتوں کے اہم کردار کو اجاگر کیا ہے (Guo et al., 2014; Jji et al., 2019; Maynard and Weinkove, 2018; Rothenberg and Zhang, 2019; Salazar et al. 2018)۔ آنتوں کا اپیتھیلیم، جو ایک منتخب رکاوٹ کے طور پر کام کرتا ہے، غذائی اجزاء، آئنوں اور پانی کو جذب کرنے کی اجازت دیتا ہے اور نقصان دہ ہستیوں کے ساتھ میزبان کے رابطے کو محدود کرتا ہے، بشمول مائکروجنزم، غذائی اینٹیجنز، اور ماحولیاتی زہریلے (Capo et al., 2019؛ Nicholson et al. ، 2012؛ Ryu et al.، 2010)۔ افراد میں ایک اعلی ٹرن اوور ٹشو کے طور پر، آنتوں کی نالی سمبیوٹک مائیکرو جانداروں کے لیے بہترین ماحول فراہم کرتی ہے، بشمول قدرتی انیروبک حالات، وافر غذائی اجزاء، اور مناسب درجہ حرارت اور پی ایچ۔

تصویر 1۔ تھیفلاوین ڈروسوفلا کی عمر کو طول دیتے ہیں اور چڑھنے کی صلاحیت کو بڑھاتے ہیں۔

(A اور B) مادہ پھلوں کی مکھیوں کو معیاری کھانوں کے ساتھ پالا گیا تھا جو 1 ملی گرام/ملی لیٹر یا 2.5 ملی گرام/ملی لیٹر تھیافلاوین (TFs) کے ساتھ یا بغیر TFs کے بیسل کے طور پر دیا گیا تھا۔ مکھیوں کو تازہ شیشیوں میں منتقل کیا جاتا تھا جس میں ہر دوسرے دن نیا میڈیا ہوتا تھا، اور مردہ مکھیوں نے پوری بالغ عمر میں اسکور کیا ہوتا ہے، بقا کے منحنی خطوط (A) اور مادہ مکھیوں کی لمبی عمر (B) کا تجزیہ کرکے دکھایا گیا تھا۔

(کینڈ ڈی) خواتین ڈبلیو 18 کو معیاری ڈروسوفلا فوڈز (بیسل کا حوالہ دیا گیا) یا بالترتیب 1mg/ml یا 2.5mg/ETFs کے ساتھ اضافی خوراک کے ساتھ کھلایا گیا۔ اشارہ شدہ عمروں میں مکھیوں کے چھ آزاد گروپ (بالترتیب 10 دن، 30 دن، 40 دن، اور 50 دن) کیفے (C) اور فلوروسین فیڈنگ (D) اسسیس کا نشانہ بنے۔ قدر، جسم میں مخصوص بیکٹیریل انواع کے زیر قبضہ طاقوں کی تشکیل (Bonfini et al.,2016; Buchon et al., 2013; Nicholson et al., 2012)۔ دریں اثنا، یہ سمبیوٹک مائکروجنزم اور ان کے میٹابولائٹس بھی براہ راست یا بالواسطہ طور پر غذائی اجزاء کی پروسیسنگ کو متاثر کرتے ہیں۔ عمل انہضام اور جذب؛ توانائی کے توازن؛ مدافعتی تقریب؛ معدے کی ترقی اور پختگی؛ اور بہت سی دوسری اہم جسمانی سرگرمیاں (Bonfini et al., 2016; Broderick, 2016; Maynard and VVeinkove, 2018; Nicholson et al., 2012)۔ دونوں علامتوں کے درمیان باہمی فائدہ مند رشتہ آنتوں کے مائیکرو ماحولیاتی نظام کے استحکام اور متحرک توازن کو برقرار رکھ سکتا ہے (Bonfini et al. Weinkove, 2018; Nicholson et al., 2012)۔

cistanche عمر مخالف کر سکتے ہیں

مطالعات کے ایک سلسلے سے یہ ظاہر ہوا ہے کہ آنتوں کے مائکرو بایوٹا ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھنے کے لیے فطری قوت مدافعت کا ردعمل بہت اہم ہے اور یہ invertebrates سے vertebrates تک محفوظ ہے (Guillouet al.,2016; Guo et al.,2014; Ryu et al., 2006, 2010; Vijay کمار وغیرہ، 2010)۔ ڈروسوفلا میں، سگنلنگ کے دو بڑے راستے، یعنی ٹول اور مدافعتی کمی (Imd) راستے، پیدائشی مدافعتی ردعمل میں شامل ہیں (Lu et al., 2020; Myllymakiet al.,2014; Valanne et al.,2011)۔ خاص طور پر، ڈروسوفلا ٹول پاتھ وے ممالیہ انٹرلییوکن-1 رسیپٹر (IL-1R) اور MyD88-انحصار ٹول نما رسیپٹر (TLR) راستوں کے ساتھ مماثلت رکھتا ہے، جب کہ Imd پاتھ وے مماثلت رکھتا ہے۔ ٹیومر نیکروسس فیکٹر ریسیپٹر (TNFR) پاتھ وے اور ستنداریوں میں TRIF پر منحصر TLR پاتھ وے (Imler، 2014؛ Myllymaki et al.، 2014؛ Valanne et al.، 2011)۔ یہ دونوں راستے NF-KB ٹرانسکرپشن عوامل (Imler,2014; Myllymaki et al.,2014; Valanne et al.,2011) کو چالو کرنے کے ذریعے antimicrobial peptides (AMPs) کے اظہار کو کنٹرول کرتے ہیں۔bioflavonoidsImd سگنلنگ پاتھ وے عام طور پر گرام منفی بیکٹیریل انفیکشن کے ذریعے چالو ہوتا ہے اور اس کے نتیجے میں AMPs کے ایک اور سیٹ، جیسے Attacin، Cecropin، اور Diptericin (Kleino and Silverman, 2014; Myllymaki et al., 2014) کا اظہار ہوتا ہے۔ ان AMPs کے اظہار کے لیے Imd پاتھ وے میں پیپٹائڈوگلیکن ریکگنیشن پروٹین (PGRP)-LC رسیپٹر اور Relish کے سگنل پر منحصر کلیویج اور نیوکلیئر ٹرانسلوکیشن کی ضرورت ہوتی ہے، NF-kB فیملی ٹرانسکرپشن فیکٹر (Kleino and Silverman, 2014; Myllymaki et al., 2014)۔ ایک حالیہ مطالعہ سے پتہ چلتا ہے کہ بیکٹیریل پیپٹائڈوگلائکنز (کلیینو ایٹ ال۔، 2017) کی شناخت کے بعد ڈروسوفلا آئی ایم ڈی پاتھ وے کو چالو کرنے کے لیے امائلائیڈ کی تشکیل ضروری ہے۔ تاہم، آیا یہ آئی ایم ڈی کنڈینسیٹ دیگر حیاتیاتی عمل میں شامل ہے، جیسے آنتوں کے ہومیوسٹاسس کی دیکھ بھال اور عمر بڑھنے کے ضابطے، بڑی حد تک نامعلوم ہے۔

موجودہ مطالعہ میں، ہم نے پھل کی مکھیوں اور چوہوں کو جانوروں کے ماڈل کے طور پر استعمال کیا تاکہ آنتوں کی سالمیت اور عمر بڑھنے کو کنٹرول کرنے میں TFs کے کردار کی چھان بین کی جا سکے۔ ہم نے دکھایا کہ TFs آنتوں کے اسٹیم سیلز کی عمر کے آغاز سے زیادہ پھیلاؤ میں تاخیر کرتے ہیں، گٹ مائکرو بایوم کے dysbiosis کے خلاف حفاظت کرتے ہیں، اور Imd سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کرنے سے روکتے ہیں، اس طرح ڈروسوفلا میں عمر کو طول دیتے ہیں۔ مزید میکانکی مطالعات نے اشارہ کیا کہ TFs منفی طور پر Imd سگنلنگ میں حصہ ڈالتے ہیں Imd کے گاڑھا ہونے کو روکنے کے بجائے اس کے ہر جگہ ہونے کے ذریعے۔ مزید یہ کہ، ہم نے پایا کہ TFs چوہوں میں DSS-حوصلہ افزائی کولائٹس کو روکنے میں انتہائی موثر ہیں۔ ایک ساتھ مل کر، ہماری تلاشیں Imd رویے کو ماڈیول کرنے میں TFs کے ممکنہ کردار کو ظاہر کرتی ہیں، جو آنتوں کے ہومیوسٹاسس اور عمر میں توسیع میں ان کی مثبت شراکت کا کلیدی عنصر ہو سکتا ہے۔

نتائج

Theaflavins کی غذائی ضمیمہ ڈروسوفلا کی عمر بڑھاتی ہے۔

اس بات کا جائزہ لینے کے لیے کہ آیا تھیافلاوین (TFs) ڈروسوفلا میں عمر بڑھنے اور عمر کو متاثر کرتے ہیں، ہم نے مادہ w'118 مکھیوں کو پالنے والے معیاری کھانوں کے ساتھ پالا جو 1mg/mL یا 2.5mg/ml TFs کے ساتھ ضمیمہ کیا گیا تھا اور زندگی کے دورانیہ کے اسسز کیے تھے جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے (Ji et al .،2019)۔ مکھیوں کو TFs سالوینٹس (H2O) کی مساوی مقدار کے ساتھ اضافی خوراک کھلائی گئی اسے کنٹرول سمجھا جاتا تھا۔ جیسا کہ شکل 1A میں دکھایا گیا ہے، TFs (1 mg/mL) کے نسبتاً کم ارتکاز کے غذائی اضافے نے پھلوں کی مکھی کی عمر کو قدرے طویل کیا، اور TFs (2.5 mg/mL) کی زیادہ ارتکاز نے عمر کی توسیع پر نمایاں طور پر مثبت اثر ڈالا۔ خاص طور پر، TFs (2.5 mg/mL) کے زیادہ ارتکاز کے طویل مدتی استعمال کے نتیجے میں مادہ مکھیوں کی اوسط عمر (شکل 1B) میں تقریباً 8 دن کی بلندی ہوتی ہے، جو ڈروسوفلا میں لمبی عمر کو منظم کرنے میں TFsin کے فائدہ مند کردار کی تجویز کرتی ہے۔ اسی طرح کے نتائج اس وقت حاصل ہوئے جب ہم نے نر w'*''8 مکھیوں (اعداد و شمار S1A اور S1B) کی عمر پر اضافی TFs کے ممکنہ اثرات کا تجربہ کیا۔

تصویر 2. تھیافلاوین ڈروسوفلا میں عمر کے آغاز سے آنت کی خرابی اور مائکرو بائیوٹا ڈیسبیوسس کو روکتی ہے۔

(A اور B) آنتوں کی سالمیت کے نقصان کو Smurftest نے 10 دن، 30 دن، 40 دن اور خواتین w18 بالغوں کی 50 دن کی عمر میں جانچا تھا۔ غیر Smurf اور Smurf کی مثالیں (A) میں دکھائی گئیں۔ مختلف اشارے والے گروپوں میں Smurf کی فیصد کا تجزیہ کیا گیا اور (B) میں دکھایا گیا۔

(C) مختلف اشارے والے گروپوں سے خواتین w18 فائلوں میں 16S rRNA جین کے qPCR کے ذریعہ محفوظ کردہ بیکٹیریا کی مقدار کا تجزیہ کیا گیا اور دکھایا گیا۔

(DF) کامنسل بیکٹیریل 16S rRNA جین کی ترتیب کی گئی تھی۔ بیکٹیریل ٹیکسا (D) کے تناسب، مرکزی مائکروبیل ٹیکسا (F) کا گرمی کا نقشہ، اور گاما پروٹو بیکٹیریا (F) کی نسبتا کثرت کا تجزیہ اور پیش کیا گیا۔

شکل 2. جاری

(G اور H) 10 دن اور 40 دن کی عمر میں کنٹرول کے طور پر 2.5 mg/ml TFs یا TFs کے بغیر کھلائے جانے والی نشاندہی شدہ مادہ مکھیوں سے ہمتیں جدا کی گئیں۔ مڈگٹ سلائیڈز کی تصاویر GFP سگنلز (G) کے لیے فلوروسینس مائکروسکوپی کے ذریعے حاصل کی گئیں۔ GFP-مثبت خلیات کا فیصد ظاہر کرنے والا شماریاتی تجزیہ (H) میں دکھایا گیا ہے۔

(I) اشارہ شدہ مادہ مکھیوں سے ہمتیں اکٹھی کی گئیں اور فاسفوریلیٹ ہسٹون 3(pH3) کے خلاف اینٹی باڈیز کا استعمال کرتے ہوئے امیونوسٹیننگ اسسیس کا نشانہ بنایا گیا جس میں pH3-مثبت خلیات فی گٹ کی مقدار کے اعداد و شمار کے نتائج کا تجزیہ کیا گیا اور دکھایا گیا۔ B، C، H، اور، میں ڈیٹا کا تجزیہ دو دم والے طالب علم کے ٹیسٹ کے ذریعے کیا جاتا ہے اور بطور ذریعہ دکھایا جاتا ہے ± SEM.NS، اہم نہیں،*p<><0.001. see="" also="" figure="">

ETFs کا ذائقہ کڑوا ہوتا ہے، اور کڑوی کھانوں سے عام طور پر دونوں صارفین پرہیز کرتے ہیں جن میں پھل کی مکھیاں اور ممالیہ جانور شامل ہیں (Yamazaki et al.، 2014؛ Yang et al.، 2018)۔ اس کے بعد ہم نے یہ واضح کرنے کی کوشش کی کہ آیا TFs ڈروسوفلا کے کھانے کی مقدار کو متاثر کر سکتا ہے، کیونکہ پچھلے مطالعات نے ثابت کیا ہے کہ غذائی پابندی فقاری اور غیر فقاری دونوں میں طویل عمر کا باعث بنتی ہے (Hudry et al. ، 2020)۔ ایسا کرنے کے لیے، ہم نے پہلے کیفے پرکھ کا مظاہرہ کیا، جو کہ مائع میڈیم پر مشتمل کیپلیری فیڈر کا استعمال کرکے فیڈنگ کی شرح کو براہ راست اور درست طریقے سے ماپنے کے لیے ایک وسیع پیمانے پر استعمال شدہ طریقہ ہے، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے (Ja et al.، 2007)۔ جیسا کہ اعداد و شمار 1C اور S1C میں دکھایا گیا ہے، TFs کی غذائی ضمیمہ (بالترتیب 1 mg/mL اور 2.5 mg/mL) نے آزمائشی مکھیوں کے کھانے کی کھپت کو مشکل سے تبدیل کیا۔ اس کی مزید تصدیق کرنے کے لیے، ہم نے پھر فلوروسین کو فوڈ ٹریسر کے طور پر استعمال کیا (ریرا ایٹ ال۔، 2012؛ وانگ ایٹ ال۔، 2005) اور ایک قدرتی فیڈنگ پرکھ (ڈینیلوف ایٹ ال۔، 2015) کی گئی۔ جیسا کہ اعداد و شمار 1D اور S1D میں دکھایا گیا ہے، ہم TFs کی تکمیل اور خوراک کی مقدار کے درمیان کسی بھی ارتباط کا مشاہدہ کرنے میں ناکام رہے۔ ایک ساتھ مل کر، ہمارے نتائج نے تجویز کیا کہ عمر کو طول دینے میں TFs کے فائدہ مند کردار ڈروسوفلا میں غذائی پابندی کی وجہ سے نہیں ہو سکتے۔

اضافی TFs ڈروسوفلا انرجی ہومیوسٹاسس کو متاثر کرنے کے لیے قابل استعمال ہیں۔

یہ تجویز کیا گیا ہے کہ کالی چائے کے پولی فینولز لپڈ اور سیکرائیڈ کے عمل انہضام، جذب اور انٹیک کو روک کر موٹاپے کی روک تھام پر مثبت اثر ڈالتے ہیں، اس طرح کیلوری کی مقدار کو کم کرتے ہیں (کیمرون ایٹ ال۔، 2008)۔ اس کے بعد ہم نے یہ واضح کرنے کی کوشش کی کہ آیا TFs سے ریگولیٹڈ LDrosophila کی عمر میں توسیع غذائی اجزاء کے جذب اور توانائی کے ذخیرہ میں تبدیلی کی وجہ سے ہے۔ ایسا کرنے کے لیے، ہم نے سب سے پہلے triacylglyceride (TAG) کی سطح کی جانچ کی، جو کہ سب سے زیادہ عام طور پر پائے جانے والے لپڈ میٹابولائٹس میں سے ایک ہے (Tennessen et al.، 2014)، مادہ مکھیوں میں ان کی پوری زندگی میں جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے (Fan et al.، 2017)۔cistanche خریدیںجیسا کہ شکل 1E میں دکھایا گیا ہے، TFs کے علاج نے عمر کے مختلف مقامات پر TAG کی کثرت کو مشکل سے متاثر کیا۔ جب ہم نے گلائکوجن کے مواد اور مقدار میں گردش کرنے والے کاربوہائیڈریٹس (گلوکوز اور ٹریہلوز) کو ہیکسوکینیز کٹ (Li et al., 2018; Ten-nessen et al., 2014) کے ذریعے مزید دریافت کیا تو نتائج سے معلوم ہوا کہ نمونوں کے درمیان کوئی واضح تبدیلی نہیں تھی بغیر TFs علاج (اعداد و شمار 1F-1H)۔ قابل غور بات یہ ہے کہ جب ہم نے مردانہ w118 کو جانوروں کے ماڈل (اعداد و شمار S1E-S1H) کے طور پر استعمال کرنے والے میٹابولک فینوٹائپس کی جانچ کی تو مسلسل نتائج حاصل ہوئے۔ اجتماعی طور پر، ان اعداد و شمار نے تجویز کیا کہ TFs کی غذائی ضمیمہ کاربوہائیڈریٹ اور انرجی ہومیوسٹاسس کے ضابطے کے لیے ڈروسوفلا کی پوری زندگی میں قابل عمل ہے۔

ہم نے خوراکی TFs مداخلت کے تحت ڈروسوفلا کے قدرتی سنسنی کے حرکیات کی مزید تحقیقات کیں جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے تیزی سے تکراری منفی جیوٹاکسیس (رنگ) ٹیسٹ کر کے (Dilliane et al.، 2017؛ Staats et al.، 2018)۔ جیسا کہ اعداد و شمار 1l,1J, S1l, اور S1J میں دکھایا گیا ہے، TFs کے ضمنی گروپوں میں عمر (40 دن) w1118 (خواتین اور مرد دونوں) کے چڑھنے کے اشاریہ جات میں نمایاں بہتری آئی ہے (خواتین میں تقریباً 12 فیصد اضافہ اور مردوں میں تقریباً 18 فیصد اضافہ ) کنٹرول گروپس کے مقابلے میں، تجویز کرتا ہے کہ TFs ممکنہ طور پر ڈروسوفلا چڑھنے اور لوکوموٹر کی سرگرمیوں کو بہتر بناتا ہے۔

Theaflavins عمر کے آغاز سے آنتوں کے رساو اور مائکرو بائیوٹا ڈیسبیوسس کو روکتے ہیں۔

پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ فروٹ فلائی لوکوموٹر کی سرگرمیاں اور عمر کا میزبان کی صحت کی حالت سے بہت زیادہ تعلق ہے، جیسے کہ جنس، خوراک، عمر، اور جین ٹائپ (Caruso et al.,2013; Heintz and Mair,2014)۔ حال ہی میں، شواہد کی کئی سطروں نے یہ ثابت کیا ہے کہ آنتوں کے آئی ایم ڈی سگنلنگ ہومیوسٹاسس کو محفوظ رکھنے سے آئی ایس سی اور پیشگی خلیوں کے زیادہ پھیلاؤ کو روک کر اور عمر سے شروع ہونے والے آنتوں کے اپکلا ناکارہ ہونے میں تاخیر کر کے آنتوں کی سالمیت کو بہتر بناتا ہے، جس کے نتیجے میں آرگنزم کی صحت میں مثبت کردار ہوتا ہے۔ ، 2015؛ Guo et al.، 2014)۔ ڈروسوفلا میں، ایک مختصر عمر کا آنتوں کے اپکلا رکاوٹ کے ناکارہ ہونے کے ساتھ گہرا تعلق ہے، اور عمر بڑھنے کے دوران اس رکاوٹ کی سالمیت کی نشوونما کے نتیجے میں عمر میں توسیع ہوتی ہے (Clark et al.,2015; Guoet al.,2014; Jet al., 2019)۔ اس طرح، ہم نے اس بات کا تعین کرنے کی کوشش کی کہ آیا TFs Smurf پرکھ کو انجام دے کر آنت کی سالمیت کو تبدیل کرتے ہیں، ایک طریقہ جو پہلے بیان کیا جا چکا ہے (Clark et al., 2015; Rera et al., 2011)۔ جیسا کہ شکل 2A میں دکھایا گیا ہے، تجربہ شدہ پھلوں کی مکھیوں میں جن میں نیلے رنگ کو ہضم کے راستے تک محدود رکھا گیا تھا اسے نان اسمرف (شکل 2A میں بائیں پینل) کہا جاتا ہے۔ اگر نیلے رنگ کا مشاہدہ کیا گیا۔

شکل 3. جاری

(EG) بالترتیب 10 دن، 30 دن، 40 دن اور 50 دن کی عمر میں 2.5 mg/ml TFs کے ساتھ یا TFs کے بغیر بنیادی طور پر کھلایا جانے والی خواتین w1118 فائلوں سے ہمت کو الگ تھلگ کیا گیا تھا۔ کل آر این اے نکالا گیا اور آر ٹی پی سی آر کے تجزیوں کا نشانہ بنایا گیا۔ diptericin (F)، attacin (F) اور cecropin A1(G) کے mRNA اظہار کی سطحوں کا تجزیہ کیا گیا اور دکھایا گیا۔ EG میں، ڈیٹا کا تجزیہ دو دم والے طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کے ذریعے کیا جاتا ہے اور اسے بطور مطلب دکھایا جاتا ہے ± SEM.NS، اہم نہیں، *p<><><0.001. see="" also="" figure="">

پیٹ میں آنتوں سے باہر نکلتے ہوئے، میزبانوں کو سمرف (شکل 2A میں دائیں پینل) کے طور پر شمار کیا گیا۔ سابقہ ​​نتائج سے مطابقت رکھتے ہوئے (Clark et al.,2015)، Smurf کا تناسب عمر بڑھنے کے دوران بتدریج بڑھتا گیا (شکل 2B)۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ TFs سے کھلائے گئے گروپوں میں Smurf بالغوں کا تناسب دونوں خواتین میں عمر کے مطابق کنٹرول کے مقابلے میں بہت کم ہوا (8.2 فیصد سے 3.7 فیصد، 19.4 فیصد سے 15.6 فیصد، اور گروپوں کے لیے 35.4 فیصد سے 27.1 فیصد تک بالترتیب 30 دن، 40 دن، اور 50 دن کی عمر میں، Figure2B) اور مرد بالغ (2.7 فیصد سے 0.9 فیصد، 6.9 فیصد سے 0.9 فیصد، اور 30 ​​سال کی عمر میں 8.3 فیصد سے 2.7 فیصد تک دن، 40 دن، اور 50 دن، بالترتیب، شکل S2A)، جس سے ظاہر ہوتا ہے کہ TFs عمر رسیدہ پھلوں کی مکھیوں میں آنتوں کی رکاوٹ کے کام کو روک سکتے ہیں۔ قابل غور بات یہ ہے کہ ہم نے مردوں میں اسمرف فیصد کی بڑی کمی دیکھی ہے (30 دن، 40 دن اور 50 دن کی عمر میں بالترتیب 65.8 فیصد، 86.9 فیصد، اور 67.4 فیصد کم ہوئی)۔ -مماثل خواتین (بالترتیب 30 دن، 40 دن اور 50 دن کی عمر میں تقریباً 54.1 فیصد، 19.5 فیصد، اور 23.3 فیصد کی کمی)، اس کا مطلب یہ ہے کہ TFs نر مکھیوں میں آنتوں کے رساو کو کم کرنے میں بہتر کردار ادا کر سکتے ہیں۔

پچھلے مطالعات نے تجویز کیا ہے کہ عمر سے شروع ہونے والی آنتوں میں رکاوٹ کی خرابی کا تعلق اکثر گٹ مائکرو بائیوٹا (Clark et al.,2015; Guo et al.,2014) کے dysbiosis سے ہوتا ہے۔ اس طرح ، ہم نے TFs کی تکمیل کے بعد آنتوں کے کامنسل بیکٹیریل مرکب کی جانچ کی۔ ہم نے سب سے پہلے یونیورسل پرائمر کا استعمال کیا اور بیکٹیریل 16S rRNA جین کی سطح کو درست کرنے کے لیے مقداری PCR تجربات کیے ہیں۔ جیسا کہ شکل 2C میں دکھایا گیا ہے، عمر رسیدہ کٹوتیوں میں، TFs کے مداخلتی گروپوں سے بیکٹیریا کی کل آبادی میں کنٹرولز کے مقابلے میں زبردست کمی (تقریباً 45 فیصد -55 فیصد) دکھائی گئی، جو تجویز کرتی ہے کہ TFs کی تکمیل عمر بڑھنے کے دوران مائیکرو بائیوٹا کے پھیلاؤ کو روکتی ہے۔ . پھر، ہم نے TFs کے ساتھ غذائی ضمیمہ کی وجہ سے آنتوں کے مائکروبیل کمیونٹی میں ہونے والی تبدیلیوں کی تفصیل سے جانچ کرنے کے لیے میٹاجینومکس کا مظاہرہ کیا۔ جیسا کہ اعداد و شمار 2D-2F میں دکھایا گیا ہے، گاما پروٹو بیکٹیریا کا تناسب، جس کا پھیلاؤ آنتوں کی رکاوٹ (Clark et al., 2015) کے ساتھ قریبی تعلق پایا گیا تھا، ظاہر ہے کہ عمر رسیدہ آنتوں میں TFs کی تکمیل سے کمی واقع ہوئی تھی۔ تقریباً 7 فیصد کمی)، جس کا مطلب یہ ہے کہ TFs ڈروسوفلا میں عمر بڑھنے کے دوران گٹ مائکرو بایوٹا کے ہومیوسٹاسس میں مثبت کردار ادا کرتے ہیں۔

Theaflavins ڈروسوفلا میں آنتوں کے پھیلاؤ والے ہومیوسٹاسس کو بہتر بناتا ہے۔

We further examined the intestinal integrity of flies that were treated with or without TFs. First, we employed the widely-used P{Esg-Gal4}/P{Uasp-GFP};{Tub-Gal80*s}strain(referred to as esgts>GFP)، جس میں آنتوں کے اسٹیم سیلز (ISCs) اور پروجینیٹر سیلز کو GFP کے ساتھ لیبل لگایا گیا تھا۔ جیسا کہ اعداد و شمار 2G اور 2H میں دکھایا گیا ہے، 40 دن کی عمر میں TFs کے مداخلتی گروپوں میں GFP-مثبت خلیوں کی تعداد (20 ہمتوں کو شمار کیا گیا تھا) عمر کے موافق کنٹرولز (تقریبا 47.6 فیصد) کے مقابلے میں بہت کم (تقریباً 29.7 فیصد) تھا۔ 19 ہمتوں کو شمار کیا گیا تھا)، تجویز کرتا ہے کہ TFs ISCs کے عمر کے آغاز سے زیادہ پھیلاؤ کو روک سکتا ہے۔ مزید برآں، ہم نے فاسفو ہسٹون 3 (پی ایچ 3) کے خلاف اینٹی باڈیز کا استعمال کرتے ہوئے امیونوسٹیننگ تجربات کیے، جو گٹ ٹشوز میں مائٹوٹک خلیوں کے لیے ایک مخصوص مارکر ہے۔ ہم نے کم پی ایچ3-مثبت خلیات کا مشاہدہ کیا جو عمر رسیدہ TFs سے ضمیمہ شدہ بالغوں کی آنتوں میں تھے (اس کی اوسط تعداد 20.6 تھی) ان کے مقابلے میں کنٹرولز میں سے (وسطی تعداد 39.5 تھی، شکل 2)۔ ایک ساتھ مل کر، ہمارے نتائج بتاتے ہیں کہ TFs کے ساتھ غذائی ضمیمہ آنتوں کے پھیلاؤ والے ہومیوسٹاسس کو بہتر بناتا ہے اور عمر سے شروع ہونے والے مائکرو بائیوٹا ڈیسپلاسیا کو روکتا ہے، اس طرح ڈروسوفلا میں عمر بڑھنے میں تاخیر ہوتی ہے۔

Theaflavins منفی طور پر آنتوں کے Imd سگنلز کو ماڈیول کرتے ہیں۔

ان بنیادی مالیکیولر میکانزم کو دریافت کرنے کے لیے جن کے ذریعے TFs مثبت طور پر ڈروسوفلا گٹ ہومیوسٹاسس میں حصہ ڈالتے ہیں، ہم نے TFs کے ساتھ یا اس کے بغیر علاج کیے جانے والے خواتین w1118 بالغوں کے عمر سے مماثل آنتوں کے نمونوں کا استعمال کرتے ہوئے RNA-seq تجزیہ کیا۔ ٹکڑے فی کلو بیس فی ملین (FPKM) کے تجزیوں نے تجویز کیا کہ مجموعی طور پر جین کے اظہار کے نمونے دو تجرباتی گروپوں (شکل 3A) کے درمیان ایک جیسے تھے۔ مزید تفریق اظہار کے تجزیے نے، تاہم، مجموعی طور پر 229 مختلف جینوں کی نشاندہی کی، جن میں سے 99 کو اپ ریگولیٹ کیا گیا اور 126 کو کم کیا گیا (شکل 3B)۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ ان جینوں کے جین آنٹولوجی کے تجزیے سے یہ بات سامنے آئی کہ مدافعتی ردعمل کا راستہ TFs (شکل 3C) کے ساتھ غذائی ضمیمہ کے ذریعہ بہت زیادہ بدل گیا ہے۔

ڈروسوفلا میں، پیدائشی مدافعتی سگنلنگ راستے عمر کے آغاز کے گٹ ہومیوسٹاسس اور لمبی عمر کو منظم کرنے میں ایک غالب کردار ادا کرنے کے لئے ثابت ہوئے ہیں (کلارک ایٹ ال، 2015؛ گوو ایٹ ال، 2014)۔ اس کے بعد ہم نے پیدائشی مدافعتی اشاروں کے بہاو میں اینٹی مائکروبیل پیپٹائڈس (AMPs) کے اظہار کے نمونوں کی جانچ کرنے پر توجہ دی۔ جیسے دکھایا گیا ہے

تصویر 4. جاری

(D) پیوریفائیڈ آئی ایم ڈی پروٹین کو 5 منٹ تک کمرے کے درجہ حرارت پر TFs (بالترتیب 50 uM، 100 uM، اور 200 uM) کی مختلف تعداد کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد نمونوں کو اشارہ شدہ طول موج (430 nm پر اتیجیت، 5 nm کی سلٹ چوڑائی کے ساتھ 450 nm سے 550 nm تک اخراج) کا استعمال کرتے ہوئے فلوروسینس اخراج سپیکٹرم تجزیہ کا نشانہ بنایا گیا۔ TFs کے بغیر ایک نمونہ بیس لائن کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔

（E and F）Lysates of guts from NP11>Myc-Imd مکھیوں کو تیار کیا گیا تھا اور TFs (100μM) کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت پر 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ SDD-AGE （E میں اوپری پینل) اور SDS-PAGE (E میں نچلا پینل) Assays Imd پروٹین کے مجموعوں کا تجزیہ کرنے کے لئے انجام دیا گیا تھا۔ Tubulin لوڈنگ کنٹرول کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا.cistanchمختلف نمونوں میں آئی ایم ڈی کنڈینسیٹس کی مقدار درست کرنے کے لیے کثافت کا تجزیہ کیا گیا، اور نتائج (F) میں دکھائے گئے۔ (G) TFs نمونے کا ایک نمائندہ کرومیٹوگرام۔

（H اور I） Purified Flag-Imd پروٹین TFs, TF1, TF2a, TF2b، یا TF3（ہر نمونے کے لئے 100 μM） یا بفر کے برابر حجم کے ساتھ （کنٹرول） کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت پر 30 منٹ تک اشارہ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد نمونوں کو SDD-AGE (H میں اوپری پینل) اور SDS-PAGE (H میں نچلا پینل) Assys سے مشروط کیا گیا تاکہ Imd کے جمع کرنے کے نمونوں کا تعین کیا جاسکے۔ مختلف نمونوں میں آئی ایم ڈی کنڈینسیٹس کی مقدار درست کرنے کے لیے کثافت کا تجزیہ کیا گیا اور () میں دکھایا گیا۔ C، F، اور I میں، ڈیٹا کا تجزیہ دو دم والے طالب علم کے ٹیسٹ کے ذریعے کیا جاتا ہے اور اسے بطور ذریعہ دکھایا جاتا ہے ± SEM۔***p< 0.001.="" see="" also="" figure="">

شکل 3D میں، مدافعتی کمی (Imd) کے راستے پر چلنے والے AMP جین، بشمول diptericin A (DptA)، dip-tericin B(DptB)، attacin A(AttA)، cecropin A1 (CecA1)، cecropin A2 (CecA2)، اور cecropin C (Cece)، کنٹرول گروپوں کے مقابلے TFs سے علاج شدہ گروپوں میں نمایاں طور پر کم ہوا (بالترتیب 39.4 فیصد، 72.3 فیصد، 10.5 فیصد، 86.5 فیصد، 99.8 فیصد، اور 36.1 فیصد)۔ RNA-seq تجزیہ سے حاصل کردہ نتائج کی مزید تصدیق کرنے کے لیے، ہم نے ایک مقداری ریورس ٹرانسکرپشن-پولیمریز چین ری ایکشن (gRT-PCR) کیا تاکہ ڈروسوفلا گٹ کے نمونوں میں آئی ایم ڈی سے متعلق AMP جینز کے متعلقہ اظہار کی سطح کو چار مختلف عمر کے مقامات پر حاصل کیا جا سکے۔ بشمول 10 دن، 30 دن، 40 دن، اور 50 دن۔ جیسا کہ اعداد و شمار 3E-3G میں دکھایا گیا ہے، کچھ جینوں کے mRNA اظہار کی سطح، بشمول diptericin، attacin، اور cecropin A1، TFs کے علاج میں نمایاں طور پر (تقریباً 35.9 فیصد -66.6 فیصد) کم ہوئے بوڑھے ہمت. اجتماعی طور پر، ہمارے اعداد و شمار نے انکشاف کیا کہ TFs نے عمر بڑھنے کے دوران ڈروسوفلا گٹ سیلز میں Imd سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کرنے کا ممکنہ طور پر مخالف کیا۔

Theaflavins Imd پاتھ وے کے ٹرانسکرپشنی ریگولیشن یا Imd کے ہر جگہ استعمال کرنے کے لیے قابل استعمال ہیں۔

ہم نے TFs اور Imd کے مابین ایسوسی ایشن کی جانچ کرنے کی کوشش کی اور سطح پلازمون گونج (SPR) پرکھ جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے (Lan et al., 2020)۔ جیسا کہ شکل 4A میں دکھایا گیا ہے۔ TFs نے پیوریفائیڈ آئی ایم ڈی پروٹین کے ساتھ اعتدال پسند پابند وابستگی کی نمائش کی جس کا تخمینہ Kp 8.078 uM ہے۔ پھر ہم اس بات کا تعین کرتے ہیں کہ TFs آنتوں کے Imd سگنلنگ پاتھ وے کو کس طرح کنٹرول کرتے ہیں۔ RNA-seq ڈیٹا سے ٹرانسکرپٹوم تجزیہ کے نتائج کی بنیاد پر، ہم نے پایا کہ Imd سگنلنگ پاتھ وے میں کلیدی ریگولیٹری عوامل کے اظہار کی سطح، جیسے PGRP-LC، Imd، اور Relish، کو TFs کے علاج سے مشکل سے تبدیل کیا گیا تھا (شکل S3A )۔ ہم نے مزید مکھیوں سے گٹ کے نمونے اکٹھے کیے جن کو مختلف عمروں میں TFs کے ساتھ یا اس کے بغیر غذائی ضمیمہ کا نشانہ بنایا گیا تھا اور خاص طور پر ان جینوں کے اظہار کے نمونوں کا پتہ لگانے کے لیے qRT-PCR تجربات کیے تھے۔ جیسا کہ شکل S3B میں دکھایا گیا ہے، بعض جینز کی mRNA لیولز، بشمول effete، faded، tak1، pgrp-Ica، uev1a، bendless، relish، imd، pgrp-sc2، tab2، ird5 Kenny، اور diap2، کنٹرول گروپس کے درمیان ایک جیسے تھے۔ اور TFs کے مداخلتی گروپ، تجویز کرتے ہیں کہ TFs نقل کی سطح پر Imd سگنلز کو منظم کرنے میں ملوث نہیں ہیں۔

اگلا، ہم نے Imd ubiquitination پروفائلز کا جائزہ لیا کیونکہ پچھلے مطالعات نے تجویز کیا ہے کہ Imd کے ubigui-tination Imd پاتھ وے (Myllymaki et al.,2014; Zhou et al.,2005) میں بہاو سگنل کی منتقلی کے لیے ضروری ہے۔ ہم نے سب سے پہلے ان وٹرو E1 شفٹنگ پرکھ کا مظاہرہ کیا اور پایا کہ TFs کے ساتھ علاج E1 اور ubiquitin کے انزیمیٹک رد عمل پر کوئی واضح اثر نہیں رکھتا ہے تاکہ کنججیٹڈ E1/Ub (فگر S4A) بن سکے۔ مزید یہ کہ ہم نے ڈروسوفلا S2 خلیوں کو پلازمیڈ کے ساتھ منتقل کیا جس میں HA-tagged Ub کے ساتھ فلیگ ٹیگ شدہ Imd کا اظہار کیا گیا اور پھر TFs کے ساتھ یا اس کے بغیر خلیوں کا علاج کیا۔ مزید ہر جگہ کے اسیس نے تجویز کیا کہ TFs کی تکمیل نے مہذب خلیوں (اعداد و شمار S4B اور S4C) میں ہر جگہ آئی ایم ڈی کی سطح کو بمشکل متاثر کیا۔ Vivo میں TFs اور Imd ubiquitination کے درمیان تعلقات کا تعین کرنے کے لیے، ہم نے ٹرانسجینک فلائی P {NP1-Gal4}/P{Uasp-Myc-Imd};P{Tub-Gal80*} کا استعمال کیا (جسے NP1* کہا جاتا ہے۔ s > Myc-Imd)، جس میں ایک Myc-tagged Imd پروٹین کو گٹ سیلز (Figure S4D) میں بہت زیادہ ظاہر کیا گیا تھا۔ ہمارے ہر جگہ کے تجربات سے پتہ چلتا ہے کہ TFs کے ساتھ غذائی ضمیمہ گٹ ٹشوز (اعداد و شمار S4D اور S4E) میں آئی ایم ڈی کی ہر جگہ کو ماڈیول کرنے کے لئے قابل عمل تھا۔ ایک ساتھ مل کر، ہمارے نتائج نے اشارہ کیا کہ TFs منفی طور پر ڈروسوفلا آئی ایم ڈی سگنلز پر اثرانداز نہ ہو کر آئی ایم ڈی کے ہر جگہ ہونے کے انداز کو متاثر کرتے ہیں۔

Theaflavins Imd کنڈینسیٹ اسمبلی کو روکتے ہیں۔

ایک حالیہ مطالعہ نے تجویز کیا ہے کہ آئی ایم ڈی کے راستے میں بہاو والے جینوں کو چالو کرنے کے لئے آئی ایم ڈی کی جمع ضروری ہے (کلیینو ایٹ ال۔، 2017)۔ پھر ہم نے جانچنے کی کوشش کی کہ آیا TFs کے عمل کو منظم کرتے ہیں۔

شکل 5. جاری

(F اور G)Female w18 (جسے imd plus/plus کہا جاتا ہے)، imd' heterozygous اور homozygous mutants (جسے بالترتیب imd plus /- اور imd-/- کہا جاتا ہے) معیاری ڈروسوفلا فوڈز پالے گئے (جسے بیسل کہا جاتا ہے) یا 2.5 mg/mL (TFs کے طور پر کہا جاتا ہے) کے ساتھ غذائی ضمیمہ اور اس کے بعد عمر بھر پرکھ کی بقا کے منحنی خطوط (F) اور اوسط لمبی عمر (G) کا تجزیہ کیا گیا اور دکھایا گیا۔

میں اور ایف، لاگ رینک ٹیسٹ شماریاتی تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ BE، اور، میں دو دم والے طالب علم کا t-ٹیسٹ شماریاتی تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا، اور ڈیٹا کو ± SEM کا مطلب ہے۔ NS، اہم نہیں، *p<0.05, **p="" <="" 0.01,=""><0.001. see="" also="" figure="">

آئی ایم ڈی کی مجموعی تشکیل۔ سب سے پہلے، ہم نے مائک ٹیگ والے آئی ایم ڈی پروٹین کو کلچرڈ S2 سیلوں سے پاک کیا اور TFs (شکل 4B) کے مختلف ارتکاز کے ساتھ پروٹین کو انکیوبیٹ کیا۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ، ہم نے پایا کہ TFs نے نمایاں طور پر Imd کی جمع کو روکا (81.7 فیصد -89.7 فیصد، اعداد و شمار 4B اور 4C)، جیسا کہ ہمارے سیمیڈینیچرنگ ڈٹرجنٹ ایگرز جیل الیکٹروفورسس (SDD-AGE) اسسیس کے ذریعہ تجویز کیا گیا ہے۔ اس تلاش کی تصدیق کرنے کے لیے، ہم نے مزید تھیوفلاوین-ٹی بائنڈنگ اسیسز کیے اور مستقل نتائج حاصل کیے (شکل 4D)۔ آخر میں، ہم نے NP1ts > Myc-Imd ٹرانسجینک مکھیوں کو اٹھایا جو TFs کے ساتھ یا اس کے بغیر غذائی ضمیمہ کا نشانہ بنی تھیں اور معمر بالغوں سے گٹ کے نمونے اکٹھے کیے تھے۔ SDD-AGE تجربات نے تجویز کیا کہ آنتوں کے خلیوں میں TFs کے ذریعہ Imd کی جمع کو بہت حد تک کم کیا گیا تھا (16.7 فیصد -22 فیصد، اعداد و شمار 4E، اور 4F)۔

اس بات کا تعین کرنے کے لیے کہ TFs کس طرح Imd کنڈینسیٹ اسمبلی کو کنٹرول کرنے میں اپنا کردار ادا کرتے ہیں، ہم نے TFs کو HPLCanal-ysis سے مشروط کیا اور پتہ چلا کہ ان میں بنیادی طور پر چار قسم کے monomers (Figure 4G) ہیں، یعنی تھیفلاوین (TF1)، تھیافلاوین 3-O-gallate ( TF2a)، theaflavin 3'-O-gallate (TF2b)، اور theaflavin 3,3'-di-O-gallate (TF3)، جو پچھلی رپورٹس سے مطابقت رکھتے تھے (Li et al.,2013; Takemoto and Takemoto,2018) . پھر، ہم نے ان میں سے ہر ایک کیمیکل کو پیوریفائیڈ Imdprotein کے ساتھ لگایا اور SDD-AGE تجربات کئے۔ جیسا کہ اعداد و شمار 4H اور 4l میں دکھایا گیا ہے، ان تمام TFmonomers کے علاج کے نتیجے میں نمایاں کمی واقع ہوئی (بالترتیب 59.5 فیصد، 60.9 فیصد، 58.4 فیصد .58.2 فیصد اور 55.8 فیصد TFs، TF1، TF2a، TF2b، اور TF3 میں بالترتیب) آئی ایم ڈی کی مجموعی سطحیں۔ اجتماعی طور پر، ہمارے نتائج نے تجویز کیا کہ TFs ڈروسوفلا آئی ایم ڈی سگنلنگ پاتھ وے کو ممکنہ طور پر آئی ایم ڈی کنڈینسیٹس کے رویے کو کنٹرول کرکے منفی طور پر منظم کرتے ہیں۔

Theaflavins IMD پر منحصر انداز میں ڈروسوفلا کی عمر بڑھاتے ہیں۔

To examine whether TFs prolong Drosophila lifespan depending on their regulatory role in Imd, we specifically knocked down Imd in gut tissues using the transgenic flies P{NP1-gal4)PITub-gal80*}/P{Uasp-imd-IR(KK)} (referred to as Imd RNAi). As shown in Figures 5A and 5B, dietary supplementation of TFs extended the lifespan of controls (elevation of nearly 7.2 days in the mean lifespan), whereas prevention of Imd expression in guts apparently reversed the lifespan extension caused by TFs. Consistent results were obtained when we utilized male Imd RNAi and control flies to perform lifespan assays (Figures S5A and S5B). Further qRT-PCR assays showed that the mRNA expression levels of AMP genes at ages of 10 days, 30 days, 40 days, and 50 days, including diptericin, attacin, and cecropin A1.hardly changed in the gut tissues of Imd RNAi flies(Figures 5C-5E), whereas additional TFs caused reductions of 31%-72.3% in mRNA abundances of these genes in samples from control groups. To confirm these results from Imd RNAi flies, we first performed lifespan assays using w18(control, referred to as imd+/+), imd' heterozygous (referred to as imd+/-), and homozygous(referred as imd-/-)mutant flies. We found that TFs addition extended lifespan and increased mean life longevity of imd+/-flies (elevation of nearly 6.2 days, Figures 5F and 5G). However, this lifespan extension effect by TFs was almost abolished in imd-/-flies (Figures 5F and 5G). Next, we performed lifespan assays utilizing Relish RNAi(NP1's>Relish RNAi and control(NP1ts>پلس) مکھی۔ کیونکہ Relish اہم ٹرانسکرپشن عنصر ہے جو Imd-downstream AMP جین اظہار (Myllymaki et al.,2014) کے لیے ذمہ دار ہے۔ جیسا کہ Fiqres S5C اور S5D میں دکھایا گیا ہے۔ TFs کے غذائی اضافے نے واضح طور پر کنٹرول مکھیوں کی لمبی عمر کو بڑھایا، اور ریلش RNAi مکھیوں میں عمر میں اس توسیع کو نمایاں طور پر روکا گیا۔ اجتماعی طور پر، ہمارے اعداد و شمار نے اشارہ کیا کہ TFs کی غذائی ضمیمہ ممکنہ طور پر آنتوں کے آئی ایم ڈی سگنلز پر منحصر ڈروسوفلا کی عمر میں مثبت کردار ادا کرتی ہے۔

یہ دیکھنے کے لیے کہ آیا TFstill کے ذریعے عمر کی توسیع محوری پس منظر میں ہوتی ہے، ہم نے axenic حالات کے تحت w1118 خواتین کا استعمال کرتے ہوئے عمر بھر کی جانچ کی۔ جیسا کہ اعداد و شمار S5E اور S5F میں دکھایا گیا ہے، TFs کے مختلف ارتکاز (1 mg/mL اور 2.5 mg/mL) کے اضافے نے شرح اموات کے تناسب کو مشکل سے متاثر کیا ہے اور w18 بالغوں میں عمر کی لمبی عمر ہے۔ چونکہ axenic پرورش کے حالات بڑے پیمانے پر مائکرو بائیوٹا کو روک سکتے ہیں، اس طرح کٹوتیوں میں Imd سگنلز کو محدود کرتے ہیں (Clarke al., 2015)، ہمارے اعداد و شمار نے تجویز کیا کہ TFs ڈروسوفلا کی عمر کو طول دیتے ہیں جو گٹ مائکرو بائیوٹا ریگولیٹڈ فطری مدافعتی سگنلز کی ماڈیولیشن کے ذریعے ہوسکتے ہیں۔

تصویر 6. تھیافلاوین سی ڈی-1 چوہوں میں ڈی ایس ایس سے متاثرہ کولائٹس کو ختم کرتے ہیں۔

(A) TFs کے علاج نے CD-1 چوہوں کے مختلف گروپوں میں پانی کی کھپت کو متاثر نہیں کیا۔

(BD) TFs کے مختلف ارتکاز (1 mg/mL، 2.5 mg/mL، اور 5mg/mL، بالترتیب) کی گیویج انتظامیہ نے CD-1 چوہوں میں DSS کی وجہ سے بڑی آنت کے چھوٹے ہونے اور تلی کے بڑھنے کو بہتر کیا۔ نمائندہ تصاویر (B) اور بڑی آنت (C) اور تللی (D) کے شماریاتی تجزیے دکھائے گئے۔ (E) TFs کے مختلف ارتکاز (1 mg/mL، 2.5 mg/ml، اور 5mg/mL، بالترتیب) کا انتظام CD-1 چوہوں میں DSS کے ذریعے گٹ کے رساو کو روکتا ہے۔ (F اور G) کالون چوہوں کے اشارے شدہ گروپوں سے جمع کیے گئے تھے۔ TNFa(F) اور IL-6 (G) کے mRNA اظہار کی سطحوں کا پتہ لگانے کے لیے کل RNA کو نکالا گیا اور qRT-PCR اسسیس کا نشانہ بنایا گیا۔

(HL) چوہوں کے مختلف گروہوں کے کالون کو طولانی طور پر جمع کیا گیا تھا اور HE داغدار اسیس کا نشانہ بنایا گیا تھا۔ نمونوں کی جانچ مائیکروسکوپی کے ذریعے کی گئی، اور اشارے شدہ نمونوں (HL) کی نمائندہ تصاویر حاصل کی گئیں اور دکھائی گئیں۔ اسکیل بارز، 40 μm۔ (MQ') SEM تصاویر جو مختلف اشارے شدہ نمونوں سے بڑی آنت کے مائیکرو ٹرائیکومز کو دکھاتی ہیں۔ اسکیل بارز، 50 um (MQ) اور 4 um (M'-Q')۔

CG میں، ڈیٹا کا تجزیہ دو دم والے طالب علم کے ٹیسٹ کے ذریعے کیا جاتا ہے اور اسے بطور مطلب دکھایا جاتا ہے ± SEM.NS، اہم نہیں، *p<><><0.001. see="" also="" figure="">

Theaflavins CD-1 چوہوں میں DSS سے متاثرہ کولائٹس کو ختم کرتے ہیں۔

ممالیہ جانوروں میں آنتوں کے ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھنے میں TFs کے ممکنہ کردار کی مزید چھان بین کرنے کے لیے، CD-1 چوہوں کو ڈیکسٹران سلفیٹ سوڈیم (DSS) کے ذریعے کولائٹس پیدا کرنے کے لیے استعمال کیا گیا۔ چوہوں کو چار ہفتوں تک کنٹرول کے طور پر TFs (1 g/L، 2.5 g/L، یا 5 a/L) یا پانی کی مختلف ارتکاز کا انتظام کیا گیا، اس کے بعد 7 دن تک پینے کے پانی میں 2 فیصد DSS کے ساتھ علاج کیا گیا۔ یہ دیکھنے کے لیے کہ آیا TFs چوہوں کے مختلف گروپوں کے DSSacross کے پینے کی مقدار کو متاثر کرتے ہیں، ہم نے ہر روز چوہوں کے پینے کی نگرانی کی۔ جیسا کہ Fiqre6A میں دکھایا گیا ہے، TFs کا علاج DSS-حوصلہ افزائی کولائٹس چوہوں میں مشروبات کی کھپت کو متاثر کرنے کے لیے قابل عمل ہے، DSS سے علاج شدہ چوہوں نے اسہال اور/یا ہیماٹوچیزیا کے ساتھ کولائٹس سنڈروم پیش کیا، جسے خوراک پر منحصر TFs کے علاج سے روکا گیا تھا (اعداد و شمار S6A-S6E)۔cistanche آسٹریلیامزید برآں، TFs کے ساتھ مداخلت نے DSS کی وجہ سے بڑی آنت کی لمبائی میں کمی کو بچایا اور تللی کی توسیع کو بہتر بنایا (اعداد و شمار 6B-6D)۔

اس کے بعد ہم نے ان چوہوں کے آنتوں کی رکاوٹ کے کام کی جانچ کرنے کے لیے dextran-4000-FITC (FITC-DX) کا استعمال کیا۔ جیسا کہ شکل 6E میں دکھایا گیا ہے، DSS کے زیر علاج گروپوں کے چوہوں نے خون کے نمونوں میں FITC-DX کی زیادہ مقدار ظاہر کی، جو کہ ان جانوروں میں گٹ کے رساو کو ظاہر کرتی ہے، تاہم، TFs کے ساتھ مداخلت نے FITC-DX کو ہاضمہ کے اعضاء سے لے جانے سے نمایاں طور پر روک دیا۔ گردشی نظام (56.1 فیصد -77.5 فیصد کی کمی، شکل 6E)۔ خاص طور پر، TFs کی انتظامیہ نے عام حالات میں چوہوں کی گٹ پارگمیتا کو تبدیل نہیں کیا (شکل S6F)۔ چونکہ سوزش ماؤس ماڈل کی کولائٹس کی نشوونما میں ایک اہم کردار ادا کرتی ہے، ہم نے مزید qRT-PCR تجربات کیے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ TFs کے علاج نے DSS سے علاج شدہ چوہوں کی آنتوں میں IL-6 اور TNF کے تاثرات کو نمایاں طور پر کم کیا (اعداد و شمار 6F اور 6G)۔

بڑی آنت میں پیتھولوجیکل تبدیلیوں کا مزید تجزیہ کرنے کے لئے، ہم نے ہیماتوکسیلین-ایوسین (ایچ ای) کے داغ لگانے والے اسسیس کو انجام دیا۔ جیسا کہ اعداد و شمار6H-6L اور S6G-S6J میں دکھایا گیا ہے، DSS کی حوصلہ افزائی سے ہونے والے شدید اپکلا نقصان کو خوراک پر منحصر انداز میں TFs کے علاج سے نمایاں طور پر بہتر کیا گیا تھا۔ ان آنتوں کے نمونوں کی سکیننگ الیکٹران مائکروسکوپی امیجنگ نے مزید مستقل نتائج فراہم کیے (اعداد و شمار 6M-6Q' اور S6K-S6N')۔ ایک ساتھ مل کر، ہمارے نتائج نے اشارہ کیا کہ TFs کیڑوں اور ستنداریوں دونوں میں آنتوں کی رکاوٹ کے کام کی حفاظت میں فائدہ مند کردار ادا کرتے ہیں۔

بحث

اس مطالعے میں، ہم نے آنتوں کے ہومیوسٹاسس اور لمبی عمر اور بنیادی مالیکیولر میکانزم کو ماڈیول کرنے میں TFs کے جسمانی افعال کی چھان بین کی۔ ہم نے دکھایا کہ TFs کے ساتھ غذائی ضمیمہ آنتوں کے مائکرو بائیوٹا کی عمر سے شروع ہونے والے dysbiosis کی روک تھام اور گٹ اپیتھیلیل dysfunction میں تاخیر میں مثبت کردار ادا کرتا ہے، اس طرح ڈروسوفلا کی عمر کو طول دیتا ہے۔ ہمارے ان وٹرو اور ان ویوو میکانسٹک اسٹڈیز سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ TFs ممکنہ طور پر Imd کے اتحاد کو روک کر Imd سگنلنگ پاتھ وے کو کنٹرول کرنے میں منفی کردار ادا کرتے ہیں۔ مزید برآں، ہم نے پایا کہ CD-1 چوہوں میں TFs کی تکمیل کے ذریعے DSS سے متاثرہ کولائٹس کو مؤثر طریقے سے ختم کیا جا سکتا ہے۔ ہمارے نتائج اس تصور کی تائید کرتے ہیں کہ TFs invertebrates اور vertebrates دونوں میں آنتوں کے ہومیوسٹاسس میں فائدہ مند تعاون کرتے ہیں۔

Theaflavins کے ساتھ غذائی ضمیمہ ڈروسوفلا کی عمر کو طول دیتا ہے۔

چائے کا استعمال دنیا بھر میں مقبول ہے اور پانی کے استعمال کے بعد دوسرے نمبر پر ہے (روتھنبرگ اور ژانگ، 2019)۔ متعدد مطالعات نے جسمانی افعال پر اکثر تجرباتی اور طبی دونوں طریقوں سے توجہ مرکوز کی ہے (کیمرون ایٹ ال، 2008؛ نیو ایٹ ال، 2013؛ پینگ ایٹ ال، 2009؛ روتھنبرگ اور ژانگ، 2019؛ اسپنڈلریٹ ال، 2013؛ ٹیکموٹو اور Takemoto,2018; Unno et al.,2020;Zhou et al.,2020. یہ بڑے پیمانے پر دکھایا گیا ہے کہ چائے لپڈ کی سطح کو کم کرکے اور موٹاپا مخالف اثرات کے ذریعے صحت کو فائدہ پہنچاتی ہے، اور چائے میں اہم فعال مرکبات کیٹیچنز ہیں، خاص طور پر epigallocatechin gallate (EGCG)(Abbas and Wink,2009; Modernelli et al.,2015; Niu et al.,2013; Wagner et al.,2015; Xiong et al.,2018)۔ پچھلے مطالعات نے بھی اشارہ کیا ہے کہ سبز چائے اور کالی چائے پھلوں کی مکھیوں (Site al., 2011; Wagner et al., 2015)، کیڑے (Fei et al., 2017; Xiong et al., 2018)، اور چوہوں (Imran et al. .,2018; Niu etal.2013) اور اہم ریگولیٹری میکانزم EGCG کے ذریعے ROSsignals کی ماڈیولیشن کے ذریعے آکسیڈیٹیو تناؤ کی مؤثر روک تھام ہے۔cistanche فوائد،تاہم، آیا TFs، کالی چائے میں خصوصیت والے "سنہری" مرکبات کے طور پر، بڑھاپے اور عمر کو کنٹرول کرنے میں کردار ادا کرتے ہیں، یہ کافی حد تک نامعلوم ہے۔ یہ مطالعہ زبردست ثبوت فراہم کرتا ہے جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ کھانے کی مقدار کو متاثر کرنے کے لیے TFs کی مداخلت ناگزیر ہے، اور خوراک کے ذریعے TFs کا طویل مدتی استعمال نر اور مادہ دونوں پھلوں کی مکھیوں کی عمر کو نمایاں طور پر بڑھاتا ہے۔ یہ نتائج ممالیہ کی لمبی عمر میں TFs کے افعال پر مزید مطالعات کے لئے رہنما خطوط فراہم کرتے ہیں۔

Theaflavins عمر کے آغاز سے شروع ہونے والے مائکرو بائیوٹا dysbiosis کو بہتر بناتے ہیں اور آنتوں کے ہومیوسٹاسس کو فروغ دیتے ہیں proliferative homeostasis اور regenerative صلاحیت کا ترقی پسند عدم توازن بڑھاپے اور عمر سے شروع ہونے والی بیماریوں کی علامت ہے (Clark et al. et al. 2012)۔ دائمی سوزش ہومیوسٹاسس کے نقصان اور عمر بڑھنے والے جانداروں میں کینسر کے بڑھتے ہوئے واقعات سے وابستہ ہے (بارٹکے ایٹ ال۔ یہ خاص طور پر بیریئر اپیتھیلیا میں اہم ہے جیسے آنتوں کے اپکلا (Guo et al.,2014; Maynard and Weinkove,2018)۔ عمر بڑھنے والی آنت میں عمر سے متعلق ڈیسپلیسیا کی نشوونما کے ماڈل کے ساتھ، ہم نے یہ ظاہر کیا کہ عمر رسیدہ رکاوٹ ایپیٹیلیا میں میزبان کامنسل تعامل کو بہتر بنانا صحت اور عمر کو فروغ دے سکتا ہے۔ ہم نے عمر بڑھنے کے دوران آنتوں کے فنکشن اور مائکرو بائیوٹا کی حرکیات کی جانچ کرنے کے لئے متعدد غیر حملہ آور طریقوں کا استعمال کیا۔ سب سے پہلے، Smurf پرکھ نے عمر بڑھنے کے دوران اپکلا رکاوٹ کی خرابی کو منظم کرنے میں TFs کے مثبت کردار کی نشاندہی کی۔ پھر، متعدد ٹرانسجینک مکھیوں کا استعمال کرتے ہوئے امیونوسٹیننگ پرکھ نے انکشاف کیا کہ TFs نے ISCs کے زیادہ پھیلاؤ اور مختلف خلیوں کے کاروبار میں تاخیر کی۔ آخر میں، مائکروبیوم کی ترتیب نے تجویز کیا کہ TFs آنتوں کے کامنسل مائکرو فلورا کی عمر کے آغاز کی توسیع کو کم کرتے ہیں۔ ان نتائج نے سختی سے اشارہ کیا کہ TFs گٹ ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھ کر میزبان کی عمر بڑھنے کے عمل میں تاخیر میں کلیدی کردار ادا کرتے ہیں۔

Theaflavins Imd سگنلنگ کو منفی طور پر ریگولیٹ کرکے گٹ میں ضرورت سے زیادہ مدافعتی ردعمل کو کم کرتے ہیں۔

یہ تجویز کیا گیا ہے کہ گٹ کے مدافعتی فنکشن اور مائکرو بائیوٹا کے درمیان نازک توازن کو برقرار رکھنا ہوگا تاکہ بیریئر ایپیتھیلیا کے طویل مدتی ہومیوسٹاسس کو یقینی بنایا جاسکے (Guo et al.,2014; Maynard and Weinkove, 2018)۔ پچھلے مطالعات میں یہ بھی دکھایا گیا ہے کہ آنتوں میں دائمی ضرورت سے زیادہ سوزش رکاوٹ کے اپیتھیلیا میں عمر سے متعلقہ dysfunction سے وابستہ ہے اور یہ عمر بڑھنے کی علامت ہے (Clark et al.,2015; Guo et al., 2014; Ji et al.,2019) . اس طرح، اس طرح کے اپیتھیلیا میں پیدائشی مدافعتی ہومیوسٹاسس کو محفوظ رکھتے ہوئے صحت مند کامنسل آبادی کو برقرار رکھنا صحت اور لمبی عمر کو فروغ دینے کے لیے ایک امید افزا نقطہ نظر ہے جو TFs عمر بڑھنے میں تاخیر کرتی ہے، ہم نے TFs کے علاج کے ساتھ یا اس کے بغیر کٹی ہوئی آنتوں کا استعمال کرتے ہوئے RNA-seq تجزیہ کیا۔ ہمارے اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ جنوں کا گروپ TFs سے علاج شدہ جانوروں کے مقابلے میں کنٹرول فروٹ فلائیز کی آنتوں میں بہت زیادہ ظاہر ہوتا ہے وہ "مدافعتی ردعمل" جین کے طور پر درجہ بندی شدہ جینوں سے افزودہ تھا۔ مزید بایو انفارمیٹک تجزیہ اور گیٹ-پی سی آر اسسیس نے انکشاف کیا کہ IMD سے متعلق AMP جینوں کے اظہار کو TFs کے غذائی اضافے سے ڈرامائی طور پر روکا گیا تھا۔ CD-1 ماؤس کے تجربات کے نتائج جو DSS کو استعمال کرتے ہوئے آنتوں میں غیر معمولی مدافعتی ردعمل پیدا کرتے ہیں اس تصور کی مزید تصدیق کرتے ہیں کہ TFs آنتوں کی سوزش کے خلاف محافظ کے طور پر کام کرتے ہیں۔

Theaflavins Imd کی amyloid اسمبلی کا تعین کرکے سگنلز کو دباتے ہیں۔

TFs کس طرح منفی طور پر Imd سگنلنگ پاتھ وے کو ریگولیٹ کرتے ہیں؟ ٹرانسکرپٹوم تجزیہ کے نتائج کی بنیاد پر، ہم نے پایا کہ TFs Imd سگنلنگ پاتھ وے میں کلیدی عوامل کے ٹرانسکرپشن ریگولیشن کے لیے قابل استعمال ہیں۔ دلچسپی سے، ہم نے ایس پی آر پرکھ کے ذریعہ پیوریفائیڈ آئی ایم ڈی پروٹین کے ساتھ TFs کی ظاہری پابند وابستگی کا مشاہدہ کیا، جس نے اس امکان کی تجویز پیش کی کہ TFs Imd پروٹین کے رویے یا اس کے بعد از ترجمہ ترمیمی عمل کو کنٹرول کرنے میں کردار ادا کر سکتے ہیں۔ پچھلے مطالعات نے آئی ایم ڈی سگنل کی منتقلی (کلیینو اور سلورمین، 2014؛ مائلیماکی ایٹ ال، 2014) میں ہر جگہ ہر جگہ کے ایک اہم کردار پر روشنی ڈالی ہے، اور آئی ایم ڈی ہر جگہ کی روک تھام کے نتیجے میں آئی ایم ڈی سگنلنگ کے گہرے بند ہونے کا نتیجہ ہوتا ہے (Myllymaki et al., 2014; وغیرہ، 2009)۔ تاہم، ہمارے ان وٹرو اور in vivoubiquitination Asses سے پتہ چلتا ہے کہ TFs شاید ہی Imd کے ubiquitination پیٹرن کو متاثر کرتے ہیں۔ ایک حالیہ مطالعہ سے پتہ چلتا ہے کہ بیکٹیریل پیپٹائڈوگلیکانس (کلیینو ایٹ ال۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ ہمارے SDD-AGE اور ThTbinding asses نے تجویز کیا کہ TFs کے ذریعہ Imd کے اتحاد کو روکا جاتا ہے۔ گٹ سیلز میں آئی ایم ڈی کو گھٹا کر یا اتپریورتن کرکے آئی ایم ڈی جمع کی روک تھام نے بظاہر عمر میں توسیع پر ٹی ایف کے فائدہ مند اثرات کو الٹ دیا۔ ہماری تلاش کی مزید تصدیق کرنے کے لیے، یہ جانچنا دلچسپ ہوگا کہ آیا TFs پھلوں کے اڑنے والوں میں عمر بڑھانے کے لیے زیادہ کارآمد نہیں ہیں جب Imd کے محفوظ خفیہ RHIM (cRHIM، امینو ایسڈز 118 سے 121h تک) خاص طور پر تباہ ہو جاتے ہیں، اس تلاش کی بنیاد پر کہ آئی ایم ڈی میں جرم اس کی جمع اور امائلائیڈ کی تشکیل کے لیے ضروری ہے (کلیینو ایٹ ال۔، 2017)۔ بہر حال، ہمارا مطالعہ آنتوں کے ہومیوسٹاسس اور عمر بڑھنے کے عمل کو کنٹرول کرنے میں TFs کے اہم کردار پر روشنی ڈالتا ہے، شاید Imd coalescence کو ماڈیول کرنے کے ذریعے۔ مستقبل کے مطالعے کو اس بات کی کھوج پر توجہ مرکوز کرنی چاہئے کہ کس طرح سے Imd کے باقیات یا علاقے TFs کے پابند ہیں اور یہ پابندی کس طرح Imd کنڈینسیشن کی روک تھام میں ہوتی ہے۔ مزید برآں، ممالیہ کے نظام میں ہماری دریافتوں نے اشارہ کیا کہ TFs مؤثر طریقے سے بڑی آنت کو خارجی زہریلے کیمیائی DSS کی وجہ سے ہونے والی سوزش سے بچا سکتے ہیں، جو آنتوں کے ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھنے میں TFs کے محفوظ ریگولیٹری کردار کی تجویز کرتے ہیں۔ یہ تحقیق کرنا فائدہ مند ہے کہ آیا TFs ممالیہ کے ؤتکوں میں پروٹین اسمبلی کو چلانے میں کوئی کردار ادا کرتے ہیں۔

یہ مضمون zhongwenxie@ahau.edu.cn سے ماخوذ ہے