Cistanche Deserticola Polysaccharide Melanocytes میں Melanogenesis کی حوصلہ افزائی کرتا ہے، آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرتا ہے اور سفیدی کو فروغ دیتا ہے

رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

Yibo Hu1|جنہوا ہوانگ1|Yixiao Li2|لنگ جیانگ1|Yujie Ouyang1|Lun Yang1|Xiaojiao Zhao1|Lihua Huang3|ہانگ ژیانگ 3|جینگ چن 1 چنگھائی زینگ 1

خلاصہ

پگمنٹیشن عوارض کے اہم حصے کے طور پر، جلد کی خرابی کی بیماریاں جیسے وٹیلگو اور ایکرومک نایوس بہت عام ہیں اور اب زیادہ توجہ حاصل کرتے ہیں۔ depigmentation کے روگجنن میں melanocyte dysfunction اور نقصان شامل ہیں، جو ممکنہ طور پر موروثی، خودکار قوت مدافعت اورآکسیڈیٹیو تناؤs. ان میں، آکسیڈیٹیو تناؤ کلیدی کردار ادا کرتا ہے۔ تاہم، چند طبی علاج آکسیڈیٹیو تناؤ سے نمٹ سکتے ہیں۔ جیسا کہ اطلاع دی گئی ہے،Cistanche deserticola polysaccharide(CDP) ایک موثر اینٹی آکسیڈینٹ ہے۔ اس کی بنیاد پر، ہم نے میلانوسائٹس میں اس کے کردار کا جائزہ لیا اور میکانزم کا مزید انکشاف کیا۔ اس مطالعہ میں، ہم نے پایا کہ CDP کو فروغ مل سکتا ہے۔melanogenesisانسانی ایپیڈرمل میلانوسائٹس (HEMs) اور ماؤس میلانوما B16F10 خلیوں میں، اس نے زیبرا فش میں پگمنٹیشن کو بھی متاثر کیا۔ مزید برآں،سی ڈی پیمائٹوجن ایکٹیویٹڈ پروٹین کناز (MAPK) سگنل پاتھ وے کو چالو کر سکتا ہے، پھر مائیکرو فیتھلمیا سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر (MITF) اور ڈاؤن اسٹریم جینز TYR، TRP1، TRP2، اور RAB27A کے اظہار کو اپ ریگولیٹ کر سکتا ہے۔ بصورت دیگر، ہم نے پایا کہ CDP میلانوسائٹس میں H2O2-حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسٹی اور اپوپٹوسس کو کم کر سکتا ہے۔ مزید شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ CDP NRF2/HO-1 اینٹی آکسیڈینٹ راستے کو بڑھا سکتا ہے اور انٹرا سیلولر ROS کو ختم کر سکتا ہے۔ خلاصہ میں، CDP فروغ دے سکتا ہے۔melanogenesisاور میلانوسائٹس کو روکتا ہے۔آکسیڈیٹیوتناؤچوٹ، یہ تجویز کرتی ہے کہ CDP میلانوسائٹس کی معمول کی حیثیت کو برقرار رکھنے میں مدد کرتا ہے۔ اس طرح،سی ڈی پیdepigmentation بیماریوں کے علاج کے لئے ایک نیا دوا ہو سکتا ہے.

مطلوبہ الفاظ

Cistanche deserticola polysaccharide, depigmentation disease, melanocyte, melanogenesis, NRF2, oxidative stress

تازهCistanche

1|تعارف

جلد کی ڈیپگمنٹیشن کی بیماریاں، جیسے کہ وٹیلیگو اور ایکرومک نایوس، جلد کے دھندلے یا وسیع پیمانے پر ڈپگمنٹیشن کی خصوصیات ہیں۔ ڈیپگمنٹیشن میں بڑی پیتھولوجیکل تبدیلیوں میں میلانوسائٹ کا dysfunction اور نقصان شامل ہے، جو میلانین کی ترکیب اور نقل و حمل کو بہت متاثر کرتا ہے، 3 اس طرح جلد میں میلانین کی ناکافی جمع ہوتی ہے۔

depigmentation میں شامل میکانزم فی الحال نامعلوم ہیں، لیکن مطالعات نے کچھ متعلقہ عوامل کی نشاندہی کی ہے۔ ایک طرف، میلانوسائٹ کا فنکشن جزوی طور پر مائیکرو فیتھلمیا سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر (MITF) پر منحصر ہے، جو کہ کے اظہار کو فروغ دینے کے لیے مشہور ہے۔melanogenesis-متعلقہ جینز بشمول ٹائروسینیز (TYR)، ٹائروسینیز سے متعلقہ پروٹین 1 (TRP1)، ٹائروسینیز سے متعلقہ پروٹین 2 (TRP2)، راس سے متعلق پروٹین Rab-27a (RAB27A) اور fascin ایکٹین بنڈلنگ پروٹین 1 (FSCN1) .4 ان جینوں میں سے، TYR ایل ڈوپا کو ڈوپاکوئنون میں آکسیڈائز کرنے کے ذریعے میلانین کی ترکیب میں کلیدی کردار ادا کرتا ہے۔ ، اوراوکسیڈیٹیو تناؤ{0}} ان عوامل میں، آکسیڈیٹیو تناؤ کو سب سے اہم سمجھا جاتا ہے۔

کے میکانزماوکسیڈیٹیو تناؤdepigmentation کی وجہ سے جزوی طور پر انکشاف کیا گیا ہے؛ ری ایکٹیو آکسیجن اسپیسز (ROS) اوورلوڈ ایک کلیدی عنصر ہے۔ 10 ڈیپگمنٹیشن میں ROS اوورلوڈ پرو اور اینٹی آکسیڈینٹ سسٹمز کے درمیان عدم توازن کو شامل کرتا ہے۔ عنصر 2/اینٹی آکسیڈینٹ رسپانس عنصر (NRF2/ARE) اینٹی آکسیڈینٹ پاتھ وے کی خرابی۔ 12 راستہ NRF2 اور اینٹی آکسیڈیٹیو انزائمز پر مشتمل ہوتا ہے جیسے ہیم آکسیجنز-1 (HMOX-1, HO-1) , catalase (CAT)، glutathione peroxidase 1 (GPX1)، اور NAD(P)H quinone dehydrogenase 1 (NQO1)۔ 13 جب میلانوسائٹس کو ضرورت سے زیادہ ROS کے سامنے لایا جاتا ہے، NRF2 نیوکلئس میں منتقل ہو سکتا ہے اور محفوظ ARE سے منسلک ہو سکتا ہے، پھر فروغ دے سکتا ہے۔ اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز کا اظہار۔ تاہم، کچھ depigmentation بیماریوں میں، جیسے vitiligo، ایک خراب NRF2/ARE اینٹی آکسیڈینٹ راستہ مؤثر طریقے سے ROS کو ختم نہیں کر سکتا۔

عام طور پر ڈیپگمنٹیشن میں استعمال ہونے والے طبی علاج میں ٹاپیکل یا سیسٹیمیٹک کورٹیکوسٹیرائڈز، کیلسینورین انحیبیٹرز، تنگ بینڈ الٹرا وایلیٹ B (NBUVB؛ 311 nm)، 308-nm excimer لائٹ، آٹولوگس ایپیڈرمل ٹرانسپلانٹیشن، اور روایتی چینی ادویات (TCM) شامل ہیں۔ Corticosteroids اور calcineurin inhibitors غیر معمولی مدافعتی ایکٹیویشن کو کم کر سکتے ہیں، 15 جبکہ فوٹو تھراپی کو پہلی لائن کے علاج کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ خاص طور پر، NBUVB melanocyte کے پھیلاؤ اور T-cell کی تباہی کو تحریک دیتا ہے، 16 جبکہ 308-nm excimer روشنی T خلیات کو apoptosis کو اکساتی ہے۔17 اس کے علاوہ، TCM علاج کے اثرات فروغ دینے سے متعلق ہیں۔melanogenesis.18 ایک خاص حد تک، یہ طریقے ڈیپگمنٹیشن کو بہتر بنانے میں مددگار ہیں، لیکن بیماری کے بڑھنے پر قابو پانا اب بھی مشکل ہے۔ یہ خاص طور پر کے لئے، نئے علاج تیار کرنے کے لئے ضروری ہےاوکسیڈیٹیو تناؤجس کو پہلے نظر انداز کیا گیا تھا۔

Cistanche deserticola 'desert ginseng' کے نام سے جانا جاتا ہے۔ 19 اس کے اجزا ایتھنول سے متاثرہ جگر کی چوٹ اور آنتوں کی سوزش کے ہائپرپلاسیا میں مفید ہیں۔ اسے اینٹی تھکاوٹ، اینٹی سوزش، اور اینٹی ٹیومر ری ایجنٹ کے طور پر بھی استعمال کیا جا سکتا ہے۔{5}} حال ہی میں، Guo et al نے رپورٹ کیا کہCistanche deserticola polysaccharide(سی ڈی پی)، اس کے اہم اجزاء میں سے ایک، اینٹی آکسیڈینٹ اور ہیپاٹوپروٹیکٹو سرگرمی20؛ ایک اور دو مطالعات نے خلیات کی حفاظت میں اس کے کردار کی نشاندہی کی۔اوکسیڈیٹیو تناؤآکسیجن-گلوکوز کی کمی/ریپرفیوژن اور آسٹیوپوروسس کے حالات میں چوٹ۔ یہاں، ہم نے اس بات کی تصدیق کرنے کا مقصد کیاسی ڈی پیمتاثر کر سکتا ہےmelanogenesisاور میلانوسائٹس کو آکسیڈیٹیو تناؤ سے بچاتا ہے۔

2|مواد اور طریقے

2.1|کیمیکل اور اینٹی باڈیز

Cistanche deserticola polysaccharide(CDP) اور l-dopa کو Yuanye Biotec (98 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر؛ شنگھائی، چین) سے خریدا گیا تھا۔ ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ (H2O2)، ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ (DMSO)، NaOH، Triton X-100, 4,5-dimethylthiazol-2-yl-2,5-diphenyltetrazolium bromide ( MTT)، اور ایک Annexin V-FITC اپوپٹوس ڈیٹیکشن کٹ سگما-الڈرچ سے خریدی گئی تھی۔ 4 فیصد غیر جانبدار پیرافارمیلڈہائڈ بائیوشارپ (ہیفی، چین) سے خریدا گیا تھا۔ اور ایک Immunofluorescence Staining Kit (Alexa Fluor 488) اور 2,7-dichlorofluorescein-diacetate (DCFH-DA) Beyotime Biotec (شنگھائی، چین) سے خریدا گیا تھا۔ ایک فونٹانا-میسن اسٹین کٹ اور ایک نیوکلیوپلاسمک پروٹین ایکسٹریکشن کٹ سلواربیو (بیجنگ، چین) سے خریدی گئی تھی۔ ہیومن میلانوسائٹ گروتھ سپلیمنٹ (HMGS)، ڈلبیکو کا ترمیم شدہ ایگل میڈیم (DMEM)، اور میڈیم 254 گبکو سے خریدے گئے تھے۔ فیٹل بووائن سیرم (FBS) BI (Kibbutz Beit-Haemek, Israel) سے خریدا گیا تھا۔ -ایکٹین، TYR، TRP2، RAB27A، FSCN1، ERK، p-ERK، JNK، p-JNK، p38، p-p38، NRF2، اور HO-1 کے لیے بنیادی اینٹی باڈیز سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی سے خریدی گئی تھیں، جو کہ ایک بنیادی ہے۔ MITF کے لیے اینٹی باڈی سینٹ جان کی لیبارٹری سے خریدی گئی، p-MITF کے لیے ایک بنیادی اینٹی باڈی Affinity Biosciences سے خریدی گئی، GAPDH کے لیے ایک بنیادی اینٹی باڈی Bioworld سے خریدی گئی، اور TRP1 کے لیے بنیادی اینٹی باڈی EMD ملی پور سے خریدی گئی۔

2.2|سیل کلچر اور علاج

ماؤس میلانوما B16F10 خلیوں کو درمیانے درجے کے DMEM میں 10 فیصد FBS اور 1 فیصد پینسلن-اسٹریپٹومائسن اینٹی بائیوٹک مکس کے ساتھ مکمل کیا گیا تھا۔ ہیومن ایپیڈرمل میلانوسائٹس (HEMs) کو انسانی چمڑی سے الگ کیا گیا تھا (ہمارے پچھلے مطالعہ25 کا حوالہ دیں) اور درمیانے درجے کے 254 میں HMGS، 5 فیصد FBS، اور 1 فیصد پینسلن-اسٹریپٹومائسن اینٹی بائیوٹک مکس کے ساتھ کلچر کیا گیا تھا۔ تمام خلیوں کو 5 فیصد CO2 کے ساتھ 37 ڈگری پر گیلے انکیوبیٹر میں کلچر کیا گیا تھا۔ CDP کو DMSO میں تحلیل کر دیا گیا تھا اور استعمال سے پہلے میڈیم سے پتلا کر دیا گیا تھا، DMSO کی حتمی ارتکاز 0.1 فیصد سے کم تھی۔ H2O2 کو استعمال سے پہلے میڈیم سے پتلا کر دیا گیا تھا۔

2.3|زیبرا فش کی ثقافت اور علاج

زیبرا فش ایمبریو اور میڈیم EzeRinka Biotech سے خریدے گئے تھے۔ تجرباتی پروٹوکول کو سینٹرل ساؤتھ یونیورسٹی کی اخلاقیات کمیٹی نے منظور کیا تھا۔ زیبرا فش کو روشنی سے 37 ڈگری کے فاصلے پر 12-کنویں پلیٹوں میں پالا گیا اور CDP کے مختلف ارتکاز کے ساتھ علاج کیا گیا۔ ایک الٹی خوردبین کا استعمال روزانہ زیبرا فش کے سروں اور دموں میں میلانین کو دیکھنے اور ریکارڈ کرنے کے لیے کیا جاتا تھا۔ مشاہدے کے بعد، ہم نے میڈیم کو تبدیل کیا اور دوبارہ شامل کیا۔سی ڈی پی. زیبرا فش کی دم میں میلانن کی کثافت کو امیج جے سے ماپا گیا تھا، اور اقدار کو مربوط نظری کثافت (IOD) کے طور پر پیش کیا گیا ہے۔

2.4|سیل کی عملداری

MTT پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے سیل کی عملداری کی پیمائش کی گئی۔ کی cytotoxicity کی تحقیقات کرنے کے لئےسی ڈی پی، HEMs اور B16F10 خلیوں کو 2 × 103 خلیات کی کثافت پر 96-کنویں پلیٹوں میں لگایا گیا تھا اور اس وقت تک کلچر کیا گیا تھا جب تک کہ خلیات پلیٹوں سے منسلک نہ ہو جائیں۔ اس کے بعد خلیوں کا علاج مختلف ارتکاز (0، 2.5، 5، 10، 20، 40، 80، 160 اور 320 ug/mL) کے ساتھ کیا گیا۔سی ڈی پی24، 48 یا 72 گھنٹے کے لیے۔ پیمائش سے پہلے، ہر کنویں میں 20 μL MTT شامل کیا گیا تھا اور پلیٹوں کو 37 ڈگری پر 4 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، ہم نے سپرنٹنٹ کو ضائع کر دیا اور فارمازان کرسٹل کو تحلیل کرنے کے لیے ہر کنویں میں 160 μL DMSO شامل کیا۔ 490 nm پر جاذبیت کی قدر ملٹی موڈ پلیٹ ریڈر (پرکن ایلمر) کے ذریعہ ماپا گیا۔ H2O2- induced cytotoxicity حالت میں CDP کے اثر کی چھان بین کرنے کے لیے، HEMs، اور B16F10 سیلز کو 4 × 103 سیلز/ کنویں کی کثافت پر 96-کنویں پلیٹوں میں چڑھایا گیا تھا۔ خلیوں کا مختلف ارتکاز کے ساتھ علاج کیا گیا۔سی ڈی پی({{0}}، 20، 40، یا 80 ug/mL) 24 گھنٹوں کے لیے، اس وقت ہم نے H2O2 (حتمی ارتکاز: HEMs کے لیے 500 μm اور B16F10 خلیات کے لیے 1.0 mm) ہر ایک کنویں میں شامل کیا اور خلیات کو مزید 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔ ہم نے CDP سے علاج شدہ اور منفی کنٹرول (NC) گروپس قائم کیے ہیں۔ پتہ لگانے کے اقدامات وہی تھے جو پہلے بیان کیے گئے تھے۔

2.5|میلانین مواد کا NaOH پرکھ

خلیوں کو 100- ملی میٹر پیٹری ڈشز میں کلچر کیا گیا اور ان کے ساتھ علاج کیا گیا۔سی ڈی پیمختلف ارتکاز پر (0, 20, 40, اور 80 ug/mL) 48 گھنٹے تک، پھر ٹرپسن کے ساتھ ہضم کیا جاتا ہے اور 15-mL ٹیوب میں جمع کیا جاتا ہے۔ ہم نے خلیات کو دو بار ڈبل آست پانی سے دھویا، انہیں 1 ملی لیٹر ایتھنول میں دوبارہ بند کیا اور میلانین کو جاری کرنے کے لیے ان کو گھمایا۔ اس کے بعد ہم نے مرکب (200 گرام، 5 منٹ) کو سینٹری فیوج کیا اور سپرناٹینٹ کو ضائع کر دیا، ہر ٹیوب میں 1 ملی لیٹر 10 فیصد DMSO (1 ملی میٹر NaOH محلول سے پتلا) شامل کیا اور تلچھٹ کو معطل کر دیا۔ ہم نے میلانین کو تحلیل کرنے کے لیے 1 گھنٹے کے لیے پانی کے غسل میں 80 ڈگری پر سسپنشن کو انکیوبیٹ کیا۔ آخر میں، ہم نے 200 μL مائع کو ایک 96-وییل پلیٹ میں منتقل کیا اور 470 nm پر جاذبیت کی قدر کی پیمائش کے لیے ملٹی موڈ پلیٹ ریڈر کا استعمال کیا۔

Cistancheجائزے: روکتا ہے۔میلانینپیداوار

2.6|ٹائروسینیز سرگرمی کی پیمائش

خلیوں کو 100-ملی میٹر پیٹری ڈشز میں کلچر کیا گیا اور ان کے ساتھ علاج کیا گیا۔سی ڈی پیپیمائش سے پہلے، ٹرپسن کے ساتھ ہضم کیا جاتا ہے اور 15-mL ٹیوبوں میں جمع کیا جاتا ہے، اور فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS) سے دو بار دھویا جاتا ہے۔ ہم نے ہر نمونے سے 106 خلیات کو ایک نئی ٹیوب میں منتقل کیا اور سنٹرفیوگریشن کے بعد سپرنٹنٹ کو خارج کر دیا، پھر سیل کے گولے میں 1 ملی لیٹر 0.5 فیصد ٹریٹن ایکس-100 شامل کیا اور ذخیرہ کیا مکسچر کو 15 منٹ کے لیے 0 ڈگری پر رکھیں۔ اس کے بعد، ہم نے 1 ملی لیٹر ایل ڈوپا (1 ملی میٹر، 0.1 ایم فاسفیٹ بفر کے ساتھ گھٹا ہوا) سبسٹریٹ کے طور پر شامل کیا اور محلول کو ملایا، مکسچر کے 200 μL کو ایک {0 میں منتقل کیا۔ {16}}فوری طور پر اچھی طرح سے پلیٹ، اور ملٹی موڈ پلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے 475 nm پر جاذبیت کی قدر (A0) کی پیمائش کی، پیمائش کو 10 منٹ (A10) پر دہرایا۔ ٹائروسینیز سرگرمی کا حساب (A10-A0)/105 سے کیا گیا تھا، اور نتائج کو منفی کنٹرول کے مقابلے میں فیصد (فیصد) کے طور پر ظاہر کیا گیا ہے۔

2.7|فونٹانا-میسن میلانین کا داغ

خلیات کو 50 فیصد کثافت حاصل کرنے تک 12-کنویں پلیٹوں میں کلچر کیا گیا تھا۔ علاج کے بعد، خلیات کو 30 منٹ کے لیے 4 فیصد نیوٹرل پیرافارمیلڈہائیڈ کے ساتھ فکس کیا گیا اور آست پانی سے دھویا گیا۔ اس کے بعد ہم نے ہر کنویں میں 500 μL فونٹانا امونیا سلور محلول شامل کیا اور میلانین کو رنگنے کے لیے پلیٹوں کو 16 گھنٹے تک اندھیرے میں محفوظ کیا۔ اس کے بعد، ہم نے خلیات کو آست پانی سے پانچ بار دھویا (ہر بار 1 منٹ) اور انہیں 500 μL ہائپو سلفائٹ میں 5 منٹ کے لیے بھگو دیا۔ آخر میں، ہم نے ہائپو سلفائٹ کو ہٹا دیا اور خلیات کو 1 منٹ کے لیے آست پانی سے دوبارہ دھویا۔ اس کے بعد ہم نے میلانین کا مشاہدہ اور ریکارڈ کرنے کے لیے ایک الٹی خوردبین کا استعمال کیا۔

2.8|آر این اے نکالنا اور مقداری ریورس ٹرانسکرپشن پولیمریز چین کا رد عمل

خلیوں کو 6-کنویں پلیٹوں میں کلچر کیا گیا تھا۔ علاج کے بعد، خلیوں کو ٹرپسن کے ساتھ ہضم کیا گیا اور 15-mL ٹیوبوں میں جمع کیا گیا۔ ہم نے خلیات کو PBS کے ساتھ دو بار دھویا، پھر 1 ملی لیٹر لیسیز بفر میں شامل کیا، مکسچر کو گھمایا، اور خلیوں کو مکمل طور پر لیس کرنے کے لیے ٹیوبوں کو 5 منٹ تک برف پر رکھا۔ RNA کو ٹوٹل RNA Kit (Omega Bio-Tek) اور ReverTra Ace qPCR RT ماسٹر مکس (TOYOBO) کا استعمال کرتے ہوئے ریورس ٹرانسکرپٹ (RT) کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا۔ کوانٹیٹیٹو ریورس ٹرانسکرپشن-پولیمریز چین ری ایکشن (PCR) کو KODSYBR qPCR مکس (TOYOBO) کا استعمال کرتے ہوئے تشکیل دیا گیا تھا۔ RT مکسچر کا ری ایکشن والیوم 20 μL تھا، جبکہ PCR مکسچر کا ری ایکشن والیوم 20 μL تھا (cDNA 1-8 μL، MIX 10 μL، پرائمر F 1 μL، پرائمر R 1 μL، DEPC H2O کو 20 μL میں شامل کریں۔ )۔ تجربات پروٹوکول کے مطابق کیے گئے تھے۔ پرائمر کے سلسلے ٹیبل S1 میں درج ہیں۔

2.9|پروٹین نکالنا اور مغربی بلوٹنگ/امیونو فلوروسینس

خلیوں کو 100-ملی میٹر پیٹری ڈشز میں کلچر کیا گیا تھا۔ علاج کے بعد، خلیوں کو ٹرپسن کے ساتھ ہضم کیا گیا اور 15-mL ٹیوبوں میں جمع کیا گیا۔ ہم نے خلیات کو PBS کے ساتھ دو بار دھویا، پھر 500 μL RIPA lysis بفر (Thermo Fisher) میں شامل کیا گیا جس میں 1 mm phenylmethylsulpho-nyl fluoride (Thermo Fisher) اور 1:100 diluted phosphatase inhibitor cocktail (RiPA lysis inhibitor cocktail) شامل کیا گیا۔ نیوکلیائی اور سائٹوپلازم پروٹین کو مینوفیکچرر کے پروٹوکول کے مطابق نیوکلیوپلاسمک پروٹین ایکسٹریکشن کٹ کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا۔ ہم نے ٹیوبوں کو 30 منٹ تک برف پر رکھا اور خلیوں کو مکمل طور پر لیس کرنے کے لیے انہیں ہر 5 منٹ بعد گھمایا۔ ہم نے خلیات کو سینٹرفیوج کیا (200 جی، 4 ڈگری، 15 منٹ)، سپرنٹنٹ کو ایک نئی ٹیوب میں منتقل کیا، اور BCA پروٹین پرکھ کٹ (KeyGEN Biotec) کا استعمال کرتے ہوئے کل پروٹین کے ارتکاز کی پیمائش کی۔ ہم نے پروٹین کو 5× لوڈنگ بفر (بیو ٹائم بائیوٹیک، چائنا) کے ساتھ 100 ڈگری پر 10 منٹ کے لیے ابالے، پھر انہیں −80 ڈگری پر ذخیرہ کیا۔ Polyacrylamide جیل الیکٹروفورسس (PAGE) طریقہ مغربی بلوٹنگ میں استعمال کیا گیا تھا، اور ہر گروپ کے 20 ug پروٹین کو الگ کر کے پولی وینیلائیڈین فلورائیڈ جھلی میں منتقل کیا گیا تھا۔ اینٹیجن بلاک کرنے کے بعد، ہم نے جھلی کو 1:1000 پتلی پرائمری اینٹی باڈی میں 16 گھنٹے کے لیے 4 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا، پھر جھلی کو PBST سے دھویا اور اسے 1:10 000 پتلا فلوروسینٹ سیکنڈری اینٹی باڈی میں 1 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا۔ . فلوروسینس کی شدت کا پتہ Odyssey CLx امیجنگ سسٹم (LI-COR) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ امیونو فلوروسینس کو امیونو فلوروسینس سٹیننگ کٹ (الیکسا فلور 488) کا استعمال کرتے ہوئے پرائمری اینٹی باڈی کے 1:100 کم کرنے کے ساتھ انجام دیا گیا تھا۔

cistanche reddit

2.10|سیل اپوپٹوسس کی پیمائش

خلیوں کو {{0}} ملی میٹر پیٹری ڈشز میں کلچر کیا گیا تھا اور مختلف ارتکاز (0، 20، 40، اور 80 ug/mL) کے ساتھ علاج کیا گیا تھا۔سی ڈی پی24 گھنٹے کے لیے، اور H2O2 کو شامل کیا گیا (حتمی ارتکاز: HEMs کے لیے 500 μm، B16F10 خلیات کے لیے 1.0 mm) ہر ایک کنویں میں اور مزید 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ ہم نے CDP سے علاج شدہ اور NC گروپس بھی قائم کیے ہیں۔ علاج کے بعد، ہم نے ای ڈی ٹی اے فری ٹرپسن کے ساتھ خلیات کو ہضم کیا اور انہیں ٹیوبوں میں جمع کیا، پھر خلیات کو پی بی ایس سے دو بار دھویا اور 100 μL پی بی ایس میں دوبارہ بحال کیا۔ خلیوں کو پروٹوکول کے مطابق ایک Annexin V-FITC Apoptosis ڈیٹیکشن کٹ کے ساتھ داغ دیا گیا تھا اور فلو سائٹومیٹری (FCM) کے ذریعہ ان کا پتہ لگایا گیا تھا۔ فلوجو سافٹ ویئر اپوپٹوس کی شرح کا تجزیہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

2.11|انٹرا سیلولر ROS پیمائش

خلیات کو {{0}} اچھی پلیٹوں میں کلچر کیا گیا تھا اور مختلف ارتکاز (0، 20، 40، اور 80 ug/mL) کے ساتھ علاج کیا گیا تھا۔سی ڈی پی24 گھنٹے کے لیے، جس میں ہم نے H2O2 (حتمی ارتکاز: HEMs کے لیے 500 μm، B16F10 خلیات کے لیے 1.0 mm) ہر ایک کنویں میں شامل کیا، انہیں مزید 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا اور CDP سے علاج شدہ اور NC گروپس قائم کیا۔ علاج کے بعد، ہم نے تمام میڈیم اور ایف بی ایس کو ہٹانے کے لیے پی بی ایس کے ساتھ دو بار خلیات کو دھویا، پھر DCFH-DA تحقیقات کو درمیانے درجے کے ساتھ 1:1000 کر دیا اور اسے ہر کنویں میں شامل کیا۔ ہم نے خلیوں کو 37 ڈگری پر 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا اور انہیں سیرم فری میڈیم سے تین بار دھویا۔ ہم نے ایک استعمال کیا۔فلوروسینس کا مشاہدہ کرنے اور ریکارڈ کرنے کے لیے الٹی فلوروسینس مائکروسکوپ، پھر فلوروسینس کی شدت کی پیمائش کے لیے امیج جے کا استعمال کیا۔

2.12|شماریات اور تجزیہ

اس کام میں ڈیٹا کو اوسط ± معیاری انحراف (SD) کے طور پر پیش کیا گیا ہے، اور شماریاتی تجزیہ گراف پیڈ پرزم (ورژن 7۔{1}}) یا SPSS (ورژن 22۔{3}})، اور طالب علم کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ t-ٹیسٹ یا یکطرفہ تجزیہ کا تغیر (ANOVA) متعدد گروپ موازنہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ڈبلیو بی پروٹین بینڈ کی گرے ویلیو کو جی اے پی ڈی ایچ یا ایکٹین کے ساتھ معیاری بنایا گیا تھا۔ P <.05 کی="" قدروں="" کو="" اہم="" سمجھا="" جاتا="" تھا۔="" تمام="" تجربات="" کم="" از="" کم="" تین="" بار="" دہرائے="">

3|نتائج

3.1|CDP نے HEMs اور B16F10 خلیوں میں میلانوجینیسیس کی حوصلہ افزائی کی۔

شروع کرنے سے پہلے، ہم نے MTT پرکھ کا استعمال HEMs اور ماؤس میلانوما B16F10 خلیوں پر CDP کی ممکنہ سائٹوٹوکسٹی کی تحقیقات کے لیے کیا۔ خلیات کے ساتھ علاج کیا گیا تھاسی ڈی پی24، 48، یا 72 گھنٹے کے لیے مختلف ارتکاز میں۔ ایچ ای ایم کی قابل عمل جانچ نے یہ ظاہر کیا کہ جب ارتکاز 320 ug/mL سے کم تھا، CDP کا سیل کے قابل عمل ہونے پر کوئی اثر نہیں ہوتا تھا۔ تاہم، قابل عملیت میں نمایاں کمی واقع ہوئی کیونکہ 24، 48، اور 72 گھنٹے میں ارتکاز 320 ug/mL تک پہنچ گیا (P <.05؛ شکل="" 1a)۔="" b16f10="" خلیات="" کی="" عملداری="" بھی="" 48="" اور="" 72="" گھنٹے="" میں="" کم="" ہوئی="">سی ڈی پی320 ug/mL (P <.01) تک="" پہنچ="" گئی="" لیکن="" کم="" ارتکاز="" میں="" کوئی="" تبدیلی="" نہیں="" دیکھی="" گئی="" (شکل="" 1b)۔="" اس="" کے="" بعد="" ہم="" نے="" ابتدائی="" طور="" پر="" cdp="" کے="" کردار="" کو="" دریافت="">melanogenesisاور اس کے اثرات کا موازنہ -میلانوسائٹ محرک ہارمون ( -MSH؛ ارتکاز: 20، 100، اور 400 nm) اور HEMs میں DMSO (0.1 فیصد) سے کیا۔ میلانین سٹیننگ، ٹائروسینیز کی سرگرمی، اور میلانین مواد کی جانچ کے نتائج نے تجویز کیا کہ میلانجینیسیس کو فروغ دینے کے لیے CDP -MSH کے ساتھ موازنہ کیا جا سکتا ہے، جبکہ 0.1 فیصد DMSO علاج سے کوئی فرق نہیں پڑا (شکل S1)۔

ہم نے اسی کے مطابق اپنی تلاش کو مزید بہتر کیا۔ HEMs کے ساتھ علاج کیا گیا۔سی ڈی پی48 گھنٹے کے لیے مختلف ارتکاز (20، 40، اور 80 ug/mL) پر؛ میلانین سٹیننگ، میلانین کا مواد، اور ٹائروسینیز ایکٹیویٹی اسسز کیے گئے، اور سبھی نے CDP کے علاج کے بعد ارتکاز پر منحصر انداز میں نمایاں اضافہ دکھایا جو 80 ug/mL گروپ (P <.05، شکل="" 2a-c)="" میں="" عروج="" پر="" تھا۔="" پھر="" ہم="" نے="" mrna="" اور="" پروٹین="" کی="" سطح="" کی="" پیمائش="">melanogenesisمتعلقہ جین (MITF، TYR، TRP1، TRP2، RAB27A، اور FSCN1)۔ CDP نے HEMs (P <.05؛ figure="" s2a)="" میں="" ان="" جینوں="" کے="" mrna="" کی="" سطح="" میں="" نمایاں="" اضافہ="" کیا۔="" اس="" کے="" علاوہ،="" mitf،="" tyr،="" trp1،="" اور="" rab27a="" پروٹین="" کی="" سطح="" میں="" اضافہ="" ہوا،="" جیسا="" کہ="" فاسفوریلیٹڈ="" mitf="" کا="" کل="" mitf="" (p=""><.05) کے="" تناسب="" میں="" ہوا،="" جبکہ="" trp2="" اور="" fscn1="" نے="" کوئی="" فرق="" نہیں="" دکھایا="" (شکل="" 2d،e)۔="" نتائج="" نے="" اشارہ="" کیا="" کہ="" سی="" ڈی="" پی="" میلانوجینیسیس="" کو="" فروغ="" دے="" سکتا="" ہے="" اور="" انسانی="" میلانوسائٹس="" میں="" میلانوجینیسیس="" سے="" متعلق="" جینوں="" کے="" اظہار="" کو="" بہتر="" بنا="" سکتا="">

مزید برآں، ہم نے اثرات کی دوبارہ تصدیق کی۔سی ڈی پیدوبارہ B16F10 خلیات کے ساتھ اور پتہ چلا کہ B16F10 خلیات کے میلانین مواد میں نمایاں اضافہ ہوا (P <.01؛ figure="" s2b)۔="" اس="" کے="" علاوہ،="" سی="" ڈی="" پی="" نے="" ایم="" آر="" این="" اے="" کی="" سطح="" میں="" نمایاں="" اضافہ="">melanogenesisمتعلقہ جینز (P <.05؛ فگر S2C)، اور MITF، TYR، TRP1، TRP2، اور RAB27A کے پروٹین کی سطح میں بھی CDP علاج کے بعد اضافہ ہوا (P <.05؛ Figure S2D-E)۔

شکل 1 HEMs اور B16F10 خلیوں میں CDP کی سائٹوٹوکسیٹی۔

3.2|سی ڈی پی نے زیبرا فش میں میلانوجینیسیس کو فروغ دیا۔

اس بات کی تحقیقات کرنے کے لئے کہ آیاسی ڈی پیفروغ دے سکتا ہے۔melanogenesisVivo میں، ہم نے زیبرا فش ایمبریو استعمال کیا۔ زیبرا فش ایمبریو کو چار گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا اور مختلف ارتکاز (20، 40، اور 80 ug/mL) میں اکیلے میڈیم (NC) یا CDP کے ساتھ مسلسل علاج کیا جاتا تھا۔ میلانین گرینولز کی کثافت اور تقسیم کا مشاہدہ کیا گیا اور ہر روز ریکارڈ کیا گیا۔ جیسے جیسے زیبرا فش ایمبریو میں اضافہ ہوا، ہم نے پایا کہ میلانین کی کثافت آہستہ آہستہ سروں اور دموں میں بڑھ رہی ہے۔ تیسرے دن، بین گروپ کے اختلافات قابل تمیز تھے، اور یہ فرق اس وقت تک بڑھتا رہا جب تک کہ ہم نے 6 ویں دن تجربہ ختم نہیں کیا (شکل 3A)۔ ہم نے زیبرا فش کی دم میں میلانین کی کثافت کی پیمائش کے لیے امیج جے کا استعمال کیا۔ CDP سے علاج شدہ گروپوں میں میلانین کی کثافت کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھی (P <.05؛ شکل="">

3.3|CDP نے HEMs اور B16F10 سیلز میں MAPK سگنل پاتھ وے کو چالو کیا۔

جس کے ذریعے میکانزم کو ظاہر کرناسی ڈی پیفروغ دیاmelanogenesis، ہم نے CDP کے ساتھ HEMs کا 48 گھنٹے تک مختلف ارتکاز (20، 40، اور 80 ug/mL) پر علاج کیا اور پھر MAPK سگنلنگ پاتھ وے میں ERK، JNK، اور p38 پروٹین کی فاسفوریلیٹڈ اور کل سطحوں کی چھان بین کی۔ جیسا کہ مغربی بلوٹنگ کے ذریعہ ماپا جاتا ہے، p-ERK، p-JNK، اور p-p38 کی سطح CDP علاج (P <.05) کے="" بعد="" بڑھائی="" گئی،="" جبکہ="" ان="" کی="" کل="" سطحوں="" میں="" کوئی="" تبدیلی="" نہیں="" آئی="" (شکل="" 4a،="" b)۔="" تجربات="" کو="" b16f10="" خلیات="" کے="" ساتھ="" دہرایا="" گیا="" اور="" erk،="" jnk،="" اور="" p38="" پروٹین="" کے="" فاسفوریلیٹ="" لیولز="" میں="" اضافہ="" کیا="" گیا="" (p=""><.05)، لیکن="" mapk="" کی="" کل="" سطحیں="" تبدیل="" نہیں="" ہوئیں="" (شکل="" 4c،="" d)،="" نتائج="" کے="" مطابق۔="" hems="">

3.4|HEMs اور B16F10 خلیات میں CDP نے کم H2O2-کی حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسیٹی اور اپوپٹوسس

ہم نے آکسیڈیٹیو تناؤ کے ماحول کی تقلید کے لئے H2O2 کا استعمال کیا اور آکسیڈیٹیو تناؤ کے تحت میلانوسائٹس میں CDP کے کردار کو مزید دریافت کیا۔ HEMs میں استعمال ہونے والے H2O2 کا حتمی ارتکاز 500 μm تھا، جب کہ B16F10 خلیوں میں 1.0 mm تھا۔ H2O2-حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسٹی پر CDP کے اثر کی تحقیقات کے لیے، ہم نے HEMs اور B16F10 سیلز کے ساتھ پہلے سے علاج کیاسی ڈی پی24 گھنٹے تک مختلف ارتکاز (20، 40، اور 80 ug/mL) پر، پھر H2O2 شامل کیا اور مشاہدے اور MTT پرکھ سے پہلے 24 گھنٹے تک ان کا علاج جاری رکھا۔

H2O2 کی وجہ سے HEMs میں جھلیوں کے بلبنگ اور سیل سکڑنے کا سبب بنتا ہے، CDP سے پہلے سے تیار کردہ گروپوں میں، صورت حال کو کم کیا گیا تھا۔ صرف CDP کے ساتھ علاج کا کوئی اثر نہیں ہوا (شکل 5A)۔ MTT پرکھ نے اسی طرح کا نتیجہ ظاہر کیا کہ H2O2 علاج سے HEM کی عملداری میں کمی آئی، جبکہ CDP نے اس نقصان دہ اثر کو نمایاں طور پر کم کیا (P <.01)؛ کے="" ساتھ="">سی ڈی پیاکیلے نے کوئی فرق نہیں کیا (شکل 5C)۔ اس کے بعد ہم نے B16F10 خلیوں میں حفاظتی اثر کی دوبارہ تصدیق کی۔ H2O2 کے علاج نے ظاہری جھلی کے بلبنگ اور سیل سکڑنے کی حوصلہ افزائی کی، جبکہ B16F10 خلیات (شکل 5B) میں CDP کے ذریعہ ناموافق حالت کو بھی بہتر بنایا گیا۔ دریں اثنا، MTT پرکھ سے پتہ چلتا ہے کہ H2O2 کے علاج کے بعد B16F10 سیل کی عملداری میں کمی واقع ہوئی ہے، لیکن CDP-پریٹریٹیڈ گروپس (P <.05؛ figure="" 5d)="" میں="" صورتحال="" میں="" نمایاں="" بہتری="" آئی="">

مزید برآں، ہم نے FCM کا استعمال H2O2-ایچ ای ایم اور B16F10 خلیات کی حوصلہ افزائی اپوپٹوسس کی پیمائش کے لیے کیا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ H2O2 HEMs اور B16F10 خلیوں میں اہم apoptosis کا سبب بنتا ہے، لیکن پہلے سے علاجسی ڈی پیمختلف ارتکاز میں apoptosis کو نمایاں طور پر کم کر سکتا ہے۔ بصورت دیگر، اکیلے CDP کے علاج سے کوئی فرق نہیں پڑا (شکل 5E، F)۔ H2O2 علاج کے بعد apoptosis کی شرح میں اضافہ ہوا لیکن CDP-pretreated گروپوں میں کمی واقع ہوئی، تبدیلی HEMs اور B16F10 دونوں خلیوں (P <.05، شکل="" 5g،="" h)="" میں="" نمایاں="">

تصویر 2 CDP HEMs میں میلانوجینیسیس کو فروغ دیتا ہے۔

3.5|HEMs اور B16F10 سیلوں میں CDP سکیوینجڈ H2O2-حوصلہ افزائی انٹرا سیلولر ROS

کے میکانزم کی تحقیقات کرنے کے لئےسی ڈی پیH2O2-حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسیٹی اور اپوپٹوسس کو کم کرنے کے لیے، ہم نے DCFH-DA فلوروسینس پروب کا استعمال کرتے ہوئے HEMs اور B16F10 سیلوں میں انٹرا سیلولر ROS کا مزید پتہ لگایا۔ علاج وہی تھے جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے، فلوروسینس کی شدت کو ROS کی سطح کی نمائندگی کرنے کے لیے ماپا گیا تھا۔ جیسا کہ ہم نے HEMs میں مشاہدہ کیا، H2O2 کا علاج ROS کو بلند کرنے میں مؤثر تھا، لیکن CDP نے H2O2- علاج شدہ گروپوں (P <.01; شکل="" 6a,="" c)="" میں="" انٹرا="" سیلولر="" ros="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" ختم="" کیا۔="" اس="" کے="" علاوہ،="" اکیلے="" cdp="" کے="" استعمال="" سے="" کوئی="" فرق="" نہیں="" پڑا۔="" ہم="" نے="" b16f10="" خلیوں="" میں="" نتائج="" کی="" دوبارہ="" تصدیق="" کی۔="" b16f10="" خلیوں="" میں،="" صرف="" cdp="" کے="" ساتھ="" علاج="" نے="" ros="" کی="" سطح="" کو="" متاثر="" نہیں="" کیا،="" جبکہ="" h2o2="" کے="" علاج="" سے="" ros="" کی="" سطح="" میں="" واضح="" طور="" پر="" اضافہ="" ہوا،="" لیکن="" یہ="" تبدیلی="" cdp="" پریٹریٹمنٹ="" (p=""><.05؛ شکل="" 6b،="" d)="" کے="" ذریعے="" بھی="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="">

3.6|میلانوسائٹس میں CDP اپ ریگولیٹڈ NRF2/HO-1 اینٹی آکسیڈینٹ راستہ

ان طریقہ کار کو مزید ظاہر کرنے کے لیے جن کے ذریعے CDP ROS کو ختم کرتا ہے، ہم نے سب سے پہلے B16F10 خلیوں میں NRF2/HO-1 اینٹی آکسیڈینٹ پاتھ وے کی پروٹین کی سطح کی پیمائش کی۔ ہم نے پایا کہ صرف CDP کے ساتھ علاج نے NRF2 اور HO-1 پروٹین پر کوئی خاص اثر نہیں کیا، لیکن H2O2-علاج شدہ گروپوں میں، ان دو پروٹینوں کی سطح میں نمایاں اضافہ ہوا، اورسی ڈی پیقبل از علاج نے بلندی کو مزید بڑھایا (p<.05; figure="" s3).="" moreover,="" we="" investigated="" the="" protein="" levels="" of="" nrf2="" and="" ho-1="" in="" hems="" after="" h2o2="" and/or="" cdp="" treatment.="" the="" results="" showed="" that="" ho-1="" level="" was="" elevated="" in="" h2o2-treated="" groups,="" and="" further="" increased="" in="" cdp="" pretreatment="" groups=""><.05; figure="" 7a,="" b).="" to="" know="" the="" distribution="" of="" nrf2,="" we="" compared="" the="" level="" of="" nuclear="" and="" cytoplasmic="" nrf2="" with="" the="" total="" level="" of="" β-actin="" in="" hems.="" similarly,="" we="" found="" that="" both="" nuclear="" and="" cytoplasmic="" nrf2="" were="" elevated="" under="" h2o2="" treatment;="" their="" levels="" further="" increased="" in="" the="" cdp="" pretreated="" groups.="" based="" on="" that,="" we="" calculated="" the="" ratio="" of="" nuclear="" nrf2="" to="" cytoplasmic="" nrf2.="" the="" result="" suggested="" that="" cdp="" increased="" the="" ratio="" significantly="" at="" concentrations="" of="" 40="" and="" 80="" μg/ml=""><.05; figure="" 7a,="" b).="" using="" immunofluorescence,="" we="" observed="" the="" fluorescence="" of="" nrf2="" in="" hems="" and="" knew="" that,="" under="" h2o2="" treatment,="" the="" nucleus="" seemed="" to="" have="" expanded="" and="" the="" levels="" of="" nrf2="" in="" the="" nucleus="" and="" cytoplasm="" were="" enhanced.="" among="" them,="" the="" cells="" pretreated="" with="">سی ڈی پینے کچھ اختلافات ظاہر کیے، جیسا کہ ہم دیکھ سکتے ہیں کہ نیوکلئس میں فلوروسینس سائٹوپلازم کے مقابلے میں زیادہ مضبوط تھا، اور تقسیم تین CDP ارتکاز (شکل 7C) کے قریب تھی۔

تصویر 3 سی ڈی پی زیبرا فش میں میلانوجینیسیس کو فروغ دیتا ہے۔

4|بحث اور نتائج

اس مطالعہ میں، ہم نے کے کردار کی تحقیقات کیسی ڈی پیHEMs اور B16F10 خلیوں میں۔ پہلی بار، ہم نے پایا کہ سی ڈی پی میلانوسائٹس میں میلانوجینیسیس کو فروغ دے سکتا ہے اور زیبرا فش میں پگمنٹیشن کو فروغ دے سکتا ہے۔ اس کے بعد کے تجربے سے پتہ چلتا ہے کہ MAPK سگنلنگ پاتھ وے CDP علاج کے تحت چالو کیا گیا تھا۔ میں اس کے کردار کی مزید تفتیش کی۔اوکسیڈیٹیو تناؤاور پتہ چلا کہ CDP میلانوسائٹس میں H2O2- حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسٹی اور اپوپٹوس کو کم کر سکتا ہے۔ اس دوران، CDP NRF2/HO-1 اینٹی آکسیڈینٹ پاتھ وے کو چالو کر سکتا ہے اور آکسیڈیٹیو تناؤ کے حالات میں انٹرا سیلولر ROS کو ختم کر سکتا ہے۔

مائٹوجن ایکٹیویٹڈ پروٹین کناز ایک اہم راستہ ہے جو ایم آئی ٹی ایف کے ضابطے میں شامل ہے، ایک اہم ٹرانسکرپشن عنصر جو اظہار کو فروغ دیتا ہے۔melanogenesis-متعلقہ جینز اور اس کے نتیجے میں میلانین کی ترکیب اور نقل و حمل کو متاثر کرتے ہیں۔ اس دوران، MITF/p-MITF اور MITF سے چلنے والے TYR، TRP1، TRP2، اور RAB27A کے تاثرات اسی کے مطابق اپ ریگولیٹ کیے گئے تھے۔ اس طرح، ہم تجویز کرتے ہیں کہ CDP فروغ دے سکتا ہے۔melanogenesisMAPK پاتھ وے کو چالو کرنے کے ذریعے، لیکن کیسےسی ڈی پیMAPKs کو چالو کرتا ہے نامعلوم رہتا ہے۔ حالیہ مطالعات کے مطابق، ٹول نما رسیپٹر 4 (TLR4) میلانوسائٹس میں بہت زیادہ ظاہر ہوتا ہے اور اس میں شامل ہوتا ہے۔melanogenesis.28,29 TLR4 ایک اہم ٹرانس میمبرین پروٹین ہے جو خاص طور پر لپوپولیساکرائیڈ (LPS)30 کو باندھ سکتا ہے۔ مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ ایل پی ایس میلانوجینیسیس کو متاثر کر سکتا ہے۔29 دلچسپ بات یہ ہے کہ پودوں یا کھمبیوں سے نکالے گئے متعدد پولی سیکرائڈز نے مبینہ طور پر TLRs اور ڈاؤن اسٹریم سگنلنگ پاتھ ویز جیسے MAPK اور نیوکلیئر فیکٹر کاپا بیٹا (NF-κB) کو چالو کیا ہے۔31,32 اس لیے ہمیں شبہ ہے کہسی ڈی پیTLRs کے ذریعے پہچانا اور پابند کیا جا سکتا ہے، پھر ڈاؤن اسٹریم MAPK سگنل-لنگ پاتھ وے کو چالو کرتا ہے اور فروغ دیتا ہے۔melanogenesis. مزید برآں، نیوکلیوٹائڈ بائنڈنگ اولیگومرائزیشن ڈومین نما رسیپٹرز (NLRs) انٹرا سیلولر لیگنڈز کو پہچاننے اور MAPK اور NF-κB سگنلنگ پاتھ ویز کو چالو کرنے کے لیے جانا جاتا ہے۔ اور NLRs.35,36 کو متاثر کرتا ہے اس طرح، یہ ممکن ہے کہ CDP میلانوسائٹس میں داخل ہو اور NLRs کے ذریعے MAPK سگنلنگ پاتھ وے کو ریگولیٹ کر سکے۔ تاہم، اس مفروضے کی تصدیق کے لیے مزید مطالعات کی ضرورت ہے۔

آج تک کے کچھ مطالعات میں میلانجینیسیس میں ہربل پولی سیکرائڈز کے استعمال کی اطلاع ملی ہے تاکہ میلانین کی پیداوار کو روکا جا سکے۔ 37,38 تاہم، اس تحقیق میں،سی ڈی پیفروغ دیاmelanogenesismelanocytes میں، اور -MSH کے مقابلے کے بعد اس اثر کی مزید تصدیق ہوئی۔ سی ڈی پی بھی جڑی بوٹیوں سے نکالی جانے والی پولی سیکرائیڈ کی ایک قسم ہے، ہمیں شبہ ہے کہ سی ڈی پی کا الٹا اثر سی ڈی پی اور دیگر پولی سیکرائیڈز کے درمیان ساختی فرق سے متعلق ہو سکتا ہے۔ پولی سیکرائڈز مونوساکرائڈز کے پولیمرائزیشن سے بنتے ہیں لیکن مونوساکرائڈ کی قسم، مونو سیکرائڈ کمپوزیشن، گلائکوسیڈک بانڈ، سائیڈ چین ڈھانچہ، اور سالماتی وزن39,40 میں متغیر ہوتے ہیں۔ ان عوامل کے بارے میں سوچا جاتا ہے کہ وہ ان کے حیاتیاتی افعال کا تعین کرتے ہیں۔سی ڈی پیاور تجویز کیا کہ CDP ڈھانچہ بعد میں اس کے کام کو متاثر کرتا ہے۔

میلانوجینیسیسبالائے بنفشی نقصان کے خلاف مزاحمت اور جسم کے ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھنے کا ایک اہم حفاظتی طریقہ کار ہے43؛ ایک ہی وقت میں، میلانوسائٹس آسانی سے ناگوار ماحول جیسے کہ ROS اوورلوڈ کے سامنے آ جاتے ہیں۔ 11 یہ معلوم ہے کہ ROS میلانوجینیسیس کو فروغ دینے میں حصہ لیتا ہے، میکانزم میں سے ایک MAPKs کو فعال کر رہا ہے۔ سطح، جبکہ ROS اوورلوڈ کو خراب کرتا ہے۔melanogenesisROS، MAPK، اور melanogenesis کے درمیان تعلق مختلف حالات میں متغیر ہوتا ہے، اس طرح پرو اور اینٹی آکسیڈینٹ سسٹمز کے درمیان توازن واضح طور پر اہم ہے۔ ڈیپگمنٹیشن کی بیماریوں میں جیسے کہ وٹیلگو، ایک غیر متوازن اینٹی آکسیڈینٹ سسٹم اور بے قابو ROS اوورلوڈ میلانوسائٹس کو نقصان پہنچائے گا اور سیل کی عملداری کو کم کرے گا۔ B16F10 خلیات سے H2O2۔ جب میلانوسائٹس کو H2O2 علاج کا نشانہ بنایا گیا تو، ان کی قابل عملیت اور اپوپٹوسس کی شرح بدتر ہوگئی، لیکن CDP پریٹریٹمنٹ اس رجحان کو جزوی طور پر تبدیل کر سکتا ہے۔ ایک ہی وقت میں، ROS کو صاف کیا گیا تھا۔ جیسا کہ اطلاع دی گئی ہے، NRF2/ARE اینٹی آکسیڈیشن پاتھ وے ایکٹیویشن جلد کے خلیوں میں ROS کی صفائی کا ایک بڑا طریقہ ہے۔ 14 ہمارے تجربات میں، میلانوسائٹس میں NRF2 اور HO-1 کے پروٹین کی سطح کو بغیر CDP کے H2O2 کے علاج کے بعد اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا۔ اس کا مطلب ہے کہ H2O2-کی حوصلہ افزائیاوکسیڈیٹیو تناؤNRF2/HO-1 راستے کو چالو کر سکتا ہے، لیکن یہ ریڈوکس توازن برقرار رکھنے اور سیل کو چوٹ سے بچانے کے لیے ناکافی ہے۔ تاہم، CDP پریٹریٹمنٹ نے NRF2/HO-1 اینٹی آکسیڈیشن کے راستے کو بڑھایا اور توازن بحال کیا۔ اس طرح، ہم تجویز کرتے ہیں کہ CDP NRF2/HO-1 اینٹی آکسیڈیشن پاتھ وے کو چالو کرنے اور ROS کی صفائی کے ذریعے میلانوسائٹس کو آکسیڈیٹیو تناؤ کی چوٹ سے بچا سکتا ہے۔

یہ ہماری پروڈکٹ ہے۔

مزید معلومات کے لیے، براہ کرم یہاں کلک کریں۔

ہم نے یہ پایاسی ڈی پیمیلانوسائٹس میں صرف علاج کا ROS یا NRF2/HO-1 پر کوئی اثر نہیں ہوتا ہے۔ یہ نتیجہ بتاتا ہے کہ CDP ریڈوکس بیلنس کو متاثر کر سکتا ہے۔اوکسیڈیٹیو تناؤلیکن عام حالات نہیں۔ مزید برآں، NRF2/HO-1 اینٹی آکسیڈیشن پاتھ وے کو مبینہ طور پر PI3K، NF-κB، اور MAPK سگنلنگ پاتھ ویز کے ذریعے ریگولیٹ کیا جاتا ہے۔ 47,48 ہمارے مطالعے میں، CDP MAPK سگنلنگ پاتھ وے کو فعال کرنے میں کامیاب رہا۔ یہ ممکن ہے کہ CDP NRF2/HO-1 راستے کو اپ ریگولیٹ کرنے والے MAPKs کے ذریعے فعال کر سکے۔ جیسا کہ سلومینسکی نے رپورٹ کیا، میلانوسائٹس تناؤ کے سینسر ہیں جو ایک ریگولیٹری نیٹ ورک میں شامل ہیں، اور ان کے افعال ماحول کے جواب میں تیزی سے تبدیل ہو سکتے ہیں۔melanogenesisعام حالات میں اینٹی آکسیڈینٹ سسٹم کو متاثر کیے بغیر لیکن آکسیڈیٹیو تناؤ کے حالات میں ریڈوکس توازن کو بحال کرتا ہے۔ لہذا، میلانوسائٹ کے فنکشن اور بقا کو CDP کے ذریعے دو مختلف طریقوں سے برقرار رکھا جا سکتا ہے۔ سی ڈی پی میلانوسائٹس کو ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھنے میں مدد کرتا ہے، جو اس کا ایک اہم کام بھی ہے۔melanogenesis.50,51

آخر میں،سی ڈی پیMAPK سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کرنے کے ذریعے میلانوسائٹس کے میلانوجینیسیس کو فروغ دے سکتا ہے۔ CDP NRF2/HO-1 اینٹی آکسیڈینٹ پاتھ وے کو چالو کرنے اور انٹرا سیلولر ROS کی صفائی کے ذریعے میلانوسائٹ کی بقا کو بہتر بنا سکتا ہے۔اوکسیڈیٹیو تناؤحالات ہمارے نتائج معنی خیز ہیں کیونکہ وہ یہ ظاہر کرتے ہیں کہ CDP دونوں کو فروغ دے سکتے ہیں۔melanogenesisاور melanocytes کو آکسیڈیٹیو تناؤ کی چوٹ سے بچاتا ہے، جو ممکنہ طور پر میلانوسائٹ کی خرابی اور نقصان کا ذمہ دار ہے۔ اس مطالعے کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ سی ڈی پی ڈیپگمنٹیشن بیماریوں کے علاج میں ایک نئی دوا ہو سکتی ہے۔