Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides H22 Hepatocellular Carcinoma Cells میں Apoptosis کو اکساتا ہے خارجی اور اندرونی سگنلنگ دونوں راستوں کے ذریعے

مزید معلومات کے لیے:ali.ma@wecistanche.com

پینگفی یوآن¹ ET رحمہ اللہ تعالی

خلاصہ

پس منظر: Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight ایک روایتی چینی دوا ہے جو Tamarix کے پودے کی جڑوں کو طفیلی بناتی ہے اور اسے مردانہ کمزوری، بانجھ پن، جسم کی کمزوری، اور ٹانک کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ تاہم، ہیپاٹو سیلولر کارسنوما پر اس کا اینٹی ٹیومر اثر ابھی تک مضمر ہے۔ یہاں، ہم نے اینٹیٹیمر اثر کی تحقیقات کی۔Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides(CTPG) H22 ہیپاٹو سیلولر کارسنوما خلیوں پر وٹرو اور ویوو دونوں میں اور اس کے میکانزم۔

طریقے:مورفولوجی، عملداری،apoptosis، سیل سائیکل، اور H22 خلیوں کی مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت (Δψm) کا بالترتیب الٹی مائکروسکوپی، MTT پرکھ، اور بہاؤ سائٹوومیٹری کے ذریعے تجزیہ کیا گیا۔ میں پروٹین کا اظہار اور ایکٹیویشنapoptosisراستے کا پتہ مغربی دھبے سے لگایا گیا تھا۔ ان ویوو اینٹیٹیمر اثر کا اندازہ ٹیومر ماؤس ماڈل میں کیا گیا تھا جو مرد کنمنگ چوہوں کا استعمال کرتے ہوئے قائم کیا گیا تھا۔

نتائج:سی ٹی پی جی کے علاج نے خوراک اور وقت پر منحصر انداز میں H22 سیل کی نشوونما کو نمایاں طور پر دبایا، جو کہ اضافہ کے ساتھ منسلک تھا۔apoptosisاور G0/G1 اور G2/M مراحل میں سیل سائیکل گرفتاری۔ مزید یہ کہ سی ٹی پی جی سے علاج شدہ H22 خلیوں میں کروموسومل سنکشیشن دیکھی گئی۔ CTPG علاج نے نمایاں طور پر Bax/Bcl-2 تناسب میں اضافہ کیا، Δψm کو کم کیا، اور cytochrome c کی رہائی کو بڑھایا۔ خارجی اور اندرونی سگنلنگ دونوں راستوں میں کلیویڈ کیسپیس-8 اور کیسپیس-9 کی سطحوں میں نمایاں طور پر اضافہ کیا گیا تھا جس نے PARP کو ​​کلیو کرنے کے لیے ترتیب وار کیسپیس-7 اور-3 کو چالو کیا تھا۔ آخر میں، CTPG نے چوہوں میں H22 خلیوں کی نشوونما کو روکا اور ٹیومر چوہوں کی بقا کی شرح کو بہتر کیا۔

نتائج: ان نتائج نے تجویز کیا کہ CTPG نے خارجی اور اندرونی دونوں کے ذریعے H22 سیل کی نشوونما کو دبایا۔apoptosisراستے

مطلوبہ الفاظ: Cistanche tubulosa, فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈز, اپوپٹوسس، سگنلنگ پاتھ وے، ٹیومر ماؤس ماڈل

نامیاتی Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides کے لیے کلک کریں۔

پس منظر

جگر کا کینسر کینسر کے واقعات میں چھٹا اور دنیا بھر میں کینسر سے ہونے والی اموات میں چوتھے نمبر پر ہے۔ مزید یہ کہ، یہ کینسر کے واقعات کے لیے چوتھے اور کم سماجی آبادیاتی انڈیکس والے ممالک میں کینسر کی شرح اموات کے لیے پہلے نمبر پر ہے [1]۔ چین میں، جگر کا کینسر 2015 میں کینسر سے متعلق موت کی تیسری بڑی وجہ ہے [2]۔ دنیا میں 90 فیصد سے زیادہ بنیادی جگر کے کینسر ہیپاٹو سیلولر کارسنوما (HCC) ہیں [3]۔ فی الحال، ہیپاٹک ریسیکشن ایچ سی سی کے علاج کے لیے اہم آپشن ہے۔ تاہم، ایچ سی سی کے 30 فیصد سے بھی کم مریض علاجی ہیپاٹک ریسیکشن کے معیار پر پورا اترتے ہیں اور اعادہ کی اعلی شرح کی وجہ سے مجموعی طور پر 5-سال کی بقا کی شرح اب بھی کم ہے 35-50 فیصد [4, 5] . انٹرمیڈیٹ سے ایڈوانس ایچ سی سی والے مریضوں کے لیے علاج کے اختیارات کی دستیابی بہت محدود ہے۔ صرافینیب، ایک مالیکیولر ٹارگٹ ڈرگ، کو ایف ڈی اے نے ایڈوانسڈ ایچ سی سی کے لیے پہلی لائن علاج کے طور پر منظور کیا ہے۔ تاہم، صرافینیب صرف 3 ماہ کی بقا کو طول دیتا ہے اور ردعمل کی شرح 4 فیصد سے کم ہے [6, 7]۔ ایچ سی سی کے خلاف نئی دوائیں یا حکمت عملی تیار کرنے کی اشد ضرورت ہے۔

روایتی چینی ادویات (TCM) کو اکیلے یا دیگر حکمت عملیوں کے ساتھ HCC کے علاج کے لیے استعمال کیا گیا ہے اور طبی فوائد کو دکھایا گیا ہے جس میں طویل عرصے تک زندہ رہنے کا وقت، زندگی کے معیار میں بہتری، منفی ردعمل میں کمی، اور اسی طرح [8، 9] شامل ہیں۔ Cistanche، TCM کی ایک قسم، میں مختلف حیاتیاتی افعال ہوتے ہیں، جیسے اینٹی آکسیڈیشن، اینٹی سوزش، اینٹی ایجنگ، اور نیورو پروٹیکشن [10، 11]۔فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈزCistanche کے اہم فعال اجزاء سمجھے جاتے ہیں، جن میں مختلف سرگرمیاں ہوتی ہیں جن میں اینٹی آکسیڈیشن، اینٹی سوزش، ہیپاٹو پروٹیکشن، اور نیورو پروٹیکشن [12–15] شامل ہیں۔ ہمارے گروپ نے اس کی اطلاع دی ہے۔Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides(CTPG) کو آمادہ کر سکتا ہے۔apoptosisمیلانوما B16-F10 خلیوں میں اور چوہوں میں ٹیومر کی نشوونما کو روکتا ہے [16]۔ اس مطالعے میں، ہم نے وٹرو اور ویوو دونوں میں HCC H22 خلیوں پر CTPG کے اینٹیٹیمر اثر کی پیمائش کی اور اس کے طریقہ کار کی چھان بین کی۔ ہم نے پایا کہ CTPG(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)حوصلہ افزائیapoptosisH22 خلیوں میں خارجی اور اندرونی سگنلنگ راستوں کے ذریعے اور چوہوں میں H22 ٹیومر کی نشوونما کو دبایا۔

طریقے

سیل لائن

ماؤس H22 ہیپاٹو سیلولر کارسنوما خلیات سنکیانگ کلی لیبارٹری آف بائیولوجیکل ریسورسز اینڈ جینیٹک انجینئرنگ، سنکیانگ یونیورسٹی (ارمچی، سنکیانگ، چین) سے حاصل کیے گئے تھے اور RPMI 1640 میڈیم (Gibco) میں 100 U/ml 100 U/ml penicill کے ساتھ مکمل کیے گئے تھے۔ اسٹریپٹومائسن، اور 5 فیصد CO2 کے مرطوب ماحول میں 37 ڈگری پر 10 فیصد حرارت سے غیر فعال فیٹل بووائن سیرم (Gibco)۔

ایم ٹی ٹی پرکھ

سی ٹی پی جی(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Xinjiang, China) اور CTPG کے بڑے مرکبات سے خریدا گیا تھا۔(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی [16] کے ذریعہ اہل اور مقدار کا تعین کیا گیا تھا۔ سیل کی قابل عملیت کا اندازہ 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) (Sigma, St. Louis, MO سے کیا گیا تھا۔ ، USA) پرکھ۔ H22 خلیوں کو 2 × 1 کی کثافت پر 96-کنویں کی پلیٹوں میں ٹیکہ لگایا گیا0100 ul میڈیم فی کنواں میں 4 سیل اور 37 ڈگری پر کلچر کیا گیا۔ 24 گھنٹے کے بعد، خلیات کو بالترتیب 24، 48 اور 72 گھنٹے کے لیے CTPG (0,100, 200, 300 اور 400 ug/ml) یا 0.3 فیصد DMSO (400 ug/ml CTPG میں اس کے برابر) کے ساتھ علاج کیا گیا۔ 7 منٹ کے لیے 1000 rpm پر سینٹرفیوگریشن کے بعد، سپرناٹینٹ کو ضائع کر دیا گیا اور ہر کنویں میں 100 ul MTT محلول (5 mg/ml) شامل کیا گیا۔ پلیٹوں کو 4 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا اور تشکیل شدہ فارمازان کرسٹل کو تحلیل کرنے کے لیے 100 ul DMSO شامل کیا گیا۔ OD490 قدروں کا پتہ ایک 96-ویل مائکروپلیٹ ریڈر (Bio-Rad Laboratories, CA, USA) کے ذریعے لگایا گیا تھا۔ سیل کی عملداری کا حساب اس فارمولے کے مطابق کیا گیا تھا: سیل کی قابل عملیت ( فیصد )=(OD علاج شدہ/ OD غیر علاج شدہ) x 100 فیصد۔

Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides

اپوپٹوسس کا پتہ لگانا

H22 خلیوں کا علاج CTPG کے مختلف ارتکاز کے ساتھ کیا گیا۔(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)({{0}}، 100، 200، 300، اور 400 ug/ml) یا 0.3 فیصد DMSO 24 گھنٹے کے لیے، اور پھر Annexin VFITC/Propidium iodide (PI) سے داغداراپوپٹوسسکارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق ڈیٹیکشن کٹ (YEASEN، چین)۔ نمونوں کا تجزیہ بہاؤ سائٹوومیٹری (BD FACSCalibur، USA) کے ذریعے کیا گیا۔

مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت کا پتہ لگانا

H22 خلیوں کا علاج CTPG کے مختلف ارتکاز کے ساتھ کیا گیا۔(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)(0، 200، اور 400 ug/ml) 24 گھنٹے کے لیے، اور پھر 37 ڈگری پر 20 منٹ کے لیے جھلی سے پارمیبل JC-1 ڈائی (بیو ٹائم، چین) سے داغ دیا گیا۔ JC-1 بفر کے ساتھ دو بار دھونے کے بعد، نمونوں کو 300 ul JC-1 بفر کے ساتھ دوبارہ معطل کیا گیا اور فلو سائٹومیٹری (BD FACSCalibur، USA) کے ذریعے تجزیہ کیا گیا۔

سیل سائیکل کا تجزیہ

H22 خلیوں کو 60 ملی میٹر کلچر ڈشز میں ٹیکہ لگایا گیا تھا اور 24 گھنٹے کے لیے CTPG (0، 100,200، 300 اور 400 ug/ml) یا 0.3 فیصد DMSO کے ساتھ علاج کیا گیا تھا۔ . تمام خلیوں کو جمع کیا گیا تھا اور پی بی ایس کے ساتھ دو بار دھویا گیا تھا۔ سیلز کو 70 فیصد آئس کولڈ ایتھنول میں −20 ڈگری پر 2 گھنٹے کے لیے طے کیا گیا تھا اور پی بی ایس کے ساتھ دو بار دھویا گیا تھا، پھر 300 ul Propidium iodide/RNase سٹیننگ بفر (BD Biosciences) میں دوبارہ معطل کر دیا گیا تھا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 10 منٹ کے بعد، فلو سائٹومیٹری (BD FACSCalibur، USA) کے ذریعے نمونے جمع کیے گئے، اور ModFit LT 3.0 سافٹ ویئر کے ساتھ سیل سائیکل کی تقسیم کا تجزیہ کیا گیا۔

phenylethanoid glycosidesمیںCistanche tubulosa

Hoechst 33,258 سٹیننگ

H22 سیل نیوکلی کی شکلیاتی تبدیلیوں کا تجزیہ جھلی سے چلنے والے ڈی این اے بائنڈنگ ڈائی ہوچسٹ 33,258 سٹیننگ کے ذریعے کیا گیا۔ H22 خلیات کو 2 ملی لیٹر میڈیم میں 1 × 105 خلیات / کنویں کے ارتکاز پر 6-کنویں پلیٹ میں سیڈ کیا گیا تھا۔ 60 فیصد ~ 70 فیصد سنگم کے بعد، خلیوں کا علاج CTPG سے کیا گیا۔(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)(0، 100، 200، 300، اور 400 ug/ml) 24 گھنٹے کے لیے۔ خلیوں کو جمع کیا گیا اور 10 منٹ کے لئے 4 ڈگری پر 4 فیصد آئس کولڈ پیرافارمیلڈہائڈ کے ساتھ طے کیا گیا۔ پی بی ایس سے دھونے کے بعد، خلیات کو ہوچسٹ 33,258 (بیو ٹائم، چین) سے 10 منٹ کے لیے 4 ڈگری پر داغ دیا گیا۔ نمونے ایک الٹی فلوروسینس مائکروسکوپ (نیکون ایکلیپس Ti-E، جاپان) کے ذریعے دیکھے گئے۔

مغربی دھبہ

اینٹی کیسپیس-3، اینٹی کلیویڈ کیسپیس-3، اینٹی بی سی ایل-2، اور اینٹی بیکس کو Beyotime Biotech Co., Ltd. (شنگھائی، چین) سے خریدا گیا تھا۔ اینٹی کیسپیس-7، اینٹی کلیویڈ-کیسپیس-7،اینٹی کیسپیس-8، اینٹی کلیویڈ-کیسپیس-8، اینٹی کیسپیس-9، اینٹی Cleaved-caspase-9، anti PARP، anti-cleaved PARP، antimouse IgG-HRP اور اینٹی خرگوش IgG-HRP سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی سے خریدے گئے تھے۔ اینٹی- -ایکٹین بیجنگ ComWin Biotech Co., Ltd. (بیجنگ، چین) سے خریدی گئی تھی۔

H22 خلیوں کا علاج CTPG کے مختلف ارتکاز کے ساتھ کیا گیا۔(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)({{0}}، 100، 200، 300 اور 400 ug/ml) یا 24 گھنٹے کے لیے 0.3 فیصد DMSO۔ سیلز کو سیل لائسس سلوشن RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) کے ساتھ 30 منٹ تک برف پر جمع کیا گیا اور لیس کیا گیا۔ سپرنٹینٹس کو جمع کرنے کے لیے نمونے (12،{10}} جی 15 منٹ کے لیے 4 ڈگری پر) کاٹے گئے اور پروٹین کی تعداد کو بی سی اے کٹ (تھرمو فشر سائنٹیفک، یو ایس اے) سے ماپا گیا۔ ہر نمونے میں پروٹین کی مساوی مقدار کو 12 فیصد SDS-PAGE کے ذریعے الگ تھلگ کر کے PVDF جھلیوں (Biosharp، China) میں منتقل کر دیا گیا تھا۔ ٹی بی ایس ٹی بفر کے ساتھ بلاک کرنے کے بعد 5 فیصد نان فیٹ دودھ پر مشتمل تھا، جھلیوں کو بالترتیب ہارسریڈش پیرو آکسیڈیز (HRP) سے منسلک بنیادی اینٹی باڈیز اور سیکنڈری اینٹی باڈیز کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ ٹی بی ایس ٹی کے ساتھ دھونے کے بعد، ای سی ایل پرکھ کٹ (بیو ٹائم، چین) کے ذریعے ٹارگٹ پروٹینز کا پتہ چلا۔

جانوروں اور اخلاقیات کا بیان

6-8 ہفتے پرانے نر کنمنگ چوہوں کو اینیمل لیبارٹری سنٹر، سنکیانگ میڈیکل یونیورسٹی (ارمچی، سنکیانگ، چین) سے خریدا گیا تھا۔ چوہوں کو سنکیانگ یونیورسٹی کی معیاری درجہ حرارت پر قابو پانے والے، ہلکے سائیکل والے جانوروں کی سہولت میں رکھا گیا تھا۔ تمام جانوروں کی تحقیق سنکیانگ یونیورسٹی کی جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کمیٹی کے رہنما اصولوں کے مطابق کی گئی۔ پروٹوکول کو سنکیانگ یونیورسٹی کی سنکیانگ کلی لیبارٹری آف بائیولوجیکل ریسورسز اینڈ جینیٹک انجینئرنگ (BRGE-AE001) کی جانوروں کے تجربات کی اخلاقیات سے متعلق کمیٹی نے منظور کیا۔

ٹیومر ماؤس کا مطالعہ

ٹیومر ماؤس ماڈل کو شامل کرنے کے لیے، نر کنمنگ چوہوں کو 100 ul PBS میں 1 × 10 6 H22 خلیات کے ساتھ دائیں طرف کے اندر داخل کیا گیا۔ 3 دن کے بعد، چوہوں کو تصادفی طور پر 3 گروپوں (7 چوہوں/گروپ) میں تقسیم کیا گیا۔ کنٹرول گروپ کو ٹیومر کے ارد گرد 0.1 ملی لیٹر ڈی ایم ایس او کے ساتھ انجکشن لگایا گیا تھا۔ CTPG-200 اور CTPG-400 گروپوں کو 200 یا 400 mg/kg CTPG کے ساتھ ذیلی طور پر انجیکشن لگایا گیا تھا۔(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)ٹیومر کے ارد گرد 0.1 ملی لیٹر DMSO میں۔ چوہوں کا علاج ہر 2 دن میں 21 دن تک کیا جاتا تھا۔ ٹیومر کے سائز کو 25 دن تک کیلیپرز کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا اور ٹیومر کے حجم کا حساب فارمولے کے مطابق کیا گیا: ٹیومر کا حجم (mm3)=(لمبائی × چوڑائی2)/2۔ 25 دن کے بعد، اس تحقیق کے اختتام تک ٹیومر چوہوں کی بقا کی ہر روز نگرانی کی گئی۔

شماریاتی تجزیہ

شماریاتی اہمیت کا تخمینہ علاج اور کنٹرول گروپس کے درمیان فرق کے یک طرفہ تجزیہ سے لگایا گیا۔ تمام اعداد و شمار کو اوسط ± معیاری انحراف (SD) کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ p < 0.05="" کو="" شماریاتی="" لحاظ="" سے="" اہم="" سمجھا="" جاتا="">

نتائج

سی ٹی پی جی(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)وٹرو میں H22 خلیوں کی عملداری کو کم کیا۔

CTPG کے اینٹیٹیمر اثر کو دریافت کرنے کے لئے(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)HCC پر، H22 خلیوں کا علاج وٹرو میں CTPG (0، 100، 200، 300، اور 400 ug/ml) کے مختلف ارتکاز کے ساتھ کیا گیا۔ 24 گھنٹے کے بعد، ایک الٹی خوردبین کا استعمال کرتے ہوئے H22 خلیوں کی شکل کا مشاہدہ کیا گیا۔ ہم نے پایا کہ CTPG علاج کے ذریعہ H22 خلیوں کی شکل کو ڈرامائی طور پر تبدیل کیا گیا تھا۔ بڑھتی ہوئی CTPG ارتکاز کے ساتھ، خلیات چھوٹے اور گول ہو گئے اور سیل نمبر بھی بہت کم ہو گئے (تصویر 1a)۔ MTT پرکھ بالترتیب 24، 48، اور 72 h کے لئے CTPG علاج کے بعد H22 خلیوں کی عملداری کا تجزیہ کرنے کے لئے استعمال کیا گیا تھا۔ سی ٹی پی جی(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)خوراک پر منحصر اور وقت پر منحصر انداز میں H22 سیل کی عملداری کو نمایاں طور پر کم کیا گیا (تصویر 1b)۔ سی ٹی پی جی(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)300 ug/ml پر بہترین روک تھام کی شرح پر پہنچا (تصویر 1c)۔ H22 سیلز کے لیے CTPG کے IC50 کی قدریں 24 h پر 236 ug/ml اور 48h پر 169.8 ug/ml ہیں۔

سی ٹی پی جی(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)H22 خلیوں میں حوصلہ افزائی apoptosis

اس بات کی جانچ کرنے کے لئے کہ آیا H22 خلیوں کی کم ہونے والی عملداری کی شمولیت سے ثالثی کی گئی ہے۔apoptosis، H22 خلیوں کا علاج CTPG کی مختلف ارتکاز (0,100, 200, 300, اور 400 ug/ml) کے ساتھ 24 گھنٹے تک کیا گیا اور PI اور Annexin V کے ساتھ داغ دیا گیا۔ بہاؤ سائٹومیٹری کے نتائج سے ظاہر ہوا کہ CTPG(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)نمایاں طور پر حوصلہ افزائیapoptosisH22 خلیات (بشمول ابتدائی اور دیر سےapoptosisخوراک پر منحصر انداز میں (تصویر 2a)۔ اگرچہ CTPG کی اعلی خوراک(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)H22 خلیوں کی نیکروسس میں بھی نمایاں اضافہ ہوا، نیکروسس H22 خلیوں کی نشوونما کو روکنے میں ایک معمولی کردار ادا کرتا ہے کیونکہ اس کے کم تناسب (8.3 فیصد) کے مقابلے میںapoptosis(52.6 فیصد)۔ مزید، H22 خلیوں کے کل پروٹین کو CTPG کے بعد الگ تھلگ کر دیا گیا تھا۔(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)علاج اور اینٹی اپوپٹوٹک بی سیل لیمفوما 2 (بی سی ایل-2) اور پروپوپٹوٹک بی سی ایل-2- سے وابستہ ایکس پروٹین (بیکس) کے تاثرات کا مغربی دھبے سے پتہ چلا۔ گرے اسکیل اسکیننگ ڈیٹا نے ظاہر کیا کہ Bax اور Bcl-2 کے اظہار کی سطحیں بالترتیب بڑھی اور کم ہوئیں۔ Bax/Bcl-2 تناسب میں نمایاں اضافہ ہوا تھا (تصویر 2b)۔ یہ نتائج تجویز کرتے ہیں کہ CTPG حوصلہ افزائی کرتا ہے۔apoptosisH22 خلیوں میں۔

سی ٹی پی جی(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)H22 خلیوں میں کروموسومل سنکشیشن اور سیل سائیکل گرفتاری کو اکساتا ہے۔

یہ اطلاع دی گئی ہے کہ منشیات کے ذریعے ڈی این اے کو پہنچنے والے نقصان اور سیل سائیکل گرفتاری ٹیومر سیل کی نشوونما کو روک سکتی ہے۔apoptosisٹیومر کے خلیوں میں [17، 18]۔ CTPG کے بعد H22 خلیوں میں نیوکلی کی شکل کا پتہ لگانا(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)24 گھنٹے کے لئے علاج، H22 خلیوں کو ہوچسٹ 33،342 نے داغ دیا تھا اور الٹی فلوروسینٹ مائکروسکوپی کا استعمال کرتے ہوئے مشاہدہ کیا تھا۔ سی ٹی پی جی(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)علاج شدہ خلیات نے نیوکلیئ کے چمکدار گاڑھا کرومیٹن کی خوراک پر منحصر اضافہ دکھایا، جبکہ علاج نہ کیے جانے والے خلیات نے یکساں طور پر داغ دار نیوکللی (تصویر 3a) کو دکھایا۔ H22 خلیوں میں سیل سائیکل کی تقسیم کا مزید تجزیہ پی آئی سٹیننگ کے ذریعے 24 گھنٹے تک CTPG علاج کے بعد کیا گیا۔ جیسا کہ تصویر 3b، CTPG میں دکھایا گیا ہے۔(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)علاج نے G0/G1- اور G2/M-فیز سیلز کے تناسب کو نمایاں طور پر بڑھایا اور S-phase سیلز کے تناسب کو نمایاں طور پر کم کیا، یہ تجویز کرتا ہے کہ CTPG(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)حوصلہ افزائی G0/G1 اور G2/M مرحلے کی گرفتاری H22 خلیوں میں۔ CTPG کی اعلی خوراک نے ذیلی G1 خلیوں کے تناسب میں بھی نمایاں اضافہ کیا۔

سی ٹی پی جی(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت میں کمی اور سائٹوکوم سی کی رہائی میں اضافہ

مائٹوکونڈریل پر منحصر راستہ شامل کرنے میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے۔apoptosis[19، 20]۔ مائٹوکونڈریل میمبرین پوٹینشل (Δψm) میں تبدیلیاں ہو سکتی ہیں۔

JC-1 کے ذریعے نگرانی کی گئی JC-1 مجموعی (سرخ فلوروسینس) کی وجہ سے داغ دھبے Δψm [21] کی کمی کے ساتھ مونومر (سبز فلوروسینس) میں بکھر سکتے ہیں۔ CTPG کے بعد(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)24 گھنٹے کے لیے علاج، H22 خلیات JC-1 ڈائی کے ذریعے داغدار تھے۔ فلو سائٹومیٹری ڈیٹا سے پتہ چلتا ہے کہ FL-2 چینل میں سرخ فلوروسینس اور FL-1 چینل میں سبز فلوروسینس میں نمایاں طور پر کمی اور CTPG پر اضافہ ہوا ہے۔(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)علاج. PE−FITC پلس خلیوں کے تناسب میں نمایاں اضافہ ہوا تھا (تصویر 4a)، تجویز کرتا ہے کہ CTPG(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)H22 خلیوں میں Δψm کو کم کیا۔ یہ بڑھے ہوئے Bax/Bcl-2 تناسب سے مطابقت رکھتا ہے۔ اس کے نتیجے میں، ہم نے مشاہدہ کیا کہ CTPG پر cytochrome c کی رہائی میں نمایاں اضافہ ہوا ہے۔(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)علاج (تصویر 4b)۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ CTPG جزوی طور پر آمادہ کر سکتا ہے۔apoptosisH22 خلیوں میں مائٹوکونڈریل پر منحصر (اندرونی) راستے کے ذریعے۔

سی ٹی پی جی نے کیسپیس پاتھ وے کو چالو کیا اور ڈی این اے کی مرمت کو روکا۔

اگلا، CTPG کی طرف سے حوصلہ افزائی کیسپیس کی ایکٹیویشن(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)دونوں خارجی اور اندرونی سگنلنگ راستوں کے ذریعے تجزیہ کیا گیا۔ CTPG کے بعد(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)24 گھنٹے کے علاج میں، کل پروٹین کو H22 خلیوں سے الگ تھلگ کر دیا گیا تھا اور مغربی دھبے کے ذریعے پرو اور کلیویڈ کیسپیسز کی سطح کا پتہ چلا تھا۔ غیر علاج شدہ یا DMSO کنٹرول کے مقابلے میں، CTPG(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)علاج نے نہ صرف کلیویڈ کیسپیس کی سطح کو نمایاں طور پر اپ ریگولیٹ کیا-8 (خارجی راستہ) بلکہ کلیویڈ کیسپیس-9 (انٹرنسک پاتھ وے) (تصویر 5) کی سطح کو بھی۔ ترتیب وار، ایکٹیویٹڈ کیسپیس-8 اور -9 نے ڈاون اسٹریم پرو کیسپیس کو کلیو کیا-3 اور -7 جو کہ تصویر 5 میں دیکھا گیا تھا۔ ایکٹیویٹڈ کیسپیس-3 نے ڈی این اے کو کلیو کیا۔ پولی (ADP-ribose) پولیمریز (PARP) کا انزائم مرمت کریں تاکہ DNA کی مرمت کو روکا جا سکے اور DNA کے نقصان کو جمع کیا جا سکے جیسا کہ تصویر 3a میں دیکھا گیا ہے۔ ان نتائج نے اشارہ کیا کہ CTPG(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)حوصلہ افزائیapoptosisH22 خلیوں میں خارجی اور اندرونی سگنلنگ راستوں کے ذریعے۔

سی ٹی پی جی(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)Vivo میں H22 HCC کی نشوونما کو دباتا ہے اور ٹیومر چوہوں کی بقا کی شرح کو بہتر بناتا ہے۔

آخر میں، CTPG کا اینٹیٹیمر اثر(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)HCC پر ٹیومر ماؤس ماڈل میں تشخیص کیا گیا تھا، جو H22 خلیوں کے subcutaneous انجیکشن کے ذریعہ قائم کیا گیا تھا۔ H22 سیل انجیکشن کے 3 دن کے بعد، ٹیومر چوہوں کا علاج CTPG سے کیا گیا۔(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)8 بار. چوہوں کے جسمانی وزن اور ٹیومر کے سائز کی نشاندہی کردہ ٹائم پوائنٹس پر نگرانی کی گئی۔ جیسا کہ تصویر 6a میں دکھایا گیا ہے، ہر گروپ میں چوہوں کے جسمانی وزن میں کوئی خاص فرق نہیں ہے، یہ تجویز کرتا ہے کہ CTPG کی منتخب خوراکیں(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)کوئی واضح ضمنی اثرات نہیں ہیں. دلچسپ بات یہ ہے کہ 200 mg/kg اور 400 mg/kg CTPG دونوں کے ساتھ علاج کیے گئے چوہوں میں ٹیومر کی نشوونما کو نمایاں طور پر روکا گیا تھا (تصویر 6b)۔ اس کے علاوہ، CTPG کی دو خوراکیں(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)تجربے کے اختتام پر کنٹرول گروپ (0/7) کے مقابلے میں علاج نے ٹیومر چوہوں (3/7, 3/7) کی بقا کو بہت بہتر بنایا (تصویر 6b)۔ ہم نے یہ بھی پایا کہ CTPG نے خوراک پر منحصر انداز میں نر کنمنگ چوہوں سے الگ تھلگ splenocytes کے پھیلاؤ کو نمایاں طور پر بڑھایا ہے (تصویر 6c)، تجویز کرتا ہے کہ CTPG(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)ایک immunostimulatory اثر ہے.

بحث

TCM ایک طویل تاریخ سے کینسر سمیت مختلف بیماریوں کے علاج کے لیے استعمال ہوتا رہا ہے۔ یہ اطلاع دی گئی ہے کہ TCM دلانا کر سکتا ہے۔apoptosisٹیومر کے خلیوں کی مختلف اقسام میں دونوں خارجی (ڈیتھ ریسیپٹر ثالثی) اور اندرونی (مائٹوکونڈریا پر منحصر) سگنلنگ راستوں کے ذریعے اینٹیٹیمر اثرات [22-25] کے ذریعے۔ دو راستے بالترتیب کیسپیس-8 اور -9 کو چالو کر سکتے ہیں [24, 26]۔ یہاں، ہم نے پایا کہ CTPG(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)apoptosis اور سیل سائیکل گرفتاری کی شمولیت کے ذریعے H22 سیل کی نمو کو نمایاں طور پر دبایا۔ کلیویڈ کیسپیس-8 اور -9 کی سطحوں کو CTPG کے ذریعہ نمایاں طور پر اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا۔(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)علاج، یہ تجویز کرتا ہے کہ دونوں خارجی اور اندرونی سگنلنگ راستے شامل کرنے میں شامل تھے۔apoptosis. ہمارے پچھلے مطالعہ سے پتہ چلتا ہے کہ CTPG(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)میلانوما B16-میں مائٹوکونڈریل پر منحصر راستے کے ذریعہ F10 خلیوں کی حوصلہ افزائی اپوپٹوس جس نے کلیویڈ کیسپیس کی سطح کو بڑھایا-9 لیکن کیسپیس نہیں-8 [16]۔ سی ٹی پی جی(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)مختلف قسم کے ٹیومر سیلز میں سگنلنگ کے الگ الگ راستے چالو کر سکتے ہیں۔

مائٹوکونڈریل جھلی کی سالمیت کو BCL-2 پروٹین فیملی کے اراکین بشمول Bax اور Bcl-2 [27, 28] کے ذریعے سختی سے منظم کیا جاتا ہے۔ بیکس سے Bcl-2 کا تناسب مائٹوکونڈریا پر منحصر ہونے میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔apoptosisراستہ [29]۔ CTPG کی طرف سے علاج H22 خلیات میں(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides), Bax/Bcl-2 تناسب کو نمایاں طور پر اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا، جو Δψm کی کمی اور اس مطالعہ میں مشاہدہ کردہ سائٹوکوم c کی رہائی کا سبب بن سکتا ہے۔ نتیجتاً، پرو کیسپیس-9 کو کلیو کر کے فعال کر دیا گیا۔ آخر کار، فعال کیسپیس کے آغاز کرنے والوں نے-8 اور -9 نے ڈی این اے کی مرمت کو روکنے کے لیے PARP کو ​​صاف کرنے کے لیے کیسپیس کے پھانسی دینے والے کو چالو کیا-3۔ ایک ساتھ مل کر، ان نتائج نے تجویز کیا کہ CTPG کی حوصلہ افزائی کی گئی۔apoptosisH22 خلیوں میں خارجی اور اندرونی سگنلنگ راستوں کے ذریعے۔ ٹیومر ماؤس ماڈل میں، CTPG نے H22 HCC کی نشوونما کو نمایاں طور پر دبایا اور ٹیومر چوہوں کی بقا کو بہت بہتر کیا۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ سی ٹی پی جی(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)خوراک پر انحصار کرتے ہوئے کنمنگ چوہوں سے سپلینوکیٹس کے پھیلاؤ کو فروغ دیا، جو ہمارے پچھلے مطالعہ [16] کے مطابق ہے۔ ان نتائج نے تجویز کیا کہ CTPG براہ راست اینٹیٹیمر اثر اور بالواسطہ مدافعتی اضافہ دونوں کے ذریعہ چوہوں میں H22 HCC کی نشوونما کو دبا سکتا ہے۔

Cistanche tululosaمصنوعات

نتائج

سی ٹی پی جی(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)وٹرو اور ویوو دونوں میں H22 خلیوں کی نشوونما کو دبایا اور حوصلہ افزائی کی۔apoptosisH22 خلیوں میں خارجی اور اندرونی سگنلنگ راستوں کے ذریعے۔ ان اعداد و شمار نے اشارہ کیا کہ CTPG(Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides)ایچ سی سی کے علاج کے لیے ممکنہ امیدوار ہو سکتا ہے۔

مخففات

بکس: BCL-2-متعلقہ X پروٹین؛ بی سی ایل-2: بی سیل لیمفوما 2؛ CTPG:Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides; ایچ سی سی: ہیپاٹو سیلولر کارسنوما؛ HRP: ہارسریڈش پیرو آکسیڈیز؛ MTT: 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide; PARP: پولی (ADP-ribose) پولیمریز کا DNA مرمت کا انزائم؛ TCM: روایتی چینی ادویات؛ Δψm: مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت

فنڈنگ

اس کام کو سنکیانگ اویگور خودمختار علاقے کے اعلیٰ سطحی ٹیلنٹ تعارفی پروجیکٹ، جے ایل کو چینی نیشنل نیچرل سائنس فاؤنڈیشن گرانٹ (31460241) اور سنکیانگ یونیورسٹی کے ڈاکٹریٹ اسٹارٹ اپ فنڈ (BS160261 سے XW اور BS1502 سے BS1502) کی حمایت حاصل تھی۔ YL)۔

ڈیٹا اور مواد کی دستیابی

اس مطالعے کا خام ڈیٹا متعلقہ مصنف کی معقول درخواست پر دستیاب ہے۔

مصنفین کی شراکتیں۔

JL اور JL نے تجربات کو ڈیزائن کیا۔ PY، JL، AA، اور YY نے تجربات کئے۔ LX، XW، اور YL نے ڈیٹا کا تجزیہ کیا۔ پی وائی، جے ایل، اور جے ایل نے مخطوطہ لکھا۔ تمام مصنفین نے تعاون کیا اور حتمی مخطوطہ کی منظوری دی۔

اخلاقیات کی منظوری

جانوروں کے مطالعے کو سنکیانگ یونیورسٹی کی سنکیانگ کلی لیبارٹری آف بائیولوجیکل ریسورسز اینڈ جینیٹک انجینئرنگ کی جانوروں کے تجربات کی اخلاقیات پر کمیٹی نے منظور کیا تھا۔

مسابقتی مفادات

مصنفین اعلان کرتے ہیں کہ ان کی کوئی مسابقتی دلچسپی نہیں ہے۔

پبلیشر کا نوٹ

Springer Nature شائع شدہ نقشوں اور ادارہ جاتی وابستگیوں میں دائرہ اختیار کے دعووں کے حوالے سے غیر جانبدار رہتا ہے۔

مصنف کی تفصیلات

¹حیاتیاتی وسائل اور جینیاتی انجینئرنگ کی سنکیانگ کلیدی لیبارٹری، کالج آف لائف سائنس اینڈ ٹیکنالوجی، سنکیانگ یونیورسٹی، 666 شینگلی روڈ، ارومچی، سنکیانگ 830046، چین۔²کالج آف لائف سائنس، سنکیانگ نارمل یونیورسٹی، 102 ژینی روڈ، ارومچی 830054، سنکیانگ، چین۔³سنکیانگ میڈیکل یونیورسٹی سے منسلک ٹیومر ہسپتال، ارومچی 830011، چین۔

Cistanche tululosaمصنوعات

منجانب:'Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosidesدلاناapoptosisH22 ہیپاٹو سیلولر کارسنوما خلیوں میں خارجی اور اندرونی دونوں راستوں کے ذریعے پینگفی یوآن 1 ایٹ ال کے ذریعہ

---یوآن وغیرہ۔ BMC تکمیلی اور متبادل دوا (2018) 18:275 https://doi.org/10.1186/s12906-018-2201-1

حوالہ جات

1. گلوبل برڈن آف ڈیزیز کینسر کولیبوریشن، فٹزمورس سی، ایلن سی، باربر آر ایم، بیریگارڈ ایل، بھوٹا زیڈ اے، برینر ایچ، ڈیکر ڈی جے، چیمڈ آرچر او، ڈنڈونا آر، وغیرہ۔ کینسر کے عالمی، علاقائی اور قومی واقعات، اموات، زندگی کے ضائع ہونے والے سال، معذوری کے ساتھ زندگی گزارنے کے سال، اور 32 کینسر گروپوں کے لیے معذوری کے مطابق زندگی کے سال، 1990 سے 2015: بیماری کے مطالعہ کے عالمی بوجھ کے لیے ایک منظم تجزیہ۔ JAMA Oncol. 2017؛ 3:524–48۔

2. Chen W, Zheng R, Baade PD, Zhang S, Zeng H, Bray F, Jemal A, Yu XQ, He J. Cancer statistics in China, 2015. CA Cancer J Clin. 2016؛ 66:115–32.3۔ یورپی ایسوسی ایشن فار دی اسٹڈی آف دی لیور، یورپی تنظیم برائے تحقیق اور کینسر کے علاج۔ EASL-EORTC کلینیکل پریکٹس کے رہنما خطوط: ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کا انتظام۔ جے ہیپٹول۔ 2012؛ 56:908–43۔

4. Roayaie S, Obeidat K, Sposito C, Mariani L, Bhoori S, Pellegrinelli A, Labow D, Llovet JM, Schwartz M, Mazzaferro V. hepatocellular cancer کا ریسیکشن 2 سینٹی میٹر سے کم یا اس کے برابر: دو مغربی مراکز سے نتائج۔ ہیپاٹولوجی. 2013؛57:1426–35۔

5. Ting CT، Cheng YY، Tsai TH. ہیپاٹوٹوکسٹیٹی، ہسٹوپیتھولوجی، اور چوہوں میں فارماکوکینیٹکس پر روایتی ہیپاٹو پروٹیکٹو فارمولیشن اور سورفینیب کے درمیان جڑی بوٹیوں سے دوائی کا تعامل۔ مالیکیولز۔ 2017;22:E1034۔

6. Llovet JM, Ricci S, Mazzaferro V, Hilgard P, Gane E, Blanc JF, de Oliveira AC, Santoro A, Raoul JL, Forner A, et al. اعلی درجے کی ہیپاٹو سیلولر کارسنوما میں صرافینیب۔ این انگل جے میڈ۔ 2008؛ 359:378-90۔

7. Cheng AL، Kang YK، Chen Z، Tsao CJ، Qin S، Kim JS، Luo R، Feng J، Ye S، Yang TS، et al. ایشیا پیسیفک ریجن میں ایڈوانس ہیپاٹو سیلولر کارسنوما والے مریضوں میں صرافینیب کی افادیت اور حفاظت: ایک مرحلہ III بے ترتیب، ڈبل بلائنڈ، پلیسبو کنٹرول ٹرائل۔ لینسیٹ آنکول۔ 2009؛ 10:25-34۔

8. Shi Z, Song T, Wan Y, Xie J, Yan Y, Shi K, Du Y, Shang L. روایتی کیڑے کی چینی ادویات کا ایک منظم جائزہ اور میٹا تجزیہ غیر جراحی ہیپاٹو سیلولر کارسنوما تھراپی کے لئے مشترکہ کیمو تھراپی۔ سائنس Rep.2017؛ 7:4355۔

9. Yang Z, Liao X, Lu Y, Xu Q, Tang B, Chen X, Yu Y. روایتی چینی ادویات کے ساتھ ایڈ آن تھراپی نتائج کو بہتر بناتی ہے اور ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کے منفی واقعات کو کم کرتی ہے: بے ترتیب کنٹرول ٹرائلز کا میٹا تجزیہ۔ Evid پر مبنی تکمیلی متبادل میڈ۔ 2017؛ 2017: 3428253۔

10. Lin LW، Hsieh MT، Tsai FH، Wang WH، Wu CR. چوہوں میں Cistanche deserticola کی وجہ سے اینٹی نوسیسیپٹیو اور سوزش کی سرگرمی۔ جے ایتھنوفرماکول۔ 2002؛ 83:177-82۔

11. وو سی آر، لن ایچ سی، ایس یو ایم ایچ۔ کے پانی کے نچوڑ کی طرف سے الٹCistanche tubulosaالزائمر کی بیماری جیسے چوہے کے ماڈل میں طرز عمل کے خسارے سے: امائلائڈ جمع اور مرکزی نیورو ٹرانسمیٹر فنکشن کے لئے مطابقت۔ بی ایم سی کمپلیمنٹ الٹرن میڈ۔ 2014؛ 14:202۔

12. جیانگ وائی، ٹو پی ایف۔ Cistanche پرجاتیوں میں کیمیائی اجزاء کا تجزیہ۔ JChromatogr A. 2009؛ 1216:1970-9۔

13. موریکاوا T، Pan Y، Ninomiya K، Imura K، Matsuda H، Yoshikawa M، Yuan D، Muraoka O. صحرائی پودے سے ہیپاٹوپروٹیکٹو سرگرمی کے ساتھ Acylated phenylethanoid oligo glycosidesCistanche tubulosa.بائیو آرگ میڈ کیم۔ 2010; 18:1882–90۔

14. Nan ZD، Zeng KW، Shi SP، Zhao MB، Jiang Y، Tu PF.فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈزصحرائے تارم میں مہذب Cistanche deserticola کے تنوں سے سوزش مخالف سرگرمیوں کے ساتھ۔ Fitoterapia.2013؛ 89:167–74.

15. Deng M, Zhao J, Tu P, Jiang Y, Li Z, Wang Y. Echinacoside TNF سے SHSY5Y نیورونل خلیات کو دوبارہ شروع کرتا ہے۔apoptosis. یور جے فارماکول۔ 2004؛505:11–8۔

16. Li J، Li J، Aipire A، Gao L، Huo S، Luo J، Zhang F.فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈزسےCistanche tubulosaB16- F10 خلیوں کی نشوونما کو وٹرو میں اور vivo دونوں میں شامل کرنے سے روکتا ہےapoptosisمائٹوکونڈریل پر منحصر راستے کے ذریعے۔ جے کینسر۔ 2016؛ 7:1877–87۔

17. Shang HS, Chang CH, Chou YR, Yeh MY, Au MK, Lu HF, Chu YL, Chou HM, Chou HC, Shih YL, et al. Curcumin ڈی این اے کو نقصان پہنچاتا ہے اور HeLa انسانی سروائیکل کینسر کے خلیوں میں پروٹین کے اظہار کو متاثر کرتا ہے۔ Oncol Rep. 2016؛ 36:2207–15۔

18. Wang R, Zhang Q, Peng X, Zhou C, Zhong Y, Chen X, Qiu Y, Jin M, Gong M, Kong D. Stellettin B نے G1 کو گرفتار کیا،apoptosis، اور PI3K/Akt/mTOR راستے کو مسدود کرنے کے ذریعے انسانی غیر چھوٹے سیل پھیپھڑوں کے کینسر A549 خلیوں میں آٹوفجی۔ سائنس کا نمائندہ 2016؛ 6:27071۔

19. سنہا کے، داس جے، پال پی بی، سل پی سی۔ آکسیڈیٹیو تناؤ: مائٹوکونڈریا پر منحصر اور مائٹوکونڈریا سے آزاد راستےapoptosis. آرک ٹاکسیکول۔ 2013; 87:1157–80۔

20. Zhang YS, Shen Q, Li J. روایتی چینی ادویات غذائی نالی کے کینسر کے علاج کے لیے اپوپٹوٹک میکانزم کو نشانہ بناتی ہیں۔ ایکٹا فارماکول گناہ۔ 2016; 37:295–302۔

21. Chong ZZ, Lin SH, Li F, Maiese K. sirtuin inhibitor nicotinamide AKT، BAD، PARP، اور mitochondrial سے منسلک "اینٹی اپوپٹوٹک" راستے کے ذریعے شدید anoxic چوٹ کے دوران نیورونل سیل کی بقا کو بڑھاتا ہے۔ Curr Neurovasc Res. 2005؛ 2:271-85۔

22. Hu B, Wang SS, Du Q. ہیپاٹو کارسینوما کی روک تھام اور علاج کے لیے روایتی چینی ادویات: بینچ سے پلنگ تک۔ ورلڈ جے ہیپاٹول۔ 2015؛ 7:1209–32۔

23. Hu B, An HM, Wang SS, Chen JJ, Xu L. hepatocellular carcinoma کے خلاف چینی جڑی بوٹیوں کے مرکبات کے روک تھام اور علاج کے اثرات۔ مالیکیولز۔ 2016؛ 21:142۔

24. Xu H, Zhao X, Liu X, Xu P, Zhang K, Lin X. روایتی چینی ادویات کے اینٹیٹیمر اثرات جو سیلولر اپوپٹوٹک راستے کو نشانہ بناتے ہیں۔ ڈرگ ڈیس ڈیول تھیر۔ 2015؛ 9:2735–44۔

25. Li-Weber M. ٹارگٹنگapoptosisچینی طب کے ذریعہ کینسر کے راستے۔ کینسر لیٹ. 2013؛ 332:304-12۔

26. سو جی، شی وائی۔اپوپٹوسسسگنلنگ راستے اور لیمفوسائٹ ہومیوسٹاسس۔ سیل ریس 2007؛ 17:759-71۔

27. ٹیٹ ایس ڈبلیو، گرین ڈی آر۔ مائٹوکونڈریا اور سیل کی موت: بیرونی جھلی پارمیبلائزیشن اور اس سے آگے۔ نیٹ ریو مول سیل بائیول۔ 2010؛ 11:621–32۔

28. Galluzzi L, Kepp O, Kroemer G. Mitochondria: خطرے کے سگنلنگ کے ماسٹر ریگولیٹرز۔ نیٹ ریو مول سیل بائیول۔ 2012؛ 13:780–8۔

29. Martinou JC، Youle RJ. مائٹوکونڈریا میںapoptosis: بی سی ایل-2 فیملی ممبرز اور مائٹوکونڈریل ڈائنامکس۔ دیو سیل۔ 2011؛ ​​21:92–101۔