Cistanche Tubulosa Apoptosis اور Glial Cell-derived Neurotrophic Factor کے ریگولیشن کے ذریعے Dopaminergic Neurons کی حفاظت کرتا ہے: Vivo اور in Vitro-Ⅱ

طرز عمل کے ٹیسٹ

تیراکی ٹیسٹ (Zhu et al., 2014)

چوہوں میں جسم کی نقل و حرکت کے کوآرڈینیشن کو تیراکی کے ٹیسٹ سے ماپا گیا۔ چوہوں کو انفرادی طور پر ایک پانی کے ٹینک (اونچائی میں 25 سینٹی میٹر اور قطر میں 10 سینٹی میٹر) میں رکھا گیا تھا جس میں 10 سینٹی میٹر پانی تھا اور ان کی ساکن مدت کو 5 منٹ سے زیادہ ریکارڈ کرنے کے لیے پرسکون ماحول میں ٹیسٹ کیا گیا تھا۔

اوپن فیلڈ ٹیسٹ (Kawai et al.، 1998)

اوپن فیلڈ ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے لوکوموٹر کی سرگرمی کی پیمائش کی گئی۔ چوہوں کا تجربہ ایک پرسکون اور مدھم روشنی والے ماحول میں کیا گیا اور انفرادی طور پر 30 سینٹی میٹر × 30 سینٹی میٹر × 15 سینٹی میٹر شفاف ایکریلک کنٹینر میں 6 سینٹی میٹر × 6 سینٹی میٹر علیحدگی گرڈ کے ساتھ نیچے رکھا گیا۔ چوہوں کو ماحول کے مطابق ڈھالنے کے لیے 10 منٹ کا وقت دیا گیا تھا اور پھر گرڈ نمبر کی ایمبولیشن اور انفرادی چوہوں کی پرورش کی فریکوئنسی کی اوسط قدریں حاصل کرنے کے لیے لگاتار پانچ بار پیمائش کی گئی۔

جنسی فعل کو بہتر بنانے کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا PHGS75% ECH 30% ACT 12%

دماغی بافتوں کے نمونے لینے

ٹشو کے نمونے لینے سے پہلے، چوہوں کو پانی تک مفت رسائی کے ساتھ ایڈ لیبیٹم کھلایا گیا اور مسلسل 14 دن تک منشیات کی مداخلت حاصل کی۔ ہر گروپ میں چار چوہوں کا انتخاب کیا گیا اور جلدی سے سر کاٹ دیا گیا۔ ہر جانور سے SN (Bregma: −2.75 mm −2.92 mm) کو الگ تھلگ کرکے برف پر رکھا گیا تھا۔ کسی بھی خون کو نکالنے کے لیے دماغ کے ٹشوز کو 0.9% آئس کولڈ سوڈیم کلورائیڈ محلول سے دھویا گیا اور −80◦C پر ذخیرہ کرنے سے پہلے فلٹر پیپر پر خشک کیا گیا۔ ہر گروپ کے چار چوہوں کو انٹراپریٹونلی طور پر بے ہوشی کی گئی اور ان کے سینے کھل گئے۔ اس کے بعد ہر جانور کے بائیں ویںٹرکل میں ایک انفیوژن سوئی ڈالی گئی۔ گردشی نظام میں خون نکالنے کے لیے، دائیں ایٹریل اپینڈیج کو کاٹا گیا اور جانور کو 4◦C نارمل نمکین ملایا گیا جب تک کہ جگر پیلا نہ ہو جائے تاکہ پے درپے پرفیوژن کو یقینی بنایا جا سکے۔ ایک بار جب دائیں ایٹریئم کا اخراج واضح ہو گیا تو، ہر جانور کو 4% پیرافارمیلڈہائیڈ فکسٹیو کے ساتھ پرفیوز کیا گیا۔ پرفیوژن کے بعد، ہر جانور کے دماغ کے ٹشو کو احتیاط سے الگ کیا گیا اور 24 گھنٹے کے لیے 4% پیرافارمیلڈہائیڈ میں پوسٹ فکس کیا گیا۔ اس کے بعد دماغ کے فکسڈ ٹشوز کو بہتے ہوئے پانی کے نیچے دھویا گیا، ایتھنول محلول کی درجہ بندی کی سیریز میں پانی کی کمی کی گئی، اور زائلین محلول میں صاف کر دی گئی۔ اس کے بعد پیرافین وسرجن اور ایمبیڈنگ کی گئی۔

HPLC کے ذریعے ماپا گیا DA کی مقدار میں تبدیلیاں

ہر گروپ کے نینو پاؤڈرڈ SN کو برف کے غسل میں رکھا گیا تھا جس میں 0.9% سوڈیم کلورائد محلول (1:9 تناسب) تھا۔ الٹراسونک سیل ڈسپوٹر کا استعمال کرتے ہوئے دماغی بافتوں کو ہم آہنگ کیا گیا اور سپرنٹنٹ حاصل کرنے کے لیے 4◦C پر 20 منٹ کے لیے 1200 rpm پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ HPLC کے لیے، 30◦C کالم درجہ حرارت پر ایک Hypersil AA-ODS کالم (2.1 mm × 200 mm, 5 µm) استعمال کیا گیا تھا۔ فلوروسینس کا پتہ لگانے کا کام 280 nm λex اور 340 nm λem پر کیا گیا تھا۔ انجیکشن کا حجم 10 μL تھا۔

TH، GDNF، GFR 1 اور Ret کا اظہار امیونو ہسٹو کیمسٹری کے ذریعے پتہ چلا

پیرافین سیکشنز (5 µm موٹی) دماغ کے انفرادی بافتوں کو ہر جانور سے الگ تھلگ کیا گیا تھا اور شیشے کی سلائیڈوں کو چپٹا کرنے اور ان پر قائم رہنے کے لیے 40◦C گرم پانی کے غسل میں رکھا گیا تھا۔ تمام ٹشو سلائیڈز کو 60◦C اوون میں 3–6 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا، اس کے بعد زائلین ڈی ویکسنگ، گریڈینٹ ایتھنول ڈی ہائیڈریشن، اور سائٹرک ایسڈ بفر میں انکیوبیٹ کرکے اور مائکروویو میں 20 منٹ تک گرم کرکے اینٹیجن کی بازیافت کی گئی تھی۔ اس کے بعد ٹشو سلائیڈز کو کمرے کے درجہ حرارت پر 3٪ H2O2 محلول میں 10 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ پی بی ایس میں تین بار دھونے کے بعد، ٹشو سلائیڈز کو 20 منٹ تک کمرے کے درجہ حرارت پر بند چیمبر میں نارمل سیرم کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ امیونو ہسٹو کیمیکل سٹیننگ کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق کی گئی تھی۔ ایک Motic Med 6.0 امیج اینالائزر کو مثبت طور پر داغدار خلیوں میں مربوط نظری کثافت کی قدر کا حساب لگانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

چوہوں کے دماغی بافتوں میں مغربی دھبے کا تجزیہ

اس مطالعہ نے ٹائروسین ہائیڈروکسیلیس (TH)، GDNF، GFR 1، Ret، Bcl2، اور Bax کے پروٹین اظہار کا اندازہ کیا۔ ہر گروپ کے دماغ کے لائسیٹ کو برف پر 3{{10} منٹ کے لیے ہم آہنگ کیا گیا، اس کے بعد کم درجہ حرارت سینٹرفیوگریشن، 20،000 rpm، 4 ◦C پر سپرنٹنٹ کو جمع کرنے کے لیے 5 منٹ۔ پروٹین کے نمونوں کو 10% SDS-PAGE جیل کا استعمال کرتے ہوئے مستقل دباؤ میں الگ کیا گیا جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے۔ بنیادی اینٹی باڈی کا ارتکاز: TH 0.15 mg/ml، GDNF 0.5 mg/ml، GFR 1 0.8 mg/ml، Ret 0.63 mg/ml، Bcl-2 0.34 mg/ml، اور Bax 0.11 mg/ml طریقہ کار اوپر جیسا تھا۔

نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا فار اینٹی ایجنگ اینٹی الزائمر PHGS75% ECH 30% ایکٹ 12%

شماریاتی تجزیہ

اس مطالعہ نے ڈیٹا پروسیسنگ اور تجزیہ کے لیے SPSS 20.0 شماریاتی سافٹ ویئر کا استعمال کیا۔ پیرامیٹر کی اقدار کو اوسط ± معیاری انحراف (¯x ± S) کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ انووا کو سنگل فیکٹر ڈیٹا کے تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ گروپوں کا موازنہ کرنے کے لیے ایل ایس ڈی یا گیمز-ہاؤل ٹیسٹ استعمال کیا گیا تھا۔ پی< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

نتائج

C. tubulosa Nanopowder کے فعال اجزاء

200-400 nm سکیننگ کی حد میں، C. tubulosa میں ECH اور 330 nm میں VER میں جذب کی زیادہ سے زیادہ چوٹی تھی، جو 20 منٹ کے اندر ظاہر ہوئی۔ ICA میں زیادہ سے زیادہ جذب کی چوٹی 270 nm تھی اور 20 منٹ کے بعد ظاہر ہوئی (شکل 1A)۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ منفی نمونوں نے پتہ لگانے میں مداخلت نہیں کی (شکل 1B)۔ نمونے اور کنٹرول میں ایک جیسی کرومیٹوگرافک چوٹییں تھیں اور منفی نمونے میں کوئی نہیں تھا۔ اس سے ظاہر ہوا کہ نمونے میں موجود دیگر اجزاء نے جزو کی پیمائش میں مداخلت نہیں کی۔ مزید یہ کہ تین اجزاء اور ملحقہ چوٹیاں علیحدگی کی بنیاد پر پہنچ سکتی ہیں اور علیحدگی کی ڈگری 1.5 سے زیادہ تھی۔

C. tubulosa Nanopowder Redused MPP+ - MES23.5 سیلز میں سائٹوٹوکسائٹی

MPP+ کی بڑھتی ہوئی تعداد کے ساتھ MES23.5 خلیات کی عملداری نمایاں طور پر کم ہو گئی تھی۔ شکل 2F MPP+ کے مختلف ارتکاز کی اہم سائٹوٹوکسیٹی کو ظاہر کرتا ہے۔

C. tubulosa nanopowder نے MPP+-کی حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسٹی کو کم کیا اور MES23.5 خلیات کی عملداری کو بڑھایا۔ شکل 2G سے پتہ چلتا ہے کہ 10–250 µg/mL کی C. tubulosa نینو پاؤڈر کی خوراک نے MPP+-علاج شدہ MES23.5 خلیوں پر خوراک پر منحصر حفاظتی اثرات مرتب کیے ہیں۔

C. tubulosa Nanopowder کا سائٹومورفولوجیکل اثر

عام MES23.5 خلیوں میں خلیے کی اچھی چپکنے والی ہوتی تھی اور واضح سیل کی حدود اور synapses کے ساتھ تکلی کی شکل کے تھے۔ MPP+-نقصان پہنچانے والے MES23.5 خلیات میں خلیے کی ناقص چپکنے اور سکڑنا ظاہر ہوا، اور بہت سے کو میڈیا میں کنٹریکٹڈ Synapses کے ساتھ معطل کر دیا گیا۔ یہ خلیے جمع، سکڑ گئے اور اندر خالی جگہوں کے ساتھ گول تھے، اور نیوکلی منتشر یا منہدم ہو گئے تھے۔ C. tubulosa nanopowder نے مختلف مقداروں میں MES23.5 خلیوں کی cytomorphology کو مختلف ڈگریوں میں سیل کے چپکنے اور گاڑیوں کے گروپ کے synaptic کلیئرنس کو بہتر بنا کر بہتر کیا۔ اعلی خوراک والے C. tubulosa ٹریٹمنٹ گروپ میں MES23.5 خلیات نے مورفولوجی کو دکھایا جو عام کنٹرول گروپ (اعداد و شمار 2A–E) سے ملتا جلتا تھا۔

خلیات میں TH اظہار اور اپوپٹوس پر C. tubulosa Nanopowder کا اثر

شکل 3 گاڑیوں کے گروپ میں TH پروٹین کے اظہار میں نمایاں کمی کو ظاہر کرتا ہے۔ C. tubulosa کی مختلف خوراکوں کے ساتھ علاج کیے جانے والے گروپوں میں TH پروٹین کے اظہار میں مختلف طریقے سے اضافہ ہوا۔ تاہم، LSD ٹیسٹ سے پتہ چلتا ہے کہ علاج کیے جانے والے تین گروپوں کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں تھا۔

شکل 4 فلو سائٹومیٹری کا استعمال کرتے ہوئے اپوپٹوس کی تشخیص کے نتائج کو ظاہر کرتی ہے۔ گاڑیوں کے گروپ میں apoptosis کی شرح دوسرے گروپوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھی۔ C. tubulosa nanopowder کی مختلف خوراکوں کے ساتھ علاج کیے جانے والے خلیوں نے گاڑیوں کے گروپ کے مقابلے میں apoptotic شرح میں کمی کی مختلف ڈگریاں ظاہر کیں۔ درمیانی اور زیادہ خوراک والے C. tubulosa ٹریٹمنٹ گروپ کے خلیات میں دوسرے C. tubulosa ٹریٹمنٹ گروپس کے مقابلے میں apoptotic ریٹ میں نمایاں بہتری آئی۔ ایل ایس ڈی ٹیسٹ سے معلوم ہوا کہ دو علاج شدہ گروپوں میں کوئی خاص فرق نہیں تھا لیکن کم خوراک والے گروپ کے درمیان بھی ایک اہم فرق ہے۔

خلیوں میں Bcl2/Bax پروٹین کے اظہار پر C. tubulosa Nanopowder کا اثر

شکل 5 سے پتہ چلتا ہے کہ گاڑیوں کے گروپ کے خلیوں میں Bcl2 پروٹین کا اظہار عام کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھا۔ اس کے برعکس، گاڑیوں کے گروپ کے خلیوں میں بیکس پروٹین کا اظہار عام کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھا۔ C. tubulosa کے علاج کے گروپوں نے Bcl2 پروٹین کے اظہار میں اضافہ اور MPP+-علاج شدہ MES23.5 خلیوں میں Bax پروٹین اظہار میں کمی کو ظاہر کیا۔ تین علاج شدہ گروپوں کے درمیان، ایل ایس ڈی ٹیسٹ میں اہم اختلافات تھے۔ یہ اثرات خوراک پر منحصر تھے۔

طرز عمل کے ٹیسٹ

تیراکی کے ٹیسٹ کے نتائج سے معلوم ہوا کہ گاڑیوں کے گروپ میں چوہوں کا نسبتاً طویل دورانیہ تھا، جو وقت کے ساتھ ساتھ بڑھتا گیا۔ 14 ویں دن، گاڑیوں کے گروپ میں چوہوں کا معمول کے کنٹرول گروپ کے چوہوں کے مقابلے میں کافی طویل اسٹیشنری دورانیہ تھا۔ میں چوہوں کا ساکن دورانیہ

کم خوراکC. tubulosaعلاج کا گروپ گاڑیوں کے گروپ میں موجود چوہوں سے نمایاں طور پر مختلف نہیں تھا۔ تاہم، ہائی ڈوز C. tubulosa ٹریٹمنٹ گروپ میں چوہوں کا سٹیشنری دورانیہ گاڑیوں کے گروپ میں چوہوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھا۔

اوپن فیلڈ ٹیسٹ کے نتائج بتاتے ہیں کہ چوہوں میں MPTP کی وجہ سے نقصان پہنچنے کے بعد، گاڑیوں کے گروپ کے چوہوں نے خود بخود سرگرمی کے لیے اپنی صلاحیت میں نمایاں کمی کا مظاہرہ کیا جیسا کہ پالنے کی فریکوئنسی سے ظاہر ہوتا ہے۔ کے ایک 14-دن کے انتظام کے بعدC. ٹیوبولوسا نینو پاؤڈر، اعتدال پسند اور اعلی خوراک والے علاج والے گروپوں میں چوہوں میں گاڑیوں کے گروپ میں چوہوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ پرورش کی تعدد ہوتی ہے (اعداد و شمار 6A، B)۔

چوہوں میں DA مواد پر C. tubulosa Nanopowder کا اثر

SN کے DA مواد میں تبدیلیوں کا تعین HPLC نے کیا تھا۔ یہ پایا گیا کہ گاڑیوں کے گروپ کے دماغ میں ڈی اے کا مواد نمایاں طور پر کم ہو گیا تھا۔ کم خوراک والے C. tubulosa ٹریٹمنٹ گروپ میں PD چوہوں کے دماغوں میں DA کا مواد گاڑیوں کے گروپ کے چوہوں سے نمایاں طور پر مختلف نہیں تھا۔ البتہ،C. tubulosa علاجخوراک پر منحصر انداز میں PD چوہوں کے دماغوں میں DA کی سطح میں اضافہ ہوا۔ PD چوہوں کے دماغوں میں جن کا علاج زیادہ مقدار میں C. tubulosa کے ساتھ کیا گیا تھا ان میں گاڑیوں کے گروپ (شکل 6C) کے چوہوں کے دماغوں کے مقابلے میں DA کا مواد نمایاں طور پر زیادہ تھا۔

چوہوں میں TH اظہار پر C. tubulosa Nanopowder کا اثر

TH- مثبت خلیوں کی تعداد اور MPTP- حوصلہ افزائی PD چوہوں کے SN میں TH پروٹین اظہار کی سطح کنٹرول گروپ میں چوہوں کے مقابلے میں کم تھی۔ C. tubulosa کے علاج کے بعد، TH-مثبت خلیوں کی تعداد اور MPTP-حوصلہ افزائی PD چوہوں کے SN میں TH پروٹین کے اظہار کی سطح میں اضافہ ہوا، جس میں زیادہ خوراک والے C. tubulosa علاج گروپ اور گاڑیوں کے گروپ کے درمیان نمایاں فرق تھا۔ LSD ٹیسٹ کے ذریعے؛ اور علاج کیے جانے والے تین گروہوں کے درمیان اہم اختلافات تھے (شکل 7)۔

GDNF اور اس کے ریسیپٹرز، GFR 1 اور چوہوں میں ریٹ کے پروٹین اظہار پر C. tubulosa Nanopowder کا اثر

GDNF اور اس کے ریسیپٹرز، GFR 1 اور Ret کے پروٹین ایکسپریشن کا مثبت داغ والے خلیوں میں، امیونو ہسٹو کیمسٹری کا استعمال کرتے ہوئے جائزہ لیا گیا۔ مغربی بلٹ تجزیہ کا استعمال چوہوں کے مختلف گروپوں کے ایس این میں پروٹین کے اظہار کی سطح کا اندازہ کرنے کے لئے کیا گیا تھا۔ پتہ لگانے کے دو طریقوں کا استعمال کرتے ہوئے مختلف گروہوں کے نتائج ایک جیسے تھے۔ گاڑیوں کے گروپ میں چوہوں کے SN میں مثبت داغ والے خلیوں میں GDNF اور اس کے ریسیپٹر پروٹین، GFR 1 اور Ret کا اظہار، عام کنٹرول گروپ میں چوہوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھا۔ C. tubulosa کے علاج کی مختلف خوراکوں نے GDNF-، GFR 1-، اور Ret-positive خلیات (اعداد و شمار 8A–S) کی تعداد میں اضافہ کیا۔

گاڑیوں کے گروپ میں چوہوں کے SN میں GDNF، GFR 1، اور Ret کا پروٹین ایکسپریشن کنٹرول گروپ کے چوہوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھا۔ کے علاج کی تعداد میں اضافہC. tubulosa nanopowerنمایاں طور پر ان پروٹینوں کے اظہار کو بڑھایا۔ اعلی خوراک والے C. tubulosa ٹریٹمنٹ گروپ میں چوہوں کے SN میں GDNF، GFR 1، اور Ret کا پروٹین ایکسپریشن گاڑیوں کے گروپ میں چوہوں کی نسبت نمایاں طور پر زیادہ تھا۔< 0.01; Figures 8T, U). 

چوہوں میں Bcl2/Bax کے پروٹین اظہار پر C. tubulosa Nanopowder کا اثر

بی سی ایل 2 پروٹین ایکسپریشن کو نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا اور گاڑیوں کے گروپ میں چوہوں کے ایس این میں بیکس پروٹین ایکسپریشن کو نمایاں طور پر بڑھایا گیا تھا۔< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

بحث

پی ڈی اور اپوپٹوسس

PD ایک نیوروڈیجینریٹو ڈس آرڈر ہے۔ Zhang et al کے مطابق. (2005)، 55 سال سے زیادہ عمر کی چینی آبادی میں اس کا پھیلاؤ 10.7% اور 65 سال سے زیادہ عمر والوں میں 1.67% ہے۔ عالمی سطح پر بڑھتی عمر کے ساتھ PD مریضوں کی تعداد میں سالانہ اضافہ ہوا ہے، جس سے مریضوں کے خاندانوں پر بھاری مالی بوجھ پڑ رہا ہے۔ اور بڑے پیمانے پر معاشرہ۔ دماغ میں، ڈوپیمینرجک نیوران بنیادی طور پر ڈی اے کی ترکیب اور رطوبت میں شامل ہوتے ہیں۔ وہ مرکزی اعصابی نظام میں وسیع پیمانے پر تقسیم ہوتے ہیں اور بنیادی طور پر SN (80%) میں واقع ہوتے ہیں۔ TH DA کی ترکیب کے لیے اہم شرح کو محدود کرنے والا انزائم ہے۔ اس طرح، TH سرگرمی کی روک تھام ڈی اے کی ترکیب کو کم کرتی ہے (ہوٹ اور والدین، 2007)۔ PD کی اہم پیتھولوجیکل اور بائیو کیمیکل تبدیلیاں SN میں ڈوپیمینجک نیوران کا اپوپٹوس، نگروسٹریٹل ڈی اے میں نمایاں کمی، اور ڈوپامینرجک نیوران میں لیوی باڈیز کی تشکیل (ڈیکسٹر اور جینر، 2013) ہیں۔ PD کی ایٹولوجی میں منسلک جینیاتی عوامل، ماحولیاتی عوامل، اور اعصابی نظام کی عمر بڑھنا شامل ہے (Allam et al.، 2005)۔ جدید طب میں PD کا روگجنن غیر واضح ہے۔ 1960 کی دہائی کے اواخر سے، لیوڈوپا متبادل تھراپی PD کے علاج کے لیے کامیابی کے ساتھ استعمال ہوتی رہی ہے اور اسے PD کے علاج میں ایک اہم موڑ کے طور پر تسلیم کیا گیا ہے۔ تاہم، اس تھراپی کا طویل مدتی استعمال ضمنی اثرات کا سبب بنتا ہے اور تھراپی PD کی بنیادی وجوہات کا علاج نہیں کرتی ہے (Del Sorbo and Albanese, 2008)۔ لہذا، نئی ادویات یا علاج کے طریقوں کے لیے فعال تحقیق جو ڈوپیمینرجک نیوران کے تحفظ کو نشانہ بناتی ہے PD کے علاج کے لیے اہم ہے۔

ابتدائی مطالعات میں، ٹرمینل deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP نک اینڈ لیبلنگ کے اطلاق نے اشارہ کیا کہ PD مریضوں کے SN میں ڈوپامینرجک نیوران کے 0.6%–4.8% نے apoptosis ظاہر کیا (Mochizuki et al., 1996)۔ الیکٹران مائکروسکوپی نے اپوپٹوٹک خصوصیات کو ظاہر کیا، بشمول رنگین گاڑھا ہونا اور ڈوپامینرجک خلیوں میں اپوپٹوٹک باڈیز (اینگلیڈ ایٹ ال۔، 1997)۔ Tompkins et al. (1997) نے PD، AD، اور diffuse Lewy body disease (DLBD) کے مریضوں سے دماغی بافتوں کے پوسٹ مارٹم کا الٹراسٹرکچرل تجزیہ کیا۔ انہوں نے PD اور DLBD مریضوں میں SN کی گھنی پرت میں apoptotic لاشیں پائی، جو PD اور متعلقہ بیماریوں میں نیورونل apoptosis کے حتمی ثبوت فراہم کرتے ہیں۔ لہذا، ڈوپیمینرجک نیوران میں اپوپٹوس کی کمی یا دبانا PD کے علاج کے لیے بنیادی ہے۔

پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ ایم پی ٹی پی نے PD جیسی علامات پیدا کی ہیں۔ ایم پی ٹی پی خون کے دماغ کی رکاوٹ کو عبور کرتا ہے اور ایسٹروائٹس میں قسم B مونوامین آکسیڈیسس کے ذریعہ میٹابولائز ہوتا ہے۔ یہ بعد میں زہریلے MPP+ میں تبدیل ہو جاتا ہے، جو DA ٹرانسپورٹر کے پروٹین کی مقدار کے ذریعے ڈوپامینرجک نیوران کے مائٹوکونڈریا میں جمع ہوتا ہے۔ اس طرح یہ اضافی آکسیجن فری ریڈیکلز پیدا کرتا ہے جو مائٹوکونڈریل سانس کی زنجیر اور ATP ترکیب کی پیچیدہ I سرگرمی کو روکتا ہے۔ یہ واقعات مزید آزاد ریڈیکل تشکیل اور آکسیڈیٹیو تناؤ کے رد عمل کو فروغ دیتے ہیں اور آخر کار ڈوپیمینرجک نیوران کے انحطاط اور موت کا باعث بنتے ہیں۔ لہذا، اس مطالعہ نے MES23.5 ڈوپامینرجک نیورونز اور MPTP میں وٹرو گاڑی قائم کرنے کے لیے MPP+ کا استعمال کیا تاکہ وہیکل ماؤس کو باہمی تصدیق کے لیے آمادہ کیا جا سکے۔ MTT پرکھ کے نتائج کے مطابق، MPP+ نے MES23.5 خلیات کی عملداری کو نمایاں طور پر کم کیا، جس سے یہ تجویز کیا گیا کہ MPP+ ڈوپامینرجک نیوران کے لیے سائٹوٹوکسک تھا۔ نتائج نے یہ بھی ظاہر کیا کہ C. tubulosa نے مؤثر طریقے سے اینٹی اپوپٹوٹک پروٹین کے اظہار کو بڑھایا اور MPP+-حوصلہ افزائی apoptosis کے اضافے کو روکا۔

پی ڈی اور جی ڈی این ایف

جی ڈی این ایف ایک نیوروٹروفک عنصر ہے، جسے پہلے لن ایٹ ال نے الگ تھلگ کیا تھا۔ (1993)۔ لن وغیرہ۔ (1993) نے یہ بھی ظاہر کیا کہ GDNF کے چوہوں کے وسط دماغ میں ڈوپیمینرجک نیوران پر مخصوص غذائی اثرات تھے۔ GDNF، neurturin (NTN)، persephin (PSP)، اور artemin (ART) GDNF فیملی تشکیل دیتے ہیں۔ وہ ساختی طور پر ملتے جلتے اور فعال طور پر متعلقہ سیکریٹری پروٹین ہیں (Kotzbauer et al., 1996; Baloh et al., 1998; Milbrandt et al., 1998; Woodbury et al., 1998)۔

GDNF ریسیپٹر دو اجزاء پر مشتمل ہے۔ پہلا جزو، GFR، glycosylphosphatidylinositol (GPI) کی بیرونی جھلی پر طے کیا جاتا ہے اور کونیکسن کی سطح پر لنگر انداز ہوتا ہے۔ دوسرا جزو ریٹ پروٹین ہے۔ تحقیق سے معلوم ہوا ہے کہ GFR کی چار مختلف قسمیں ہیں: GFR 1، GFR 2، GFR 3 اور GFR 4۔ GFR 1 GDNF کا ایک اعلی تعلقی رسیپٹر ہے (Onochie et al., 2000; Chen et al., 2001; Lindahl وغیرہ، 2001)۔ ریٹ پروٹین جی ڈی این ایف کا ایک فعال ریسیپٹر ہے۔ GDNF کا ہوموڈیمر مالیکیول GFR 1 سے براہ راست جڑتا ہے تاکہ کمپلیکس بنتا ہے اور Ret کے ساتھ تعامل کرتا ہے، جس کے نتیجے میں Ret کی dimerization اور ایکٹیویشن ہوتی ہے۔ Ret کے آٹو فاسفوریلیشن کی وجہ سے، Ret کئی عام TH سگنلنگ راستوں کو چالو کرتا ہے۔ ریٹ پروٹین کی عدم موجودگی میں، GDNF MAPK، PI-3، اور PLC- کے پروٹین فاسفوریلیشن کا سبب بنتا ہے، اس کے علاوہ mRNA اظہار اور C-fos کی فعال سرگرمی اس کے ریسیپٹر پروٹین، GFR 1 (He et al. 2008)۔

مطالعات نے ثابت کیا ہے کہ جی ڈی این ایف کا ڈوپامینرجک نیوران پر سب سے مضبوط حفاظتی اثر تھا (رنگاسامی ایٹ ال۔، 2010؛ کیمپوس ایٹ ال۔، 2012)۔ MPTP اور 6-hydroxydopamine (6-OHDA) کا استعمال کرنے والی گاڑیوں میں ڈوپامینرجک نیورونز کو نقصان پہنچانے کے لیے، GDNF apoptosis کو کم کرکے اور محوری نمو کو فروغ دے کر اسٹیم سیل کی تفریق (Lucas et al., 2012) کی حفاظت کرتا ہے۔ Littrell et al.، 2013)۔ لن وغیرہ۔ (1993) نے ظاہر کیا کہ GDNF نے خاص طور پر نیوران میں DA کے اخراج کو فروغ دینے کے لیے ڈوپامینرجک نیوران کی عملداری، تفریق، اور محوری نمو کو فروغ دیا۔ مطالعہ نے یہ بھی ظاہر کیا کہ GDNF نے نہ صرف شدید زہریلے پن کو روکا بلکہ ڈوپامینرجک نیورونز میں MPP+ یا 6-OHDA کے طویل مدتی زہریلے پن کو بھی کم کیا، مزید یہ کہ تناؤ والے یا خراب خلیوں میں سیل کی موت کو روکا (Yu et al., 2010)۔ اس کے علاوہ، GDNF نے عصبی اسٹیم سیل کے پھیلاؤ اور مڈبرین (لنڈسے، 1995) میں ڈوپامینرجک نیورونز کو ریٹروگریڈ انحطاط سے بچانے کے لیے ڈوپامینرجک نیوران کی طرف تفریق کو فروغ دیا (ہانگ-جوآن ایٹ ال۔، 2011)۔

مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ SN میں GDNF اظہار جانوروں کی گاڑیوں میں نمایاں طور پر کم ہوا تھا (یانگ ایٹ ال۔، 2010)۔ اس سے پتہ چلتا ہے کہ یہ PD چوہوں میں روگجنن کے میکانزم میں سے ایک ہو سکتا ہے۔ 5–15 µg/d GDNF کے لیٹرل وینٹریکل یا MPTP سے متاثرہ گاڑی کے جانور کے سٹرائٹم میں لگاتار تین مہینوں تک انجیکشن نے گاڑی کے جانوروں میں ڈوپامینرجک نظام کی نگروسٹریٹل مرمت کو فروغ دیا (گرونڈین ایٹ ال۔، 2002)۔ جانوروں کی گاڑیوں میں PD کے لیے GDNF کے علاج کے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ GDNF کا دماغ کے مختلف علاقوں میں intracerebral انجیکشن، جیسے SN، caudate nucleus، اور lateral ventricle، PD جانوروں کے ماڈلز کے ساتھ منسلک تحریک کی خرابی میں بہتری، بشمول موٹر سرگرمی میں کمی، پٹھوں کی سختی اور زلزلہ (Grondin et al.، 2002)۔ تاہم، GDNF براہ راست خون کے دماغ کی رکاوٹ سے نہیں گزر سکتا۔ لہذا، GDNF کے مقامی دماغی انجیکشن میں کلینکل ایپلی کیشن میں کافی خطرہ اور مشکلات شامل ہیں۔ کنٹرولڈ ریلیز مائیکرو اسپیئرز، مستقل ریلیز کیپسول، اور وائرل جینز کے ذریعے خارجی GDNF متعارف کرانے کے لیے درخواستوں کا ابھی بھی مطالعہ کیا جا رہا ہے (لیانگ ایٹ ال۔، 2010؛ یانگ ایٹ ال۔، 2010؛ کیو ایٹ ال۔ دماغ میں exogenous GDNF کو متعارف کرانے کے لیے مختلف تکنیکوں کی حدود کو دیکھتے ہوئے، نیورو پروٹیکٹو ایجنٹ جو اینڈوجینس GDNF کی رہائی کو فروغ دیتے ہیں کلینکل ایپلی کیشن کے لیے اہم ہیں۔

پی ڈی اورC. tubulosaنینو پاؤڈر

درمیانی عمر کے بالغوں اور بوڑھوں میں PD زیادہ عام ہے۔ TCM کا نظریہ اس بات پر غور کرتا ہے کہ PD بنیادی طور پر دماغ میں واقع ہے اور بنیادی طور پر اہم توانائی اور خون کی کمی کے علاوہ جگر اور گردے کی کمی کی وجہ سے ہے۔ اس نظریہ کے مطابق، PD علاج کو گردے اور بون میرو کو متحرک کرنے پر توجہ دینی چاہیے۔یانگ وغیرہ۔ (2010)بے ترتیب، ڈبل بلائنڈ، اور پلیسبو کے زیر کنٹرول کلینیکل ٹرائلز کا استعمال کیا اور پتہ چلا کہ میڈوپر اور کڈنی ٹونیفائینگ ریسیپیز کا استعمال کرتے ہوئے امتزاج تھراپی نے PD مریضوں کی موٹر کی خرابی کو دور کیا۔ علاج کا نتیجہ میڈوپر کا استعمال کرتے ہوئے ایک ہی تھراپی سے بہتر تھا۔ PD میں TCM مونو تھراپی یا کمپاؤنڈ نسخے کی علاج کی افادیت کی تصدیق PD جانوروں کے ماڈلز اور کلینیکل ایپلی کیشنز میں ہوئی ہے۔ ٹی سی ایم کی ایپلی کیشنز گردے کو ٹونیفائی کرنے اور خون کی گردش کو فروغ دینے کے لیے میڈوپر کا استعمال کرتے ہوئے PD کے لیے مونو تھراپی کی خوراک کو کم کر دیتی ہیں۔ کچھ مطالعات نے تجویز کیا ہے کہ TCM نے PD کی علامات میں بہتری لائی ہے اور ڈوپامینرجک نیوران کو محفوظ کیا ہے، جو کہ endogenous GDNF اظہار کے فروغ سے گہرا تعلق رہا ہو گا۔Hong-Juan et al.، 2011؛ Qiao et al.، 2012).

اس تحقیق میں استعمال ہونے والا کڈنی ٹونیفائینگ کمپاؤنڈ،C. tubulosaنینو پاؤڈر، مشتملCistanche, epimedium، اورریزوما پولی گونیٹی. جدید تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ کیمیائی ساختCistancheECH ہے، جو MPTP-حوصلہ افزائی PD چوہوں میں SN میں ڈوپیمینرجک نیوران کی حفاظت کرتا ہے اور DA اور DA ٹرانسپورٹر کی کمی کو روکتا ہے (Zhao et al.، 2010)۔ اس کے علاوہ، یہ 6- DA میں OHDA کی حوصلہ افزائی کی کمی کو روکتا ہے اور سٹرائٹل ڈوپامینرجک نیوران (چن وغیرہ، 2007)۔ ایپی میڈیم کیسپیس کو چالو کرنے سے روکتا ہے-3 اور نیورو پروٹیکٹو کردار ادا کرتا ہے (Liu et al.، 2011)۔ Epimedium flavonoids مؤثر طریقے سے اعصابی اسٹیم سیل کے پھیلاؤ اور تفریق کو فروغ دیتے ہیں (یاؤ وغیرہ، 2010).

اس مطالعہ میں،C. tubulosaنینو پاؤڈر نے ایم پی پی کے اضافے کی مخالفت کی۔+- خوراک پر منحصر انداز میں اپوپٹوس کی حوصلہ افزائی۔ اس نے میں TH اظہار کو نمایاں طور پر بہتر کیا۔وٹرو میںگاڑی اور ڈوپیمینرجک نیوران میں اہم اینٹی اپوپٹوٹک اثرات تھے۔ ایم پی ٹی پی کی حوصلہ افزائی والی گاڑی کے چوہوں نے طرز عمل کی خرابی ظاہر کی اور مڈبرین ٹشوز اور ڈی اے کی سطحوں میں ٹی ایچ کے اظہار کو نمایاں طور پر کم کیا، جو کہ PD کی مخصوص پیتھولوجیکل خصوصیات ہیں۔ کی مختلف خوراکیںC. tubulosaنینو پاؤڈر نے اسٹیشنری مدت کو کم کیا، خود مختار سرگرمیوں میں اضافہ کیا، رویے کی خرابی میں بہتری، دماغ میں ڈی اے کی سطح میں اضافہ، اور گاڑیوں میں TH اظہار میں اضافہ کیا۔ ان نتائج نے تجویز کیا کہC. tubulosaنینو پاؤڈر نے ڈوپیمینرجک نیوران میں حفاظتی اثرات مرتب کیے، اس طرح گاڑیوں کے رویے کی خرابی کو بہتر بنایا۔ کی مختلف خوراکیںC. tubulosaنینو پاؤڈر نے گاڑی کے چوہوں کے دماغ میں جی ڈی این ایف پروٹین اور اس کے ریسیپٹر پروٹین کے اظہار میں اضافہ کیا۔ زیادہ خوراکC. tubulosaعلاج نے Bcl2 اظہار کو نمایاں طور پر بڑھا دیا اور Bax اظہار کو کم کیا، جس نے تجویز کیا کہC. tubulosaنینو پاؤڈرMPTP سے تباہ شدہ ماؤس دماغ میں GDNF اظہار اور سراو کو فروغ دے سکتا ہے۔ اس کے علاوہ، یہ ڈوپامینرجک نیوران میں نیورو پروٹیکٹو اثرات مرتب کر سکتا ہے اور GDNF کے نیوروٹروفک سپورٹ رولز کے ذریعے نیورونل اپوپٹوسس کو کم کر سکتا ہے۔

اس مطالعہ نے یہ ظاہر کیا۔C. tubulosaنینو پاؤڈر نے دونوں میں ڈوپیمینجک نیوران میں حفاظتی اثرات مرتب کیے ہیں۔وٹرو میںاورجاندار کےاندراور DA مواد کو بہتر بنانے کے لیے TH اظہار میں اضافہ کیا۔ اس نے ایم پی ٹی پی کی حوصلہ افزائی والے گاڑیوں کے چوہوں میں طرز عمل کی خرابی کو بھی بہتر بنایا، GDNF کے ریگولیٹڈ پروٹین ایکسپریشن اور SN میں اس کے ریسیپٹر پروٹینز، اور PD چوہوں میں اینٹی اپوپٹوٹک اثرات تھے۔ کے طبی اثرات کا بنیادی طریقہ کارC. tubulosaPD میں نینو پاؤڈر دماغ میں endogenous GDNF کے مواد کو بڑھاتا ہے اور اس طرح ڈوپیمینرجک نیوران کو پہنچنے والے نقصان کو کم کرتا ہے۔

جنسی فعل کو بہتر بنانے کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا PHGS75% ECH 30% ایکٹ 12