Oligochaeta Earthworm Lumbricus Terrestris کے Coelomocytes (Linnaeus, 1758) دفاع کی ارتقائی کلید کے طور پر: ایک مورفولوجیکل اسٹڈی

خلاصہ

Metazoans اپنی بقا کے لیے اندرونی دفاع کے کئی میکانزم رکھتے ہیں۔ اندرونی دفاعی نظام حیاتیات کے ساتھ ساتھ تیار ہوا۔ Annelidae میں گردش کرنے والی coelomocytes ہوتی ہیں جو فقاری جانوروں کے phagocytic مدافعتی خلیوں کے مقابلے کے افعال انجام دیتی ہیں۔ متعدد مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ یہ خلیے فاگوسائٹوسس، آپسونائزیشن، اور پیتھوجین کی شناخت کے عمل میں شامل ہیں۔ vertebrate macrophages کی طرح، یہ گردش کرنے والے خلیات جو coelomic cavity سے اعضاء کو پکڑتے ہیں یا پیتھوجینز، ری ایکٹیو آکسیجن اسپیسز (ROS) اور نائٹرک آکسائیڈ (NO) کو سمیٹتے ہیں۔ مزید برآں، وہ مدافعتی ردعمل میں شامل بائیو ایکٹیو پروٹین کی ایک رینج تیار کرتے ہیں اور اپنے لائسوسومل سسٹم کے ذریعے سم ربائی کے افعال انجام دیتے ہیں۔

Coelomocytes ہدف کے خلیات اور antimicrobial پیپٹائڈس کی رہائی کے خلاف لیتھک رد عمل میں بھی حصہ لے سکتے ہیں۔ ہمارا مطالعہ امیونو ہسٹو کیمیکل طور پر ایپیڈرمل میں بکھرے ہوئے Lumbricus terrestris کے coelomocytes کی شناخت کرتا ہے اور نیچے کی کنیکٹیو پرت، دونوں طول بلد میں اور ہموار پٹھوں کی تہہ میں، پہلی بار TLR2، CD14، اور -Tubulin کے لیے immunoreactive۔ TLR2 اور CD14 ایک دوسرے کے ساتھ مکمل طور پر جمع نہیں ہیں، یہ تجویز کرتے ہیں کہ یہ coelomocytes دو الگ الگ خاندانوں سے تعلق رکھتے ہیں۔ Annelidae coelomocytes پر ان مدافعتی مالیکیولز کا اظہار ان Oligochaeta protostomes کے اندرونی دفاعی نظام میں ان کے اہم کردار کی تصدیق کرتا ہے، جو ان ریسیپٹرز کے فائیلوجنیٹک تحفظ کی تجویز کرتا ہے۔ یہ اعداد و شمار اینیلیڈا کے اندرونی دفاعی نظام اور کشیرکا جانوروں میں مدافعتی نظام کے پیچیدہ میکانزم کی تفہیم میں مزید بصیرت فراہم کر سکتے ہیں۔

کوئلوموسائٹس کا استثنیٰ سے گہرا تعلق ہے۔ Coelomocytes مدافعتی نظام سے متعلق خلیات ہیں. وہ جسم کی مدافعتی صلاحیت کو منظم اور بڑھانے کے لیے مختلف قسم کے مدافعتی عوامل، جیسے سائٹوکائنز، انٹرلییوکنز، اینٹیجنز اور اینٹی باڈیز کو خارج کر سکتے ہیں۔

Coelomocytes مختلف قسم کے مدافعتی افعال ادا کرتے ہیں، بشمول سیلولر مدافعتی ردعمل کو اینٹیجن پیش کرنے والے خلیوں کے طور پر منظم کرنا، پیتھوجینز اور غیر معمولی خلیوں کو براہ راست مارنا، اور سوزش اور مدافعتی ردعمل کے ضابطے میں حصہ لینا۔ اس کے علاوہ، کچھ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ coelomocytes مدافعتی میموری خلیوں کو جمع کرکے ممکنہ پیتھوجینز کے خلاف قوت مدافعت کو بھی بہتر بنا سکتے ہیں، اس طرح جسم کی قوت مدافعت میں بہتری آتی ہے۔

اس لیے جسم کی قوت مدافعت کے لیے coelomocytes کے معمول کے افعال اور مقدار کو برقرار رکھنا بہت ضروری ہے۔ ایک ہی وقت میں، coelomocytes کے مدافعتی فنکشن کو منظم اور بڑھا کر، جسم کی قوت مدافعت کو بھی بہتر بنایا جا سکتا ہے، تاکہ مختلف بیماریوں کو بہتر طریقے سے روکا جا سکے اور ان کا علاج کیا جا سکے۔ اس سے ہم استثنیٰ کی اہمیت کو دیکھ سکتے ہیں۔ Cistanche قوت مدافعت کو بڑھا سکتا ہے۔ Cistanche مختلف قسم کے اینٹی آکسیڈنٹ مادوں سے بھرپور ہے، جیسے وٹامن سی، وٹامن سی، کیروٹینائڈز وغیرہ۔ یہ اجزاء آزاد ریڈیکلز کو ختم کر سکتے ہیں، آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کر سکتے ہیں اور قوت مدافعت کو بہتر بنا سکتے ہیں۔ نظام مزاحمت.

cistanche tubulosa فوائد پر کلک کریں۔

مطلوبہ الفاظ

Annelid، Coelomocytes، کیچڑ، ارتقاء، استثنیٰ۔

تعارف

اندرونی دفاعی میکانزم میٹازوان میں میزبان کی بقا کی اجازت دیتے ہیں۔ یہ میکانزم تیزی سے پیچیدہ ہوتے جاتے ہیں جیسے جیسے حیاتیات تیار ہوتے ہیں۔ کشیراتی ڈیوٹروسٹومز کے برعکس، پروٹوسٹوم میں انکولی قوت مدافعت کی کمی ہوتی ہے، جو ان کے دفاع کو فطری قوت مدافعت پر مبنی بناتے ہیں [56]۔ کشیرکا میں بیکٹیریا اور مائکروجنزموں کے خلاف دفاع کی ابتدائی لائن پیدائشی مدافعتی خلیوں اور مالیکیولز کا فوری فعال ہونا ہے۔ حال ہی میں، invertebrates فطری قوت مدافعت کے تجزیہ کے امیدوار بن گئے ہیں تاکہ کشیرکا انکولی مدافعتی ردعمل کی حکمت عملیوں اور پیچیدگیوں کو ظاہر کیا جا سکے۔ Invertebrates نے متعدد فعال مدافعتی میکانزم تیار کیے ہیں جن میں antimicrobial peptides، coagulation، phagocytosis، اور encapsulation reactions [20, 24] کی پیداوار شامل ہیں۔ یہ میکانزم "پیٹرن ریکگنیشن ریسیپٹرز" (PRRs) پر منحصر ہیں، پیدائشی مدافعتی مالیکیول جو "خود" کو "غیر خود" جھلی کے اجزاء سے امتیاز کر سکتے ہیں۔

"پیتھوجین سے وابستہ مالیکیولر پیٹرن" (PAMPs) کی پہچان ضروری سگنلنگ پاتھ ویز کے آغاز کو منظم کرتی ہے، جن میں انکوڈنگ سوزش ثالثوں، antimicrobial peptides، اور phagocytosis regulators [32] کے فعال ہونے تک۔ Oligochaetes annelids (کینچوڑے) تقابلی امیونولوجی کے لیے ایک نمونہ بن چکے ہیں، اور جونکوں کی طرح، زمینی اور آبی ماحولیاتی بائیو مانیٹرنگ (B.-T. [48, 52, 53, 72] کے لیے استعمال کیے جاتے ہیں۔ ، اور خطرناک ماحولیاتی مائکروجنزموں کے خلاف موثر دفاعی طریقہ کار۔ دفاع کی پہلی مکینیکل – حیاتیاتی لائن، جو اینیلڈز کے جسم کو بیرونی ماحول سے الگ کرتی ہے، ٹیگومنٹ ہے، جو کہ ایپیڈرمس اور پٹھوں کی تہوں پر مشتمل ہے۔ mucopolysaccharides اور پروٹین، جو ایک antimicrobial رکاوٹ کے طور پر کام کرتے ہیں [20]۔

کینچوڑوں میں، سیلولر اور مزاحیہ مدافعتی نظام پہلی بار میٹازوئن کے ارتقاء میں ایک ساتھ کام کرتے ہیں۔ coelomic cavity میں موجود سیال کو humoral immunological سرگرمیوں کے لیے ذمہ دار سمجھا جاتا ہے۔ کینچوں کی coelomic cavity مائعات سے بھری ہوتی ہے جس میں آزاد اور گھومنے والے coelomocytes اور ان کے رنگین مجموعے ہوتے ہیں، جنہیں براؤن باڈیز کہا جاتا ہے، حملہ آور بیکٹیریا اور ذرات کی باقیات کے انکیپسولیشن کی پیداوار ہے۔ کئی حیاتیاتی عمل جن میں ہیمولٹک، پروٹولوٹک، سائٹوٹوکسک، اور اینٹی بیکٹیریل شامل ہیں، کیچڑ کے کوئلومک سیال کے ذریعے انجام پاتے ہیں [19, 24, 29]۔ coelom بیرونی ماحول کے ساتھ ڈورسل pores اور جوڑے ہوئے nephridial tubules کے ذریعے براہ راست رابطہ کرتا ہے، جو میٹابولائٹس کو خارج کرتے ہیں۔ یہ pores بیکٹیریا اور ختم ہونے والے coelomocytes کے خاتمے میں بھی شامل ہیں۔ تناؤ کے حالات میں، کوئلومک سیال اور معلق خلیات کو انٹراکولونک دباؤ میں اضافے سے تیزی سے باہر نکالا جا سکتا ہے [24]۔

کیچوں کے Coelomocytes سیلولر فطری قوت مدافعت کا ایک لازمی عنصر ہیں۔ یہ خلیے مورفولوجی اور فنکشن [33] دونوں میں کشیرکا لیوکوائٹس سے مشابہت رکھتے ہیں۔ Coelomocytes وسیع پیمانے پر کام انجام دیتے ہیں، بشمول سیل cytotoxicity، encapsulation، اور phagocytosis۔ انہیں دو بنیادی ذیلی آبادیوں میں تقسیم کیا جاسکتا ہے: میلانوسائٹس اور امیبوسائٹس (ہائیلین اور دانے دار) [33]۔ ہائیلین اور دانے دار امیبوسائٹس فگوسائٹوسس اور انکیپسولیشن میں شامل ہیں، مختلف PRRs کا اظہار کرتے ہیں [23، 60]۔ یہ گردش کرنے والے خلیے جو کہ coelomic cavity سے ٹشوز میں منتقل ہوتے ہیں، vertebrate macrophages، engulfing or encapsulating pathogens، reactive oxygen species (ROS)، اور نائٹرک آکسائیڈ (NO) [39] سے بہت ملتے جلتے ہیں۔ Eleocytes بائیو ایکٹیو پروٹین کی ایک وسیع رینج تیار کرتے ہیں جو مزاحیہ مدافعتی ردعمل میں شامل ہوتے ہیں اور اپنے لیسوسومل نظام کے ذریعے جسم کو detoxify کرتے ہیں [24]۔ Coelomocytes ہدف کے خلیات اور antimicrobial پیپٹائڈس کی رہائی کے خلاف لیتھک رد عمل میں حصہ لے سکتے ہیں۔ مدافعتی میکانزم میں، ٹرانسپلانٹیشن کے تجربات نے کیچڑ میں خود شناسی کے وجود کو ظاہر کیا ہے [28]۔

اینیلڈ کوئلوموسائٹس تیزی سے سیلولر رد عمل کے ذریعے بیکٹیریا، پرجیویوں اور خمیر کے خلاف مدافعتی میکانزم بناتی ہیں [59]۔ اس تیز ردعمل میں گھلنشیل اینٹی بیکٹیریل مالیکیولز، جیسے لائزوزائم، لائسینن، اور لبریکن کے ذریعے ثالثی کی جاتی ہے [22، 42، 68]۔ انتہائی محفوظ شدہ امیونولوجیکل مالیکیولز، جیسے سیل کی سطح کے اشارے، تجزیہ کے لیے سائٹومیٹرک کا استعمال کرتے ہوئے کوئلوموسائٹس پر دریافت کیے گئے تھے۔ خاص طور پر، کوئلوموسائٹس نے ممالیہ کے مخصوص اینٹی باڈیز کے ساتھ رد عمل ظاہر کیا، اینٹی باڈیز اینٹی CD11a، CD45RA، CD45RO، CDw49b، CD54، b2-M، اور Ty-1 [30, 34] کے خلاف سطحی مثبتیت ظاہر کرتے ہوئے۔

ہمارے مطالعے کا مقصد امیونو ہسٹو کیمیکل طور پر TLR2، CD14، اور -Tubulin کی موجودگی کا جائزہ لینا ہے پہلی بار Lumbricus Terrestris (Linnaeus, 1758) کے coelomocytes میں، ایک وسیع، کثیر طبقے والا، بیلناکار کیچڑ جس کا تعلق خاندان Lunnellida، O Lunnelidadea) سے ہے۔ ہرمافروڈائٹ، 8 سے 10 سینٹی میٹر لمبا [55]۔ invertebrate اندرونی دفاعی نظام کے علم کو بہتر بنانے سے فقرے کی زیادہ نفیس قوت مدافعت کو سمجھنے میں مدد مل سکتی ہے اور نتیجتاً، مدافعتی ردعمل کے ارتقاء [63]۔

مواد اور طریقے

نمونے اور ٹشو کی تیاری

Lombricus terrestris کے نمونے ہماری لیبارٹری ہسٹوتھیکا سے آتے ہیں۔ اس سے پہلے، انہیں غیر آلودہ کھلے میدان میں لے جایا جاتا تھا اور تازہ مٹی میں دو ہفتوں تک اس کے مطابق رکھا جاتا تھا، جیسا کہ Licata et al نے رپورٹ کیا ہے۔ [51]، اور پھر لائٹ مائکروسکوپی کے معیاری طریقوں کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا۔ نمونوں کو دو گھنٹے تک قوت مدافعت (paraformaldehyde 4 فیصد) (05-W01030705, BioOptica Milano SpA, Milan, Italy) میں ڈبو دیا گیا۔ اس کے بعد، پانی کی کمی والے ایتھنول پیمانے (30 سے ​​100 فیصد ایتھنول تک) کے ساتھ علاج کیا گیا، اور پھر xylene کا استعمال کرتے ہوئے پیرافین میں شامل کرنے کے لیے تیار کیا گیا۔

ایک بار شامل ہونے کے بعد، ہر سلائیڈ پر روٹری مائکروٹوم کے ساتھ 3–5 μm کٹ کے دو پتلے حصے رکھے گئے تھے۔

ہسٹولوجی

مورفولوجیکل اور ہسٹو کیمیکل داغ سلائیڈوں پر کارروائی کرنے کے لئے استعمال کیے گئے تھے [4، 6]۔ اس کے بعد سلائسوں کو پروگریسو الکحل سلوشنز (100 سے 30 فیصد ایتھنول تک) کا استعمال کرتے ہوئے ری ہائیڈریٹ کیا گیا، زائلین [17]، G. [75] میں ڈیپرافینائز کرنے کے بعد ڈسٹل واٹر میں، بعد ازاں، میلوری ٹرائیکروم اور AB/PAS [3] کا استعمال کرتے ہوئے ان پر داغ ڈالے گئے۔ . داغ لگانے کے بعد سلائیڈیں یوکٹ (BioOptica Milano SPA، میلان، اٹلی، یورپ) کا استعمال کرتے ہوئے لگائی گئیں۔ اس مطالعے میں استعمال ہونے والے تناؤ کا ڈیٹا ٹیبل 1 میں شامل ہے۔

امیونو فلوروسینس

آٹو فلوروسینس کو ختم کرنے کے لیے سوڈیم بوروہائیڈرائیڈ کے 5 فیصد محلول سے ڈیپرافنائزڈ حصوں کا علاج کیا گیا، پھر بوائین سیرم البومین (BSA) کا 2.5 فیصد محلول استعمال کیا گیا، اور پھر سلائسوں کو TLR2، CD14، اور -Tubulin کے خلاف بنیادی اینٹی باڈیز کے ساتھ راتوں رات انکیوبیٹ کیا گیا۔ ] اس کے بعد، ثانوی اینٹی باڈیز کی انکیوبیشن کی گئی۔ بلیچنگ سے بچنے کے لیے، سلائسوں کو فلوروماؤنٹ ™ ایکوئس ماؤنٹنگ میڈیم (Sigma-Aldrich، Taufkirchen Germany, Europe) کا استعمال کرتے ہوئے لگایا گیا تھا۔ تجربات بنیادی اینٹی باڈیز کے بغیر منفی کنٹرول کے طور پر چلائے گئے تھے (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)۔ اس بات کی تصدیق کرنے کے لیے کہ بنیادی اینٹی باڈیز مدافعتی تھیں، چوہے کی جلد کے ٹشوز کو مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا) [5، 47، 74]۔

سیکشنز کا تجزیہ Zeiss LSM DUO کنفوکل لیزر سکیننگ مائیکروسکوپ کے تحت ایک META ماڈیول (Carl Zeiss MicroImaging GmbH, Jena, Germany, Europe) کے ساتھ ہیلیم – neon (543 nm) اور argon (458 nm) مختلف طول موج کے لیزر کے ساتھ کیا گیا تھا۔ . تصویروں کو بہتر بنانے کے لیے Zen 2011 (LSM 700 Zeiss سافٹ ویئر، Oberkochen, Germany, Europe) استعمال کیا گیا۔ Adobe Photoshop CC ورژن 2019 (Adobe Systems, San Jose, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے ڈیجیٹل تصاویر کو ایک جامع شکل میں ضم کر دیا گیا۔ فلوروسینس کی شدت کے منحنی خطوط کا جائزہ پھر زین 2011 "ڈسپلے پروفائل" فیچر [58] کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ اینٹی باڈیز کے بارے میں تفصیلات کا خلاصہ جدول 2 میں دیا گیا ہے۔

مقداری تجزیہ

اعداد و شمار کو مقداری تجزیہ کے لیے دس حصوں اور فی نمونے کے بیس شعبوں کی جانچ کے ذریعے جمع کیا گیا تھا۔ سیل کی مثبتیت اور نمبر کا اندازہ ImageJ سافٹ ویئر 1.53e کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ کوئلوموسائٹس کی تعداد جو TLR2، CD14، اور -Tubulin کے لیے مثبت ہیں کو SigmaPlot ورژن 14 کا استعمال کرتے ہوئے شمار کیا گیا۔{6}} (Systat Software, San Jose, CA, USA)۔ عام طور پر تقسیم کیے گئے ڈیٹا کا یک طرفہ ANOVA اور طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے تجزیہ کیا گیا۔ امیونووریکٹیو کوئلوموسائٹس کی تعداد کی اوسط قدریں اور معیاری انحراف (SD) کی اطلاع دی گئی ہے: ** p 0 سے کم یا اس کے برابر۔{11}}1، * p 0.05 سے کم یا اس کے برابر۔

نتائج

کینچوڑے Lumbricus terrestris میں ایک مونو سٹریٹیفائیڈ اپیتھیلیم اور ایک ڈھکنے والا ریشہ دار کٹیکل ہوتا ہے جو ایپیڈرمس کی تشکیل کرتا ہے۔ جوڑنے والے اور پٹھوں کے ٹشوز جو جسم کی زیادہ تر دیوار کو تشکیل دیتے ہیں وہ ایپیڈرمس کے نیچے ہوتے ہیں۔ ایپیڈرمل اپیٹیلیم کولیجینس کٹیکل کو باقی جانداروں سے الگ رکھتا ہے اور اس کٹیکلر کولیجن کی تیاری کے لیے ذمہ دار ہے۔ کٹیکل، ایپیڈرمس، طولانی پٹھے، اور سرکلر پٹھے سب کینچوڑوں کے جسم کی دیوار کے کراس سیکشن کے ہسٹولوجیکل معائنہ کے ذریعے نظر آتے ہیں۔ ایپیڈرمس مورفولوجیکل طور پر اچھی طرح سے بیان کیا گیا ہے؛ یہ یا تو ایک واحد اپکلا پرت ہے یا سیوڈسٹریٹیفائیڈ؛ یہ معاون، بنیادی، غدود، اور حسی خلیات (تصویر 1) پر مشتمل ہوتا ہے۔ امیونو فلوروسینس تجزیہ، کنفوکل مائیکروسکوپ کے مشاہدے میں، TLR2 (تصویر 2، 3)، CD14 (تصویر 2)، اور -Tubulin (تصویر 3) کے لیے مثبت کوئلوموسائٹس دکھاتا ہے، جو ایپیڈرمل اور نیچے کی کنیکٹیو پرت میں بکھرے ہوئے ہیں، دونوں میں۔ طول بلد اور ہموار پٹھوں کی پرت میں۔ TLR2 اور CD14 ایک دوسرے کے ساتھ مکمل طور پر جمع نہیں ہیں، یہ تجویز کرتے ہیں کہ یہ coelomocytes دو الگ الگ خاندانوں سے تعلق رکھتے ہیں (تصویر 2)۔ مزید برآں، چپچپا غدود کے خلیے ایپیڈرمس (تصویر 3) میں ٹیوبلین پازیٹو تھے۔ کنفوکل مائیکروسکوپ کے "ڈسپلے پروفائل" فنکشن کا تجزیہ کرکے، ہم نے ٹیسٹ شدہ اینٹی باڈیز کے درمیان اجتماعیت کی فلوروسینس چوٹیوں کی تصدیق کی۔

مقداری تجزیے سے ٹیسٹ کیے گئے انفرادی اینٹی باڈیز کے لیے اتنی ہی تعداد میں مثبت کوئلوموسائٹس کا انکشاف ہوا، جیسا کہ جدول 3 میں دکھایا گیا ہے۔

بحث

حملہ آور پیتھوجینز کے خلاف میزبان ردعمل تمام جانداروں سے تعلق رکھنے والے جسمانی میکانزم ہیں۔ پہلے یوکرائیوٹک خلیوں کی ظاہری شکل کے بعد سے، کئی دفاعی عمل سیل کی سالمیت، ہومیوسٹاسس، اور میزبان کی بقا کی ضمانت کے لیے تیار ہوئے ہیں [25]۔ Invertebrates نے دفاعی ردعمل کی ایک رینج تیار کی ہے جو غیر ملکی مواد، جرثوموں، یا پرجیویوں کو مؤثر طریقے سے پہچانتے اور ہٹاتے ہیں۔ جب کہ کورڈیٹس میں انکولی قوت مدافعت ہوتی ہے، لوفوٹروکوزونز بنیادی طور پر پیدائشی مدافعتی خلیوں پر انحصار کرتے ہیں، جیسے کہ فاگوسائٹس (امیبوسائٹس، کوئلوموسائٹس)، جو مدافعتی ردعمل میں ثالثی کے لیے فائیلوجنیٹک طور پر محفوظ PRRs کو شامل کرتے ہیں [41]۔ اسکیوینجر ریسیپٹرز، TLRs، اور Nod-like receptors (NLRs) invertebrates میں نمایاں نمائندے ہیں۔ رسیپٹر-لیگینڈ بائنڈنگ کے بعد، سگنل کی نقل و حمل سیلولر رد عمل کا ایک پیچیدہ جھرن شروع کرتی ہے، جس کے نتیجے میں مدافعتی ردعمل میں شامل ایک یا زیادہ اثر والے مالیکیولز کی پیداوار ہوتی ہے [61]۔ coelomic cytolytic پروٹین (CCF)، lipopolysaccharide-binding protein (EaLBI/BPI)، اور Toll-like EaTLR ریسیپٹر تین قسم کے PRR ہیں جن کی شناخت اب تک کینچوں میں کی گئی ہے [65، 66]۔ CCF کی شناخت کی گئی ہے اور اسے کوئیلومک سیال کے مدافعتی مالیکیول کے طور پر خصوصیت دی گئی ہے اور Eisenia foetida کے coelomocytes (Savigny, 1826)۔ CCF، مائکروبیل اینٹیجنز کا پابند، پروفینولوکسیڈیس جھرن کو متحرک کر سکتا ہے، جو ایک اہم invertebrate مدافعتی طریقہ کار ہے جو opsonizing خصوصیات کو بھی استعمال کرتا ہے، اس طرح phagocytosis کو فروغ دیتا ہے [18، 35]۔

TLRs ارتقائی طور پر محفوظ جھلیوں کی شناخت کے رسیپٹرز ہیں [9, 15] جو PAMPs کا استعمال کرتے ہوئے غیر ملکی اینٹیجنز کو پہچانتے ہیں [2] اور مدافعتی ردعمل [8, 9, 11, 36] کی ماڈلن میں حصہ ڈالتے ہیں۔ Bodó et al. [24] نے اینیلڈ اولیگوچیٹ ایزینیا اینڈری (Bouché، 1972) [24] کے coelomocytes پر TLR کی موجودگی کا مظاہرہ کیا۔ سکنتا وغیرہ۔ (2013) E. andrei سے الگ تھلگ کیچڑ TLR (EaTLR)۔ اس ریسیپٹر کا اعلیٰ نسلی تنوع ای اینڈری جینوم کے اندر متعدد TLR جینوں کی موجودگی کی نشاندہی کرتا ہے۔ اینیلڈ پولی چیٹ کیپیٹیلا ٹیلیٹا (بلیک، گراسل، اور ایکلبرجر، 2009)، EaTLR، اور مولسکس اور ایکینوڈرم کے TLR میں بہت سی مماثلتیں ہیں، فائیلوجنیٹک تحقیق کے مطابق [66]۔ پروچازکووا وغیرہ۔ روشنی ڈالی گئی EaTLR اور ایک سے زیادہ سسٹین کلسٹر (MCC) EaTLR کا اظہار کینچوں کے پورے جسم کے ؤتکوں میں ہوتا ہے۔ پہلا خاص طور پر نظام انہضام میں وافر ہوتا ہے، جبکہ دوسرا جنین کی نشوونما اور پرجیویوں کے خلاف ردعمل میں کام کر سکتا ہے [61]۔ مزید برآں، کوئلوموسائٹس میں اس کی موجودگی بیکٹیریا کے جمع ہونے کی وجہ سے زیادہ متاثر ہوسکتی ہے [66]۔ Lumbricus terrestris کے Coelomocytes وٹرو میں monocytes کو غیر خود کے طور پر پہچاننے کے قابل تھے، ان کی مدافعتی شناخت کی صلاحیت کی تصدیق کرتے ہوئے [62]۔ ٹرانسکرپٹومکس اسٹڈیز پولی چیٹ اینیلیڈ آرینیکولا مرینا میں 18 TLRs کی موجودگی کی تصدیق کرتی ہیں (Linnaeus, 1758) [67]۔

ہم اس سے قبل متعدد فقاریوں [4، 11، 12، 16، 46، 54] اور یوروچورڈیٹس [14، 45] میں TLR2 کی موجودگی کا مظاہرہ کر چکے ہیں۔

ان اعداد و شمار کے بعد، ہمارے مطالعہ نے پہلی بار Lumbricus terrestris کے coelomocytes میں امیونو ہسٹو کیمیکل TLR2 کی خصوصیت کی۔ ہم نے TLR2/CD14 اور TLR2/ -Tubulin کو اجتماعی شکل دی، جس نے دو سیل قسم کے کوئلوموسائٹس کی تصدیق کی، جیسا کہ اینجل مین نے رپورٹ کیا ہے [33]۔ ٹیسٹ کیے گئے اینٹی باڈیز کے لیے تمام coelomocytes کو اکٹھا نہیں کیا گیا، جو ان خلیوں کے ممکنہ فعال اور ساختی تنوع کی تجویز کرتا ہے۔ اگرچہ کوئی تجرباتی ثبوت نہیں ہے، TLR2/CD14 colocalized coelomocytes کی موجودگی یہ تجویز کر سکتی ہے کہ یہ خلیات فاگوسائٹوسس میں شامل امیبوسائٹس ہو سکتے ہیں، جبکہ کوئیلوموسائٹس صرف TLR کا اظہار کرنے والے melanocytes خلیات ہو سکتے ہیں جو مدافعتی ردعمل میں شامل ہیں لیکن phagocytic افعال انجام نہیں دے رہے ہیں۔ ، 38]، SJ [49، 50]، صفحہ، [57، 71]۔ Bodó et al کے باوجود۔ qPCR کا استعمال کرتے ہوئے E. andrei melanocytes میں TLR کی عدم موجودگی کا مشورہ دیتے ہوئے [23]، L. terrestris میں TLR2-مثبت میلانوسائٹس کا پتہ چلا ہے، جو کہ کیچڑ کی انواع کے درمیان فرق کی تجویز کرتا ہے، جیسا کہ پہلے ہی نیوکلیئر جینومک بیس [64] پر قیاس کیا گیا ہے۔

Eguielor et al کی طرف سے ایک مطالعہ. [31] جونک Glossiphonia Complanata (Linnaeus, 1758) میں شکل اور ہسٹو کیمیکل طور پر تین اہم خلیوں کی اقسام (میکروفیج جیسے خلیات، NK جیسے خلیات، گرینولوسائٹس قسم I اور II) کی نشاندہی کی گئی ہے جو میکروفیجز CD14 کے لیے مخصوص ماؤس میں مختلف انسان مخالف مارکر استعمال کرتے ہیں۔ CD61 [44]، اور NK خلیات CD56 اور CD57 [43]۔ ممالیہ سی ڈی اینٹیجنز کے خلاف پیدا ہونے والی اینٹی باڈیز کے لیے یہ کراس ری ایکٹیویٹی اینیلڈز اور کشیرکا کے درمیان فائیلوجنیٹک ارتباط پر ادب کے اعداد و شمار سے متفق ہے [21، 30] اور یہ ان مدافعتی مالیکیولز کے ارتقائی تحفظ کی ایک مثال ہوسکتی ہے۔

ماؤس اینٹی ہیومن اینٹی سی ڈی 24، اینٹی ٹیومر نیکروسس فیکٹر (ٹی این ایف)-، اینٹی سی ڈی 45 آر اے، اور اینٹی سی ڈی 45 آر او اینٹی باڈیز کو کیچڑے کی کوئیلوموسائٹ سطحوں میں مقامی کیا گیا ہے Eisenia foetida [30, 34]، یہ تجویز کرتا ہے کہ یہ مالیکیول ہیں۔ phylogenesis کے دوران انتہائی محفوظ. یہ مطالعات پچھلی تحقیق سے مطابقت رکھتے ہیں جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ coelomocyte سطح کے اینٹیجنز CD14، CD11b، اور CD11c کے خلاف اینٹی باڈیز کے ساتھ کراس ری ایکٹیو ہوتے ہیں جو ممالیہ تیمسٹ پیٹریولا (امور، 1964) میں پیدا ہوتے ہیں، اینٹی CD14، CD11b اور اینٹی CD11b اور CD11b اور اینٹی باڈیز کے لیے فگوسائٹس کو مثبت قرار دیتے ہیں۔ ] ان اعداد و شمار کے ذریعہ، ہمارے نتائج نے Lumbricus Terrestris میں CD14 کے خلاف phagocytic خلیات کو مدافعتی ظاہر کیا۔

مزید برآں، ہم نے TLR2 کے ساتھ مل کر، TLR2 کے ساتھ coelomocytes کی مدافعتی صلاحیت کا مظاہرہ کیا، جس میں TLR2 کے ذریعے ثالثی کردہ cytoskeleton، microtubules، اور پیدائشی مدافعتی ردعمل کے درمیان ایک ربط دکھایا گیا ہے۔ TLR2 اور -Tubulin کا ​​اکٹھا کرنا جھلی کی سطح پر TLRs کی نقل و حمل میں Tubulin کی شمولیت کی تصدیق کرتا ہے۔ Heli Uronen-Hansson et al کا ایک مطالعہ۔ [70] نے اندرونی اور بیرونی مونوسائٹس کے ساتھ ساتھ ڈینڈریٹک خلیوں میں TLR2 اور TLR4 کے وسیع ٹیوبولووسیکولر اظہار کی نمائش کی۔ چونکہ یہ ریسیپٹرز -Tubulin کے ساتھ جمع ہوتے ہیں اور گولگی کمپلیکس سے براہ راست جڑے ہوتے ہیں، اس لیے مائیکرو ٹیوبولس TLR vesicles کی منتقلی کے لیے ایک نالی کا کام کر سکتے ہیں [70]۔ Tubulin epidermis میں بھی موجود ہے، اس کی سالمیت کو برقرار رکھنے میں مدد کرتا ہے [27]، اور زخم بھرنے میں مداخلت کرتا ہے [73]، اس طرح پیدائشی مدافعتی نظام کی مدد کرتا ہے، جیسا کہ Nematoda Caenorhabditis elegans (Maupass, 1900) [27 69]۔

کنفوکل مائیکروسکوپ کے "ڈسپلے پروفائل" فنکشن سے تصدیق شدہ اجتماعیت، حاصل کردہ نتائج کی تصدیق کرتی ہے، جو اینٹی باڈیز کے متعلقہ اینٹیجنز کے پابند ہونے کے مطابق فلوروسینس کی چوٹی کو نمایاں کرتی ہے۔

آخر میں، ہمارا مطالعہ Oligochaeta annelid Lumbricus terrestris میں پہلی بار TLR2، CD14، اور -Tubulin کے لیے confocal microscopy coelomocytes immunoreactive کے ذریعے شناخت کرتا ہے۔ یہ اعداد و شمار نہ صرف ان مالیکیولز کے اہم ارتقائی تحفظ کی توثیق کرتے ہیں، بلکہ غیر فقاری جانوروں، خاص طور پر اینیلڈز کے دفاع کے اندرونی نظام کے بارے میں ہمارے علم کو بھی گہرا کرتے ہیں، اور مستقبل کے مطالعے کے لیے مفید اشارے فراہم کر سکتے ہیں، جس سے پیچیدہ پیدائشی مدافعتی میکانزم کے مطالعہ کو بہتر بنایا جا سکتا ہے۔ اوپری ریڑھ کی ہڈی والے.

ادارہ جاتی جائزہ بورڈ کا بیان

اس مطالعے کے لیے اخلاقی جائزے اور منظوری کو چھوڑ دیا گیا تھا کیونکہ نمونوں پر کوئی تجرباتی طریقہ کار لاگو نہیں کیا گیا تھا۔

مصنفین کی شراکتیں۔

تصوراتی، Alessio Alesci؛ رسمی تجزیہ، ایلیسیو ایلیسی اور اینجلو فومیا؛ تفتیش، الیسیو ایلیسی، جیوئل کیپیلو، اینجلو فومیا، مارکو البانو، ایمینوئل میسینا، نونزیاکارلا اسپانو، سیمونا پرگولیزی، اور یوجینیا ریٹا لاریانو؛ ڈیٹا کیوریشن، الیسیو ایلیسی، جیویل کیپیلو، اینجلو فومیا، مارکو البانو، ایمانوئل میسینا، نونزیاکارلا اسپانو، سیمونا پرگولیزی، اور یوجینیا ریٹا لوریانو۔ تحریر — اصل مسودہ کی تیاری، الیسیو ایلیسی؛ تحریر—جائزہ اور ترمیم، الیسیو ایلیسی، جیوئل کیپیلو، نونزیاکارلا اسپاناو، سیمونا پرگولیزی، اور یوجینیا ریٹا لاریانو؛ تصور، Alessio Alesci اور Angelo Fumia؛ نگرانی، Eugenia Rita Lautiano. تمام مصنفین نے مخطوطہ کے شائع شدہ ورژن کو پڑھا اور اس سے اتفاق کیا ہے۔

فنڈنگ

اس تحقیق کو کوئی بیرونی فنڈ نہیں ملا۔

ڈیٹا اور مواد کی دستیابی

اس مطالعے میں پیش کردہ اعداد و شمار مضمون کے اندر دستیاب ہیں۔

اعلانات

اخلاقیات کی منظوری اور شرکت کے لیے رضامندی۔

قابل اطلاق نہیں۔

مسابقتی مفادات

مصنفین مفادات کے تصادم کا اعلان نہیں کرتے ہیں۔

حوالہ جات

1. ایڈریم اے، انڈر ہل ڈی ایم۔ میکروفیجز میں phagocytosis کے میکانزم۔ Annu Rev Immunol. 1999؛ 17(1):593–623۔ https://doi.org/10.1146/annur ev.immunol.17.1.593۔

2. Akira S, Uematsu S, Takeuchi O. پیتھوجین کی شناخت اور پیدائشی استثنیٰ۔ سیل 2006؛124(4):783–801۔ https://doi.org/10.1016/j.cell.2006.02.015۔

3. Alesci A, Albano M, Savoca S, Mokhtar DM, Fumia A, Aragona M, Lo Cascio P, Hussein MM, Capillo G, Pergolizzi S, Spanò N, Lauriano ER. زیبرافش (ڈینیو ریریو، ہیملٹن 1882) کے سکن کلب سیلز میں مدافعتی مالیکیولز کی کنفوکل شناخت اور قوت مدافعت میں ان کا ممکنہ کردار۔ حیاتیات. 2022؛ 11(11):1653۔ https://doi.org/10.3390/biology11111653۔

4. Alesci A, Capillo G, Fumia A, Messina E, Albano M, Aragona M, Lo Cascio P, Spanò N, Pergolizzi S, Lauriano ER. آنتوں کے ڈینڈریٹک خلیوں کی کنفوکل خصوصیت مائکسائنز سے ٹیلیوسٹ تک۔ حیاتیات. 2022;11(7):1045.https://doi.org/10.3390/biology11071045۔

5. Alesci A, Capillo G, Mokhtar DM, Fumia A, D'Angelo R, Lo Cascio P, Albano M, Guerrera MC, Sayed RKA, Spanò N, Pergolizzi S, Lauriano ER. Giant Mudskipper Periophthalmodon schlosseri (Palas، 1770) کے گلز ماسٹ سیلز میں Antimicrobic Peptide Piscidin1 کا اظہار۔ Int J Mol Sci. 2022;23(22):13707۔ https://doi.org/10.3390/ijms232213707۔

6. Alesci A, Cicero N, Fumia A, Petrarca C, Mangifesta R, Nava V, Lo Cascio P, Gangemi S, Di Gioacchino M, Lauriano ER. بوپس بوپس کے گردے اور گلوں میں بھاری دھاتوں کا ہسٹولوجیکل اور کیمیکل تجزیہ: میلانوماکروفیج سینٹرز اور روڈلیٹ سیلز بطور ماحولیاتی بائیو مارکر۔ زہریلا 2022؛ 10(5):218۔ https://doi.org/10.3390/toxics10050218۔

7. Alesci, A., Fumia, A., Miller, A., Calabrò, C., Santini, A., Cicero, N., & Lo Cascio, P. (2022)۔ Spirulina zebrafish (Danio rerio) جگر میں میکروفیج جمع کو فروغ دیتا ہے۔ نیٹ پروڈ ریس، 1-7۔ https://doi.org/10.1080/14786419۔ 2022.2089883۔

8. Alesci, A., Gitto, M., Kotańska, M., Lo Cascio, P., Miller, A., Nicosia, N., Fumia, A., & Pergolizzi, S. (2022)۔ COVID-19 mRNA ویکسینز کی مدافعتی صلاحیت، تاثیر، حفاظت اور نفسیاتی اثرات۔ ہیومن امیونول، S0198885922001586۔ https://doi.org/10.1016/j.humimm.2022.08.004۔

9. Alesci, A., Lauriano, ER, Aragona, M., Capillo, G., & Pergolizzi, S. (2020)۔ مچھلی سے لے کر ستنداریوں تک لنگر ہینس کے خلیات کو نشان زد کرنا۔ Acta Histochemica, 122(7): 151622. https://doi.org/10.1016/j.acthis.2020.151622۔

10. Alesci A, Lauriano ER, Fumia A, Irrera N, Mastrantonio E, Vaccaro M, Gangemi S, Santini A, Cicero N, Pergolizzi S. مدافعتی خلیوں کے درمیان تعلق، ڈپریشن، تناؤ اور چنبل: کیا قدرتی مصنوعات کا استعمال مددگار بنو؟ مالیکیولز۔ 2022؛ 27(6):1953۔

11. Alesci, A., Pergolizzi, S. Capillo, G., Lo Cascio, P., & Lauriano, ER (2022). گولڈ فش کے گردے میں راڈلیٹ سیلز (کیریسیس اوریٹس، لینیس 1758): ایک ہلکا اور کنفوکل مائکروسکوپی مطالعہ۔ ایکٹا ہسٹو کیمکا، 124(3):151876۔

12. Alesci, A., Pergolizzi, S., Fumia, A., Calabrò, C., Lo Cascio, P., & Lauriano, ER (2022). گولڈ فش ( Carassius auratus ) گٹ میں مستول خلیات: امیونو ہسٹو کیمیکل خصوصیات۔ ایکٹا زولوجیکا۔

13. Alesci A, Pergolizzi S, Fumia A, Miller A, Cernigliaro C, Zaccone M, Salamone V, Mastrantonio E, Gangemi S, Pioggia G, Cicero N. مدافعتی نظام اور COVID کے دوران حاملہ خواتین کی نفسیاتی حالت-19 وبائی بیماری: کیا مائیکرو نیوٹرینٹس حمل کو سہارا دینے کے قابل ہیں؟ غذائی اجزاء۔ 2022؛ 14(12):2534۔ https://doi.org/10.3390/nu14122534۔ 14. Alesci, A., Pergolizzi, S., Lo Cascio, P., Capillo, G., & Lauriano, ER (2022). urochordate Styela plicata (Lesueur، 1823) کے اینڈو اسٹائل میں واسو ایکٹیو آنتوں کے پیپٹائڈ اور ٹول نما رسیپٹر 2 امیونو ایکٹیو خلیوں کی لوکلائزیشن۔ Microsc Res Tech، https://doi.org/10.1002/jemt.24119۔

15. Alesci A, Pergolizzi S, Lo Cascio P, Fumia A, Lauriano ER. نیورونل تخلیق نو: فقرے کا تقابلی جائزہ اور نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں کے لیے نئے تناظر۔ ایکٹا زولوجیکا۔ 2021۔ https://doi.org/10۔ 1111/azo.12397۔

16. Alesci A, Pergolizzi S, Savoca S, Fumia A, Mangano A, Albano M, Messina E, Aragona M, Lo Cascio P, Capillo G, Lauriano ER. Broadgilled Hagfsh Eptatretus Cirrhatus (Forster, 1801) کے آنتوں کے گوبلٹ سیلز کا پتہ لگانا: ایک کنفوکل مائکروسکوپی تشخیص۔ حیاتیات. 2022;11(9):1366.https://doi.org/10.3390/biology11091366۔

17. الترکستانی ایچ اے، تاشقندی ایف ایم، محمد صالح زیڈ ایم۔ ہسٹولوجیکل داغ: ایک ادب کا جائزہ اور کیس اسٹڈی۔ گلوبل جے ہیلتھ سائنس 2015;8(3):72.https://doi.org/10.5539/gjhs.v8n3p72۔

18. Beschin A, Bilej M, Brys L, Torreele E, Lucas R, Magez S, De Baetselier P. سائٹوکائنز کا متضاد ارتقاء۔ فطرت 1999;400(6745):627–8.https://doi.org/10.1038/23164۔

19. بلیج M، De Baetselier P، Beschin A. کیچڑ کا اینٹی مائکروبیل دفاع۔ فولیا مائکروبیول۔ 2000؛45(4):283–300۔ https://doi.org/10.1007/BF028 17549۔

20. Bilej M, Procházková P, Šilerová M, Josková R (2010) Earthworm Immunity. میں: Söderhäll K, edotiro. Invertebrate Immunity, Vol. 708. بوسٹن: اسپرنگر؛ ص 66-79)۔ https://doi.org/10.1007/978-1-4419-8059-5_4۔

21. Blanco GAC، Escalade AM، Alvarez E، Hajos S. LPS کی حوصلہ افزائی phagocytosis کی sipunculan worm Themiste petricola میں: انسانی CD14، CD11B، اور CD11C کراس ری ایکٹیو مالیکیولز کی ممکنہ شمولیت۔ دیو کمپ امیونول۔ 1997؛21(4):349–62۔ https://doi.org/10.1016/ S0145-305X(97)00007-4۔

22. Bodó K, Boros Á, Rumpler É, Molnár L, Böröcz K, Németh P, Engelmann P. Eisenia andrei کیچڑ میں ناول lubricin homologs کی شناخت۔ دیو کمپ امیونول۔ 2019؛ 90:41–6۔

23. Bodó, K., Ernszt, D., Németh, P., & Engelmann, P. (2018)۔ الگ الگ مدافعتی اور دفاع سے متعلق مالیکیولر فنگر پرنٹس Eisenia andrei کینچوڑوں کے الگ الگ coelomocyte ذیلی سیٹوں میں۔ Invertebrate Survival J، 338–345۔

24. Bodó K، Kellermayer Z، László Z، Boros Á، Kokhanyuk B، Németh P، Engelmann P. کینچوڑے، Eisenia andrei کے حصے کی تخلیق نو کے دوران چوٹ سے متاثرہ پیدائشی مدافعتی ردعمل۔ Int J Mol Sci. 2021;22(5):2363۔

25. Buchmann، K. (2014). پیدائشی استثنیٰ کا ارتقاء: مچھلی کے ذریعے ممالیہ تک غیر فقاری سے سراغ۔ امیونولوجی میں فرنٹیئرز۔

For more information:1950477648nn@gmail.com