سیرم نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈی کو پورسائن ایپیڈیمک ڈائیریا وائرس کی کھوج کے لیے دو تشخیصی اسیسز کا موازنہ

خلاصہ:

لیکٹوجینک استثنیٰ خنزیر کی وبائی اسہال کے وائرس سمیت کئی پیتھوجینز کے خلاف سور کے تحفظ کے لیے اہم ہے۔ sow sera میں اینٹی باڈی کی سطح کو بے اثر کرنے سے اس بات کا تعین کرنے میں مدد مل سکتی ہے کہ آیا قابل شناخت مدافعتی ردعمل سوروں کو تحفظ فراہم کر سکتا ہے۔ مختلف تشخیصی اسیسز کے ذریعے غیر جانبدار اینٹی باڈیز کا پتہ لگایا جا سکتا ہے۔ اس مطالعے نے چیلنج شدہ گلٹس کے سیرم میں پورسائن وبائی اسہال کے وائرس کو بے اثر کرنے والے اینٹی باڈیز کے لئے دو غیر جانبدار اینٹی باڈی اسیس کی تشخیصی خصوصیات کا جائزہ لیا۔ علاج کے چار گروپ، کنٹرول، غیر ویکسین شدہ، چیلنج سے پہلے ویکسین شدہ، اور چیلنج کے بعد ویکسین کیے گئے، 20 گلٹس پر مشتمل تھے۔ پورسائن ایپیڈیمک ڈائریا وائرس کے چیلنج سے پہلے اور اس کے بعد ہر گلٹ سے سیرم کے نمونے جمع کیے گئے تھے۔ فلوروسینٹ فوکس نیوٹرلائزیشن پرکھ اور ہائی تھرو پٹ نیوٹرلائزیشن پرکھ کے ذریعے غیر جانبدار اینٹی باڈیز کی موجودگی کے لیے نمونوں کا جائزہ لیا گیا۔ اس مطالعہ کے لیے فلوروسینٹ فوکس نیوٹرلائزیشن اور ہائی تھرو پٹ نیوٹرلائزیشن اسیس کے لیے تشخیصی حساسیت اور خصوصیت کو بالترتیب 80 اور 80% فلوروسینٹ کمی کے کٹ آف پر بہتر بنایا گیا اور کپا کے اعدادوشمار کی بنیاد پر اعتدال پسند معاہدے کا مظاہرہ کیا۔ فوکس فلوروسینٹ نیوٹرلائزیشن اور ہائی تھرو پٹ نیوٹرلائزیشن اسیس کا استعمال جانوروں یا جانوروں کی آبادی کے اندر اینٹی باڈیز کو بے اثر کرنے کی حیثیت کی نگرانی کے لیے کیا جا سکتا ہے۔ ہائی تھرو پٹ پرکھ کے فوکس فلوروسینٹ پرکھ کے فوائد ہیں کہ اس کی نشاندہی کردہ کٹ آف پر اعلی خصوصیت ہے اور نتائج کی نوعیت انفرادی نتائج کے درمیان زیادہ امتیاز کی اجازت دیتی ہے۔

cistanche سپلیمنٹ کے فوائد - قوت مدافعت میں اضافہ

مطلوبہ الفاظ: PEDV; اینٹی باڈی کو بے اثر کرنا؛ تشخیصی پرکھ

1. تعارف

پورسائن ایپیڈیمک ڈائریا وائرس (PEDV) ایک الفاکورونا وائرس ہے جو 2013 [1–3] میں ریاستہائے متحدہ میں اس کے ظہور کے بعد امریکہ میں مقامی بن گیا ہے۔ حیاتیاتی تحفظ کے اقدامات بیماری کے اثرات کو کم کرنے کے لیے پی ای ڈی وی جیسے پیتھوجینز کو سوائن کے ریوڑ سے دور رکھنے پر مرکوز ہیں [4]۔ سیرولوجی ٹیسٹنگ اس بات کا تعین کرنے کے لیے ایک کارآمد ٹول ہے کہ آیا خنزیر کو پہلے کسی پیتھوجین سے متاثر اور متاثر کیا گیا ہے۔ نمائش قدرتی طور پر ہوسکتی ہے (مثال کے طور پر، وائرس سے بھرے مواد کا استعمال) یا جان بوجھ کر (مثلاً، سیڈر جانوروں کے ساتھ ملنا، منہ سے ناک میں ٹیکہ لگانا، یا گیسٹرک لیویج)۔ اس مطالعے کے مقاصد کے لیے، پی ای ڈی وی کے تصدیق شدہ، کلینیکل پھیلنے سے PEDV- مثبت ٹشو ہوموجنیٹ کے ساتھ جان بوجھ کر چیلنج کے ذریعے نمائش حاصل کی گئی۔ گانا وغیرہ۔ [5] ظاہر کیا گیا سیرم نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈی ٹائٹرز زبانی یا اندرونی ویرو سیل کو کم کرنے والی PEDV DR13 ویکسین کے ذریعے لگائے گئے بیجوں کے درمیان مختلف نہیں تھے۔ اس تحقیق نے یہ بھی ثابت کیا کہ زبانی ٹیکے لگائے گئے بووں میں انٹرا مسکیولر ویکسینیشن کے مقابلے میں سور کی شرح اموات کم تھی۔ مزید برآں، de Arriba et al. [6] نے خون اور گٹ سے وابستہ لیمفائیڈ ٹشو میں IgA اور IgG اینٹی باڈی سیکریٹنگ سیلز (ASC) کے درمیان ارتباط کا مظاہرہ کیا۔ بووں کا پھیلا ہوا، اپیٹیلیوچوریل نال مدافعتی خلیات اور اینٹی باڈیز کو بچہ دانی میں سوروں میں منتقل ہونے سے روکتا ہے جو پیدائش کے وقت خنزیر کو اگمگلوبولینیمک بناتا ہے [7]۔ زچگی کی قوت مدافعت بوئے سے ان کے سوروں میں ممری رطوبتوں کے ذریعے منتقل ہوتی ہے اور پی ای ڈی وی، ٹی جی ای وی، اور روٹا وائرس جیسے آنتوں کے پیتھوجینز کے خلاف تحفظ میں اہم کردار ادا کرتی ہے۔ لہذا، سور کے بچے ان پیتھوجینز سے تحفظ کے لیے کولسٹرم اور دودھ کی اینٹی باڈیز پر انحصار کرتے ہیں۔ سیرم امیونوگلوبلینز کولسٹرم میں ایک بڑا حصہ ڈالتے ہیں جبکہ دودھ میں امیونوگلوبلین میمری غدود کے اندر پیدا ہوتے ہیں [8]۔ اس طرح، اینٹی باڈی اسس کو بے اثر کرنے سے اس بات کا تعین کرنے میں مدد مل سکتی ہے کہ آیا پریچورینٹ سو سیرا میں قابل شناخت مدافعتی ردعمل سوروں کو تحفظ فراہم کر سکتا ہے۔ اینٹی باڈیز کو بے اثر کرنے کے طریقہ کار میں جمع کرنا، ٹارگٹ سیل کے وائرل انٹری کو روکنا اور ٹارگٹ سیل کے اندر وائرل ریپلیکشن کو روکنا شامل ہیں [9]۔ پی ای ڈی وی کے لیے نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈیز کا پتہ لگانے کے لیے تشخیصی اسیس تیار کیے گئے ہیں جن میں وائرس نیوٹرلائزیشن (VN)، فلوروسینٹ فوکس نیوٹرلائزیشن (FFN)، اور ہائی تھرو پٹ نیوٹرلائزیشن ٹیسٹ (HTNT) [2,10–13] شامل ہیں۔ جیسا کہ Sarmento et al نے بیان کیا ہے۔ [2]، FFN پرکھ VN پرکھ پر ایک بہتری ہے کیونکہ پرکھ زیادہ حساس ہے کیونکہ پرکھ متاثرہ ویرو خلیوں کی سطح پر ظاہر ہونے والے وائرل اینٹیجنز کی کھوج پر مبنی ہے جبکہ VN پرکھ سائٹوپیتھک اثر پر مبنی ہے۔ وائرس کی طرف سے. مزید برآں، FFN نتائج VN نتائج سے زیادہ تیزی سے حاصل کیے جا سکتے ہیں کیونکہ FFN کے ساتھ وائرل اٹیچمنٹ کے مقابلے میں سائٹوپیتھک اثر کو دیکھنے میں زیادہ وقت لگتا ہے۔ HTNT پرکھ FFN پرکھ میں مزید بہتری ہے کیونکہ HTNT پرکھ نتائج حاصل کرنے کے لیے ٹیکنیشن کی تشریح کے بجائے ڈیجیٹل امیج سائٹومیٹری پر انحصار کرتا ہے۔ اس طرح، ایک پوری پلیٹ کو 3 منٹ سے بھی کم وقت میں پڑھنے کی اجازت دیتا ہے، فلوروسینٹ کی شدت میں ایک مقداری پیمائش پیدا کرتا ہے، اور جائزہ لینے کے لیے تصاویر کو ذخیرہ کرنے کا امکان۔ اس طرح، HTNT تجارتی سوائن کے ریوڑ میں استعمال کے لیے موزوں معلوم ہوا۔ موجودہ مطالعہ نے پی ای ڈی وی، ایف ایف این، اور ایچ ٹی این ٹی اسسیس کے لیے دو غیرجانبدار اینٹی باڈی اسیسز کی تشخیصی خصوصیات (حساسیت اور مخصوصیت) اور مثبت اور منفی پیش گوئی کی قدروں کا موازنہ کیا۔ یہ Sarmento et al کے کام پر استوار ہے۔ ایک اعلی تھرو پٹ تشخیصی لیبارٹری میں استعمال کے لئے پرکھ کی توثیق کرنے میں مدد کرنے کے لئے سادہ، متاثرہ، اور ویکسین شدہ جانوروں کی جانچ کرکے۔ Sarmento et al کے نتائج کی بنیاد پر۔ [2]، ہمارا کالعدم مفروضہ یہ ہے کہ پی ای ڈی وی چیلنج شدہ گلٹس کے سیرم میں پی ای ڈی وی اینٹی باڈیز کو بے اثر کرنے کا پتہ لگانے کے لیے دو اسیس کی تشخیصی خصوصیات میں کوئی فرق نہیں ہے۔

cistanche سپلیمنٹ کے فوائد - قوت مدافعت میں اضافہ

2. مواد اور طریقہ

2.1 سوائن کے ذرائع اور انتخاب

جیسا کہ پہلے براؤن ایٹ ال نے بیان کیا ہے۔ [14]، اس مطالعے میں علاج کے 4 گروپس کا استعمال کیا گیا جنہیں کنٹرول، NV (غیر ویکسین شدہ)، پری (چیلنج سے پہلے ویکسین شدہ)، اور پوسٹ (چیلنج کے بعد ویکسین شدہ) کہا جاتا ہے۔ ہر گروپ ابتدائی طور پر 20 کمرشل، کراس بریڈ، گلٹس پر مشتمل تھا۔ مرکزی آئیووا کے ایک تجارتی سوائن فارم سے کل 60 گلٹ آسانی سے منتخب کیے گئے تھے جن کی PEDV کی کوئی تاریخ نہیں تھی۔ کنٹرول گروپ میں موجود 20 گلٹس کو NV گروپ کے لیے دوبارہ استعمال کیا گیا۔ NV گروپ صرف 18 خنزیروں پر مشتمل تھا کیونکہ PEDV چیلنج سے غیر متعلق پیچیدگیوں کی وجہ سے مطالعہ سے دو گلٹس کو ہٹا دیا گیا تھا۔

PEDV منفی حیثیت کے مزید ثبوت کے طور پر، 12 ملی لیٹر خون ایک 16-گیج، 1.5-انچ کی سوئی اور 12 ملی لیٹر سرنج کا استعمال کرتے ہوئے جگولر وینپنکچر کے ذریعے جمع کیا گیا۔ خون کے نمونوں سے سیرم کی کٹائی سینٹرفیوگریشن کے ذریعے 1.500×g پر 8 منٹ (منٹ) کے لیے کی گئی، 1 mL aliquots میں تقسیم کیا گیا، اور −80 ◦C پر ذخیرہ کیا گیا۔ Iowa State University Veterinary Diagnostic Laboratory (ISU-VDL, Ames, IA, USA) [15] میں سیرم کے نمونوں کی جانچ wv-ELISA کے ساتھ کی گئی۔

2.2 علاج کرنے والے گروپوں کو جانوروں کی تفویض

ساٹھ گلٹس کو یکساں طور پر 3 گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا، ہر ایک میں 20 کمرشل، کراس نسل کی خواتین شامل تھیں۔ علاج کے چار گروپس بنانے کے لیے، علاج کے دو گروپوں، کنٹرول اور NV کے لیے 20 گلٹ ترتیب وار استعمال کیے گئے۔ PEDV-مثبت گلٹس کے ایک گروپ کی نشوونما اور کنٹرول کے لیے 20 گلٹس کے دوبارہ استعمال کی اجازت دی گئی جو PEDV کے سامنے آئے تھے اور مطالعہ میں استعمال ہونے والے جانوروں کی کل تعداد کو کم کر دیا تھا۔ بقیہ 40 گلٹس میں PRE اور POST گروپس شامل ہیں، جن میں ہر گروپ میں 20 گلٹ شامل ہیں۔ علاج گروپ کے ذریعہ واقعات کی ٹائم لائن براؤن ایٹ ال میں بیان کی گئی ہے۔ [14]۔ مختصراً، چیلنج کے بعد ہر علاج گروپ میں ہفتہ وار ایک بار خون کے انفرادی نمونے جمع کیے گئے۔ مزید تفصیل سیکشن 2.4 اور 2.5 میں زیر بحث آئی ہے۔ علاج کے گروپ "PRE" گلٹس کو آف سائٹ سہولت پر پہنچنے سے پہلے ٹیکہ لگایا گیا تھا۔ علاج کے گروپ "POST" گلٹس کو چیلنج کے بعد تک ٹیکے نہیں لگائے گئے تھے۔

2.3 سوائن کی رہائش اور دیکھ بھال

تحقیقی سہولت پر پہنچنے پر، گِلٹس کو ایک ٹریٹمنٹ گروپ کے ذریعے رکھا گیا تھا: ٹریٹمنٹ گروپ کے تمام 20 گلٹس ایک ہی قلم میں ایڈ لیبیٹم فیڈ اور پانی کے ساتھ تھے۔ تمام قلم ایک ہی کمرے میں تھے۔ آلودگی کو کم کرنے کے لیے NV PRE اور POST گروپوں کے درمیان ایک قلم خالی چھوڑ دیا گیا تھا۔ خوراک، پانی، کمرے کے درجہ حرارت کی اونچائی اور کم، اور نمی کی بلندی اور کم کی نگرانی کی گئی تاکہ پیداواری معیارات کے ساتھ مطابقت کو یقینی بنایا جا سکے۔ صحت کے مشاہدات روزانہ ایک بار کیے گئے اور ریکارڈ کیے گئے تاکہ ایمبولیشن، سستی، آنتوں کی مستقل مزاجی، اور بیماری کی دیگر طبی علامات کا اندازہ لگایا جا سکے۔ جانوروں کی انفرادی شناخت کے لیے ہر گلٹ کے دائیں کان میں ایک کان کا ٹیگ (انٹیگرا ہوگ، آل فلیکس، ڈلاس، TX، USA) لگایا گیا تھا۔

2.4 زبانی چیلنج

ایک 4-دن کی موافقت کی مدت کے بعد، CONTROL میں ہر گلٹ کو ایک تجارتی فارم پر PEDV کے تصدیق شدہ کلینیکل پھیلنے سے جمع کردہ ٹشو ہوموجنیٹ کا استعمال کرتے ہوئے زبانی طور پر PEDV کے سامنے لایا گیا۔ ہوموجنیٹ کو آئیووا اسٹیٹ یونیورسٹی کی ویٹرنری ڈائیگنوسٹک لیبارٹری نے ترتیب دیا تھا اور اسے امریکی پروٹو ٹائپ سٹرین، جینو گروپ G2b پایا گیا تھا۔ ہوموجنیٹ کے دس ملی لیٹر کو 590 ملی لیٹر فاسفیٹ بفرڈ نمکین کے ساتھ ملایا گیا اور 30 ​​ملی لیٹر مکس ہر گلٹ پر ستم ظریفی کے ساتھ دیا گیا۔ انوکولم کی PEDV مثبت ہونے کی تصدیق ریئل ٹائم، ریورس ٹرانسکرپٹیز پولیمریز چین ری ایکشن کے ذریعے کی گئی جس کی CT ویلیو 19.6 اور 14.23 × 107 جینومک کاپیاں فی ایم ایل اور چیلنج کے بعد گلٹس میں اسہال کی نشوونما ہے۔ چیلنج کے بعد ہر 7 دن بعد خون کے انفرادی نمونے جیولر وینی پنکچر کے ذریعے جمع کیے گئے جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے کہ چیلنج کے بعد 42 دن تک۔ جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے سیرم کی کٹائی اور ذخیرہ کیا گیا تھا اور فوکس فلوروسینٹ نیوٹرلائزیشن پرکھ اور ایک ہائی تھرو پٹ وائرس نیوٹرلائزیشن ٹیسٹ کے ذریعے غیر جانبدار اینٹی باڈیز کا پتہ لگانے کے لیے نمونے ISU VDL کو جمع کیے گئے تھے۔ CONTROL کے ابتدائی چیلنج کے بعد 60 ویں دن، بقیہ 40 گلٹس کو تحقیقی سہولت میں لایا گیا اور 18 کنٹرول گلٹس NV بن گئے۔ مطالعہ سے غیر متعلق شرائط کی وجہ سے کنٹرول سے دو گلٹس کو ہٹا دیا گیا تھا۔ ایک 3- دن کے بعد آمد کے بعد کے موافقت کی مدت کے بعد، 18 گلٹس کو دوبارہ چیلنج کیا گیا (NV) اور 40 گلٹس (PRE اور POST) کو چیلنج کیا گیا، خون کے نمونے جمع کیے گئے، سیرم کی کٹائی کی گئی، اور نمونے جانچ کے لیے جمع کیے گئے جیسا کہ یہاں بیان کیا گیا ہے۔ .

2.5 گلٹس کی ویکسینیشن

چالیس گلٹ اصل فارم میں رہ گئے تھے اور انہیں کنٹرول کی آمد کے 8.5 ہفتوں بعد تحقیقی مرکز میں لایا گیا تھا۔ چیلنج سے 5 اور 2 ہفتے پہلے بیس گلٹس کو ویکسین لگائی گئی تھی، جیسا کہ ویکسین تیار کرنے والی کمپنی نے تجویز کی تھی، تجارتی طور پر دستیاب، ہلاک شدہ PEDV ویکسین، جینوگروپ G2b، (Porcine Epidemic Diarhea Vaccine، Zoetis, Inc., Florham Park, NJ) ، USA) PRE گروپ پر مشتمل ہے۔ POST گروپ پر مشتمل PEDV چیلنج کے 1 اور 3 ہفتے بعد باقی بیس کو اسی ویکسین سے ٹیکہ لگایا گیا۔ اصل بیس کنٹرول گلٹس میں سے اٹھارہ مطالعہ میں رہے اور NV گروپ پر مشتمل تھے اور PEDV کی ویکسینیشن حاصل نہیں کی

cistanche پلانٹ میں مدافعتی نظام میں اضافہ

2.6۔ اینٹی باڈی اسسیس کو بے اثر کرنا

2.6.1 فلوروسینٹ فوکس نیوٹرلائزیشن (FFN) طریقہ کار

ایف ایف این کو آئیووا اسٹیٹ یونیورسٹی ویٹرنری ڈائیگنوسٹک لیبارٹری، معیاری آپریٹنگ طریقہ کار 9.5324 [16] نے انجام دیا تھا۔ مختصراً، ویرو 76 خلیات کو 37 ◦C پر 5 منٹ کے لیے Trypsin-Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) کے ساتھ کلی کر کے تیار کیا گیا تھا۔ خلیات اور سیل پروپیگیشن میڈیم کا 1:20 کم ہونا بنایا گیا اور ایک کنویں کی پلیٹ کے ہر کنویں میں 200 µL شامل کیا گیا اور 48 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ پلیٹوں کو ڈمپ کیا گیا تھا اور وائرس ٹیکہ لگانے والے میڈیم سے دھویا گیا تھا۔ سیرم کے نمونوں کو 56 ◦C پر 30 منٹ کے لیے پانی کے غسل میں حرارت سے غیر فعال کیا گیا اور پھر پلیٹ میں 1:10 سے شروع ہونے والے 2- فولڈ سیریل ڈائلیشن میں پتلا کر دیا گیا۔ سٹاک وائرس کو 100-200 فوکی بنانے والی یونٹس فی 100 µL اور 100 µL ہر کنویں میں شامل کیا گیا اور 5% کاربن ڈائی آکسائیڈ (CO2) کے ساتھ 37 ◦C پر 60 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ ٹیسٹ پلیٹ کو ڈمپ کیا گیا، کلی کیا گیا اور 150 µL سیرم/وائرس مکسچر کو متعلقہ کنوؤں میں شامل کیا گیا اور 37 ◦C پر 60 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ سیرم/وائرس کے آمیزے کو ڈمپ کیا گیا تھا اور کنوؤں کو وائرس ٹیکہ لگانے والے میڈیم سے دھویا گیا تھا۔ ہر کنویں میں 150 µL وائرس ٹیکہ لگانے والا میڈیم شامل کیا گیا اور 37 ◦C اور 5% CO2 پر 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ میڈیا کو پلیٹ سے ہٹا دیا گیا تھا اور سیلز کو 80% ایسیٹون شامل کرکے ٹھیک کیا گیا تھا، جسے برف کے غسل میں 15 منٹ تک ٹھنڈا کیا گیا تھا۔ ایسیٹون کو ضائع کر دیا گیا اور پلیٹ کو ہوا میں خشک کر دیا گیا۔ پی بی ایس (پی ایچ 7.2) میں گھٹا ہوا FITC کنجوگیٹڈ PEDV NP مونوکلونل اینٹی باڈی کا 1:100 کم کرنا تیار کیا گیا اور 50 µL تمام کنویں میں شامل کیا گیا اور 60 منٹ کے لئے 37 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ پلیٹ کو پی بی ایس سے دھویا گیا اور پھر فلوروسینس مائکروسکوپ (اولمپس BX51، 10X مقصد، FITC فلٹر) کا استعمال کرتے ہوئے پڑھا۔ مثبت کنویں فلورسنگ تختیاں نہیں دکھاتے ہیں اور منفی سبز تختیاں نہیں دکھاتے ہیں۔ غیر جانبدار اینٹی باڈی ٹائٹرز کو وائرس کنٹرول کے مقابلے میں وائرس کی نقل میں 90٪ کمی کے ساتھ سب سے زیادہ سیرم کی کمزوری کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ 20 سے زیادہ یا اس کے برابر ٹائٹر والے نمونوں کو PEDV-غیر جانبدار اینٹی باڈیز کے لیے مثبت کے طور پر درجہ بندی کیا گیا تھا۔ ایک اعلی ٹائٹر نمونے میں اینٹی باڈیز کو بے اثر کرنے کے زیادہ ارتکاز کی نشاندہی کرتا ہے۔ ضمنی مواد میں مثبت اور منفی سیرا کے نمونے دستیاب ہیں۔

2.6.2 ہائی تھرو پٹ فلورسنٹ نیوٹرلائزیشن ٹیسٹ (HTNT) طریقہ کار

ایچ ٹی این ٹی کو آئیووا اسٹیٹ یونیورسٹی ویٹرنری ڈائیگنوسٹک لیبارٹری، معیاری آپریٹنگ طریقہ کار 9.5324 ورژن 2 [17] کے ذریعہ انجام دیا گیا تھا۔ سیرم کے نمونے 30 منٹ کے لئے 56 ◦C پر پانی کے غسل میں گرمی سے غیر فعال تھے۔ وائرس سٹاک کو وائرس ٹیکہ کاری میڈیم (2 µg/mL Trypsin-TPCK کے ساتھ DMEM) میں سیریل 10-گنا، ویرو 81 سیلز (ATTC® CCL-81™) میں منتقل کیا گیا، اور 37 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ 5 دن کے لیے 5% CO2 کے ساتھ۔ آخری کمزوری جس میں سائٹوپیتھک اثر دیکھا گیا تھا اس کا استعمال اسپیئر مین اور کربر کے طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے میڈین ٹشو کلچر انفیکشن ڈوز (TCID50) کا تعین کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ ایک سو مائیکرو لیٹر سیل سلوشن (سیل پروپیگیشن میڈیم، ٹرپسن ای ڈی ٹی اے، اور ویرو 81 سیل) کو 100 µL سیل پروپیگیشن میڈیم (DMEM 10% FBS اور 1% penicillin-streptomycin کے ساتھ) کے ساتھ 1:1 کو کم کیا گیا . 5 × 104 سیل/کنواں بنانے کے لیے ڈائلیشن کو گننے اور شمار کرنے کے لیے ایک ہیمو سائیٹومیٹر کا استعمال کیا گیا اور ایک صاف نیچے سیاہ 96-وییل پلیٹ (کورنگ 96 ویل سیل بِنڈ مائکروپلیٹ، سگما) کے ہر کنویں میں شامل کیا گیا اور 48 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ 37 ◦C 5% CO2 کے ساتھ سیل کو سنگم بنانے کے لیے (100% confluent)۔ ہر پلیٹ میں مثبت کنٹرول، منفی کنٹرول، اور وائرس کنٹرول کنویں تھے۔ اس کے بعد، پانچ مائیکرو لیٹر ہیٹ ان ایکٹیویٹڈ کنٹرولز اور نمونے ڈپلیکیٹ کنوؤں میں رکھے گئے تھے تاکہ پہلے 1:20 میں 1:40 کو 95 µL وائرس ٹیکہ لگانے والے میڈیم کو شامل کیا جا سکے، پھر 1:10 کا 100 µL پتلا PEDV وائرس (3.16 × 105) TCID50/mL)۔ سیرم/وائرس کا مرکب 5% CO2 کے ساتھ 37 ◦C پر 1 گھنٹہ کے لیے انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ ٹیسٹ پلیٹ کے تمام سیل کنویں کو 150 µL سیل واشنگ میڈیم (DMEM with 1% penicillin-streptomycin) کے ساتھ 3 بار دھویا گیا، اور 150 µL سیرم/وائرس مکسچر اور وائرس کے کنٹرول کو ٹیسٹ پلیٹ میں منتقل کیا گیا اور 90 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ 37 ◦C پر۔ سیرم/وائرس مکسچر کو ضائع کر دیا گیا تھا اور پلیٹوں کو ایک بار سیل واشنگ میڈیم سے دھویا گیا تھا، جیسا کہ اوپر بیان کیا گیا ہے، اس کے بعد ایک بار وائرس ٹیکہ لگانے والے میڈیم کے ساتھ۔ ہر کنویں میں وائرس ٹیکہ لگانے والا میڈیم (150 µL) شامل کیا گیا اور 5% CO2 کے ساتھ 37 ◦C پر 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ وائرس ٹیکہ کے میڈیم کو ضائع کر دیا گیا تھا اور پلیٹ کو PBS pH 7.4 سے دھویا گیا تھا۔ خلیوں کو ہر کنویں میں 4 ◦C، 80% ایسیٹون شامل کرکے اور کمرے کے درجہ حرارت پر 15 منٹ تک انکیوبیٹ کرکے طے کیا گیا تھا۔ اس کے بعد ایسیٹون کو ہٹا دیا گیا اور پلیٹ کو 30 منٹ تک ہوا میں خشک کیا گیا۔ ہر کنویں کو PBS pH 7.4 سے دھویا گیا تھا۔ 50 µL FITC-conjugated PEDV NP مونوکلونل اینٹی باڈی (SD6-29 کلون، Medgene Labs) PBS pH 7.4 میں 1:100 پتلا ہر کنویں میں شامل کیا گیا اور 37 ◦C پر 60 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ پلیٹ کو PBS pH 7.4 کے ساتھ چار بار دھویا گیا، پلیٹ میں آخری دھونے کو 5 منٹ کے لیے چھوڑ دیا گیا پھر اسے ضائع کر دیا گیا اور PBS pH 7.4 کے 100 µL کے ساتھ تبدیل کر دیا گیا۔ اس کے بعد SoftMax Pro 6.5 (Molecular Devices, San Jose, CA, USA) کا استعمال کرتے ہوئے SpectraMax i3× کے ساتھ پلیٹوں کو 30 ایم ایس ایکسپوژر ٹائم اور 541 طول موج کے لیے 20 ام فوکل ایڈجسٹمنٹ کا استعمال کرتے ہوئے پڑھا گیا۔ کل فلوروسینس کمی (%FR) کے ساتھ نمونے 85% سے زیادہ یا اس کے برابر اینٹی باڈیز کو بے اثر کرنے کے لیے مثبت کے طور پر درجہ بندی کیے گئے تھے [2]۔ کل فلوروسینس کمی کا حساب 100 − ([اوسط نمونہ کل فلوروسینس شدت/اوسط منفی کنٹرول ٹوٹل فلوروسینس شدت]) × 100) کے طور پر کیا گیا تھا۔ ایک اعلی کل فلوروسینس کمی نمونوں کے اندر اینٹی باڈی کی اعلی تعداد کو غیر جانبدار کرنے کی نشاندہی کرتی ہے۔ ضمنی مواد میں مثبت اور منفی سیرا کے نمونے دستیاب ہیں۔

2.7۔ تشخیصی خصوصیات: حساسیت اور مخصوصیت اور مثبت اور منفی پیش گوئی کی قدریں

HTNT کے لیے تشخیصی حساسیت اور مخصوصیت کا حساب لگایا گیا %FR کٹ آف 70، 75، 80، 85، اور 90 اور FFN کا استعمال کرتے ہوئے 20، 40، 80، اور 160 کے سیمپل ڈائلیشن کٹ آف کا استعمال کرتے ہوئے اصلاح شدہ کٹ آف کا تعین کیا گیا۔ آپٹمائزڈ کی تعریف کٹ آف کے طور پر کی گئی تھی جہاں تشخیصی مخصوصیت کو کم سے کم نقصان کے ساتھ زیادہ سے زیادہ کیا جاتا ہے۔ CONTROL اور POST گروپس کے لیے پہلے دو نمونے لینے والے پوائنٹس سے پچھتر معروف PEDV-منفی نمونوں کا ایک ذیلی سیٹ منتخب کیا گیا تھا۔ NV گروپ کے لیے آخری دو سیمپلنگ پوائنٹس سے 36 معلوم PEDV-مثبت نمونے منتخب کیے گئے تھے۔ پرکھ کے لیے ISU VDL معیاری آپریٹنگ طریقہ کار کے مطابق مثبت نمونوں کی وضاحت کے لیے 85 سے زیادہ کا کٹ آف استعمال کیا گیا تھا [17]۔ تشخیصی حساسیت کا اندازہ معلوم مثبت نمونوں کی تعداد کو تقسیم کر کے لگایا گیا تھا جن کا مثبت تجربہ کیا گیا کل معلوم مثبت نمونوں سے۔ تشخیصی خصوصیت کا اندازہ معلوم منفی نمونوں کی تعداد کو تقسیم کرکے لگایا گیا تھا جنہوں نے منفی تجربہ کیا تھا معلوم منفی نمونوں کی تعداد سے۔ تشخیصی خصوصیت اور حساسیت کو بہتر بنانے والے کٹ آف کو پرکھ کے مقابلے کے لیے منتخب کیا گیا تھا۔ اس مطالعے کے مقاصد کے لیے، تشخیصی خصوصیت (DSp) اور حساسیت (DSe) کو زیادہ سے زیادہ کیا گیا، جہاں حساسیت اور مخصوصیت کی اقدار کے درمیان فرق کی مطلق قدر سب سے چھوٹی ہے۔ مثبت پیشن گوئی کی قدر (PPV) کا اندازہ معلوم مثبت نمونوں کی تعداد کو تقسیم کرکے لگایا گیا تھا جنہوں نے مثبت (TP) کا تجربہ کیا تھا کل ٹیسٹ مثبت نمونوں (TP پلس جھوٹے مثبت [FP]) سے۔ منفی پیشن گوئی کی قدر (NPV) کا تخمینہ معلوم منفی نمونوں (TN) کی تعداد کو تقسیم کرکے لگایا گیا تھا جنہوں نے کل ٹیسٹ منفی نمونوں (TN پلس جھوٹے منفی [FN]) سے منفی تجربہ کیا تھا۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا

Cistanche Enhance Immunity مصنوعات دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

2.8۔ شماریاتی تجزیہ

اس مطالعے میں کوئی غیر متعین نتائج یا لاپتہ ڈیٹا نہیں تھا۔ تمام ڈیٹا کا تجزیہ SAS ورژن 9.4 (SAS Instit. Cary NC) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ 4 گروپوں میں سے ایک سے تعلق رکھنے والے 6{{10}} سوروں کے 609 مشاہدات استعمال کیے گئے۔ FFN پرکھ کے لیے دو ممکنہ کٹ آف ویلیوز (40 اور 80) پر غور کیا گیا اور HTNT کے لیے 85 کے کٹ آف سے موازنہ کیا گیا۔ ہر ایک کے لیے، ایک لکیری مخلوط اثرات کا ماڈل FFN اور HTNT اسسیس کے معاہدے پر گروپ کے اثر کی وضاحت کرنے کے لیے موزوں تھا، جس میں سور مخصوص بے ترتیب اثر تھا۔ گروپوں کے جوڑے کے لحاظ سے موازنہ کرنے والے تمام تجزیے کیے گئے۔ مزید، FFN پرکھ کے لیے استعمال ہونے والی تین کٹ آف قدروں میں سے دو کے لیے، FFN اور HTNT اسسیس کے مجموعی معاہدے کا تعین کرنے کے لیے کوہن کے کپا کوفیشنٹ کا حساب لگایا گیا۔ کپا کوفیشینٹس کی تشریح اس طرح کی گئی: 0 سے کم۔{17}}، "ناقص" معاہدہ؛ 0 کے درمیان۔{21}} اور 0.20، "معمولی" معاہدہ؛ 0.21 اور {{30}}.40 کے درمیان، "منصفانہ" معاہدہ؛ 0.41 اور 0.60 کے درمیان، "اعتدال پسند" معاہدہ؛ 0.61 اور 0.80 کے درمیان، "کافی" معاہدہ؛ اور 0.81 اور 1.0 کے درمیان، "تقریبا کامل" معاہدہ [19]۔ اہمیت p 0.05 سے کم یا اس کے برابر پر رکھی گئی تھی۔ R سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے باکس اور وِسکر پلاٹ تیار کیے گئے تھے۔

3. نتائج

جدول 1 منتخب کردہ کٹ آف پر FFN اور HTNT اسسیس کے لیے تشخیصی حساسیت اور مخصوصیت کو ظاہر کرتا ہے۔ اس مطالعہ کے لیے تشخیصی حساسیت اور خصوصیت کو بالترتیب 80 اور 80% FR کی کمی کے کٹ آف پر بہتر بنایا گیا۔

جدول 1. ٹیبل کی دوسری قطار میں درج مختلف کٹ آف کا استعمال کرتے ہوئے HTNT اور FFN اسیسز کے لیے تشخیصی حساسیت (DSe)، تشخیصی خصوصیت (DSp)، مثبت پیشین گوئی قدر (PPV)، اور منفی پیشین گوئی قدر (NPV)۔ مثال کے طور پر، 70 کے کٹ آف پر HTNT پرکھ کے لیے، DSe=0.97 (97%), DSP=0.91 (91%), PPV=0.83 ( 83%)، اور NPV=0.95 (95%)۔ U=غیر متعینہ۔

چترا 1 اسٹڈی ٹریٹمنٹ گروپ کے ذریعے چیلنج کے بعد کے دنوں میں HTNT کے نتائج کے باکس اور وِسکر پلاٹ دکھاتا ہے۔ CONTROL اور POST گروپس (n=76) کے نمونوں کو دن −4، 0، اور 7 پر منفی کے طور پر درجہ بندی کیا گیا تھا جیسا کہ خنزیر کی سابقہ ​​حالت کی وجہ سے توقع کی گئی تھی۔ NV گروپ نے چیلنج کے بعد ایک غیر معمولی ردعمل تیار کیا۔ HTNT کے نتائج میں کمی واقع ہوئی جیسا کہ PEDV کے ساتھ چیلنج کے بعد دونوں ویکسین شدہ گروپوں (PRE اور POST) میں اقدار کی حد میں کمی سے دکھایا گیا ہے۔ اس کمی کی تبدیلی کو شکل 1 میں دیکھا جا سکتا ہے کیونکہ POST اور PRE-پلاٹ کے سرگوشیاں اور آؤٹ لیرز چیلنج کے بعد 14 دن چھوٹے ہو جاتے ہیں۔ شکل 2 ٹریٹمنٹ گروپ کے ذریعے چیلنج کے بعد کے دنوں میں قدرتی لاگ میں تبدیل شدہ FFN نتائج کے باکس اور وِسکر پلاٹ دکھاتا ہے، جس کے نتائج HTNT پرکھ کی طرح ہوتے ہیں۔ ایچ ٹی این ٹی (فگر 1) اور ایف ایف این (فگر 2) دونوں ہی نتائج چیلنج اور ویکسینیشن کے ردعمل کو ظاہر کرتے ہیں جیسا کہ دونوں اسسیس سے %FR اور ٹائٹرز میں اضافہ کے ساتھ دیکھا گیا ہے۔ جب کہ وسعت میں یکساں ہے، ہر پرکھ کے نتائج کی تبدیلی کو ہومولوجس چیلنج (NV) کے بعد کم کیا گیا تھا۔ ویکسینیشن (PRE اور POST) کے بعد بھی فرق میں کمی واقع ہوئی۔ ہفتہ کے بعد کی نمائش کے ذریعہ اینٹی باڈی کی قدروں کو بے اثر کرنے کا یہ تغیر پی ای ڈی وی (اعداد و شمار 1 اور 2) کے ساتھ ویکسینیشن اور ہم جنس چیلنج کے بعد کم ہوتا ہے۔ ویکسین شدہ اور ہم جنس چیلنج شدہ علاج کے گروپوں کے دونوں پرکھوں کے نتائج میں دیکھے جانے والے اینٹی باڈی کو بے اثر کرنے کے تغیر میں کمی کا ایک ہی رجحان تھا۔ پی ای ڈی وی اور دوسری ویکسینیشن کے ہم جنس چیلنج نے ایک اینامنیسٹک ردعمل پیدا کیا جس سے خنزیروں کے درمیان کم فرق کے ساتھ اینٹی باڈیز کو غیر جانبدار کرنے کا ایک اعلیٰ سطح پیدا ہوا جو دونوں پرکھوں (شکل 1) سے ماپا گیا پری چیلنج اور پوسٹ ویکسینیشن اقدار کے مقابلے میں خنزیروں کے درمیان کم فرق ہے۔ تشخیصی حساسیت اور مخصوصیت کے تجزیے کی بنیاد پر، بالترتیب FFN اور HTNT اسسیس کے لیے ٹیسٹ معاہدے کا تجزیہ کرنے کے لیے 80 (ٹائٹر) اور 85 (%FR) کے کٹ آف کا انتخاب کیا گیا۔ کپا ٹیسٹ نے 0.5257 کے "اعتدال پسند" معاہدے کا مظاہرہ کیا جس میں 95% اعتماد وقفہ 0.461، 0.5904 کٹ آف 80 (ٹائٹر) اور 85 (%FR) کے لیے FFN اور HTNT اسسیس۔

شکل 1. HTNT اینٹی باڈی ردعمل کے منحنی خطوط کے باکس اور سرگوشی کے پلاٹ ہر علاج گروپ کے لیے چیلنج کے بعد کے دنوں تک۔ درمیانی بار ہفتے کے حساب سے نتائج کی اوسط قدر کی نمائندگی کرتا ہے۔ قلابے (باکس کے اوپر اور نیچے) پہلے (Q1) اور تیسرے (Q3) کوارٹائل کی نمائندگی کرتے ہیں۔ سایہ دار خطہ انٹرکوارٹائل رینج (IQR) کی نمائندگی کرتا ہے۔ سرگوشیوں کا تعین اس طرح کیا جاتا ہے: ٹاپ سرگوشی=Q3 + 1.5∗IQR; نیچے کی سرگوشی=Q1 + 1.5∗IQR۔ اگر کوئی ڈیٹا پوائنٹ حسابی قدر پر نہیں ہے، تو اگلا ڈیٹا پوائنٹ Q1 یا Q3 کے قریب ترین سرگوشی کی حد ہے۔ کھلے حلقے (◦) باہر کی نشاندہی کرتے ہیں۔ 85 کا کٹ y-axis پر 85 پر ڈیشڈ لائن سے ظاہر ہوتا ہے۔

شکل 2. ہر علاج گروپ کے لیے چیلنج کے بعد کے دنوں تک FFN اینٹی باڈی ردعمل کے منحنی خطوط کے خانے اور سرگوشیاں۔ درمیانی بار ہفتے کے حساب سے نتائج کی اوسط قدر کی نمائندگی کرتا ہے۔ قلابے (باکس کے اوپر اور نیچے) پہلے (Q1) اور تیسرے (Q3) کوارٹائل کی نمائندگی کرتے ہیں۔ سایہ دار خطہ انٹرکوارٹائل رینج (IQR) کی نمائندگی کرتا ہے۔ سرگوشیوں کا تعین اس طرح کیا جاتا ہے: ٹاپ سرگوشی=Q3 + 1.5∗IQR; نیچے کی سرگوشی=Q1 + 1.5∗IQR۔ اگر کوئی ڈیٹا پوائنٹ حسابی قدر پر نہیں ہے، تو اگلا ڈیٹا پوائنٹ Q1 یا Q3 کے قریب ترین سرگوشی کی حد ہے۔ کھلے حلقے (◦) باہر کی نشاندہی کرتے ہیں۔ 40 کا کٹ y-axis پر ln(40) پر ڈیشڈ لائن سے ظاہر ہوتا ہے۔

4. بحث

ہم یہ قیاس کرتے ہیں کہ کم تغیر اور ایک غیر معمولی ردعمل کا تعلق یکساں ریوڑ سے استثنیٰ اور بیماری سے تحفظ سے ہے، حالانکہ طبی علامات ابھی بھی PRE گروپ میں دیکھے گئے جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [14]۔ اس تحقیق کے مقاصد کے لیے ان جانوروں میں طبی اثرات اور بیماری کی شدت کا جائزہ نہیں لیا گیا۔ یہ بیماری بالغوں اور نوزائیدہ بچوں کے درمیان مختلف طریقے سے ظاہر ہوتی ہے جس میں زیادہ شدید طبی علامات ہوتے ہیں اور نوزائیدہ بچوں میں بالغ جانوروں کے مقابلے میں موت ہوتی ہے [1,20]۔ جب کہ اکیلے اینٹی باڈی کی سطح کو غیرجانبدار بنانے سے تحفظ حاصل نہیں ہوتا ہے [21]، ان کا استعمال ریوڑ میں جان بوجھ کر نمائش یا ویکسینیشن انتظامیہ کے بعد اینٹی باڈی کے ردعمل کا اندازہ کرنے کے لیے کیا جا سکتا ہے۔ جب کہ viremia کی غیر موجودگی PEDV کی خصوصیت ہے، viremia 4 ہفتے کی عمر تک کے خنزیروں میں رپورٹ کیا گیا ہے [22,23]۔ اس طرح، غیر جانبدار اینٹی باڈیز کی گردش بیماری کے کلینیکل کورس کو متاثر کر سکتی ہے [21]۔ تاہم، lactogenic استثنیٰ، خاص طور پر میمری رطوبتوں میں IgA، خنزیر کے تحفظ کی زیادہ درست پیمائش ہوگی [21]۔ اس تحقیق میں بیان کیے گئے اسسیس کو لییکٹوجینک/سیکریٹری آئی جی اے کی جانچ کے لیے میمری رطوبتوں کو جمع کرنے کے علاوہ سوز یا گلٹس کے گروپوں میں ویکسینیشن انتظامیہ کے بعد سیرم کو بے اثر کرنے والے اینٹی باڈیز کی نگرانی کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ یہ فائدہ مند ہوگا اگر ان اسسیس سے تیار کردہ ڈیٹا ویکسینیشن کے بعد پیدا ہونے والی لیکٹوجینک قوت مدافعت کی مقدار اور استحکام کی پیش گوئی کر سکے۔ تاہم، موجودہ مطالعہ میں اس کا تجزیہ نہیں کیا گیا تھا. ویکسینیشن کے بعد سیرم آئی جی جی اینٹی باڈی ردعمل کو کولسٹرل آئی جی جی ردعمل کی پیش گوئی کے طور پر دکھایا گیا ہے، لیکن سیرم کو غیر جانبدار کرنے والے اینٹی باڈیز اور میمری رطوبتوں کے درمیان کوئی تعلق نہیں تھا [15]۔ اگرچہ سیرم کو بے اثر کرنے والی اینٹی باڈیز اور میمری رطوبتوں کے درمیان کوئی تعلق نہیں تھا، لیکن ٹیکے لگائے گئے جانوروں کو کنٹرول جانوروں کے مقابلے میں ممری رطوبتوں میں زیادہ غیر جانبدار اینٹی باڈیز ہوتے ہوئے دکھایا گیا تھا [15]۔ لہٰذا، جیسا کہ بِجسٹروم-کرافٹ، وغیرہ کی حمایت کرتا ہے۔ [15]، اگر سیرم کو نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈیز زیادہ ہیں، تو ماں کی رطوبتوں میں آئی جی جی اور آئی جی اے بھی بڑھ سکتے ہیں۔ اس طرح، خواتین کے گھر میں منتقل ہونے سے پہلے سیرم کے نمونے اکٹھا کرنے سے خون اور میمری رطوبتوں کو جمع کرنے کے دوران پیدا ہونے والے تناؤ اور درد کو کم کیا جائے گا جو بونے اور کوڑے پر منفی اثر ڈال سکتے ہیں [24]۔ صارفین کے لیے یہ سمجھنا ضروری ہے کہ کٹ آف ویلیو تشخیصی حساسیت اور پرکھ کی مخصوصیت کو کیسے متاثر کر سکتی ہے۔ کٹ آف ویلیو میں اضافہ جھوٹے مثبت نتائج کی تعداد کو کم کرے گا اور غلط منفی نتائج کی تعداد میں اضافہ کرے گا۔ الٹا، کٹ آف ویلیو کو کم کرنے سے غلط مثبت نتائج کی تعداد میں اضافہ ہوگا اور غلط منفی نتائج کی تعداد میں کمی آئے گی۔ یہ علم صارف کو یہ انتخاب کرنے کی اجازت دیتا ہے کہ ان کی مخصوص صورتحال کے لیے کون سی کٹ آف ویلیو استعمال کرنی ہے۔ اس مطالعہ کے لئے، اس مطالعہ کے نتائج اور Sarmento et al کی طرف سے شائع پچھلے نتائج کی بنیاد پر. [2]، ہم نے HTNT کے لیے %80 FR اور 80 FFN کی کمی کا انتخاب کیا۔ ان کٹ آف پر تشخیصی خصوصیت FFN (76%) کے مقابلے HTNT (97%) کے لیے زیادہ ہے اور FFN کے مقابلے HTNT سے اعلیٰ مثبت پیشین گوئی کی قدر فراہم کرتی ہے۔ یہ بھی سمجھنا ضروری ہے کہ پیش گوئی کی اقدار بیماری کے پھیلاؤ پر منحصر ہیں [25,26]۔ اس مطالعہ میں، درجہ بندی شدہ نمونوں کی بنیاد پر پھیلاؤ 32.1% تھا (36 مثبت اور 76 منفی نمونے)۔ جیسے جیسے پھیلاؤ بڑھتا ہے، پی پی وی میں بھی اضافہ ہوتا ہے کیونکہ تجربہ شدہ جانور (نمونہ) کے مثبت ہونے کا امکان زیادہ ہوتا ہے۔ جیسے جیسے پھیلاؤ کم ہوتا ہے، NPV کم ہوتا جائے گا۔ اعداد و شمار 3A اور B اس کی وضاحت کرتے ہیں HTNT اور FFN اسسیس کے لئے مختلف کٹ آفسز پر اس مطالعہ میں ایرب [25] کے بیان کردہ طریقوں کے بعد۔ لہذا، تشخیصی نتائج پر غور کرتے وقت، تشخیصی حساسیت اور پرکھ کی خصوصیت پر غور کرنا چاہیے اور اگر پیشین گوئی کی اقدار کا استعمال کرتے ہوئے گروپ کے اندر پھیلاؤ کو سمجھنا چاہیے۔

شکل 3. (A)۔ HTNT (سیاہ لکیروں) اور FFN (گرے لائنز) کے لیے مختلف کٹ آف پر مثبت پیشین گوئی کی اقدار۔ HTNT کے لیے 90 کے کٹ آف کی نمائندگی نہیں کی جاتی ہے۔ (ب)۔ منفی پیشن گوئی کی قدریں یا HTNT (سیاہ لکیریں) اور FFN (گرے لائنز) مختلف کٹ آف پر اسیس۔ FFN پرکھ کے لیے 20 کے کٹ آف کی نمائندگی نہیں کی جاتی ہے۔

ایچ ٹی این ٹی میں ایف ایف این کے مقابلے میں اعلیٰ تشخیصی حساسیت اور مخصوصیت ہے۔ اینٹی باڈی کے نتائج کا تجزیہ کرتے وقت، یہ غلط مثبت اور غلط منفی نتائج کی تعداد کو کم کرنے کے لیے مثالی ہے۔ مثال کے طور پر، FFN کے لیے 80 کا کٹ آف استعمال کرتے وقت، ہم نے 97% کی حساسیت اور 76% کی مخصوصیت کا مشاہدہ کیا۔ اس کا مطلب یہ ہے کہ کچھ غلط منفی نتائج ہوں گے لیکن غلط مثبت کی ایک بڑی تعداد ہوگی۔ اگر نتائج کو غلط طور پر مثبت کے طور پر درجہ بندی کیا جاتا ہے، تو یہ غلط تشریح کا باعث بن سکتا ہے کہ ایک ریوڑ میں PEDV کے لیے اینٹی باڈیز ہوتی ہیں جب کہ حقیقت میں وہ ایسا نہیں کرتے۔ چونکہ HTNT میں مختلف کٹ آف میں اعلیٰ تشخیصی اور خصوصیات ہیں، اس لیے یہ PEDV اینٹی باڈیز کا پتہ لگانے کے لیے ترجیحی پرکھ ہے۔ Sarmento et al کے نتائج۔ [2] نے FFN کے لیے بہت زیادہ تشخیصی خصوصیات اور HTNT کے لیے موازنہ حساسیتیں اور خصوصیات دکھائیں۔ ان تشخیصی اسسز نے کاپا کے اعدادوشمار (κ) کے مطابق اعتدال پسند معاہدہ ظاہر کیا۔ κ کی ایک کمزوری یہ ہے کہ ایک ٹیسٹ کو سونے کا معیار سمجھا جانا چاہیے۔ دو نامکمل اسیس کا موازنہ کرتے وقت، یہ κ کی تشریح کو ترچھا کر سکتا ہے۔ اس مطالعے کے لیے، ہم نے κ کے ساتھ مل کر اسیس کی تشخیصی کارکردگی کا جائزہ لیا تاکہ اس بات کا تعین کیا جا سکے کہ ٹیسٹ متفق ہے لیکن اس کی افادیت مختلف ہو سکتی ہے۔ FFN پرکھ پر HTNT کا ایک اضافی فائدہ یہ ہے کہ HTNT کے نتائج کا حساب FFN سے کیٹیگریکل ویلیوز (ٹائٹریشنز) کے مقابلے لگاتار ڈیٹا سے کیا جاتا ہے۔ HTNT ڈیٹا کی مسلسل نوعیت نمونے کے نتائج میں زیادہ امتیازی سلوک کی اجازت دیتی ہے تاکہ بیجوں کی غیر جانبدار اینٹی باڈی کی حیثیت کو بیان کیا جا سکے۔ جیسا کہ سارمینٹو ایٹ ال نے اطلاع دی ہے۔ [2]، HTNT کے پاس 96 ویل پلیٹ کے پڑھنے کا وقت کم ہے اور 4 منٹ سے بھی کم ہے جس سے نتائج میں تیزی سے تبدیلی آتی ہے۔ سیسٹیمیٹک اینٹی باڈیز کی گردش پی ای ڈی وی انفیکشنز [21] کے خلاف سور کے تحفظ میں معاون ثابت ہوسکتی ہے۔ تاہم، اس بارے میں کوئی لٹریچر موجود نہیں ہے کہ بونے میں گردش کرنے والے غیرجانبدار اینٹی باڈی کی کتنی مقدار سوروں کو PEDV تحفظ فراہم کرے گی۔ گردش کرنے والی اینٹی باڈیز کی اعلی سطح کولسٹرم میں زیادہ ارتکاز کا باعث بنتی ہے اور بڑھتے ہوئے تحفظ کو برداشت کرتی ہے۔ حمل کے دوران نمونے جمع کرنے کے دوران، اور PEDV انفیکشن کے خلاف کولسٹرل اینٹی باڈی کے تحفظ کے درمیان ایسوسی ایشن کا تعین کرنے کے لیے مزید جانچ کی ضرورت ہے۔ پی ای ڈی وی کے سامنے آنے والے خنزیروں کی بقا کے لیے لیکٹوجینک اور میوکوسل استثنیٰ انتہائی اہمیت کا حامل ہے۔ اینٹی باڈیز گٹ-MG-sIGA محور کے ذریعے دودھ میں جمع ہوتی ہیں اور تحفظ فراہم کرنے کے لیے خنزیروں تک پہنچ جاتی ہیں۔ Langel et al. [27] نے پایا کہ دوسری سہ ماہی کے دوران سامنے آنے والے گلٹس میں پہلی اور تیسری سہ ماہی کے گلٹس کے مقابلے میں گردش کرنے والی IgA، IgG، اور اینٹی باڈیز کو بے اثر کرنے کی سطح نمایاں طور پر زیادہ تھی۔ مزید برآں، Langel et al. [27] نے پایا کہ دوسرے سہ ماہی میں پی ای ڈی وی کے سامنے آنے والے گلٹس کے گلٹس کی بقا کی شرح 100٪ تھی جو دوسرے سہ ماہی میں 87.2٪ سے کم تھی جس سے پتہ چلتا ہے کہ اعلی سیرم IgA، IgG، اور غیر جانبدار اینٹی باڈیز کا تعلق piglet کی بقا کے ساتھ ہے۔ پی ای ڈی وی اگرچہ سیرم اینٹی باڈیز PEDV کو تحفظ فراہم نہیں کرتی ہیں، لیکن ہمارے مطالعے کے نتائج بتاتے ہیں کہ سیرم کو غیر جانبدار کرنے والی اینٹی باڈی کی سطح PEDV انفیکشن کے خلاف تحفظ سے وابستہ ہے۔ جیسا کہ پہلے براؤن ایٹ ال نے اطلاع دی ہے۔ [14]، PEDV کو ہم جنس چیلنج اور گلٹس کی ویکسینیشن کے بعد پاخانے میں بہایا جاتا ہے۔ موجودہ مطالعے میں براؤن ایٹ ال جیسے جانوروں کے نمونوں کا استعمال کیا گیا ہے۔ [14]۔ مزید ظاہر کرتا ہے کہ چیلنج کی نمائش یا ویکسینیشن کے بعد اینٹی باڈی کو غیر جانبدار کرنے والے سیرم میں اضافہ وائرس کے بہانے کے انداز کو متاثر نہیں کرتا کیونکہ چیلنج اور ویکسینیشن کے بعد اینٹی باڈی کی سطح میں اضافہ ہوتا ہے۔ اس بات کی تصدیق کرنے کے لیے مزید مطالعات کی توثیق کی جاتی ہے کہ آیا پاخانہ میں وائرس کی مقدار کا تعلق سیرم میں موجود اینٹی باڈی کو بے اثر کرنے کی مقدار سے ہے [21]۔

مردوں کے لئے cistanche فوائد - مدافعتی نظام کو مضبوط

5. نتائج

اس مطالعے کا باطل مفروضہ یہ تھا کہ دو PEDV-غیرجانبدار اینٹی باڈی اسسیس، FFN اور HTNT کی تشخیصی خصوصیات میں کوئی فرق نہیں تھا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ یہ پرکھیں کاپا کے اعدادوشمار کی بنیاد پر اعتدال سے متفق ہیں جبکہ پرکھ کے کٹ آف کی بنیاد پر ان کی تشخیصی خصوصیات اور پیشین گوئی کی قدروں میں فرق ہے۔ یہ گداز ریوڑ کے ویکسینیشن ردعمل کی پیمائش کے لیے استعمال کیے جا سکتے ہیں۔ کالعدم مفروضے کو مسترد کرنے میں ناکامی سے پتہ چلتا ہے کہ HTNT سیرم میں PEDV-غیر جانبدار اینٹی باڈیز کا پتہ لگانے کے لیے ترجیحی ٹیسٹ ہے۔ PRE اور POST دونوں گروپوں میں ویکسینیشن کے بعد، اس تحقیق میں زیادہ تر نتائج مثبت پائے گئے۔ PRE گروپ میں، نتائج کے درمیان فرق میں کمی نے بھی چیلنج کی پیروی کی۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ سوائن کے پریکٹیشنرز سیرم کو بے اثر کرنے والی اینٹی باڈیز کی پیمائش کر سکتے ہیں تاکہ یہ تعین کیا جا سکے کہ آیا ریوڑ میں پی ای ڈی وی ویکسین مناسب طریقے سے چلائی جا رہی ہیں۔

حوالہ جات

1. سیف، ایل. وانگ، Q. ولاسوا، اے. جنگ، K.؛ Xiao, S. کورونا وائرس۔ سوائن کی بیماریوں میں، 11 واں ایڈیشن؛ زیمرمین، جے جے، ایڈ۔ ولی بلیک ویل: ہوبوکن، NJ، USA، 2019۔

2. سارمینٹو، ایل وی؛ پونسوک، کے. تیان، ایل۔ مورا ڈیاز، جے سی؛ مین، آر جی؛ بوم، ڈی ایچ؛ زیمرمین، جے جے؛ Gimenez-Lirola، LG کا پتہ لگانا پورسائن ایپیڈیمک ڈائریا وائرس کو بے اثر کرنے والے اینٹی باڈی کا استعمال کرتے ہوئے ہائی تھرو پٹ امیجنگ سائٹومیٹری۔ J. ویٹ۔ تشخیص تفتیش کریں۔ 2020، 32، 324–328۔ [کراس ریف]

3. سٹیونسن، جی ڈبلیو؛ ہوانگ، ایچ. شوارٹز، کے جے؛ برورو، ای آر؛ سورج، ڈی. میڈسن، ڈی. کوپر، VL؛ Pillatzki, A.; Gauger، P.؛ شمٹ، بی جے؛ ET رحمہ اللہ تعالی. ریاستہائے متحدہ میں پورسین وبائی اسہال کے وائرس کا ظہور: طبی علامات، گھاووں، اور وائرل جینومک سلسلے۔ J. ویٹ۔ تشخیص تفتیش کریں۔ 2013، 25، 649–654۔ [کراس ریف]

4. کم، وائی؛ یانگ، ایم. گوئل، ایس ایم؛ چیران، ایم سی؛ Torremorell، M. خنزیر کی وبائی اسہال کے وائرس کی بالواسطہ منتقلی کو روکنے کے لیے بائیو سیکیورٹی اقدامات کا جائزہ۔ بی ایم سی ویٹ۔ Res. 2017، 13، 89۔ [کراس ریف]

5. گانا، ڈی ایس؛ اوہ، جے ایس؛ کانگ، بی کے؛ یانگ، جے ایس؛ چاند، HJ؛ یو، ایچ ایس؛ جنگ، وائی ایس؛ پارک، بی کے ویرو سیل ایٹینیویٹڈ پورسین ایپیڈیمک ڈائریا وائرس DR13 تناؤ کی زبانی افادیت۔ Res. ڈاکٹر سائنس 2007، 82، 134-140۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

6. ڈی اریبا، ایم ایل؛ کارواجل، اے. پوزو، جے؛ روبیو، پی. میوکوسل اور سیسٹیمیٹک آئسو ٹائپ کے مخصوص اینٹی باڈی ردعمل اور روایتی خنزیروں میں تحفظ جو وائرلینٹ یا ٹینیویٹڈ پورسائن ایپیڈیمک ڈائریا وائرس سے متاثر ہوتے ہیں۔ ڈاکٹر امیونول۔ امیونوپاتھول۔ 2002، 85، 85-97۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

7. فروکاوا، ایس. Kuroda, Y.; Sugiyama، A. تجرباتی جانوروں میں نال کی ہسٹولوجیکل ساخت کا موازنہ۔ جے ٹوکسیکول۔ پاتھول۔ 2014، 27، 11-18۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

8. بورن، ایف جے؛ Curtis, J. امیونوگلوبنز IgG, IgA, اور IgM کی سیرم سے کولسٹرم اور بونے میں دودھ میں منتقلی۔ امیونولوجی 1973، 24، 157–162۔ [پب میڈ]

9. پیرین، پی ڈبلیو؛ برٹن، ڈی آر وٹرو اور ویوو میں اینٹی باڈیز کی اینٹی وائرل سرگرمی۔ Adv. امیونول۔ 2001، 77، 195-262۔ [کراس ریف]

10. Bjustrom-Kraft, J.; ووڈارڈ، K.؛ Gimenez-Lirola, L.; روٹولو، ایم؛ وانگ، سی. سورج، Y. لاسلی، پی. ژانگ، جے؛ بوم، ڈی. Gauger، P.؛ ET رحمہ اللہ تعالی. پورسائن ایپیڈیمک ڈائریا وائرس (PEDV) کا پتہ لگانے اور تجارتی بڑھتے ہوئے خنزیروں میں اینٹی باڈی ردعمل۔ بی ایم سی ویٹ۔ Res. 2016، 12، 99۔ [کراس ریف]

11. اوہ، جے ایس؛ گانا، ڈی ایس؛ یانگ، جے ایس؛ گانا، جے وائی؛ چاند، HJ؛ کم، ٹی وائی؛ پارک، بی کے سیرم نیوٹرلائزیشن ٹیسٹ کے ساتھ انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ کا موازنہ پورسائن ایپیڈیمک ڈائریا وائرس کے انفیکشن کی سیرو تشخیص کے لیے۔ J. ویٹ۔ سائنس 2005، 6، 349–352۔ [کراس ریف]

12. اوکدا، ایف۔ لیو، ایکس؛ سنگری، اے. کلیمنٹ، ٹی. نیلسن، جے؛ کرسٹوفر ہیننگز، جے۔ نیلسن، ای اے؛ لاسن، S. بالواسطہ ELISA کی ترقی، ELISA کو مسدود کرنا، فلوروسینٹ مائیکرو اسپیئر امیونوسے اور فلوروسینٹ فوکس نیوٹرلائزیشن پرکھ پورسائن ایپیڈیمک ڈائریا وائرس کے شمالی امریکہ کے تناؤ کے سیرولوجک تشخیص کے لیے۔ بی ایم سی ویٹ۔ Res. 2015، 11، 180۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

13. چن، Q.؛ لی، جی؛ Stasko، J.؛ تھامس، جے ٹی؛ Stensland, WR; Pillatzki, AE; گیجر، پی سی؛ شوارٹز، کے جے؛ میڈسن، ڈی. یون، کے جے؛ ET رحمہ اللہ تعالی. ریاستہائے متحدہ میں سوائن کے درمیان 2013 کی بیماری کے پھیلنے سے وابستہ پورسائن وبائی اسہال کے وائرس کی تنہائی اور خصوصیات۔ جے کلین مائکروبیول 2014، 52، 234–243۔ [کراس ریف]

14. براؤن، جے؛ Rademacher، C.؛ بیکر، ایس. گلٹس میں وائرل شیڈنگ کے دورانیے کو کم کرنے کے لیے کمرشل پورسین وبائی ڈائریا وائرس ویکسین کی افادیت۔ جے ایس ایچ اے پی 2019، 27، 256–264۔

15. Bjustrom-Kraft, J.; ووڈارڈ، K.؛ Giménez-Lirola، L. Serum اور mammary secretion antibody کے ردعمل پورسائن کی وبا کے اسہال میں - امیون گلٹس پورسائن ایپیڈیمک ڈائریا ویکسینیشن کے بعد۔ JSHAP 2018, 26, 34–40۔

16. آئیووا اسٹیٹ یونیورسٹی۔ پورسائن ایپیڈیمک ڈائریا وائرس (PEDV) فلوروسینٹ فوکس نیوٹرلائزیشن (FFN) ٹیسٹ کا طریقہ کار۔ سیرولوجی 2017، 1–7۔

17. آئیووا اسٹیٹ یونیورسٹی۔ پورسائن ایپیڈیمک ڈائریا وائرس (PEDV) ہائی تھرو پٹ وائرس نیوٹرلائزیشن ٹیسٹ (HTNT) کے لیے طریقہ کار۔ سیرولوجی 2017، 1–16۔

18. Hierholzer, JC; کلنگٹن، RA؛ کینگرو، HO؛ ماہی، بی ڈبلیو جے وائرولوجی میتھڈز مینوئل؛ اکیڈمک پریس: لندن، یو کے، 1996؛ ص 21۔

19. تھرسفیلڈ، ایم. ویٹرنری ایپیڈیمولوجی، دوسرا ایڈیشن؛ Blackwell Science LTD: Hoboken، NJ، USA، 1995؛ ص 479.

20. لی، سی پورسائن ایپیڈیمک ڈائریا وائرس: ایک ابھرتا ہوا اور دوبارہ ابھرتا ہوا ایپیزوٹک سوائن وائرس۔ ویرول۔ J. 2015, 12, 193. [CrossRef]

21. پونسوک، K.؛ Gimenez-Lirola, LG; ژانگ، جے؛ اررودا، پی. چن، Q. Correa da Silva Carrion, L.; Magtoto, R.; پینیرو، پی. سارمینٹو، ایل۔ وانگ، سی. ET رحمہ اللہ تعالی. کیا گردش کرنے والی اینٹی باڈی سور کی وبائی اسہال کے وائرس سے خنزیر کے تحفظ میں کوئی کردار ادا کرتی ہے؟ PLOS ONE 2016, 11, e0153041۔ [کراس ریف]

22. Niederwerder, MC; Nietfeld, JC; بائی، جے؛ پیڈیریڈی، ایل۔ بریزیل، بی۔ اینڈرسن، جے؛ کیریگن، ایم اے؛ این، بی؛ اوبرسٹ، آر ڈی؛ کرافورڈ، K.؛ ET رحمہ اللہ تعالی. ٹشو لوکلائزیشن، شیڈنگ، وائرس کیریج، اینٹی باڈی رسپانس، اور 4-ہفتہ پرانے فیڈر سوروں کو ٹیکہ لگانے کے بعد پورسین وبائی ڈائریا وائرس کی ایروسول ٹرانسمیشن۔ J. ویٹ۔ تشخیص سرمایہ کاری کریں۔ 2016، 28، 671–678۔ [کراس ریف]

23. میڈسن، ڈی ایم؛ اروڈا، پی ایچ؛ Magstadt, DR; برورو، ای آر؛ ہوانگ، ایچ. سورج، ڈی. بوور، ایل پی؛ بھنڈاری، ایم. گیجر، پی سی؛ سٹیونسن، جی ڈبلیو؛ ET رحمہ اللہ تعالی. خنزیر کے وبائی اسہال کے وائرس کی خصوصیت US/Iowa/18984/2013 انفیکشن کو 1-دن پرانے سیزرین سے حاصل شدہ کولسٹرم سے محروم سوروں میں الگ کرتا ہے۔ ڈاکٹر پاتھول۔ 2016، 53، 44–52۔ [کراس ریف]

24. میناؤ، ای. Manteca، X. گایوں اور بویوں میں پیدائش کی وجہ سے درد اور تکلیف۔ اپل انیم برتاؤ۔ سائنس 2011، 135، 241–251۔ [کراس ریف]

25. Erb، HN پیشگی امکان (پہلے سے بہترین اندازہ) تشخیصی ٹیسٹوں کی پیشین گوئی کی قدروں کو متاثر کرتا ہے۔ ڈاکٹر کلین پاتھول۔ 2011، 40، 154–158۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

26. ٹینی، ایس. ہافمین، ایم آر پھیلاؤ۔ StatPearls میں؛ StatPearls Publishing: Treasure Island, FL, USA, 2022. 27. Langel, SN; پائیم، ایف سی؛ الحمو، ایم اے؛ بکلی، اے. وین گیلن، اے. لیگر، کلومیٹر؛ ولاسوا، اے این؛ سیف، LJ حاملہ سوائن کی وبائی مرض میں حمل کے مرحلے کا حاملہ سوائن کا وائرس انفیکشن زچگی کی قوت مدافعت اور نوزائیدہ دودھ پلانے والے سوروں کی لیکٹوجینک مدافعتی تحفظ کو متاثر کرتا ہے۔ سامنے والا۔ امیونول۔ 2019، 10، 727۔ [کراس ریف] [پب میڈ]