NADC سے متاثرہ خنزیروں میں Exosomal MiRNAs کے ظاہر شدہ پروفائلز کی منظم شناخت اور موازنہ{0}}جیسے PRRSV سٹرین

سادہ خلاصہ:Exosomes وائرس کے انفیکشن، اینٹیجن پریزنٹیشن، اور جسم کی قوت مدافعت کو دبانے/فروغ دینے میں ایک منفرد کردار ادا کرتے ہیں۔ پورسائن ری پروڈکٹیو اینڈ ریسپائریٹری سنڈروم وائرس (PRRSV) سور کی صنعت میں سب سے زیادہ نقصان دہ پیتھوجینز میں سے ایک ہے۔ یہاں، ہم نے PRRSV NADC30-جیسے CHsx1401 تناؤ کا استعمال مصنوعی طور پر 42-دن پرانے خنزیروں کو متاثر کرنے کے لیے کیا، سیرم کے خارجیوں کو الگ تھلگ کرنے، اور انفیکشن اور کنٹرول گروپس کے درمیان 33 نمایاں طور پر ظاہر کردہ (DE) exosomal miRNAs کی شناخت، اور PRRSV انفیکشن اور استثنیٰ سے وابستہ 18 DE miRNAs کو exosomes کے ذریعے PRRSV وائرس کے انفیکشن کے ضابطے میں شامل ممکنہ فعال مالیکیولز کے طور پر اسکرین کیا گیا تھا۔

خلاصہ:Exosomes حیاتیاتی vesicles ہیں جو خلیات کے ذریعے چھپے اور جاری کیے جاتے ہیں جو انٹر سیلولر کمیونیکیشن کے ثالث کے طور پر کام کرتے ہیں اور وائرس کے انفیکشن، اینٹیجن پریزنٹیشن، اور جسم کی قوت مدافعت کو دبانے/فروغ دینے میں منفرد کردار ادا کرتے ہیں۔ پورسائن ری پروڈکٹیو اینڈ ریسپائریٹری سنڈروم وائرس (PRRSV) سور کی صنعت میں سب سے زیادہ نقصان دہ پیتھوجینز میں سے ایک ہے اور یہ بویوں میں تولیدی خرابی، خنزیروں میں سانس کی بیماریاں، نشوونما میں کمی، اور دیگر بیماریوں کا سبب بن سکتا ہے جو سور کی موت کا باعث بنتے ہیں۔ اس مطالعہ میں، ہم نے PRRSV NADC30-جیسے CHsx1401 سٹرین کا استعمال کیا تاکہ مصنوعی طور پر 42-دن پرانے خنزیروں کو متاثر کیا جائے اور سیرم کے خارجیوں کو الگ کیا جائے۔ ہائی تھرو پٹ سیکوینسنگ ٹکنالوجی کی بنیاد پر، انفیکشن سے پہلے اور بعد میں 305 miRNAs کی شناخت سیرم exosomes میں کی گئی تھی، جن میں سے 33 miRNAs گروپوں کے درمیان نمایاں طور پر فرق کا اظہار کیا گیا تھا (13 نسبتاً اپ ریگولیٹڈ اور 20 نسبتاً نیچے)۔ CHsx1401 جینوم کے تسلسل کے تحفظ کے تجزیے نے 8 محفوظ علاقوں کی نشاندہی کی، جن میں سے کل 16 امتیازی طور پر ظاہر کیے گئے (DE) miRNAs کے 3 کے قریب ترین محفوظ علاقے سے منسلک ہونے کی پیش گوئی کی گئی تھی۔0 CHsx1401 جینوم کا UTR، بشمول 5 DE miRNAs جو CHsx1401 3 سے منسلک ہونے کے قابل ہیں0 UTR (ssc-miR-34c, ssc-miR-375, ssc-miR-378, ssc-miR-486, ssc-miR-6529)۔ مزید تجزیے سے یہ بات سامنے آئی کہ متفرق طور پر ظاہر کیے گئے miRNAs کے ہدف والے جین exosomal فنکشن سے متعلق اور پیدائشی قوت مدافعت سے متعلق سگنلنگ راستوں میں بڑے پیمانے پر شامل تھے، اور 18 DE miRNAs (ssc-miR-4331-3p, ssc-miR-744 , ssc-miR-320, ssc-miR-10b, ssc-miR-124a, ssc-miR-128، وغیرہ) PRRSV انفیکشن اور امیونٹی سے وابستہ اسکریننگ کی گئی۔ ممکنہ فعال مالیکیولز کے طور پر جو exosomes کے ذریعے PRRSV وائرس کے انفیکشن کے ضابطے میں شامل ہیں۔

cistanche پلانٹ میں مدافعتی نظام میں اضافہ

مطلوبہ الفاظ:PRRSV; سیرم exosome؛ miRNAs

1. تعارف

پورسائن ری پروڈکٹیو اینڈ ریسپائریٹری سنڈروم وائرس (PRRSV) ایک واحد پھنسے ہوئے مثبت اسٹرینڈ RNA وائرس ہے جس کا لفافہ ڈھانچہ Nidovirales، Family Arteriviridae، genus Betaarterivirus [1,2] سے تعلق رکھتا ہے۔ یہ ایک منجمد الیکٹران خوردبین کے نیچے 50-65 nm کے قطر کے ساتھ کروی یا بیضوی ہے [3,4]۔ PRRSV جینوم کی لمبائی 50 کیپ اور 30 ​​پولی اے ٹیل کے ساتھ تقریباً 15 kb ہے اور اس میں کم از کم 10 اوپن ریڈنگ فریم (ORFs) ہوتے ہیں جو 50 اور 30 ​​ٹرمینی [5,6] دونوں جگہوں پر غیر ترجمہ شدہ خطوں (UTRs) سے جڑے ہوتے ہیں۔ وائرس کے ذرات بنانے کے لیے لپڈ ڈبل لیئر کوٹنگ کے ساتھ نیوکلیو کیپسڈ پروٹین سے لپیٹا جاتا ہے۔ Exosomes monolayer جھلی کے ڈھانچے کے ساتھ vesicles سے تعلق رکھتے ہیں اور ان کی ٹاپولوجیکل ساخت خلیات کی طرح ہوتی ہے [7]۔ شکل الیکٹران خوردبین کے تحت "کپ کی شکل" یا "ڈسک کی شکل" ہے [8,9]۔ گردشی نظام میں Exosomes طویل عرصے تک موجود رہ سکتے ہیں، اور exosomes میں موجود مادوں کو ملحقہ خلیات یا دور رسیپٹر سیلز کے ذریعے جذب کیا جا سکتا ہے اور پھر خلیات کے درمیان جینیاتی مواد کے تبادلے میں حصہ لینے کے لیے ریسیپٹر سیلز کو ریگولیٹ کر سکتے ہیں [10,11]۔ وہ بنیادی طور پر جھلی کی سطح کے مادوں اور لے جانے والے مواد پر مشتمل ہوتے ہیں، بشمول سیل کی سطح کے رسیپٹرز، جھلی پروٹین، حل پذیر پروٹین، لپڈس، RNA (mRNA، miRNA، lncRNA، اور وائرل RNA، وغیرہ)، جینومک DNA، mitochondrial DNA [12–14 ] مائیکرو آر این اے (miRNAs) 18–25 نیوکلیوٹائڈس (nt) کی ایک کلاس ہے جو ارتقائی طور پر محفوظ شدہ اینڈوجینس نان کوڈنگ سنگل اسٹرینڈڈ چھوٹے RNAs ہیں، جو ہدف mRNA کے انحطاط کو دلانے یا ہدف mRNA کے 30 UTR کے ساتھ پابند ہو کر ترجمے کے عمل کو روکتے ہیں۔ نقل کے بعد کے جین کو خاموش کرنا، پھر نقل کے بعد کی سطح [15–17] پر جین کے اظہار کو منظم کرنا۔ یہ اندازہ لگایا گیا ہے کہ miRNAs 60٪ سے زیادہ ممالیہ جینوں کو نقل کے بعد کنٹرول کرتے ہیں [18,19]۔ MiRNAs انٹر سیلولر مواصلات میں ایک اہم کردار ادا کرتے ہیں اور اسے بیماری اور وائرس کے انفیکشن، ٹرانسمیشن اور دفاع کے لیے ممکنہ فعال مالیکیول کے طور پر بھی استعمال کیا جا سکتا ہے [20]۔ مطالعے کی ایک بڑھتی ہوئی تعداد سے پتہ چلتا ہے کہ miRNAs جسمانی رطوبتوں میں موجود ہوسکتے ہیں، جیسے تھوک، پیشاب، ماں کے دودھ، اور خون، اور جسم کے سیال گردشی نظام کے ذریعے کام کرتے ہیں [21,22]۔ Exosomal miRNAs کو جین کے اظہار اور میٹابولزم کے اینڈوجینس ریگولیٹرز سمجھا جاتا ہے اور مختلف پیتھولوجیکل حالات کی نشاندہی کر سکتے ہیں [23,24]۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا

پچھلی دو دہائیوں کے دوران، یہ دکھایا گیا ہے کہ مدافعتی خلیوں کی نشوونما، پیدائشی مدافعتی ردعمل، اور حاصل شدہ مدافعتی ردعمل کے ضابطے میں miRNAs کا اہم کردار ہے۔ کچھ دیگر miRNAs کے بارے میں بتایا جاتا ہے کہ وہ مندرجہ ذیل طریقوں سے PRRSV انفیکشن کو متاثر کرتے ہیں، براہ راست PRRSV جینوم یا PRRSV ریسیپٹر کو نشانہ بناتے ہیں، یا میزبان کے پیدائشی مدافعتی ردعمل کو منظم کرتے ہوئے اپنا کردار ادا کرتے ہیں۔ miR-26 خاندان وائرس کی نقل کو نمایاں طور پر نقصان پہنچا سکتا ہے، اور miR-26a قسم I انٹرفیرون (IFN) کو ریگولیٹ کرکے پورسائن الیوولر میکروفیجز (PAMs) میں ٹائپ 1 اور ٹائپ 2 PRRSV تناؤ کی نقل کو روک سکتا ہے۔ راستہ، جو miR-26b [25,26] سے زیادہ موثر ہے۔ miR-30c اور miR-125b کی شناخت بالترتیب [27–29] قسم I IFN پاتھ وے اور NF-κB پاتھ وے کو ہدف بنا کر میزبان پیدائشی مدافعتی ردعمل کو ماڈیول کرنے کے لیے کی گئی ہے۔ MiR-23، miR-378، اور miR-505 PRRSV کو نشانہ بنانے والے اینٹی وائرل ہوسٹ عوامل ہیں اور ٹائپ 2 PRRSV اسٹرینز میں قدامت پسند ٹارگٹ سائٹس ہیں [30]۔ ایک ہی وقت میں، میزبان miR-506 کی شناخت PRRSV کی نقل کو روکنے کے لیے MARC-145 خلیات [31] میں PRRSV ریسیپٹر CD151 کو براہ راست نشانہ بنا کر کی گئی ہے۔ miR-181 خون کے مونوسائٹس اور پی اے ایم میں PRRSV ریسیپٹر CD163 کو نیچے ریگولیٹ کرکے بالواسطہ طور پر PRRSV نقل کو روک سکتا ہے [32]۔ اس کے علاوہ، miRNAs بنیادی سیل فزیالوجی میں مداخلت کرکے PRRSV نقل کو فروغ دے سکتے ہیں۔ MiR-24-3p اور miR-22 PRRSV انفیکشن کے دوران HO-1 کے 30 UTR کو براہ راست نشانہ بناتے ہیں تاکہ ہیم آکسیجن کی روک تھام سے بچ سکیں-1 (HO-1)، a PRRSV [33,34] پر ہیٹ شاک پروٹین (HSP32 بھی کہا جاتا ہے)۔ خنزیر PRRSV کے لیے زیادہ حساس اور جاندار میں اس روگجن کے داخلے کے خلاف اپنا دفاع کرنے کے قابل نہیں ہوتے ہیں [35]۔ موجودہ مطالعہ میں، اس وائرس سے متاثرہ خنزیروں کی پیدائشی قوت مدافعت اور حاصل شدہ قوت مدافعت کا مالیکیولر سطح پر کھیت میں موجود تناؤ کا استعمال کرتے ہوئے مطالعہ کیا گیا۔ PRRSV کے انفیکشن سے پہلے اور بعد میں سیرم ایکزووم کو الگ تھلگ کرنے اور شناخت کرنے کے لیے ایک سیرم ایکزووم آئسولیشن کٹ، ٹرانسمیشن الیکٹران مائیکروسکوپی (TEM)، نینو پارٹیکل ٹریکنگ اینالیسس (NTA)، اور ویسٹرن بلاٹ (WB) کا استعمال کیا گیا، اس کے بعد چھوٹے RNA تسلسل کا تجزیہ، شناخت، اور متعدد PRRSV سے وابستہ سیرم exosome miRNAs حاصل کرنے کے لیے بایو انفارمیٹکس کے طریقوں کا استعمال کرتے ہوئے امتیازی اظہار کے نتائج کا تجزیہ، جس کے بعد مقداری ریئل ٹائم پی سی آر (qRT-PCR) کا استعمال کرتے ہوئے ڈیٹا کے نتائج کی شناخت۔

2. مواد اور طریقہ

2.1 جانوروں کے تجربات

چھ PRRSV اینٹیجن اور اینٹی باڈی ڈبل منفی صحت مند 42-دن پرانے بڑے سفید خنزیر کو تنہائی، صحت کی دیکھ بھال، اور ماحولیاتی موافقت کے لیے پگ کلین فیڈنگ سسٹم میں رکھا گیا تھا۔ تمام خنزیر بغیر کسی پابندی کے کھانے پینے کے لیے آزاد تھے۔ جب وہ آئسولیٹر کے حالات سے واقف تھے، خنزیروں کو ناک سے 2 mL 105 TCID50/mL PRRSV NADC30-جیسے CHsx1401 کے ساتھ ٹیکہ لگایا گیا تھا، جس کا ذکر پیشرو [36,37] نے کیا تھا۔ خنزیر کا خون اس سے پہلے (کنٹرول گروپ، n=6) اور 7 دن بعد (علاج گروپ، n=6) وائرس ٹیکہ سیرم تنہائی کے لیے anterior vena cava سے جمع کیا گیا تھا۔ سیرم میں سیلولر ملبے کو 15 منٹ کے لئے 3000 جی پر سینٹرفیوگریشن کے ذریعہ ہٹا دیا گیا تھا۔ ہمارے مطالعے میں جانوروں کے تمام تجربات کو انسٹی ٹیوٹ آف اینیمل سائنس، چائنیز اکیڈمی آف ایگریکلچرل سائنسز (CAAS) (بیجنگ، چین)، IAS2022-130 کی اینیمل ایتھکس کمیٹی نے منظور کیا تھا۔

2.2 سیرم Exosomes کی الگ تھلگ اور صاف کرنا

صنعت کار کے پروٹوکول کے مطابق ExoEasy Maxi کٹ (QIAGEN, Hilden, Germany, cat. no. 76064) کا استعمال کرتے ہوئے Exosome تنہائی اور تطہیر کی گئی۔

2.3 ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپی (TEM)

نکالے گئے exosome سسپنشنز کو فارموار کاربو لیپت تانبے کی جالی پر دیکھا گیا تھا، اور exosomes کو PBS کے ساتھ دھویا گیا تھا اور کمرے کے درجہ حرارت پر 3 منٹ کے لیے معیاری uranyl acetate سٹیننگ کا نشانہ بنایا گیا تھا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر کئی منٹ تک خشک ہونے کے بعد، گرڈ کو ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ (HT-7700, Hitachi-High Tech, Tokyo, Japan) کے ذریعے 100 kV پر تصویر کشی کی گئی۔

2.4 نینو پارٹیکل ٹریکنگ تجزیہ (NTA)

نکالے گئے exosomes کو 1 × PBS کے ساتھ 10 سے 30 μL حجم میں تبدیل کر کے پتلا کر دیا گیا۔ نمونے کی جانچ کے بعد، مینوفیکچرر کی ہدایات (NanoFCM، Xiamen، China) پر عمل کرتے ہوئے N30E فلو نینو اینالائزر کے ذریعے سیرم ایکسوسم کی حراستی اور سائز کا تجزیہ کیا گیا۔

2.5 مغربی دھبہ

نکالے گئے exosome نمونوں کو RIPA lysate میں شامل کیا گیا جس میں protease inhibitor (Invitrogen, Waltham, MA, USA) اور phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) کے ساتھ ملایا گیا تاکہ exosome پروٹین کو نکالا جا سکے، جسے برف پر 30 منٹ تک لیس کیا گیا تھا۔ پھر، بریڈ فورڈ کٹ کی ہدایات کے مطابق، ہم نے سیرم ایکزووم پروٹین کے ارتکاز کی مقدار درست کی۔ Exosome پروٹین تھرمل ڈینیچریشن سے گزرے۔ پروٹین کی اتنی ہی مقدار کو 12٪ SDS-PAGE جیل پر الگ کیا گیا تھا اور پھر پولی وینیلائیڈین فلورائڈ (PVDF) جھلی (ملی پور، برلنگٹن، ایم اے، یو ایس اے) میں منتقل کیا گیا تھا۔ اسے TBST میں بھگو کر رکھا گیا تھا جس میں 5% سکمڈ دودھ کا پاؤڈر تھا اور کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹے کے لیے سیل کر دیا گیا تھا۔ ہم نے جھلی کو پتلی پرائمری اینٹی باڈی (اینٹی CD9 اینٹی باڈی، Abcam, Boston, MA, USA, #ab92726; اینٹی CD81 اینٹی باڈی، Abcam, Boston, MA, USA, #ab109201) میں راتوں رات 4 ◦C پر بھگو دیا، اور صحت یاب ہو گئے۔ بنیادی اینٹی باڈی. ہم نے جھلی کو پتلی ثانوی اینٹی باڈی میں بھگو دیا، اسے کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹہ تک انکیوبیٹ کیا، اور سیکنڈری اینٹی باڈی کو بازیافت کیا۔ ہم نے PBST کی دھوئی ہوئی فلم کو تازہ کیپنگ فلم پر ڈالا، مساوی حجم میں ملا ہوا ECL a/b کروموجینک محلول شامل کیا، اور اسے کیمیلومینیسینس امیجر میں رکھا۔

مردوں کے لئے cistanche فوائد - مدافعتی نظام کو مضبوط

Cistanche Enhance Immunity مصنوعات دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

2.6۔ Exosomal Small RNA کی ترتیب اور ڈیٹا کا تجزیہ

کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق Exosomes سے کل RNA Trizol کے ساتھ نکالا گیا تھا۔ اس کے بعد ہم نے RNA حراستی اور نظری کثافت (OD) قدر کا پتہ لگایا اور 1% ایگروز جیل الیکٹروفورسس کے ساتھ RNA کی تنزلی اور پاکیزگی کا پتہ لگایا۔ دریں اثنا، Agilent Bioanalyzer 2100 RNA کی سالمیت کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا گیا۔ ہم نے معیار کے معائنے کے بعد exosomes کے کل RNA کا استعمال کیا۔ مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق، ہم نے Illumina® (Illumina, San Diego, CA, USA) کے لیے NEB NEXT ملٹی پلیکس چھوٹی RNA لائبریری پریپ سیٹ کا استعمال کیا۔ کٹ نے ایک چھوٹی سی آر این اے سی ڈی این اے لائبریری تیار کی اور ایلومینا نووسیق 6000 پلیٹ فارم کے ذریعے 50 nt سنگل اینڈ ریڈز تیار کرنے کے لیے ترتیب دی۔ چھوٹی آر این اے لائبریری کی تیاری کے تمام طریقہ کار نووگین (بیجنگ، چین) نے مکمل کیے تھے۔ کوالٹی کنٹرول کے بعد ڈیٹا کو بوٹی کا استعمال کرتے ہوئے پورسائن ریفرنس جینوم (Sus scrofa 11.1) کے ساتھ جوڑا گیا تھا۔ معروف miRNAs کی شناخت miRbase (v22.0) ڈیٹا بیس [38] (https://www.mirbase.org، 14 جنوری 2022 کو حاصل کی گئی)، miRdeep2 (v0.0.5) [39]، اور miRevo (v1.1) سے کی گئی۔ ) [40] اور نئے miRNAs کی پیشن گوئی کرنے کے لیے استعمال کیے گئے تھے۔ ایک ہی وقت میں، miRNAs کے لیے امتیازی اظہار کا تجزیہ DESeq (v1.24.0) [41] کے ذریعے کیا گیا، جس میں |fold change| > 1.6 اور p <0.05۔ صف بندی MEGA (V11) [42] کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی جس کے بعد PHAST (v1.6.9) [43] کا استعمال کرتے ہوئے سنگل بیس اسکورنگ کی گئی تھی اور 10 وائرس جینز کے سب سے زیادہ محفوظ علاقوں کی تشخیص، بشمول WUH3 (GenBank الحاق نمبر HM853973)، VR2332 ( GenBank الحاق نمبر. U87392)، JXA1 (GenBank الحاق نمبر EF112445)، CH-1a (GenBank الحاق نمبر. AY032626)، NADC30 (GenBank الحاق نمبر. HN654459)، HUNk4 (EF112459 GenBank الحاق نمبر)، HUNk4 (HUNk6DL00Gen) 22-1812 (GenBank الحاق نمبر MN648450)، SC/DJY (GenBank الحاق نمبر. MT075480)، اور Lelystad (GenBank الحاق نمبر M96262.2)۔ RNAhybrid (V2.0) [44] کا استعمال CHsx1401 وائرس جینوم کے 3 0 UTR سے شناخت شدہ miRNA ترتیب کے پابند ہونے کی پیش گوئی کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ مرانڈا (v3.3a) اور RNAhybrid کو جین کی پیشن گوئی کو نشانہ بنانے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ کلسٹر پروفائل [45] R پیکیج کا استعمال GO (جین آنٹولوجی) ٹارگٹ جینز کے فنکشنل افزودگی تجزیہ اور KEGG (کیوٹو انسائیکلوپیڈیا آف جینز اینڈ جینومز) پاتھ وے افزودگی کے تجزیہ کے لیے کیا گیا تھا۔

2.7۔ RT-qPCR کے ذریعے miRNA اظہار کی توثیق

مینوفیکچرر کے پروٹوکول کے مطابق کل RNA کو Trizol (انویٹروجن، شنگھائی، چین) کا استعمال کرتے ہوئے سیرم exosomes سے الگ تھلگ کیا گیا تھا۔ الگ تھلگ RNA کی تصدیق RT-qPCR کے ذریعے نمونوں پر کی گئی تھی (n=6 فی گروپ)۔ cDNA کو miRNA 1st اسٹرینڈ cDNA ترکیب (بذریعہ اسٹیم لوپ) کٹ (وازیم، نانجنگ، چائنا) کی ہدایات کے مطابق ترکیب کیا گیا تھا، اور فلوروسینس کوانٹیفیکیشن ABI 7500 کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا تھا۔ miRNA یونیورسل SYBR qPCR ماسٹر مکس کی ہدایات (وازیم، نانجنگ، چین)۔ استعمال شدہ تھرمل سائیکل پیرامیٹرز مندرجہ ذیل تھے: پہلا مرحلہ: 30 s کے لیے 95 ◦C؛ مرحلہ 2: 5 سیکنڈ کے لیے 95 ◦C، 34 سیکنڈ کے لیے 60 ◦C، اور 40 سائیکل؛ مرحلہ 3: 15 سیکنڈ کے لیے 95 ◦C، 1 منٹ کے لیے 60 ◦C، اور 15 سیکنڈ کے لیے 95 ◦C۔ miRNAs کے ابتدائی سلسلے، U6 جین، بطور حوالہ استعمال کیے گئے [46] اور ضمنی جدول S1 میں درج ہیں۔ تمام qRT-PCR تصدیق تین حیاتیاتی نقلوں کا استعمال کرتے ہوئے اور ہر نمونے کے لیے تین نقل کے ساتھ کی گئیں۔ نقلوں کی نسبتا کثرت کا حساب 2-Ct طریقہ سے لگایا گیا تھا، اور بالترتیب SPSS (v22.0) اور GraphPad Prism (v8.0) کو ڈیٹا کے تجزیہ اور نقشہ سازی کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ p <0.05 کا مطلب ہے کہ فرق شماریاتی لحاظ سے اہم ہے۔

3. نتائج

3.1 وائرس ٹیکہ لگانے کے بعد اینٹیجن اور اینٹی باڈی کی رشتہ دار قدر

چیلنج سے پہلے (دن 0) اور (دن 7) کے بعد PRRSV اینٹیجن اور اینٹی باڈی ٹیسٹ کے نتائج ٹیبل 1 میں دکھائے گئے ہیں۔ چیلنج سے پہلے PRRSV اینٹیجن اور اینٹی باڈی کا سیرولوجیکل پتہ لگانا منفی تھا، اور اینٹیجن تھا چیلنج کے بعد مثبت، اس بات کی نشاندہی کرتا ہے کہ خنزیر کامیابی سے CHsx1401 سے متاثر ہوئے تھے۔

3.2 سیرم Exosomes کی تنہائی اور شناخت

سیرم سے الگ تھلگ vesicles TEM کے ذریعہ دریافت کیے گئے تھے۔ زیادہ تر vesicles درمیان میں مقعر طشتری- یا ڈسک کے سائز کے exosomes کو دیکھ سکتے ہیں۔ exosomes کی جھلی کا کنارہ نظر آتا ہے، اور مورفولوجی نسبتاً مکمل ہے (شکل 1A، B)۔ نینو پارٹیکل سے باخبر رہنے کے تجزیے سے پتہ چلتا ہے کہ 95.73% exosomes کا قطر 30–150 nm ہے، بنیادی طور پر تقریباً 72.25 nm، جس کا اوسط قطر 76.22 nm ہے، جو exosomes کی سائز کی خصوصیات کے مطابق تھا (شکل 1C)۔ اس سائز کی حد ٹی ای ایم کے ذریعہ دریافت کی گئی تھی اور اس نے ان ویسیکلز کی بطور ایکسوسم کی شناخت کی مزید تصدیق کی۔ مغربی دھبے کے تجزیے سے پتہ چلتا ہے کہ سیرم کے نمونوں سے الگ تھلگ واسیکلز CD9 اور CD81 پروٹین (شکل 1D) کے لیے مثبت تھے۔ مندرجہ بالا خصوصیات MISEV2018 [47] میں انٹرنیشنل سوسائٹی فار ایکسٹراس ویسیکلز (ISEV) کے وضع کردہ exosome شناختی معیارات کے مطابق ہیں۔

جدول 1. چیلنج وائرس کے ساتھ (دن 0) اور (دن 7) کا اینٹیجن اور اینٹی باڈی۔

پیکر 1. سیرم ایکسوسم کی اہم خصوصیات۔ (A، B) TEM کے ذریعہ vesicles کی مورفولوجیکل خصوصیات دکھاتے ہیں۔ اسکیل بارز بالترتیب 500 nm اور 100 nm ہیں۔ (C) NTA زیادہ تر vesicles کے قطر اور ارتکاز کو ظاہر کرتا ہے۔ (D) ویسٹرن بلاٹ نے سیرم exosomes میں exosome مارکر CD81 اور CD9 کی موجودگی کو ظاہر کیا۔ نوٹ: WB کے نتائج میں مکس نمونہ مخلوط معطلی ہے جو exoEasy Maxi کٹ کے ذریعے الگ تھلگ کی گئی ہے۔

3.3 سیرم Exosomes کی چھوٹی RNA ترتیب

ہر نمونے کے لیے، صاف ڈیٹا 0.5 Gb تک پہنچ گیا، اور Q30 بنیادی فیصد 96.20% سے اوپر تھا۔ ہر نمونے کے کلین ریڈز کو سور ریفرنس جینوم کے ساتھ جوڑا گیا تھا۔ 12 نمونوں میں سے، کنٹرول گروپ نے بالترتیب 10,920,887, 10,248,696, 10,109,117, 10,655,494, 9,217,285, اور 9,782,523 ریڈز حاصل کیے۔ علاج کے گروپ نے بالترتیب 11,889,518, 10,593,504, 10,593,504, 12,846,080, 10,105,325, 11,729,451, اور 9,789,542 ریڈز حاصل کیے۔ اوسطاً، کل کلین ریڈز کا 77.96% لمبائی میں 19-22 نیوکلیوٹائڈس (nt) پر مشتمل ہے (شکل 2A)۔ کوالٹی کنٹرول کے بعد پڑھے جانے والے کل ریڈز کے 92.59 فیصد سے زیادہ تھے۔ پروسیس شدہ کلین ریڈز کو پورسین ریفرنس جینوم کے ساتھ منسلک کیا گیا تھا، اور جینوم پر 12 لائبریریوں کی میپ شدہ شرح 92.30٪ سے زیادہ تھی، اور میپ شدہ شرح 94.98٪ تھی (شکل 2B)۔ اس نے اشارہ کیا کہ تعمیر شدہ سیرم exosomal miRNA لائبریری اعلیٰ معیار کی تھی اور مزید تجزیہ کے لیے موزوں تھی۔ تفصیلات ضمنی جدول S2 میں درج ہیں۔

شکل 2. چھوٹے RNA ٹرانسکروم ڈیٹا کا جائزہ۔ (A) سیرم کے خارجی نمونوں (nt=نیوکلیوٹائڈز) کی پڑھی ہوئی تعداد کی لمبائی کی تقسیم؛ (B) حوالہ جینوم میں نقشہ کردہ 12 نمونوں کی شرح

3.4 miRNAs کا امتیازی اظہار کا تجزیہ

شناخت شدہ miRNA اظہار کے مقداری تجزیہ کے بعد، miRNAs کو پہلے سیکشن 2.6 میں بیان کردہ دہلیز کے ذریعہ اسکرین کیا گیا تھا۔ CHsx1401 تناؤ (کنٹرول، n=6؛ علاج، n=6) کی ٹیکہ لگانے سے پہلے اور بعد میں کل 305 miRNAs حاصل کیے گئے تھے۔ دو گروپوں کے درمیان کل 33 امتیازی طور پر اظہار کردہ (DE) miRNAs کی نشاندہی کی گئی تھی، 13 DE miRNAs کو اپ گریڈ کیا گیا تھا، اور 20 DE miRNAs کو علاج کے گروپ میں کم کیا گیا تھا (شکل 3 اور ضمنی جدول S3)۔

3.5 ایم آر این اے ٹارگٹ جینز کا فنکشنل افزودگی تجزیہ

33 DE miRNAs کے ذریعہ کل 7283 ٹارگٹ جینز کی پیش گوئی کی گئی تھی، اور ہدف کے جینز کے افعال بنیادی طور پر MAPK کیسکیڈ کے مثبت ریگولیشن، لپڈ میٹابولزم کے عمل، انٹرا سیلولر سگنل کی نقل و حمل کے ریگولیشن، ERK1 اور ERK2 cascade (FAig44) پر مرکوز تھے۔ )۔ سالماتی افعال کے لحاظ سے، امتیازی طور پر اظہار کردہ miRNA ٹارگٹ جین بنیادی طور پر GTP-enzyme ریگولیٹری سرگرمی، kinase سرگرمی، nucleoside triphosphatase ریگولیٹری سرگرمی، اور سگنل کی نقل و حمل اور توانائی کے تحول (شکل 4B) سے متعلق دیگر افعال پر توجہ مرکوز کرتے ہیں۔ اس کے علاوہ، خلیے کے اجزاء میں سے، ہدف والے جین بنیادی طور پر سپرمولیکولر پولیمر، گولگی، آٹوفاگوسوم، سیل کی سطح، ابتدائی اینڈوسومس وغیرہ کے حیاتیاتی افعال میں حصہ لیتے ہیں۔ (شکل 4C)۔ ان اجزاء کے افعال کا گہرا تعلق exosomes کی تشکیل سے ہے، جو ترتیب کی درستگی کی بھی وضاحت کرتا ہے۔ KEGG پاتھ وے کی افزودگی کے تجزیے سے پتہ چلتا ہے کہ ٹارگٹ جینز کو اینڈو سائیٹوسس، MAPK سگنلنگ پاتھ وے، Rap1 سگنلنگ پاتھ وے، اسفنگولیپڈ سگنلنگ پاتھ وے، اور PI3K اکٹ سگنلنگ پاتھ وے (p <0.05) میں نمایاں طور پر افزودہ کیا گیا تھا۔ )۔ ایک ہی وقت میں، افزودہ راستوں کی درجہ بندی اور تجزیہ کیا گیا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ ہدف جین کا KEGG راستہ بنیادی طور پر ماحولیاتی معلومات کی پروسیسنگ، انسانی بیماریوں، اور حیاتیاتی نظام (شکل 5B) میں افزودہ تھا۔

شکل 3۔ exosomes میں miRNAs کا امتیازی اظہار۔ (A) کنٹرول اور ٹریٹمنٹ گروپس کے درمیان miRNAs کا آتش فشاں پلاٹ۔ (B) کنٹرول اور ٹریٹمنٹ گروپس کے درمیان DE miRNAs کا درجہ بندی کا کلسٹرنگ ہیٹ میپ۔

شکل 4. DE miRNAs کے ٹارگٹ جینز کا GO فنکشن افزودگی کا تجزیہ۔ (A) DE miRNAs کا حیاتیاتی عمل ہدف جینز؛ (B) DE miRNAs کے سالماتی افعال ہدف جینز؛ (C) DE miRNAs کے سیلولر اجزاء ہدف جینز

شکل 5. KEGG پاتھ وے ٹارگٹ جینز کی افزودگی کا تجزیہ۔ (A) DE miRNAs کے ہدف والے جینوں کے ساتھ نمایاں طور پر افزودہ KEGG راستہ؛ (B) نمایاں طور پر افزودہ KEGG راستوں کی درجہ بندی۔

3.6۔ سیرم Exosomal miRNA اور PRRSV CHsx1401 جینوم کی ہدف سازی کی پیشن گوئی

پی ایچ اے ایس ٹی کی سیدھ کے بعد سنگل بیس کے فاسٹ کونز اسکور کے مطابق، وائرل جینومز (شکل 6) میں کل آٹھ سب سے زیادہ محفوظ طبقات (چوٹی کے نقشے کے اوپر سیاہ بینڈ) حاصل کیے گئے تھے۔ مجموعی طور پر 31 DE miRNAs کو محفوظ طبقہ سے منسلک miRNAs کی پیش گوئی کرکے محفوظ طبقہ سے منسلک پایا گیا۔ ان میں، CHsx1401 جینوم کے 30 UTR (14,870–15,020) کے قریب ترین محفوظ علاقے (14,644–15,020 nt) میں، 16 DE miRNAs کے اس سے منسلک ہونے کی پیش گوئی کی گئی ہے، بشمول 5 miRNAs (ssc-miR{1}} c, ssc-miR-375, ssc-miR-378, ssc-miR-486، اور ssc-miR-6529) جو CHsx1401 کے 30 UTR سے منسلک ہو سکتے ہیں۔ ان miRNAs میں، صرف ssc-miR-223 کو انفیکشن کے بعد اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا، اور دیگر miRNAs کو انفیکشن کے بعد کم کر دیا گیا تھا۔ تفصیلات کے لیے ضمنی جدول S4 دیکھیں۔

تصویر 6. پی ایچ اے ایس ٹی کے ذریعہ پیش گوئی کی گئی CHsx1401 تناؤ کے جینوم میں محفوظ حصے

3.7۔ Exosome فنکشن اور PRRSV سے متعلق DE miRNAs کی اسکریننگ

ٹارگٹ جینز کے فنکشنل افزودگی کے تجزیے کے ذریعے exosomes اور PRRSV کے فنکشن سے متعلق متفرق اظہار شدہ miRNAs کی ایک قسم پائی گئی۔ ان میں، 11 DE miRNAs جیسے ssc-miR-4331-3p، ssc-miR-744، اور ssc-miR-320 exosome اپٹیک میں شامل ہیں، اور ان کے ہدف والے جین بنیادی طور پر مرتکز ہوتے ہیں۔ راس جین فیملی، اینیکسن فیملی، اور اے ڈی پی رائبوسیلیشن جین فیملی۔ اٹھارہ DE miRNAs، بشمول sscmiR-10b، ssc-miR-124a، اور ssc-miR-128، مدافعتی سے متعلق راستوں میں حصہ لیتے ہیں، اور ان کے ہدف والے جین بنیادی طور پر MAPK میں مرتکز ہوتے ہیں۔ جین فیملی، PIK3 جین فیملی، اور پروٹین فاسفیٹیس جین فیملی۔ جبکہ 11 DE miRNAs وائرس کے حملے میں ملوث ہیں، متعلقہ ٹارگٹ جین بنیادی طور پر MAPK جین فیملی اور پروٹین فاسفیٹیس جین فیملی میں مرتکز ہوتے ہیں۔ مزید برآں، متعدد متفرق اظہار کردہ miRNAs، جیسے ناول_102۔ چھ DE miRNAs، بشمول ssc-miR-320, ssc-miR-423-5p, ssc-miR-4331-3p,ssc-miR-7137-3p، اور ssc-miR{{ 25}}، exosome فنکشن، PRRSV وائرس کے حملے، اور مدافعتی سے متعلق راستے میں مشترکہ اظہار کیا جاتا ہے، جیسا کہ شکل 7 میں دکھایا گیا ہے۔ تفصیلات ضمنی جدول S5 میں دکھائی گئی ہیں۔

شکل 7. DE miRNAs exosome uptake، PRRSV یلغار، اور استثنیٰ سے متعلق

3.8۔ دو گروپوں کے درمیان DE miRNAs کا QRT-PCR پرکھ

تصدیق کے لیے تصادفی طور پر پانچ DE miRNAs کا انتخاب کیا گیا تھا۔ qRT-PCR کے نتائج کے مطابق، علاج گروپ میں ssc-miR-19a اور ssc-miR-32 کے اظہار میں اضافہ ہوا، جبکہ ssc-miR-124a, ssc-miR{ {8}}، اور ssc-miR-34c نے کنٹرول گروپ میں اعلیٰ اظہار ظاہر کیا، ترتیب دینے والے ڈیٹا (شکل 8) کے مطابق۔

شکل 8. QRT-PCR کے ذریعے تصدیق شدہ پانچ DE miRNAs

4. بحث

PRRSV اب بھی عالمی سور کی صنعت میں ایک ضدی پیتھوجین ہے، جس سے دنیا میں بہت زیادہ معاشی نقصان ہوتا ہے۔ اس وقت، ویکسینیشن بنیادی طور پر PRRSV کو روکنے اور کنٹرول کرنے کے لیے استعمال کی جاتی ہے، جن میں ترمیم شدہ لائیو (MLV) وائرس ویکسین سب سے زیادہ استعمال ہوتی ہے [48]۔ اگرچہ یہ ویکسین PRRS کے پھیلنے اور واقعات کو کم کرنے میں کارگر تھی، لیکن اس نے وائرس کے جینیاتی تغیرات اور تنوع کو بھی بہت بڑھایا اور میدان میں جنگلی اور زندہ ویکسین کے وائرس کے درمیان وائرل دوبارہ ملاپ کا باعث بنا [49,50]۔ حالیہ برسوں میں، دوبارہ پیدا ہونے والے وائرس NADC30-کے پھیلاؤ اور پھیلاؤ جیسے PRRSV تناؤ نے چین میں پورسائن ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم کے متعدد پھیلنے کا سبب بنایا ہے۔ اس مطالعے میں استعمال ہونے والے CHsx1401 اور NADC30 کے درمیان مماثلت 92.2–99.1% رہی۔ تب سے، یہ چین میں ایک وبائی تناؤ بن گیا ہے۔ Exosomes، سیل کمیونیکیشن کے ثالث کے طور پر، مختلف جسمانی رطوبتوں میں بڑے پیمانے پر پائے جاتے ہیں اور بیماری کی تشخیص اور علاج میں ان کے منفرد فوائد ہیں [51,52]۔ پچھلی رپورٹس کے مطابق، exosomes antigen پریزنٹیشن [53]، مدافعتی ردعمل [53,54]، وائرس کی نقل [54]، کینسر [55]، neurodegenerative disease [56]، angiogenesis [57]، ٹیومر سیل میں ایک اہم مواصلاتی کردار ادا کرتے ہیں۔ ہجرت [58] اور حملہ [59]، اور اعلیٰ تحقیقی قدر رکھتے ہیں۔

اس مطالعے میں، اعلی تھرو پٹ سیکوینسنگ ٹیکنالوجی کا استعمال سیرم ایکزوسومز کے miRNA ایکسپریشن پروفائل کی تعمیر کے لیے کیا گیا تھا، اور 33 DE miRNAs کی شناخت کی گئی تھی۔ جیسا کہ ہم سب جانتے ہیں، میزبان انکوڈ شدہ miRNA وائرل جینوم کے ساتھ منسلک ہو سکتا ہے اور پھر انفیکشن کو محدود کرنے اور پیتھولوجیکل عمل کو متاثر کرنے کے لیے وائرس کی نقل، ترکیب اور رہائی کو منظم کر سکتا ہے [15]۔ وائرل جینوم کو نشانہ بنانے والے miRNAs کے مطالعے کو جانوروں میں بھی بار بار رپورٹ کیا گیا ہے۔ چکن کی متعدی برسل بیماری میں gga-miR-454 اور gga-miR-130b وائرل کی نقل کو روکنے کے لیے وائرل جینوم کو نشانہ بنا سکتے ہیں، جبکہ gga-miR-21 براہ راست وائرل پروٹین VP1 کو روکنے کے لیے نشانہ بناتا ہے۔ وائرل پروٹین کا ترجمہ [60,61]۔ PRRSV مطالعات میں، ssc-miR-181 خاص طور پر وائرل جینوم ORF4 کے بہاو کے انتہائی محفوظ علاقے سے منسلک ہوتا ہے اور PRRSV کی نقل کو سختی سے روکتا ہے [62]۔ اس مطالعہ میں، دو گروپوں کے درمیان ssc-miR-181 کے اظہار کا فرق ایک اہم سطح تک نہیں پہنچا۔ ہمارے مطالعے میں، نو مختلف PRRSV وائرسوں کے جینوم کا موازنہ CHsx1401 تناؤ کے ساتھ کیا گیا، اور آٹھ سب سے زیادہ محفوظ طبقات کی نشاندہی کی گئی۔ یہ پیشین گوئی کی گئی تھی کہ 31 DE miRNAs CHsx1401 کے 8 سب سے زیادہ محفوظ حصوں سے منسلک ہو سکتے ہیں، اور 16 DE miRNAs CHsx1401 کے 30 UTR کے قریب محفوظ ترتیبوں سے منسلک ہو سکتے ہیں۔ ان میں، 5 DE miRNAs (ssc-miR-34c, ssc-miR-375, ssc-miR-378, ssc-miR-486، اور ssc-miR{{ 36}}) بیک وقت CHsx1401 30 UTR سے منسلک ہو سکتا ہے۔ اس کے علاوہ، ssc-miR-223 کے اپریگولیٹڈ ایکسپریشن کی PRRSV جینوم کے 30 UTR ہدف سے منسلک ہونے کی پیش گوئی کی گئی تھی۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ وائرس کے جینوم کے محفوظ سلسلے اس کی روگجنکیت میں کلیدی کردار ادا کر سکتے ہیں، اور miRNAs جو مختلف PRRSV تناؤ کے جینوم کے درمیان محفوظ ترتیب سے منسلک ہو سکتے ہیں وائرس کی روگجنکیت کو کنٹرول کرنے میں اہم اہمیت رکھتے ہیں۔ کچھ امتیازی طور پر ظاہر کیے گئے miRNAs کو پچھلے مطالعات سے PRRSV سے متعلق ثابت کیا گیا ہے اور یہاں تک کہ PRRSV کے ضابطے میں براہ راست ملوث ہیں، بشمول ssc-miR-10b [63], ssc-miR-378 [30] , ssc-miR-124a [64], let-7f-5p [65], ssc-miR-744 [66], اور ssc-miR{{57 ایک [67]۔

PRRSV پیدائشی مدافعتی ردعمل میں مداخلت کرکے میزبان دفاع سے بچ سکتا ہے۔ اس عمل کو بہت سے سگنلنگ پاتھ ویز کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے، بشمول MAPK سگنلنگ پاتھ وے، PI3K اکٹ سگنلنگ پاتھ وے، آٹوفیجی، کیموکائن، اور TNF سگنلنگ پاتھ وے۔ فی الحال، MAPK سگنلنگ پاتھ وے میں تین اہم راستے شامل ہیں: ERK1/2، JNK، اور p38 پاتھ وے۔ MAPK جھرن کو چالو کرنا میزبان سیل اپوپٹوس کو فروغ دے سکتا ہے، میزبان کے مدافعتی دفاعی ردعمل سے بچنے میں وائرس کی مدد کر سکتا ہے، اور PRRSV نقل کو فروغ دے سکتا ہے [68]۔ مزید برآں، c-Jun N-terminal kinases (JNKs) اور p38 کو چالو کرنا بھی سوزش کے عنصر IL-10 [68–70] کے اخراج کو فروغ دے سکتا ہے اور سوزش کے اثر کو بڑھا سکتا ہے۔ اپوپٹوسس کو دلانے کے علاوہ، PRRSV آٹوفجی کو بھی آمادہ کر سکتا ہے، جو PRRSV نقل کو فروغ دے سکتا ہے۔ PI3K/Akt کا فعال ہونا وائرس کے داخلے اور وائرس کی نقل تیار کرنے کے لیے ضروری ہے، اور PRRSV- ایکٹیویٹڈ اکٹ JNK پاتھ وے کو منفی طور پر ریگولیٹ کرکے میزبان سیل اپوپٹوسس کو روکتا ہے [71]۔ TNF یہ دیگر اشتعال انگیز عوامل کے ساتھ مل کر اشتعال انگیز ردعمل کی شمولیت اور ضابطے میں اہم کردار ادا کر سکتا ہے، لیکن TNF اظہار PRRSV نقل کے منفی ضابطے سے متاثر ہوتا ہے [72]۔ موجودہ مطالعہ میں، miRNAs (ssc-miR-10b, ssc-miR-122-5p, ssc-miR-124a, ssc-miR-128, ssc-miR{ {24}}a-5p، وغیرہ) ان راستوں میں افزودہ PRRSV-حوصلہ افزائی apoptosis، autophagy، اور سوزش میں ملوث ہیں اور وائرل مدافعتی ردعمل، مدافعتی چوری، اور نقل کے ساتھ قریبی تعلق رکھتے ہیں۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا

سیل پلازما جھلی مختلف قسم کے لپڈ رافٹس سے مالا مال ہے، اور اسفنگولپیڈ- اور کولیسٹرول سے بھرپور اسفنگولپیڈز (اسفنگومائیلین اور گلائکوسفنگولپڈس) لپڈ رافٹس کے کلیدی مالیکیول ہیں۔ وائرس کے کچھ پروٹینوں کے ذریعہ لپڈس کی پہچان وائرس کے داخلے کے لیے ضروری شرط ہو سکتی ہے [73]۔ لفافے کے وائرس وائرس کے داخل ہونے کے مرحلے پر لپڈ رافٹس میں وائرل لفافے گلائکوپروٹین داخل کرتے ہیں، لپڈ رافٹس میں واقع ریسیپٹرز کے ساتھ تعامل کرتے ہیں، یا وائرل انٹرنلائزیشن/فیوژن کو شروع کرنے یا فروغ دینے کے لیے اپنی فطری حالت سے فعال شکل میں تبدیل کرتے ہیں، جیسے HSV، SARS کورونا وائرس، اور piglet وبائی ڈائریا وائرس [73,74]۔ پچھلے مطالعات سے پتہ چلا ہے کہ MARC-145 خلیات کی سطح سے کولیسٹرول کے اخراج نے PRRSV انفیکشن کو نمایاں طور پر کم کیا، یہ ظاہر کرتا ہے کہ PRRSV انفیکشن کی روک تھام خاص طور پر سیلولر کولیسٹرول کے خاتمے کے ذریعے کی گئی تھی۔ سیل میمبرین کولیسٹرول کی کمی نے وائرس کے داخلے کو خاص طور پر روک دیا ہے، خاص طور پر وائرس سے منسلک ہونا، اور رہائی [75]۔ Sphingolipid میٹابولزم جھلی کی ساخت اور آسنجن کو منظم کر سکتا ہے، جو PRRSV وائرس کے حملے میں بہت اہمیت رکھتا ہے۔ اس مطالعے میں اینڈوسیٹوسس سب سے اہم افزودگی تھی۔ Endocytosis ہدف کے خلیات کی طرف سے exosome اپٹیک کا ایک اہم طریقہ کار ہے۔ پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ exosome uptake ایک توانائی کا مطالبہ کرنے والا اور cytoskeleton پر منحصر عمل ہے، جو اس عمل میں endocytosis کے ممکنہ کردار کو نمایاں کرتا ہے [76]۔ یہ ثابت ہو چکا ہے کہ کئی راستے اس عمل میں ثالثی کر سکتے ہیں، بشمول phagocytosis، macropinocytosis، clathrin، وغیرہ۔ اس راستے میں متفرق طور پر ظاہر کیے گئے exosomal miRNAs کی افزودگی اس بات کی نشاندہی کرتی ہے کہ exosomes PRRSV انفیکشن میں اہم کردار ادا کرتے ہیں، اور exosomes میں مواد کی نقل و حمل اور اپٹیک کا ضابطہ ہدف کے خلیوں اور اعضاء میں پیتھوفزیولوجیکل تبدیلیوں کا باعث بن سکتا ہے۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا

5. نتائج

PRRSV سے متاثرہ خنزیروں سے سیرم exosomal miRNAs کی شناخت اور بائیو انفارمیٹکس تجزیہ کے ذریعے، PRRSV سے متعلق متعدد راستے اور مختلف طریقے سے ظاہر کیے گئے miRNAs اس مطالعے میں حاصل کیے گئے، جیسے ssc-miR-4331-3p، ssc-miR{{ 5}}, sscmiR-320, ssc-miR-10b, ssc-miR-124a, ssc-miR-128، وغیرہ، جو PRRSV میں ممکنہ فعال کردار ادا کرتے ہیں۔ - حوصلہ افزائی مدافعتی ردعمل، حملہ، اور exosome اپٹیک. اس کے علاوہ، چونکہ ایک miRNA متعدد جینوں کو نشانہ بنا سکتا ہے اور ایک جین کو بھی متعدد miRNAs کے ذریعے منظم کیا جاتا ہے، کئی miRNAs مذکورہ راستوں میں متعدد افعال انجام دیتے ہیں۔ کچھ miRNAs کی تصدیق کی گئی ہے کہ PRRSV انفیکشن کو کنٹرول کرنے کے لیے کلیدی ریسیپٹرز پر عمل کر کے یا وائرس کے جینوم کو براہ راست نشانہ بنا کر، جیسے ssc-miR-10b، ssc-miR-378، miR-124a، let-7f-5p, ssc-miR-744, ssc-miR-19a، وغیرہ۔ دریں اثنا، موجودہ مطالعہ نے مختلف قسم کے miRNAs کی بھی پیش گوئی کی ہے جو اس سے منسلک ہو سکتے ہیں۔ CHX1401 وائرس جینوم کے 30 UTR کا سب سے زیادہ محفوظ ٹکڑا، بشمول ssc-miR-34c, ssc-miR-375, ssc-miR-378, ssc-miR{{34} }، اور ssc-miR-6529، جو وائرل روگجنکٹی کو منظم کرنے کے لیے اہم ہو سکتا ہے۔

حوالہ جات

1. Snijder، EJ؛ کیکرٹ، ایم؛ Fang, Y. Arterivirus سالماتی حیاتیات اور روگجنن۔ جے جنرل ویرول 2013، 94 Pt 10، 2141–2163۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

2. لو، وائی؛ Zhang, Y.; ژیانگ، ایکس۔ شرما، ایم. لیو، کے؛ وی، جے؛ شاو، ڈی. لی، بی؛ ٹونگ، جی؛ Olszewski, MA; ET رحمہ اللہ تعالی. نوچ سگنلنگ پورسائن الیوولر میکروفیجز میں انتہائی پیتھوجینک پورسائن ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس (HP-PRRSV) کے انفیکشن سے پیدا ہونے والی سوزش والی سائٹوکائنز کے اظہار میں معاون ہے۔ دیو کمپ امیونول۔ 2020، 108، 103690۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

3. ڈی اے، ایس؛ ساویر، این. ایلین، آر. ایتھناسیئس، آر الٹراسٹرکچرل خصوصیات اور پورسین ری پروڈکٹیو اینڈ ریسپائریٹری سنڈروم وائرس کی مورفوجینیسیس انتہائی اجازت دینے والے MARC-145 سیل کلون میں پھیلتی ہے۔ Adv. ختم میڈ. بائول 1995، 380، 95-98۔ [پب میڈ]

4. ڈوکلینڈ، T. PRRSV کی ساختی حیاتیات۔ وائرس ریس 2010، 154، 86–97۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

5. جانسن، سی آر؛ گرگس، ٹی ایف؛ Gnanandarajah, J.; مرٹاؤ، پورسائن ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس میں ایم پی نوول سٹرکچرل پروٹین جو تمام آرٹی وائرسز میں موجود ایک متبادل ORF5 کے ذریعے انکوڈ کیا گیا ہے۔ جے جنرل ویرول 2011، 92 Pt 5، 1107–1116۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

6. لی، ایس سی؛ لی، ایس؛ یو، جی ڈبلیو؛ چوئی، ایچ ڈبلیو؛ Noh, YH; پارک، عیسوی؛ شن، جے ایچ؛ یون، آئی جے؛ کانگ، SY؛ Lee, C. فینوٹائپک اور جینو ٹائپک تجزیے جو کہ کلچرڈ پورسین الیوولر میکروفیجز میں سیریل حصئوں کے بعد ایک کشیدہ پورسائن ری پروڈکٹو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس کے تناؤ کا۔ J. ویٹ۔ سائنس 2018، 19، 358–367۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

7. زیبروسکا، اے. Skowronek, A.; Wojakowska, A.; Widlak، P.؛ Pietrowska, M. Exosomes کا میٹابولوم: کینسر کے خلیات کے ذریعہ جاری ہونے والے اور انسانی جسم کے سیالوں میں موجود vesicles پر توجہ مرکوز کریں۔ انٹر جے مول سائنس 2019، 20، 3461۔ [کراس ریف]

8. بیبل مین، ایم پی؛ سمٹ، ایم جے؛ پیگٹیل، ڈی ایم؛ باگلیو، ایس آر بایوجنسیس اور کینسر میں ایکسٹرا سیلولر ویسیکلز کا فنکشن۔ فارماکول۔ وہاں 2018، 188، 1–11۔ [کراس ریف]

9. Zaborowski, MP; بالاج، ایل. بریک فیلڈ، XO؛ لائی، سی پی ایکسٹرا سیلولر ویسیکلز: کمپوزیشن، حیاتیاتی مطابقت، اور مطالعہ کے طریقے۔ بائیو سائنس 2015، 65، 783–797۔ [کراس ریف]

10. المغلق، ایف بی؛ کوہ، وائی کیو؛ پیرس، ایچ این؛ واسوانی، کے. ہالینڈ، O. میئر، ایس. Roche, JR; برک، سی آر؛ کروکینڈن، ایم اے؛ Arachchige, BJ; ET رحمہ اللہ تعالی. گردش کرنے والے exosomes میٹابولک dysfunction کے لئے خطرے میں گایوں کے لئے بائیو مارکر کی شناخت کر سکتے ہیں. سائنس نمائندہ 2019، 9، 13879۔ [کراس ریف]

11. ژانگ، آر سی؛ Du, WQ; ژانگ، جے وائی؛ یو، ایس ایکس؛ لو، ایف زیڈ؛ ڈنگ، ایچ ایم؛ چینگ، YB؛ رین، سی. پردیی اعصاب کی چوٹ کے لئے گینگ، ڈی کیو میسنچیمل اسٹیم سیل کا علاج: ایک داستانی جائزہ۔ نیورل ریجن۔ Res. 2021، 16، 2170–2176۔ [پب میڈ]

12. Bryzgunova, OE; زریپوف، ایم ایم؛ Skvortsova, TE; لیکچنوف، ای اے؛ Grigor'eva, AE; Zaporozhchenko, IA; موروزکن، ای ایس؛ Ryabchikova، EI؛ Yurchenko, YB; Voitsitskiy, VE; ET رحمہ اللہ تعالی. صحت مند افراد اور پروسٹیٹ کینسر کے مریضوں کے پیشاب سے ایکسٹرا سیلولر ویسکلز کا تقابلی مطالعہ۔ PLOS ONE 2016, 11, e0157566۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

13. کاموسی، جی؛ Deregibus, MC; برونو، ایس. گرینج، سی. فونساٹو، وی. ٹیٹا، C. خلیات کی Exosome/microvesicle-mediated epigenetic reprogramming. ایم۔ جے کینسر ریس 2011، 1، 98-110۔ [پب میڈ]

14. تمکووچ، ایس این؛ Tutanov، OS؛ Laktionov، PP Exosomes: نسل، ساخت، نقل و حمل، حیاتیاتی سرگرمی، اور تشخیصی اطلاق۔ بائیو کیم۔ Mosc سپلائی سر ایک رکن. سیل بائیول۔ 2016، 10، 163–173۔ [کراس ریف]

15. بارٹیل، ڈی پی مائیکرو آر این اے: جینومکس، بایوجنسیس، میکانزم، اور فنکشن۔ سیل 2004، 116، 281–297۔ [کراس ریف]

16. گورڈینو، جی؛ کوسٹا پریرا، ایس. Corredeira، P.؛ Alves، P.؛ کوسٹا، ایل. گومز، اے کیو؛ سلوا سانتوس، بی۔ Ribot, JC MicroRNA-181a Map3k2 اور Notch2 کو ہدف بنا کر انسانی δ T سیل کی تفریق کو محدود کرتا ہے۔ EMBO Rep. 2022, 23, e52234۔ [کراس ریف]

17. لیو، بی؛ یان، ایل. چی، وائی؛ سورج، Y. یانگ، X. لانگ نان کوڈنگ RNA AFAP1-AS1 miR-107/PDK4 محور کو ریگولیٹ کرکے رحم کے کینسر کے بڑھنے میں سہولت فراہم کرتا ہے۔ J. Ovarian Res. 2021، 14، 60۔ [کراس ریف]

18. کم، وائی؛ لی، ڈی ایچ؛ پارک، ایس ایچ؛ جیون، ٹی آئی؛ جنگ، CH غیر الکوحل فیٹی جگر کی بیماری میں آٹوفیجی ریگولیشن میں مائکرو آر این اے اور ٹرانسکرپشن عوامل کا باہمی تعامل۔ ختم مول میڈ. 2021، 53، 548–559۔ [کراس ریف]

19. کازمیرزاک، ڈی۔ جوپیک، کے. Sterzynska, K.; نوکی، ایم؛ Rucinski، M.؛ Januchowski, R. مائیکرو آر این اے اظہار کا پروفائل اور سسپلٹین اور پیلیٹیکسیل مزاحم ڈمبگرنتی کینسر سیل لائنوں میں منشیات کے خلاف مزاحم جینوں کے ضابطے میں ممکنہ کردار۔ انٹر جے مول سائنس 2022، 23، 526۔ [کراس ریف]

20. گونگ، وائی؛ وی، ایکس؛ سورج، ڈبلیو. رین، ایکس۔ چن، جے؛ Aweya, JJ; ما، ایچ. چان، کے جی؛ Zhang, Y.; Li, S. Exosomal miR-224 کرسٹیشین میں بیکٹیریل انفیکشن کے دوران hemolymph microbiota homeostasis میں حصہ ڈالتا ہے۔ پی ایل او ایس پیتھوگ۔ 2021, 17, e1009837۔ [کراس ریف]

21. چینگ، وائی. کو، ڈبلیو. Zhu, D.; یو، ایکس؛ Zhu, Y. ایڈرینوکارٹیکل کارسنوما کی تشخیص، تشخیص اور بیماری کی نگرانی میں مستقبل کی ہدایات: ناول غیر حملہ آور بائیو مارکر۔ سامنے والا۔ اینڈو کرائنول۔ 2022، 12، 811293۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

22. گیلو، اے. ٹنڈن، ایم. Alevizos, I.; Illei, GG سیرم اور تھوک میں قابل شناخت مائکرو آر این اے کی اکثریت exosomes میں مرکوز ہوتی ہے۔ PLOS ONE 2012, 7, e30679۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

23. پنکھا، بی۔ چوپ، ایم. ژانگ، زیڈ جی؛ لیو، XS بائیو مارکر اور ذیابیطس نیوروپتی کے علاج کے اہداف کے طور پر مائکرو آر این اے کے ابھرتے ہوئے کردار۔ سامنے والا۔ نیورول. 2020، 11، 558758۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

24. وی، ایچ. چن، Q. لن، ایل. شا، ج۔ لی، ٹی. لیو، وائی؛ ین، ایکس؛ Xu, Y.; چن، ایل. گاو، ڈبلیو. ET رحمہ اللہ تعالی. exosome پیداوار اور کارگو کی چھانٹی کا ضابطہ۔ انٹر J. Biol سائنس 2021، 17، 163–177۔ [کراس ریف]

25. جیا، ایکس۔ Bi, Y.; لی، جے؛ Xie, Q.; یانگ، ایچ. Liu, W. Cellular microRNA miR-26ایک فطری اینٹی وائرل مدافعتی کو چالو کرکے پورسائن ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس کی نقل کو دباتا ہے۔ سائنس Rep. 2015, 5, 10651. [CrossRef]

26. لی، ایل. وی، زیڈ؛ Zhou, Y.; جیانگ، وائی؛ یو، ایل. زینگ، ایچ. ٹونگ، ڈبلیو. یانگ، ایس. زینگ، ایچ. شان، ٹی. ET رحمہ اللہ تعالی. میزبان miR-26ایک قسم I انٹرفیرون کو اپ گریڈ کرکے پورسائن ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس کی نقل کو دباتا ہے۔ وائرس ریس 2015، 195، 86–94۔ [کراس ریف]

27. لیو، ایف. وانگ، ایچ. ڈو، ایل. وی، زیڈ؛ ژانگ، Q. Feng, WH MicroRNA-30c قسم 2 PRRSV انفیکشن کو فروغ دینے کے لیے انٹرفیرون–الفا/بیٹا ریسیپٹر بیٹا چین کو نشانہ بناتا ہے۔ جے جنرل ویرول 2018، 99، 1671–1680۔ [کراس ریف]

28. ژانگ، Q.؛ ہوانگ، سی.؛ یانگ، Q. گاو، ایل. لیو، ہائی کورٹ؛ تانگ، جے؛ Feng, WH MicroRNA-30c JAK1 کو نشانہ بنا کر پورسائن ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس انفیکشن کی سہولت فراہم کرنے کے لیے قسم I IFN ردعمل کو ماڈیول کرتا ہے۔ J. Immunol. 2016، 196، 2272–2282۔ [کراس ریف]

29. وانگ، ڈی. کاو، ایل۔ Xu, Z.; فینگ، ایل. Zhong, Y.; چن، Q. Luo, R.; چن، ایچ. لی، کے؛ Xiao, S. MiR-125b NF-κB پاتھ وے کو منفی طور پر ریگولیٹ کرکے پورسائن ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس کی نقل کو کم کرتا ہے۔ PLOS ONE 2013, 8, e55838۔ [کراس ریف]

30. ژانگ، Q.؛ گو، ایکس کے؛ گاو، ایل. ہوانگ، سی.؛ لی، این. جیا، ایکس۔ لیو، ڈبلیو؛ Feng, WH MicroRNA-23 PRRSV RNA کو براہ راست نشانہ بنا کر اور ممکنہ طور پر قسم I انٹرفیرون کو اپ گریڈ کر کے PRRSV نقل کو روکتا ہے۔ وائرولوجی 2014، 450–451، 182–195۔ [کراس ریف]

31. وو، جے؛ پینگ، ایکس۔ چاؤ، اے. Qiao, M.; وو، ایچ. Xiao, H.; لیو، جی؛ زینگ، ایکس؛ Zhang, S.; Mei, S. MiR-506 CD151 کے ذریعے MARC-145 سیلوں میں PRRSV نقل کو روکتا ہے۔ مول سیل بائیو کیم۔ 2014، 394، 275–281۔ [کراس ریف]

32. گاو، ایل. گو، ایکس کے؛ وانگ، ایل. ژانگ، Q. لی، این. چن، ایکس ایکس؛ وانگ، وائی؛ Feng, WH MicroRNA 181 PRRSV ریسیپٹر CD163 کو نشانہ بنا کر پورسائن ری پروڈکٹیو اینڈ ریسپائریٹری سنڈروم وائرس (PRRSV) انفیکشن کو دباتا ہے۔ جے ویرول۔ 2013، 87، 8808–8812۔ [کراس ریف]

33. Xiao, S.; ڈو، ٹی. وانگ، ایکس؛ NIH.؛ یان، وائی؛ لی، این. ژانگ، سی. ژانگ، اے. گاو، جے؛ لیو، ایچ. ET رحمہ اللہ تعالی. MiR-22 میزبان عنصر HO-1 کو نشانہ بنا کر پورکین ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس کی نقل کو فروغ دیتا ہے۔ ڈاکٹر مائکروبیول 2016، 192، 226–230۔ [کراس ریف]

34. Xiao, S.; وانگ، ایکس؛ NIH.؛ لی، این. ژانگ، اے. لیو، ایچ. Pu, F.; Xu, L.; گاو، جے؛ زاؤ، ق. ET رحمہ اللہ تعالی. MicroRNA miR-24-3p ہیم آکسیجنیس-1 اظہار کو دبانے کے ذریعے پورسائن ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس کی نقل کو فروغ دیتا ہے۔ جے ویرول۔ 2015، 89، 4494–4503۔ [کراس ریف]

35. بٹلر، جے ای؛ سنکورہ، ایم. وانگ، جی؛ Stepanova, K.; لی، وائی۔ Cai, X. تھائموسائٹ کی نشوونما کا اضطراب PRRS وبائی مرض کی بنیاد رکھتا ہے: ایک قابل آزمائش مفروضہ۔ سامنے والا۔ امیونول۔ 2019، 10، 1077۔ [کراس ریف]

36. چاؤ، ایل. وانگ، زیڈ؛ ڈنگ، وائی۔ Stepanova, K.; لی، وائی۔ Cai, X. NADC30-جیسے خنزیر کے تولیدی اور سانس لینے والے سنڈروم وائرس کا تناؤ، چین۔ ایمرج متاثر کرنا۔ ڈس 2015، 21، 2256–2257۔ [کراس ریف]

37. چاؤ، ایل. یانگ، بی؛ Xu, L.; جن، ایچ. جی، ایکس۔ گو، ایکس؛ ہان، جے؛ یانگ، H. پورسین ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس NADC30-جیسے تناؤ کے خلاف تین تبدیل شدہ لائیو وائرس ویکسین کی افادیت کا جائزہ۔ ڈاکٹر مائکروبیول 2017، 207، 108–116۔ [کراس ریف]

38. وونگ، این. وانگ، ایکس ایم آر ڈی بی: مائیکرو آر این اے ہدف کی پیشین گوئی اور فنکشنل تشریحات کے لیے ایک آن لائن وسیلہ۔ نیوکلک ایسڈ Res. 2015، 43، D146–D152۔ [کراس ریف]

39. Friedländer, MR; میکوویک، ایس ڈی؛ لی، این. چن، ڈبلیو. راجیوسکی، N. miRDeep2 جانوروں کے سات کلیڈز میں معلوم اور سینکڑوں نئے مائیکرو آر این اے جینوں کی درست شناخت کرتا ہے۔ نیوکلک ایسڈ Res. 2012، 40، 37–52۔ [کراس ریف]

40. وین، ایم؛ شین، وائی؛ شی، ایس. تانگ، T. miREvo: اگلی نسل کے تسلسل کے تجربات کے لیے ایک مربوط مائکرو آر این اے ارتقائی تجزیہ پلیٹ فارم۔ بی ایم سی بایو انفارم۔ 2012، 13، 140۔ [کراس ریف]

41. اینڈرس، ایس. Huber، W. ترتیب شمار کے اعداد و شمار کے لیے تفریق اظہار تجزیہ۔ جینوم بائیول۔ 2010، 11، R106۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

42. تمورا، K. سٹیچر، جی. کمار، ایس. MEGA11: مالیکیولر ایوولیوشنری جینیٹکس تجزیہ ورژن 11. Mol. بائول ارتقاء 2021، 38، 3022–3027۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

43. Hubisz, MJ; پولارڈ، کے ایس؛ سیپل، A. PHAST، اور RPHAST: جگہ/وقت کے ماڈلز کے ساتھ فائیلوجنیٹک تجزیہ۔ مختصر. بایو انفارم۔ 2011، 12، 41–51۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

44. Krüger, J.; Rehmsmeier، M. RNAhybrid: microRNA ہدف کی پیشن گوئی آسان، تیز اور لچکدار۔ نیوکلک ایسڈ Res. 2006, 34, W451–W454. [کراس ریف]

45. یو، جی؛ وانگ، LG؛ ہان، وائی؛ وہ، کیو وائی کلسٹر پروفائلر: جین کلسٹرز کے درمیان حیاتیاتی موضوعات کا موازنہ کرنے کے لیے ایک آر پیکج۔ OMICS 2012، 16، 284–287۔ [کراس ریف]

46. ​​Que, R.; ڈنگ، جی؛ چن، جے؛ Cao, L. لبلبے کے اڈینو کارسینوما کے مریضوں کی سیرم ایکسوومل مائکرو آر این اے اور کلینکوپیتھولوجک خصوصیات کا تجزیہ۔ ورلڈ جے سرگ اونکول۔ 2013، 11، 219۔ [کراس ریف]

47. تھیری، سی. وٹور، کلو واٹ؛ Aikawa, E.; الکاراز، ایم جے؛ اینڈرسن، جے ڈی؛ Andriantsitohaina, R.; انتونیو، اے. عرب، ٹی. آرچر، ایف. Atkin-Smith, GK; ET رحمہ اللہ تعالی. ایکسٹرا سیلولر ویسیکلز 2018 (MISEV2018) کے مطالعے کے لیے کم سے کم معلومات: انٹرنیشنل سوسائٹی فار ایکسٹرا سیلولر ویسیکلز کا پوزیشن اسٹیٹمنٹ اور MISEV2014 کے رہنما خطوط کی تازہ کاری۔ J. ایکسٹرا سیل۔ Vesicles 2018, 7, 1535750. [CrossRef]

48. Lyoo, K.-S.; چوئی، جے وائی؛ ہان، ٹی ڈبلیو؛ پارک، KT؛ کم، HK کھیت کے حالات میں خنزیروں کو فربہ کرنے میں نمو کی کارکردگی پر ایک تبدیل شدہ زندہ پورسائن ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس ویکسین کے ساتھ ویکسینیشن کا اثر۔ J. ویٹ۔ میڈ. سائنس 2016، 78، 1533–1536۔ [کراس ریف]

49. بیان، ٹی. سورج، Y. ہاؤ، ایم؛ چاؤ، ایل. جی، ایکس۔ گو، ایکس؛ ہان، جے؛ یانگ، ایچ۔ این اے ڈی سی30-جیسے اور ایم ایل وی کی طرح کے درمیان دوبارہ پیدا ہونے والا ٹائپ 2 پورسائن ری پروڈکٹو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس: خنزیر کے لیے جینیاتی خصوصیات اور روگجنک۔ متاثر کرنا۔ جینیٹ ارتقاء 2017، 54، 279–286۔ [کراس ریف]

50. لی، وائی. جی، جی؛ وانگ، جے؛ ٹین، ایف. Zhuang, J.; لی، ایکس۔ تیان، K. ایک NADC کا مکمل جینوم تسلسل30-جیسے پورسائن ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس جس کی خصوصیات دیگر تناؤ کے ساتھ دوبارہ ملاپ سے ہوتی ہے۔ جینوم کا اعلان 2016، 4، ای00330-16۔ [کراس ریف]

51. کلوری، آر. Lebleu, VS Exosomes کی حیاتیات، فنکشن، اور بائیو میڈیکل ایپلی کیشنز۔ سائنس 2020, 367, eau6977۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

52. Miao، XY Exosomes میں miRNAs کے کردار اور ان کے علاج کی صلاحیت کو سمجھنے میں حالیہ پیشرفت۔ J. انٹیگر زرعی۔ 2017، 16، 753–761۔ [کراس ریف]

53. شینودا، بی بی؛ اجیت، ایس کے اینٹیجن پیش کرنے والے خلیات سے اخذ کردہ ایکزوم کے ذریعے مدافعتی ردعمل کی ماڈیولیشن۔ کلین میڈ. بصیرت پاتھول۔ 2016, 9 (Suppl. S1), CPath-S39925۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

54. لی، ایس. لی، ایس. وو، ایس. چن، ایل. ایکسوسم وائرل نقل کو ماڈیول کرتے ہیں اور ایچ بی وی انفیکشن میں مدافعتی ردعمل کی میزبانی کرتے ہیں۔ BioMed Res. انٹر 2019، 2019، 2103943۔ [کراس ریف]

55. گریننگ، ڈی ڈبلیو؛ گوپال، ایس کے؛ سو، آر. سمپسن، آر جے؛ چن، ڈبلیو. ایکزومز اور مدافعتی ضابطے اور کینسر میں ان کے کردار۔ سیل اور ترقیاتی حیاتیات میں سیمینار میں؛ اکیڈمک پریس: کیمبرج، ایم اے، امریکہ، 2015؛ جلد 40، صفحہ 72-81۔

56. Howitt, J.; ہل، AF Exosomes in the pathology of neurodegenerative disease. J. Biol کیم 2016، 291، 26589–26597۔ [کراس ریف]

57. ربیرو، ایم ایف؛ Zhu, H.; ملارڈ، آر ڈبلیو؛ فین، G. Exosomes پرو اور اینٹی انجیوجینیسیس میں کام کرتا ہے۔ کرر انجیوجینیسیس 2013، 2، 54–59۔ [کراس ریف]

58. لین، جے؛ سورج، ایل. Xu, F.; لیو، ایل. Hu, F.; گانا، ڈی. Hou, Z.; وو، ڈبلیو؛ لوو، ایکس۔ وانگ، جے؛ ET رحمہ اللہ تعالی. M2 میکروفیج سے ماخوذ exosomes بڑی آنت کے کینسر میں سیل کی منتقلی اور حملے کو فروغ دیتے ہیں۔ کینسر ریس 2019، 79، 146–158۔ [کراس ریف]

59. آغا، ایم. بینٹز، جی ایل؛ Raffa, S.; Torrisi, MR; کونڈو، ایس. واکیساکا، این. یوشیزاکی، ٹی. Pagano, JS; Shackelford, J. Exosomal HIF1 nasopharyngeal carcinoma سے وابستہ LMP1-مثبت exosomes کی ناگوار صلاحیت کی حمایت کرتا ہے۔ آنکوجین 2014، 33، 4613–4622۔ [کراس ریف]

60. فو، ایم. وانگ، بی؛ چن، ایکس؛ He, Z.; وانگ، وائی؛ لی، ایکس۔ کاو، ایچ. Zheng، SJ gga-miR-454 براہ راست IBDV جینومک سیگمنٹ B اور سیلولر سپریسرز آف سائٹوکائن سگنلنگ 6 (SOCS6) کو نشانہ بناتے ہوئے متعدی برسل بیماری وائرس (IBDV) کی نقل کو دباتا ہے۔ وائرس ریس 2018، 252، 29–40۔ [کراس ریف]

61. فو، ایم. وانگ، بی؛ چن، ایکس؛ He, Z.; وانگ، وائی؛ لی، ایکس۔ کاو، ایچ. زینگ، ایس جے مائکرو آر این اے جی جی اے ایم آر 2018، 92، ای01646-17۔ [کراس ریف]

62. Guo, XK; ژانگ، Q. گاو، ایل. لی، این. چن، ایکس ایکس؛ فینگ، ڈبلیو ایچ مائیکرو آر این اے 181 کا بڑھتا ہوا اظہار پورکین ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس کی نقل کو روکتا ہے اور وائرس کے انفیکشن کو کنٹرول کرنے کے لیے مضمرات رکھتا ہے۔ جے ویرول۔ 2013، 87، 1159–1171۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

63. کانگریس، پی. Xiao, S.; چن، وائی؛ وانگ، ایل. گاو، جے؛ لی، ایم؛ He, Z.; Guo, Y.; زاؤ، جی؛ ژانگ، ایکس؛ ET رحمہ اللہ تعالی. پورسائن الیوولر میکروفیجز (PAM سیلز) کے انٹیگریٹڈ miRNA اور mRNA ٹرانسکرپٹوم H-PRRSV اور N-PRRSV انفیکشن سے وابستہ تناؤ سے متعلق miRNA مالیکیولر دستخطوں کی نشاندہی کرتے ہیں۔ مول بائول Rep. 2014, 41, 5863–5875. [کراس ریف] [پب میڈ]

64. لی، این. ہوانگ، K.؛ چن، وائی؛ ہوانگ، Z. Zhang, Y.; لینگ، سی. لیو، وائی؛ ش، جے؛ Xiao, S.; Yao, L. MicroRNA ssc-miR-124میزبان جینز CD163 کو دبانے کے ذریعے پورسائن ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس کے خلاف اینٹی وائرل سرگرمی کی نمائش کرتا ہے۔ ڈاکٹر مائکروبیول 2021، 261، 109216۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

65. لی، این. ڈو، ٹی. یان، وائی؛ ژانگ، اے. گاو، جے؛ ہو، جی؛ Xiao, S.; Zhou, EM MicroRNA let-7f-5p MYH9 کو نشانہ بنا کر پورسائن ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس کو روکتا ہے۔ سائنس Rep. 2016, 6, 34332. [CrossRef]

66. جین، وائی. وانگ، ایف. لیانگ، ڈبلیو. لیو، جے؛ گاو، جی؛ وانگ، وائی؛ Xu, X.; Su, Q.; ژانگ، Q. Liu, B. ٹونگچینگ سے پورسین الیوولر میکروفیجز میں غیر کوڈنگ والے RNA کی شناخت اور بڑے سفید خنزیر نے PRRSV کو جواب دیا۔ سائنس Rep. 2018, 8, 15621. [CrossRef]

67. چاؤ، ایکس۔ Michal, JJ; جیانگ، زیڈ؛ Liu, B. Vivo میں PRRSV سے متاثرہ مقامی چینی ٹونگچینگ سوروں کے الیوولر میکروفیجز میں مائکرو آر این اے ایکسپریشن پروفائلنگ۔ J. Appl جینیٹ 2017، 58، 539–544۔ [کراس ریف]

68. لی، وائی جے؛ Lee, C. پورسائن ری پروڈکٹو اینڈ ریسپائریٹری سنڈروم وائرس کی نقل کو ایکسٹرا سیلولر سگنل ریگولیٹڈ کناز (ERK) سگنلنگ پاتھ وے کی روک تھام سے دبایا جاتا ہے۔ وائرس ریس 2010، 152، 50-58۔ [کراس ریف]

69. نغمہ، ایس. Bi, J.; وانگ، ڈی. فینگ، ایل. ژانگ، ایل. لی، ایف۔ چن، ایچ. Xiao, S. Porcine reproductive and respiratory syndrome وائرس انفیکشن IL-10 کی پیداوار کو NF-κB اور p38 MAPK راستوں کے ذریعے پورسین الیوولر میکروفیجز میں متحرک کرتا ہے۔ دیو کمپ امیونول۔ 2013، 39، 265–272۔ [کراس ریف]

70. ین، ایس. Huo, Y.; ڈونگ، Y. فین، ایل. یانگ، ایچ. وانگ، ایل. ننگ، وائی۔ Hu, H. c-Jun NH (2)-ٹرمینل کناز کی ایکٹیویشن پورسائن ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس سے متاثرہ اپوپٹوس کے لیے ضروری ہے لیکن وائرس کی نقل کے لیے نہیں۔ وائرس ریس 2012، 166، 103–108۔ [کراس ریف]

71. فین، ایل سگنلنگ پاتھ ویز جو PRRSV انفیکشن پر میزبان سیلز میں اپوپٹوس انڈکشن کو ریگولیٹ کرنے میں شامل ہیں۔ وائرس جینز 2019، 55، 433–439۔ [کراس ریف]

72. Lopez-Fuertes, L.; کیمپوس، ای. ڈومینیک، این. Ezquerra, A.; کاسترو، جے ایم؛ Domínguez, J.; الونسو، ایف پورسین ری پروڈکٹیو اینڈ ریسپائریٹری سنڈروم (PRRS) وائرس متاثرہ میکروفیجز میں TNF کی پیداوار کو کم کرتا ہے۔ وائرس ریس 2000، 69، 41–46۔ [کراس ریف]

73. Teissier, É.; Pécheur، وائرل فیوژن پروٹین کے ذریعہ ثالثی جھلی فیوژن کے ماڈیولیٹر کے طور پر EI Lipids۔ یور بائیوفیس۔ J. 2007, 36, 887-899. [کراس ریف]

74. جیون، جے ایچ؛ لی، سی. پورسائن نیڈو وائرس انفیکشن کے لیے سیلولر کولیسٹرول کی ضرورت ہوتی ہے۔ محراب ویرول۔ 2017، 162، 3753–3767۔ [کراس ریف]

75. سورج، Y. Xiao, S.; وانگ، ڈی. Luo, R.; لی، بی؛ چن، ایچ. فینگ، ایل سیلولر میمبرین کولیسٹرول MARC-145 خلیوں میں پورسائن ری پروڈکٹیو اور ریسپائریٹری سنڈروم وائرس کے داخلے اور ریلیز کے لیے ضروری ہے۔ سائنس چائنا لائف سائنس 2011، 54، 1011–1018۔ [کراس ریف]

76. تیان، ٹی. Zhu, YL; Zhou, YY; لیانگ، جی ایف؛ وانگ، وائی؛ Hu, FH; Xiao, ZD Exosome اپٹیک کے ذریعے Clathrin-mediated endocytosis اور macropinocytosis اور ثالثی miR-21 کی ترسیل۔ J. Biol کیم 2014، 289، 22258–22267۔ [کراس ریف]

77. Mulcahy, LA; گلابی، RC؛ کارٹر، DRF روٹس اور ایکسٹرا سیلولر ویسیکل اپٹیک کے طریقہ کار۔ J. ایکسٹرا سیل۔ Vesicles 2014, 3, 24641. [CrossRef]

78. ژانگ، ایم. Zang, X.; وانگ، ایم؛ لی، زیڈ؛ Qiao, M.; Hu, H.; Chen, D. Exosome-based nanocarriers منشیات کی ترسیل کے لیے بائیو انسپائرڈ اور ورسٹائل گاڑیاں: حالیہ پیشرفت اور چیلنجز۔ جے میٹر کیم B 2019، 7، 2421–2433۔ [کراس ریف]