جینوٹائپ VII نیو کیسل ڈیزیز وائرس کے لیے نوول تھرموسٹیبل چائمرک ویکسین کے امیدواروں کی تعمیر

خلاصہ: جینوٹائپ VII نیو کیسل ڈیزیز وائرس (NDV) نے بہت سے ممالک میں وبائی بیماری پیدا کی ہے اور عام طور پر متاثرہ مرغیوں میں مہلک نتائج کا سبب بنتا ہے۔ اگرچہ موجودہ کمرشل این ڈی وی ویکسین جینی ٹائپ VII NDV کے خلاف مثالی تحفظ فراہم کر سکتی ہیں، لیکن وہ انفیکشن اور وائرل شیڈنگ کو مکمل طور پر نہیں روک سکتیں، اور کچھ ویکسین کے تناؤ کا جین ٹائپ مروجہ تناؤ سے میل نہیں کھا سکتا۔ اس مطالعے میں، تھرموسٹیبل اور جین ٹائپ VII سے مماثل لائیو اٹینیوٹیڈ ویکسین بنانے کے لیے، ہم نے تھرموسٹیبل جین ٹائپ VIII وائرلنٹ HR09 سٹرین کو ریڑھ کی ہڈی کے طور پر استعمال کیا اور اس کے F جین کو جین ٹائپ VII DT-2014 strain کے ساتھ تبدیل کیا۔ دریں اثنا، DT-2014 کے F جین کی کلیویج سائٹ کو بالترتیب کلاس IF پروٹین اور avirulent کلاس II F پروٹین میں تبدیل کر دیا گیا تھا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ دو چائمرک وائرس، نامزد کردہ rcHR09-CI اور rcHR09-CII، نے اپنے والدین کے HR09 تناؤ کے ساتھ یکساں نمو کے حرکیات اور تھرموسٹیبلٹی کا اشتراک کیا۔ میان ڈیتھ ٹائم (ایم ڈی ٹی) اور انٹرا سیریبرل پیتھوجینسیٹی انڈیکس (آئی سی پی آئی) ٹیسٹ سے پتہ چلتا ہے کہ دو چیمریک وائرس بہت زیادہ کم تھے۔ اگرچہ chimeric NDVs اور La Sota vaccine strain دونوں حفاظتی مرغیوں کو وائرل جین ٹائپ VII ZJ1 سٹرین کے چیلنج کے خلاف مکمل تحفظ فراہم کر سکتے ہیں، لیکن دو chimeric NDVs ZJ1 سٹرین کے خلاف اینٹی باڈی ردعمل کی اعلی سطح پیدا کر سکتے ہیں اور وائرل شیڈنگ کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم کر سکتے ہیں۔ لا سوٹا ویکسین کا تناؤ۔ آخر میں، ہمارے مطالعے نے دو chimeric تھرموسٹیبل جین ٹائپ VII سے مماثل NDV ویکسین کے امیدوار بنائے، جنہوں نے وائرل جین ٹائپ VII NDV کے چیلنج کے خلاف مکمل تحفظ فراہم کیا۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا

مطلوبہ الفاظ: نیو کیسل ڈیزیز وائرس؛ تھرموسٹیبلٹی؛ جین ٹائپ VII سے مماثل chimeric وائرس؛ ایف پروٹین؛ تحفظ کی کارکردگی؛ وائرل شیڈنگ

1. تعارف

نیو کیسل ڈیزیز وائرس (این ڈی وی)، نیو کیسل ڈیزیز (این ڈی) کا کارگر ایجنٹ، کا تعلق پیرامائکسوویریڈی خاندان کے ذیلی خاندان Avulavirinae میں آرتھواوولا وائرس کی نسل سے ہے۔ NDV میں ایک منفی احساس، واحد پھنسے ہوئے RNA جینوم ہے، جو نیوکلیوپروٹین (N)، فاسفوپروٹین (P)، میٹرکس پروٹین (M)، فیوژن پروٹین (F)، hemagglutinin-neuraminidase پروٹین (HN)، اور بڑے پروٹین (L) کو انکوڈ کرتا ہے۔ ) [2]۔ NDV تناؤ کے ارتقاء کی بنیاد پر، NDV کو دو طبقوں میں تقسیم کیا جا سکتا ہے: ایک کلاس I وائرس، جس کا جینوم سائز 15,198 نیوکلیوٹائڈز ہے۔ دوسرا ایک کلاس II وائرس ہے، جس کا جینوم سائز 15,186 یا 15,192 ہے [3]۔ اس کی روگجنکیت کی بنیاد پر، NDV کو تین پیتھو ٹائپس میں درجہ بندی کیا گیا ہے: lentogenic، mesogenic، اور velogenic [4]۔ NDV کو دو طبقوں میں تقسیم کیا جا سکتا ہے، ایک کلاس I NDV جو بنیادی طور پر جنگلی پرندوں سے الگ تھلگ ہے اور ہمیشہ مرغیوں کے لیے خطرناک ہوتا ہے۔ دوسرا کلاس II NDV ہے، جو گھریلو اور جنگلی پرندوں میں پایا جاتا ہے، جس میں وائرس اور مہلک دونوں قسمیں شامل ہیں [1,5,6]۔ NDV کے F پروٹین کو سب سے پہلے ایک غیر فعال پیشگی، F0 کے طور پر ترکیب کیا جاتا ہے، جسے میزبان سیلولر پروٹیز [7] کے ذریعہ مزید دو فعال F1 اور F2 ذیلی یونٹس میں تقسیم کیا جاتا ہے۔ فعال ایف پروٹین وائرل اور سیلولر جھلیوں کے فیوژن میں ثالثی کر سکتا ہے [8]۔ محققین نے پایا ہے کہ F پروٹین کی کلیویج سائٹ کی شکل بھی NDV کے وائرس کا اشارہ ہے۔ یہ اطلاع دی گئی ہے کہ مرغیوں کے لیے وائرلیس سٹرین نے 112R/KR-QK/RR↓F 117 کا کلیویج سائٹ موٹف دکھایا، جبکہ کم وائرلیس NDVs میں اسی علاقے میں 112G/EK/R-QG/ER↓L 117 کا موٹف ہے۔ [9,10]۔ لہذا، F پروٹین کے کلیویج سائٹ موٹف کو تبدیل کرنا وائرل NDV [11,12] کو کم کرنے کا ایک موثر طریقہ ہے۔ NDV کے وائرس میں اس کے اہم کردار کے باوجود، F پروٹین جینی ٹائپ سے مماثل ویکسین کی حفاظتی استثنیٰ میں بھی ایک اہم کردار ادا کرتا ہے [13]۔ تھرموسٹیبل وائرس ویکسین اس کے ذخیرہ کرنے اور نقل و حمل میں سہولت فراہم کر سکتی ہے، خاص طور پر کچھ دور دراز اضلاع کے لیے جہاں کولڈ چین کی نقل و حمل دستیاب نہیں ہے۔ اس سے پہلے، ایک قدرتی تھرموسٹیبل NDV تناؤ، نامزد HR09، کو ہماری لیب میں الگ تھلگ کیا گیا تھا اور 56 ◦C علاج کے تحت ایک گھنٹے سے زیادہ متعدی رکھ سکتا تھا [14]۔ اس کے بعد، ایک معکوس جینیاتی نظام کا استعمال کرتے ہوئے، یہ پایا گیا کہ HN پروٹین میں موجود باقیات 315 اور 369 اس کی حرارت کے خلاف مزاحمت کی صلاحیت کے لیے ذمہ دار ہیں [15]۔ چونکہ HR09 ایک خطرناک تناؤ ہے، اس لیے ہم نے الٹا جینیاتی نظام کا استعمال کرتے ہوئے اس کی F پروٹین کی کلیویج سائٹ کو 112RRQKR↓F 117 سے ایک وائرسی شکل 112GRQGR↓L 117 میں تبدیل کر دیا اور پتہ چلا کہ ریکومبیننٹ وائرس rHR09 VII کے خلاف مکمل تحفظ فراہم کر سکتا ہے۔ NDV وائرل تناؤ [16]۔ مزید برآں، H9N2 ذیلی قسم ایویئن انفلوئنزا وائرس (AIV) کے HA جین کو ظاہر کرنے کے لیے کم HR09 کو مزید ویکسین ویکٹر کے طور پر استعمال کیا گیا، جس نے H9N2 AIV کے چیلنج کے خلاف مثالی تحفظ بھی فراہم کیا۔ اس مطالعہ میں، تھرموسٹیبل اور جین ٹائپ VII سے مماثل NDV کم کرنے والی ویکسین بنانے کے لیے، ہم نے تھرموسٹیبل جین ٹائپ VIII NDV وائرلینٹ HR09 سٹرین کو ریڑھ کی ہڈی کے طور پر استعمال کیا اور اس کے F جین کو جین ٹائپ VII DT{{59} کے ساتھ تبدیل کیا۔ دریں اثنا، DT-2014 کے F جین کی کلیویج سائٹ کو بالترتیب کلاس I NDV F پروٹین اور Avirulent کلاس II NDV F پروٹین میں تبدیل کر دیا گیا تھا۔ نتائج سے معلوم ہوا کہ دو چائمرک وائرسز نے HR09 کے ساتھ ایک جیسی ترقی کی حرکیات اور تھرموسٹیبلٹی کا اشتراک کیا۔ اس کے علاوہ، اوسط موت کا وقت (MDT) اور intracerebral pathogenicity index (ICPI) ٹیسٹوں سے پتہ چلتا ہے کہ دو کیمریک وائرس ایک خطرناک تناؤ سے تعلق رکھتے تھے۔ یہ دونوں اپنے خلاف اعلی سطحی اینٹی باڈی ردعمل پیدا کر سکتے ہیں اور امیونائزڈ مرغیوں میں جینوٹائپ VII ZJ1 تناؤ پیدا کر سکتے ہیں، وائرل شیڈنگ کو نمایاں طور پر کم کر سکتے ہیں، اور ZJ1 سٹرین کے ساتھ چیلنجز کے خلاف مکمل تحفظ فراہم کر سکتے ہیں۔ آخر میں، ہمارا مطالعہ جین ٹائپ VII NDV کے لیے دو چیمرک تھرموسٹیبل ویکسین کے امیدوار فراہم کرتا ہے۔

cistanche tubulosa کے فوائد- مدافعتی نظام کو مضبوط کرنا

Cistanche Enhance Immunity مصنوعات دیکھنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

【مزید پوچھیں】 ای میل:cindy.xue@wecistanche.com / واٹس ایپ: 0086 18599088692 / وی چیٹ: 18599088692

2. مواد اور طریقہ

2.1 خلیات اور وائرس

BSR-T7/5 خلیات، BHK خلیوں سے منتخب سیل لائن جو T7 RNA پولیمریز کا اظہار کر سکتے ہیں، Dulbecco کے ترمیم شدہ ایگل میڈیم (DMEM, Gibco) کے ساتھ 15% فیٹل بووائن سیرم (پین بائیوٹیک، جرمنی) اور 1% کے ساتھ کلچرڈ ہیں۔ penicillin-streptomycin (Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA) 5% CO2 انکیوبیٹر میں 37 ◦C پر۔ مخصوص پیتھوجین فری (SPF) برانن شدہ چکن کے انڈے، جو NDV کے پھیلاؤ کے لیے استعمال کیے جا سکتے ہیں، بیجنگ Boehringer Ingelheim Vital Biotechnology Co., Ltd. Thermostable genotype VIII NDV HR09 سٹرین (MF285077. ZDV.17777.1) سے خریدے گئے ہیں۔ ہماری لیب میں ذخیرہ ہیں۔

2.2 پلازمیڈ کی تعمیر

پلاسمڈ، نامزد pNDV/rHR09، جین ٹائپ VIII HR09 کے مکمل طوالت کے جینوم تسلسل کو TVT7R (0.0) ویکٹر میں F پروٹین میں تغیر کے ساتھ کلون کرکے بنایا گیا تھا [16]۔ جین ٹائپ VII DT-2014 تناؤ کا F جین، جو مروجہ جین ٹائپ VII NDV تناؤ کے ساتھ اعلیٰ مماثلت رکھتا تھا، کو بڑھا دیا گیا تھا، اور اس کی کلیویج سائٹس کے تغیرات کو سائٹ کی طرف سے ہدایت شدہ mutagenesis کے ذریعے پیدا کیا گیا تھا۔ پھر، pNDV/rHR09 میں F جین کو تبدیل شدہ DT-2014 F جین سے تبدیل کر دیا گیا۔ مطالعہ میں استعمال ہونے والے تمام پرائمر ترتیب درخواست پر دستیاب ہیں۔

2.3 ریکومبیننٹ وائرس سے بچاؤ

اس مطالعہ میں، دو chimeric NDV ویکسین کے امیدواروں کو بچایا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [18]۔ اہم طریقہ کار ذیل میں بیان کیے گئے ہیں: سب سے پہلے، مکمل طوالت کے NDV پلازمیڈز جن میں Cleavage سائٹس NDV DT-2014 کے F جین کو تبدیل کرتی ہیں، نامزد pNDV/rcHR09-CI اور pNDV/rcHR{{4} }CII، مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق Lipofectamine 3000 reagent (Thermo Fisher Scientific, USA) کا استعمال کرتے ہوئے تین مددگار پلازمیڈ pCI-NP، pCI-P، اور pCI-L سے تبدیل کیا گیا تھا۔ دوم، ایس پی ایف ایمبریونیٹڈ چکن انڈوں سے ایلانٹوک سیالوں کو بالترتیب 12 گھنٹے اور 36 گھنٹے پوسٹ ٹرانسفیکشن میں شامل کیا گیا تھا۔ تیسرا، پورے سیل لائسیٹس کو 72 گھنٹے کے بعد منتقلی پر اکٹھا کیا گیا اور تین بار منجمد / پگھلنے میں سیٹ کیا گیا۔ آخر میں، سیل لائسیٹس کو 10- دن پرانے SPF ایمبریونیٹڈ چکن انڈوں میں 3-5 دنوں کے لیے انجکشن لگایا گیا، اور بچائے گئے chimeric NDVs کے وجود کے لیے allantoic سیال جمع کیے گئے اور HA پرکھ کا نشانہ بنایا گیا۔

2.4 RT-PCR اور QRT-PCR

آر این اے کو TRIzol ریجنٹ (Merck, Darmstadt, Germany) کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا جو کہ متاثرہ جنین والے مرغی کے انڈوں سے اکٹھے کیے گئے ایلنٹوک سیالوں سے تھا، اور پھر PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Takara, China) کا استعمال کرتے ہوئے cDNA میں نقل کیا گیا تھا۔ بچائے گئے NDV جینوم کی ترتیب کی پوری لمبائی کو 10-جوڑے کے پرائمر (درخواست پر دستیاب) کا استعمال کرتے ہوئے بڑھا دیا گیا تھا۔ لائف ٹکنالوجی کے آلے کا استعمال کرتے ہوئے مطلق مقداری ریئل ٹائم RT-PCR کے ذریعہ وائرس شیڈنگ کی سطحوں کو درست کیا گیا۔ مختصراً، cloacal swab اور tracheal swab کے نمونے 3- اور 5- دنوں کے بعد چیلنج (dpc) پر جمع کیے گئے، پھر RNA نکالا گیا، cDNA میں الٹا نقل کیا گیا، اور مقداری ریئل ٹائم پی سی آر کے ساتھ مشروط کیا گیا۔ (QRT-PCR) وائرل شیڈنگ کی مقدار کے لیے۔ وائرل شیڈنگ کی مقدار کا حساب تمام جمع شدہ جھاڑیوں کے mRNA سطح کے اوسط ± SD کے طور پر کیا گیا تھا۔ وائرل شیڈنگ کا پتہ لگانے میں استعمال ہونے والے پرائمر اور پروب کے سلسلے درخواست پر دستیاب ہیں۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا

2.5 وائرل گروتھ وکر

مختلف NDVs کی نشوونما کی حرکیات کو 10- دن پرانے جنین والے چکن کے انڈوں میں ناپا گیا۔ مختصراً، NDVs کو النٹوک ٹیکہ کے ذریعے پتلا کر کے 10-دن پرانے جنین چکن کے انڈوں میں انجکشن لگایا گیا تھا۔ انفیکشن کے بعد 24-، 48-، 72-، اور 96- گھنٹہ میں ایلنٹوک فلوڈ جمع کیا گیا تھا۔ ہر نمونے کی EID50 کا حساب ریڈ اور میونچ طریقہ [19] کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔

2.6۔ تھرموسٹیبلٹی ٹیسٹ

ہر وائرس کی تھرموسٹیبلٹی کو ماپا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [18]۔ مختصراً، 108 EID50 ٹائٹر کے ساتھ ہر ایک وائرس کو 0.1 ملی لیٹر فی شیشی پر 56 ◦C کے ساتھ پانی کے غسل کا نشانہ بنایا گیا، پھر نمونے 10-، 20-، {{ پر جمع کیے گئے۔ 8}}، 40-،50-، اور 60-منٹ پوسٹ انکیوبیشن۔ آخر میں، وائرس ٹائٹر کو EID50 طریقہ استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔

2.7۔ وائرس اور استحکام کا تعین

ہر وائرس کے وائرل ہونے کا اندازہ 10- دن پرانے SPF برانن شدہ چکن انڈوں میں اوسط ڈیتھ ٹائم (MDT) ٹیسٹ لگا کر لگایا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [20,21]۔ مختصراً، ہر chimeric NDV سٹرین کے اکٹھے کیے گئے ایلنٹوک فلوڈ کو 10- فولڈ سیریز میں 10−6 سے 10−9 تک پتلا کر کے 10- دن پرانے SPF میں انجکشن لگایا گیا جس میں 5 فی گروپ کے ساتھ مرغی کے انڈے لگائے گئے تھے۔ ہر ایک کے 100 L کے ساتھ. اس کے بعد، چیلنج شدہ جنین شدہ چکن کے انڈوں کو 37 ◦C پر انکیوبیٹ کیا گیا اور کل 7 دن تک موم بتیوں میں رکھا گیا۔ ہر گروپ کی موت ریکارڈ کی گئی، اور ایم ڈی ٹی کی قیمت کا حساب لگایا گیا۔ اس کے علاوہ، 1- دن پرانے SPF مرغیوں میں ICPI ٹیسٹ کی پیمائش بھی کیمریک وائرس کی وائرلینس کو جانچنے کے لیے کی گئی۔ مختصراً، chimeric وائرس کو PBS کا استعمال کرتے ہوئے ایک 10- فولڈ سیریز میں پتلا کیا گیا اور 1- دن پرانے SPF برانن شدہ مرغی کے انڈوں میں انجکشن لگایا گیا۔ انکیوبیٹڈ انڈوں کو کل 8 دن کے لیے کینڈل کیا گیا اور ICPI کی قدر کا حساب لگایا گیا۔ دو chimeric NDVs کے استحکام کا اندازہ لگانے کے لیے، ان کو 10-دن پرانے SPF برانن شدہ چکن انڈوں میں کل 20 حصئوں کے لیے allantoic انوکولیشن کے ذریعے پھیلایا گیا، پھر منتخب حصئوں کی MDT اور ICPI اقدار کی پیمائش کی گئی۔

2.8۔ چکن امیونائزیشن اور چیلنج

کل 48 8-دن پرانے SPF مرغیوں کو تصادفی طور پر چار گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا، اور تین گروپوں کو 106 EID50 rcHR09-CI، rcHR09-CII، اور لا سوٹا سٹرین کے ساتھ ٹیکہ لگایا گیا تھا۔ بالترتیب oculonasal راستے کے ذریعے 100 μL DMEM۔ کنٹرول گروپ میں مرغیوں کو 100 µL DMEM کے ساتھ انجکشن لگایا گیا تھا۔ امیونائزڈ مرغیوں کا سیرم 7-، 14-، اور 21 دن کے بعد امیونائزیشن (dpi) پر اینٹی باڈی ٹائٹر کے تعین کے لیے جمع کیا گیا تھا۔ 21 dpi پر، مرغیوں کو 105 EID50 NDV genotype VII ZJ1 تناؤ کے ساتھ oculonasal راستے سے چیلنج کیا گیا۔ cloacal اور oropharyngeal swabs کو مزید وائرل شیڈنگ کا پتہ لگانے کے لیے 3- اور 5- دن کے پوسٹ چیلنج (dpc) میں جمع کیا گیا۔ طبی علامات اور موت ہر روز 14 ڈی پی سی تک ریکارڈ کی جاتی تھی۔

2.9 سیرم اینٹی باڈی ٹائٹر کا تعین

این ڈی وی کے خلاف اینٹی باڈی ٹائٹر کو ہیماگلوٹینیشن انابیشن (HI) طریقہ سے ماپا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [22]۔

2.10 اخلاقیات کا بیان

مرغیوں کی حفاظتی ٹیکوں اور چیلنج کو یانگ زو یونیورسٹی (نمبر YZUDWLL-201904-002؛ تاریخ: 4 فروری 2019) کی ادارہ جاتی جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کمیٹی نے منظور کیا تھا۔

مردوں کے لئے cistanche فوائد - مدافعتی نظام کو مضبوط

2.11۔ شماریاتی تجزیہ

اعداد و شمار کو ذرائع ± معیاری انحراف (SDs) کے طور پر دکھایا گیا ہے، اور وہ تین نقلوں سے حاصل کیے گئے تھے۔ گراف پیڈ پرزم 7{2}} سافٹ ویئر (لا جولا، CA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے طالب علم کے ٹی ٹیسٹ کے طریقہ کار سے مختلف گروپوں کے درمیان شماریاتی اہمیت کا تجزیہ کیا گیا۔ (* p < 0۔{5}}5; ** p < 0.01; *** p < 0.001)۔

3. نتائج

3.1 دو Chimeric NDVs کی تعمیر کے لیے منصوبہ بندی

جینوٹائپ VII NDV دنیا بھر میں تقسیم کیا جاتا ہے اور اکثر مرغیوں اور دیگر حساس پرندوں کے لیے مہلک نتائج کا سبب بنتا ہے [23]۔ اس سے پہلے، ہم نے تھرموسٹیبل جین ٹائپ VIII NDV HR09 سٹرین کو الگ تھلگ کیا تھا، جو 56 ◦C [14] پر انکیوبیٹ ہونے پر 60 منٹ سے زیادہ تک انفیکشن برقرار رکھ سکتا ہے۔ اس مطالعہ میں، NDV جینوٹائپ VII کے خلاف تھرموسٹیبل ایٹینیویٹڈ ویکسین امیدوار پیدا کرنے کے لیے، ہم نے HR09 کو ریڑھ کی ہڈی کے طور پر استعمال کیا اور F جین کو VII DT-2014 سٹرین کے ساتھ تبدیل کیا۔ دریں اثنا، کلیویج سائٹس کو 112RRQRR↓F 117 سے کلاس I NDV F پروٹین کلیویج سائٹس 112ERQER↓L 117 میں تبدیل کیا گیا تھا اور کلاس II NDV F پروٹین کلیویج سائٹس 112 جی آر کیو جی آر ↓ کی پوری لمبائی پر مشتمل ہے۔ تبدیل شدہ F پروٹین کے ساتھ HR09 جینوم کو بالترتیب prcHR09-CI اور prcHR09-CII کے طور پر نامزد کیا گیا تھا (شکل 1)۔

شکل 1۔ دو chimeric NDVs کی تعمیر کے لیے منصوبہ بندی کی حکمت عملی۔ جین ٹائپ VIII تھرموسٹیبل HR09 سٹرین کے F جین کو جین ٹائپ VII DT-2014 سٹرین کے تبدیل شدہ F جین سے تبدیل کر دیا گیا۔

3.2 Chimeric NDV rcHR09-CΙ اور rcHR09-CⅡ کی تعمیر

chimeric وائرس کی تعمیر کے لیے، پلازمیڈ prcHR09-CI یا prcHR09-CII کو تین مددگار پلازمیڈز، pCI-NP، pCI-P، اور pCI-L کے ساتھ BSR-T7/5 خلیوں میں منتقل کیا گیا تھا۔ ، جو T7 RNA پولیمریز کا اظہار کرسکتا ہے۔ 72 گھنٹے بعد، پورے سیل لیسیٹ کی کٹائی کی گئی اور 10- دن پرانے SPF برانن والے انڈوں میں انجکشن لگایا گیا، اور انکیوبیشن کے 4 دن بعد ایلانٹوک فلویڈز جمع کیے گئے۔ بچائے گئے دو چیمریک وائرس کی کلیویج سائٹس کو چیک کرنے کے لیے، ایف جین کا پی سی آر تجربہ کیا گیا اور مصنوعات کو ترتیب سے مشروط کیا گیا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ کلیویج سائٹس کو rcHR09-CI (Figure 2A) میں 112ERQER↓L 117 اور rcHR09-CII (شکل 2B) میں 112GRQGR↓L 117 میں کامیابی سے تبدیل کر دیا گیا تھا۔ آخر میں، دو تھرموسٹیبل chimeric NDVs کے مکمل طوالت کے جینوم کو 10 جوڑے پرائمر کا استعمال کرتے ہوئے بڑھا دیا گیا، اور نتائج نے دونوں rcHR09-CI (Figure 2C) اور rcHR09-CII (فگر 2D) کو ظاہر کیا۔ NDV کا مکمل طوالت والا جینوم۔ اجتماعی طور پر، ان اعداد و شمار نے یہ ظاہر کیا کہ دو تھرموسٹیبل چیمریک وائرس کامیابی کے ساتھ بنائے گئے تھے۔

شکل 2. chimeric NDV rcHR09-CI اور rcHR09-CII کی تعمیر اور توثیق۔ بچائے گئے وائرسز کے کل RNA کو نکالا گیا اور cDNA میں الٹا نقل کیا گیا، rcHR09-CI (A) اور rcHR09-CII (B) کے F جین کو بڑھا دیا گیا اور ترتیب پر سیٹ کیا گیا۔ chimeric NDV rcHR09-CI (C) اور rcHR09-CII (D) کی پوری لمبائی کو پرائمر کے 10 جوڑوں کا استعمال کرتے ہوئے بڑھایا گیا تھا، اور S1–S10 ان کی نمائندگی کرتے ہیں۔

3.3 Chimeric NDV rcHR09-CI اور rcHR09-CII کی حیاتیاتی خصوصیات

یہ جانچنے کے لیے کہ آیا F جین کی تبدیلی NDV کی نقل کو متاثر کرتی ہے، نمو کے حرکیات کو ان میں سے EID50 کی پیمائش کرکے 10- دن پرانے جنین والے چکن انڈوں میں انجام دیا گیا۔ NDVs کو پتلا کیا گیا تھا اور 10- دن پرانے جنین چکن کے انڈوں میں انکیوبیٹ کیا گیا تھا، اور ایلنٹوک سیال کو 24-، 48-، 72-، اور 96- پر جمع کیا گیا تھا۔ h پوسٹ انکیوبیشن۔ EID50 کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ دونوں بچائے گئے chimeric rcHR09-CI اور rcHR09-CII نے اپنے والدین کے HR09 تناؤ (شکل 3A) کے ساتھ ایک جیسی ترقی کی حرکیات کا اشتراک کیا، جس نے یہ ظاہر کیا کہ F جین کی تبدیلی کا کوئی اثر نہیں ہوا۔ HR09 کی نقل پر۔

شکل 3. چائمرک NDV rcHR09-CI اور rcHR09-CII کی حیاتیاتی خصوصیات۔ (A) دو chimeric NDV rcHR09-CI اور rcHR09-CII اپنے زچگی کے تناؤ HR09 کے ساتھ یکساں نمو کائنےٹک رکھتے ہیں۔ دو چائمرک وائرس اور ان کے زچگی کے تناؤ HR09 کی نشوونما کو EID50 طریقہ سے 10- دن پرانے SPF برانن شدہ چکن انڈوں میں ماپا گیا۔ (B) دو chimeric NDV rcHR09-CI اور rcHR09-CII HR09 کے ساتھ تھرموسٹیبلٹی کا اشتراک کرتے ہیں۔ NDV rcHR09-CI, rcHR09-CII, HR09، اور La Sota strains کے کل 108 EID50 56 ◦C میں 10-، 20-، {{21} کے لیے انکیوبیٹ کیے گئے تھے۔ }}، 40-، 50-، اور 60-منٹ، بالترتیب۔ پھر، چار NDVs کے ٹائٹرز کو EID50 طریقہ استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔

جیسا کہ HR09 تناؤ تھرموسٹیبل NDV تناؤ تھا، آیا F پروٹین کی تبدیلی نے اس کی تھرموسٹیبلٹی کو متاثر کیا یا نہیں اس کی بھی چھان بین کی گئی۔ ایک ہی وائرس ٹائٹر (108 EID5{{50}}) کے ساتھ ہر ایک chimeric وائرس اور HR09 کا علاج 10-، 20- کے ساتھ کیا گیا تھا۔ ، 30-، 40-، 50-، اور 60-منٹ 56 ◦C سے کم۔ پھر، وائرس ٹائٹر کی پیمائش EID50 پرکھ کے ذریعے کی گئی۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ دو چیمریک وائرس اور ان کے والدین کے تناؤ HR09 60 منٹ سے زیادہ متعدی رہ سکتے ہیں، جبکہ غیر تھرموسٹیبل لا سوٹا تناؤ صرف 20 منٹ سے زیادہ متعدی رہا (شکل 3B)۔ ان اعداد و شمار نے اشارہ کیا کہ chimeric وائرس rcHR09-CI اور rcHR09- 218 CII اب بھی تھرموسٹیبل تھے۔ اس مطالعہ میں، VIII HR09 کے F جین کو VII DT- 2014 کے بدلے ہوئے F جین سے تبدیل کیا گیا تاکہ دو کم chimeric NDVs حاصل کی جاسکیں۔ chimeric rcHR09-CI اور rcHR09-CII کی وائرلینس کا جائزہ لینے کے لیے، MDT اور ICPI اقدار کا پتہ چلا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ تمام دو chimeric NDVs کی MDT ویلیو 120 h سے زیادہ تھی۔ ایک کنٹرول کے طور پر، ان کے والدین کے HR09 تناؤ کی MDT ویلیو 57.6 h تھی۔ rcHR09-CI اور rcHR09-CII کی ICPI قدریں صفر تھیں، کنٹرول کے طور پر، HR09 کا ICPI 1.8 تھا (ٹیبل 1)۔ MDT قدر کی بنیاد پر NDV کی وائرلینس کو تین گروپوں میں درجہ بندی کیا گیا ہے: ویلوجینک (60 h سے کم)، mesogenic (60-90 h) اور lentogenic (90 h سے زیادہ)۔ دریں اثنا، ICPI قدر بھی NDV کی وائرلینس کا تعین کرنے کا ایک عام معیار ہے: ویلوجنک (60 h سے کم)، mesogenic (60–90 h)، اور lentogenic (90 h سے زیادہ): ویلوجنک (1.5–2.0)، mesogenic (0.7) -1.5)، اور لینٹوجینک (0.0–0.7) [24]۔ اجتماعی طور پر، یہ اعداد و شمار یہ ظاہر کرتے ہیں کہ بچائے گئے chimeric rcHR09-CI اور rcHR09-CII دونوں کو F پروٹین کی کلیویج سائٹس کو تبدیل کرکے انتہائی کم کیا گیا تھا۔

جدول 1۔ دو چائمرک NDVs کی روگجنکیت اور استحکام کی تشخیص (کل 20 حوالے)۔

مزید برآں، دو chimeric NDVs کے استحکام کو 10- دن پرانے ایمبریونیٹڈ چکن انڈوں میں 20 حصئوں کے لیے انکیوبٹنگ کے ذریعے معلوم کیا گیا تھا، اور MDT اور ICPI قدروں کی پیمائش کے لیے حصئوں 10 اور 20 کا انتخاب کیا گیا تھا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ گزرنے 10 اور گزرنے 20 کی MDT قدریں سبھی 120 h سے بڑی تھیں، اور گزرنے 10 اور گزرنے 20 کی ICPI قدریں تمام صفر تھیں (ٹیبل 1)۔ ان اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ 10-دن پرانے برانن والے چکن انڈوں میں 20 گزرنے کے بعد، دو chimeric NDVs کی MDT اور ICPI قدروں میں کوئی خاص فرق نہیں تھا، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ بچائے گئے دو chimeric NDVs نسبتاً مستحکم تھے۔

3.4 Chimeric NDVs کے امیونائزیشن کے بعد ایک ہائی HI اینٹی باڈی ٹائٹر کی حوصلہ افزائی کی گئی۔

یہ جانچنے کے لیے کہ آیا بچائے گئے chimeric NDVs کی امیونائزیشن مرغیوں میں اینٹی باڈی ردعمل پیدا کر سکتی ہے، 48 8- دن پرانی SPF مرغیوں کو چار گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا۔ مختلف گروپوں کو بالترتیب rcHR09-CI، rcHR09-CII، لا سوٹا سٹرین، یا 100 µL DMEM کے 106 EID50 کے ساتھ oculonasal راستے سے ٹیکہ لگایا گیا تھا۔ امیونائزڈ مرغیوں کا سیرم 7-، 14-، اور 21 دن بعد امیونائزیشن (dpi) پر HI اینٹی باڈی ٹائٹر کے تعین کے لیے جمع کیا گیا تھا۔ حفاظتی ٹیکوں والے NDV تناؤ کے خلاف جمع کردہ سیرم کے HI اینٹی باڈی نے ظاہر کیا کہ 7 dpi میں rcHR09-CI, rcHR09-CII، اور La Sota کے سیرم میں کوئی خاص فرق نہیں تھا۔ مزید یہ کہ، وقت گزرنے کے ساتھ، ایچ آئی اینٹی باڈی ٹائٹر 14 اور 21 ڈی پی آئی کے سیرم میں بڑھ رہا تھا، اور تینوں گروپوں کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں تھا (شکل 4A)

شکل 4۔ چائمرک وائرسز نے اعلیٰ سطح کے اینٹی باڈی ردعمل کو جنم دیا۔ SPF مرغیوں کو بالترتیب 106 EID50 rcHR09-CI, rcHR09-CII، اور کمرشل ویکسین La Sota strain کے ذریعے oculonasal راستے سے ٹیکہ لگایا گیا تھا۔ سیرم کو 1-، 2-، اور امیونائزیشن کے 3 ہفتوں کے بعد جمع کیا گیا تھا، اینٹی باڈی ٹائٹر کو اپنے خلاف HI طریقہ استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا (A) اور کراس HI اینٹی باڈی ٹائٹر ZJ1 (B) کے خلاف۔ (ns: کوئی خاص فرق نہیں؛ * p <0.05؛ ** p <0.01)۔

اس کے علاوہ، ZJ1 تناؤ کے خلاف کراس ری ایکٹیو HI اینٹی باڈی ٹائٹر کا پتہ لگایا گیا تاکہ جین ٹائپ VII NDV کے خلاف chimeric NDVs کے حفاظتی ٹیکوں کے اثرات کو بلند کیا جا سکے۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ 7 ڈی پی آئی میں تین NDVs کے حفاظتی ٹیکوں والے گروپوں کے درمیان کوئی خاص فرق نہیں تھا، اور HI اینٹی باڈی ٹائٹر وقت کے ساتھ بڑھ رہا تھا۔ حفاظتی ٹیکوں کے خلاف HI اینٹی باڈی ٹائٹر سے مختلف، RCHR کے ZJ1 تناؤ کے خلاف HI اینٹی باڈی ٹائٹرز09-CI- اور rcHR09-CII-امیونائزڈ گروپ لا سوٹا ویکسین کے امیونائزڈ گروپ سے نمایاں طور پر زیادہ تھے، اور rcHR 09-CI گروپ نے ان تینوں گروپوں میں سب سے زیادہ HI اینٹی باڈی ٹائٹر کی حوصلہ افزائی کی (شکل 4B)۔

3.5 وائرل شیڈنگ کو اس وقت کم کیا گیا جب حفاظتی مرغیوں کو وائرولنٹ جینوٹائپ VII ZJ1 سٹرین کے ساتھ چیلنج کیا گیا

اس مطالعہ میں، حفاظتی SPF مرغیوں کو جین ٹائپ VII ZJ1 سٹرین کے ساتھ چیلنج کیا گیا تاکہ جین ٹائپ VII NDV کے خلاف chimeric وائرس کے حفاظتی اثر کا اندازہ کیا جا سکے۔ 21 dpi پر، حفاظتی مرغیوں کو 105 EID50 ZJ1 سٹرین کے ساتھ چیلنج کیا گیا، اور ہر گروپ کے تمام چیلنج شدہ مرغیوں سے cloacal اور oropharyngeal swabs 3- اور 5- دنوں کے بعد چیلنج (dpc) میں جمع کیے گئے ) وائرل شیڈنگ کا پتہ لگانے کے لیے۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ rcHR09-CI، rcHR09-CII، اور La Sota گروپوں کی حفاظتی ٹیکوں سے cloacal swabs (Figure 5A, C) اور oropharyngeal swabs میں وائرل شیڈنگ کو کم کیا جا سکتا ہے {{11} } اور 5-dpc (شکل 5B، D) کنٹرول گروپ کے مقابلے میں۔ لا سوٹا گروپ کے مقابلے میں، دو چائمرک NDVs میں وائرل شیڈنگ لا سوٹا امیونائزڈ گروپس کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھی، جس نے یہ ظاہر کیا کہ دو chimeric NDVs میں جین ٹائپ VII NDV کے چیلنج کے خلاف لا سوٹا سٹرین سے بہتر حفاظتی کارکردگی تھی۔

شکل 5. چیلنج شدہ مرغیوں میں NDV ZJ1 شیڈنگ کی QRT-PCR مقدار۔ 21 دن کے بعد امیونائزیشن پر مرغیوں کو 1{{10}6 EID50 NDV جین ٹائپ VII ZJ1 سٹرین کے ساتھ چیلنج کیا گیا۔ کلوکل سویب کے نمونے (A,C) اور oropharyngeal swab کے نمونے (B,D) چیلنج کے بعد 3- اور 5- دنوں میں جمع کیے گئے تھے، اور NDV ZJ وائرل شیڈنگ کی سطحوں کو QRT- کے ذریعے شمار کیا گیا تھا۔ پی سی آر اقدار کو ہر گروپ میں اوسط اقدار ± معیاری انحراف (مطلب ± SD) کے طور پر دکھایا گیا تھا۔ (ns: کوئی خاص فرق نہیں؛ * p <0.05؛ ** p <0.01؛ *** p <0.001)۔

3.6۔ دو Chimeric NDVs نے جینوٹائپ VII ZJ1 سٹرین کے چیلنج کے خلاف مکمل تحفظ فراہم کیا

کیونکہ جین ٹائپ VII ZJ1 تناؤ کا چیلنج مہلک نتائج کا باعث بن سکتا ہے، سوائے وائرل شیڈنگ کے پتہ لگانے کے، چیلنج شدہ مرغیوں کی موت بھی 14 دن تک ہر روز ریکارڈ کی جاتی تھی۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ کنٹرول گروپ میں موجود تمام مرغیوں میں روحانی ڈپریشن، سانس کی خرابی، اسہال کی طبی علامات ظاہر ہوئیں، اور وہ 5- سے 6-dpc میں مر گئے، اور rcHR میں کوئی طبی علامات نہیں ہیں اور نہ ہی کوئی مرغیاں مری ہیں{ {4}}CI, rcHR09-CII، اور La Sota گروپس 14 dpc تک (شکل 6)، جس نے یہ ظاہر کیا کہ تمام chimeric NDVs اور La Sota ویکسین سٹرین جین ٹائپ VII NDV کے چیلنج کے خلاف مکمل تحفظ فراہم کر سکتے ہیں۔

شکل 6. Chimeric NDV rcHR09-CI اور rcHR09-CII ZJ1 کے چیلنج کے خلاف مکمل تحفظ فراہم کرتے ہیں۔ امیونائزیشن کے 3 ہفتوں کے بعد، مرغیوں کو 106 EID50 ZJ1 سٹرین کے ساتھ چیلنج کیا گیا۔ مجموعی طور پر 14 دن تک بقا کی صورتحال کی نگرانی کی گئی۔

4. بحث

دنیا میں متعدد قسم کی این ڈی وی ویکسین استعمال ہونے کے باوجود، این ڈی اب بھی دنیا کے کئی مقامات پر ہوتا ہے۔ ایک مسئلہ یہ ہو سکتا ہے کہ ویکسین کے تناؤ کا جین ٹائپ مروجہ تناؤ سے میل نہیں کھاتا۔ یہ جینی ٹائپ سے مماثل ویکسین خطرناک NDVs کے چیلنج کے خلاف کچھ تحفظ فراہم کر سکتی ہیں۔ تاہم، وہ مرغیوں کو انفیکشن سے نہیں بچا سکتے، اور وائرل شیڈنگ کو مؤثر طریقے سے کم نہیں کر سکتے [25,26]۔ کلاس II genotype VII NDV مشرق وسطیٰ، افریقہ اور ایشیا کے خطوں میں رائج ایک بڑا جین ٹائپ ہے۔ تاہم، ان جگہوں پر استعمال ہونے والی ویکسین عام طور پر جین ٹائپ II لا سوٹا اور B1 سٹرین ہوتی ہیں، جو کہ مروجہ تناؤ [27-29] کے ساتھ ایک جیسی جین ٹائپ نہیں ہیں۔ اس مطالعہ میں، تھرموسٹیبل جینی ٹائپ VII سے مماثل ویکسین کے امیدوار کو پیدا کرنے کے لیے، تھرموسٹیبل جین ٹائپ VIII HR09 سٹرین کو ریڑھ کی ہڈی کے طور پر استعمال کیا گیا تھا، اور VII کے لیے ویکسین کی ضرورت کو پورا کرنے کے لیے دو چیمرک جین ٹائپ VII سے مماثل ویکسین کے امیدوار بنائے گئے تھے۔ اب تک، متعدد تھرموسٹیبل این ڈی وی ویکسین کے امیدوار تیار کیے جا چکے ہیں۔ پہلا تھرموسٹیبل NDV V4 1966 میں مرغیوں کے پرووینٹریکولس سے الگ تھلگ کیا گیا تھا [30]۔ V4 ایک قدرتی لینٹوجینک تناؤ تھا، اور فائیلوجنیٹک تجزیہ کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ اس کا تعلق جین ٹائپ II NDV سے ہے۔ V4 سے مختلف، ہمارے مطالعے میں استعمال ہونے والا تھرموسٹیبل سٹرین HR09 ایک وائریلنٹ سٹرین سے تعلق رکھتا تھا [14]۔ اگر ہم اسے طبی استعمال میں لانا چاہتے ہیں، تو سب سے پہلے اس بات کا تعین کرنا ہے کہ اسے ایک مہلک تناؤ کے طور پر کیسے بنایا جائے۔ معکوس جینیاتی نظام کی ترقی کی بدولت، این ڈی وی ویکسین کے امیدواروں کی این ڈی وی ویکسین کی تیاری میں نمایاں پیش رفت ہوئی ہے۔ جیسا کہ F پروٹین کی کلیویج سائٹ کو NDV [31] کا بڑا وائرلیس تعین کرنے والا ثابت کیا گیا ہے، اس لیے کشیدہ NDV پیدا کرنے کا ایک آسان طریقہ یہ ہے کہ وائرلینٹ سٹرین میں F پروٹین کی کلیویج سائٹ کو وائرسی تناؤ کے ساتھ بدلنا ہے۔ دریں اثنا، یہ اطلاع دی گئی ہے کہ ایف پروٹین ایک اہم امیونوجنیٹک پروٹین ہے جو غیرجانبدارانہ اینٹی باڈی کو متاثر کر سکتا ہے تاکہ حفاظتی مرغیوں کو وائرس سے بھرپور NDV [32–34] کے چیلنج سے بچایا جا سکے۔ اس کے علاوہ، یہ اطلاع دی گئی کہ NDV کی کلیویج سائٹ حفاظتی مرغیوں میں مدافعتی ردعمل کو متاثر کر سکتی ہے [11]۔ اس مطالعہ میں، ہم نے تھرموسٹیبل HR09 کے F جین کو NDV genotype VII وائرلنٹ DT-2014 سٹرین کے F جین سے تبدیل کیا۔ اس دوران، DT-2014 کی کلیویج سائٹس کو بھی بالترتیب کلاس I اور کلاس II کے این ڈی وی سٹرین میں تبدیل کر دیا گیا تھا (شکل 1)۔

cistanche tubulosa - مدافعتی نظام کو بہتر بنانا

جیسا کہ توقع کی گئی ہے، وائرلینس کے تعین کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ دونوں کیمرک تھرموسٹیبل NDVs انتہائی کم ہیں (ٹیبل 1)۔ دریں اثنا، یہ بھی پایا گیا کہ دونوں chimeric NDVs نے اپنے والدین کے HR09 تناؤ (شکل 3A) میں یکساں نمو کے حرکیات دکھائے۔ چونکہ HN پروٹین وہ بڑا پروٹین تھا جو HR09 کی تھرموسٹیبلٹی کے لیے ذمہ دار تھا، دو chimeric NDVs نے پھر بھی اپنے والدین کے HR09 تناؤ (شکل 3B) کی طرح تھرموسٹیبلٹی کو برقرار رکھا۔ متعدد مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ جینی ٹائپ سے مماثل NDV ویکسین اعلی سطح پر مزاحیہ مدافعتی ردعمل پیدا کر سکتی ہے، اور ہیٹرولوگس ویکسین کے مقابلے میں وائرل شیڈنگ کو کم کرنے میں زیادہ کارگر ہے، اس کے باوجود جین ٹائپ سے مماثل اور ہیٹرولوگس دونوں ویکسین متاثرہ مرغیوں اور مرغیوں کی حفاظت کر سکتی ہیں۔ موت [35-37]۔ اس مطالعہ میں، HI اینٹی باڈی ٹائٹر کو 7-، 14-، اور 21-dpi پر ماپا گیا، امیونائزڈ ٹرین کے خلاف اینٹی باڈی ٹائٹر کے نتائج نے ظاہر کیا کہ rcHR میں کوئی خاص فرق نہیں تھا۔ {13}}CI، rcHR09-CII، اور La Sota strains (Figure 4A)، جب کہ HI antibody کے خلاف genotype VII ZJ1 سٹرین نے ظاہر کیا کہ دو تھرموسٹیبل chimeric NDVs نے لا سوٹا سٹرین سے نمایاں طور پر اونچے درجے کی حوصلہ افزائی کی، اور تینوں حفاظتی ٹیکوں والے NDVs میں سے، rcHR09-CI نے HI اینٹی باڈی (شکل 4B) کی اعلیٰ ترین سطح کی حوصلہ افزائی کی۔ یہ نتیجہ پچھلی رپورٹس سے مطابقت رکھتا تھا کہ ایف پروٹین کی کلیویج سائٹ مرغیوں میں ویکسین کے امیدواروں کے مدافعتی ردعمل کو متاثر کر سکتی ہے۔ جینی ٹائپ VII ZJ1 چیلنج کے تجربے سے پتہ چلتا ہے کہ تینوں حفاظتی گروپوں نے کنٹرول گروپ کے مقابلے وائرل شیڈنگ میں نمایاں کمی ظاہر کی، اور دو chimeric تھرموسٹیبل NDVs وائرل شیڈنگ کو لا سوٹا سٹرین (شکل 5) سے زیادہ مؤثر طریقے سے کم کر سکتے ہیں۔ بقا کے منحنی خطوط نے ظاہر کیا کہ تمام rcHR09-CI، rcHR09-CII، اور لا سوٹا سٹرینز ZJ1 سٹرین (شکل 6) کے چیلنج کے خلاف مکمل تحفظ فراہم کر سکتے ہیں۔ مشترکہ طور پر، ان اعداد و شمار سے پتہ چلتا ہے کہ اس مطالعہ میں بنائے گئے دو جین ٹائپ VII سے مماثل chimeric NDVs جینوٹائپ VII ZJ1 سٹرین کے چیلنج کے خلاف موثر تحفظ فراہم کر سکتے ہیں، اور لا سوٹا سٹرین سے زیادہ مؤثر طریقے سے وائرس کے بہاؤ کو کم کر سکتے ہیں۔ خلاصہ طور پر، اس مطالعے نے دو تھرموسٹیبل چائمرک NDV ویکسین کے امیدوار بنائے، جو تھرموسٹیبل جین ٹائپ VIII NDV وائرلنٹ HR09 سٹرین کو ریڑھ کی ہڈی کے طور پر استعمال کرتے ہیں اور اس کے F جین کو جین ٹائپ VII DT-2014 سٹرین کے ساتھ بدل دیتے ہیں۔ دریں اثنا، DT-2014 کی F پروٹین کلیویج سائٹ کو بالترتیب 112RRQRR↓F 117 سے 112ERQER↓L 117 اور 112GRQGR↓L 117 میں تبدیل کر دیا گیا تھا۔ دو chimeric NDVs HR09 کی تھرموسٹیبلٹی کو محفوظ رکھتے ہیں، اور MDT اور ICPI کے ذریعے وائرلینس ٹیسٹ بتاتے ہیں کہ وہ کامیابی سے کم ہو گئے ہیں۔ دونوں chimeric NDVs اعلی سطحی اینٹی باڈی ردعمل پیدا کر سکتے ہیں، وائرل شیڈنگ کو نمایاں طور پر کم کر سکتے ہیں، اور وائرل جین ٹائپ VII ZJ1 تناؤ کے چیلنج سے مکمل تحفظ فراہم کر سکتے ہیں۔

حوالہ جات

1. Dimitrov، KM؛ Abolnik، C.؛ Afonso, CL; البینا، ای. بہل، جے؛ برگ، ایم؛ برائنڈ، ایف ایکس؛ براؤن، آئی ایچ؛ چوئی، کے ایس؛ Chvala, I.; ET رحمہ اللہ تعالی. نیو کیسل بیماری کے وائرس کے لیے متحد فائیلوجنیٹک درجہ بندی کا نظام اور نظر ثانی شدہ نام کی تازہ کاری۔ متاثر کرنا۔ جینیٹ ارتقاء 2019، 74، 103917۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

2. ڈی لیو، او. Peeters, B. نیو کیسل بیماری کے وائرس کا مکمل نیوکلیوٹائڈ تسلسل: ذیلی خاندان Paramyxovirinae کے اندر ایک نئی نسل کے وجود کا ثبوت۔ جے جنرل ویرول 1999، 80 Pt 1، 131–136۔ [کراس ریف]

3. Czeglédi, A.; Ujvári, D.; سوموگی، ای. ویمن، ای. ورنر، او۔ Lomniczi, B. ایویئن پیرامائیکسوائرس سیرو ٹائپ 1 (نیو کیسل بیماری وائرس) اور ارتقائی مضمرات کا تیسرا جینوم سائز زمرہ۔ وائرس ریس 2006، 120، 36–48۔ [کراس ریف]

4. گنار، K.؛ داس، ایم. سنہا، ایس. کمار، ایس. نیو کیسل بیماری وائرس: موجودہ حیثیت اور ہماری سمجھ۔ وائرس ریس 2014، 184، 71–81۔ [کراس ریف]

5. کابلوف، ایم آر؛ علیکینا، TY؛ Yurchenko, KS; Glushchenko, AV; گنبن، کے وی؛ شیسٹوپالوف، AM؛ Gubanova، NV روس میں جنگلی بطخ اور ایک کبوتر سے الگ تھلگ دو نیو کیسل بیماری وائرس کے جینوم کے سلسلے مکمل۔ جینوم کا اعلان 2016، 4، ای01348-16۔ [کراس ریف]

6. رین، ایس. Xie, X.; وانگ، وائی؛ ٹونگ، ایل. گاو، ایکس؛ جیا، وائی۔ وانگ، ایچ. فین، ایم. Zhang, S.; Xiao, S.; ET رحمہ اللہ تعالی. چین میں ایک کبوتر سے الگ تھلگ کلاس I نیو کیسل بیماری کے وائرس کے تناؤ کی سالماتی خصوصیات۔ ایوین پاتھول۔ 2016، 45، 408–417۔ [کراس ریف]

7. موریسن، ٹی جی کی ساخت اور پیرامیکسو وائرس فیوژن پروٹین کا کام۔ بائیوکیم۔ بائیوفیس۔ ایکٹا 2003، 1614، 73–84۔ [کراس ریف]

8. بوسارٹ، کے این؛ فوسکو، ڈی ایل؛ Broder، CC Paramyxovirus اندراج۔ Adv. ختم میڈ. بائول 2013، 790، 95–127۔ [کراس ریف]

9. کولنز، ایم ایس؛ بشیر الدین، جے بی؛ الیگزینڈر، ڈی جے نے نیو کیسل بیماری کے وائرس کے فیوژن پروٹین کلیویج سائٹ پر امینو ایسڈ کی ترتیب کی کٹوتی جو کہ اینٹی جینیسیٹی اور روگجنکیت میں فرق ظاہر کرتی ہے۔ محراب ویرول۔ 1993، 128، 363–370۔ [کراس ریف]

10. پانڈا، اے. ہوانگ، Z. ایلان کماران، ایس. Rockemann، DD؛ سامل، نیو کیسل بیماری کے وائرس میں فیوژن پروٹین کلیویج سائٹ کا کردار۔ مائکروب پیتھوگ 2004، 36، 1-10۔ [کراس ریف]

11. کم، ایس ایچ؛ چن، زیڈ؛ یوشیدا، اے. پالدورائی، اے۔ Xiao, S.; سمل، ایس کے جینی ٹائپ سے مماثل ویکسین میں نیو کیسل بیماری کے وائرس کے فیوژن پروٹین کلیویج سائٹ کے سلسلے کی تشخیص۔ PLOS ONE 2017, 12, e0173965۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

12. منوہرن، وی کے؛ ورگیز، بی پی؛ پالدورائی، اے۔ سامل، ایس کے ایفیکٹ آف فیوژن پروٹین کلیویج سائٹ سیکوئنس آن جینی ٹائپ VII نیو کیسل بیماری وائرس ویکسین کی نسل پر۔ PLOS ONE 2018، 13، e0197253۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

13. کمار، ایس. نائک، بی؛ کولنز، پی ایل؛ سمل، SK مرغیوں میں ریکومبیننٹ ایویئن پیرامائیکسو وائرس ٹائپ 3 ویکٹر کا استعمال کرتے ہوئے حفاظتی قوت مدافعت میں نیو کیسل بیماری کے وائرس F اور HN پروٹین کی تشخیص۔ جے ویرول۔ 2011، 85، 6521–6534۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

14. Cao, Y.; لیو، Q. ژانگ، ایکس؛ Hu, H.; وو، وائی۔ ہیٹ ریزسٹنٹ نیو کیسل ڈیزیز وائرس سٹرین HR09 کا مکمل جینوم سیکوئنس۔ جینوم کا اعلان 2017، 5، ای01149-17۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

15. روآن، بی. ژانگ، ایکس؛ ژانگ، سی. ڈو، پی. مینگ، سی. گو، ایم؛ وو، وائی؛ HN پروٹین میں Cao, Y. باقیات 315 اور 369 نیو کیسل ڈیزیز وائرس کی تھرموسٹیبلٹی میں حصہ ڈالتے ہیں۔ سامنے والا۔ مائکروبیول 2020، 11، 560482۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

16. روآن، بی. لیو، Q. چن، وائی؛ نیو، ایکس؛ وانگ، ایکس؛ ژانگ، سی. گو، ایم؛ ژانگ، ایکس؛ Cao, Y.; Wu, Y. کم اور گرمی سے بچنے والے جین ٹائپ VIII نیو کیسل بیماری کے وائرس کے ویکسین امیدوار کی نسل اور تشخیص۔ پولٹ سائنس 2020، 99، 3437–3444۔ [کراس ریف]

17. ژانگ، ایکس۔ بو، زیڈ؛ مینگ، سی. چن، وائی؛ ژانگ، سی. Cao, Y.; Wu, Y. Recombinant Thermostable Newcastle Disease Virus کی نسل اور تشخیص H9N2 ایویئن انفلوئنزا وائرس کے HA کا اظہار۔ وائرس 2021، 13، 1606۔ [کراس ریف]

18. وین، جی؛ چن، سی. گو، جے؛ ژانگ، Z. شانگ، وائی. شاو، ایچ. Luo، Q.؛ یانگ، جے؛ وانگ، ایچ. وانگ، ایچ. ET رحمہ اللہ تعالی. ہیٹرولوگس جین کے اظہار کے لئے ایک ناول تھرموسٹیبل نیو کیسل بیماری وائرس ویکسین ویکٹر کی ترقی۔ جے جنرل ویرول 2015، 96، 1219–1228۔ [کراس ریف]

19. LaBarre, DD; لووی، آر جے ٹی سی آئی ڈی 50 اور پلاک اسیس سے وائرس ٹائٹر تخمینے کا حساب لگانے کے طریقوں میں بہتری۔ جے ویرول۔ طریقے 2001، 96، 107-126۔ [کراس ریف]

20. الیگزینڈر، ڈی جے نیو کیسل بیماری اور دیگر ایویئن پیرامائیکسو وائرس۔ Rev. Sci. ٹیک انٹر بند. ایپی زوٹ۔ 2000، 19، 443–462۔ [کراس ریف]

21. یو، ایکس ایچ؛ چینگ، جے ایل؛ زیو، جے؛ جن، جے ایچ؛ گانا، Y. زاؤ، جے؛ ژانگ، نیو کیسل ڈیزیز وائرس وائرولنس میں پولیمریز سے وابستہ پروٹین جینز کے GZ کردار۔ سامنے والا۔ مائکروبیول 2017، 8، 161۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

22. ماماری، جے؛ صف، ایف. گاو، Q. گارسیا-سسترے، اے۔ سٹین مین، RM؛ Palese, P.; نچنڈا، جی نیو کیسل بیماری کا وائرس ایک ڈینڈرٹک سیل سے ٹارگٹڈ ایچ آئی وی گیگ پروٹین کا اظہار کرتا ہے جو چوہوں میں ایک طاقتور گیگ مخصوص مدافعتی ردعمل پیدا کرتا ہے۔ جے ویرول۔ 2011، 85، 2235–2246۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

23. عید، AAM؛ حسین، اے. حسنین، او۔ ایلبکری، RM؛ ڈینس، آر. سعدین، J.-R.؛ عابدین، HMF؛ Chrzastek, K.; اقبال، ایم. نیو کیسل ڈیزیز جینوٹائپ VII مصر میں پولٹری اور جنگلی پرندوں میں پھیلاؤ۔ وائرس 2022، 14، 2244۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

24. حجازی، ج. طباطبائی زادہ، SE؛ توروغی، آر. فرزین، ایچ. Saffarian, P. ذیلی جینوٹائپ XIII.2.1 نیو کیسل بیماری کے وائرس کی پہلی شناخت اور خصوصیات ایران میں گھر کے پچھواڑے کے مرغیوں سے الگ تھلگ۔ ڈاکٹر میڈ. سائنس 2022، 8، 2521–2531۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

25. تسائی، ایچ جے؛ چانگ، کے ایچ؛ تسینگ، CH؛ ٹھنڈ، کلومیٹر؛ مینویل، آر جے؛ الیگزینڈر، DJ Antigenic اور 1969 اور 1996 کے درمیان تائیوان میں الگ تھلگ نیو کیسل بیماری کے وائرس کی جینو ٹائپیکل خصوصیات۔ ڈاکٹر۔ مائکروبیول 2004، 104، 19-30۔ [کراس ریف]

26. کپزنسکی، ڈی آر؛ کنگ، DJ کیلیفورنیا 2002 کے غیر ملکی نیو کیسل بیماری کے پھیلنے سے انتہائی خطرناک وائرس کے ساتھ چیلنج پر تجارتی طور پر دستیاب نیو کیسل بیماری کے وائرس کی ویکسین کے ساتھ واضح طبی بیماری کے خلاف مرغیوں کا تحفظ اور وائرل شیڈنگ کا عزم۔ ویکسین 2005، 23، 3424–3433۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

27. چو، ایس ایچ؛ کم، ایس جے؛ Kwon، HJ کوریا میں الگ تھلگ اینٹی جینک ویرینٹ نیو کیسل بیماری کے وائرس کا جینومک تسلسل۔ وائرس جینز 2007، 35، 293–302۔ [کراس ریف]

28. خان، ٹی اے؛ Rue, CA; رحمانی، ایس ایف؛ احمد، اے. واسیلینکو، جے ایل؛ ملر، پی جے؛ افونسو، سی ایل فائیلوجینیٹک اور نیو کیسل بیماری وائرس کی حیاتیاتی خصوصیات پاکستان سے الگ تھلگ ہیں۔ جے کلین مائکروبیول 2010، 48، 1892–1894۔ [کراس ریف]

29. لیو، وائی؛ سورج، سی. چی، ایم. وین، ایچ. زاؤ، ایل. گانا، Y. لیو، این. وانگ، Z. چین سے نیو کیسل بیماری کے وائرس کا جینیاتی خصوصیات اور فائیلوجنیٹک تجزیہ۔ متاثر کرنا۔ جینیٹ ارتقاء 2019، 75، 103958۔ [کراس ریف]

30. سیمنز، جی سی کوئنز لینڈ میں نیو کیسل بیماری کے وائرس کی تنہائی۔ آسٹ۔ ڈاکٹر جے 1967، 43، 29-30۔ [کراس ریف]

31. ٹویوڈا، ٹی۔ ساکاگوچی، ٹی. امائی، کے. Inocencio, NM; گوتوہ، بی؛ ہماگوچی، ایم؛ ناگائی، وائی۔ نیو کیسل بیماری کے وائرس کے وائرولنٹ اور وائرولنٹ تناؤ کے درمیان فیوژن گلائکوپروٹین کی کلیویج ایکٹیویشن سائٹ کا ساختی موازنہ۔ وائرولوجی 1987، 158، 242–247۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

32. ڈنگ، ایل. چن، پی. باو، ایکس؛ لی، اے. جیانگ، وائی؛ Hu, Y.; جی، جے؛ زاؤ، وائی؛ وانگ، بی؛ لیو، جے؛ ET رحمہ اللہ تعالی. نیو کیسل بیماری وائرس (NDV) F جین کا اظہار کرنے والے ریکومبیننٹ ڈک اینٹرائٹس وائرس مرغیوں کو مہلک NDV چیلنج سے بچاتے ہیں۔ ڈاکٹر مائکروبیول 2019، 232، 146–150۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

33. جیا، ڈبلیو. ژانگ، ایکس؛ وانگ، ایچ. ٹینگ، Q. زیو، جے؛ ژانگ، جی. ریکومبیننٹ ٹرکی ہرپیس وائرس ویکسین تناؤ کی تعمیر اور مدافعتی افادیت جو جین ٹائپ VII نیو کیسل بیماری وائرس کے فیوژن پروٹین کو ظاہر کرتی ہے۔ ڈاکٹر مائکروبیول 2022، 268، 109429۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

34. شاؤ، وائی. سن، جے؛ ہان، زیڈ؛ لیو، ایس ریکومبیننٹ متعدی لیرینگوٹریچائٹس وائرس جو نیو کیسل بیماری کے وائرس کا اظہار کرتا ہے ایف پروٹین مرغیوں کو متعدی لارینگوٹریچائٹس وائرس اور نیو کیسل بیماری وائرس چیلنج سے بچاتا ہے۔ ویکسین 2018، 36، 7975–7986۔ [کراس ریف]

35. ملر، پی جے؛ بادشاہ، DJ؛ Afonso, CL; ویکسین کی تشکیل میں استعمال ہونے والے مختلف جین ٹائپس کے نیو کیسل بیماری کے وائرس کے تناؤ کے درمیان سوریز، ڈی ایل اینٹی جینک اختلافات ایک خطرناک چیلنج کے بعد وائرل شیڈنگ کو متاثر کرتے ہیں۔ ویکسین 2007، 25، 7238–7246۔ [کراس ریف]

36. محمد، MH؛ عبدالعزیز، AM؛ کمار، ایس. الحبیب، ایم اے؛ Megahed, MM Effect of phylogenetic diversity of velogenic Newcastle disease وائرس چیلنج مرغیوں میں homologous and heterologous DNA ویکسینیشن کے بعد وائرس شیڈنگ پر۔ ایوین پاتھول۔ 2016، 45، 228–234۔ [کراس ریف]

37. واجد، الف۔ بشارت، اے۔ بی بی، ٹی. رحمانی، SF ویکسین کی تشکیل میں استعمال ہونے والے مختلف جین ٹائپس کے نیو کیسل بیماری کے وائرس کے تناؤ کے ساتھ ویکسینیشن کے بعد تحفظ اور وائرل شیڈنگ کا موازنہ۔ ٹراپ انیم صحت کی مصنوعات. 2018، 50، 1645–1651۔ [کراس ریف]