AAVs کے ساتھ Vivo جین تھراپی کی موجودہ کلینیکل ایپلی کیشنز حصہ 4

سپراکورائیڈل انجیکشن

suprachoroidal انجکشن آکولر AAV ڈیلیوری کا نسبتاً نیا موڈ ہے جو فی الحال طبی دلچسپی پیدا کر رہا ہے۔ Transscleralsuprachoroidal وائرل ڈیلیوری کا مقصد بغیر vitreoretinal سرجری کے موثر بیرونی ریٹنا ٹرانسڈکشن حاصل کرنا ہے۔

کورائیڈ انسانی آنکھ کا ایک بہت اہم حصہ ہے۔ یہ ریٹنا کے باہر واقع ہے اور آنکھ میں خون کی نالیوں اور بافتوں میں سے ایک ہے۔ کورائیڈ آنکھ کے عام کام میں اہم کردار ادا کرتا ہے اور حالیہ مطالعات سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ کورائیڈ کا ہماری یادداشت سے بھی گہرا تعلق ہے۔

سب سے پہلے، کورائیڈ آنکھ کے اہم اعضاء میں سے ایک ہے جو خون فراہم کرتا ہے، اور یہ ریٹینا کو بڑی مقدار میں آکسیجن اور غذائی اجزاء فراہم کر سکتا ہے۔ یہ آنکھ کے عام بصری فعل اور صحت کے لیے بہت ضروری ہے، اور یہ دماغ اور اعصابی نظام کے معمول کے کام کو برقرار رکھنے میں بھی مدد کرتا ہے۔

دوسری بات، جدید طبی تحقیق سے پتہ چلا ہے کہ کورائیڈ میں کچھ اہم مادے جیسے ویسکولر اینڈوتھیلیل گروتھ فیکٹر (VEGF) اعصابی خلیوں کی نشوونما اور بقا کے لیے انتہائی اہم ہیں۔ یہ مادے میٹابولزم کو فروغ دے سکتے ہیں، عصبی خلیوں کے درمیان تعلق کو فروغ دے سکتے ہیں، اور یادداشت اور علمی صلاحیت کو بڑھانے میں مدد کر سکتے ہیں۔

اس کے علاوہ، کچھ مطالعات سے یہ بھی پتہ چلا ہے کہ دماغی افعال پر کورائیڈ کا اثر صرف جسمانی پہلوؤں تک ہی محدود نہیں ہے، بلکہ اس کا تعلق جذباتی اور نفسیاتی حالتوں سے بھی ہو سکتا ہے۔ نفسیاتی تناؤ اور اضطراب کورائیڈ کو نقصان پہنچا سکتا ہے، جس سے یادداشت میں کمی جیسے مسائل پیدا ہوتے ہیں۔ ایک مثبت رویہ اور پر امید موڈ کورائیڈ کی صحت کو برقرار رکھنے اور یادداشت اور علمی صلاحیت کو بہتر بنانے میں مدد کرتا ہے۔

لہذا، کورائیڈ کی صحت کی حفاظت اور اسے برقرار رکھنا ہمارے جسم اور دماغ دونوں کے لیے ضروری ہے۔ اچھی زندگی کی عادات کو برقرار رکھنا، جیسے متوازن خوراک، مناسب نیند، اور اعتدال پسند ورزش، ہماری آنکھوں اور جسم کی صحت کو برقرار رکھنے میں ہماری مدد کر سکتی ہے۔ ایک ہی وقت میں، مثبت رویہ برقرار رکھنا اور ضرورت سے زیادہ تناؤ اور اضطراب سے بچنا بھی کورائیڈ کی حفاظت اور علمی صلاحیت کو فروغ دینے کے اہم ذریعہ ہیں۔

مختصراً، کورائیڈ کا ہماری صحت اور علمی صلاحیت سے گہرا تعلق ہے۔ یہ نہ صرف عام بصری افعال اور آنکھوں کی صحت میں اہم کردار ادا کرتا ہے بلکہ یادداشت اور علمی صلاحیت میں بھی اہم کردار ادا کرتا ہے۔ ہمیں اپنے جسمانی اور دماغی افعال کو بہتر بنانے کے لیے ہمیشہ اپنے کورائیڈ کی صحت کی حفاظت اور اسے برقرار رکھنے پر توجہ دینی چاہیے۔ اس سے ظاہر ہوتا ہے کہ ہمیں اپنی یادداشت کو بہتر کرنے کی ضرورت ہے۔ Cistanche یادداشت کو نمایاں طور پر بہتر بنا سکتا ہے کیونکہ Cistanche ایک روایتی چینی دوا ہے جس میں بہت سے منفرد اثرات ہیں، جن میں سے ایک یادداشت کو بہتر بنانا ہے۔ Cistanche کی افادیت اس میں موجود مختلف فعال اجزاء سے آتی ہے، بشمول tannic acid، polysaccharides، flavonoid glycosides، وغیرہ، جو دماغی صحت کو کئی طریقوں سے فروغ دے سکتے ہیں۔

شارٹ ٹرم میموری کو بہتر بنانے کا طریقہ جانیں پر کلک کریں۔

suprachoroidal اسپیس آنکھ کی choroid اور scleral wall کے درمیان ایک ممکنہ جگہ ہے جس تک جراحی کینولیشن 113 یا transscleralmicroneedles کے ذریعے رسائی حاصل کی جا سکتی ہے۔

114,115 چوہوں، خنزیروں، اور NHP میں موجود ڈیٹا RPE اور PRs دونوں کی سپراکورائیڈل AAV جین کی ترسیل کے ذریعے منتقلی کی معقولیت کی تجویز کرتا ہے، حالانکہ نتائج تمام مطالعات میں متضاد رہے ہیں۔

116-118 ایک حالیہ رپورٹ سے پتہ چلتا ہے کہ suprachoroidal AAV کی ترسیل نے عارضی اظہار پیدا کیا جو بنیادی طور پر RPE اور سوزش خلیوں کی مقامی دراندازی تک محدود تھا۔

اس کے برعکس، جب ایک ہی ناول ڈیوائس کو AAV8 (سوپراکورائیڈل اسپیس سے رسائی جس کے بعد برچ کی جھلی کو قابل توسیع مائکروکینولا کے ساتھ منتقل کیا جاتا ہے) کی فراہمی کے لیے استعمال کیا جاتا تھا، تو RPE اور PRs میں فوکل ٹرانسجن اظہار اور کم سے کم انٹراوکولر سوزش کا مشاہدہ کیا گیا تھا۔

117 ان آلات کا سیل پر مبنی علاج کے طبی اور طبی مطالعات میں جائزہ لیا گیا ہے اور اب AAV کی فراہمی کے لیے غور کیا جا رہا ہے۔ اس نقطہ نظر کو طبی میدان میں منتقل کرنے سے پہلے طریقہ کار کو بہتر بنانے اور متعلقہ مقامی اور نظامی مدافعتی ردعمل کی تحقیقات کے لیے اضافی کام کی ضرورت ہے۔

آئی وی آئی

IVI اب تک سب سے کم ناگوار ترسیل کا راستہ ہے جو IRD کے علاج کے لیے زیر غور ہے اور یہ ممکنہ طور پر وٹریکٹومی اور سرجیکل سبریٹائنل لاتعلقی کی وجہ سے ہونے والے اضافی مکینیکل نقصان سے موروثی طور پر پتلی اور انحطاط پذیر ریٹینا کی حفاظت کر سکتا ہے۔

تاہم، اس کے لیے ایک AAV کیپسڈ کی ضرورت ہوتی ہے جو کانچ سے ریٹینا کے ذریعے "گھسنے" کے قابل ہو۔ IVI کا ایک فائدہ یہ ہے کہ اس طریقہ کار کو طبی ترتیب میں انجام دیا جا سکتا ہے، اس طرح مریضوں کی بڑی آبادی کے لیے جین کے علاج کی رسائی میں اضافہ ہوتا ہے۔

تاہم، محدود طبی ڈیٹا 88,89 اور NHP اسٹڈیز120 جو فی الحال دستیاب کیپسڈز کا استعمال کرتے ہوئے اس بات کی نشاندہی کرتے ہیں کہ IVI AAVs بہت سی رکاوٹوں کا مقابلہ کرتے ہیں جو کہ جین کے اظہار کو کم کر سکتے ہیں اور مریضوں کی اکثریت میں علاج کے فائدے کو روک سکتے ہیں (یعنی کانچ، اندرونی محدود جھلی میں کمزوری/غیر جانبداری)۔

کلینیکل ٹیسٹنگ میں موجودہ AAVs میکولر "رنگ،" مولر گلیا میں ریٹینل گینگلیئن سیلز (RGCs) کی منتقلی میں ثالثی کرتے ہیں، اور بڑی خون کی نالیوں، کچھ فوول کونز، اور سلیری باڈی کے غیر نیورونل سیلز سے متصل ویرل PRsadad۔

121-124 اس طرح، یہ حیرت کی بات نہیں ہے کہ حیاتیاتی سرگرمی کو ظاہر کرنے کے لیے صرف IVI پر مبنی کلینیکل ٹرائلز نے اب تک اندرونی ریٹنا میں RGCs کو نشانہ بنایا ہے تاکہ ان خلیوں کو براہ راست فائدہ پہنچایا جا سکے (ND4-لیبر موروثی آپٹک نیوروپتی[LHON] 125,126 یا انہیں اینٹی وی ای جی ایف ریجنٹ (گیلے AMD) کے اخراج کے لیے ڈپو کے طور پر استعمال کریں۔

88 اس بات کا کوئی طبی ثبوت نہیں ہے کہ IVI کے ذریعے فراہم کردہ AAV ویکٹر علاج کے ردعمل میں ثالثی کے لیے کافی سطحوں پر بیرونی ریٹنا خلیوں (PRs/RPE) کو منتقل کر سکتا ہے۔

انٹرا وٹریلی ڈیلیور کردہ AAV8-RS1 XLRS مریضوں میں ریٹنا کی ساخت/ فنکشن کو بحال کرنے میں ناکام رہا (ClinicalTrials.gov: NCT02317887)۔ 89 RS1protein کی خفیہ نوعیت کے باوجود، Rs1h ناک آؤٹ چوہوں میں کئے گئے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ AAV-میڈیا علاج جب حاصل کیا جاتا ہے۔ RS1 PRs کے اندر تیار کیا جاتا ہے۔

127 AAV8 برقرار ریٹنا کے IVI کے بعد PRs کو مؤثر طریقے سے منتقل نہیں کرتا ہے۔ اس مقدمے میں کم از کم جزوی طور پر RS1 سے PRs کے غیر موثر ہدف کی وجہ سے تھا۔ مدافعتی ردعمل نے بھی اہم کردار ادا کیا۔

کانچ اتنا استحقاق یافتہ نہیں ہے جتنا کہ سبریٹینل اسپیس۔ 129 جب IVI بمقابلہ SRI کے بعد AAV کی بایو ڈسٹری بیوشن کا موازنہ کریں تو IVI کا نتیجہ نسبتاً زیادہ سیسٹیمیٹک ایکسپوژر ہوتا ہے۔ 8-RS1 آکولر سوزش کے ساتھ ساتھ AAV کے خلاف نظامی اینٹی باڈیز سے وابستہ تھا جو خوراک سے متعلق فیشن میں دونوں میں اضافہ ہوا۔

89 دو کلینیکل ٹرائلز جن میں AAV2-کی بنیاد پر ویکٹر LHON کو مائٹوکونڈریل ND4 (ClinicalTrials.gov: NCT02161380 اور NCT02064569) میں تبدیلیوں کی وجہ سے ایڈریس کرنے کے لیے IVI کا استعمال کرتے ہوئے ہائیینٹی باڈی ٹائٹرز اور اینٹیرئیر یوویائٹس کے مریضوں کو دستاویزی شکل دی گئی، اسی طرح کچھ مریضوں میں، جن کا علاج کچھ 1231 میں ہوا۔ گیلے AMD (ClinicalTrials.gov:NCT01024998) کے لیے گھلنشیل VEGF نیوٹرلائزنگ پروٹین (AAV2-sFLT01) (2 1010 vg) کے AAV2 ڈرائیونگ ایکسپریشن کی اعلی خوراک IVI (ClinicalTrials.gov:NCT01024998) میں پائیریکسیا اور انٹراوکولر سوزش کے ردعمل کا مشاہدہ کیا گیا ہے۔ NHP سیفٹی اسٹڈیز۔

134Adverum Biotechnologies کے پاس ایک اینٹی VEGF پروڈکٹ AAV.7m8capsid ہے جو کلینیکل ٹیسٹنگ میں aflibercept کے لیے جین لے کر جاتا ہے جسے IVI کے ذریعے فراہم کیا جا رہا ہے۔ پہلی جماعت (6 1011 vg) نے 6/6 مریضوں کے ساتھ حوصلہ افزا افادیت کا مظاہرہ کیا جنہیں افلیبرسیپٹ پوسٹ ٹریٹمنٹ کے ریسکیو انجیکشن، BCVA کی دیکھ بھال، مرکزی ریٹنا کی موٹائی میں بحالی یا کمی، اور 15 ماہ تک پائیداری کی ضرورت نہیں تھی۔

تاہم، اس گروہ کو بار بار یوویائٹس کا سامنا کرنا پڑا جس کے لیے اضافی سٹیرایڈ علاج (ٹاپیکل ڈراپس) کی ضرورت تھی، 135 جس کے نتیجے میں CMC کا طبی جائزہ زیر التواء ہے۔

136 ٹرائل کے دوبارہ شروع ہونے پر، بعد کے ساتھیوں کا علاج ویکٹر کی کم خوراک (2 1011 vg) کے ساتھ کیا گیا، اور پروفیلیکسس سٹیرایڈ ریگیمین میں تبدیلیاں لاگو کی گئیں، جس میں دو ایک ہی خوراک کی سطح کے ساتھیوں کے درمیان پری ٹریٹمنٹ اورل بمقابلہ ٹاپیکل سٹیرایڈ ٹریٹمنٹ بھی شامل ہے۔

کم خوراک علاج کے بعد کم سوزش کے ساتھ منسلک دکھائی دیتی ہے لیکن 5/15 مریضوں کے ساتھ بھی کم موثر تھی جنہیں ریسکیو انجیکشن کی ضرورت ہوتی ہے۔

دلچسپی کی بات یہ ہے کہ مشاہدہ یہ ہے کہ ویکٹر کی حوصلہ افزائی یوویائٹس ٹاپیکل سٹیرایڈ ڈراپس کے لیے جوابدہ دکھائی دیتی ہے، اور درحقیقت، تجرباتی ڈفلوپریڈنیٹ کے ساتھ علاج کیے جانے والے گروہ نے کم سوزش کے بعد کے علاج کے ساتھ بہتر کارکردگی کا مظاہرہ کیا جس کے مقابلے میں اسی خوراک کی سطح کے گروہ کے ساتھ تجربہ کار زبانی prednisone کے ساتھ علاج کیا گیا تھا۔

حالیہ طبی اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ مزاحیہ استثنیٰ IVI کے ذریعے فراہم کردہ AAV کے لیے نقل و حمل کو محدود کرنے میں کردار ادا کر سکتا ہے، حالانکہ SRI کے ساتھ ایسا نہیں مانا جاتا ہے۔

گیلے AMD (ClinicalTrials.gov: NCT01024998) کے علاج کے لیے IVI AAV2-sFLT01 کے نتائج سے AAV2 اور sFLT01 کی سطحوں کو نیوٹرلائزنگ اینٹی باڈیز (NAbs) کے درمیان مضبوط منفی تعلق کا پتہ چلتا ہے۔

88 یہ پہلا طبی مطالعہ تھا جس نے آنکھ میں AAV-mediatedtransgene اظہار کو محدود کرنے میں سیرم NAbs کے ممکنہ کردار کو اجاگر کیا۔ ایک علیحدہ مطالعہ میں، AAV- ثالثی ٹرانسجین اظہار کو سیرم اور کانچ کے مکاک دونوں میں NAbs کی موجودگی کے ساتھ الٹا تعلق بتایا گیا ہے، جو بعد میں ایک مضبوط ارتباط ظاہر کرتا ہے۔

120 جیسا کہ اینٹی وی ای جی ایف اے اے وی علاج پروگریسو ڈائیبیٹک ریٹینوپیتھی (پی ڈی آر) اور ذیابیطس میکولر ایڈیما (ڈی ایم ای) کے کلینیکل ٹرائلز کا محور ہے، دونوں عوارض، جن کی خصوصیات ریٹینل بلڈ بیریئر میں رکاوٹیں ہیں اور یہ خدشات کہ این اے بی ایس تھراپی کو محدود کر دے گا، بڑھ گئے ہیں، اس وجہ سے کہ اکثریت AAV کے لیے آبادی کا سیرپوزیٹو ہے۔

ان وجوہات کی بناء پر، AAV کیپسڈ تیار کرنے کے لیے کوششیں جاری ہیں جو غیرجانبداری کو "فرار" کرتے ہیں، اس طرح ایسے مریضوں کی تعداد میں اضافہ ہوتا ہے جو IVI فراہم کردہ جین علاج کے لیے قابل عمل ہوں گے۔

112 PR کی ثالثی کی بیماری کے مؤثر طریقے سے علاج کرنے کے لیے تھیوٹر ریٹنا کی کافی منتقلی IVI AAV کے ذریعے غیر جانبداری یا سوزش کی عدم موجودگی میں حاصل کی جا سکتی ہے یا نہیں، یہ دیکھنا باقی ہے اور ممکنہ طور پر ناول AAVcapsids اور/یا immunosuppressive regimens کی ترقی پر منحصر ہوگا۔

جیسا کہ ریٹنا جین تھراپی تیار ہوئی ہے، ہم سمجھ گئے ہیں کہ "ایک ہی سائز کے تمام فٹ" نقطہ نظر کام نہیں کرے گا۔ بالکل اسی طرح جیسے دوسرے جین تھراپی اہداف (مثلاً، ہیموفیلیا) کے ساتھ، ہم یہ سیکھ رہے ہیں کہ جانوروں کے ماڈلز میں تصوراتی مطالعات کے کامیاب ثبوت کا ترجمہ کرنے کے لیے مزید تحقیقات کی ضرورت ہوگی جس کا مقصد ان رکاوٹوں کی شناخت اور ان پر قابو پانا ہے جو انسانی آنکھ کی ساخت اور فزیالوجی سے جڑی ہوتی ہیں اور بعض صورتوں میں، ہدف مریض آبادی کی مخصوص بیماری کی حالت۔

خوش قسمتی سے، ہمارے اختیار میں ٹولز (مثلاً، AAV capsids)، ترسیل کے طریقے، اور تشخیصی ٹیکنالوجیز کا ایک مسلسل بہتر کرنے والا سیٹ ہے جو اس کوشش کو فعال کرنے کا امکان ہے۔

اس کے نسبتاً مدافعتی استحقاق اور دوسرے اعضاء کی نسبت آنکھ کو نشانہ بنانے کے لیے ضروری ویکٹر کی بہت کم خوراکوں کے ساتھ مل کر، آکولر جین تھراپی فیلڈ میں بہت سی اضافی کامیابیوں کا امکان ہے۔

ہیموفیلیا جین تھراپی: تصور کے ثبوت سے آگے بڑھنا

ہیموفیلیا جین کی منتقلی میں کامیابی واضح طور پر پہنچ گئی ہے۔ جیسا کہ جدول 2 اور 3 میں بیان کیا گیا ہے، 20 کلینیکل ٹرائلز قریب آ رہے ہیں، جن میں مٹھی بھر اہم ٹرائلز اور پہلی زیر التواء لائسنسنگ درخواست (Harrington et al., 2020, WFH ورچوئل سمٹ، کانفرنس) شامل ہیں۔ کوایگولیشن عوامل VIII (FVIII) اور IX (FIX) کے ہیپاٹوسیٹ اظہار کے لئے نظامی طور پر زیر انتظام AAV ویکٹر کا استعمال۔

144 اگرچہ AAV کی کوششیں غالب ہیں، یا تو سیسٹیمیٹک انفیوژن 157,158 یا ہیماٹوپوائٹک اسٹیم سیلز159–161 یا inducedpluripotent اسٹیم سیلز162 کے ex vivo transduction کے لیے lentiviral vectors کا تعاقب ابتدائی طور پر یا فیز کلینکل ٹرائل کے طور پر کیا جا رہا ہے۔

156 اگرچہ AAV کلینیکل ٹرائل کی کوششوں نے بار بار تصور کی کامیابیوں کا ثبوت دیا ہے، لیکن بقایا سوالات باقی ہیں جو ہیموفیلیا جین تھراپی کی صلاحیت کو سمجھنے کے لیے ضروری ہیں۔

اس نکتے کو حال ہی میں بائیو مارین فارماسیوٹیکل برائے ہیموفیلیا اے (HA) ویکٹر کی طرف سے جمع کرائی گئی ہیموفیلیجین تھراپی پروڈکٹ کے لیے پہلی بایولوجکس لائسنسنگ درخواست کے ایف ڈی اے کے انکار کے ذریعے اجاگر کیا گیا تھا۔ جہاں نتائج نے بہت سے لوگوں کو حیران کر دیا، ایف ڈی اے کے درخواست کردہ اضافی ڈیٹا کا مقصد ابھی تک اس کے ٹرائل سے مخصوص غیر واضح مشاہدات کو حل کرنا ہے (مثلاً اظہار کے استحکام کے بارے میں سوالات 163,164) جو کہ بلاشبہ ہیموفیلیا جین تھراپی کی تمام کوششوں کے لیے اہم ہیں۔

مزید وسیع طور پر، انہیموفیلیا سے سیکھے گئے بہت سے اسباق کا اطلاق تمام سیسٹیمیٹک AAV جین تھراپی کی کوششوں پر ہوتا ہے۔ HA اور ہیموفیلیا B (HB) X سے منسلک مونوجینک عوارض ہیں جو کہ جمنے FVIII یاFIX.165,166 کے کام میں کمی/غیر حاضری کے نتیجے میں ہوتے ہیں جبکہ FIX endogenously synthecythepace میں ہوتا ہے۔ ,FVIII بنیادی طور پر جگر کے سائنوسائیڈل اینڈوتھیلیل سیلز میں ترکیب کیا جاتا ہے، اس طرح کہ FVIII طبی آزمائشوں میں ایکٹوپک طور پر ظاہر ہوتا ہے۔

167–170ہیموفیلیا کے مریضوں کو جوڑوں میں کلاسیکی طور پر بار بار، بے ساختہ، یا صدمے کی وجہ سے خون بہنے کا تجربہ ہوتا ہے، جس کے نتیجے میں آرتھرو پیتھی ناکارہ ہوجاتی ہے۔ خون بہنے کا نتیجہ پلازما FVIII/FIX سرگرمی (FVIII:C/FIX:C) کے ساتھ جڑتا ہے، اس طرح کہ شدید ایچ اے/ایچ بی (FVIII/FIX: C) میں اچانک نکسیر واقع ہوتی ہے۔<1% of normal), less commonly in moderate HA/HB (FVIII/FIX: C 1%–5% of normal), and typically only following trauma in mild HA/HB (FVIII/FIX: C >5%–40% نارمل)۔

171 اس طرح، FVIII/FIX اظہار کی ایک معمولی مقدار کا بڑا طبی فائدہ ہوتا ہے۔ ہیموفیلیا کا علاج انٹراوینس انزائم ریپلیسمنٹ تھراپی (ERT) سے کیا جاتا ہے جو خون بہنے کی اورون کی طلب کو روکنے کے لیے پروفیلیکٹک طریقے سے فراہم کی جاتی ہے۔

172,173 اگرچہ مؤثر ہے، ERT تقریباً 40% عدم تعمیل کی شرح سے محدود ہے، لاگت R$200،000سالانہ ہے، اور آرتھرو پیتھی کو بڑھاتا ہے۔172–175

For more information:1950477648nn@gmail.com