ذیابیطس چوہوں کے ماڈل میں گردے، پھیپھڑوں اور دل ACE2 پر Ramipril کا اثر
Mar 28, 2022
خلاصہپس منظر: شدید ایکیوٹ ریسپائریٹری سنڈروم کورونا وائرس 2 (SARS-CoV-2) موجودہ کورونا وائرس بیماری 2019 (COVID-19) کے لیے ذمہ دار ہے۔ اس انفیکشن میں متاثر ہونے والا اہم عضو پھیپھڑا ہے اور وائرس ٹارگٹ سیلز میں داخل ہونے کے لیے انجیوٹینسن کنورٹنگ انزائم 2 (ACE2) کو ریسیپٹر کے طور پر استعمال کرتا ہے۔ اس تناظر میں، renin-angiotensin system (RAAS) بلاکرز کے استعمال کے حوالے سے ایک تنازعہ کھڑا ہوا، کیونکہ یہ دوائیں کچھ ٹشوز میں ACE2 کے اظہار کو بڑھا سکتی ہیں اور ممکنہ طور پر SARS-CoV{11}} کے انفیکشن کا خطرہ بڑھا سکتی ہیں۔ یہ خاص طور پر ذیابیطس کے مریضوں کے متعلق ہے کیونکہ ذیابیطس COVID-19 کے لیے ایک خطرے کا عنصر ہے۔ طریقے: 12-ہفتہ پرانے ذیابیطس کے چوہوں (db/db) کا علاج 8 ہفتوں تک ریمپریل یا گاڑی کے کنٹرول سے کیا گیا۔ Nondiabetic db/m چوہوں کو بطور کنٹرول شامل کیا گیا تھا۔ پھیپھڑوں میں ACE2 اظہار اور سرگرمی کا مطالعہ کیا گیا،گردےاور ان جانوروں کے دل۔ نتائج:گردہACE2 کی سرگرمی db/db چوہوں میں db/m کے مقابلے میں بڑھی تھی (143.2 فیصد ± 23 فیصد بمقابلہ 100 فیصد ± 22.3 فیصد، p=0.004)، جبکہ رامپریل کا کوئی خاص اثر نہیں ہوا۔ پھیپھڑوں میں، ACE2 میں کوئی فرق نہیں پایا گیا جب db/db چوہوں کا db/m سے موازنہ کیا جائے اور ramipril کا بھی کوئی خاص اثر نہیں ہوا۔ دل میں، ذیابیطس نے ACE2 کی سرگرمی کو کم کیا (83 فیصد ± 16.8 فیصد، بمقابلہ 100 فیصد ± 23.1 فیصد p=0.02)، اور ramipril نے ACE2 میں نمایاں اضافہ کیا (83 فیصد ± 16.8 فیصد بمقابلہ 98.2 فیصد ± 15 فیصد، p=0.04)۔ نتیجہ: ٹائپ 2 ذیابیطس کے ماؤس ماڈل میں، رامپریل کا ACE2 کی سرگرمی پر کوئی خاص اثر نہیں پڑا۔گردہیا پھیپھڑوں میں؟ لہٰذا، اس بات کا امکان نہیں ہے کہ RAAS بلاکرز یا کم از کم انجیوٹینسن کو تبدیل کرنے والے انزائم انحیبیٹرز ACE2 میں اضافے کے ذریعے SARS-CoV-2 انفیکشن کے خطرے کو بڑھاتے ہیں۔
مطلوبہ الفاظ:COVID-19; ذیابیطس؛ RAAS ناکہ بندی؛ پھیپھڑا؛ گردوں کی بیماریوں؛ گردہ
CISTANCHE گردے/ گردوں کی بیماری کو بہتر کرے گا۔
تعارفچین کے شہر ووہان میں دسمبر 2019 میں شروع ہونے والے شدید ایکیوٹ ریسپائریٹری سنڈروم کورونا وائرس 2 (SARS-CoV-2) کی وجہ سے پھیلنے والی وبا نے دنیا بھر میں سینیٹری بحران کو جنم دیا ہے۔ پھیپھڑے کورونا وائرس کی بیماری میں متاثر ہونے والا اہم عضو ہے-19 (COVID-19)۔ SARS-CoV-2 ٹارگٹ سیلز (Hoffmann et al., 2020) میں داخل ہونے کے لیے ٹرانس میبرن پروٹین اینجیوٹینسن کنورٹنگ انزائم 2 (ACE2) کو ایک رسیپٹرز کے طور پر استعمال کرتا ہے، ایک خصوصیت جو SARS-CoV (وائرس جو کہ 2002 میں سارس کی وبا کا سبب بنی) (لی ایٹ ال۔، 2003)۔ ACE2 ایک carboxypeptidase ہے جو angiotensin-I (Ang-I) اور angiotensin-II (Ang-II) کو angiotensin-1-9 (Ang-1-9) اور angiotensin-1-7 (Ang{{23) میں تبدیل کرتا ہے۔ }}) بالترتیب۔ یہ انزائم رینن-انجیوٹینسن-الڈوسٹیرون سسٹم (RAAS) کے متبادل راستے کا حصہ ہے۔ اس کے ایکٹیویشن کے فی سی ای ویسوڈیلیٹر اثرات ہوتے ہیں اور RAAS (vasoconstrictor) کے کلاسیکی بازو کو منفی انداز میں منظم کرتا ہے (Obukhov et al.، 2020; Romero et al.، 2015)۔ ACE2 کا وسیع پیمانے پر قربت کے نلی نما خلیوں میں اظہار کیا جاتا ہے۔گردہ(لیلی وغیرہ، 2004)۔ ایک حد تک اس کا اظہار پھیپھڑوں میں بھی ہوتا ہے (نیموسائٹس ٹائپ 2 میں) (Hamming et al., 2004; Serfozo et al., 2020) اور دل (cardiomyocytes میں) (Oudit et al., 2009)۔ 2002 میں پہلی SARS-CoV وبائی مرض کے ذریعے فراہم کردہ بصیرت نے انکشاف کیا کہ SARS-CoV انفیکشن پھیپھڑوں میں ACE2 اظہار میں کمی کا باعث بنا۔ پھیپھڑوں کی شدید چوٹ میں، ACE2 کی کمی کا تعلق بافتوں کے بڑھے ہوئے نقصان سے ہے، جس کی وجہ RAAS (ACE/Ang-II/Angiotensin-II قسم 1 ریسیپٹر ایکسس) کے واسکانسٹریکٹر بازو کے زیادہ فعال ہونے سے ہو سکتی ہے (Kuba et al. ، 2006)۔ لہذا، ایسا لگتا ہے کہ SARS-CoV-2 انفیکشن سے متعلق پھیپھڑوں کی چوٹ کی شدت میں RAAS اہم کردار ادا کرتا ہے۔ مزید، RAAS کی ڈی ریگولیشن کو کلاسیکی طور پر ذیابیطس میں دیکھا جاتا ہے، اور ACE2 اظہار میں تبدیلیوں کی نشاندہی کی گئی ہے۔گردہاور ذیابیطس کے مریضوں کا دل (ریخ ایٹ ال۔، 2008)۔ میٹا تجزیہ کے اعداد و شمار سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ SARS-CoV-2 سے متاثرہ مریضوں میں ذیابیطس کا زیادہ پھیلاؤ نہیں ہوتا ہے، حالانکہ ذیابیطس کے مریضوں میں SARS-CoV-2 انفیکشن کی شدید شکلوں اور بدتر نتائج کا شکار ہونے کا خطرہ بڑھ جاتا ہے۔ (Fadini et al.، 2020)۔ ٹائپ 2 ذیابیطس کے تقریباً 40 فیصد مریض ہائی بلڈ پریشر ہیں ("ذیابیطس کے مطالعہ میں ہائی بلڈ پریشر (ایچ ڈی ایس): I. نئے پیش آنے والے ٹائپ 2 ذیابیطس کے مریضوں میں ہائی بلڈ پریشر کا پھیلاؤ اور قلبی اور ذیابیطس کی پیچیدگیوں کے خطرے والے عوامل کے ساتھ وابستگی،" 1993) RAAS بلاکرز کے ساتھ علاج کیا جاتا ہے: انجیوٹینسن کنورٹنگ انزائم انحیبیٹرز (ACEis) یا انجیوٹینسن-II ٹائپ 1 ریسیپٹر بلاکرز (ARBs)۔ اس کے علاوہ، یہ دوائیں غیر ذیابیطس ہائی بلڈ پریشر اور پروٹینوریا کے علاج کے لیے بھی وسیع پیمانے پر استعمال ہوتی ہیں۔گردوں کی بیماریوں(García-Carro et al.، 2019)۔
COVID-19 وبائی بیماری کی پہلی لہر کے دوران، RAAS بلاکرز کے استعمال کے حوالے سے ایک تنازعہ کھڑا ہوا کیونکہ تجرباتی ماڈلز میں کچھ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ ان ادویات کے ساتھ علاج سے کارڈیک ٹشو میں ACE2 اظہار میں اضافہ ہوا ہے (Ferrario et al.، 2005) ؛ اشیاما وغیرہ، 2004؛ اوکرانزا وغیرہ، 2006) اور اس میںگردوںvasculature (Soler et al.، 2009)۔ اس طبی ثبوت کی وجہ سے، یہ تجویز کیا گیا ہے کہ RAAS بلاکرز کے ساتھ علاج SARS-CoV-2 انفیکشن کی حساسیت کو بڑھا سکتا ہے جس سے ایک تضاد پیدا ہوتا ہے کیونکہ ACE2 کی بڑھتی ہوئی سطح کو عام طور پر ٹشو سے حفاظتی سمجھا جاتا ہے (Aleksova et al.، 2020) ؛ Sparks et al., 2020; Wang et al., 2020)۔ مذکورہ بالا مطالعات کے نتائج کے باوجود (Ferrario et al. اسی طرح کے تجرباتی ماڈل استعمال کرنے والے دوسرے مصنفین نے RAAS بلاکرز (Burchill et al.، 2012؛ Burrell et al.، 2005) کے ذریعہ ACE2 ماڈیولیشن کا مشاہدہ نہیں کیا ہے۔ مزید برآں، پھیپھڑوں کے ACE2 ماڈیولیشن پر RAAS بلاکرز کے اثرات کا شاذ و نادر ہی جائزہ لیا گیا ہے۔ ایک حالیہ رپورٹ میں، Wysocki اور ساتھیوں نے ACE2 ماڈیولیشن کو بیان کیا۔گردہاور چوہوں کے پھیپھڑوں (C57BLKS/J) کا علاج RAAS بلاکرز (telmisatan یا captopril) سے کیا گیا (Wysocki et al.، 2020)۔ یہاں ہم ACEi (ramipril) کے اثرات کا مطالعہ کرتے ہیں۔گردہٹائپ 2 ذیابیطس کے ماؤس ماڈل میں پھیپھڑے اور دل ACE2۔
CISTANCHE گردے/ گردوں کے انفیکشن کو بہتر بنائے گا۔
2. مواد اور طریقہ
2.1.جانوروں کے طریقہ کارآٹھ ہفتے پرانے مرد لیپٹین ریسیپٹر کی کمی والے ذیابیطس کے چوہے (db/db) اور غیر ذیابیطس heterozygote littermates (db/plus ) چارلس ریور (BKS.Cg-Dock7m plus/plus Lepr"J.Strain Code: 607) سے خریدے گئے تھے۔ .چوہوں کو زیادہ سے زیادہ 4 فی پنجرے کے گروپوں میں رکھا گیا تھا جس میں 12 گھنٹے روشنی: 12 گھنٹے کے تاریک چکر کے تحت چوہوں کو باقاعدہ چوہوں تک رسائی حاصل تھی۔ db/db (n =7) کے گروپ کا علاج 8 ہفتوں تک پینے کے پانی (20 mg/L) میں ملا کر رامپریل (8 mg/kg/day) سے کیا گیا۔ گاڑی db/db (n=7 )اور db/m (n=7) کو بطور کنٹرول استعمال کیا گیا۔ علاج سے پہلے اور بعد میں وزن اور خون میں گلوکوز اور بلڈ پریشر کی دو ہفتہ وار نگرانی کی گئی (اضافی طریقے دیکھیں)۔ علاج کی مدت کے بعد، جانوروں کو سوڈیم کے تحت قربان کیا گیا۔ پینٹو باربیٹل اینستھیزیا۔پھر چوہوں کو ٹھنڈے پی بی ایس 1x سے پرفیوز کیا گیا اور کارڈیک پنکچر کے ذریعے پورا خون حاصل کیا گیا۔ خون کے نمونے ٹیوبوں میں کلوٹنگ ایکٹیویٹر جیل (41.1378.005، سارسٹیڈ، جرمنی) کے ساتھ جمع کیے گئے۔ erum اس کے بعد،گردہ،دل اور پھیپھڑوں کو ہٹا دیا گیا، مائع نائٹروجن میں اسنیپ فریز کیا گیا اور استعمال تک -80 ڈگری سینٹی گریڈ پر برقرار رکھا گیا۔ اس کے علاوہ، کا ایک حصہگردہاور دل کو ہسٹولوجیکل تجزیوں کے لیے 10 فیصد فارملین اور پیرافین ایمبیڈ کیا گیا تھا۔ تجرباتی پروٹوکول کو وال ڈی ہیبرون ریسرچ انسٹی ٹیوٹ (47.18 CEEA) کی جانوروں کے تجربات کی اخلاقی کمیٹیوں نے منظور کیا تھا۔ تمام طریقہ کار کو تحفظ کے لیے یورپی کونسل کی ہدایات کے فریم ورک میں Generalitat de Catalunya کے رہنما خطوط کے مطابق انجام دیا گیا تھا۔ تحقیق اور دیگر سائنسی مقاصد کے لیے استعمال ہونے والے جانوروں کی دیکھ بھال (2010/63/EU)۔
2.2 ACE2 تجزیہACE2 جین اور پروٹین کے اظہار کے ساتھ ساتھ ACE2 سرگرمی کا تجزیہ کیا گیا۔گردہ، پھیپھڑوں اور دل کے عرق۔ سیرم میں، صرف ACE2 سرگرمی کا اندازہ کیا گیا تھا۔ ACE2 جین کے اظہار کی پیمائش RT-qPCR سے کی گئی تھی اور A△Cr طریقہ ہائپو-xanthine Phosphoribosyltransferase 1 (HPRT) کو ہاؤس کیپنگ جین کے طور پر استعمال کرتے ہوئے رشتہ دار مقدار کے لیے لاگو کیا گیا تھا۔ ACE2 پروٹین کی سطح کا اندازہ مغربی دھبے کے ذریعے کیا گیا تھا اور ACE2 سرگرمی کا تعین فلوروسینٹ انزیمیٹک پرکھ کے ذریعے ACE2-کونچڈ فلوروجینک سبسٹریٹ (Mca-Ala-Pro-Lys (Dnp)-OH: Enzo Life-Sciences) کے ذریعے کیا گیا تھا۔ ماضی میں (ریرا وغیرہ۔ 2016)۔ اس کے علاوہ، میںگردہاور دل میں ہم نے امیونو ہسٹو کیمسٹری کے ذریعے ACE2 کا پتہ لگایا۔ طریقہ کار کو ضمنی طریقوں میں تفصیل سے بیان کیا گیا ہے۔
2.3۔ شماریاتی تجزیہکوانٹل-کوانٹل (کیو کیو) پلاٹ کے ذریعہ پیش گوئی کی گئی نارمل تقسیم کے ساتھ ہمارے ڈیٹا کا موازنہ کرکے معمول کی تقسیم کی جانچ کی گئی اور نارملٹی ٹیسٹ (شاپیرو-ولک اور/یا کولموگوروف-سمرنوف) سے تصدیق کی گئی۔ گروپوں کا موازنہ کیا گیا (db/m بمقابلہ db/db) اور db/db بمقابلہ db/db پلس رامپری) ویلچ ٹی-ٹیسٹ کے ذریعے جب نارملٹی کو پورا کیا گیا تھا یا مان-وٹنی ٹیسٹ کے ذریعے جب ڈیٹا کی غیر معمولی تقسیم کے بعد۔ اعداد و شمار کو الواووس کا مطلب ± معیاری انحراف (SD) کے طور پر ظاہر کیا جاتا ہے۔ موازنہ کے اعتماد کا اندازہ لگانے کے لیے p-values تفصیلی ہیں اور جب p 0.05 سے کم یا اس کے برابر ہو تو شماریاتی اہمیت پر غور کیا جاتا ہے۔ تمام شماریاتی تجزیے اور گراف گراف پیڈ پرزم ورژن 8.2.1 کے ساتھ کیے گئے تھے۔
3. نتائج
3.1 Ramipril db/db چوہوں میں بلڈ پریشر کو کم کرتا ہے۔موجودہ مطالعہ کے حتمی مقاصد کا اندازہ لگانا تھا کہ (1) ڈائی بیٹک سیاق و سباق میں تبدیلی کیسے آتی ہے۔گردوں, پلمونری اور کارڈیک ACE2(SARS-CoV-2 رسیپٹر ہدف کے خلیات کو متاثر کرنے کے لیے)، اور (2)کیا ACEi کا علاج ذیابیطس میں ACE2 رویے کو تبدیل کر سکتا ہے۔ اس مقصد کے لیے،12-ہفتہ پرانے ذیابیطس کے چوہوں (db/db) کا 8 ہفتوں کے دوران ramipril (8 mg/kg/day) ایک ACEi سے علاج کیا گیا۔ گاڑیاں db/db اور غیر ذیابیطس چوہوں (db/m) کو بطور کنٹرول شامل کیا گیا تھا۔ جیسا کہ توقع کی گئی تھی، تمام ذیابیطس والے چوہوں نے، جن کا علاج ریمپریل اور گاڑی دونوں کے ساتھ کیا گیا، تجربہ کے اختتام پر todb/m چوہوں (ٹیبل 1) کے مقابلے میں ہائپرگلیسیمیا اور بڑھے ہوئے وزن کو ظاہر کیا۔ ہماری تجرباتی ترتیب میں، db/db چوہوں میں دکھایا گیا ہے کہ کنٹرول db/m چوہوں کے مقابلے میں سسٹولک اور diastolic بلڈ پریشر میں کمی آئی ہے (ٹیبل 1 دیکھیں)۔ جیسا کہ توقع کی گئی تھی، 8 ہفتوں کے لیے رامپریل کی انتظامیہ نے گاڑی کے ڈی بی/ڈی بی اور/یا ڈی بی/ایم گروپ (ٹیبل 1) کے مقابلے میں سسٹولک بلڈ پریشر میں نمایاں کمی کی جو یہ ظاہر کرتی ہے کہ ریمپریل کا علاج موثر تھا۔
3.2 ACE2 db/db چوہوں کے گردے میں بڑھتا ہے جسے ramipril کے ذریعے تبدیل نہیں کیا گیا تھا۔ہم نے ACE2 کی ماڈیولیشن کا مطالعہ کیا۔گردہdb/m سے، گاڑی db/db اور db/db چوہوں کا علاج ramipril کے ساتھ دو ap-proaches کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا: (1) ACE2 جین کا اظہار qPCR کے ذریعے اور (2) ACE2 ac-tivity پرکھ فلوروسینٹ سبسٹریٹ کا استعمال کرتے ہوئے۔ گاڑی کے db/db چوہوں نے db/m(1۔{9}}11 ± 0.16 بمقابلہ 1582 ± 0.18، p کے مقابلے میں گردوں کے ACE2 جین کے اظہار میں اضافہ دکھایا۔<0.0001), this="" effect="">
ریمپریل انتظامیہ کے ساتھ الٹ (1.280 ± 0.18، p=0.01) (تصویر 1، اے)۔ رینل ACE2 کی سرگرمی (100 فیصد ± 14.2 فیصد بمقابلہ 114 فیصد ± 31.9 فیصد، p=0.2) نے بھی گاڑی کے db/db میں اضافہ کیا، تاہم رامپریل نے اپنی سرگرمی میں کوئی تبدیلی نہیں کی (114 فیصد ± 31.9 فیصد بمقابلہ 109.3 فیصد ± 18.6 فیصد) (تصویر 1D))۔ جھلی سے افزودہ پروٹین کے نچوڑ میں، یہ واضح ہو گیا کہ db/db جانوروں نے ACE2 سرگرمی کو db/m کے مقابلے میں بڑھایا ہے (100 فیصد ± 22.3 فیصد بمقابلہ 143.2 فیصد ± 23.1 فیصد، p=0.004) اور ایک بار پھر، ramipril نے ACE2 سرگرمی میں ترمیم نہیں کی۔گردہجھلی سے افزودہ عرق (تصویر 2A)۔ میںگردہٹشو سیکشنز، ACE2 ایکسپریشن کو نلی نما خلیوں کے برش بارڈر میں مقامی بنایا گیا تھا اور db/m (تصویر 3) کے مقابلے میں db/db میں داغ زیادہ نمایاں تھے۔ ہم نے ACE2 کی تقسیم میں کوئی بڑی تبدیلی نہیں نوٹ کی۔گردہعلاج نہ کیے جانے والے db/db (تصویر 3) کے مقابلے میں ramipril سے علاج شدہ جانوروں کا۔
3.3 Ramipril نے db/db چوہوں میں پلمونری ACE2 میں ترمیم نہیں کی پھیپھڑوں میں، ہم نے وہی طریقہ کار انجام دیا جیسا کہگردہACE2 کا مطالعہ کرنا۔ ہمیں ACE2 جین اظہار (تصویر 1، B) کے حوالے سے db/m اور گاڑی db/db کے درمیان کوئی فرق نہیں ملا جو بنیادی طور پر ACE2 mRNA اظہار (0.97 ± {{6}) میں اعلی تغیر سے متعلق ہے۔ }.8 بمقابلہ 1۔{10}}7 ± 0.71، p=0.63)۔ ہم پھیپھڑوں اور ACE2 کی سرگرمی کے درمیان فرق تلاش کرنے کے قابل نہیں تھے (نہ ہی کل پروٹین کے نچوڑ میں یا جھلی سے افزودہ عرقوں میں) (تصویر 1E اور 2B، اور ضمنی شکل 1 اور 2، بالترتیب)۔ مزید برآں، db/db کے پھیپھڑوں میں، ramipril کے علاج سے ACE2 جین کے اظہار اور سرگرمی میں کوئی تبدیلی نہیں آئی (تصویر 1B اور E، تصویر 2B اور ضمنی شکل 1 اور 2)۔
3.4 ACE2 d/d کے دل میں کم ہوتا ہے اور ramipril ACE2 کی سطح کو معمول پر لاتا ہے۔ہم نے دل میں ACE2 کا بھی تجزیہ کیا کارڈیک ٹشو میں، ACE2 میں db/db بمقابلہ db/m دونوں میں نمایاں کمی واقع ہوئی، mRNA کی سطح (1.01±0.12ws {{8} }}.84±0.16،p=0.05)(تصویر 1C)اورACE2 ایکٹیویٹی （100 فیصد ±23.1 فیصد ws 83 فیصد ±16.8 فیصد ,p=0.02）（臣g.1F） جھلی سے افزودہ عرقوں میں، ACE2 کی سرگرمی db/db میں بھی نمایاں طور پر کم ہوئی جب db/m کے مقابلے میں (Fig.2O. Ramipril علاج نے ACE2 سرگرمی کو مشاہدہ شدہ db/m چوہوں میں نمایاں طور پر بحال کیا (83 فیصد ±16.8 فیصد v 98.2 فیصد) فیصد ±15 فیصد ,p=0.04)(تصویر 1E)۔تاہم، رامپریل دل (تصویر، آئی سی) میں ACE2 جین کے اظہار کو تبدیل کرنے کے قابل نہیں تھا، مزید، ہم نے کارڈیک ٹشو میں ACE2 کی تقسیم کا اندازہ کیا جہاں ACE2 کچھ علاقوں میں ACE2 داغ کے بڑھنے کے ساتھ داغ دھبے کی تقسیم کو ظاہر کیا۔ ہم نے نوٹ کیا کہ db/m کے مقابلے میں داغ کی شدت db/db میں ہلکی تھی۔ رامیپریل داغ کی شدت کو بحال کرتا دکھائی دیتا ہے (Hig 3)۔
3.5 سیرم ACE2 کی سرگرمی db/db میں بڑھی ہے اور اس میں ramipril کے ذریعے کوئی تبدیلی نہیں کی گئی تھی۔آخر میں، ہم نے ACE2 کی سرگرمی کو db/m، db/db اور db/db کے سیرم کے نمونوں میں ماپا جس کا علاج ramipril سے کیا گیا۔ db/m (99.9 فیصد ± 29.3 فیصد ws 146 فیصد ± 57.2 فیصد، p= 0.03) کے مقابلے میں سیرم ACE2 کی سرگرمی db/db میں نمایاں طور پر بڑھی اور رامپریل نے اس اثر کو کم نہیں کیا (146 فیصد ±57.2 فیصد بمقابلہ 128 فیصد ±55.7 فیصد ,p= 0.5)(تصویر 4)۔
4. بحث
SARS-CoV-2 کی وجہ سے موجودہ وبائی بیماری نے COVID-19 مریضوں میں RAAS بلاکرز کے استعمال سے متعلق ایک تنازعہ کھڑا کر دیا ہے۔ قلبی مریضوں میں ACEi یا ARBs کے استعمال کے واضح فوائد کے باوجود (Fegan et al, 2000; Romero et al., 2015) یہ تجویز کیا گیا ہے کہ یہ دوائیں ACE2 کے اظہار کو بڑھا سکتی ہیں، جو SARS-CoV کے لیے رسیپٹر ہے{{ 7}}، اور اس وجہ سے COVID کے خطرے اور شدت کو بڑھاتا ہے-19 (Aleksova et al,2020; Sparls et al,2020; Wang et al,2020)۔
موجودہ مطالعہ کے ساتھ ہمارا مقصد اس تنازعہ پر روشنی ڈالنا تھا اور اس مقصد کے لیے ہم نے 8 ہفتوں تک ریمپریل کے ساتھ علاج کیے گئے ذیابیطس کے چوہوں کے ماڈل (db/db) کے گردے، پھیپھڑوں، دل اور سیرم کے نمونوں میں ACE2 کا تجزیہ کیا۔ ہم نے RAAS ناکہ بندی کے اثر کا تعین کرنے کے لیے ذیابیطس کے ماڈل کا استعمال کیا کیونکہ ذیابیطس کا ماحول COVID-19 مریضوں میں خراب تشخیص کے لیے سمندری خطرے کا عنصر ہے (Fadini et al,2020; Williamson et al,2020)۔ ہمیں db/db چوہوں میں گردے کے ACE2 جین کے اظہار اور جھلی کے نچوڑ میں سرگرمی پائی گئی (بالترتیب انجیر 1A اور 2A)۔ پچھلے مطالعات میں db/db ذیابیطس کے چوہوں (Wysocki et al, 2006; Yeet al, 2004,2006) کے ساتھ ساتھ ذیابیطس کے دیگر ماؤس ماڈلز (Riera et al,2016; Wysocki et al, 2006) میں نلی نما رینل ACE2 اضافہ کا بھی مظاہرہ کیا گیا ہے۔ )۔ Ramipril جین اظہار کی سطح پر ACE2 کے اضافے کو واپس کرنے میں کامیاب رہا، یہ تجویز کرتا ہے کہ اس کی انتظامیہ گردے کے اندر ذیابیطس کے مضر اثرات کے خلاف حفاظتی ہے۔ گردے کے بارے میں ہمارے نتائج Wysocki اور collaborators (Wysocldi et al.2020) کی حالیہ رپورٹ میں شائع ہونے والے نتائج کے برعکس ہیں جیسا کہ انہوں نے C57BLKS/J چوہوں میں RAAS ناکہ بندی کو پروٹین کے اندرونی ہونے کے ساتھ ساتھ ACE2 اظہار کی کمی کو فروغ دیا ہے۔ db/db چوہوں کے ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے ہمارے مطالعے میں، ہم نے گردے میں ramiprilreducedACE2 سرگرمی نہیں پائی (Figs. 1Dand2A) اور نہ ہی ہم نے پروٹین انٹرنلائزیشن (تصویر، 3) کا مشاہدہ کیا۔ اس کے باوجود، ہم نے پایا کہ ریمپریل علاج نے ڈی بی/ڈی بی (تصویر، 1 اے) میں ACE2 جین کے اظہار میں کمی کی حوصلہ افزائی کی۔ پروٹین کی ترکیب اور انحطاط کے درمیان مختلف اوقات کی وجہ سے جین اور پروٹین کا اظہار ممکن نہیں ہے، لیکن ACE2 جین ایکسپریشن (Fg.1A) میں حاصل کردہ نتائج تجویز کرتے ہیں کہ RAAS ناکہ بندی گردے میں ACE2 کی کمی کو فروغ دے گی جیسا کہ Wysocki اور ساتھیوں نے تجویز کیا ہے۔ Wysocldi et al.2020)۔ ہمارا نقطہ نظر، Wysocki اور cols.(Wysocldi et al.2020) کے مطالعہ کے برعکس، ذیابیطس کے مریضوں کی نقل کرتا ہے جو عام طور پر ذیابیطس نیفروپیتھی (Garcia-Carro et al..2019) کے بڑھنے میں تاخیر کے لیے RAAS بلاکرز حاصل کرتے ہیں۔ ان لائن، Batchu et al کی ایک حالیہ وارک۔ کوموربڈ ذیابیطس چوہوں کے گردے اور پھیپھڑوں میں واضح طور پر دکھایا گیا ہے (عمر بڑھنے، زیادہ چکنائی والی خوراک، اور اسٹریپٹوزوٹوسن سے متاثرہ ذیابیطس) کہ ACE2 کو اپ گریڈ کیا گیا ہے۔ تاہم، RAAS ناکہ بندی اس میں ترمیم کرنے کے قابل نہیں تھی (Batchu et al.2020)۔ اس طرح. کم از کم گردے کے لیے۔ ہمارے نتائج اس خیال کو برقرار نہیں رکھتے ہیں کہ RAAS ناکہ بندی ACE2 اوور ایکسپریشن کے حق میں ہوگی۔ انسانوں میں، دو آزاد مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ ذیابیطس کے مریضوں میں نلی نما ACE2 جین اور پروٹین کے اظہار میں کمی واقع ہوئی ہے۔
صحت مند افراد کے مقابلے میں نیفروپیتھی (Mizuiri et al,2008; Reich et al,2008)، حالانکہ ایک اور مصنف کوئی فرق تلاش کرنے کے قابل نہیں تھا(Lelyet al.2004)۔ انسانوں میں RAAS ناکہ بندی کے اثر کے بارے میں، کچھ شواہد موجود ہیں کہ یہ گردے میں ACE2 اظہار کو متاثر کرتا ہے (لیلی ایٹ ال، 2004؛ ریخ ایٹ ال، 2008)۔
ہم نے پھیپھڑوں اور دل کے بافتوں میں ACE2 کا بھی تجزیہ کیا جہاں ACE2 کی موجودگی گردے کی نسبت بہت کم ہے (ضمنی شکل S1 اور S2)۔ پھیپھڑوں کے حوالے سے، ہم نے ACE2geneexpression (Fig.1) میں اعلیٰ انفرادی تغیرات حاصل کیے جس کی جزوی طور پر اس حقیقت سے وضاحت کی جا سکتی ہے کہ پھیپھڑوں میں ACE2 کا اظہار بہت کم ہے اور نیوموسائٹس ٹائپ 2 (Ziegler et al,2020) تک محدود ہے۔ ہم نے صوتی نتائج حاصل کیے جب ACE2 کا اندازہ انزائم سرگرمی کی پیمائش سے لگایا گیا تھا۔ پھیپھڑوں کے ACE2 کی سرگرمی کنٹرول db/m اور ذیابیطس db/db کے درمیان یکساں تھی اور گاڑی db/db (Fgs.IE اور 2B) کے مقابلے میں رامپریل کے ساتھ علاج کیے جانے والے db/db میں کوئی فرق نہیں دیکھا گیا۔ اگرچہ پھیپھڑوں میں ACE2 کا جانوروں کے ماڈلز میں وسیع پیمانے پر مطالعہ نہیں کیا گیا ہے، لیکن یہ بتایا گیا ہے کہ NOD چوہوں اور ان کے غیر ذیابیطس والے لیٹر میٹس کے پھیپھڑوں میں ACE2 کی سرگرمی ایک جیسی ہوتی ہے (Roca-Ho et al.2017)۔ اس کے برعکس، اسٹریپٹوزوٹوسن اور زیادہ چکنائی والی خوراک سے متاثرہ ذیابیطس کے چوہوں نے غیر ذیابیطس چوہوں کے مقابلے میں پھیپھڑوں کی ACE2 سرگرمی کو ظاہر کیا (Batchu et al.,2020)۔ پلمونری ACE2 پر RAAS ناکہ بندی کے اثر کے بارے میں، ہمارے نتائج Wysockiet al اور Batchu et al کی رپورٹس کے مطابق ہیں۔ کیونکہ جب چوہوں کا ARBs یا ACEi (Batchu et al.2020؛ Wysocldi et al.2020) کے ساتھ علاج کیا گیا تو انہیں ACE2 کی سرگرمی سمیت کوئی فرق نہیں ملا۔ طویل مدتی ACEi علاج جبکہ ARBs (Milne et al,2020) کے ذریعہ اس میں کوئی تبدیلی نہیں کی گئی، حالانکہ ACE2 پروٹین کی سطح یا سرگرمی سے متعلق کوئی ڈیٹا دستیاب نہیں تھا۔
db/m (بالترتیب Fig.1Cand F) کے مقابلے میں db/db مائیک میں کارڈیک ACE2 جین کے اظہار اور سرگرمی میں نمایاں کمی واقع ہوئی تھی۔ اس صورت میں، ramipril کے ساتھ علاج سے ACE2 کی سرگرمی میں اضافہ ہوا ہے (تصویر 1F۔ یہ نتائج بتاتے ہیں۔ کہ db/db ماڈل میں ذیابیطس کا پروفائل کارڈیک ACE2 کی کمی کو فروغ دیتا ہے جو RAAS ناکہ بندی کے تحت بحال ہوتا ہے۔ دل میں ACE2 کی سرگرمی میں کمی نہیں دکھاتی ہے جب ان کے غیر ذیابیطس لیٹر میٹس (Patel et al,2012; Roca-Ho et al.,2017) کے مقابلے میں۔ اس کے باوجود، وٹرو تجربات سے پتہ چلتا ہے کہ گلوکوز کارڈیک ویسکولر ہموار پٹھوں کے خلیوں میں ACE2 کو براہ راست کم کر سکتا ہے (لاورینٹیف اور ملک) ، 2009) دل میں ACE2 ماڈلن کے ساتھ ساتھ RAAS بلاک کا اثر۔ کیڈ کا زیادہ تر مطالعہ چوہے کے ماڈلز اور انسانوں دونوں میں مایوکارڈیل انفکشن (MI) میں کیا گیا ہے۔ ایک MI چوہا ماڈل میں، Ocaranza اور ساتھیوں نے ظاہر کیا کہ MI اور RAAS ناکہ بندی میں دل کی ACE2 سرگرمی میں کمی واقع ہوئی تھی۔
enalapril کے ساتھ اسے الٹ دیا (Ocaranz et al, 2006)، اسی طرح جو ہمارے مطالعہ میں ہوتا ہے۔ تاہم، اسی طرح کے MI چوہوں کے ماڈلز میں کی گئی دیگر مطالعات ایک جیسے نتائج پر نہیں پہنچی ہیں (Burrell et al.2005; Ishiyama et al,2004)۔ انسانوں میں، MI(Burrell et al,2005) کے بعد دل میں ACE2 میں اضافہ ہوتا دکھائی دیتا ہے۔ اور idiopathic اور اسکیمک کارڈیو مایوپیتھی میں (Goulter et al, 2004)۔ ہمارے علم کے مطابق، کارڈیک ACE2 اظہار پر RAAS ناکہ بندی کے اثر کا انسانوں میں مطالعہ نہیں کیا گیا ہے۔ آخر میں، ہم نے سیرم میں ACE2 سرگرمی کا تجزیہ کیا۔ ACE2 بافتوں کے خلیوں کی سیل جھلیوں اور حل پذیر (sACE2) دونوں میں پایا جا سکتا ہے۔ جس کی ابتدا ADAM میٹالوپیپٹائڈیس ڈومین 17(ADAM17)(Lambert et al,2005) کے ذریعے جھلی سے منسلک ACE2 کے بہانے سے ہوتی ہے۔ ACE2 صرف اعضاء کی سطح پر SARS-CoV-2 کے لیے ایک رسیپٹر کے طور پر کام کرتا ہے لیکن یہ تجویز کیا گیا ہے کہ sACE2 ڈیکو کے طور پر کام کر کے وائرس کے انفیکشن کی صلاحیت کو کم کر سکتا ہے (Bale et al,2020; Monteil et al, 2020؛ Wysocl et al,2021)، اگرچہ کم sACE2 خون کی سطح شاید ہی یہ فائدہ مند اثر پیدا کرے گی۔ اس کے باوجود، یہ جاننا دلچسپ ہے کہ کیا سیرم ACE2 کی سطح ذیابیطس یا RAAS بلاکرز میں ماڈیول کی جاتی ہے (یا نہیں) asit ٹشو ACE2 میں تغیرات کا اشارہ ہو سکتا ہے، اس لحاظ سے، یہ فرض کیا گیا ہے کہ ADAM17 ایک اہم انسدادی کردار ادا کر سکتا ہے۔ سیرین پروٹیز ٹرانس میمبرین سیرین پروٹیز 2 (TMPRSS2) کے ساتھ ACE2 کلیویج کا مقابلہ کرتے ہوئے، SARS-CoV-2 انٹرنلائزیشن (Palau et al.2020) کے لیے ایک بنیادی پروٹیز۔ ہم نے پایا کہ سیرم ACE2 کو db/db میں بڑھایا گیا جب db/m کے مقابلے میں اور ramipril نے اس اثر کو واپس نہیں کیا (Fg,.3)۔ دیگر مطالعات میں ذیابیطس کے ماؤس ماڈلز میں خون کے ACE2 کے اضافے کو بھی بیان کیا گیا ہے (Riera et al.2016; Roca-Hoet al,2017;
Wysocki et al.,2013) اور ٹائپ 1 ذیابیطس کے مریضوں میں (Soro-Paavonen et al.2012) اگرچہ RAAS ناکہ بندی کے اثرات کا وسیع پیمانے پر مطالعہ نہیں کیا گیا ہے۔ انسانوں میں اس سلسلے میں، ثبوت یکساں نہیں ہیں۔ Soro-Paavonen اور cols کے مطالعہ میں۔ (Soro-Paavonen et al,2012)، ACEi تھراپی نے مرد اور خواتین دونوں مریضوں میں ACE2 خون کی سطح میں اضافہ کیا اور صرف خواتین میں ARB علاج۔ اس کے برعکس، ایک حالیہ پری پرنٹ میں، خون کے ACE2 میں معمولی کمی ARB علاج کے ساتھ نوٹ کی گئی تھی لیکن ACEi نے کوئی تبدیلی نہیں کی (Emilsson et al, 2020)۔
CISTANCHE گردے/ گردوں کے درد کو بہتر کرے گا۔
ذیابیطس کے مختلف جانوروں کے ماڈلز اور انسانوں میں ACE2 ماڈلن کے حوالے سے مذکورہ بالا تضادات کی وجہ سے، اس سوال کا قطعی جواب حاصل کرنا مشکل ہے: "کیا RAAS کی ناکہ بندی ACE2 کی حد سے زیادہ اظہار کی حوصلہ افزائی کرتی ہے؟"۔ ایک مجموعی جائزہ میں، ہمارے اعداد و شمار کو دیکھتے ہوئے، اور دوسرے مصنفین کے شواہد کے مطابق، یہ تاثر ہے کہ ذیابیطس کا سیاق و سباق زیادہ تر صورتوں میں گردے اور دل دونوں میں ACE2 کے اظہار کو تبدیل کرتا ہے (ماڈل یا نوع کے لحاظ سے نیچے یا اپ گریڈ کرتا ہے۔ ) اور، یہ کہ RAAS ناکہ بندی:(1) گردے ACE2 کو کم کرتا ہے یا اس میں ترمیم نہیں کرتا (دونوں تجرباتی ماڈلز میں اور غیر انسانی)، (2) پھیپھڑوں کے ACE2 میں ترمیم نہیں کرتا (اگرچہ یہاں مزید ثبوت کی ضرورت ہے)، (3) میں ACE2 اظہار کو فروغ دیتا ہے۔ دل (زیادہ تر تجرباتی ماڈلز میں) اور (4) خون کے ACE2 کی سطح پر متغیر اثرات رکھتا ہے (جو کہ گروہ اور RAAS بلاکر کی قسم پر منحصر ہے)۔ لہٰذا، طیارہ کی بنائی گئی بنیاد "RAAS ناکہ بندی ACE2 کو زیادہ متاثر کرتی ہے اور اس کے نتیجے میں۔ SARS-CoV-2 انفیکشن کا خطرہ بڑھاتا ہے" دل، گردے، اور زیادہ اہم بات یہ ہے کہ پھیپھڑوں کے لیے درست نہیں رہتا . اگرچہ، یہ مفروضہ ایک اہم نقطہ ہے کیونکہ یہ ACE2 اظہار کے ضابطے کا صرف ایک سادہ نقطہ نظر فراہم کرتا ہے اور اس بات کو ذہن میں نہیں رکھتا کہ ACE2 زیادہ تر سیاق و سباق میں حفاظتی ہے (Batlle et al,2012; Oudit et al,2010; Zhong et al یہ ثابت کیا گیا ہے کہ ACE2 پھیپھڑوں کی چوٹ کے تجرباتی ماڈلز میں فائدہ مند ہے جو H7N9 فلو وائرس (Yang et al,2015) یا LPS (Ye and Liu,2020) سے متاثر ہوتا ہے۔ پھیپھڑوں کی چوٹ والے چوہوں کے ماڈل میں، SARS -CoV انفیکشن نے پھیپھڑوں کے ACE2 اظہار کو کم کیا لیکن لاسارٹن کے ساتھ علاج نے پھیپھڑوں کی چوٹ کو کم کیا اور ACE2 کے اظہار میں ایک ہی وقت میں اضافہ ہوا (Kuba et al, 2005) یہ تجویز کرتا ہے کہ ACE2 وائرل انفیکشن کو حل کرنے کے لیے فائدہ مند ہے۔ مزید برآں، سوزشی سیاق و سباق جیسے سائٹوکائن طوفان جو کہ کوروڈ-19 مریضوں کے ذیلی سیٹ میں ہوتا ہے (مہتا ایٹ ال، 2020) بھی ACE2 اظہار کو منظم کر سکتا ہے حالانکہ یہ واضح نہیں ہے کہ کس سمت میں ہے (de Lang et al.,2006) ؛ گیلے ال۔2020)۔کسی بھی صورت میں، SARS-CoV-2 انفیکشن کے دوران ACE2 کی اپ گریجولیشن اور کمی دونوں ممکنہ طور پر نقصان دہ ہو سکتی ہیں جو تجویز کرتی ہے کہ ACE2 کی سطح ایک توازن کی حد میں ہونی چاہیے (South et al.2020)۔
آخر میں، یہاں ہم ذیابیطس کے چوہوں کے ماڈل میں یہ ظاہر کرتے ہیں کہ ACE روکنا صرف ذیابیطس کے دل میں ACE2 اپ گریجولیشن پیدا کرتا ہے، جہاں ACE2 ذیابیطس کے مقابلے میں ثانوی طور پر کم ہوتا ہے۔ یہ گردے یا پھیپھڑوں میں نہیں ہوتا ہے جس سے اس خیال کو تقویت ملتی ہے کہ زیادہ تر ٹشوز میں RAAS ناکہ بندی ACE2 اظہار کی سطح میں اضافہ نہیں کرتی ہے۔ یہاں تک کہ جو نتائج ہم نے دل میں حاصل کیے ہیں، یہ بات قابل بحث ہے کہ آیا ARB یا ACEi کے ساتھ علاج سے COVID-19 انفیکشن میں اضافہ اور اس کی تشخیص خراب ہونے کا حقیقی خطرہ ہے۔ RAAS ناکہ بندی کے واضح قلبی فوائد ہیں (Fegan et al,2000; Romero et al,2015)، جبکہ اس بات کا امکان نہیں ہے کہ ACE2 کی کم سطح COVID-19 ریزولوشن کے لیے فائدہ مند ہو۔
