سیپسس کے ساتھ چوہوں میں پھیپھڑوں، جگر اور thymus کے فنکشنل نقصان پر Cistanche کے اثرات

خلاصہ

مقصد: Cistanche extract کے شدید پر اثرات کا مطالعہ کرناجگرسیپٹک جھٹکے کے ساتھ چوہوں میں پھیپھڑوں، اور thymus کے فنکشن کو پہنچنے والے نقصان، اور سیپٹک جھٹکے کے علاج کو دریافت کرنا۔

طریقے: سیپٹک شاک ماڈل کی نقل تیار کرنے کے لیے سیکل لیگیشن اینڈ پرفوریشن (CLP) کا استعمال کریں، پیتھولوجیکل تبدیلیوں کا مشاہدہ کریں۔جگر، پھیپھڑوں، اور تھائمس ٹشو، اور شدید جگر، پھیپھڑوں، اور تھائمس کی چوٹ کے حیاتیاتی اشارے اور اس کے اثر و رسوخ کا تعین کرتے ہیں۔Cistancheنکالنا

نتائج: چوہوں میں CLP کے بعد، mitochondrial state III، P/O تناسب، اور عام نمکین گروپ میں ہیپاٹوسائٹس کی سانس کی کنٹرول کی شرح نمایاں طور پر کم ہو گئی تھی، اور mitochondrial membrane sodium-potassium calcium-magnesium-ATPase سرگرمی نمایاں طور پر کم ہو گئی تھی۔ پھیپھڑوں کے گیلے سے خشک وزن کا تناسب، الیوولر مواصلات پارگمیتا انڈیکس، پلمونری کیپلیری پارگمیتا، اور پھیپھڑوں کے ٹشووں کے میلونڈیلڈہائڈ میں نمایاں اضافہ ہوا، اور سپر آکسائیڈ کے اخراج میں نمایاں کمی واقع ہوئی۔ thymocyte apoptosis اور DNA کے ٹکڑے ہونے کی فیصد میں نمایاں اضافہ ہوا۔ میںCistancheایڈمنسٹریشن گروپ، مندرجہ بالا اشارے عام نمکین گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر بہتر ہوئے، مصنوعی سرجری گروپ کی سطح تک پہنچنا یا اس کے قریب جانا۔

نتیجہ:Cistancheشدید پر ایک اچھا حفاظتی اثر ہےجگر، پھیپھڑوں، اورthymus کی چوٹسیپٹک جھٹکا چوہوں میں. اس کا طریقہ کار بافتوں کو آکسیجن فری ریڈیکلز کے نقصان کو کم کرنا، خلیے کی جھلی کے کام کو بہتر بنانا، اور جسم کے مدافعتی فعل اور تناؤ کی صلاحیت کو بہتر بنانا ہو سکتا ہے۔

مطلوبہ الفاظ:

پودوں کے عرق / فارماسولوجیCistancheڈیزرٹیکولا/فارماکولوجی سیپسس/پیچیدگیوں کا جھٹکا، سیپسس/چائنیز میڈیسن تھراپی چوہوں۔

اس مطالعہ کے اثرات کا مشاہدہ کیاCistancheشدید پھیپھڑوں کے ساتھ سیپٹک جھٹکا ماڈل چوہوں پر،جگر، اور تھائمس اور دیگر اعضاء کو پہنچنے والے نقصان، ایک پیش رفت کے طور پر سیل کے فنکشن کو بچانے کی کوشش کرتے ہوئے، اس کے اثر اور طریقہ کار کو دریافت کریں۔Cistancheسیپسس میں، سیپسس کے لیے موثر حفاظتی علاج کی دوائیں تیار کرنے کے لیے مفید ریسرچ کریں۔

مزید معلومات کے لیے رابطہ کریں:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche tubulosa گردے کی بیماری سے بچاتا ہے، نمونہ حاصل کرنے کے لیے یہاں کلک کریں۔

1. مواد اور طریقے

1.1 دوائیں، ری ایجنٹس، اور آلے کی دوائیں:

سوڈیم پینٹوباربیٹل (چائنا نیشنل فارماسیوٹیکل گروپ شنگھائی کیمیکل ریجنٹ کمپنی)، میلونڈیالڈہائڈ (ایم ڈی اے) کٹ، سپر آکسائیڈ ڈسمیوٹیز (ایس او ڈی) کٹ، اے ٹی پیز ریجنٹ (نانجنگ جیانچینگ انسٹی ٹیوٹ آف بائیولوجیکل انجینئرنگ)،Cistancheتھری گورجز یونیورسٹی کے روایتی چینی طب کے شعبہ سے ڈاکٹر وانگ چیزی کے ذریعہ تشخیص شدہ) پانی کا کاڑھا، ایونز بلیو۔ آلہ: ہٹاچی ایچ-600 ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ، فلو سائٹو میٹر (ای پی آئی سی ایس، بیک مین کولٹر)، 721 قسم کا سپیکٹرو فوٹومیٹر۔

1.2 Cistanche deserticola extract کی تیاری

کا نچوڑCistanche\ leaching طریقہ سے تیار کیا گیا تھا۔ کے خشک وزن کے 200 گرام لے لوCistancheاسے ایک بیکر میں ڈالیں، 1:1O کے تناسب سے آست پانی ڈالیں، اسے 30 منٹ سے 1 گھنٹے تک بھگو دیں، اسے برقی چولہے پر 1 گھنٹے کے لیے گرم کریں، فلٹر کریں، اور عمل کو دو بار دہرائیں۔ جمع کیے گئے فلٹریٹ کو بخارات بننے کے لیے گرم کیا گیا اور اسے 1g/mL تک مرتکز کیا گیا، اور پھر اسے سیل کر کے بعد میں استعمال کے لیے 4 ڈگری پر ریفریجریٹر میں محفوظ کیا گیا۔

1.3 جانور اور سیپٹیسیمیا جانوروں کے ماڈل

صحت مند نر SD چوہے (ہوازونگ یونیورسٹی آف سائنس اینڈ ٹیکنالوجی کے تجرباتی جانوروں کے مرکز کے ذریعہ فراہم کردہ، جس کا وزن 200 25 اوگ ہے۔ جانوروں کو تصادفی طور پر 3 گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا، ایک شیم آپریشن گروپ (، z-8)، ایک عام نمکین کنٹرول گروپ (, z-8)، اور aCistanchedeserticolaگروپ (ایک 8) شام آپریشن گروپ اور کنٹرول گروپ کو گیویج کے ذریعہ نارمل نمکین (10 ملی لیٹر/کلوگرام) دیا گیا تھا، اور انتظامیہ گروپ کو 1 گرام/ملی لیٹر (انتظامی خوراک 200 ملی گرام/کلوگرام) دی گئی تھی۔Cistanchegavage کے ذریعے، ld 2 بار، اور فیجیالوجی کے 15 دن تک کھلایا۔ نمکین کنٹرول گروپ اورCistanche deserticolaگروپ نے سیپسس ماڈل کی نقل تیار کرنے کے لئے سیکل لیگیشن اور سوراخ کا استعمال کیا۔ آپریشن سے پہلے جانوروں کو مفت پینے کا پانی اور 12 گھنٹے روزہ رکھا گیا۔

1.4 چوہے کے جگر کی مائٹوکونڈریل ATPase سرگرمی اور جگر کے mitochondrial سانس کی تقریب کی پیمائش

آپریشن کے 16 گھنٹے بعد، 6 جی چوہاجگرجلدی سے ایک {{0}} ڈگری علیحدگی میڈیم (250mmol sucrose، 2mmol ethoxy-ethyl piperazine 2-ethyl سلفونک ایسڈ، 0.1mmol ethylenediaminetetraacetic acid، pH 7.4)، تفریق کی شرح کا استعمال کرتے ہوئے چوہا مائٹوکونڈریا کم درجہ حرارت سینٹرفیوگل علیحدگی کے ذریعہ تیار کیا گیا تھا۔ ATPase سرگرمی کی پیمائش کے لیے فاسفورس کے تعین کا طریقہ [2 استعمال کریں۔ کلارک آکسیجن الیکٹروڈ کا طریقہ [3] JYD-IA تحلیل شدہ آکسیجن میٹر کے ساتھ مائٹوکونڈریل ریڈوکس رد عمل کے منحنی خطوط کو ریکارڈ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا، اور مرحلہ III اور مرحلہ IV کی سانس کی شرح، تنفس کنٹرول کی شرح (RCR)، اور فاسفورس-آکسیجن تناسب ( ADlP/0) کا حساب لگایا گیا۔

1.5 چوہے کے پھیپھڑوں کی ہسٹولوجی اور پلمونری فنکشن کی پیمائش

16 گھنٹے کے بعد سینے کو کھول کر پھیپھڑوں کا بایاں حصہ نکالا گیا۔ گیلے وزن کا وزن کرنے کے بعد، اسے تندور (80 ڈگری، 20 گھنٹے) میں اس وقت تک پکایا گیا جب تک کہ وزن مستقل نہ ہو، اور خشک وزن کا حساب لگایا جائے۔ پروٹین کے مواد کے لیے، پھیپھڑوں کی پارگمیتا انڈیکس (alveolar lavage fluid protein/ga پلازما پروٹین، LPI) کا حساب لگائیں۔ Zhou et al کی طرف سے متعارف کرائے گئے انٹراوینس انجیکشن ایونز بلیو طریقہ کے مطابق۔ [4]، چوہے کے پلمونری ویسکولر پارگمیتا (PVP) میں تبدیلیوں کی پیمائش کی گئی۔ thiobarbituric ایسڈ (TBA) طریقہ Ls کا استعمال چوہے کے پھیپھڑوں کے ٹشو میں میلونڈیالڈہائڈ (MDA) کی سرگرمی کا تعین کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ SOD سرگرمی کا تعین کرنے کے لیے xanthine oxidase طریقہ [6 کا استعمال۔

1.6 تھیمس ٹشو

جسمانی معائنہ اور سیل اپوپٹوس کی شرح کا تعین ہر گروپ میں 2 سے 3 چوہوں کو آپریشن کے بعد اسی وقت پر قربان کیا گیا تھا، برقرار تھامس کو الگ تھلگ کیا گیا تھا، اور معمول کے پیرافین کے حصے بنائے گئے تھے، وہ داغدار تھے، اور ہلکے خوردبین کے تحت مشاہدہ کیا گیا تھا۔ 2.5 گلوٹرالڈہائڈ فکسیشن، ایک الیکٹران مائکروسکوپ سیکشن بنائیں اور ٹرانسمیشن الیکٹران مائکروسکوپ کے ساتھ اس کا مشاہدہ کریں۔ thymocyte معطلی کی ایک اور تیاری، apoptotic زون میں واقع خلیات کی تعداد کے بہاؤ cytometry پتہ لگانے، apoptotic خلیات کی فیصد حاصل. برٹن ایٹ ال کے مطابق۔ L7] طریقہ (diphenylamine طریقہ)، مائکروپلیٹ ریڈر thymocyte genomic DNA فریگمنٹیشن کی فیصد کا پتہ لگاتا ہے اور اس کا حساب لگاتا ہے۔

1.7 شماریاتی پروسیسنگ

تجرباتی ڈیٹا کو اوسط ± معیاری انحراف ± s) کے لحاظ سے ظاہر کیا جاتا ہے۔ SPSS سافٹ ویئر تغیر اور ارتباط کے تجزیہ کا یک طرفہ تجزیہ کرتا ہے۔ پی<0.05 indicates="" a="" statistical="">

2. نتیجہ

2.1 جگر کے مائٹوکونڈریا Ⅲ حالت، RCR، اور P/O تناسب کنٹرول گروپ میں تبدیلیاں

ریاست III کی سانس لینے کی شرح شمع آپریشن گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھی۔<0.01). the="" breathing="" rate="" of="" state="" iv="" was="" not="" significantly="" changed="" compared="" with="" that="" of="" the="" sham="" operation="" group.="" as="" a="" result,="" the="" rcr="" of="" the="" control="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" sham="" operation="" group=""><0.01). the="" rcr="" in="" the="">Cistancheعلاج گروپ شام آپریشن گروپ کے قریب تھا۔ کنٹرول گروپ میں ADP/0 کا تناسب کم ہوا، اور Cistanche ٹریٹمنٹ گروپ کا تناسب بحال ہوا۔ شام آپریشن گروپ کے مقابلے میں، ایک اہم فرق تھا (P<>

2.2 mitochondrial ATPase کی سرگرمی پر Cistanche کا اثر

مائٹوکونڈریل جھلی کیلشیم-ATPase، سوڈیم-پوٹاشیم ATPase، میگنیشیم-ATPase، اور کیلشیم-میگنیشیم-ATPase کنٹرول گروپ میں ہیپاٹوسائٹس کی سرگرمیاں شام آپریشن گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم تھیں۔ کی انزائم سرگرمیاںCistancheعلاج گروپ متعلقہ کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھے، جو شمع آپریشن گروپ کی سطح تک پہنچ گئے تھے۔

2.3 thymocytes کے apoptosis پر Cistanche کا اثر

فلو سائٹومیٹری کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ شام آپریشن گروپ کے مقابلے میں، آپریشن کے بعد کنٹرول گروپ میں تھائموسائٹس کے اپوپٹوسس میں نمایاں اضافہ ہوا، جبکہCistanchedeserticola اقتباس مؤثر طریقے سے apoptosis کی شرح کو کم کر سکتا ہے، اور DNA کے ٹکڑے ہونے کا فیصد بہاؤ cytometry کے ذریعے پتہ چلا جیسا تھا۔ نتائج بنیادی طور پر ایک جیسے ہیں (ٹیبل 4)۔

2.4 thymus کی ہسٹولوجیکل تبدیلیوں پر Cistanche کا اثر

شام آپریشن گروپ میں تھائمس کے پیرافین سیکشن کے مشاہدے میں کوئی واضح پیتھولوجیکل تبدیلیاں نہیں دکھائی گئیں۔ تھائموسائٹس کو تھائمک پرانتستا میں گھنے طور پر تقسیم کیا گیا تھا، نیوکلئس گول، گہرا نیلا داغ، اور کم سائٹوپلازم تھا۔ میڈولا میں منتقلی کے بعد، نیوکلئس بتدریج بڑا ہوتا گیا، اور ہلکے داغ والے Epithelial reticular خلیات غالب ہوتے ہیں۔ کنٹرول گروپ میں، جانوروں کی تھیمک پرانتستا بہت کم خلیات پر مشتمل تھی، لیمفوسائٹس میں کمی واقع ہوئی، اور میکروفیجز میں اضافہ ہوا۔ فوکل نیکروسس اور بکھرے ہوئے سیل کے ٹکڑے مقامی طور پر دیکھے گئے۔ thymus medulla خلیات نمایاں طور پر کم نہیں ہوئے، اور خلیات کارٹیکل ایریا کے مقابلے میں زیادہ گھنے تقسیم کیے گئے تھے، جس سے نام نہاد "cortical-medullary inversion" رجحان بنتا ہے۔ میں جانوروں کے thymocyte ٹکڑےCistanche-انتظامی گروپ میں نمایاں طور پر کمی واقع ہوئی تھی، اور "کورٹیکس اور گودا الٹا" رجحان بھی نمایاں طور پر بہتر ہوا تھا۔

کنٹرول گروپ کے الیکٹران مائکروسکوپک مشاہدے سے معلوم ہوا کہ سیل کا زیادہ تر حجم کم ہو گیا تھا، سیل کی سطح سکڑ گئی تھی، چھالے پڑ گئے تھے، کرومیٹن جمع ہو گئے تھے، کچھ خلیے ہلال کی شکل کے تھے، اپوپٹوٹک باڈیز بن چکے تھے، اور سیل نیکروسس اور لیسز عام تھے۔ میںCistancheعلاج گروپ، سیل مورفولوجی میں تبدیلیوں کو نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا، اور سیل نیکروسس اور lysis کے رجحان کو نمایاں طور پر بہتر بنایا گیا تھا.

3. بحث

ایک سے زیادہ اعضاء کی خرابی کے سنڈروم سیپٹک صدمے کے آخری مرحلے میں ناقابل واپسی حالت اور زیادہ اموات کی بنیادی وجہ ہیں۔ سیپٹک جھٹکے کی اعلیٰ طبی اموات کو کم کرنے کے لیے اعضاء کے افعال کی حفاظت بہت اہمیت کی حامل ہے۔ Cistanche ہمارے ملک کی ایک روایتی چینی جڑی بوٹیوں کی دوا ہے۔ یہ سب سے پہلے "شین لونگ میٹیریا میڈیکا" میں شائع ہوا تھا۔ یہ جوہر اور خون کی پرورش، گردے کی پرورش، اور یانگ کو مضبوط بنانے کے لیے مشہور روایتی چینی ادویات میں سے ایک ہے۔ جدید فارماسولوجیکل مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ یہ جسم کے مدافعتی افعال اور تناؤ کو بہتر بنا سکتا ہے، ڈی این اے کی ترکیب کو فروغ دے سکتا ہے، 7 تابکاری کے خلاف مزاحمت کر سکتا ہے، عمر بڑھنے کے خلاف مزاحمت کر سکتا ہے، سیلولر ڈی این اے کی ترکیب کی شرح کو بڑھا سکتا ہے، اور بافتوں کے خلیوں کی حفاظت کر سکتا ہے۔ اس میں موجود اہم اجزاء میں Cistanche Polysaccharide (cDPS) اور D-mannitol شامل ہیں، جو آزاد ریڈیکلز کو مؤثر طریقے سے ختم کر سکتے ہیں۔Cistancheپولی سیکرائڈز T اور B لیمفوسائٹس کے پھیلاؤ کو بھی فروغ دے سکتے ہیں، اور ConA اور PHA کے ساتھ ماؤس thymocytes کے پھیلاؤ کو ہم آہنگی سے متحرک کر سکتے ہیں۔ یہ تجربہ سیپٹک جھٹکے میں اہم اہم اعضاء کے کام کو بہتر بنانے اور ان کی حفاظت کے بنیادی نکتے پر مبنی ہے اور جسم کو مضبوط بنانے کے TCM کے خیال پر، معروضی اور حساس پتہ لگانے کے طریقوں کا استعمالCistancheکی Ⅲ حالت پرجگرسیپٹک شاک چوہوں میں مائٹوکونڈریا، سانس کی کنٹرول کی شرح (RCR)، P/O تناسب، جھلی ATPase اور پھیپھڑوں کی پارگمیتا انڈیکس، پلمونری ویسکولر پارگمیتا، پھیپھڑوں کے ٹشو MDA، SOD سرگرمی، thymocyte apoptosis۔ تجرباتی نتائج بتاتے ہیں۔Cistancheاضافہ کر سکتے ہیںجگرmitochondrial RCR، P/O تناسب، اضافہجگرمائٹوکونڈریل سانس کی تقریب، مائٹوکونڈریل سانس کی زنجیر میں الیکٹران کی منتقلی کو تیز کرتا ہے، آکسیڈیٹیو فاسفوریلیشن اور جھلی ATPase سرگرمی کے جوڑے کی ڈگری میں اضافہ کرتا ہے، اور انٹرا سیلولر ATP ترکیب میں اضافہ کرتا ہے۔ Cistanche ایڈمنسٹریشن گروپ میں، پھیپھڑوں کے پارگمیتا انڈیکس اور پلمونری عروقی پارگمیتا میں نمایاں کمی واقع ہوئی، پھیپھڑوں کے بافتوں کی میلونڈیالڈہائڈ سرگرمی میں کمی واقع ہوئی، اور سپر آکسائیڈ خارج کرنے میں نمایاں اضافہ ہوا۔ یہ تجویز کیا جاتا ہے کہ Cistanche اپنے اینٹی آکسیڈینٹ اثر کے ذریعے پھیپھڑوں کے بافتوں کے خلیوں کو آکسیجن فری ریڈیکلز کے نقصان کو کم کر سکتا ہے، اور پھیپھڑوں کی چوٹ پر اچھا حفاظتی اثر رکھتا ہے۔ سیپٹک جھٹکے میں، تھائموسائٹس، خاص طور پر نادان T-lymphocytes، apoptosis کی ایک بڑی تعداد پردیی لیمفائیڈ اعضاء میں بالغ لیمفوسائٹس کی رہائی کا سبب بن سکتی ہے، اور پھر جسم کے مدافعتی کام کو براہ راست یا بالواسطہ طور پر نقصان پہنچاتی ہے۔ سیپٹک شاک میں غیر معمولی تھائموسائٹ اپوپٹوس کو درست کرنا جسم کی قوت مدافعت کو بہتر بنانے کے لیے فائدہ مند ہے۔ اس تجرباتی مطالعے سے پتا چلا ہے کہCistancheنچوڑ thymocytes کے apoptosis کو نمایاں طور پر بہتر کر سکتا ہے، اور سیپٹیسیمیا جانوروں کے thymocytes پر ایک اہم حفاظتی اثر رکھتا ہے۔ مزید برآں، یہ انفیکشن کے عمل کے دوران جسم کی قوت مدافعت کو بڑھاتا ہے اور اہم اعضاء کو غیر ملکی ٹاکسن کے نقصان کو کم کرتا ہے۔ ہم نے یہ بھی پایا کہ منشیات کے گروپ کا بلڈ پریشر نمایاں طور پر بہتر ہوا، اور شرح اموات میں نمایاں کمی ہوئی۔ Cistanche اور Cistanche نے جگر اور پھیپھڑوں کے خلیوں کے کام کو بڑھایا اور thymocytes کے apoptosis کو کم کیا۔ ایک اہم مثبت ارتباط ہے، جو اس بات کی نشاندہی کرتا ہے۔Cistancheجسم کے اہم اعضاء کے افعال کو بہتر بنا سکتے ہیں اور جسم کی قوت مدافعت میں اضافہ کر سکتے ہیں سیپٹک جھٹکے کے علاج میں Cistanche کے لیے ایک اہم فارماسولوجیکل بنیاد ہو سکتی ہے۔

Cistancheشدید اعضاء کو پہنچنے والے نقصان پر ایک اہم حفاظتی اثر پڑتا ہے، اور اس کا طریقہ کار یہ ہو سکتا ہے: ① جھلی ایسٹر پیرو آکسیڈیشن کے خلاف مزاحمت، جھلی کے استحکام کو بڑھانا، اور جھلی کی ساخت کو آزاد ریڈیکلز کے نقصان کو کم کرنا۔ ② ٹشو نیوکلک ایسڈ کی ترکیب کو فروغ دیں اور نیوکلک ایسڈ کے گلنے اور تباہی کو سست کریں، پروٹین کی ترکیب کو فروغ دیں، اور ٹشو سیلز کی مرمت اور تخلیق نو کو تیز کریں۔ ③ جسم کے مدافعتی فنکشن کو مضبوط کریں اور روگجنک عوامل کی وجہ سے جسم کو پہنچنے والے نقصان کو کم کریں۔ ④ ٹشو کے خلیات کی ضرورت سے زیادہ apoptosis کو روکنا. ⑤جسم کے مائیکرو سرکولیشن کو بہتر بنائیں اور اہم اعضاء کی خون کی فراہمی کو یقینی بنائیں۔

حوالہ جات

[1] جن ہیومنگ، سیکل لیگیشن اور پرفوریشن کے بعد سیپسس ماڈل [جے]۔ چائنا ڈیزیز جرنل آف فزیالوجی، 1990، 6(2):126۔

[2] 3 وانگ کیان، ژو ژاؤفینگ، ژاؤ زیلونگ۔ جدید طبی تجرباتی طریقے [M] شمالی بیجنگ: پیپلز ہیلتھ پبلشنگ ہاؤس، l997:342۔

[3] وانگ Qian، Zhu Xiaofeng، Zhao Xilong. جدید طبی تجرباتی طریقے [M3. شمالی بیجنگ: پیپلز ہیلتھ پریس، 1997: 508-510۔

[4] Zhang Xiuming، Li Jianzhai، Wei Mingjing، وغیرہ جدید طبی حیاتیاتی کیمیائی امتحان

[5]۔ بیجنگ: پیپلز آرمی میڈیکل پریس، 2001: 896-899۔

[6] انہوں نے Weijing، Li Wei، Bi Zheng، وغیرہ لیوکیمیا خلیات Diphenylamine طریقہ [J] میں apoptosis کا پتہ لگانے کے. شنگھائی جرنل آف میڈیکل ٹیسٹنگ، 2001، 16(3): 160۔