کس طرح Cistanche Polysaccharide Melanogenesis کو کم کرتا ہے اور آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرتا ہے؟

مزید معلومات کے لیے رابطہ کریں:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola Polysaccharide Melanocytes میں Melanogenesis کو دلاتا ہے اور آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرتا ہے

1Department of Dermatology, Third Xiangya Hospital, Central South University, Changsha, China

2 شعبہ یورولوجی، تیسرا ژیانگیا ہسپتال، سنٹرل ساؤتھ یونیورسٹی، چانگشا، چین

3 میڈیسن تجرباتی مرکز، تیسرا ژیانگیا ہسپتال، سنٹرل ساؤتھ یونیورسٹی، چانگشا، چین

Cistanchedeserticolaبہت سے اثرات ہیں، مزید جاننے کے لیے یہاں کلک کریں۔

خلاصہ: پگمنٹیشن عوارض کے اہم حصے کے طور پر، جلد کی خرابی کی بیماریاں جیسے وٹیلیگو اور ایکرومک نایوس بہت عام ہیں اور اب زیادہ توجہ حاصل کرتے ہیں۔ depigmentation کے روگجنن میں melanocyte dysfunction اور loss شامل ہیں، جو ممکنہ طور پر موروثی، خود کار قوت مدافعت اور آکسیڈیٹیو تناؤ کی وجہ سے ہوتے ہیں۔ ان کے درمیان،اوکسیڈیٹیو تناؤایک اہم کردار ادا کرتا ہے؛ تاہم، چند طبی علاج آکسیڈیٹیو تناؤ سے نمٹ سکتے ہیں۔ جیسا کہ اطلاع دی گئی ہے،Cistanchedeserticola پولی سیکرائیڈ(CDP) ایک موثر اینٹی آکسیڈینٹ ہے۔ اس کی بنیاد پر، ہم نے میلانوسائٹس میں اس کے کردار کا جائزہ لیا اور میکانزم کا مزید انکشاف کیا۔ اس مطالعے میں، ہم نے پایا کہ سی ڈی پی انسانی ایپیڈرمل میلانوسائٹس (HEMs) اور ماؤس میلانوما B16F10 خلیوں میں میلانوجینیسیس کو فروغ دے سکتا ہے، اس نے زیبرا فش میں پگمنٹیشن کو بھی متاثر کیا۔ مزید برآں، CDP مائٹوجن ایکٹیویٹڈ پروٹین کناز (MAPK) سگنل پاتھ وے کو چالو کر سکتا ہے، پھر مائیکرو فیتھلمیا سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر (MITF) اور ڈاون اسٹریم جینز TYR، TRP1، TRP2، اور RAB27A کے اظہار کو اپ ریگولیٹ کر سکتا ہے۔ بصورت دیگر، ہم نے پایا کہ CDP میلانوسائٹس میں H2O2-حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسٹی اور اپوپٹوس کو کم کر سکتا ہے۔ مزید شواہد سے پتہ چلتا ہے کہ CDP NRF2/HO-1 اینٹی آکسیڈینٹ راستے کو بڑھا سکتا ہے اور انٹرا سیلولر ROS کو ختم کر سکتا ہے۔ خلاصہ طور پر، سی ڈی پی میلانوجینیسیس کو فروغ دے سکتا ہے اور میلانوسائٹس کو آکسیڈیٹیو تناؤ کی چوٹ سے روک سکتا ہے، یہ تجویز کرتا ہے کہ سی ڈی پی میلانوسائٹس کی معمول کی حیثیت کو برقرار رکھنے میں مدد کرتا ہے۔ اس طرح، CDP depigmentation بیماریوں کے علاج کے لیے ایک نئی دوا ہو سکتی ہے۔

مطلوبہ الفاظ:

Cistanche deserticola پولی سیکرائیڈ, depigmentation بیماری, melanocyte, melanogenesis, NRF2,اوکسیڈیٹیو تناؤ

1. تعارف

جلد کی ڈیپگمنٹیشن کی بیماریاں، جیسے کہ وٹیلیگو اور ایکرومک نایوس، جلد کے دھندلے یا وسیع پیمانے پر ڈپگمنٹیشن کی خصوصیات ہیں۔ ڈیپگمنٹیشن میں بڑی پیتھولوجیکل تبدیلیوں میں میلانوسائٹ کا dysfunction اور نقصان شامل ہے، جو میلانین کی ترکیب اور نقل و حمل کو بہت متاثر کرتا ہے، 3 اس طرح جلد میں میلانین کی ناکافی جمع ہوتی ہے۔

depigmentation میں شامل میکانزم فی الحال نامعلوم ہیں، لیکن مطالعات نے کچھ متعلقہ عوامل کی نشاندہی کی ہے۔ ایک طرف، میلانوسائٹ کا فنکشن جزوی طور پر مائیکرو فیتھلمیا سے وابستہ ٹرانسکرپشن فیکٹر (MITF) پر منحصر ہے، جو کہ میلانوجینیسیس سے متعلقہ جینوں کے اظہار کو فروغ دینے کے لیے جانا جاتا ہے جن میں ٹائروسینیز (TYR)، ٹائروسینیز سے متعلق پروٹین 1 (TRP1)، ٹائروسینیز سے متعلق ہے۔ پروٹین 2 (TRP2)، راس سے متعلق پروٹین راب-27a (RAB27A) اور fascin ایکٹین بنڈلنگ پروٹین 1 (FSCN1)۔ dopaquinone.5 دوسری طرف، مطالعات کئی عوامل کا ایک مجموعہ تجویز کرتے ہیں جو میلانوسائٹس کے نقصان کے لیے ذمہ دار ہو سکتے ہیں، بشمول موروثی، ماحول، خودکار قوت مدافعت، اور آکسیڈیٹیو تناؤ۔{17}} ان عوامل میں سے، آکسیڈیٹیو تناؤ کو سب سے اہم سمجھا جاتا ہے۔ .

کے میکانزماوکسیڈیٹیو تناؤdepigmentation کی وجہ سے جزوی طور پر انکشاف کیا گیا ہے؛ ری ایکٹیو آکسیجن اسپیسز (ROS) اوورلوڈ ایک کلیدی عنصر ہے۔ 10 ڈیپگمنٹیشن میں ROS اوورلوڈ پرو اور اینٹی آکسیڈینٹ سسٹمز کے درمیان عدم توازن کو شامل کرتا ہے۔ عنصر 2/اینٹی آکسیڈینٹ رسپانس عنصر (NRF2/ARE) اینٹی آکسیڈینٹ پاتھ وے کی خرابی۔ 12 راستہ NRF2 اور اینٹی آکسیڈیٹیو انزائمز پر مشتمل ہوتا ہے جیسے ہیم آکسیجنز-1 (HMOX-1, HO-1) , catalase (CAT)، glutathione peroxidase 1 (GPX1)، اور NAD(P)H quinone dehydrogenase 1 (NQO1)۔ 13 جب میلانوسائٹس کو ضرورت سے زیادہ ROS کے سامنے لایا جاتا ہے، NRF2 نیوکلئس میں منتقل ہو سکتا ہے اور محفوظ ARE سے منسلک ہو سکتا ہے، پھر فروغ دے سکتا ہے۔ اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز کا اظہار۔ تاہم، کچھ depigmentation بیماریوں میں، جیسے vitiligo، ایک خراب NRF2/ARE اینٹی آکسیڈنٹ راستہ ROS کو مؤثر طریقے سے نہیں نکال سکتا۔ , 308-nm excimer لائٹ، آٹولوگس ایپیڈرمل ٹرانسپلانٹیشن، اور روایتی چینی ادویات (TCM) تھراپی۔ Corticosteroids اور calcineurin inhibitors غیر معمولی مدافعتی ایکٹیویشن کو کم کر سکتے ہیں، 15 جبکہ فوٹو تھراپی کو پہلی لائن کے علاج کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ خاص طور پر، NBUVB melanocyte کے پھیلاؤ اور T-cell کی تباہی کو متحرک کرتا ہے، جبکہ 308-nm excimer روشنی T خلیات کو apoptosis کی حوصلہ افزائی کرتی ہے۔ ڈیپگمنٹیشن کو بہتر بنانے میں مددگار ہیں، لیکن بیماری کے بڑھنے پر قابو پانا اب بھی مشکل ہے۔ یہ ضروری ہے کہ نئے علاج تیار کیے جائیں، خاص طور پر آکسیڈیٹیو تناؤ کے لیے، جسے پہلے نظر انداز کیا گیا تھا۔

Cistanche deserticolaاس کے اجزاء ایتھنول کی وجہ سے جگر کی چوٹ اور آنتوں کی سوزش کے ہائپرپلاسیا میں مفید ہیں۔ اسے اینٹی تھکاوٹ، اینٹی سوزش، اور اینٹی ٹیومر ری ایجنٹ کے طور پر بھی استعمال کیا جا سکتا ہے۔{5}} حال ہی میں، Guo et al نے رپورٹ کیا کہCistanche deserticola پولی سیکرائیڈ(سی ڈی پی)، اس کے اہم اجزاء میں سے ایک، اینٹی آکسیڈینٹ اور ہیپاٹوپروٹیکٹو سرگرمی20؛ ایک اور دو مطالعات نے آکسیجن گلوکوز کی کمی/ریپرفیوژن اور آسٹیوپوروسس کے حالات میں چوٹ سے خلیوں کی حفاظت میں اس کے کردار کی نشاندہی کی۔ یہاں، ہمارا مقصد اس بات کی تصدیق کرنا ہے کہ آیا CDP cاوکسیڈیٹیو تناؤould melanogenesis کو متاثر کرتا ہے اور melanocytes کو آکسیڈیٹیو تناؤ سے بچاتا ہے۔

2.|مواد اور طریقے

2.1|کیمیکل اور اینٹی باڈیز

Cistanche deserticolaپولی سیکرائیڈ(CDP) اور l-dopa کو Yuanye Biotec (98 فیصد سے زیادہ یا اس کے برابر؛ شنگھائی، چین) سے خریدا گیا تھا۔ ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ (H2O2)، ڈائمتھائل سلفوکسائیڈ (DMSO)، NaOH، Triton X-100, 4,5-dimethylthiazol-2-yl-2,5-diphenyltetrazolium bromide ( MTT)، اور ایک Annexin V-FITC اپوپٹوس ڈیٹیکشن کٹ سگما-الڈرچ سے خریدی گئی تھی۔ 4 فیصد غیر جانبدار پیرافارمیلڈہائڈ بائیوشارپ (ہیفی، چین) سے خریدا گیا تھا۔ اور ایک Immunofluorescence Staining Kit (Alexa Fluor 488) اور 2,7-dichlorofluorescein-diacetate (DCFH-DA) Beyotime Biotec (شنگھائی، چین) سے خریدا گیا تھا۔ ایک فونٹانا-میسن اسٹین کٹ اور ایک نیوکلیوپلاسمک پروٹین ایکسٹریکشن کٹ سلواربیو (بیجنگ، چین) سے خریدی گئی تھی۔ ہیومن میلانوسائٹ گروتھ سپلیمنٹ (HMGS)، ڈلبیکو کا ترمیم شدہ ایگل میڈیم (DMEM)، اور میڈیم 254 گبکو سے خریدے گئے تھے۔ فیٹل بووائن سیرم (FBS) BI (Kibbutz Beit-Haemek, Israel) سے خریدا گیا تھا۔ ایکٹین، TYR، TRP2، RAB27A، FSCN1، ERK، p-ERK، JNK، p-JNK، کے لیے بنیادی اینٹی باڈیز

p38, p-p38, NRF2، اور HO-1 سیل سگنلنگ ٹیکنالوجی سے خریدا گیا تھا، MITF کے لیے ایک بنیادی اینٹی باڈی سینٹ جان لیبارٹری سے خریدی گئی تھی، p-MITF کے لیے ایک بنیادی اینٹی باڈی Affinity Biosciences سے خریدی گئی تھی، ایک بنیادی اینٹی باڈی GAPDH کے لیے Bioworld سے خریدا گیا تھا، اور TRP1 کے لیے بنیادی اینٹی باڈی EMD ملی پور سے خریدی گئی تھی۔

2.2|سیل کلچر اور علاج

ماؤس میلانوما B16F10 خلیوں کو درمیانے درجے کے DMEM میں 10 فیصد FBS اور 1 فیصد پینسلین-اسٹریپٹومائسن اینٹی بائیوٹک مکس کے ساتھ کلچر کیا گیا تھا۔ ہیومن ایپیڈرمل میلانوسائٹس (HEMs) کو انسانی چمڑی سے الگ کیا گیا تھا (ہمارے پچھلے مطالعہ25 کا حوالہ دیں) اور درمیانے درجے کے 254 میں HMGS، 5 فیصد FBS، اور 1 فیصد پینسلن-اسٹریپٹومائسن اینٹی بائیوٹک مکس کے ساتھ کلچر کیا گیا تھا۔ تمام خلیوں کو 5 فیصد CO2 کے ساتھ 37 ڈگری پر گیلے انکیوبیٹر میں کلچر کیا گیا تھا۔ سی ڈی پی کو DMSO میں تحلیل کر کے کمزور کر دیا گیا۔

استعمال سے پہلے درمیانے درجے کے ساتھ، DMSO کا حتمی ارتکاز 0.1 فیصد سے کم تھا۔ H2O2 کو استعمال سے پہلے میڈیم سے پتلا کر دیا گیا تھا۔

2.3|زیبرا فش کی ثقافت اور علاج

زیبرا فش ایمبریو اور میڈیم EzeRinka Biotech سے خریدے گئے تھے۔ تجرباتی پروٹوکول کو سینٹرل ساؤتھ یونیورسٹی کی اخلاقیات کمیٹی نے منظور کیا تھا۔ زیبرا فش کو روشنی سے 37 ڈگری کے فاصلے پر 12-کنویں پلیٹوں میں پالا گیا اور CDP کے مختلف ارتکاز کے ساتھ علاج کیا گیا۔ ایک الٹی خوردبین کا استعمال روزانہ زیبرا فش کے سروں اور دموں میں میلانین کو دیکھنے اور ریکارڈ کرنے کے لیے کیا جاتا تھا۔ مشاہدے کے بعد، ہم نے میڈیم کو تبدیل کیا اور CDP کو دوبارہ شامل کیا۔ زیبرا فش کی دم میں میلانن کی کثافت کو امیج جے سے ماپا گیا تھا، اور اقدار کو مربوط نظری کثافت (IOD) کے طور پر پیش کیا گیا ہے۔

2.4|سیل کی عملداری

MTT پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے سیل کی عملداری کی پیمائش کی گئی۔ CDP کی سائٹوٹوکسیٹی کی تحقیقات کے لیے، HEMs اور B16F10 خلیات کو 96-کنویں پلیٹوں میں 2 × 1{{30}} کی کثافت پر لگایا گیا تھا خلیات پلیٹوں سے منسلک تھے. اس کے بعد خلیوں کو 24، 48 یا 72 گھنٹے کے لیے CDP کے مختلف ارتکاز (0، 2.5، 5، 10، 20، 40، 80، 160 اور 320 ug/mL) کے ساتھ علاج کیا گیا۔ پیمائش سے پہلے، ہر کنویں میں 20 μL MTT شامل کیا گیا تھا اور پلیٹوں کو 37 ڈگری پر 4 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، ہم نے سپرنٹنٹ کو ضائع کر دیا اور فارمازان کرسٹل کو تحلیل کرنے کے لیے ہر کنویں میں 160 μL DMSO شامل کیا۔ 490 nm پر جاذبیت کی قدر ملٹی موڈ پلیٹ ریڈر (پرکن ایلمر) کے ذریعہ ماپا گیا۔ H2O2- induced cytotoxicity حالت میں CDP کے اثر کی چھان بین کرنے کے لیے، HEMs، اور B16F10 سیلز کو 4 × 103 سیلز/ کنویں کی کثافت پر 96-کنویں پلیٹوں میں چڑھایا گیا تھا۔ خلیات کو 24 گھنٹوں تک CDP (0، 20، 40، یا 80 ug/mL) کے مختلف ارتکاز کے ساتھ علاج کیا گیا، اس موقع پر ہم نے H2O2 (حتمی ارتکاز: HEMs کے لیے 500 μm اور B16F10 خلیات کے لیے 1.0 ملی میٹر) ہر کنویں میں شامل کیا۔ اور خلیات کو مزید 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا۔ ہم نے CDP سے علاج شدہ اور منفی کنٹرول (NC) گروپس قائم کیے ہیں۔ پتہ لگانے کے اقدامات وہی تھے جو پہلے بیان کیے گئے تھے۔

2.5|میلانین مواد کا NaOH پرکھ

خلیوں کو {{0}}mm پیٹری ڈشز میں کلچر کیا گیا تھا اور CDP کے ساتھ مختلف ارتکاز (0, 20, 40, اور 80 ug/mL) میں 48 گھنٹے تک علاج کیا گیا، پھر ٹرپسن کے ساتھ ہضم کیا گیا اور 1 میں جمع کیا گیا۔ 5-mL ٹیوبیں۔ ہم نے خلیات کو دو بار دو بار آست پانی سے دھویا، انہیں 1 ملی لیٹر ایتھنول میں دوبارہ بند کیا، اور میلانین کو جاری کرنے کے لیے انہیں گھمایا۔ اس کے بعد ہم نے مرکب (200 گرام، 5 منٹ) کو سینٹری فیوج کیا اور سپرناٹینٹ کو ضائع کر دیا، ہر ٹیوب میں 1 ملی لیٹر 10 فیصد DMSO (1 ملی میٹر NaOH محلول سے پتلا) شامل کیا، اور تلچھٹ کو معطل کر دیا۔ ہم نے میلانین کو تحلیل کرنے کے لیے 1 گھنٹے کے لیے پانی کے غسل میں 80 ڈگری پر سسپنشن کو انکیوبیٹ کیا۔ آخر میں، ہم نے 200 μL مائع کو ایک 96-وییل پلیٹ میں منتقل کیا اور 470 nm پر جاذبیت کی قدر کی پیمائش کے لیے ملٹی موڈ پلیٹ ریڈر کا استعمال کیا۔

2.6|ٹائروسینیز سرگرمی کی پیمائش

خلیوں کو {{0}} ملی میٹر پیٹری ڈشز میں کلچر کیا گیا اور پیمائش سے پہلے CDP کے ساتھ علاج کیا گیا، ٹرپسن کے ساتھ ہضم کیا گیا اور 15-mL ٹیوبوں میں جمع کیا گیا، اور فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS) کے ساتھ دو بار دھویا گیا۔ )۔ ہم نے ہر نمونے سے 106 خلیات کو ایک نئی ٹیوب میں منتقل کیا اور سینٹرفیوگریشن کے بعد سپرنٹنٹ کو خارج کر دیا، پھر سیل کے گولے میں 1 ملی لیٹر 0.5 فیصد ٹریٹن ایکس-100 شامل کیا اور ذخیرہ کیا مکسچر کو 15 منٹ کے لیے 0 ڈگری پر رکھیں۔ اس کے بعد، ہم نے 1 ملی لیٹر ایل ڈوپا (1 ملی میٹر، 0.1 ایم فاسفیٹ بفر کے ساتھ گھٹا ہوا) سبسٹریٹ کے طور پر شامل کیا اور محلول کو ملایا، مرکب کے 200 μL کو ایک 96- کنویں پلیٹ میں منتقل کیا۔ فوری طور پر، اور ملٹی موڈ پلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے 475 nm پر جاذبیت کی قدر (A0) کی پیمائش کی، پیمائش کو 10 منٹ (A10) پر دہرایا۔ ٹائروسینیز کی سرگرمی کا حساب (A10-A0)/105 سے کیا گیا تھا، اور نتائج کو منفی کنٹرول کے مقابلے میں فیصد (فیصد) کے طور پر ظاہر کیا گیا ہے۔

2.7|فونٹانا-میسن میلانین کا داغ

خلیات کو 50 فیصد کثافت حاصل کرنے تک 12-کنویں پلیٹوں میں کلچر کیا گیا تھا۔ علاج کے بعد، خلیات کو 30 منٹ کے لیے 4 فیصد نیوٹرل پیرافارمیلڈہائیڈ کے ساتھ فکس کیا گیا اور آست پانی سے دھویا گیا۔ اس کے بعد ہم نے ہر کنویں میں 500 μL فونٹانا امونیا سلور محلول شامل کیا اور میلانین کو رنگنے کے لیے پلیٹوں کو 16 گھنٹے تک اندھیرے میں محفوظ کیا۔ اس کے بعد، ہم نے خلیات کو آست پانی سے پانچ بار دھویا (ہر بار 1 منٹ) اور انہیں 500 μL ہائپو سلفائٹ میں 5 منٹ کے لیے بھگو دیا۔ آخر میں، ہم نے ہائپو سلفائٹ کو ہٹا دیا اور خلیات کو 1 منٹ کے لیے آست پانی سے دوبارہ دھویا۔ اس کے بعد ہم نے میلانین کا مشاہدہ اور ریکارڈ کرنے کے لیے ایک الٹی خوردبین کا استعمال کیا۔

2.8|آر این اے نکالنا اور مقداری ریورس ٹرانسکرپشن پولیمریز چین کا رد عمل

خلیوں کو 6-کنویں پلیٹوں میں کلچر کیا گیا تھا۔ علاج کے بعد، خلیوں کو ٹرپسن کے ساتھ ہضم کیا گیا اور 15-mL ٹیوبوں میں جمع کیا گیا۔ ہم نے خلیات کو PBS کے ساتھ دو بار دھویا، پھر 1 ملی لیٹر لیسیز بفر میں شامل کیا، مکسچر کو گھمایا، اور خلیوں کو مکمل طور پر لیس کرنے کے لیے ٹیوبوں کو 5 منٹ تک برف پر رکھا۔ RNA کو ٹوٹل RNA Kit (Omega Bio-Tek) اور ReverTra Ace qPCR RT ماسٹر مکس (TOYOBO) کا استعمال کرتے ہوئے ریورس ٹرانسکرپٹ (RT) کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا۔ کوانٹیٹیٹو ریورس ٹرانسکرپشن-پولیمریز چین ری ایکشن (PCR) KODSYBR qPCR مکس (TOYOBO) کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا۔ RT مکسچر کا ری ایکشن والیوم 20 μL تھا، جبکہ PCR مکسچر کا ری ایکشن والیوم 20 μL تھا (cDNA 1-8 μL، MIX 10 μL، پرائمر F 1 μL، پرائمر R 1 μL، DEPC H2O کو 20 μL میں شامل کریں۔ )۔ تجربات پروٹوکول کے مطابق کیے گئے تھے۔ پرائمر کے سلسلے ٹیبل S1 میں درج ہیں۔

2.9|پروٹین نکالنا اور مغربی بلوٹنگ / امیونو فلوروسینس

خلیوں کو 100-ملی میٹر پیٹری ڈشز میں کلچر کیا گیا تھا۔ علاج کے بعد، خلیوں کو ٹرپسن کے ساتھ ہضم کیا گیا اور 15-mL ٹیوبوں میں جمع کیا گیا۔ ہم نے خلیات کو پی بی ایس کے ساتھ دو بار دھویا، پھر 500 μL RIPA lysis بفر (تھرمو فشر) میں شامل کیا گیا جس میں 1 ملی میٹر فینائل میتھائل سلفونائل فلورائڈ (تھرمو فشر) اور 1:100 پتلا فاسفیٹیس انحیبیٹر کاک ٹیل (RiPA) شامل کیا گیا۔ نیوکلیائی اور سائٹوپلازم پروٹین کو مینوفیکچرر کے پروٹوکول کے مطابق نیوکلیوپلاسمک پروٹین ایکسٹریکشن کٹ کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا۔ ہم نے ٹیوبوں کو 30 منٹ تک برف پر رکھا اور خلیوں کو مکمل طور پر لیس کرنے کے لیے انہیں ہر 5 منٹ بعد گھمایا۔ ہم نے خلیات کو سینٹرفیوج کیا (200 جی، 4 ڈگری، 15 منٹ)، سپرنٹنٹ کو ایک نئی ٹیوب میں منتقل کیا، اور BCA پروٹین پرکھ کٹ (KeyGEN Biotec) کا استعمال کرتے ہوئے کل پروٹین کے ارتکاز کی پیمائش کی۔ ہم نے پروٹین کو 5× لوڈنگ بفر (بیو ٹائم بائیوٹیک، چائنا) کے ساتھ 100 ڈگری پر 10 منٹ کے لیے ابالے، پھر انہیں −80 ڈگری پر ذخیرہ کیا۔ Polyacrylamide جیل الیکٹروفورسس (PAGE) طریقہ مغربی بلوٹنگ میں استعمال کیا گیا تھا، اور ہر گروپ کے 20 ug پروٹین کو الگ کر کے پولی وینیلائیڈین فلورائیڈ جھلی میں منتقل کیا گیا تھا۔ اینٹیجن بلاک کرنے کے بعد، ہم نے جھلی کو 1:1000 پتلی پرائمری اینٹی باڈی میں 16 گھنٹے کے لیے 4 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا، پھر اس جھلی کو PBST سے دھویا اور اسے 1:10 000 پتلا فلوروسینٹ سیکنڈری اینٹی باڈی میں 37 ڈگری پر 1 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا۔ . فلوروسینس کی شدت کا پتہ Odyssey CLx امیجنگ سسٹم (LI-COR) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ امیونو فلوروسینس امیونو فلوروسینس سٹیننگ کٹ (الیکسا فلور) کا استعمال کرتے ہوئے انجام دیا گیا تھا۔

488) بنیادی اینٹی باڈی کے 1:100 کم کرنے کے ساتھ۔

2.10|سیل اپوپٹوسس کی پیمائش

خلیوں کو {{0}} ملی میٹر پیٹری ڈشز میں کلچر کیا گیا تھا اور 24 گھنٹوں کے لئے CDP کے مختلف ارتکاز (0, 20, 40, اور 80 ug/mL) کے ساتھ علاج کیا گیا تھا، اور H2O2 شامل کیا گیا تھا ( حتمی ارتکاز: HEMs کے لیے 500 μm، B16F10 خلیات کے لیے 1.0 mm) ہر ایک کنویں میں اور مزید 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔ ہم نے CDP سے علاج شدہ اور NC گروپس بھی قائم کیے ہیں۔ علاج کے بعد، ہم نے ای ڈی ٹی اے فری ٹرپسن کے ساتھ خلیات کو ہضم کیا اور انہیں ٹیوبوں میں جمع کیا، پھر خلیات کو پی بی ایس سے دو بار دھویا اور 100 μL پی بی ایس میں دوبارہ بحال کیا۔ خلیوں کو پروٹوکول کے مطابق ایک Annexin V-FITC Apoptosis ڈیٹیکشن کٹ کے ساتھ داغ دیا گیا تھا اور فلو سائٹومیٹری (FCM) کے ذریعہ ان کا پتہ لگایا گیا تھا۔ فلوجو سافٹ ویئر اپوپٹوس کی شرح کا تجزیہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

2.11|انٹرا سیلولر ROS پیمائش

خلیات کو {{0}} اچھی پلیٹوں میں کلچر کیا گیا تھا اور 24 گھنٹے تک CDP کے مختلف ارتکاز (0, 20, 40, اور 80 ug/mL) کے ساتھ علاج کیا گیا تھا، جس میں ہم نے H2O2 (حتمی ارتکاز: 500) شامل کیا۔ HEMs کے لیے μm،

B16F10 خلیات کے لیے 10 ملی میٹر) ہر ایک کنویں میں، انہیں دوسرے کے لیے انکیوبیٹ کیا گیا

24 گھنٹے اور CDP سے علاج شدہ اور NC گروپس قائم کریں۔ علاج کے بعد، ہم نے تمام میڈیم اور ایف بی ایس کو ہٹانے کے لیے پی بی ایس کے ساتھ دو بار خلیات کو دھویا، پھر DCFH-DA تحقیقات کو درمیانے درجے کے ساتھ 1:1000 کر دیا اور اسے ہر کنویں میں شامل کیا۔ ہم نے خلیوں کو 37 ڈگری پر 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا اور انہیں سیرم فری میڈیم سے تین بار دھویا۔ ہم نے ایک استعمال کیا۔

فلوروسینس کا مشاہدہ کرنے اور ریکارڈ کرنے کے لیے الٹی فلوروسینس مائکروسکوپ، پھر فلوروسینس کی شدت کی پیمائش کے لیے امیج جے کا استعمال کیا۔

2.12|شماریات اور تجزیہ

اس کام میں ڈیٹا کو اوسط ± معیاری انحراف (SD) کے طور پر پیش کیا گیا ہے، اور شماریاتی تجزیہ گراف پیڈ پرزم (ورژن 7۔{1}}) یا SPSS (ورژن 22۔{3}})، اور طالب علم کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ t-ٹیسٹ یا یکطرفہ تجزیہ کا تغیر (ANOVA) متعدد گروپ موازنہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ ڈبلیو بی پروٹین بینڈ کی گرے ویلیو کو جی اے پی ڈی ایچ یا ایکٹین کے ساتھ معیاری بنایا گیا تھا۔ P <.05 کی="" قدروں="" کو="" اہم="" سمجھا="" جاتا="" تھا۔="" تمام="" تجربات="" کم="" از="" کم="" تین="" بار="" دہرائے="">

3|نتائج

3.1|CDP نے HEMs اور B16F10 خلیوں میں میلانوجینیسیس کی حوصلہ افزائی کی۔

شروع کرنے سے پہلے، ہم نے MTT پرکھ کا استعمال HEMs اور ماؤس میلانوما B16F10 خلیوں پر CDP کی ممکنہ سائٹوٹوکسٹی کی تحقیقات کے لیے کیا۔ خلیوں کا 24، 48، یا 72 گھنٹے تک مختلف حراستی میں CDP کے ساتھ علاج کیا گیا۔ HEM قابل عمل جانچ نے یہ ظاہر کیا کہ جب ارتکاز 320 ug/mL سے کم تھا، CDP کا سیل کی قابل عملیت پر کوئی اثر نہیں ہوتا تھا۔ تاہم، قابل عملیت میں نمایاں کمی واقع ہوئی کیونکہ 24، 48، اور 72 گھنٹے میں ارتکاز 320 ug/mL تک پہنچ گیا (P <.05؛ شکل="" 1a)۔="" b16f10="" خلیوں="" کی="" عملداری="" میں="" بھی="" 48="" اور="" 72="" گھنٹے="" میں="" کمی="" واقع="" ہوئی="" جب="" cdp="" 320="" ug/ml="" (p=""><.01) تک="" پہنچ="" گیا="" لیکن="" کم="" ارتکاز="" (شکل="" 1b)="" میں="" کوئی="" تبدیلی="" نہیں="" دیکھی="" گئی۔="" اس="" کے="" بعد="" ہم="" نے="" ابتدائی="" طور="" پر="" melanogenesis="" میں="" cdp="" کے="" کردار="" کی="" کھوج="" کی="" اور="" اس="" کے="" اثرات="" کا="" موازنہ="" -melanocyte-stimulating="" hormone="" (-msh؛="" ارتکاز:="" 20,="" 100,="" اور="" 400="" nm)="" اور="" dmso="" (0.1="" فیصد)="" hems="" میں="" کیا۔="" میلانین="" سٹیننگ،="" ٹائروسینیز="" کی="" سرگرمی،="" اور="" میلانین="" مواد="" کی="" جانچ="" کے="" نتائج="" نے="" تجویز="" کیا="" کہ="" میلانجینیسیس="" کو="" فروغ="" دینے="" کے="" لیے="" cdp="" -msh="" کے="" ساتھ="" موازنہ="" کیا="" جا="" سکتا="" ہے،="" جبکہ="" 0.1="" فیصد="" dmso="" علاج="" سے="" کوئی="" فرق="" نہیں="" پڑا="" (شکل="">

ہم نے اسی کے مطابق اپنی تلاش کو مزید بہتر کیا۔ HEMs کا علاج 48 گھنٹے تک مختلف ارتکاز (20, 40, اور 80 ug/mL) پر CDP کے ساتھ کیا گیا۔ میلانین سٹیننگ، میلانین مواد، اور ٹائروسینیز ایکٹیویٹی اسسز کیے گئے، اور ان سب میں CDP کے علاج کے بعد ارتکاز پر منحصر انداز میں نمایاں اضافہ ہوا جو 80 ug/mL گروپ میں عروج پر تھا (P <.05، شکل="" 2a-c)="" .="" اس="" کے="" بعد="" ہم="" نے="" melanogenesis="" سے="" متعلق="" جینز="" (mitf،="" tyr،="" trp1،="" trp2،="" rab27a،="" اور="" fscn1)="" کے="" mrna="" اور="" پروٹین="" کی="" سطح="" کی="" پیمائش="" کی۔="" cdp="" نے="" hems="" (p=""><.05؛ figure="" s2a)="" میں="" ان="" جینوں="" کے="" mrna="" کی="" سطح="" میں="" نمایاں="" اضافہ="" کیا۔="" اس="" کے="" علاوہ،="" mitf،="" tyr،="" trp1،="" اور="" rab27a="" پروٹین="" کی="" سطحوں="" میں="" اضافہ="" ہوا،="" جیسا="" کہ="" فاسفوریلیٹڈ="" mitf="" کا="" کل="" mitf="" (p=""><.05) کا="" تناسب="" تھا،="" جبکہ="" trp2="" اور="" fscn1="" نے="" کوئی="" فرق="" نہیں="" دکھایا="" (شکل="" 2d،="" e)۔="" نتائج="" نے="" اشارہ="" کیا="" کہ="" سی="" ڈی="" پی="" میلانوجینیسیس="" کو="" فروغ="" دے="" سکتا="" ہے="" اور="" انسانی="" میلانوسائٹس="" میں="" میلانوجینیسیس="" سے="" متعلق="" جینوں="" کے="" اظہار="" کو="" بہتر="" بنا="" سکتا="">

مزید برآں، ہم نے B16F10 خلیوں کے ساتھ دوبارہ CDP کے اثرات کی تصدیق کی اور پایا کہ B16F10 خلیوں کے میلانین مواد میں نمایاں اضافہ ہوا ہے (P <.01؛ figure="" s2b)۔="" اس="" کے="" علاوہ،="" cdp="" نمایاں="" طور="">

3.2|سی ڈی پی نے زیبرا فش میں میلانوجینیسیس کو فروغ دیا۔

اس بات کی تحقیقات کرنے کے لیے کہ آیا سی ڈی پی کو فروغ مل سکتا ہے۔melanogenesisVivo میں، ہم نے زیبرا فش ایمبریو استعمال کیا۔ زیبرا فش ایمبریوز کو چار گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا اور مختلف ارتکاز (20، 40 اور 80 ug/mL) میں اکیلے میڈیم (NC) یا CDP کے ساتھ مسلسل علاج کیا جاتا تھا۔ میلانین گرینولز کی کثافت اور تقسیم کا مشاہدہ کیا گیا اور ہر روز ریکارڈ کیا گیا۔ جیسے جیسے زیبرا فش ایمبریو میں اضافہ ہوا، ہم نے پایا کہ میلانین کی کثافت آہستہ آہستہ سروں اور دموں میں بڑھ رہی ہے۔ تیسرے دن، بین گروپ کے اختلافات قابل تمیز تھے، اور یہ فرق اس وقت تک بڑھتا رہا جب تک کہ ہم نے 6 ویں دن تجربہ ختم نہیں کیا (شکل 3A)۔ ہم نے زیبرا فش کی دم میں میلانین کی کثافت کی پیمائش کے لیے امیج جے کا استعمال کیا۔ CDP سے علاج شدہ گروپوں میں میلانین کی کثافت کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھی (P <.05؛ شکل="">

3.3|CDP نے HEMs اور B16F10 سیلز میں MAPK سگنل پاتھ وے کو چالو کیا۔

ان میکانزم کو ظاہر کرنا جس کے ذریعے CDP کو فروغ دیا گیا۔melanogenesis، ہم نے CDP کے ساتھ HEMs کا علاج مختلف ارتکاز میں کیا (20، 40 اور

80 ug/mL) 48 گھنٹے تک اور پھر MAPK سگنلنگ پاتھ وے میں ERK، JNK، اور p38 پروٹین کی فاسفوریلیٹڈ اور کل سطحوں کی چھان بین کی۔ جیسا کہ مغربی بلوٹنگ کے ذریعہ ماپا جاتا ہے، p-ERK، p-JNK، اور p-p38 کی سطح CDP علاج (P <.05) کے="" بعد="" بڑھائی="" گئی،="" جبکہ="" ان="" کی="" کل="" سطحوں="" میں="" کوئی="" تبدیلی="" نہیں="" آئی="" (شکل="" 4a،="" b)۔="" تجربات="" کو="" b16f10="" خلیات="" کے="" ساتھ="" دہرایا="" گیا="" اور="" erk،="" jnk،="" اور="" p38="" پروٹینز="" کی="" فاسفوریلیٹڈ="" لیولز="" میں="" اضافہ="" کیا="" گیا="" (p=""><.05)، لیکن="" mapk="" کی="" کل="" سطح="" تبدیل="" نہیں="" ہوئی="" (شکل="" 4c،="" d)،="" hems="" کے="" نتائج="" کے="" مطابق۔="">

3.4|CDP کم H2O2-کی حوصلہ افزائی

HEMs اور B16F10 خلیوں میں cytotoxicity اور apoptosis

ہم نے نقل کرنے کے لیے H2O2 کا استعمال کیا۔اوکسیڈیٹیو تناؤماحولیات اور اس کے تحت میلانوسائٹس میں سی ڈی پی کے کردار کو مزید دریافت کیا۔اوکسیڈیٹیو تناؤ. HEMs میں استعمال ہونے والے H2O2 کا حتمی ارتکاز 500 μm تھا، جب کہ B16F10 خلیوں میں 1.0 mm تھا۔ H2O2-حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسٹی پر CDP کے اثر کی چھان بین کرنے کے لیے، ہم نے HEMs اور B16F10 خلیات کو CDP کے ساتھ مختلف ارتکاز (20، 40، اور 80 ug/mL) پر 24 گھنٹے تک پہلے سے علاج کیا، پھر H2O2 شامل کیا اور ان کا علاج جاری رکھا۔ مشاہدہ اور MTT پرکھ کرنے سے پہلے 24 گھنٹے تک۔

H2O2 کی وجہ سے HEMs میں جھلیوں کے بلبنگ اور سیل سکڑنے کا سبب بنتا ہے، CDP سے پہلے سے تیار کردہ گروپوں میں، صورت حال کو کم کیا گیا تھا۔ صرف CDP کے ساتھ علاج کا کوئی اثر نہیں ہوا (شکل 5A)۔ MTT پرکھ نے اسی طرح کا نتیجہ ظاہر کیا کہ H2O2 علاج سے HEM کی عملداری میں کمی آئی، جبکہ CDP نے اس نقصان دہ اثر کو نمایاں طور پر کم کیا۔

3.5|HEMs اور B16F10 سیلوں میں CDP سکیوینجڈ H2O2-حوصلہ افزائی انٹرا سیلولر ROS

H2O2-حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسٹی اور اپوپٹوسس کو کم کرنے کے لیے CDP کے طریقہ کار کی چھان بین کرنے کے لیے، ہم نے DCFH-DA فلوروسینس کا استعمال کرتے ہوئے HEMs اور B16F10 خلیوں میں انٹرا سیلولر ROS کا مزید پتہ لگایا۔

4|بحث اور نتائج

اس مطالعے میں، ہم نے HEMs اور B16F10 خلیوں میں CDP کے کردار کی چھان بین کی۔ پہلی بار، ہم نے پایا کہ CDP فروغ دے سکتا ہے۔melanogenesisمیلانوسائٹس میں اور زیبرا فش میں پگمنٹیشن کو فروغ دیتے ہیں۔ اس کے بعد کے تجربے سے پتہ چلتا ہے کہ MAPK سگنلنگ پاتھ وے CDP علاج کے تحت چالو کیا گیا تھا۔ میں اس کے کردار کی مزید تفتیش کی۔اوکسیڈیٹیو تناؤاور پتہ چلا کہ CDP میلانوسائٹس میں H2O2- حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسٹی اور اپوپٹوس کو کم کر سکتا ہے۔ اس دوران، CDP NRF2/HO-1 اینٹی آکسیڈینٹ پاتھ وے کو چالو کر سکتا ہے اور انٹرا سیلولر ROS کو اس کے تحت نکال سکتا ہے۔اوکسیڈیٹیو تناؤحالات

مائٹوجن ایکٹیویٹڈ پروٹین کناز ایک اہم راستہ ہے جو ایم آئی ٹی ایف کے ضابطے میں شامل ہے، ایک اہم ٹرانسکرپشن عنصر جو اظہار کو فروغ دیتا ہے۔melanogenesis-متعلقہ جینز اور اس کے نتیجے میں میلانین کی ترکیب اور نقل و حمل کو متاثر کرتے ہیں۔ اس دوران، MITF/p-MITF اور MITF سے چلنے والے TYR، TRP1، TRP2 اور RAB27A کے تاثرات

اس کے مطابق اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا. اس طرح، ہم تجویز کرتے ہیں کہ CDP کر سکتے ہیں۔

فروغ دیناmelanogenesisMAPK پاتھ وے کو چالو کرنے کے ذریعے، لیکن CDP MAPKs کو کیسے چالو کرتا ہے یہ نامعلوم ہے۔ حالیہ مطالعات کے مطابق، ٹول نما رسیپٹر 4 (TLR4) میلانوسائٹس میں بہت زیادہ ظاہر ہوتا ہے اور میلانوجینیسیس میں شامل ہوتا ہے۔ مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ ایل پی ایس میلانوجینیسیس کو آمادہ کر سکتا ہے۔29 دلچسپ بات یہ ہے کہ کئیپولی سیکرائڈزپودوں یا کھمبیوں سے نکالا گیا جو مبینہ طور پر TLRs اور ڈاؤن اسٹریم سگنلنگ پاتھ ویز جیسے MAPK اور نیوکلیئر فیکٹر کاپا بیٹا (NF-κB) کو چالو کرتا ہے۔ لنگ راستہ اور فروغ دیتا ہےmelanogenesis. مزید برآں، نیوکلیوٹائڈ بائنڈنگ اولیگومرائزیشن ڈومین نما رسیپٹرز (NLRs) انٹرا سیلولر لیگنڈز کو پہچاننے اور MAPK اور NF-κB سگنلنگ پاتھ ویز کو چالو کرنے کے لیے جانا جاتا ہے۔ اور NLRs.35,36 کو متاثر کرتا ہے اس طرح، یہ ممکن ہے کہ CDP میلانوسائٹس میں داخل ہو اور NLRs کے ذریعے MAPK سگنلنگ پاتھ وے کو ریگولیٹ کر سکے۔ تاہم، اس مفروضے کی تصدیق کے لیے مزید مطالعات کی ضرورت ہے۔

آج تک کے کچھ مطالعات میں جڑی بوٹیوں کے استعمال کی اطلاع دی گئی ہے۔پولی سیکرائڈزmelanogenesis میں melanin کی پیداوار کو روکتا ہے۔ 37,38 تاہم، اس مطالعے میں CDP نے melanogenesis کو فروغ دیا۔

melanocytes، اور اس اثر کی مزید تصدیق -MSH کے ساتھ مقابلے کے بعد ہوئی۔ سی ڈی پی بھی ایک قسم ہے۔پولی سیکرائیڈجڑی بوٹیوں سے نکالا گیا، ہمیں شبہ ہے کہ CDP کا مخالف اثر CDP اور دیگر کے درمیان ساختی فرق سے متعلق ہو سکتا ہے۔پولی سیکرائڈز. پولی سیکرائڈز مونوساکرائڈز کے پولیمرائزیشن سے بنتے ہیں لیکن مونوساکرائڈ کی قسم، مونو سیکرائڈ کمپوزیشن، گلائکوسیڈک بانڈ، سائیڈ چین ڈھانچہ، اور سالماتی وزن39,40 میں متغیر ہوتے ہیں۔ یہ عوامل ان کے حیاتیاتی افعال کا تعین کرتے ہیں۔

میلانوجینیسیس مزاحمت کا ایک اہم حفاظتی طریقہ کار ہے۔

بالائے بنفشی نقصان اور جسم کے ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھنا43؛ ایک ہی وقت میں

وقت، میلانوسائٹس آسانی سے ناموافق ماحول جیسے ROS اوورلوڈ کے سامنے آ جاتے ہیں۔ 11 یہ معلوم ہے کہ ROS کو فروغ دینے میں حصہ لیتےmelanogenesis، میکانزم میں سے ایک MAPKs کو چالو کر رہا ہے پرو اور اینٹی آکسیڈینٹ نظام کے درمیان توازن واضح طور پر اہم ہے۔ ڈیپگمنٹیشن کی بیماریوں میں جیسے کہ وٹیلگو، ایک غیر متوازن اینٹی آکسیڈینٹ سسٹم اور بے قابو ROS اوورلوڈ میلانوسائٹس کو نقصان پہنچائے گا اور سیل کی عملداری کو کم کرے گا۔ B16F10 خلیات سے H2O2۔ جب میلانوسائٹس کو H2O2 علاج کا نشانہ بنایا گیا تو، ان کی قابل عملیت اور اپوپٹوس کی شرح خراب ہوگئی، لیکن

سی ڈی پی کا علاج جزوی طور پر رجحان کو تبدیل کر سکتا ہے۔ ایک ہی وقت میں، ROS کو صاف کیا گیا تھا۔ جیسا کہ اطلاع دی گئی ہے، NRF2/ARE اینٹی آکسیڈیشن پاتھ وے ایکٹیویشن جلد کے خلیوں میں ROS کی صفائی کا ایک بڑا طریقہ ہے۔ 14 ہمارے تجربات میں، میلانوسائٹس میں NRF2 اور HO-1 کے پروٹین کی سطح کو بغیر CDP کے H2O2 کے علاج کے بعد اپ ریگولیٹ کیا گیا تھا۔ اس کا مطلب ہے کہ H2O2-کی حوصلہ افزائیاوکسیڈیٹیو تناؤNRF2/HO-1 راستے کو چالو کر سکتا ہے، لیکن یہ ریڈوکس توازن برقرار رکھنے اور سیل کو چوٹ سے بچانے کے لیے ناکافی ہے۔ تاہم، CDP پریٹریٹمنٹ نے NRF2/HO-1 اینٹی آکسیڈیشن کے راستے کو بڑھایا اور توازن بحال کیا۔ اس طرح، ہم تجویز کرتے ہیں کہ CDP NRF2/HO-1 اینٹی آکسیڈیشن پاتھ وے کو چالو کرنے اور ROS کی صفائی کے ذریعے میلانوسائٹس کو آکسیڈیٹیو تناؤ کی چوٹ سے بچا سکتا ہے۔

ہم نے پایا کہ صرف CDP علاج کا میلانوسائٹس میں ROS یا NRF2/HO-1 پر کوئی اثر نہیں ہے۔ یہ نتیجہ بتاتا ہے کہ سی ڈی پی آکسیڈیٹیو تناؤ کے تحت ریڈوکس توازن کو متاثر کر سکتا ہے، لیکن عام حالات میں نہیں۔ مزید برآں، NRF2/HO-1 اینٹی آکسیڈیشن پاتھ وے کو مبینہ طور پر PI3K، NF-κB، اور MAPK سگنلنگ پاتھ ویز کے ذریعے ریگولیٹ کیا جاتا ہے۔ 47,48 ہمارے مطالعے میں، CDP MAPK سگنلنگ پاتھ وے کو فعال کرنے کے قابل تھا۔ یہ ممکن ہے کہ CDP NRF2/HO-1 راستے کو اپ ریگولیٹ کرنے والے MAPKs کے ذریعے فعال کر سکے۔ جیسا کہ سلومنسکی نے رپورٹ کیا، میلانوسائٹس ایک ریگولیٹری نیٹ ورک میں شامل تناؤ کے سینسرز ہیں، اور ان کے افعال ماحول کے ردعمل میں تیزی سے تبدیل ہو سکتے ہیں۔ نظام عام حالات کے تحت لیکن ریڈوکس بیلنس کو بحال کریں۔اوکسیڈیٹیو تناؤحالات لہذا، میلانوسائٹ کے فنکشن اور بقا کو CDP کے ذریعے دو مختلف طریقوں سے برقرار رکھا جا سکتا ہے۔ سی ڈی پی میلانوسائٹس کو ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھنے میں مدد کرتا ہے، جو میلانوجینیسیس کا ایک اہم کام بھی ہے۔ 50,51

آخر میں، CDP کو فروغ دے سکتا ہے۔melanogenesisمیلانوسائٹس کی

MAPK سگنلنگ پاتھ وے کو چالو کرنے کے ذریعے۔ CDP NRF2/HO-1 اینٹی آکسیڈینٹ پاتھ وے کو چالو کرنے اور آکسیڈیٹیو تناؤ کے حالات میں انٹرا سیلولر ROS کی صفائی کے ذریعے میلانوسائٹ کی بقا کو بہتر بنا سکتا ہے۔ ہمارے نتائج معنی خیز ہیں کیونکہ وہ یہ ظاہر کرتے ہیں کہ CDP دونوں کو فروغ دے سکتے ہیں۔melanogenesisاور میلانوسائٹس سے بچاؤاوکسیڈیٹیو تناؤچوٹ، جو ممکنہ طور پر melanocyte dysfunction اور نقصان کے لیے ذمہ دار ہے۔ اس مطالعے کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ سی ڈی پی ڈیپگمنٹیشن بیماریوں کے علاج میں ایک نئی دوا ہو سکتی ہے۔

اعترافات

اس کام کو چائنا کی نیشنل نیچرل سائنس فاؤنڈیشن (نمبر 81703101)، سنٹرل ساؤتھ یونیورسٹی کے تیسرے ژیانگیا ہسپتال کے نئے ژیانگیا ٹیلنٹ پروجیکٹس (نمبر JY201623 اور نمبر 20170301)، صوبہ ہنان کی نیچرل سائنس فاؤنڈیشن (نمبر 81703101) نے تعاون کیا۔ نمبر 2018JJ3788 اور نمبر 2018JJ3793) اور ہنان ہیلتھ کمیشن کا پروجیکٹ (نمبر C2019173)۔ ڈاکٹر ییبو ہو نے مطالعہ کا مرکزی حصہ انجام دیا اور مخطوطہ لکھا۔ پروفیسر جینگ چن اور چنگھائی زینگ نے مطالعہ کو ڈیزائن کیا اور مخطوطہ تحریر کی رہنمائی کی۔ پروفیسر جنہوا ہوانگ، لیہوا ہوانگ، اور ہانگ ژیانگ نے تکنیکی مدد فراہم کی اور ڈیٹا کا تجزیہ کیا۔ ڈاکٹر Yixiao Li، Ling Jiang، Yujie Ouyang، Yumeng Li، Lun Yang، اور Xiaojiao Zhao نے تجربات کے حصے میں حصہ لیا۔

مفادات کا تصادم

مصنفین اس بات کی تصدیق کرتے ہیں کہ دلچسپی کا کوئی تنازعہ نہیں ہے۔

ڈیٹا کی دستیابی کا بیان

اس مطالعہ کے نتائج کی حمایت کرنے والا ڈیٹا متعلقہ مصنف سے معقول درخواست پر دستیاب ہے۔

حوالہ جات

1. بلیوئل آر، ایبرلین بی. وٹیلگو کا علاج معالجہ۔ J Dtsch Dermatol Ges. 2018؛ 16:1309-1313۔

2. طیب اے، مورنٹ جے ایم۔ کیا ہمیں وٹیلگو کے انتظام میں نفسیاتی مداخلتوں کو ترجیح دینی چاہئے؟ J Eur Acad Dermatol Venereol. 2018؛ 32:2053-2054۔

3. Picardo M، Dell'Anna ML، Ezzedine K، et al. وٹیلگو. نیٹ ریو ڈس پرائمرز۔ 2015؛ 1:15011۔

4. Slominski A, Tobin DJ, Shibahara S, Wortsman J. Melanin pigmentation in mamalian skin and hermonal regulation. فزیول Rev. 2004؛ 84:1155-1228۔

5. Slominski A، Zmijewski MA، Pawelek J. L-tyrosine اور L-dihydroxyphenylalanine جیسے melanocyte کے افعال کے ہارمون نما ریگولیٹرز۔ پگمنٹ سیل میلانوما ریس۔ 2012؛25:14-27۔

6. اسپرٹز RA. مشترکہ جینیاتی تعلقات جن میں عمومی وٹیلگو اور آٹو امیون تھائیرائیڈ بیماری شامل ہے۔ کنٹھ. 2010؛ 20:745-754۔

7. لن ایکس، تانگ ایل وائی، فو ڈبلیو ڈبلیو، کانگ کے ایف۔ چین میں بچپن کے وٹیلگو: 620 کیسوں میں کلینیکل پروفائلز اور امیونولوجیکل نتائج۔ ایم جے کلین ڈرمیٹول۔ 2011؛12:277-281۔

8. Boehncke WH، Brembilla NC. سوزش والی جلد کی بیماریوں میں خودکار T-Lymphocytes۔ فرنٹ امیونول۔ 2019؛ 10:1198۔

9. Iannella G، Greco A، Didona D، et al. وٹیلگو: روگجنن، طبی مختلف حالتیں، اور علاج کے طریقے۔ Autoimmun Rev. 2016;15:335-343۔

10. Forrester SJ، Kikuchi DS، Hernandes MS، et al. میٹابولک اور سوزش سگنلنگ میں رد عمل آکسیجن پرجاتیوں. سرک Res. 2018؛122:877-902۔

11. Denat L، Kadekaro AL، Marrot L، et al. میلانوسائٹس بھڑکانے والے اور آکسیڈیٹیو تناؤ کے شکار کے طور پر۔ جے انویسٹ ڈرمیٹول۔ 2014؛ 134:1512-1518۔

12. Qiu L, Song Z, Setaluri V. Oxidative stress and vitiligo: the Nrf2-ARE

سگنلنگ کنکشن جے انویسٹ ڈرمیٹول۔ 2014؛ 134:2074-2076۔

13. Hayes JD، Dinkova-Kostova AT. Nrf2 ریگولیٹری نیٹ ورک ریڈوکس اور انٹرمیڈیری میٹابولزم کے درمیان ایک انٹرفیس فراہم کرتا ہے۔ ٹرینڈز بائیو کیم سائنس۔ 2014؛39:199-218۔

14. Marrot L، Jones C، Perez P، Meunier JR. Nrf2 کی اہمیت

انسانی ایپیڈرمس کے میلانوسائٹس اور کیراٹینوسائٹس میں (تصویر) آکسیڈیٹیو تناؤ کے ردعمل کا راستہ۔ پگمنٹ سیل میلانوما ریس۔ 2008؛21:79-88۔

15. وین گیل این، سپیککارٹ آر، مولیٹ I، وغیرہ۔ ویوو وٹیلگو انڈکشن اور تھراپی ماڈل میں: ایک ڈبل بلائنڈ، بے ترتیب طبی آزمائش۔ پگمنٹ سیل میلانوما ریس۔ 2012؛25:57-65۔

16. Nicolaidou E، Antonio C، Stratigos A، Katsambas AD. وٹیلیگو کے علاج میں نارو بینڈ الٹرا وائلٹ بی فوٹو تھراپی اور 308- این ایم ایکسائمر لیزر: ایک جائزہ۔ جے ایم اکیڈ ڈرمیٹول۔ 2009؛60:470-477۔

17. نوواک زیڈ، بونس بی، بالٹاس ای، وغیرہ۔ زینون کلورائد الٹرا وایلیٹ بی لیزر

چنبل کے علاج میں اور تنگ بینڈ الٹرا وائلٹ B. J Photochem Photobiol B Biol کے مقابلے T سیل اپوپٹوس دلانے میں زیادہ موثر ہے۔ 2002؛67:32-38۔

18. Xu P, Su S, Tan C, et al. Eclipse herba، Polygoni multiflora radix preparator، اور rehmanniae radix preparator melanogenesis اور انسانی melanocytes کی منتقلی کے پانی کے عرق کے اثرات۔ جے ایتھنوفرماکول۔ 2017؛ 195:89-95۔

19. وانگ ٹی، ژانگ ایکس، ژی ڈبلیو۔Cistanche deserticolaYC Ma، "Desertginseng": ایک جائزہ۔ ایم جے چن میڈ۔ 2012؛40:1123-1141۔

20. Guo Y، Cao L، Zhao Q، et al. ابتدائی خصوصیات، اینٹی آکسیڈینٹ اور ہیپاٹوپروٹیکٹو سرگرمیپولی سیکرائیڈسےCistanche deserticola. انٹ جے بائیول میکرومول۔ 2016؛93:678-685۔

21. Cai RL، Yang MH، Shi Y، et al. سے phenylethanoid امیر نچوڑ کی antifatigue سرگرمیCistanche deserticola. Phytother Res. 2010؛ 24:313-315۔

22. Zhang H، Xiang Z، Duan X، et al. سے oligosaccharides کے antitumor اور سوزش کے اثراتCistanche deserticolaریڑھ کی ہڈی کی چوٹ پر نچوڑ۔ انٹ جے بائیول میکرومول۔ 2019؛ 124:360-367۔

23. لیو وائی، وانگ ایچ، یانگ ایم، وغیرہ۔Cistanche deserticola پولی سیکرائڈزPC12 سیلز کو OGD/RP سے متاثر ہونے والی چوٹ سے بچائیں۔ بایومیڈ فارماکوتھر۔ 2018؛99:671-680۔

24. گانا D، Cao Z، Liu Z، et al.Cistanche deserticola پولی سیکرائیڈRANKL سگنلنگ اور ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں کی پیداوار کو روکنے کے ذریعے آسٹیو کلاسٹوجینیسیس اور ہڈیوں کی ریزورپشن کو کم کرتا ہے۔ جے سیل فزیول۔ 2018؛233:9674-9684۔

25. فو سی، چن جے، لو جے، وغیرہ۔ TUG1 کی کمی کو میلانوجینیسیس اور UVB کی حوصلہ افزائی میلانوجینیسیس کو فروغ دیتا ہے۔ Exp Dermatol. 2019؛ 28:730-733۔

26. Johannessen CM, Johnson LA, Piccioni F, et al. میلانوسائٹ نسب پروگرام ایم اے پی کناز پاتھ وے کی روک تھام کے خلاف مزاحمت فراہم کرتا ہے۔ فطرت 2013؛504:138-142۔

27. Vachtenheim J، Borovansky J. میلانوسائٹس میں روغن کی تشکیل کی "ٹرانسکرپشن فزیالوجی": MITF کا مرکزی کردار۔ Exp Dermatol. 2010؛ 19:617-627۔

28. یو این، ژانگ ایس، زوو ایف، وغیرہ۔ مہذب انسانی میلانوسائٹس کا اظہار فنکشنل ٹول نما رسیپٹرز 2–4، 7 اور 9۔ J Dermatol Sci. 2009؛56:113-120۔

29. آہن جے ایچ، پارک ٹی جے، جن ایس ایچ، کانگ ایچ وائی۔ انسانی میلانوسائٹس فنکشنل ٹول نما رسیپٹر کا اظہار کرتے ہیں۔ 4۔ Exp Dermatol۔ 2008؛ 17:412-417۔

30. ریڈ ایس جی، کارٹر ڈی، کیسپر سی، وغیرہ۔ GLA خاندان کے معاونین کی سرگرمیوں کا ارتباط۔ سیمین امیونول۔ 2018؛39:22-29۔

31. Guo MZ، Meng M، Feng CC، et al. ایک ناولپولی سیکرائیڈCraterellus cornucopioides سے حاصل کردہ TLR4-NF-kappaB پاتھ وے کے ضابطے کے ذریعے مدافعتی چوہوں کے ماڈلز میں مدافعتی سرگرمی کو بڑھاتا ہے۔ فوڈ فنکشن۔ 2019؛ 10(8):4792-4801۔

32. Wei W, Xiao HT, Bao WR, et al. TLR-4 Astragalus کے سگنلنگ پاتھ ویز میں ثالثی کر سکتا ہے۔پولی سیکرائیڈRAP نے RAW264.7 خلیوں کا سائٹوکائن اظہار حوصلہ افزائی کیا۔ جے ایتھنوفرماکول۔ 2016؛ 179:243-252۔

33. چن ایچ، یانگ ڈی، ہان ایف، وغیرہ۔ بیکٹیریل T6SS انفیکٹر EvpP Ca(2 پلس) پر منحصر MAPK-Jnk پاتھ وے کو روک کر NLRP3 کی سوزش کے عمل کو روکتا ہے۔ سیل ہوسٹ مائکروب۔ 2017؛21:47-58۔

34. Levy M, Shapiro H, Thaiss CA, Elinav E. NLRP6: ایک کثیر جہتی ان نیٹ امیون سینسر۔ رجحانات Immunol. 2017؛38:248-260۔

35. چن وائی ایس، چن کیو زیڈ، وانگ زیڈ جے، ہوا سی۔ گانوڈرما لوسیڈم کے اینٹی سوزش اور ہیپاٹو پروٹیکٹیو اثرات۔پولی سیکرائڈزکنمنگ چوہوں میں کاربن ٹیٹرا کلورائیڈ سے متاثرہ جگر کی چوٹ کے خلاف۔ فارماکولوجی. 2019؛ 103:143-150۔

36. تیان زیڈ، لیو وائی، یانگ بی، وغیرہ۔ Astragalusپولی سیکرائیڈNLRP3 سوزش کی روک تھام کے ذریعے مورین کولائٹس کو کم کرتا ہے۔ پلانٹا میڈ۔ 2017؛83:70-77۔

37. جیانگ ایل، ہوانگ جے، لو جے، وغیرہ۔ Ganoderma lucidumپولی سیکرائیڈIL-6/STAT3/FGF2 راستے کے ذریعے keratinocytes اور fibroblasts کے paracrine اثرات کو روک کر melanogenesis کو کم کرتا ہے۔ جے سیل فزیول۔ 2019؛ 234:22799-22808۔

38. Cai ZN، Li W، محمود ایس، وغیرہ۔ کا اثرپولی سیکرائیڈB16F10 خلیات اور زیبرا فش میں میلانوجینیسیس پر مورچیلا ایسکولینٹا سے FMP-1۔ فوڈ فنکشن۔ 2018؛9:5007-5015۔

39. Zhang C, Li Z, Zhang CY, et al. سالماتی خصوصیات، اور حیاتیاتی سرگرمیاںپولی سیکرائڈزالفالفا (Medicago sativa L.) سے۔ غذائی اجزاء۔ 2019؛ 11:1181۔

40. Coconi Linares N, Di Falco M, Benoit-Gelber I, et al. ٹریس اجزاء کی موجودگی Aspergillus niger کے مالیکیولر ردعمل کو گوار گم میں نمایاں طور پر وسیع کرتی ہے۔ نئی بائیو ٹیکنالوجی۔ 2019؛51:57-66۔

41. ما ایچ، ژانگ کے، جیانگ کیو، وغیرہ۔ پودوں کی خصوصیتپولی سیکرائڈزڈینڈروبیم آفسینال سے متعدد کرومیٹوگرافک اور ماس سپیکٹرو میٹرک تکنیکوں کے ذریعے۔ J Chromatogr A. 2018;1547:29-36۔

42. ڈونگ کیو، یاو جے، فینگ جے این، ڈنگ کے۔ ٹھنڈے پانی سے نکالے جانے والے دو کی ساختی خصوصیات اور مدافعتی سرگرمیپولی سیکرائڈزسےCistanche deserticolaوائی ​​سی ایم اے کاربوہائیڈر ریس 2007؛342:1343-1349۔

43. Slominski AT، Zmijewski MA، Plonka PM، et al. UV روشنی جلد کے ذریعے دماغ اور اینڈوکرائن سسٹم کو کیسے چھوتی ہے، اور کیوں۔ اینڈو کرائنولوجی۔ 2018؛ 159:1992-2007۔

44. شالکے ایس. ہائپر پگمنٹیشن عوارض پر نیا ڈیٹا۔ J Eur Acad Dermatol Venereol. 2017;31(ضمیمہ 5):18-21۔

45. گلاس مین ایس جے۔ وٹیلگو، رد عمل آکسیجن پرجاتیوں، اور ٹی سیلز۔ Clin Sci. 2011؛120:99-120۔

46. ​​Ristow M. اینٹی آکسیڈنٹس کے بارے میں سچائی کا پردہ فاش کرنا: mitohormesis ROS کی حوصلہ افزائی سے صحت کے فوائد کی وضاحت کرتا ہے۔ نیٹ میڈ. 2014؛20:709-711۔

47. Balogun E, Hoque M, Gong P, et al. کرکومین ہیم آکسیجنز-1 جین کو Nrf2 کے ضابطے اور اینٹی آکسیڈینٹ-ریسپانسیو عنصر کے ذریعے فعال کرتا ہے۔ بائیو کیم جے 2003؛ 371:887-895۔

48. Paine A، Eiz-Vesper B، Blasczyk R، Immenschuh S. سگنلنگ

ہیم آکسیجنز-1 اور اس کی سوزش کے علاج کی صلاحیت۔

بائیو کیم فارماکول۔ 2010؛80:1895-1903۔

49. Slominski A، Paus R، Schadendorf D. Melanocytes epidermis میں "حسی" اور ریگولیٹری خلیات کے طور پر۔ جے تھیور بائیول۔ 1993؛164:103-120۔

50. Slominski RM، Zmijewski MA، Slominski AT. میلانوما میں میلانین روغن کا کردار۔ Exp Dermatol. 2015؛24:258-259۔

51. Slominski A, Kim TK, Brozyna AA, et al. میلانوما رویے کے ضابطے میں میلانوجینیسیس کا کردار: میلانوجینیسیس HIF-1الفا اظہار اور HIF پر منحصر اٹینڈنٹ راستوں کی تحریک کا باعث بنتا ہے۔ آرک بایوکیم بایوفیس۔ 2014؛563:79-93۔