ذیابیطس نیفروپیتھی چوہوں میں فیروپٹوسس پر پولیگونا پولیساکروز کے اثرات

مطلوبہ الفاظ:ذیابیطس نیفروپتی;پولی گونا پولی سیکروز; ferroptosis; ٹرانسفرین FTH1; GPX4

 

ذیابیطس نیفروپیتھی(DN) کی ایک سنگین مائکرو واسکولر پیچیدگی ہے۔ذیابیطس mellitus[1] ڈی این ایک سنجیدہ ہے۔ذیابیطس کی مائکرو واسکولر پیچیدگیمیلیٹس [1]، عام طور پر ابتدائی مراحل میں مائیکرو البومینوریا کے طور پر پیش ہوتا ہے، اس کے بعد ابتدائی مرحلے کی ترقی پسند نشوونما عام طور پر مائیکرو البیومینوریا کے ساتھ پیش آتی ہے، اس کے بعد بڑے پیمانے پر پروٹینوریا کی ترقی پذیر نشوونما، گلوومیرولر فلٹریشن کی شرح میں بتدریج کمی، اور خون میں کریٹینائن میں مسلسل اضافہ ہوتا ہے۔ ] کریٹینائن میں ترقی پسند اضافہ[2]۔ اگر علاج نہ کیا جائے تو یہ بیماری دائمی بیماری کا باعث بن سکتی ہے۔ اگر علاج نہ کیا جائے تو یہ دائمی ترقی پسند گردوں کو نقصان پہنچا سکتا ہے اور آخر کار آخری مرحلے کی بیماری کا باعث بن سکتا ہے۔ اگر علاج نہ کیا جائے تو یہ دائمی ترقی پسند گردے کی چوٹ اور آخر میں آخری مرحلے میں گردوں کی ناکامی کا باعث بن سکتا ہے[3]۔ لوہے کی موت لوہے کی موت غیر سیر شدہ فیٹی ایسڈ کا لوہے پر منحصر جمع ہے آئرن کی موت غیر سیر شدہ فیٹی ایسڈ فاسفولیپڈ آکسیڈیشن کا لوہے پر منحصر جمع ہے جو خلیوں کی موت کا باعث بنتی ہے، بنیادی طور پر آئرن کی موت کا بنیادی مظہر آئرن پر انحصار کا جمع ہونا ہے۔ انٹرا سیلولر لپڈ پیرو آکسائیڈز[4]۔ [4] مطالعہ یہ پایا گیا ہے کہ گردوں کے نلی نما اپکلا سیل کی چوٹ کا لوہے کی موت سے گہرا تعلق ہے[5]۔ وانگ وغیرہ۔

وانگ ایٹ ال [6] نے پایا کہ رینل ٹیوبلر انٹرسٹیشل (GPX4) اظہار میں glutathione peroxidase 4 (GPX4) اظہار کا DN بیماری کی شدت اور بڑھنے سے گہرا تعلق ہے۔ GPX4، آئرن ڈیتھ پروگرام کو متحرک کرنے کے لیے ایک اہم ہدف کے طور پر، آکسیڈیٹیو تناؤ اور سیل ڈیتھ سگنلنگ کا ایک سینسر ہے، اور GPX4 اظہار میں کمی لائیو GPX4 اظہار میں نمایاں اضافہ کا باعث بنتی ہے، جس کے نتیجے میں جسم میں لائیو آکسیجن میں نمایاں اضافہ ہوتا ہے[ 7]۔ . لہذا، لوہے کی موت کے ریگولیشن کے ذریعے رینل نلی نما اپیٹیلیل سیل کی موت کی روک تھام اس لیے، ڈی این رینل انجری کو کم کرنے کے لیے آئرن ڈیتھ کے ریگولیشن کے ذریعے رینل ٹیوبلر اپیتھیلیل سیل ڈیتھ کی روک تھام ڈی این کے علاج کے لیے ایک موثر حکمت عملی ہو سکتی ہے لہذا، رینل ٹیوبلر کی روک تھام۔ لوہے کی موت کے ضابطے کے ذریعے اپیٹیلیل سیل کی موت ڈی این کے علاج کے لئے ایک موثر حکمت عملی ہوسکتی ہے۔
دیپولی سیکرائیڈکیC. فلیوسسب سے زیادہ پرچر اور اہم فارماسولوجیکل ہے یہ C. flavus کے سب سے زیادہ پرچر اور اہم فارماسولوجیکل اجزاء میں سے ایک ہے۔ تجرباتی مطالعہ سے پتہ چلا ہے کہ یہ DN کے گردوں کے کام کو بہتر بنانے اور سوزش کے ردعمل کو کم کرنے میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ لی وغیرہ[8]۔ لی وغیرہ[9]۔ لی ایٹ ال[9] نے پایا کہ C. flavus polysaccharide کی مداخلت نے ذیابیطس کے چوہوں میں گلوکولیپڈ میٹابولزم کی خرابیوں اور انسولین کی رواداری کو نمایاں طور پر بہتر کیا۔ لی وغیرہ۔ ایک اور تحقیق سے پتا چلا ہے کہ پیلے رنگ کے ایکسٹریکٹ پولی سیکرائیڈ کی مداخلت کے بعد ذیابیطس نیفروپیتھی والے چوہوں کی گلوکوز، 24 گھنٹے گلوکوز اور انسولین کی رواداری میں نمایاں بہتری آئی ہے۔ ایک اور تحقیق سے پتا چلا ہے کہ Fructus flavus polysaccharide کی مداخلت کے بعد ذیابیطس nephropathy ماڈل چوہوں میں خون میں گلوکوز، 24-h یورین مائیکرو البومین، بلڈ کریٹینائن (SCr) اور بلڈ یوریا نائٹروجن (BUN) نمایاں طور پر بہتر ہوئے ہیں۔ اور خون میں یوریا نائٹروجن (BUN) کی سطح کو ذیابیطس نیفروپیتھی ماڈل میں نمایاں طور پر کم کیا گیا تھا[10]۔ Flos Chrysanthemi سے polysaccharide کے ساتھ DN کا علاج تاہم، اس کی کارروائی کا مخصوص طریقہ کار واضح نہیں ہے۔ لہذا، موجودہ اس مطالعہ میں، ایک اعلی چکنائی والی خوراک کو اسٹریپٹوزوٹوسن (STZ) انجیکشن کے ساتھ مل کر DN چوہا ماڈل قائم کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔
لہذا، اس مطالعہ میں، ہم نے اسٹریپٹوزوٹوسن (STZ) انجیکشن کے ساتھ مل کر زیادہ چکنائی والی خوراک کے ذریعے ایک DN چوہا ماڈل قائم کیا، اور چوہوں میں لوہے کی موت پر C. flavus polysaccharide کے اثر کا مشاہدہ کیا۔ لہذا، موجودہ مطالعہ اسٹریپٹوزوٹوسن (STZ) انجیکشن کے ساتھ مل کر زیادہ چکنائی والی خوراک کے ساتھ کھلایا جانے والے چوہوں میں آئرن کی موت پر C. flavus polysaccharide کے اثر کا مشاہدہ کرنے اور DN پر C. flavus polysaccharide کے عمل کے طریقہ کار کو واضح کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔

مواد اور طریقے
1.1 جانور
(200±20) جی کے جسمانی وزن کے ساتھ پچاس صحت مند نر SD چوہوں کو انسٹی ٹیوٹ آف ریڈیولوجی، چائنیز اکیڈمی آف میڈیکل سائنسز، بیجنگ، چین میں درجہ حرارت پر 12-گھنٹہ ہلکے سیاہ چکر کے تحت رکھا گیا تھا۔ (25±2) ڈگری اور نسبتاً نمی (50±15) فیصد، اور فیڈ ایڈ لیبٹم۔ زیادہ چینی اور زیادہ چکنائی والی خوراک (10 فیصد سور کی چربی، 20 فیصد سوکروز، 2.5 فیصد کولیسٹرول، 67.5 فیصد روایتی خوراک)، (4.8 فیصد چکنائی، 20 فیصد پروٹین اور 59.4 فیصد کل شوگر)، بیجنگ ہوافوکانگ بائیو ٹیکنالوجی کمپنی نے اس تجربے کی منظوری دی تھی۔ کانگزو ہسپتال آف انٹیگریٹیو میڈیسن (CZX2022-KY-023)۔

1.2 دوا اور تیاری
پولی سیکرائیڈکیفلوس ایسٹراگلس(پاکیزگی 70 فیصد، بیچ نمبر S27804)، Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd. کو بالترتیب 200، 800 mg/mL کے ارتکاز میں نمکین کے ساتھ تیار کیا گیا تھا۔ 800 ملی گرام / ایم ایل حل۔ Irbesartan گولیاں (لاٹ 8A411)، Sanofi (Hangzhou) فارماسیوٹیکل کمپنی (Hangzhou) فارماسیوٹیکل کمپنی، لمیٹڈ کو نمکین میں 30 mg/mL پر تیار کیا گیا تھا۔ حل

 

1.3 اہم ری ایجنٹس اور آلات
پیشاب کا پروٹین (بیچ نمبر C035-2-1)، SCr (بیچ نمبر C011-2-1)، BUN (بیچ نمبر C013-2-1) BUN (بیچ نمبر C013-2-1)، میلونڈیالڈہائیڈ ( MDA، بیچ نمبر C003-1- 2)، glutathione (GSH، لاٹ C006-2-1)، کل آئرن کا مواد (بیچ نمبر A039-2-1)، نانجنگ جیانچینگ بائیولوجیکل انجینئرنگ ریسرچ انسٹی ٹیوٹ انسٹی ٹیوٹ آف بائیولوجیکل انجینئرنگ نانجنگ، چین؛ ٹرانسفرین (بیچ نمبر ab278498)، فیریٹین ٹرانسفرین (لاٹ ab278498)، فیریٹین ہیوی چین (FTH1، لاٹ ab75973)، GPX4 (لاٹ ab252833)، اور فیریٹین (لاٹ ab252833)۔ ab252833)، ایکٹین (لاٹ ab179467)، Abcam، UK۔ iMark680 ملٹی فنکشنل انزائم مارکر، Bio-Rad، USA۔ Fresco17 سینٹری فیوج، تھرمو، USA؛ 5810 بینچ ٹاپ منجمد سینٹری فیوج، ایپنڈورف، جرمنی؛ ABI Prism® 7500 fluorescence quantification Applied Biosystems, USA; DYCZ-24DN عمودی الیکٹروفورسس ٹینک، بیجنگ لیوئی انسٹرومنٹ فیکٹری، بیجنگ، چین؛ SH-523 chemiluminescence امیجنگ لمیٹڈ، Hangzhou Shenhua Technology Co.

 

1.4 ماڈلنگ، گروپ بندی اور منشیات کی انتظامیہ
انکولی فیڈنگ کے 1 ہفتہ کے بعد، 10 چوہوں کو تصادفی طور پر معمول کے طور پر منتخب کیا گیا باقی 40 چوہوں کو ڈی این چوہے کا ماڈل قائم کرنے کے لیے ادب کے طریقہ کار [11] کا حوالہ دیا گیا۔ چوہوں کو 7 ہفتوں تک زیادہ چینی اور زیادہ چکنائی والی خوراک دی گئی اور پھر پانی کے بغیر 12 گھنٹے تک روزہ رکھا گیا۔ چوہوں کو 7 ہفتوں تک زیادہ چینی اور زیادہ چکنائی والی خوراک کھلائی گئی، پھر 12 گھنٹے تک خوراک اور پانی کے ساتھ روزہ رکھا گیا۔ ایس ٹی زیڈ کو 30 ملی گرام / کلوگرام پر انٹراپریٹونی طور پر انجیکشن لگایا گیا تھا۔ 72 گھنٹے کے بعد، بے ترتیب خون میں گلوکوز کا پتہ لگانے کے لیے دم کی رگ سے خون جمع کیا گیا، اور 16.7 mmol/L سے زیادہ یا اس کے برابر خون میں گلوکوز کو ذیابیطس کی کامیاب ماڈلنگ سمجھا گیا۔ چوہوں کو 1 ہفتے تک زیادہ چینی اور زیادہ چکنائی والی خوراک دی گئی، اور میٹابولک کیج سے 24- گھنٹے کا پیشاب جمع کیا گیا۔

 

 

1.5.5 مغربی دھبہ پرکھ
گردے کے ٹشوز کو جمع کریں، 150 μL RIPA lysis بفر شامل کریں، homogenize پروٹین سپرنٹنٹ کو سینٹرفیوگریشن کے بعد برقرار رکھا گیا تھا۔ BCA پروٹین پرکھ کٹ کا استعمال کرتے ہوئے کل پروٹین کی حراستی کا تعین کیا گیا تھا۔ BCA پروٹین پرکھ کٹ کا استعمال کرکے کل پروٹین کی حراستی کا تعین کیا گیا تھا، اور پروٹین کی حراستی کو ہم آہنگ کیا گیا تھا۔ پروٹین کی مساوی مقدار 20 ug، 8 فیصد -12 فیصد SDS-PAGE پروٹین کو الگ کرنے کے لئے استعمال کیا گیا تھا، اور پروٹین کو منتقل کیا گیا تھا جھلیوں کو 5 فیصد سکمڈ دودھ پاؤڈر کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت پر 2 گھنٹے تک بند کر دیا گیا تھا۔ خرگوش اینٹی چوہا پرائمری اینٹی باڈی ٹرانسفرین (1:2 000)، FTH1 (1:3 000) اور GPX4 (1:3 000) شامل کیے گئے۔ 3،000)، GPX4 (1:3،000)، -ایکٹین (پتلا ہوا 1:5،000)، اور رات بھر 4 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔ رات بھر 4 ڈگری پر انکیوبیٹ کریں۔ جھلی کو دھویا گیا، ثانوی اینٹی باڈی (1:9 000) کو شامل کیا گیا اور کمرے کے درجہ حرارت پر 2 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ جھلیوں کو TBST سے دھویا گیا تھا، جسے ECL کیمیلومینیسینس نے تیار کیا تھا اور اس کا استعمال کرتے ہوئے پتہ چلا تھا۔
امیج جے سافٹ ویئر کو بینڈز کی گرے اسکیل ویلیو کا تجزیہ کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

 

1.6 شماریاتی طریقے
SPSS شماریات25۔{1}} شماریاتی سافٹ ویئر تجزیہ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ تجربہ نتائج کو xˉ±s کے طور پر ظاہر کیا گیا، اور تمام ڈیٹا کو نارملٹی اور chi-square کے لیے جانچا گیا۔ تمام ڈیٹا کو نارملٹی اور chi-square کے لیے ٹیسٹ کیا گیا، اور اگر وہ مطمئن تھے تو t-ٹیسٹ استعمال کیے گئے، اور نان پیرامیٹرک ٹیسٹ استعمال کیے گئے اگر وہ مطمئن نہیں تھے۔ پی<0.05 indicates that the difference is statistically significant.

 

2 نتائج
2.1 ماڈل چوہوں کے جسم کے بڑے پیمانے پر اور روزہ رکھنے والے خون میں گلوکوز پر Flavopiridium polysaccharide کے اثرات عام گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ میں چوہوں کے جسمانی وزن میں نمایاں کمی واقع ہوئی تھی (P<0.01) and FBG was significantly increased (P<0.01); compared with the model group, the body mass of rats in the positive drug group was significantly increased (P<0.05), and the differences in FBG of rats in each group were not statistically significant (P>0.05)۔ جدول 2 دیکھیں۔

2.2 ماڈل چوہوں کے رینل فنکشن انڈیکس پر Flavopiridium polysaccharide کے اثرات
عام گروپ کے مقابلے میں، ماڈل گروپ میں SCr، BUN کی سطح اور 24 گھنٹے پیشاب میں پروٹین کا مواد نمایاں طور پر زیادہ تھا (P<0.01); compared with the model group, the Cr, BUN level and 24 h urine protein content of rats in the positive drug group and the high dose group of Flavopiridium polysaccharide were significantly lower (P<0.05, P<0.01). See Table 3.

2.3 ماڈل چوہوں کے گردے کی ہسٹوپیتھولوجیکل مورفولوجی پر پیلے رنگ کے ایکسٹریکٹ پولی سیکرائیڈ کے اثرات
عام گروپ کے چوہوں کے گلوومیرولس اور نلی نما ڈھانچے میں کوئی اسامانیتا نہیں دکھائی دیتی تھی، اور تھائیلاکائیڈ جھلی اور تھائیلاکائیڈ اسٹروما پھیل نہیں رہے تھے، اور نہ ہی کوئی سوزشی خلیوں کی دراندازی، وغیرہ۔ ماڈل ماڈل چوہوں میں، فوکل نلی نما انحطاط اور ایٹروفی کا مشاہدہ کیا گیا، اور گلوومیرولر تہہ خانے کی جھلی قدرے تھی ماڈل گروپ کے چوہوں نے فوکل نلی نما انحطاط اور ایٹروفی، قدرے گاڑھا ہوا گلوومیریلر تہہ خانے کی جھلی، تھائیلکائیڈ ہائپرپلاسیا، اور چکنائی کی کمی کو ظاہر کیا۔ نلیاں ہر دوائی انتظامیہ گروپ میں چوہوں نے کم گھاووں کو ظاہر کیا، اور مثبت منشیات کے گروپ اور Flavopiridium polysaccharide کی زیادہ خوراک میں بہتری زیادہ واضح تھی۔ مثبت منشیات کے گروپ اور Flavopiridium polysaccharide کی زیادہ مقدار میں بہتری زیادہ واضح تھی۔ تصویر 1 دیکھیں۔