وٹرو میں ایسٹروجن ریسیپٹرز کے معاون کے طور پر Cistanche Deserticola سے Glycosides کی Estrogenic سرگرمی

رابطہ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ای میل:audrey.hu@wecistanche.com

ہوئی سونگ، وین لان لی، ژیانگ منگ سن، یانگ ہو، جِنگ ژِن ڈنگ، یو بن جی، جینگ یا وانگ

تعارف

Cistanche deserticola(چینی زبان میں "رو کانگ رونگ")، ایک روایتی چینی جڑی بوٹیوں کی دوا جو پہلی بار ShenNongBenCaoJing میں ریکارڈ کی گئی تھی، ہزاروں سالوں سے گردوں کی کمی، نامردی، بوڑھے قبض، اور خون کی کمی کے علاج کے لیے استعمال ہوتی رہی ہے۔[1] یہ بنیادی طور پر شمال مغربی چین کے صحرائی علاقوں جیسے گانسو اور سنکیانگ میں تقسیم کیا جاتا ہے۔[2] فارماکولوجی کی جدید تحقیق نے ثابت کیا کہ C. deserticola وسیع پیمانے پر دواؤں کے افعال کو آگے بڑھا سکتا ہے، جیسے کہ ہارمون ریگولیشن، امیونوموڈولیٹری، اینٹی آکسیڈیٹیو، نیورو پروٹیکٹو، اینٹی سوزش، اور ایسٹروجینک سرگرمی۔ مختلف حیاتیاتی اثرات کے ساتھ اہم فعال اجزاء[5,6]

ایسٹروجن ریسیپٹرز‑ (ERs‑) اور ER ERs کی ذیلی قسمیں ہیں جو جسمانی افعال کو منظم کر سکتی ہیں۔[7] یہ پروٹین سیل نیوکلئس میں منسلک ڈی این اے ریگولیٹری ترتیب کے پابند ہو کر ہدف کے جین کی نقل کو منظم کر سکتے ہیں۔ دونوں ذیلی قسمیں قلبی اور مرکزی اعصابی نظاموں میں واضح طور پر ظاہر ہوتی ہیں۔ ER بنیادی طور پر پروسٹیٹ، بیضہ دانی اور مثانے میں موجود ہوتا ہے۔[10,11] مزید یہ کہ دو ذیلی قسموں کے لیے کچھ مشترکہ جسمانی کردار ہیں، جیسے رحم کی نشوونما اور کام اور قلبی نظام کے تحفظ میں۔ [12,13] ہمارے گروپ میں پچھلی تحقیق نے میٹابولومک تجزیہ کے طریقہ کار سے GCs کے ایسٹروجینک جیسا طریقہ کار کا انکشاف کیا تھا۔ ایک مسلسل مطالعہ میں، ہم نے ERs سے متعلق MCF-7 سیل لائنوں پر GCs کی ایسٹروجینک سرگرمی کے طریقہ کار کا تجزیہ کیا۔

مواد اور طریقے

آلات

ECO-170P-230 انکیوبیٹر نیو برنسوک سائنٹیفک (چائنا) کمپنی، لمیٹڈ، بائیو راڈ 680 مائیکرو پلیٹ ریڈر سے تھا، اور الیکٹروفورسس اپریٹس Bio-Rad لیبارٹریز، انکارپوریٹڈ سے تھا، CX21 مائکروسکوپ Olympus Co., Ltd. سے تھا۔ , GIS‑2019 جیل امیجنگ سسٹم Tanon Science and Technology Co., Ltd. سے تھا، فلیٹ نیچے کی پلیٹ کارننگ انکارپوریٹڈ کی تھی، EPICS‑XL فلو سائٹومیٹری بیک مین-کولٹر انکارپوریشن کی تھی، اور StepOnePlus ریئل ٹائم پولیمریز چین ری ایکشن (PCR) سسٹم تھرمو فشر سائنٹیفک کا تھا۔

کیمیکل اور ری ایجنٹس

GCs ہماری لیبارٹری میں تیار کیے گئے تھے جیسا کہ پہلے بتایا گیا طریقہ تھا، [14] اور الٹرا وائلٹ اسپیکٹرو فوٹومیٹری کے ذریعے GCs کی پاکیزگی 52 فیصد (جی سی کے تعین کے لیے ایکٹیوسائیڈ کو مارکر کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا) کا تعین کیا گیا تھا۔ Estradiol (E2) Yuanye Biotechnology Co., Ltd. (شنگھائی، چین) سے خریدا گیا تھا۔ فیٹل بوائین سیرم (FBS) اور RPMI-1640 Gibco Co., Ltd. سے تھے، 96‑well فلیٹ نیچے پلیٹ کارننگ انکارپوریٹڈ سے تھی، اور dimethyl سلفوکسائیڈ (DMSO) اور 3‑[4,5‑dimethyl‑2‑thiazolyl ]‑2,5‑diphenyltetrazolium bromide (MTT) سگما-الڈرچ کارپوریشن سے خریدا گیا تھا۔ TRIzol ریجنٹ، ریورس ٹرانسکرپشن (RT) کٹ، اور TB Green™ RT‑PCR کٹ TaKaRa Co., Ltd., Dalian, China سے خریدے گئے تھے۔ اینٹی-ER Rabbit pAb، anti-ER Rabbit pAb، اور ‑ایکٹین اینٹی باڈیز وانلی بائیو ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ سے خریدے گئے تھے۔ دیگر تمام عام کیمیکل معیاری تجارتی سپلائرز سے خریدے گئے تھے۔

نمونے کی تیاری

Cistanches اسٹاک محلول کے glycosides کی تیاری

GCs اقتباس کو DMSO میں تحلیل کیا گیا تاکہ 0.1051 g/ml کے ارتکاز کے ساتھ اسٹاک حل بنایا جا سکے اور اسے 4 ڈگری پر ذخیرہ کیا جا سکے۔ فینول ریڈ فری RPMI-1640 استعمال کرنے سے پہلے اسٹاک کے حل کو مختلف ارتکاز میں پتلا کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

ایسٹراڈیول اسٹاک حل کی تیاری

E2 اقتباس کو DMSO میں تحلیل کیا گیا تاکہ 0.27 mg/ml کے ارتکاز کے ساتھ اسٹاک حل بنایا جا سکے اور اسے 4 ڈگری پر ذخیرہ کیا جا سکے۔ فینول ریڈ فری RPMI-1640 استعمال کرنے سے پہلے اسٹاک کے حل کو مختلف ارتکاز میں پتلا کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

چارکول ڈیکسٹران ٹریٹڈ جنین بوائین سیرم کی تیاری

ایف بی ایس کے سینکڑوں ملی لیٹر کو 250 ملی گرام ایکٹیویٹڈ چارکول پاؤڈر اور 25 ملی گرام ڈیکسٹران کے ساتھ ملایا گیا۔ 55 ڈگری پر 45 منٹ تک انکیوبیٹ کرنے کے بعد، مرکب کو 4 ڈگری، 1000 rpm پر 15 منٹ کے لیے سینٹرفیوج کیا گیا۔ چارکول ڈیکسٹران ٹریٹڈ (CDT) ‑FBS حاصل کرنے کے لیے ملی پور ایکسپریس PES جھلی کا استعمال کرتے ہوئے سپرنٹنٹ کو فلٹر کیا گیا اور اسے −20 ڈگری پر محفوظ کیا گیا۔

سیل کلچر

انسانی چھاتی کا کینسر MCF-7 سیل لائنیں امریکن ٹائپ کلچر کلیکشن (ATCC) سے حاصل کی گئیں۔ مزید برآں، خلیات کو RPMI-1640 میڈیم کے ساتھ کلچر کیا گیا تھا جس میں 10 فیصد FBS اور 1 فیصد پینسلین-اسٹریپٹومائسن 37 ڈگری پر مرطوب 5 فیصد CO2 ماحول میں تھا۔ MTT پرکھ سے 4 دن پہلے فینول ریڈ فری RPMI‑1640 میڈیم میں سیلز کو کلچر کیا گیا تھا جس میں 5 فیصد CDT-FBS ہوتا ہے تاکہ خلیوں میں ایسٹروجن کو صاف کیا جائے۔

MCF-7 سیل لائنوں پر ایسٹراڈیول کے سیل پھیلاؤ کا تجزیہ

سیل کے پھیلاؤ کو MCF‑7 خلیوں کے لیے MTT پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا تھا۔ }}.1، 1، 10، 100، اور 1000 nM۔ MCF-7 سیل لائنوں کو فینول ریڈ فری RPMI-1640 میڈیم میں 4 دن کے لیے کلچر کیا گیا تھا۔ فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS) سے تین بار دھونے کے بعد، 100 µL FBS-free RPMI-1640 میڈیم کو 1.5 × 104 فی کنویں کے حساب سے 96‑ ویل پلیٹوں میں شامل کیا گیا اور 37 ڈگری پر 24 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، خلیوں کا علاج E2 محلول کی مختلف تعداد میں 72 گھنٹے تک کیا گیا۔ پھر، ہر کنویں میں 100 µL MTT محلول (0.5 mg/mL) شامل کیا گیا۔ خلیوں کو 4 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ آخر میں، فارمازان کرسٹل کو تحلیل کرنے کے لیے DMSO کا 150 µL شامل کیا گیا۔ مائکروپلیٹ ریڈر کے ذریعہ جذب کی پیمائش 570 nm پر کی گئی تھی ، اور پھیلاؤ کی شرح (PR) کا حساب لگایا گیا تھا۔

MCF-7 سیل لائنوں پر Cistanches کے glycosides کے سیل کے پھیلاؤ کا تجزیہ

سیل کے پھیلاؤ کو MCF-7 خلیوں کے لئے MTT پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ GCs کو RPMI‑1640 کلچر میڈیا میں تحلیل کر دیا گیا تھا جس میں 0.1 فیصد DMSO 0 کی آخری ارتکاز میں تھا۔{29}}175, 0.175, 1.75, 17.5, اور 175 µg /ml MCF-7 سیل لائنوں کو فینول ریڈ فری RPMI-1640 میڈیم میں کلچر کیا گیا تھا جس میں 4 دن کے لیے 5 فیصد CDT-FBS تھا۔ PBS کی طرف سے تین بار دھونے کے بعد، 100 µL FBS-free RPMI‑1640 میڈیم کو 1.5 × 104 فی کنواں کے حساب سے 96‑ ویل پلیٹوں میں شامل کیا گیا اور 24 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، خلیوں کو بالترتیب 24، 48، اور 72 گھنٹے کے لئے GCs حل کی مختلف حراستی کے ساتھ علاج کیا گیا۔ پھر، ہر کنویں میں 100 µL MTT محلول (0.5 mg/mL) شامل کیا گیا۔ خلیوں کو 4 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ آخر میں، فارمازان کرسٹل کو تحلیل کرنے کے لیے DMSO کا 150 µL شامل کیا گیا۔ مائکروپلیٹ ریڈر کے ذریعہ جذب کو 570 nm پر ماپا گیا تھا ، اور PR کا حساب لگایا گیا تھا۔ فینول ریڈ فری RPMI‑1640 اور E2 پر مشتمل میڈیم (2.725 × 10−3 µg/ml) بالترتیب منفی اور مثبت گروپ تھے۔

MCF-7 سیل لائنوں پر fulvestrant کے ساتھ Cistanches کے glycosides کے سیل کے پھیلاؤ کا تجزیہ

سیل کے پھیلاؤ کو MCF-7 خلیوں کے لئے MTT پرکھ کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ GCs کو RPMI‑1640 کلچر میڈیا میں تحلیل کر دیا گیا تھا جس میں 0.1 فیصد DMSO 1.75، 17.5، اور 175 µg/ml کی حتمی تعداد میں تھا۔ MCF-7 سیل لائنوں کو فینول ریڈ فری RPMI-1640 میڈیم میں کلچر کیا گیا تھا جس میں 4 دن کے لیے 5 فیصد CDT-FBS تھا۔ PBS کی طرف سے تین بار دھونے کے بعد، 100 µL FBS-free RPMI‑1640 میڈیم کو 1.5 × 104 فی کنواں کے حساب سے 96‑ ویل پلیٹوں میں شامل کیا گیا اور 24 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، خلیوں کا علاج GCs محلول کی مختلف ارتکاز کے ساتھ کیا گیا اور 48 گھنٹے کے لیے fulvestrant (6.06 × 10−5 µg/ml) کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ پھر، ہر کنویں میں 100 µL MTT محلول (0.5 mg/mL) شامل کیا گیا۔ خلیوں کو 4 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ آخر میں، فارمازان کرسٹل کو تحلیل کرنے کے لیے DMSO کا 150 µL شامل کیا گیا۔ مائکروپلیٹ ریڈر کے ذریعہ جذب کو 570 nm پر ماپا گیا تھا ، اور PR کا حساب لگایا گیا تھا۔ فینول ریڈ فری RPMI‑1640 اور E2 پر مشتمل میڈیم (2.725 × 10−3 µg/ml) بالترتیب منفی اور مثبت گروپ تھے۔

سیل سائیکل پرکھ

GCs کو RPMI‑1640 کلچر میڈیا میں تحلیل کیا گیا تھا جس میں 0.1 فیصد DMSO 1.75، 17.5، اور 175 µg/ml کی حتمی تعداد میں تھا۔ MCF‑7‑سیل لائنوں کو فینول ریڈ فری RPMI‑1640 میڈیم میں 4 دنوں کے لیے 5 فیصد CDT‑FBS پر مشتمل کیا گیا تھا۔ PBS کی طرف سے تین بار دھونے کے بعد، 1 mL FBS-free RPMI‑1640 میڈیم کو 2.5 × 105 فی کنواں کے حساب سے 6 کنویں کی پلیٹوں میں شامل کیا گیا اور 24 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، خلیوں کا علاج GCs محلول کی مختلف ارتکاز کے ساتھ کیا گیا اور 48 گھنٹے کے لیے fulvestrant (6.06 × 10−5 µg/ml) کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، خلیات کو تین بار پی بی ایس کے ساتھ اکٹھا کیا گیا اور دھویا گیا، 10 منٹ کے لیے 4 ڈگری، 1000 آر پی ایم پر سینٹرفیوگ کیا گیا، اور راتوں رات −20 ڈگری پر 70 فیصد ایتھنول کے ساتھ طے کیا گیا۔ PBS سے دو بار دھونے کے بعد، خلیات کو PI محلول (50 mg/mL) سے داغ دیا گیا تھا جس میں 1 mg/mL RNase A اور 0.1 فیصد Triton X‑100 30 منٹ کے لیے 4 ڈگری پر اندھیرے میں تھا۔ سیل سائیکل کا پتہ فلو سائٹوومیٹری کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا، اور پھیلاؤ انڈیکس (PI) کا حساب درج ذیل کیا گیا تھا۔ فینول ریڈ فری RPMI‑1640 اور E2 پر مشتمل میڈیم (2.725 × 10−3 µg/ml) بالترتیب منفی اور مثبت گروپ تھے۔ PI=(S جمع G2 M)/(G0 /G1 پلس S جمع G2 M) × 100 فیصد

آر این اے تنہائی اور اصل وقتی مقداری پولیمریز چین رد عمل کا تجزیہ

mRNA کی سطح کی پیمائش کرنے کے لیے، ایک RT- مقداری PCR (qPCR) پرکھ استعمال کیا گیا تھا۔ کل سیلولر آر این اے کو TRIzol ری ایجنٹ کے ساتھ نکالا گیا تھا۔ qPCR کے لیے، RNA کو RT کٹ کا استعمال کرتے ہوئے کل RNA کے 4 µg سے cDNA میں الٹا نقل کیا گیا تھا۔ RT‑PCR تجزیہ TB Green™ RT‑PCR کٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ تمام پروٹوکول کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق انجام دیئے گئے تھے۔ ER کو بڑھاوا دینے کے لیے استعمال ہونے والا پرائمر جوڑا 5'‑GGGAAGTATGGCTATGGAATCTG‑3' (آگے) اور 5'‑TGGCTGGACACATATAGTCGTT‑3' (ریورس) تھا۔ ER کو بڑھاوا دینے کے لیے استعمال ہونے والا پرائمر جوڑا 5'‑AGTGCCGCTCTTGGAGAGCTG‑3' (آگے) اور 5'‑CCTGGGTCGCTGTGACCAGA‑3' (الٹا) تھا۔ ER اور ER کے لیے PCR حالات 3 منٹ کے لیے 94 ڈگری تھے اس کے بعد بالترتیب 37 اور 40 سائیکل، 30 سیکنڈ کے لیے 94 ڈگری، 2 منٹ کے لیے 58 ڈگری، اور 2 منٹ کے لیے 72 ڈگری۔ GAPDH کو بڑھاوا دینے کے لیے استعمال ہونے والا پرائمر جوڑا 5'‑GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT‑3' (آگے) اور 5'‑GGCTGTTGTCATACTTCATGG‑3' (الٹا) تھا۔ GAPDH کے لیے پی سی آر کے حالات 3 منٹ کے لیے 94 ڈگری تھے، اس کے بعد 30 سیکنڈ کے لیے 94 ڈگری کے 30 چکر، 2 منٹ کے لیے 58 ڈگری، اور 2 منٹ کے لیے 72 ڈگری تھے۔ ہر بار RT-qPCR تجربہ دو بار سے زیادہ دہرایا گیا۔ اس کے لیے GAPDH کو اندرونی کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا۔ کنٹرول خلیوں کے سلسلے میں ٹرانسفیکٹنٹس کے ER/ER کے متعلقہ جین اظہار کا حساب لگایا گیا: 2−(∆∆Ct)۔

مغربی دھبہ

ER اور ER پروٹین کے اظہار کا پتہ مغربی بلاٹ تجزیہ کے ذریعہ معمولی ترمیم کے ساتھ اطلاع شدہ طریقہ کے طور پر پایا گیا تھا۔ مختصراً، MCF-7 خلیات 6 کنویں کی پلیٹوں میں 2.5 × 105 سیل فی کنویں پر اگائے گئے اور بالترتیب 48 گھنٹے کے لیے 1.75، 17.5، اور 175 µg/ml کی حتمی حراستی پر GCs کے ساتھ علاج کیا گیا۔ انکیوبیشن کے بعد، پورے سیل کے نچوڑ کو RIPA بفر کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا تھا جس میں 1 mM PMSF تھا۔ پورے خلیے کے نچوڑ میں پروٹین کو 12 فیصد سوڈیم ڈوڈیسائل سلفیٹ پولی کریلامائڈ جیل الیکٹروفورسس کے ذریعے الگ کیا گیا اور پھر پولی وینیلائیڈین ڈائی فلورائیڈ جھلیوں میں منتقل کر دیا گیا۔ اس جھلی کو ٹی بی ایس ٹی بفر میں 5 فیصد (w/v) سکم دودھ کے ساتھ مسدود کیا گیا تھا اور بدلے میں پرائمری اور سیکنڈری اینٹی باڈیز کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ پابند اینٹی باڈیز دیکھی گئیں۔

شماریاتی تجزیہ

نتائج کو ذرائع اور معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا، اور SPSS 21{1}} سافٹ ویئر (IBM Co., Ltd. America) کے ساتھ اسٹوڈنٹ کے ٹی-ٹیسٹ کا استعمال کرتے ہوئے شماریاتی اہمیت کو انجام دیا گیا تھا۔ پی<0.05 was="" considered="" statistically="">

نتائج

E2 علاج کے 24 گھنٹے کے بعد، MCF-7 خلیوں کے پھیلاؤ میں واضح طور پر اضافہ کیا گیا تھا [شکل 1a]۔ E2 محلول کا 10nM ظاہری طور پر خلیوں کی نشوونما کو متحرک کر سکتا ہے (123.89 فیصد)۔ تاہم، E2 کی حراستی میں اضافے کے ساتھ، سیل کے پھیلاؤ کی صلاحیت کمزور ہو گئی۔ لہذا، 10nM اس تجربے میں E2 کی زیادہ سے زیادہ حراستی تھی۔

1.75، 17.5، اور 175 µg/mg کی ارتکاز میں GCs گروپ وقت اور خوراک پر منحصر انداز کے ساتھ MCF-7 سیل لائنوں کے پھیلاؤ کو بڑھا سکتا ہے اور منفی گروپ [شکل 1b] کے ساتھ نمایاں فرق ظاہر کر سکتا ہے۔ منفی گروپ کے مقابلے میں، E2 گروپ نے واضح پھیلاؤ (120.06 فیصد) ظاہر کیا۔

CDT-FBS میڈیم میں مشترکہ دوائیوں کا گروپ (CMG) (E2 یا GCs کے ساتھ فلوسٹرینٹ) MCF-4 خلیوں کے ساتھ تیار کیا گیا تھا۔ انکیوبیشن کے 72 گھنٹے کے بعد، CMG انفرادی دوائیوں کے گروپ (IMG) (P < 0.01)="" [شکل="" 1c]="" کے="" مقابلے="" پی="" آر="" کے="" مائل="" کا="" باعث="" بن="" سکتا="">

فلو سائٹومیٹری تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ GCs PI قدر میں قدرے اضافہ کر سکتا ہے جس سے پتہ چلتا ہے کہ GCs G{{0}}/G1 فیز سیلز کو S اور G2/M فیز [شکل 2 اور ٹیبل 1] تک بڑھا سکتے ہیں اور سیل ڈی این اے کو فروغ دے سکتے ہیں۔ ترکیب نتیجہ یہ بتاتا ہے کہ MCF-7 پر GCs کا طریقہ کار E2 سے ملتا جلتا تھا۔ CMG میں (GCs کے ساتھ fulvestrant)، سیل PI کی PI قدر قدرے IMG کے مقابلے میں کم ہو گئی تھی (P <>

RT‑PCR تجزیہ نے اشارہ کیا کہ ER اور ER mRNA کے تاثرات کو کنٹرول گروپ (P < 0.01) کے مقابلے میں خوراک پر منحصر انداز میں GCs کے مختلف ارتکاز سے 48 گھنٹے تک علاج کیے جانے کے بعد بڑھایا گیا تھا [شکل 3a اور b]۔

مغربی دھبے کا نتیجہ یہ بتاتا ہے کہ 48 گھنٹے تک GCs کے مختلف ارتکاز کے ساتھ علاج کے بعد، MCF-7 میں ER اور ER پروٹین کے مواد میں GCs کے ساتھ خوراک پر منحصر انداز میں اضافہ ہوتا ہے [شکل 3c‑e]

نتیجہ

اس تحقیق میں، MCF-7 کے پھیلاؤ اور سیل سائیکل پر GCs کے اثر کو بالترتیب MTT اور فلو cytometry کے طریقہ کار سے جانچا گیا۔ GCs 1.75، 17.5، اور 175 µg/ml کے 72 گھنٹے تک انکیوبیٹ کرنے کے بعد MCF-7 خلیوں کے پھیلاؤ کو بڑھا سکتے ہیں۔ تاہم، جب CCs اور fulvestrant کو ایک ساتھ استعمال کیا گیا تو یہ اضافہ کم ہو جاتا ہے۔ GCs MCF-7 سیلز کی PI قدر بڑھا سکتے ہیں، G1 فیز کے سیل کو کم کر سکتے ہیں، اور S اور G2 فیز کے سیل کو بڑھا سکتے ہیں۔

Fulvestrant ایک ER-مخصوص مخالف ہے، جو رسیپٹر ڈائمرائزیشن اور توانائی پر منحصر نیوکلیئر ٹرانسپورٹ کو خراب کر کے ER کے جوہری لوکلائزیشن کو روکتا ہے۔[17] اس تحقیق میں، ایک نتیجے نے اس بات کی تصدیق کی ہے کہ fulvestrant MCF-7 خلیوں پر GCs کے پھیلاؤ کو کمزور کر سکتا ہے، اور یہ سیل سائیکل کی تبدیلی کو متاثر کر سکتا ہے۔ لہذا، اس مطالعہ نے GCs کی ایسٹروجینک سرگرمی کی نشاندہی کی، اور یہ بھی، ER GCs کا ہدف ہے۔ RT-PCR اور ویسٹرن بلاٹ تجربے میں، MCF-7 خلیات میں ER اور ER کے mRNA اور پروٹین کے اظہار میں GCs کے ارتکاز میں اضافہ کے ساتھ اضافہ ہوا۔ لہذا، GCs upregulated mRNA اور ER اور ER کے پروٹین کے مطابق ایسٹروجینک سرگرمی میں کردار ادا کر سکتے ہیں۔