کاسمیٹک ایپلی کیشنز کے لیے ایکویئس پلسڈ الیکٹرک فیلڈز کی مدد سے نکالے جانے والے آئس لینڈی سمندری غذا کے نچوڑوں کی ممکنہ تلاش کرنا حصہ 2

از راہ کرم رابطہ کریںoscar.xiao@wecistanche.comمزید معلومات کے لیے

2.5.4 Hyaluronidase کی روک تھام کی سرگرمی

سمندری سوار کے تمام نچوڑ نمایاں طور پر زیادہ دکھائے گئے۔اینٹی hyaluronidaseسرگرمی (ٹیبل 4)، ٹینک ایسڈ کے حل (ہائیلورونیڈیس کا ایک معروف روکنے والا) کے مقابلے کے نتائج دکھاتا ہے۔ خاص طور پر، A.esculenta کے نچوڑ نے جانچے گئے تمام طریقوں کے لیے 100 فیصد روکنا ظاہر کیا۔ مزید برآں، U. Lactuca کے عرقوں نے 90 فیصد سے زیادہ روک تھام کی سرگرمیاں ظاہر کیں، جہاں PEF (96.8 فیصد) اور PEF پلس HW (97.3 فیصد) کے امتزاج سے پیدا ہونے والے عرق کی روک تھام روایتی گرم پانی سے پیدا ہونے والی روک تھام سے زیادہ تھی۔ طریقہ 93.4 فیصد) (p<0.05). all="" p.palmaria="" extracts="" exhibited="" similar="" activities="" (p=""><0.05), the="" inhibition="" of="" the="" extracts="" produced="" by="" pef="" was="" (91.9="" %)="" and="" the="" combination="" of="" pef+="" hw="" (89.5%)="" and="" the="" traditional="" hot="" water="" method="">

مزید جاننے کے لیے براہ کرم یہاں کلک کریں۔

دیگر مصنفین نے بھی مختلف سمندری سواروں کے عرقوں کی اینٹی ہائیلورونیڈیز سرگرمی کو بیان کیا، خاص طور پرفلوروٹاننزبھوری طحالب [73,74] سے۔ تاہم، ہماری بہترین معلومات کے مطابق، یہ پہلا موقع ہے کہ پی ای ایف کے ذریعہ تیار کردہ P. palmitate اور U.lactuca کے عرقوں کی hyaluronidase روکنے والی سرگرمیوں کی اطلاع ملی ہے۔

Cistanche قوت مدافعت کو بہتر بنا سکتا ہے۔

Hyaluronic ایسڈ ڈرمس کا ایک بڑا جز ہے، جہاں یہ ٹشو کی مرمت میں شامل ہوتا ہے، یہ عمر بڑھنے کے ساتھ ٹوٹ جاتا ہے، جس سے جھریاں پڑ جاتی ہیں اور جلد کی مضبوطی ختم ہو جاتی ہے۔ اس لحاظ سے، hyaluronidase inhibitors عمر بڑھنے کی ظاہری شکل کو بہتر بنانے کے لیے dermal extracellular میٹرکس کے hyaluronic ایسڈ کی سطح کو بڑھاتے ہیں۔چہرے کی جلد[13]۔ لہذا، اس مطالعہ کے نتائج کاسمیٹک مصنوعات میں ممکنہ استعمال کے ساتھ طحالب کے وسائل سے قدرتی hyaluronidase inhibitors کے استحصال کے لیے نئی راہیں کھول سکتے ہیں۔

خلاصہ طور پر، جمع کردہ اعداد و شمار نے ہمیں یہ نتیجہ اخذ کرنے کی اجازت دی کہ A.esculenta کے نچوڑوں نے P.palmaria اور U. Lactuca کے مقابلے میں مجموعی طور پر بہتر روک تھام کرنے والی سرگرمیوں کی نمائش کی ہے۔ اس طرح، بہترین کے ساتھ سب سے زیادہ امید افزا سمندری سوار کی نسل ہے۔اینٹی انزیمیٹکسرگرمیاں اور اس لیے اسے ہماری لیبارٹری میں مزید مطالعات کے لیے منتخب کیا گیا۔ اگرچہ A.esculenta کے خام نچوڑ وٹرو تجربات میں اچھے امیدوار دکھائی دیتے ہیں، تاہم ان حیاتیاتی اثرات کے ذمہ دار میٹابولائٹس کی شناخت کو واضح کرنے کے لیے مزید مطالعات کی ضرورت ہے۔

2.6.کیمیائی مرکبات اور حیاتیاتی خصوصیات کے درمیان ارتباط

پرنسپل اجزاء کے تجزیہ (PCA) کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ گروپوں کی بنیادی علیحدگی PC1 اور PC2 کے ذریعہ بیان کی گئی تھی، جس میں اعداد و شمار میں بالترتیب 71.9 فیصد اور 14.5 فیصد فرق ہے (شکل 2)۔ A.esculenta کے نچوڑوں میں flavonoids اور phenolic مرکبات کے اعلیٰ مواد، انزائمز (collagenase، tyrosinase اور elastase) پر روکنے والے اثرات، اور DPPH اور FRAP کی قدریں، دوسری پرجاتیوں، P. palmata اور Ul کے مقابلے میں نمایاں تھیں۔ لیکٹوکا۔ دوسری طرف، A.esculenta میں کاربوہائیڈریٹ کا مواد کم تھا، خاص طور پر P. palmitate (جو PC1 کے مخالف سمت میں واقع تھا) کے مقابلے میں۔ PC2 کے ساتھ ساتھ ڈیٹا میں فرق بنیادی طور پر ABTS اور سے متعلق تھا۔hyaluronidaseروکنا جیسا کہ پلاٹ کے مقام سے اشارہ کیا گیا ہے، P. palmata کا ABTS سے زیادہ مضبوط تعلق تھا جبکہ U. Lactuca کاhyaluronidaseان دو پرجاتیوں کے مقابلے میں روک تھام کے اثرات۔

ٹی پی سی، ٹی ایف سی، ڈی پی پی ایچ، ایف آر اے پی، اور کولیگنیس، ایلسٹیز، اور پر روکے اثرات کے درمیان ایک اعلی اور اہم مثبت تعلق۔ٹائروسینیزپیئرسن ارتباطی تجزیہ (ٹیبل 5) کے ذریعہ ظاہر کیا گیا تھا۔

تصویر 2. پرنسپل جزو تجزیہ (PCA) فیکٹر لوڈنگ (سیاہ دائرے) کا بائپلٹ اور طحالب کے نچوڑ کے اسکور (P. palmata: بھورے نقطے (اوپری دائیں)؛ U. Lactuca: سبز مثلث (بنیادی طور پر اوپری بائیں میں)؛ A esculenta: نیلے چوکور (پلاٹ کا نچلا حصہ)۔

یہ پچھلے مطالعات کے ساتھ ایک معاہدے میں تھا، جس میں بتایا گیا تھا کہ فینولک مرکبات (بشمول فلیوونائڈز) مختلف سمندری جڑی بوٹیوں [75-77] کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی میں اہم شراکت دار ہیں۔ براؤن macroalgae کے نچوڑوں کی اعلیٰ اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کا تعلق پولی فینولز، فلوروٹاننز کے ایک مخصوص گروپ اور ان کی منفرد مالیکیولر ساخت سے ہے۔ بھوری طحالب سے تعلق رکھنے والے فلوروٹانس میں آٹھ تک ایک دوسرے سے جڑے فینول کے حلقے ہوتے ہیں جو الیکٹران کے جال کے طور پر کام کرتے ہیں [78,79]۔ یہ توقع کی جا رہی تھی کہ ABTs TPC، دیگر اینٹی آکسیڈینٹ پیرامیٹرز کے ساتھ منسلک ہوں گے۔ ممکنہ وجوہات یہ ہو سکتی ہیں کہ طریقے مختلف رد عمل کے حالات پر مبنی ہیں اور یہ کہ رد عمل وقت اور اجزاء کی حد دونوں کے حوالے سے مختلف ہے۔ مثال کے طور پر، ABTS ری ایجنٹ کی وسیع رینج کے ساتھ رد عمل ظاہر کرتا ہے۔اینٹی آکسیڈینٹڈی پی پی ایچ ریڈیکل [80] سے۔ دوسری طرف، ABTS کے لیے جن حدود کا ذکر کیا گیا ہے ان میں سے ایک لمبا ردعمل ہے اور عام ردعمل کا وقت اختتامی نقطہ تک پہنچنے کی اجازت نہیں دے سکتا ہے۔

نتائج بتاتے ہیں کہ TPC اور TFC کا کولیجینیز، ایلسٹیس، اور ٹائروسینیز ({{0}}۔93-0.99) کی روک تھام کی سرگرمی سے اعلیٰ مثبت تعلق ہے، جبکہ روک تھام سے تعلق hyaluronidase اتنا مضبوط نہیں تھا (بالترتیب r=0.42 اور 0.54)۔ اس سے ظاہر ہوتا ہے کہ دوسرے اجزاء نے نچوڑ کے روکنے والے اثر میں حصہ ڈالا ہے۔ دیگر مطالعات میں بتایا گیا ہے کہ پولی سیکرائڈز میں ہائیلورونیڈیز روکنے والی سرگرمی ہوتی ہے، مثال کے طور پر بھوری طحالب میں الجنیک ایسڈ [81,82]۔ انزائم پر الگ تھلگ مرکبات کے اثرات کے لیے میکروالجی پرجاتیوں کی کیمیائی ساخت کے بارے میں مزید مطالعات کی ضرورت ہے تاکہ ہر کیمیائی جزو کی شراکت کا اندازہ لگایا جا سکے جیسا کہ اس مطالعے میں خام نچوڑ پر توجہ دی گئی تھی۔

نتائج پچھلے مطالعات کے ساتھ ہم آہنگ تھے، یہ بتاتے ہوئے کہ کیمیائی ساخت اور نچوڑ کی حیاتیاتی سرگرمی کی سطح تین نسبوں (سرخ، سبز اور بھوری طحالب) کے درمیان اور ایک ہی فیلم سے تعلق رکھنے والی مختلف انواع کے درمیان نمایاں طور پر مختلف ہوتی ہیں اور عمر سے متاثر ہوتی ہیں۔ اور ٹشو کی قسم. مزید برآں، ساخت اور خصوصیات کا انحصار بہت سے ماحولیاتی عوامل پر ہوتا ہے جو میکروالگی کی تقسیم اور نشوونما کو متاثر کرتے ہیں۔ مثال کے طور پر، روشنی (UV-تابکاری)، درجہ حرارت، غذائی اجزاء کی دستیابی، ہوا کی نمائش، پانی کی حرکت، لہر کی نمائش، اور نمکیات۔ درجہ حرارت کو ایک ایسے عنصر کے طور پر بیان کیا گیا ہے جو روغن کی تشکیل اور غذائی اجزاء کے ارتکاز، نمکیات، اور UV تابکاری پر سب سے مضبوط اثرات مرتب کرتا ہے جو TPC [83] کے ارتکاز کو متاثر کرنے والے عوامل ہیں۔

مختلف macroalgae پرجاتیوں کی تقسیم پانی کی گہرائی کے ساتھ مختلف ہوتی ہے۔ انٹر ٹائیڈل یا لیٹورل زون میں ساحل سے اونچی پوزیشنیں زیادہ تناؤ کا شکار ہوتی ہیں کیونکہ وہاں بڑھنے والی انواع کو سمندری تبدیلیوں کی وجہ سے ابیوٹک عوامل میں متعدد تبدیلیوں کا سامنا کرنا پڑتا ہے۔ مثال کے طور پر، ہوا کا خشک ہونے والا اثر، زیادہ شمسی شعاعیں (کم جوار پر)، نمکیات اور درجہ حرارت میں تبدیلی اور ہوا کے کم درجہ حرارت کے حالات میں، بشمول منجمد ہونا۔ کم پانی کے نشان کے نیچے، گہرائی میں اضافے کے نتیجے میں روشنی کی شدت میں بہت تیزی سے کمی واقع ہوتی ہے اور شعاع ریزی کی کم نمائش ہوتی ہے۔

سمندری حدود میں اگنے والے طحالب میں UV تابکاری کی حساسیت کم ہوتی ہے اور وہ شمسی دباؤ سے زیادہ تیزی سے صحت یاب ہوتے ہیں۔ جبکہ ذیلی زون میں اگنے والی طحالب UV تابکاری کے لیے زیادہ حساس ہوتی ہیں اور شمسی دباؤ سے کم بحالی ہوتی ہیں[84]۔ ایک ہی وقت میں، پانی کا کالم تحفظ فراہم کرتا ہے. موجودہ مطالعہ میں، سورج کی روشنی کی نمائش P. palmata کے لیے دیگر انواع کے مقابلے میں غالباً زیادہ مضبوط تھی۔ دیگر مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ MAAs کی تشکیل کا براہ راست تعلق سورج کی روشنی سے ہے [85]، جو حیاتیات کو UV-A اور UV-B تابکاری سے بچاتا ہے۔ مزید برآں، یہ دکھایا گیا کہ MAAs کی مخصوص مقدار جمع کرنے کی گہرائی میں اضافے کے ساتھ کم ہوئی۔ کیلپس جیسے کہ A.esculenta، اوپری ذیلی خطہ میں بڑھنے کے لیے جانا جاتا ہے لیکن یہ کم آبی نشان کے بالکل اوپر سب سے نچلی سطح تک پھیل جاتا ہے۔ مطلب پانی کے کالم نے P.palmata کے مقابلے میں زیادہ مضبوط تحفظ فراہم کیا۔ اس کے علاوہ، مورفولوجیکل خصوصیات مختلف ہیں، A.esculenta کے بلیڈ دیگر دو پرجاتیوں کے مقابلے میں زیادہ موٹے ہیں۔ UI Lactuca، بنیادی طور پر انٹر ٹائیڈل اور sublittoral میں اگنے والی روشنی سنتھیسائز کرنے اور بہت کم شعاعوں کے تحت بڑھنے کے قابل ہے۔ UVB روشنی کی نمائش U. Lactuca کے فوٹو سنتھیٹک پیرامیٹرز کی UVA روشنی کے منفی اثرات سے بازیافت کو تیز کرنے کے لیے کہا گیا ہے۔ یہ A.esculenta (5-7 vear) اور P. palmata دونوں سے چھوٹا، ساخت میں آسان، اور کم عمر (3 ماہ) ہے جس کی ہر سال نئی نشوونما ہوتی ہے۔

خلاصہ طور پر، یہ مفروضے اخذ کیے جا سکتے ہیں کہ نچوڑ کی خصوصیات میں بنیادی فرق زندگی کے دورانیے، مورفولوجیکل خصوصیات، اور طحالب کی انواع کی نشوونما کے حالات ہیں۔

3. مواد اور طریقے 3.1.مواد

آئس لینڈی سمندری سوار U.lactuca (سبز طحالب)، A.esculenta (بھوری طحالب)، اور P. palmitate (سرخ طحالب) آئس لینڈ کے نیلے رنگ کے mussels اور سمندری سوار کے ذریعے فراہم کیے گئے تھے، جو Breidafjordur (مغربی آئس لینڈ) میں سمندری گھاس کاٹتے تھے۔ کٹائی کے بعد سمندری سواروں کو خشک کیا گیا (تقریباً 90 فیصد خشک مواد تک)، مل کر، اور ویکیوم پیک کے ذریعے پہنچایا گیا۔ نمونے استعمال ہونے تک کمرے کے درجہ حرارت پر خشک اور تاریک جگہ پر رکھے گئے تھے۔

مشروم سے ٹائروسینیز، L-3،4-ڈائی ہائیڈروکسی فینیلالینین (L-DOPA)، پورسائن لبلبے سے ایلسٹیس، ascorbic ایسڈ، N-Succinyl-Ala-Ala-P-nitroanilide (AAAPVN)، hyaluronidase سے بوائین ٹیسٹس، کوئرسیٹن، ٹوکوفیرول، ٹینک ایسڈ، 2،2-ڈفینائل-1-پکریل ہائیڈرزائل(DPPH)،24،6-Tripyridyl-s-Triazine (TPTZ)، Trolox، Folin-Ciocalteu ریجنٹ، گیلک ایسڈ، اور ایک کولیجینیز ایکٹیویٹی کلوریمیٹرک پرکھ کٹ (MAK293) Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA) سے خریدی گئی تھی۔ Hyaluronic ایسڈ سوڈیم نمک MakingCosmetics (Redmond, WA, USA) سے خریدا گیا تھا۔ استعمال ہونے والے دیگر تمام کیمیکلز اور ری ایجنٹس تجزیاتی درجہ کے تھے اور وی ڈبلیو آر انٹرنیشنل، ایل ایل سی سے حاصل کیے گئے تھے۔ ڈیونائزڈ پانی (ElixEssential, Merck, Darmstadt, Germany) کو پانی پر مبنی حل نکالنے اور تیار کرنے کے لیے استعمال کیا جاتا تھا۔

3.2 تجرباتی نمونہ

Icelandicseaweedspecies (U.lactuca, A.esculenta, P. palmata) اور نکالنے کے علاج (گرم پانی نکالنے (HW, 95 ڈگری C)، PEF کی مدد سے نکالنے (PEF) اور اس کے امتزاج کے اثرات کا جائزہ لینے کے لیے ایک فیکٹریل ڈیزائن استعمال کیا گیا تھا۔ دونوں تکنیکیں (PEF پلس HW)، ایکسٹریکٹ کمپوزیشن اور بائیو ایکٹیویٹی (ٹیبل 6) پر نکالی گئی ہر گروپ کے لیے ٹرپلیکیٹ میں نکالی گئی اور ہر اقتباس کی نقل کو سہ رخی میں تجزیہ کیا گیا۔

3.3 آئس لینڈ کے سمندری سواروں سے بائیو ایکٹیو کا اخراج

مختلف سطحوں پر میکروالگل بایوماس کے استحصال نے سائنس دانوں کو سبز نکالنے کے طریقوں پر مبنی، زیادہ ماحول دوست، موثر، اور کم لاگت نکالنے کی تکنیکوں کو تلاش کرنے کی ترغیب دی ہے۔ اس کام میں، پی ای ایف کی معاونت سے نکالنے کا جائزہ فنکشنل نچوڑ پیدا کرنے کے لیے ایک نئے اور سبز طریقہ کے طور پر کیا گیا، جبکہ مقابلے کے لیے روایتی گرم پانی نکالنے کا استعمال کیا گیا۔ مزید برآں، دونوں تکنیکوں کے امتزاج کے اثرات، میکروالگی کا پی ای ایف علاج جس کے بعد روایتی گرم پانی نکالنا، بائیو ایکٹیو ریکوری پر مطالعہ کیا گیا۔ جسمانی علاج کے بعد سیل کی جھلیوں میں متوقع الیکٹروپوریشن کی وجہ سے، گرم پانی کے ساتھ درج ذیل نکالنے سے انٹرا سیلولر مواد [86] کے اخراج میں مزید سہولت ہو سکتی ہے، جس سے نکالنے کی پیداوار میں اضافہ ہوتا ہے۔ مواد کو خلیات سے باہر پھیلانے کے لیے علاج کے بعد ایک وقت درکار ہوتا ہے [87,88]، اور اس تجربے میں، معطلیاں رات بھر انتظار کرتی رہیں جب تک کہ گودا سے مائع (ایکسٹریکٹ) الگ نہ ہو جائے۔

نکالنے کے درمیانے درجے کے بارے میں، زہریلا اور نامیاتی سالوینٹس کے استعمال سے متعلق حدود کو دور کرنے کے لیے سمندری سوار کے عرقوں کو تیار کرنے کے لیے آست پانی کا استعمال کیا جاتا تھا۔ سمندری سواروں [46,89-91] سے کئی حیاتیاتی مرکبات نکالنے کے لیے پانی ایک اچھا سالوینٹ ثابت ہوا اور یہ ماحول دوست ہے۔ اس کے علاوہ، پانی عام طور پر پی ای ایف کی مدد سے نکالنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے کیونکہ یہ بجلی کے لیے ایک اچھا کنڈکٹر ہے۔

3.3.1 نکالنے کے طریقہ کار

ہر گروپ میں ہر نقل کے لیے، سمندری سوار (15 گرام) کو رات بھر کمرے کے درجہ حرارت (22 ڈگری) پر ڈیونائزڈ پانی (300 ملی لیٹر) میں بھگو دیا گیا۔ پھر، معطلی کا علاج PEF (PEF)، گرم (HW)، یا PEF-علاج شدہ اور گرم (PEF پلس HW) سے کیا گیا۔ معطلیوں کو رات بھر ریفریجریٹر میں رکھا گیا تھا جس کے بعد موٹے （20 μm） فلٹر پیپر سے فلٹریشن کیا جاتا تھا۔ پھر فلٹریٹس (عرق) کو ان کے تجزیے تک 4 ڈگری پر محفوظ کیا گیا۔

پلس الیکٹرک فیلڈز کی مدد سے نکالنے کا کام گھر میں بنائے گئے پلس جنریٹر کے ذریعے کیا گیا۔ اس میں ایک FuGHCK-200-2000 capacitor (Fu.G.Elektronik GmbH, Rosenheim, Germany) اور اسپارک گیپ (18.5 kV OG75, Perkin-Elmer Optoelectronics, GMBH, Wiese-baden, Germany) تھا۔ PEF کے آلات نے 0.96 us کی چوڑائی اور 18 kV کے طول و عرض کے ساتھ ایکسپونینشل ڈیکی پلس تیار کیں۔ طول و عرض (L × H × W) 20 × 8 × 2.5 سینٹی میٹر کے ساتھ ایک plexiglass ٹریٹمنٹ چیمبر، پلیٹ الیکٹروڈ کے درمیان کم سے کم فاصلہ 10 منٹ کے لیے 1.2 Hz پر 8 kV/cm برقی فیلڈ کے ساتھ سسپنشن کے علاج کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ HW-extracts کو تھرموسٹیٹک واٹر باتھ میں بیکر میں سسپنشن کو گرم کرکے تیار کیا گیا تھا اور 45 منٹ تک 95 ڈگری پر رکھا گیا تھا۔ مشترکہ پلسڈ الیکٹرک فیلڈ اور ہیٹنگ ٹریٹمنٹ کے لیے، سسپنشنز کو PEF ٹریٹ کیا گیا اور پھر ایک بیکر میں رکھا گیا، پانی کے غسل میں گرم کیا گیا، اور 45 منٹ کے لیے 95 ڈگری پر رکھا گیا۔

3.3.2 چالکتا، پی ایچ، اور درجہ حرارت کی پیمائش

سمندری سواروں کی معطلی کی برقی چالکتا اور پی ایچ کو بھگونے کے بعد اور نکالنے کے علاج کے بعد، کمرے کے درجہ حرارت پر پی ایچ میٹر (اورین سٹار ٹی ایم اے 215 پی ایچ/ کنڈکٹیویٹی بینچ ٹاپ میٹر، تھرمو سائنٹیفک، والتھم، ایم اے، یو ایس اے) کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا۔ سینسر اور pH/ARC triode امتزاج الیکٹروڈ۔ مزید برآں، علاج کی وجہ سے درجہ حرارت میں تبدیلی ریکارڈ کی گئی۔

3.4 سمندری غذا کے عرق کے اسپیکٹرل پروفائلز

مختلف سمندری سواروں کے عرقوں کے UV-VIS جذب سپیکٹرا کو 200 سے 450 nm کی حد کے لیے ایک ڈبل بیم Thermo Scientific Evolution 350 UV-Vis Spectrophotometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) cuvetz1 cuvetz1cm کے ساتھ ناپا گیا۔ ہر سمندری سوار کے عرق کے لیے تین اسکین کیے گئے۔ 3.5 کل پولی فینولک مواد کا تعین

سمندری سواروں کے نچوڑ میں کل فینولک مواد (TPC) کا تعین Folin-Ciocalteu reagent کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا جو کہ Zhang [92] کے ذریعہ بیان کردہ قدرے ترمیم شدہ طریقہ پر عمل کرتے ہوئے ملٹیسکن اسکائی مائیکرو پلیٹ سپیکٹرو فوٹومیٹر (تھرمو فشر سائنٹیفک، والتھم، MA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ 20 μL سمندری سوار کے عرق یا سیریل معیاری محلول کو 100 μL Folin-Ciocalteu reagent （10 فیصد آست پانی میں） کے ساتھ ملایا گیا۔ 5 منٹ کے بعد، 7.5 فیصد (o/w) سوڈیم کاربونیٹ محلول کا 80 μL شامل کیا گیا۔ رد عمل کا مرکب کمرے کے درجہ حرارت اور تاریکی میں 30 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ جذب کی پیمائش 760 nm کی طول موج پر کی گئی تھی۔ آست پانی کو خالی کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ کل فینولک مواد کا تعین کرنے کے لئے گیلک ایسڈ کا ایک معیاری وکر استعمال کیا گیا تھا اور اسے گیلک ایسڈ کے مساوی کے ug کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ (GAE) فی گرام خشک مواد (ug GAE/g dw)۔

3.6۔ کل فلاوونائڈ مواد کا تعین

سمندری سوار کے عرقوں میں کل فلیوونائڈ مواد (TFC) کا تعین اس طریقہ سے کیا گیا تھا جو کامٹیکر 【93】 کے بیان کیا گیا تھا اور اسے 96-اچھی مائیکرو پلیٹس میں ڈھال لیا گیا تھا۔ مختصراً، سمندری سوار کے عرق کے 25 μL کے حجم یا سیریل معیاری محلول کو 100 μL سوڈیم نائٹریٹ （0.375 فیصد w/v） کے ساتھ ملایا گیا تھا۔ 5 منٹ کے بعد، 25 μL ایلومینیم کلورائد （3 فیصد w/v） کو مکسچر میں شامل کیا گیا اور کمرے کے درجہ حرارت پر 6 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس کے بعد، 100 یو ایل سوڈیم ہائیڈرو آکسائیڈ (2 فیصد w/v) مرکب میں شامل کیا گیا اور ملایا گیا۔ فوری طور پر، جذب کو 510 nm کی طول موج پر ماپا گیا۔ آست پانی اور ایتھنول کو خالی جگہوں کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ quercetin کا ​​ایک معیاری وکر (ایتھنول میں تحلیل) کل فینولک مواد کا تعین کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا اور اس کا اظہار ug of quercetin کے مساوی （QE） فی گرام خشک مواد（ug QE/g do） کے طور پر کیا گیا تھا۔ 3.7 کاربوہائیڈریٹ مواد کا تعین

مفت شکر کے مواد کو [94] کے بیان کردہ طریقہ کے مطابق ماپا گیا، معمولی ترمیم کے ساتھ۔ 50 μL فینول محلول （4 فیصد） اور 250 μL سلفرک ایسڈ（96 فیصد） کو 100μL نمونے یا معیاری محلول میں شامل کیا گیا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر انکیوبیشن کے 10 منٹ کے بعد، مرکب کی جاذبیت 490 nm پر پڑھی گئی۔ گلوکوز کا ایک معیاری وکر کل کاربوہائیڈریٹ مواد کا تعین کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا اور اسے ملی گرام گلوکوز کے مساوی (GluE) فی گرام خشک مواد (mg GluE/g dw) کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔

3.8۔ سمندری سواروں کے عرق کے اینٹی آکسیڈینٹ خواص

3.8.1.2,2 Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) فری ریڈیکل سکیوینگنگ پرکھ

سمندری سوار کے عرق کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی (DPPH) کا تعین پہلے بیان کردہ طریقہ کار 【94】 کے بعد کچھ ترمیم کے ساتھ کیا گیا تھا۔ مختصراً، 10.825×10-5M DPPH محلول کا 200 μL 100 μLof نمونہ （1∶1 میتھانول） میں ایک 96-کنویں پلیٹ میں شامل کیا گیا۔ ڈی پی پی ایچ کے اسی حجم کو 50μL معیاری پلس 50 μL میتھانول کے ساتھ ملایا گیا تھا۔ پھر نمونے اور معیار کو 30 منٹ کے لئے کمرے کے درجہ حرارت پر تاریک جگہ پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ جاذبیت کو 517 nm کی طول موج پر ماپا گیا۔ آست پانی کو خالی کے طور پر استعمال کیا جاتا تھا۔ DPPH ریڈیکل کو ختم کرنے کی صلاحیت کا حساب درج ذیل مساوات کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔

جہاں A کنٹرول کنٹرول کا جذب ہوتا ہے (بغیر نمونے کے DPPH حل)، A نمونہ ٹیسٹ کے نمونے کا جذب ہوتا ہے (DPPH حل پلس ٹیسٹ کا نمونہ)، A نمونہ خالی صرف نمونے کا جذب ہوتا ہے (ڈی پی پی ایچ حل کے بغیر نمونہ ) اور امیتھانول خالی صرف میتھانول کا جذب ہے۔ کمرشل اینٹی آکسیڈینٹس (ascorbic acid، gallic acid، اور -tocopherol) کو مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا۔

3.8.2 فیرک آئن کم کرنے والی اینٹی آکسیڈینٹ پاور (FRAP) پرکھ

FRAP سرگرمی کو بینزی اور سٹرین کے طریقہ کار کے مطابق ماپا گیا[95]۔ مختصراً، ایسیٹیٹ بفر (300 mM، pH3.6)، 2,4،6-tripyridyl-s-triazine(TPTZ)10 mM 40 mM HCl میں، اور FeCl3·6H2O(20 mM) کو تناسب میں ملایا گیا تھا۔ 10:1:1 کام کرنے والے FRAP ری ایجنٹ کو حاصل کرنے کے لیے۔ رد عمل کا مرکب 10 منٹ کے لئے 37C پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ ہر نچوڑ سے A50μL نمونہ کمرے کے درجہ حرارت پر 8 منٹ کے لیے 150μL ورکنگ FRAP محلول کے ساتھ ملایا گیا۔ رنگین مصنوعات کی جذب، فیرس-ٹی پی ٹی زیڈ کو 593 nm کی طول موج پر ماپا گیا۔ سمندری سواروں کے نچوڑوں کی FRAP اقدار کا اظہار μM ٹرولوکس مساوی （TE） فی گرام خشک مواد کے طور پر کیا گیا تھا۔

3.8.3.2,2 Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)(ABTS) Assay

تجزیہ کچھ ترمیم کے ساتھ ABTS decolorization پروٹوکول[76] کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ ایک ABTS ریڈیکل کیٹیشن (ABTS plus ) ABTS (66 mg) کو 10 mL پوٹاشیم پرسلفیٹ محلول (2.45 mM) کے ساتھ رد عمل ظاہر کر کے تیار کیا گیا تھا۔ مرکب کو کمرے کے درجہ حرارت پر اندھیرے میں 12-16 کے لیے چھوڑ دیا گیا تھا۔ استعمال سے پہلے h. ABTS پلس محلول کو 734 nm پر 0.700 کے جذب پر پانی سے پتلا کر دیا گیا۔ رد عمل کا مرکب (200 ul) ایک مائکروپلیٹ میں منتقل کیا گیا تھا، 50 uL نمونہ شامل کیا گیا تھا اور پھر 150 یو ایل ریجنٹ محلول شامل کیا گیا تھا۔ پلیٹ کو درمیانی رفتار سے 10 سیکنڈ تک ہلایا گیا، اور کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ انکیوبیشن کے بعد جاذبیت کی پیمائش 734 nm کی گئی۔ ٹرالوکس معیارات کے A734nm کی روک تھام کو ان کے ارتکاز کے کام کے طور پر تیار کرکے ایک معیاری وکر تیار کیا گیا تھا۔ نمونوں کی Trolox مساوی اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیت (TEAC) قدر کا حساب ہر نمونے کے لیے A734nm اقدار کے متبادل معیاری وکر کے لکیری ریگریشن سے حاصل کردہ مساوات کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا:

اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کا اظہار TEAC کی حراستی، umol/g خشک وزن طحالب کے لحاظ سے کیا گیا تھا۔

3.9 سمندری غذا کے عرق کی اینٹی انزیمیٹک سرگرمیاں 3.9.1۔ کولیجینیس روکنا پرکھ

سگما-الڈرچ سے خریدی گئی کولیجینیز ایکٹیویٹی کلوریمیٹرک پرکھ کٹ (MAK293)، سمندری سواروں کے عرقوں کے کولیجینیز کی روک تھام کے تعین کے لیے استعمال کی گئی تھی۔ کٹ نے ایک مصنوعی پیپٹائڈ (FALGPA) کا استعمال کرتے ہوئے کولیجنز کی سرگرمی کی پیمائش کی جو کولیجن کی ساخت کی نقل کرتی ہے۔ طریقہ کار کٹ کی ہدایات کے مطابق انجام دیا گیا تھا۔

3.9.2 Elastase روکنا پرکھ

TRIS بفر سلوشن میں سمندری سواروں کے نچوڑ کے ایلسٹیس کی روک تھام کی جانچ ترمیم شدہ طریقہ کے ساتھ کی گئی جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے 【96】۔ مختصراً، 1000.1 M TRISbuffer سلوشن کا μL （pH8.0）، 25 μL elastase（1 U/mL TRISbuffer میں） اور 25μL نمونے کے نچوڑ کو ملایا گیا تھا اور 15 منٹ کے لئے 3 پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ رد عمل شروع کرنے کے لیے سبسٹریٹ شامل کرنے سے پہلے C۔ انکیوبیشن ٹائم کے بعد، 2 mM AAAPVN محلول کا 50 uL شامل کیا گیا۔ اس کے بعد، 420nm پر جاذبیت کو 20 منٹ تک مائیکرو پلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے 30 سینٹی گریڈ کے مستقل درجہ حرارت میں مانیٹر کیا گیا۔ آخر میں، مساوات کا استعمال کرتے ہوئے فیصد میں elastase روکنا کا حساب لگایا گیا:

جہاں Abs کنٹرول inhibitor (سیمپل) کے بجائے بفر کا استعمال کرتے ہوئے پرکھ کا جذب ہے اور Abssample نمونے کے نچوڑوں کا جذب ہے۔ Quercetin ایک مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا. Tris بفر کو خالی کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔

3.9.3 ٹائروسینیز روکنا پرکھ

Tyrosinase inhibitory asay اس طریقہ کے مطابق انجام دیا گیا تھا جو پہلے بیان کیا گیا تھا 【66】 L-DOPA کو بطور سبسٹریٹ استعمال کرتے ہوئے۔ نمونے کا 20 μL، مشروم ٹائروسینیز محلول کا 10 μL （50 U/mL فاسفیٹ بفر） اور 80 μL فاسفیٹ بفر（pH =6.8） کو مائیکرو پلیٹ میں ملایا گیا تھا اور 73 ڈگری پر پری انکیوبیٹڈ کیا گیا تھا۔ 5 منٹ کے لیے پھر، L-DOPA کا 90 μL (2 mg/mL) شامل کیا گیا۔ ڈوپاکروم کی تشکیل کو فوری طور پر 475 nm پر مائکروپلیٹ ریڈر میں 37 ڈگری کے مستقل درجہ حرارت میں 20 منٹ تک مانیٹر کیا گیا۔ ٹائروسینیز انزائم کی فیصد روکنا مساوات کا استعمال کرتے ہوئے شمار کیا گیا تھا:

جہاں Abs کنٹرول inhibitor (سیمپل) کے بجائے بفر کا استعمال کرتے ہوئے پرکھ کا جذب ہے اور Abs نمونہ نمونے کے نچوڑ کا جذب ہے۔ Quercetin ایک مثبت کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا. فاسفیٹ بفر کو خالی کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔

3.9.4 Hyaluronidase inhibition Assay

Hyaluronidase روکنے والی سرگرمی کی پیمائش کی گئی تھی جیسا کہ پہلے [66] نے کچھ ترمیم کے ساتھ بیان کیا تھا۔ 100 ulof قسم-1-Sbovine testes hyaluronidase（2100 U/mL）0.1 M میں تحلیل ایسیٹیٹ بفر (pH 3.5) کو 100 μL نچوڑ کے ساتھ ملایا گیا اور 20 منٹ کے لئے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ رد عمل کے مرکب میں 200 μL 6mM کیلشیم کلورائد کا حجم شامل کیا گیا، اور پھر اس مرکب کو 20 منٹ کے لیے 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ اس Ca2 پلس ایکٹیویٹڈ hyaluronidase کا علاج 250 μL سوڈیم hyaluronate（1.2 mg/mL） کے ساتھ کیا گیا جو 0.1 M ایسیٹیٹ بفر (pH 3.5) میں تحلیل کیا گیا اور پھر 40min.0μLium 50m50dium کے لئے 37 ڈگری پر پانی کے غسل میں انکیوبیٹ کیا گیا۔ اور 100 μL 0.2 M سوڈیم بوریٹ کو رد عمل کے مرکب میں شامل کیا گیا، اور پھر 5 منٹ کے لیے ابلتے ہوئے پانی کے غسل میں ڈالا گیا۔ کمرے کے درجہ حرارت پر ٹھنڈا ہونے کے بعد، 250 μL p-dimethylaminobenzaldehvde （DAMB） محلول کو رد عمل کے مرکب میں شامل کیا گیا۔ ڈی اے ایم بی محلول 0.25 جی ڈی اے ایم بی کو 21.88 ملی لیٹر 100 فیصد ایسٹک ایسڈ اور 3.12 ملی لیٹر 10 این ہائیڈروکلورک ایسڈ میں تحلیل کرکے تیار کیا گیا تھا۔ کنٹرول گروپ کو نچوڑ کے بجائے 100μL 5 فیصد پانی سے علاج کیا گیا۔ جاذبیت کو 45 منٹ کے بعد 585 nm کی طول موج پر ماپا گیا۔ انزائم کی روک تھام کا فیصد درج ذیل مساوات کا استعمال کرتے ہوئے شمار کیا گیا تھا:

جہاں Abs کنٹرول inhibitor (سیمپل) کے بجائے بفر کا استعمال کرتے ہوئے پرکھ کا جذب ہے اور Abs نمونہ نمونے کے نچوڑ کا جذب ہے۔ ٹینک ایسڈ کو حوالہ معیار کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔

3.10 شماریاتی تجزیہ

ہر اقتباس کے سہ رخی تجزیے کی اوسط کا حساب لگایا گیا اور ہر گروپ (n=3) کے لیے اوسط قدروں اور معیاری انحرافات کو تلاش کرنے کے لیے استعمال کیا گیا۔ فکسڈ فیکٹرز کے لیے جنرل لکیری ماڈلز (GLM) ماپا متغیرات پر تجرباتی عوامل (پرجاتیوں اور نکالنے کے طریقوں) کے اہم اثرات اور دو طرفہ تعاملات کا جائزہ لینے کے لیے لاگو کیے گئے تھے۔ مزید برآں، ANOVA اور Tukey-Kramer ٹیسٹ کو اہم شناخت کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا (p<0.05)differences between="" the="" groups.="" pearson="" correlation="" was="" used="" to="" evaluate="" the="" linear="" relationship="" between="" the="" variables.="" principal="" component="" analysis(pca)was="" used="" to="" detect="" structure="" in="" the="" relationship="" between="" measured="" variables="" and="" experimental="" factors.="" the="" pca="" reduces="" voluminous="" data="" to="" a="" small="" set="" of="" linear="" combinations="" of="" related="" variables="" (i.e.,="" factors)="" based="" on="" patterns="" of="" correlation="" among="" the="" original="" variables.="" the="" resulting="" linear="" attribute="" combinations="" can="" be="" used="" for="" profiling="" specific="" product="" characteristics="" based="" on="" the="" variables="" studied.="" all="" statistical="" analyses="" were="" performed="" using="" ncss="" 2020="" statistical="" software="" (2020)="" (ncss,="" llc.,="" kaysville,="" ut,="">

4. نتائج

اسکریننگ کے اس پہلے تجربے کے نتائج نے کئی راستوں سے موثر فائدہ مند اثرات فراہم کرکے آئس لینڈ کے سمندری سوار کی تین اقسام کی صلاحیت کو ظاہر کیا۔ آبی پلسڈ برقی میدانوں کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا سبز نقطہ نظر روایتی گرم پانی نکالنے کی طرح کے نتائج کی نمائش کرتا ہے، جس میں اس کے غیر تھرمل نوعیت اور کم نکالنے کا وقت (10 منٹ بمقابلہ 45 منٹ) جیسے کئی فوائد دکھائے گئے ہیں۔ تین الگل انواع میں سے، بھورے میکروالجی A.esculenta نے TPC اور TFC کا سب سے زیادہ مواد دکھایا جس میں سب سے زیادہ اینٹی آکسیڈینٹ صلاحیتوں کی بھی نمائش ہوتی ہے مزید یہ کہ A. esculenta کے پانی کے نچوڑ نے P. palmaria اور U. Lactuca سے collagenase، elgast کے مقابلے میں بہتر روک تھام کی سرگرمیاں ظاہر کیں۔ tyrosinase، اور hyaluronidase جلد کی سفیدی، عمر بڑھانے اور جلد کی صحت میں ان کے استعمال کے لیے بہترین اینٹی انزیمیٹک سرگرمیوں کے ساتھ سمندری سوار کی سب سے امید افزا نسل ہے۔ دلچسپ بات یہ ہے کہ PEF طریقہ سے تیار کردہ A. esculenta extracts میں 91 فیصد کولیگنیز روکنا دکھایا گیا، جو روایتی گرم پانی نکالنے کے ذریعہ دکھائے جانے والے روک تھام کی سرگرمی سے زیادہ ہے اور تجارتی کٹ کی طرف سے فراہم کردہ انہیبیٹر سے بھی زیادہ ہے۔ آخر میں، ہمارا ابتدائی مطالعہ یہ بتاتا ہے کہ آئس لینڈ کے سمندری سوار پر مبنی نچوڑ، خاص طور پر براؤن میکروالگی A.esculenta کے نچوڑ، جو آبی پلسڈ برقی شعبوں کی مدد سے تیار کیے گئے ہیں، ممکنہ فعال اجزاء ہیں جو کاسمیٹک اور کاسمیوٹیکل فارمولیشن کے لیے فعال مرکبات کے طور پر استعمال کیے جا سکتے ہیں۔ مستقبل قریب میں.

یہ مضمون Mar. Drugs 2021, 19, 662 سے لیا گیا ہے۔ https://doi.org/10.3390/md19120662 https://www.mdpi.com/journal/marinedrugs