Glochidion Littorale Leaf Extract DAF-16 ایکٹیویشن کے ذریعے Caenorhabditis Elegans میں Neuroprotective اثرات کو ظاہر کرتا ہے

مزید معلومات کے لیے ای میل پر پہنچیں۔tina.xiang@wecistanche.com 
خلاصہ:تھائی لینڈ اور مشرقی ایشیا میں لوک ادویات میں استعمال ہونے والے متعدد پودے اپنے نچوڑوں کی اعلیٰ حیاتیاتی سرگرمی کی وجہ سے دلچسپی کا باعث بن رہے ہیں۔ اس تحقیق کا مقصد تھائی لینڈ میں پائے جانے والے 20 پودوں کے خوردنی پتوں کے عرق کی جانچ کرنا اور انتہائی بایو ایکٹیو نمونے کے ممکنہ نیورو پروٹیکٹو اثرات کی چھان بین کرنا تھا۔ تمام 20 پتیوں کے نچوڑ کے لیے کل فینول اور فلیوونائڈ مواد اور 2،2-ڈائفنائل-1-پکریل ہائیڈرازیلراڈیکل-سکیونگنگ سرگرمی کا تعین کیا گیا تھا۔ ان اسسیسز کی بنیاد پر، Glochidionlittorale leaf extract (GLE)، جس نے تمام ٹیسٹ شدہ پیرامیٹرز میں اعلیٰ قدر ظاہر کی، مزید تجربات میں نیوروڈیجنریشن پر اس کے اثرات کا جائزہ لینے کے لیے استعمال کیا گیا۔Caenorhabditis elegans. GLE علاج نے H2O2-ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں کے جمع ہونے کو کم کرکے اور کیڑوں کو 1-میتھائل-4-فینیلپائریڈینیم سے متاثرہ نیوروڈیجنریشن سے بچا کر آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کیا۔ مشاہدہ کردہ نیورو پروٹیکٹو اثرات ٹرانسکرپشن فیکٹر DAF-16 کے ایکٹیویشن سے وابستہ ہو سکتے ہیں۔ LC-MS کے ذریعہ اس نچوڑ کی خصوصیت نے کئی فینولک مرکبات کی نشاندہی کی، جن میں myricetin، coumestrin، chlorogenic acid، اور hesperidin شامل ہیں، جو اس میں کلیدی کردار ادا کرسکتے ہیں۔نیورو پروٹیکشن. یہ مطالعہ GLE کی نئی نیورو پروٹیکٹو سرگرمی کی اطلاع دیتا ہے، جو پارکنسنز سنڈروم جیسی نیوروڈیجنریٹیو بیماریوں کے علاج کے لیے استعمال ہو سکتی ہے۔

مطلوبہ الفاظ: Caenorhabditis elegans; پتی کا عرق؛نیورو پروٹیکشن; اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی؛ ڈی اے ایف-16

1. تعارف 

الزائمر کی بیماری اور پارکنسنز کی بیماری (PD) سمیت نیوروڈیجینریٹو عوارض عالمی صحت کی دیکھ بھال کرنے والی تنظیموں کے لیے صحت اور مالیاتی خدشات کا باعث ہیں [1]۔ اگرچہ صنعتی ممالک میں پچھلی چند دہائیوں میں انسانی عمر میں اضافہ ہوا ہے لیکن عمر سے متعلقہ بیماریوں کے پھیلاؤ میں بھی اضافہ ہوا ہے۔ دیر سے شروع ہونے والے عوارض جیسے اعصابی رکاوٹوں کے واقعات میں اگلی چند دہائیوں میں تیزی سے اضافہ ہونے کی توقع ہے۔ لہٰذا، مطالعہ کی حوصلہ افزائی کرنا اور ایسے مرکبات پر کلینیکل ٹرائلز کرنا بہت ضروری ہے جن میں نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں کے علاج، روک تھام، یا کم از کم تاخیر کی صلاحیت ہو سکتی ہے [2]۔ PD کی ایک خصوصیت سبسٹینٹیا نگرا [3] میں ڈوپامینرجک (DA) نیوران کا ترقی پسند نقصان ہے۔ PD روگجنن میں، رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی بڑھتی ہوئی پیداوار DA خلیات کے نقصان میں کلیدی کردار ادا کرتی ہے [4]۔ لہذا، آکسیڈیٹیو تناؤ میں کمی کو PD علاج [5] میں ایک امید افزا علاج معالجہ سمجھا جاتا ہے۔ 1-میتھائل-4-فینیلپائرڈینیم (MPP پلس)، جو مائٹوکونڈریل کمپلیکس I سرگرمی کو روکتا ہے، انسانوں اور جانوروں کے ماڈلز میں PD جیسی علامات پیدا کر سکتا ہے [6]۔

کا استعمالCaenorhabditis elegansجیسا کہ ایک ان ویوو ماڈل PD کے مطالعہ میں کچھ فوائد فراہم کرتا ہے [7]۔ نیماٹوڈ سادہ، سستا اور مختصر زندگی کا دور ہوتا ہے۔ یہ بڑے پیمانے پر تجزیہ کرنے والے مطالعات کی حمایت کرتا ہے۔ مزید یہ کہ C. elegans کے نیورونل نیٹ ورک کو مکمل طور پر نقشہ بنایا گیا ہے۔ اس میں 8 ڈی اے نیوران اور PD سے متعلق ہومولوگس جینز ہوتے ہیں [8]۔ نیوروڈیجنریشن، جو پارکنسونین علامات کی نقل کرتا ہے، سی ایلیگنز میں نیوروٹوکسنز جیسے ایم پی پی پلس [9] کے ساتھ علاج کے ذریعے متاثر کیا جا سکتا ہے۔
قدرتی اینٹی آکسیڈینٹ مرکبات جانوروں کے ماڈلز میں ان کے نیورو پروٹیکٹو اثرات اور کم زہریلا ہونے کی وجہ سے نیوروڈیجنریٹیو بیماریوں کے علاج کے لیے دوائیں تیار کرنے کے لیے پرکشش ذرائع کی نمائندگی کرتے ہیں [3]۔ پولیفینول انسانی خوراک میں سب سے زیادہ پائے جانے والے اینٹی آکسیڈنٹس میں سے ہیں [10]۔ یہ بھی قائم کیا گیا ہے کہ آکسیڈیٹیو عمل بہت سے پیتھالوجیز میں شامل ہیں، بشمول نیوروڈیجنریشن، کینسر، ذیابیطس، قلبی اور سوزش کی بیماریاں۔ لہذا، قدرتی ذرائع سے اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات کی نمائش کرنے والے پولیفینول کی تلاش ان پیتھالوجیز کو روکنے یا علاج کرنے میں معاون ثابت ہوسکتی ہے۔ اس تحقیق میں تھائی لینڈ میں پائے جانے والے پودوں کے خوردنی پتوں کے نچوڑ پر توجہ مرکوز کی گئی۔ شمالی اور جنوبی تھائی لینڈ میں وسیع پیمانے پر کاشت کی جانے والی زیادہ تر اقسام عام چوٹوں اور بیماریوں کے خلاف لوک دوا کے طور پر استعمال ہوتی رہی ہیں۔ تاہم، ان کے نیورو پروٹیکٹو اثرات کے بارے میں کچھ رپورٹس موجود ہیں۔
اس مطالعے میں، ہم نے سب سے پہلے تھائی لینڈ میں کاشت کیے گئے 20 پودوں سے خوردنی پتوں کے نچوڑ کی جانچ کی اور ان کے فینولک اور فللاوونائڈ مواد اور ان کی 2،2-ڈفینائل-1- پکریل ہائیڈرزائل (DPPH) ریڈیکل اسکویننگ سرگرمی کا جائزہ لیا۔ Glochidion littorale leaf extract (GLE) کے اثرات، جس نے تمام جانچ شدہ پیرامیٹرز میں اعلیٰ قدر ظاہر کی، نیوروڈیجنریشن کے ساتھ C. elegans پر جانچا گیا۔ مزید برآں، GLE میں اہم اجزاء کی شناخت کے ساتھ ساتھ GLE کے نیورو پروٹیکٹو اثر میں شامل ممکنہ راستوں کی جانچ کی گئی۔
جیسا کہ ٹرانسکرپشن عنصر DAF-16 آکسیڈیٹیو تناؤ کو منظم کرنے میں کلیدی کردار ادا کرنے کے لیے جانا جاتا ہے [11]، یہ قیاس کیا گیا کہ GLE DAF-16 کو نشانہ بنا سکتا ہے۔ C. elegans strain CF1038، جو کہ DAF-16 نقصان کا کام کرنے والا اتپریورتی تناؤ ہے، GLE کے ساتھ اور اس کے بغیر علاج کیے جانے والے کیڑوں کی بقا کی شرح کا تعین کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ H2O2-حوصلہ افزائی آکسیڈیٹیو تناؤ میں، GLE علاج سے ٹرانسجینک کیڑے کی بقا کی شرح میں اضافہ نہیں ہوا (شکل 1C)۔

2. نتائج

2.1 تھائی پودوں کے پتوں کی اسکریننگ

تھائی لینڈ میں کاشت کیے گئے پودوں سے خوردنی پتوں کے خام عرق الٹراسونیکیشن کے ذریعے تیار کیے گئے تھے۔ 20 پودوں کے پتوں کے نچوڑوں کو ان کے فینولک اور فلیوونائڈ مواد اور اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کے لیے ڈی پی پی ایچ ریڈیکل اسکیوینجنگ پرکھ کے ذریعے جانچا گیا۔ چند ٹیسٹ کیے گئے نمونے، جیسے گلوچڈیئن اسفیروگائنم اور مینتھا پائپریٹا، میں کم فینولک اور فللاوونائڈ مواد کے ساتھ زیادہ ریڈیکل اسکیوینجنگ سرگرمی پائی گئی، جب کہ کچھ نمونے، جیسے کلیناکانتھس نٹانس اور اوکیمم × سیٹریوڈورم، نے اس کے برعکس دکھایا۔ )۔ G. littorale کے پتوں کے نچوڑ نے اعلی DPPH ریڈیکل اسکیوینجنگ سرگرمی کے ساتھ ساتھ اعلی فینولک اور فللاوونائڈ مواد کو دکھایا۔ لہذا، G. littorale کے ساتھ منسلک حیاتیاتی سرگرمیوں کی مزید تفتیش کی گئی۔

2.2 C. Elegans میں DAF-16 کے ذریعے آکسیڈیٹیو تناؤ کے خلاف GLE بہتر مزاحمت

آکسیڈیٹیو تناؤ کے تحت N2 کیڑے کی بقا پر GLE کے اثر کی تحقیقات کی گئیں۔ H2O2 (5 mM) کے ساتھ علاج سے کنٹرول گروپ میں 75 فیصد موت واقع ہوئی، جب کہ 50 µg/mL اور GLE کے زیادہ ارتکاز کے ساتھ مشترکہ علاج ایک اعلی بقا کی شرح (شکل 1A) سے وابستہ تھا۔ GLE کی جانچ شدہ ارتکاز میں، 100 µg/mL اور 200 µg/mL بقا کی بلند ترین شرح (بالترتیب 82.0 فیصد اور 88.2 فیصد) سے وابستہ تھے۔ لہذا، ان دو ارتکاز کو بعد کے تجربات میں استعمال کیا گیا۔ Vivo میں GLE کے اینٹی آکسیڈینٹ اثر کا اندازہ کرنے کے لیے، انٹرا سیلولر ROS کی سطحوں کو 2',7'-dichlorodihydroflfluorescein diacetate (H2DCF-DA) کا استعمال کرتے ہوئے جنگلی قسم کے نیماٹوڈس میں ماپا گیا، جو انٹرا سیلولر ROS کی پیداوار کا پتہ لگانے کے لیے ایک معروف فلوروسینس پروب ہے۔ GLE سے علاج شدہ گروپوں میں فلوروسینس کی شدت میں نمایاں کمی دیکھی گئی جو کہ علاج نہ کیے گئے گروپ (شکل 1B) کے مقابلے میں GLE کی اینٹی آکسیڈینٹ خاصیت کی تصدیق کرتی ہے۔

2.3۔ GLE ٹریٹمنٹ نے MPP پلس کی مہلکیت کو کم کیا - C. Elegans C. elegans میں 8 DA نیورونز ہوتے ہیں [8]۔ ایم پی پی پلس کی نمائش کے بعد ان ڈی اے نیوران کے منتخب انحطاط کا اندازہ کیا گیا۔ 0.75 mM MPP پلس کے ساتھ جنگلی قسم کے N2 کیڑوں کے علاج کے نتیجے میں بقا میں نمایاں کمی واقع ہوئی (شکل 2)۔ تاہم، GLE کے ساتھ مشترکہ علاج نے کیڑوں کی بقا میں نمایاں اضافہ کیا۔ ڈی ایف-16 اتپریورتی کیڑے پر GLE علاج کے اثر کی تحقیقات کی گئیں۔ جیسا کہ شکل 3 اور جدول 2 میں دکھایا گیا ہے، کنٹرول گروپ کے مقابلے میں ایم پی پی پلس کے سامنے آنے کے بعد جی ایل ای کے علاج نے ان کیڑوں کی بقا میں اضافہ نہیں کیا۔ یہ نتائج بتاتے ہیں کہ C. elegans میں GLE کے نیورو پروٹیکٹو اثر میں ثالثی کے لیے DAF-16 کی ضرورت پڑ سکتی ہے۔ اس کے بعد، ایک DAF-2 نقصان کا فنکشن اتپریورتی تناؤ، CB1370، اس بات کا تعین کرنے کے لیے استعمال کیا گیا کہ آیا DAF-2 مشاہدہ شدہ نیورو پروٹیکٹو اثرات میں شامل تھا۔ جیسا کہ شکل 4 اور جدول 3 میں دکھایا گیا ہے، GLE کے ساتھ علاج کیے جانے والے ڈیف-2 اتپریورتی کیڑوں میں درمیانی اور زیادہ سے زیادہ بقا نمایاں طور پر بڑھ گئی ہے۔

2.4 DAF-16 لوکلائزیشن پر GLE کے اثرات

یہ ظاہر کیا گیا ہے کہ DAF-16 ایکٹیویشن کو اس کے جوہری جمع [12] سے منظم کیا جاتا ہے۔ اس کے بعد، ہم نے تحقیقات کی کہ آیا GLE ایک ٹرانسجینک سٹرین TJ356 میں DAF-16 کے جوہری جمع کو آمادہ کر سکتا ہے جو DAF-16::GFP فیوژن پروٹین کا اظہار کرتا ہے۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ 100 µg/mL GLE کے ساتھ انکیوبیشن کے 48 گھنٹے بعد، نیوکلئس میں DAF-16 کی گرین فلوروسینس کی شدت غیر علاج شدہ گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر بڑھ گئی (شکل 5)۔

2.5 جی ایل ای میں فائٹو کیمیکل خصوصیات

LC-MS GLE میں فائٹو کیمیکلز کی پروفائلنگ کے لیے کیا گیا تھا، اور اس کے نتائج تصویر میں پیش کیے گئے ہیں۔6. کرومیٹوگرافک چوٹیوں کی شناخت ایم ایس ڈیٹا کا ڈیٹا بیس کے ساتھ موازنہ کرکے کی گئی تھی جس کی بنیاد پر سالماتی آئن چوٹیوں کی m/z قدروں کی تلاش تھی۔ مثبت موڈ [M پلس H]پلس. نتیجتاً، myricetin، coumestrin، chlorogenic acid، اور hesperidin بڑے مرکبات کے طور پر پائے گئے (ٹیبل4).

3. بحث

پودوں کے نچوڑ قدرتی حیاتیاتی مرکبات کا بھرپور ذریعہ ہیں۔ بہت سے مطالعات میں تھائی لینڈ سمیت جنوب مشرقی ایشیائی ممالک میں استعمال ہونے والے پودوں کے نچوڑوں کا جائزہ لیا گیا ہے، جہاں یہ نچوڑ لوک ادویات کے اجزاء ہیں [13,14]۔ اس تحقیق میں، تھائی لینڈ کے 20 خوردنی پودوں کے پتوں کے نچوڑوں کی جانچ کی گئی، اور مزید تفتیش کے لیے G. littorale کا انتخاب کیا گیا کیونکہ اس میں فینول کا مواد، flflavonoid مواد، اور ریڈیکل اسکویننگ سرگرمی دکھائی گئی۔ کئی مطالعات نے گلوچیڈون [15-19] جینس کی مختلف انواع کی تحقیقات کی ہیں۔ تاہم، G. littorale کی فعال خصوصیات اور اجزاء کے بارے میں کچھ مطالعات ہیں۔ ہمارے ڈیٹا سے پتہ چلتا ہے کہ GLE نے C. elegans کو H2O2-انٹرا سیلولر ROS جمع کم کر کے آکسیڈیٹیو تناؤ کے خلاف تحفظ فراہم کیا۔ یہ فینولک مرکبات جیسے flavonoids کے اعلی مواد کی وجہ سے ہوسکتا ہے، جو مضبوط اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی [20] رکھنے کے لیے جانا جاتا ہے۔ یہ نتائج ان سے ملتے جلتے ہیں جو Duangjan et al کے ذریعہ حاصل کیے گئے ہیں۔ (2019)، جس نے دکھایا کہ G. zeylanicum پتوں کے نچوڑ C. elegans کو آکسیڈیٹیو تناؤ سے بچا سکتے ہیں [21]۔ انسولین/انسولین نما سگنلنگ (IIS) راستہ C. elegans [22,23] میں نمو، تناؤ کے ردعمل، اور لمبی عمر کو منظم کرتا ہے۔ ہم نے پایا کہ ڈیف-16 null mutant C. elegans جس کا GLE کے ساتھ علاج کیا گیا وہ آکسیڈیٹیو تناؤ کے لیے حساس تھا۔ یہ نتیجہ بتاتا ہے کہ نیماٹوڈس میں آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرنے میں GLE کا اینٹی آکسیڈینٹ اثر ممکنہ طور پر نہ صرف ریڈیکل اسکیوینجنگ سرگرمی بلکہ DAF-16 ٹرانسکرپشن فیکٹر کے ضابطے میں بھی شامل ہے۔

C. elegans میں MPP plus-induced toxicity کے خلاف GLE کے حفاظتی اثرات کی جانچ کی گئی۔ نیماٹوڈس میں ڈی اے نیوران ایم پی پی پلس کو بنیادی طور پر ہائی وابستگی والے ڈی اے ٹرانسپورٹرز کے ذریعے لیتے ہیں، جو ممالیہ جانوروں میں بھی اسی طرح دیکھا جاتا ہے۔ نیوران کے اندر ایم پی پی پلس کا جمع ہونا سانس کی زنجیر کے مائٹوکونڈریل کمپلیکس I کو غیر فعال کرتا ہے اور خلیوں کی موت [24-27] کو اکساتا ہے۔ جنگلی قسم کے کیڑے میں MPP پلس علاج سے وابستہ مہلکیت کو نمایاں طور پر کم کرنے کے لئے GLE علاج پایا گیا۔ IIS کا راستہ C. elegans [28] میں DAF-2 رسیپٹر کے ذریعے انسولین نما پیپٹائڈس کے ذریعے ماڈیول کیا جاتا ہے۔ عام حالات میں، IIS راستہ DAF-16 کے فاسفوریلیشن کو روکتا ہے اور اس کے جوہری نقل مکانی کو روکتا ہے۔ daf-2 null mutants میں، GLE سے علاج شدہ گروپ کنٹرول گروپ سے زیادہ دیر تک زندہ رہا۔ اس کے برعکس، کنٹرول گروپ اور GLE سے علاج شدہ گروپ کے درمیان بقا میں کوئی فرق نہیں دیکھا گیا جس میں daf-16 null mutant worms تھے۔ یہ معلوم ہے کہ DAF-2 سگنلنگ کو کم کرنے سے DAF-16 کے نیوکلئس میں داخلے کی سہولت ملتی ہے، جہاں یہ ہدف کے جینز کے اظہار کو اپ گریڈ کر سکتا ہے اور تناؤ کی مزاحمت اور لمبی عمر کو کنٹرول کر سکتا ہے [29]۔ یہ وضاحت کر سکتا ہے کہ GLE کے ساتھ علاج کیے جانے والے ڈی ایف-2 متغیر کیڑے نے نسبتاً زیادہ بقا کیوں ظاہر کی۔ مزید برآں، ٹرانسجینک TJ356 DAF-16::GFPC کا استعمال کرتے ہوئے GLE کے ساتھ علاج کیے جانے والے کیڑوں میں DAF-16 کی بڑھتی ہوئی جوہری جمع دیکھی گئی۔ ایلیگنز مجموعی طور پر، ان نتائج نے اشارہ کیا کہ GLE نے DAF-16 کو چالو کرنے کے ذریعے اپنے نیورو پروٹیکٹو اثرات کی نمائش کی ہے۔

4.3 کل فینولک مواد مختصراً، 11.4 µL نچوڑ (1 mg/mL) کو 227.3 µL 2 فیصد (w/v) Na2CO3 محلول کے ساتھ ملایا گیا، اور پھر اس مرکب کو کمرے کے درجہ حرارت پر 2 منٹ تک کھڑا رہنے دیا گیا۔ 10 فیصد (v/v) Folin-Ciocalteu reagent کے 11.4 µL کے اضافے کے بعد۔ اندھیرے میں انکیوبیشن 30 منٹ تک کی گئی۔ اس کے بعد، مائکروپلیٹ ریڈر (Nivo 3F ملٹی موڈ پلیٹ ریڈر، PerkinElmer، Waltham، MA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے جذب کو 750 nm پر ماپا گیا۔ گیلک ایسڈ کو انشانکن وکر کے معیار کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ کل فینولک مواد کو گیلک ایسڈ کے مساوی کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا (ملی گرام گیلک ایسڈ مساوی/جی پلانٹ کے عرق)۔

4.4 کل فلاوونائڈ مواد ایلومینیم کلورائڈ کلوریمیٹرک طریقہ کل فلاوونائڈ مواد کی پیمائش کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ مختصراً، 25 µL نچوڑ (2 mg/mL) کو 7.5 µL 5 فیصد (w/v) NaNO2 حل اور 152.5 µL آست پانی کے ساتھ ملایا گیا۔ 6 منٹ کے بعد، 15 µL کا 10 فیصد (w/v) AlCl3 محلول شامل کیا گیا اور اسے 5 منٹ تک کھڑا رہنے دیا گیا۔ پھر، 1 M NaOH محلول کا 50 µL مرکب میں شامل کیا گیا۔ اس کے بعد، مرکب کو اندھیرے میں 15 منٹ تک انکیوبیٹ کیا گیا، اور مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے جاذبیت کو 510 nm پر ماپا گیا۔ quercetin کو معیاری کے طور پر استعمال کرتے ہوئے ایک انشانکن وکر پیدا کرکے کل flavonoid مواد کا حساب لگایا گیا اور نتائج کو quercetin کے مساوی (mg quercetin equivalent/g پلانٹ کے عرق کے) کے طور پر ظاہر کیا گیا۔4.5۔ فری ریڈیکل اسکیوینجنگ ایکٹیویٹی فری ریڈیکلز کو نکالنے کی صلاحیت کا اندازہ ڈی پی پی ایچ اسسیس [32] کے ذریعے کیا گیا۔ مختصراً، 100 µL نچوڑ (1 mg/mL) کو 100 µL DPPH محلول کے ساتھ ملایا گیا۔ 30 منٹ کے بعد، مائکروپلیٹ ریڈر کا استعمال کرتے ہوئے جذب کو 517 nm پر ماپا گیا۔ نتائج کا اظہار ڈی پی پی ایچ ریڈیکلز کی روک تھام کے فیصد کے طور پر کیا گیا تھا۔

4.10۔ DAF-16Transgenic C. elegans TJ356 کا جوہری لوکلائزیشن، جو DAF-16-GFP فیوژن پروٹین کا اظہار کرتا ہے، DAF-16 کی انٹرا سیلولر تقسیم کی جانچ کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ L1 اسٹیج نیماٹوڈس کا علاج GLE کے ساتھ 48 گھنٹے کے لیے 2{{30}} ◦C پر کیا گیا۔ اس کے بعد کیڑے کو شیشے کی سلائیڈ پر 2 فیصد ایگروز پیڈ میں منتقل کیا گیا اور ایگرز پیڈ میں 25 µM سوڈیم ایزائیڈ کا ایک قطرہ (تقریباً 20 µL) شامل کرکے بے ہوشی کی گئی۔ GFP کے اظہار کی جانچ فلوروسینس مائکروسکوپی (EVOSflfl؛ ایڈوانسڈ مائکروسکوپی گروپ، بوٹیل، WA، USA) کے ذریعے کی گئی۔ نیوکللی میں DAF-16 کی اوسط فلوروسینس شدت کا تجزیہ امیج J سافٹ ویئر (نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ، بیتھسڈا، MD، USA) کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ 4.11۔ LC-MS کا استعمال کرتے ہوئے فائیٹو کیمیکل پروفائلنگ LCMS-8040 (Shimadzu) کا استعمال کرتے ہوئے پتی کے عرق کا تجزیہ کیا گیا۔ Q3 اسکین موڈ کا استعمال کرتے ہوئے ماس سپیکٹرا m/z 50–1000 کی حد میں حاصل کیا گیا تھا۔ محلول کو ایک Inertsil ODS-3 (250 × 2.1 mm, 5 µm, GL Sciences, Tokyo Japan) پر 40 ◦C پر کالم درجہ حرارت پر (A) 0.1 فیصد فارمک ایسڈ اور (B) کے گریڈینٹ کا استعمال کرتے ہوئے انجیکشن لگایا گیا تھا۔ ) acetonitrile/water(80/20) جس میں 0.1 فیصد فارمک ایسڈ ہوتا ہے۔ 0.2 ملی لیٹر/منٹ کے بہاؤ کی شرح کے ساتھ درج ذیل میلان استعمال کیا گیا: 0–100 فیصد B (0–45 منٹ)، 100 فیصد B (45–50 منٹ)، اور 0 فیصد B (50–60 منٹ)۔ تجرباتی m/z اقدار کو ڈیٹا بیس میں موجود نظریاتی حساب شدہ m/z اقدار کی لائبریری سے ملا کر مرکبات کی شناخت کی گئی تھی، بشمول ہیومن میٹابولوم ڈیٹا بیس اور METLIN ڈیٹا بیس۔ 4.12۔ شماریاتی تجزیہ ڈیٹا کو ہر گروپ کے لیے اوسط ± معیاری انحراف کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ دونوں گروپوں کے درمیان اہم فرق کا اندازہ ٹی-ٹیسٹ کے ذریعے کیا گیا، جبکہ تین اور زیادہ گروپوں کے درمیان فرق کا اندازہ یک طرفہ انووا کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا، اس کے بعد ٹوکی کا پوسٹ ہاک موازنہ ٹیسٹ۔ اعداد و شمار کی اہمیت p <0.001 اور="" p=""><0.0001 پر="" رکھی="" گئی="" تھی۔="" عمر="" بھر="" کے="" جائزوں="" کے="" لیے،="" c.="" elegans="" survival="" کو="" kaplan-meier="" survival="" curves="" کا="" استعمال="" کرتے="" ہوئے="" پلاٹ="" کیا="" گیا="" تھا="" اور="" گراف="" پیڈ="" پرزم="" سافٹ="" ویئر="" (ورژن="" 9.01؛="" گراف="" پیڈ،="" سانگویئر،="" ڈیگویئر،="" ڈیگویئر)="" کا="" استعمال="" کرتے="" ہوئے="" لاگ="" رینک="" ٹیسٹ="" کے="" ذریعے="" تجزیہ="" کیا="" گیا="" تھا۔="" ca،="">

عبدل فواز باگودو 1، یفینگ زینگ 2، ماساہیرو ناکابایاشی 2، ساروت راڈکوین 3، ہیون ینگ پارک 4، دھیرج اے وٹیم 4,5، کینجی ساتو 6، سوچیرو ناکامورا 1 اور شیگیرو کاتایاما 1,2،*

1 گریجویٹ سکول آف میڈیسن، سائنس اینڈ ٹیکنالوجی، شنشو یونیورسٹی، 8304 Minamiminowa، Kamiina، Nagano 399-4598, Japan;

2انسٹی ٹیوٹ برائے بایومیڈیکل سائنسز، شنشو یونیورسٹی، 8304 منامیمینوا، کامینا، ناگانو 399-4598، جاپان؛

3 سکول آف ایگرو انڈسٹری، مے فاہ لوانگ یونیورسٹی، 333 مو 1، تھسود، موانگ، چیانگ رائی 57100، تھائی لینڈ؛saroat@mfu.ac.th

4 ایڈیسن بائیو ٹیکنالوجی انسٹی ٹیوٹ، کوننیکر ریسرچ لیبارٹریز، اوہائیو یونیورسٹی، ایتھنز، OH 45701، USA؛

5 کالج آف ہیلتھ سائنسز اینڈ پروفیشنز، اوہائیو یونیورسٹی، ایتھنز، OH 45701، USA

6 گریجویٹ سکول آف ایگریکلچر، کیوٹو یونیورسٹی، کیوٹو 606-8502، جاپان؛

مصنف کی شراکتیں:

مصنف کی شراکتیں: تصوراتی، SR، DAV، اور SK؛ تفتیش، AFB، YZ، MN، SR، H.-YP، DAV، اور KS؛ تحریر - اصل مسودہ کی تیاری، AFB؛ تحریر - جائزہ اور ترمیم، SK؛ نگرانی، SN تمام مصنفین نے مخطوطہ کے شائع شدہ ورژن کو پڑھا اور اس سے اتفاق کیا ہے۔
فنڈنگ: اس تحقیق کو کوئی بیرونی فنڈنگ ​​نہیں ملی۔
ادارہ جاتی جائزہ بورڈ کا بیان: قابل اطلاق نہیں ہے۔
باخبر رضامندی کا بیان: قابل اطلاق نہیں ہے۔
ڈیٹا کی دستیابی کا بیان: ڈیٹا متعلقہ مصنف کے ذریعہ معقول درخواست پر دستیاب ہے۔
مفادات کے تصادم: مصنفین مفادات کے تصادم کا اعلان نہیں کرتے ہیں۔
نمونے کی دستیابی: مرکبات کے نمونے مصنفین سے دستیاب نہیں ہیں۔

حوالہ جات

1 پوہل، ایف۔ لن، پی کے ٹی نیوروڈیجنریٹیو بیماریوں کی روک تھام/علاج کے لیے اینٹی آکسیڈینٹ خصوصیات کے ساتھ پودوں کی قدرتی مصنوعات اور پودوں کے عرق کا ممکنہ استعمال: وٹرو میں، ویوو اور کلینیکل ٹرائلز میں۔ مالیکیولز 2018، 23، 3283۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

2. کم، جی ایچ؛ کم، جے ای؛ Rhie, SJ; یون، ایس. نیوروڈیجنریٹیو بیماریوں میں آکسیڈیٹیو تناؤ کا کردار۔ ختم نیوروبیول۔ 2015، 24، 325–340۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

3. Lu, X.-l.; Yao, X.-l.; لیو، زیڈ؛ ژانگ، ایچ. لی، ڈبلیو. لی، زیڈ؛ وانگ، جی-ایل؛ پینگ، جے؛ لن، وائی۔ Xu, Z. کینورہابڈائٹس ایلیگنز اور پی سی 12 خلیوں میں ایم پی پی پلس حوصلہ افزائی نیوروٹوکسائٹی کے خلاف xyloketal B کے حفاظتی اثرات۔ دماغ ریس 2010، 1332، 110-119۔ [کراس ریف]

4. ٹرمر، PA؛ بینیٹ، جے پی، جونیئر پارکنسنز کی بیماری کا سائبرڈ ماڈل۔ ختم نیورول. 2009، 218، 320–325۔ [کراس ریف]

5. چیون، ایس ایم؛ جنگ، آئی۔ لی، ایم ایچ؛ کم، ڈی کے؛ جیون، ایچ. Cha, DS Sorbus alnifolia Caenorhabditis elegans میں dopaminergic neurodegeneration کی حفاظت کرتا ہے۔ فارم۔ بائول 2016، 55، 481–486۔ [کراس ریف]

6. شمٹ، این. Ferger، B. پارکنسنز کی بیماری کے MPTP ماڈل میں نیورو کیمیکل نتائج۔ J. نیورل ٹرانسم۔ 2001، 108، 1263–1282۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

7۔ ہیرنگٹن، اے۔ Yacoubian, TA; سلون، ایس آر؛ کالڈویل، K.؛ کیلڈویل، جی. VPS کا فنکشنل تجزیہ J. Neurosci. 2012، 32، 2142–2153۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

8. فو، آر-ایچ. ہارن، H.-J.؛ لیو، ایس پی؛ چن، سی-ایس؛ چانگ، W.-L.؛ چن، Y.-M.؛ ہوانگ، J.-E.؛ لی، آر-جے؛ Tsai, S.-Y.; ہنگ، H.-S.؛ ET رحمہ اللہ تعالی. n-Butylidenephthalide Dopaminergic Neuron Degeneration اور -Cenorhabditis elegans ماڈلز میں Synuclein کے جمع ہونے سے بچاتا ہے۔ PLOS ONE 2014, 9, e85305۔ [کراس ریف]

9. جدیہ، ص. خان، اے. سمی، ایس آر؛ کور، ایس. میر، ایس ایس؛ نذیر، اے۔ بیکوپا مونیری کے اینٹی پارکنسونین اثرات: پارکنسنز کی بیماری کے ٹرانسجینک اور فارماکولوجیکل کینورہابڈائٹس ایلیگنز ماڈلز سے بصیرت۔ بائیو کیم۔ بائیوفیس۔ Res. کمیون 2011، 413، 605-610۔ [کراس ریف] 10. اینڈریڈ، جے ایم ڈی ایم؛ Fasolo, D. قدرتی ذرائع سے پولیفینول اینٹی آکسیڈنٹس اور صحت کے فروغ میں شراکت۔ انسانی صحت اور بیماری میں پولیفینول میں؛ Elsevier BV: ایمسٹرڈیم، نیدرلینڈز، 2014؛ صفحہ 253-265۔

11. Hsu, A.-L.; مرفی، سی ٹی؛ کینیون، C. DAF-16 اور ہیٹ شاک فیکٹر کے ذریعے بڑھاپے اور عمر سے متعلقہ بیماری کا ضابطہ۔ سائنس 2003، 300، 1142–1145۔ [کراس ریف]

12. ہینڈرسن، ST؛ جانسن، TE daf-16 نمیٹوڈ Caenorhabditis elegans میں عمر بڑھنے میں ثالثی کے لیے ترقیاتی اور ماحولیاتی معلومات کو مربوط کرتا ہے۔ کرر بائول 2001، 11، 1975–1980۔ [کراس ریف]

13. Hutadilok-Towatana, N.; Chaiyamutti، P.؛ Panthong, K.; مہابوسارکم، ڈبلیو. Rukachaisirikul، V. تھائی لوک میڈیسن میں استعمال ہونے والے کچھ پودوں کی اینٹی آکسیڈیٹیو اور فری ریڈیکل اسکیوینگنگ سرگرمیاں۔ فارم۔ بائول 2006، 44، 221–228۔ [کراس ریف]

14. سٹیورٹ، پی. بونسری، پی. Puthong, S.; Rojpibulstit، P. اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی اور گیسٹرک کینسر سیل لائنوں میں الٹراسٹرکچرل تبدیلیاں جو شمال مشرقی تھائی کھانے کے لوک پودوں کے نچوڑوں سے متاثر ہوتی ہیں۔ بی ایم سی تکمیل۔ متبادل میڈ. 2013، 13، 60۔ [کراس ریف]

15. ہوئی، ڈبلیو. لی، ڈبلیو. این جی، کے؛ چان، سی. تین گلوچیڈون پرجاتیوں میں ٹرائٹرپینائڈز اور سٹیرائڈز کی موجودگی۔ فائٹو کیمسٹری 1970، 9، 1099–1102۔ [کراس ریف]

16. تاکیدا، وائی۔ میما، سی. مسعودہ، ٹی. ہیراتا، ای. تاکوشی، اے. Otsuka, H. Glochidioboside, glochidia obovatum کے پتوں سے (7S,8R)-dihydrodeh ydrodiconiferyl الکحل کا ایک گلوکوسائیڈ۔ فائٹو کیمسٹری 1998، 49، 2137–2139۔ [کراس ریف]

17. ژانگ، ایکس۔ چن، جے؛ Gao, K. Glochidion wrightii Benth سے کیمیائی اجزاء۔ بائیو کیم۔ سسٹم ایکول 2012، 45، 7-11۔ [کراس ریف]

18. تیان، J.-M.؛ فو، X.-Y.؛ ژانگ، Q. He, H.-P.; گاو، جے ایم؛ ہاؤ، X.-J. Glochidion assamicum سے کیمیائی اجزاء۔ بائیو کیم۔ سسٹم ایکول 2013، 48، 288–292۔ [کراس ریف]

19. کونگکاچوچائی، آر۔ چارونسیری، آر. یاکوہ، کے. کرنگکاسیمسی، اے۔ Insung, P. جنوبی تھائی لینڈ کی دیسی سبزیوں میں غذائی اجزاء کی قدر اور اینٹی آکسیڈینٹ مواد۔ فوڈ کیم۔ 2015، 173، 838–846۔ [کراس ریف]

20. Pietta، P.-G. فلاوونائڈز بطور اینٹی آکسیڈینٹ۔ جے نیٹ پیداوار 2000، 63، 1035–1042۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

21. Duangjan، C.؛ رنگسنتھ، پی. گو، ایکس۔ Zhang, S.; ونک، ایم؛ Tencomnao, T. Glochidion zeylanicum پتوں کے عرق DAF-16/FoxO اور SKN-1/Nrf-2 سگنلنگ پاتھ ویز کے ذریعے Caenorhabditis elegans میں عمر بڑھانے اور آکسیڈیٹیو تناؤ کے خلاف مزاحمت کی خصوصیات کو ظاہر کرتے ہیں۔ Phytomedicine 2019, 64, 153061. [CrossRef]

22. جینسن، VL؛ گیلو، ایم؛ Riddle, DAF کے DL اہداف-16 Caenorhabditis elegans بالغوں کی لمبی عمر اور dauer کی تشکیل میں ملوث ہیں۔ ختم جیرونٹول۔ 2006، 41، 922-927۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

23. Daitoku، H.؛ فوکامیزو، اے فاکسو ٹرانسکرپشن فیکٹرز ان دی ریگولیٹری نیٹ ورکس آف لمبییوٹی۔ جے بائیو کیم۔ 2007، 141، 769–774۔ [کراس ریف]

24. لاکسو، ایم؛ Vartiainen, S.; Moilanen, A.-M.; Sirviö, J.; تھامس، جے ایچ؛ ناس، آر. بلیکلی، آر ڈی؛ وونگ، جی ڈوپامینرجک نیورونل نقصان اور کینورہابڈائٹس ایلیگنز میں موٹر کی کمی انسانی -سینوکلین کو زیادہ متاثر کرتی ہے۔ J. نیورو کیم۔ 2004، 86، 165–172۔ [کراس ریف] [پب میڈ]

25. ناس، آر. ہال، ڈی ایچ؛ ملر، ڈی ایم؛ بلیکلی، کینورہابڈائٹس ایلیگنز میں ڈوپامائن نیوران کی آر ڈی نیوروٹوکسن کی حوصلہ افزائی سے انحطاط۔ پروک ناٹل اکاد۔ سائنس USA 2002, 99, 3264–3269. [کراس ریف]

26. وانگ، Y.-M.؛ پ، پی. لی، ڈبلیو-ڈی۔ اے ٹی پی کی کمی MPP پلس انڈسڈ ڈوپامائن نیورونل موت اور -synuclein transgenic C. elegans میں کیڑے کی مہلکیت کی بڑی وجہ ہے۔ نیوروسکی بیل. 2007، 23، 329–335۔ [کراس ریف]

27. برونگارٹ، ای. Gerlach، M.؛ Riederer، P.؛ Baumeister, R.; Hoener، M. Caenorhabditis elegans MPP پلس ماڈل آف پارکنسنز ڈیزیز فار ہائی تھرو پٹ ڈرگ اسکریننگ۔ نیوروڈیجنر۔ ڈس 2004، 1، 175–183۔ [کراس ریف]

28. پانوسکی، ایس ایچ؛ Dillin, A. نوجوانوں کے سگنل: Caenorhabditis elegans میں عمر بڑھنے کا اینڈوکرائن ریگولیشن۔ رجحانات Endocrinol. میٹاب۔ 2009، 20، 259–264۔ [کراس ریف]