Herba Cistanche Extract Mitochondrial Glutathione کی کیفیت اور چوہوں کے دلوں میں سانس کو بہتر بناتا ہے، ممکنہ طور پر انکپلنگ پروٹینز کی شمولیت کے ساتھ

تعارف

پچھلے اسکیمک مایوکارڈیم کا ریفرفیوژن مائٹوکونڈریل تبدیلیوں کی ایک سیریز کا سبب بنتا ہے، بشمول رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کی پیداوار میں اضافہ، Ca2+اوورلوڈ، اور اڈینوسین ٹرائی فاسفیٹ (اے ٹی پی) کی پیداوار میں کمی، یہ سب نیکروسس اور/یا اپوپٹوسس ثالثی سیل کی موت کا باعث بن سکتے ہیں (ریڈیگلڈ ایٹ ال۔، 1992؛ لیماسٹرس ایٹ ال۔، 1998)۔ جیسا کہ مائٹوکونڈریا تعین کرنے میں ایک اہم کردار ادا کرتا ہے۔اسکیمیا/ریپرفیوژن (I/R) چیلنج کے بعد کارڈیو مایوسائٹس کی قسمت میں، مایوکارڈیل I/R چوٹ کے خلاف تحفظ کو مائٹوکونڈریل ساختی اور فعال سالمیت کے تحفظ کی طرف نشانہ بنایا جانا چاہئے۔ I/R چیلنج کے بعد مائٹوکونڈریل انرجی میٹابولزم کی دیکھ بھال خاص طور پر اہم ہے کیونکہ دل کا سکڑاؤ کام تقریباً مکمل طور پر مائٹوکونڈریا سے تیار کردہ ATP پر منحصر ہے۔ کارڈیو مایوسائٹس جو زندہ ہیں لیکن سکڑ نہیں رہی ہیں ان کا بہت کم استعمال ہے۔

PHGS75% ECH 30% ACT 12% قوت مدافعت بڑھانے کے لیے قدرتی CISTANCHE TUBULOSA

Herba Cistanche، کا پورا خشک پوداCistanche deserticolaYC Ma (Orobanchaceae)، ایک پرجیوی پودا ہے جو بنیادی طور پر شمالی اور شمال مشرقی چین کے صحرائی علاقوں میں اگتا ہے۔ Herba Cistanche، جسے چینی طب میں "یانگ کو متحرک کرنے والی" جڑی بوٹی کے طور پر درجہ بندی کیا گیا ہے، گردوں کی کمی، خواتین کی بانجھ پن، اور بوڑھے مریضوں میں آنتوں کی خشکی سے پیدا ہونے والے قبض کے لیے تجویز کیا جاتا ہے (چن، 1998)۔ ہماری لیبارٹری میں پچھلے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ ایک میتھانولHerba Cistanche کا عرقمایوکارڈیل اے ٹی پی پیدا کرنے کی صلاحیت کو بڑھاتا ہے (لیونگ اینڈ کو، 2008) اور چوہوں میں مایوکارڈیل I/R چوٹ سے بچاتا ہے (لیونگ، 2006)۔ جبکہ اے ٹی پی پیدا کرنے کی صلاحیت کا محرک مائٹوکونڈریل الیکٹران ٹرانسپورٹ (لیونگ اینڈ کو، 2008) میں اضافہ کے متوازی تھا، ہربا سیستانچے کے علاج کے ذریعہ فراہم کردہ I/R چوٹ کے خلاف کارڈیو پروٹیکشن مایوکارڈیل اے ٹی پی کی کمی (لیونگ، 2006) میں کمی سے وابستہ تھا۔ موجودہ مطالعہ میں، ہربا سیستانچے کے قلبی حفاظتی عمل میں مائٹوکونڈریا کے کردار کی وضاحت کرنے کے لیے، ہم نے چوہے کے دلوں میں مائٹوکونڈریل گلوٹاتھیون کی حیثیت، Ca2+ مواد، جھلی کی صلاحیت، اور سانس کی شرح پر ہربا سیستانچے کے علاج کے اثر کی تحقیقات کی۔ .

مواد اور طریقے

جڑی بوٹیوں کا مواد

Herba Cistanche ایک مقامی (ہانگ کانگ میں مقیم) ہربل ڈیلر (لی ہونگ کی) سے خریدی گئی تھی۔ اس جڑی بوٹی کی تصدیق سپلائر کے ذریعہ کی گئی تھی اور ایک واؤچر نمونہ (HKUST00301) ہانگ کانگ یونیورسٹی آف سائنس اینڈ ٹیکنالوجی (HKUST) کے شعبہ حیاتیاتی کیمیا میں جمع کرایا گیا تھا۔ جڑی بوٹی کا میتھانول نکالنا پچھلے مطالعات کی بنیاد پر کیا گیا تھا جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ اس طرح کے نچوڑ سے مائٹوکونڈریل اے ٹی پی کی نسل میں اضافہ ہوتا ہے اور چوہوں کے دلوں میں I/R چوٹ سے محفوظ رہتا ہے (لیونگ، 2006؛ لیونگ اینڈ کو، 2008)۔ مختصراً، Herba Cistanche (400 g) کو چھوٹے چھوٹے ٹکڑوں میں کاٹا گیا اور 300mL میتھانول میں 60 ڈگری پر 2 گھنٹے کے لیے ریفلکس کے نیچے گرم کرکے نکالا گیا، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے (لیونگ اینڈ کو، 2008)۔ طریقہ کار دو بار دہرایا گیا تھا۔ جمع شدہ عرق کو کم دباؤ میں سالوینٹس کو بخارات بنا کر خشک کیا گیا تھا۔ خام جڑی بوٹیوں کی مقدار کے حوالے سے پیداوار 42% (w/w) تھی۔ استعمال تک نچوڑ 4 ڈگری پر محفوظ کیا گیا تھا۔ اگرچہ چینی جڑی بوٹیاں روایتی طور پر زبانی استعمال کے لیے پانی سے نکالی جاتی ہیں، لیکن ہمارے پہلے مطالعے میں میتھانول کو نمونوں کی پروسیسنگ اور ذخیرہ کرنے میں سہولت کے لیے استعمال کیا گیا تھا (Yim & Ko, 2002)، اور ہم نے میتھانول نکالنے کو ہر لحاظ سے تسلی بخش پایا۔

جانوروں کی دیکھ بھال اور منشیات کا علاج

بالغ مادہ Sprague-Dawley چوہوں (8-10 ہفتوں کی عمر؛ 200-230 g) نمی پر قابو پانے والے کمرے میں، 12 گھنٹے کے تاریک/روشنی سائیکل کے ساتھ، تقریباً 22 ڈگری پر رکھا گیا تھا، اور کھانے اور پانی کی اجازت دی جاتی تھی۔ جانوروں کو تصادفی طور پر مختلف گروپوں میں تفویض کیا گیا تھا، ہر گروپ میں پانچ جانور تھے۔ چوہوں نے وصول کیا۔ہربا سیستانچے کا عرقintragastrically ({{0}}.2 g/mL پانی میں) 0.5g/kg یا 1.0 g/kg مسلسل 3 دن تک۔ کنٹرول (غیر علاج شدہ) جانوروں کو صرف پانی ملا۔ آخری خوراک کے چوبیس گھنٹے بعد، بائیو کیمیکل تجزیہ کے لیے اینستھیٹائزڈ جانوروں سے دل کے وینٹرکولر ٹشو حاصل کیے گئے۔ تمام تجرباتی پروٹوکول کو ریسرچ پریکٹس کمیٹی، HKUST نے منظور کیا تھا۔

مائٹوکونڈریل فریکشن کی تیاری

کیما بنایا ہوا دل کے وینٹریکولر ٹشوز (~{{0}}.6g) برف کے ٹھنڈے سوکروز بفر [0.32M sucrose، 1mM ethylene diamine tetraacetic acid کے ایک 10- گنا (w/v) زیادہ میں ہم آہنگ کیے گئے تھے۔ (EDTA)، 50mm Tris/HCl؛ پی ایچ 7.4] ایک Teflon-glass homogenizer کا استعمال کرتے ہوئے، 4000 rpm پر، 25-30 سٹروک کے ساتھ۔ مائٹوکونڈریل چھرے 30 منٹ کے لیے 800×g پر 4 ڈگری پر سینٹرفیوگریشن کے ذریعے ٹشو ہوموجینیٹس سے تیار کیے گئے تھے، اور طہارت کا تعین بالترتیب سپرنٹنٹ اور گولی میں succinate dehydrogenase اور lactate dehydrogenase کی متعلقہ مخصوص سرگرمیوں کی پیمائش سے کیا گیا تھا، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے (Evan) 1992)۔ مائٹوکونڈریل چھرے 1 ملی لیٹر ہوموجنائزنگ بفر میں معطل کردیئے گئے تھے۔

مائٹوکونڈریل کم گلوٹاتھیون اور آکسائڈائزڈ گلوٹاتھیون کی سطح کی پیمائش

Griffith (198{{17}) سے ترمیم شدہ پروٹوکول میں مائٹوکونڈریل کم شدہ گلوٹاتھیون (GSH) کی سطحوں کا تعین 5،59-dithiobis(2- nitrobenzoic acid) (DTNB) اور glutathione reductase (GR) کا استعمال کرتے ہوئے انزیمیٹک طور پر کیا گیا تھا۔ })۔ مائٹوکونڈریل فریکشن کا ایک ایلی کوٹ (210 µL) 10% (v/v) 5-سلفوسالیسیلک ایسڈ (SSA) کے 90 µL کے ساتھ ملایا گیا تھا۔ مرکب کو 10 منٹ کے لیے 600×g پر سینٹرفیوج کیا گیا۔ آکسیڈائزڈ گلوٹاتھیون (GSSG) کی سطحوں کی پیمائش کرنے کے لیے، 100µL مقدار میں SSA سپرنٹنٹس کو 10 µL 20% (w/v) 2-vinylpyridine اور 10 µL 60% (v/v) ٹرائیتھانولامین کے ساتھ مائیکرو فیوج میں ملایا گیا۔ ہر ٹیوب کو کمرے کے درجہ حرارت پر کم از کم 1 گھنٹے تک کھڑے رہنے کی اجازت تھی۔ فاسفیٹ بفر (0.1M، 5mM Na2 EDTA؛ pH7.5 کے ساتھ) میں 0.63mM DTNB اور 0.053mM NADPH (کم نیکوٹینامائڈ ایڈنائن ڈائنوکلیوٹائڈ فاسفیٹ) پر مشتمل ایک رد عمل کا مرکب 30 ڈگری پر پہلے سے انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ ایس ایس اے سیمپل سپرنیٹنٹ (کل گلوٹاتھیون) یا جی ایس ایس جی نمونہ میں سے ایک ایلی کوٹ (30 µL) کنویں کے ایک کنویں میں شامل کیا گیا تھا 96- کنویں کے مائکرو ٹائٹر پلیٹ، اور 180 µL پہلے سے گرم رد عمل کا مرکب، جس میں 0.525U/ پر مشتمل تھا۔ mL GR، اگلا شامل کیا گیا۔ 412nm پر جاذب تبدیلیوں کی 5 منٹ تک سپیکٹرو فوٹومیٹرک طور پر نگرانی کی گئی۔ GSH اور GSSG کے ارتکاز کا اندازہ GSH اور GSSG کا استعمال کرتے ہوئے انشانکن منحنی خطوط سے لگایا گیا [3% (w/v) SSA میں تحلیل] معیار کے طور پر اور nmol/mg پروٹین کے طور پر ظاہر کیا گیا۔ جی ایس ایچ کی سطح کا تخمینہ کل جی ایس ایچ سے جی ایس ایس جی کی دوگنا مقدار کو گھٹا کر لگایا گیا۔

جنسی فعل کو بہتر بنانے کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا PHGS75% ECH 30% ACT 12%

مائٹوکونڈریل Ca2+ مواد کی پیمائش

Mitochondrial Ca{{0}} مواد کی پیمائش Ca2+-حساس فلوروسینس پروب، Fluo-5N AM ایسٹر (مالیکیولر پروبس، یوجین، یا) Victor2 ملٹی لیبل کاؤنٹر کو استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی۔ (ماڈل 1420؛ PerkinElmer، Turku، Finland)، جیسا کہ Menze et al میں بیان کیا گیا ہے۔ (2005)۔ Ca2+ dissociation constants (Kd اقدار) کا تعین Ca2+ کیلیبریشن کٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا جو ارتکاز کی حد 1–1000 µM میں درست ہے۔ کٹ مینوفیکچرر کے ڈیٹا کے مطابق، تخمینہ شدہ Kd قدریں 90–100 µM تھیں، اعلی وشوسنییتا کے ساتھ۔ مائٹوکونڈریل فریکشن (0.5mg پروٹین/mL حتمی ارتکاز) کے ایک ایلی کوٹ (25µL) کو 25 µL انکیوبیشن بفر {100mM KCl اور 30mM MOPS [3-(N-morpholino)propanesulfonic acid] کے ساتھ ملایا گیا تھا۔ pH7.2} ایک 96-کنویں سیاہ مائیکرو ٹائٹر پلیٹ میں۔ مرکب کو 15 منٹ کے لئے 25 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ 25 µL ڈیجیٹونن (50 µg/mL) اور 25 µL Fluo-5N AM ایسٹر (1 µM in 0.005% (w/v) Pluronic F-127) پھر شامل کیے گئے۔ جھلی پارمیشن کی سہولت کے ذریعے، ڈیجیٹونن نے فلوروسینٹ ڈائی کے مائٹوکونڈریل اندراج میں ثالثی کی۔ ہم نے پایا کہ چوہے کے دل کے مائٹوکونڈریل تیاریوں میں Fluo{{34}N کی سطح ڈیجیٹونن کی موجودگی میں 20-گنا بڑھ گئی ہے۔ رد عمل کے مرکب کو 30 منٹ کے لئے 25 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا تھا، اور فلوروسینس ریڈنگز کو 488nm کی حوصلہ افزائی طول موج اور 532nm کی اخراج طول موج پر ماپا گیا تھا۔ مائٹوکونڈریل Ca2+ مواد کا تخمینہ انشانکن وکر کا استعمال کرتے ہوئے لگایا گیا تھا اور اسے µmol/mg پروٹین کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔

مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت کی پیمائش

جھلی کی صلاحیت (ΔΨm) کا اندازہ بوناویٹا ایٹ ال کے طریقہ کار سے کیا گیا تھا۔ (2003)، فلوروسینٹ ڈائی کا استعمال کرتے ہوئے، لیپوفیلک کیشنک پروب 5,596،69- ٹیٹراکلورو-1،193،39-ٹیٹراتھیلبینزیمائڈازولیل کاربوسائنائن آئوڈائڈ، جسے عام طور پر JC کہا جاتا ہے-1۔ ایلی کوٹس (50 µL) مائٹوکونڈریل فریکشنز (1mg پروٹین/mL میں ایڈجسٹ) کو 37 ڈگری پر 50 µL سبسٹریٹ محلول (6mM پائروویٹ اور 6mM میلیٹ پر مشتمل)، 25 µL پریٹریٹڈ اڈینوسین (Mphates3 AD) کا حل (MPH3) اور 25 µL of 3 µM JC-1، اندھیرے میں۔ وکٹور 2 ملٹی لیبل کاؤنٹر کا استعمال کرتے ہوئے ΔΨm اقدار 535nm (FL1) بمقابلہ 580nm (FL2) پر فلوروسینس کی پیمائش کرکے حاصل کی گئیں۔ JC-1 مائٹوکونڈریا میں مجموعی طور پر تشکیل دیتا ہے، جس کے نتیجے میں اعلی FL2 فلوروسینس کی قدر ہوتی ہے اور عام مائٹوکونڈریل صلاحیت کی نشاندہی ہوتی ہے۔ ΔΨm کا نقصان FL2 فلوروسینس میں کمی کا باعث بنتا ہے (JC-1 کم حد تک جمع ہوتا ہے) اور FL1 فلوروسینس میں ایک ساتھ اضافہ (JC-1 monomers سے)۔ ڈیٹا کو FL1/FL2 فلوروسینس اقدار کے تناسب کے طور پر ظاہر کیا گیا تھا۔ کاربونیل سائینائیڈ ایم-کلوروفینیل ہائیڈرازون (سی سی سی پی)، ایک ΔΨm-گرنے والا ایجنٹ، پرکھ کی توثیق کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔

مائٹوکونڈریل سانس کی پیمائش

کلارک قسم کے آکسیجن الیکٹروڈ (ساراسوٹا، FL، USA) سے لیس Hansatech Oxygraph-Plus آلہ کا استعمال کرتے ہوئے مائٹوکونڈریل سانس کی شرح 37 ڈگری پر ماپا گیا۔ مائٹوکونڈریل فریکشنز (0.6mg پروٹین/mL) کو 125mM KCl، 20mM MOPS، 10mM Tris، 0.5mM ethylene glycol tetraacetic acid (EGMPO)، اور 2MPO4mH پر مشتمل سانس کے بفر میں معطل کیا گیا تھا۔ پی ایچ 7.2 2 منٹ تک 37 ڈگری پر انکیوبیشن کے بعد، ہر نمونے کو 50 µL سبسٹریٹ سلوشن (5mM پائروویٹ اور 5mM میلیٹ) ملا۔ سانس کی شرح 1mM ADP کی موجودگی (ریاست 3) میں اور تمام ADP سے ATP (ریاست 4) میں فاسفوریلیشن کے بعد ناپی گئی۔ ریاست 3 کا تناسب: ریاست 4 سانس لینے کی شرح تنفس پر قابو پانے کا انڈیکس ہے، جو سانس اور فاسفوریلیشن کے درمیان جوڑے کی تنگی کی نشاندہی کرتا ہے (جاوادوف ایٹ ال۔، 2005؛ کوابارا وغیرہ۔، 1997)۔ ذیلی محلول کے اضافے سے پہلے، ریاست 1 کے تنفس کی شرح ریاست 2 کے تنفس کے آغاز تک ماپا جاتا تھا، اور ADP کے اضافے سے پہلے ریاست 2 کے تنفس کی شرح کا تخمینہ لگایا گیا تھا۔

شماریاتی تجزیہ

متعدد گروپ موازنہ کے لیے تغیرات (ANOVA) کے یک طرفہ تجزیہ کے ذریعے ڈیٹا کا تجزیہ کیا گیا۔ کم از کم اہم فرق (LSD) اقدار کو دو گروپوں کے درمیان اہم فرق کی نشاندہی کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا جب p قدریں < 0.05 تھیں۔

جنسی فعل کو بہتر بنانے کے لیے نیچرل سیسٹینچ ٹیبلوسا PHGS75% ECH 30% ACT 12%

نتائج

جیسا کہ اعداد و شمار 1 اور 2 میں دکھایا گیا ہے، میتھانول کے ساتھ علاجHerba Cistanche کا عرق({{0}}.5 یا 1.0g/kg/day×3) چوہوں کے دلوں میں مائٹوکونڈریل گلوٹاتھیون کی حیثیت کو نمایاں طور پر بڑھایا، جیسا کہ GSH کی سطح میں خوراک پر منحصر اضافہ (11–30%) اور اس میں کمی سے ظاہر ہوتا ہے۔ جی ایس ایس جی کی سطح (31٪)۔

کنٹرول کے مقابلے میں Herba Cistanche علاج خوراک پر منحصر مائٹوکونڈریل Ca2+ کی سطح میں چوہوں کے دلوں میں کمی آئی۔ 1۔{4}} g/kg (شکل 3) کی خوراک پر دبائو 41% تھا۔

Herba Cistanche علاج نے mitochondrial ΔΨm میں اضافہ کیا، جیسا کہ FL1/FL2 تناسب میں کمی (14–16%) سے ظاہر ہوتا ہے۔ CCCP (100 µM) ΔΨm کے خاتمے کا سبب بنا، جیسا کہ FL1/FL2 تناسب میں اضافے سے ظاہر ہوتا ہے (شکل 4)۔

ہربا سیستانچ کا علاجبڑھا ہوا مائٹوکونڈریل سانس، جیسا کہ کنٹرول کے مقابلے ٹیسٹ جانوروں میں ریاست 3 کے تنفس (84%) کی نمایاں طور پر زیادہ شرح سے ظاہر ہوتا ہے (ٹیبل 1)۔ ریاست 2 اور ریاست 4 کے تنفس کی سطحوں میں بالترتیب 47 اور 80% اضافہ ہوا، لیکن ریاست 4 کے تنفس کے محرک کو 1mM guanosine-5'-diphosphate، جو پروٹین 2/3 کو جوڑنے کا ایک روکنے والا ہے، نے مکمل طور پر دبا دیا تھا۔ Herba Cistanche کے علاج نے سانس کے کنٹرول انڈیکس کو متاثر نہیں کیا، جیسا کہ ریاست 3/State 4 کے تنفس کی شرح کے تناسب سے اندازہ لگایا گیا ہے۔

بحث

ہربا سیستانچے سے علاج شدہ چوہوں کے دلوں سے الگ تھلگ مائٹوکونڈریا نے بہتر گلوٹاتھیون کی حیثیت ظاہر کی، جیسا کہ GSH کی سطح میں اضافہ اور GSSG کی سطح میں کمی سے ظاہر ہوتا ہے۔ mitochondrial glutathione redox اسٹیٹس کی دیکھ بھال I/R چوٹ کے خلاف کارڈیو پروٹیکشن کے لیے اہم ہے (Chiu & Ko, 2003)۔ مایوکارڈیل اسکیمیا کے دوران سائٹوسولک Ca2+ مواد میں اضافہ ہوتا ہے، اندرونی جھلی Ca2+ یونپورٹر (Ataka et al.، 1992؛ Grover et al.، 1990) کے ذریعے اٹھانے کے ذریعے، جس کے نتیجے میں mitochondrial Ca{{6} } جمع ہمارے نتائج بتاتے ہیں کہ Herba Cistanche extract کے ساتھ علاج نے mitochondrial glutathione redox کی حیثیت کو بڑھایا اور mitochondrial Ca2+ کی سطح کو کم کیا، جو مایوکارڈیل I/R کی چوٹ کے خلاف تحفظ کا متحمل ہو سکتا ہے (لیونگ، 2006)۔ GSSG اور Ca{11}} کی سطحوں کو مزید کم کرنے کے لیے 1.0 جی/کلوگرام کی زیادہ خوراک پر ہربا سیستانچے کے علاج کی نااہلی، گلوٹاتھیون ریڈوکس کی صلاحیت اور کیلشیم کی حیثیت کو متاثر کرنے والے خود کو محدود کرنے والے ریگولیٹری میکانزم کے وجود سے متعلق ہو سکتی ہے۔ مائٹوکونڈریا میں

مائٹوکونڈریا الیکٹران کی نقل و حمل کے ذریعہ اندرونی جھلی کے پار ایک الیکٹرو کیمیکل پروٹون گریڈینٹ تیار کرتا ہے۔ اس میلان کو ATP سنتھیس کے ذریعے فاسفوریلیٹ ADP سے ATP کے لیے استعمال کیا جاتا ہے۔ مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت میں کمی، جیسا کہ کلچرڈ کارڈیو مایوسائٹس (چیو ایٹ ال۔، 2008) کی چوٹ کے بعد ہائپوکسیا/ری آکسیجنیشن میں، جس کے نتیجے میں اے ٹی پی کی نسل میں کمی واقع ہوتی ہے۔ Herba Cistanche علاج، جو مایوکارڈیل مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت کو بڑھا سکتا ہے، ممکنہ طور پر ATP کی پیداوار کو بڑھاتا ہے، خاص طور پر پوسٹ اسکیمک ریپرفیوژن کے دوران۔ ایک بار پھر، خود کو محدود کرنے والے ریگولیٹری میکانزم کا وجود اس بات کی وضاحت کر سکتا ہے کہ مائٹوکونڈریل جھلی کی صلاحیت پر Herba Cistanche کے علاج کے اثرات خوراک پر منحصر کیوں نہیں ہیں۔

Herba Cistanche کے علاج نے چوہے کے دل کے مائٹوکونڈریا میں ریاست 3 کے تنفس کی شرح میں بہت زیادہ اضافہ کیا، جیسا کہ آکسیجن کی کھپت سے اندازہ ہوتا ہے۔ یہ تلاش مائٹوکونڈریل اے ٹی پی پیدا کرنے کی صلاحیت (لیونگ اینڈ کو، 2008) کے وٹرو اور سیٹو پیمائش سے حاصل کردہ نتائج سے مطابقت رکھتی ہے۔ حیرت انگیز طور پر، اگرچہ ہربا سیستانچے کے علاج نے مایوکارڈیل اے ٹی پی کی مستحکم حالت کی سطح کو کم کیا (ڈیٹا نہیں دکھایا گیا)، علاج نے مائٹوکونڈریل اے ٹی پی کی نسل کو بڑھایا۔ بے جوڑ سانس کی شمولیت ان متضاد مشاہدات کی وضاحت کر سکتی ہے۔ غیر جوڑا ہوا آکسیڈیٹیو فاسفوریلیشن اس وقت ہوتا ہے جب پروٹون مائٹوکونڈریل اندرونی جھلی کے پار واپس مائٹوکونڈریل میٹرکس میں منتقل ہو جاتے ہیں، اس طرح الیکٹران ٹرانسپورٹ چین کے ذریعے بننے والی جھلی کی صلاحیت کو ختم کر دیا جاتا ہے۔ اس کے نتیجے میں پروٹون محرک قوت میں کمی واقع ہوتی ہے جو اے ٹی پی کی تشکیل کو چلاتی ہے (گاروی، 2003)۔ نتیجے کے طور پر، مائٹوکونڈریا میں Ca2+ ارتکاز اور ROS کی پیداوار ڈرامائی طور پر کم ہو جاتی ہے (Teshima et al.، 2003)۔ یہ تجویز موجودہ مطالعہ کے نتائج سے مطابقت رکھتی ہے، جس میں ہربا سیستانچے سے علاج کیے جانے والے دلوں میں مائٹوکونڈریل Ca2+ کی سطح میں کمی واقع ہوئی ہے۔ بے جوڑ تنفس کے بارے میں، انکپلنگ پروٹینز (UCPs) کی ترکیب Herba Cistanche کے علاج سے متاثر ہو سکتی ہے۔ UCPs آکسیڈیٹیو فاسفوریلیشن کو جوڑنے کے لیے جانا جاتا ہے، اور ٹرانسجینک چوہوں کے دلوں میں UCP1 کا اظہار I/R-حوصلہ افزائی مایوکارڈیل نقصان (Hoerter et al.، 2004) سے محفوظ ہے۔ یو سی پی کے غیر منسلک اثر کو پیورین نیوکلیوٹائڈ ڈائی فاسفیٹس اور ٹرائی فاسفیٹس (جیسے ADP، ATP، guanosine diphosphate (GDP)، اور GTP) (Echtay et al.، 2002) کے ذریعے روکا گیا تھا۔ موجودہ مطالعہ میں، مائٹوکونڈریل پیرامیٹرز جیسے جھلی کی صلاحیت اور سانس لینے کی شرح کو ADP کی موجودگی میں ماپا گیا تھا (بطور سبسٹریٹ)؛ لہذا UCPs کے غیر جوڑنے والے اثر کو روک دیا گیا تھا۔ تاہم، جب ADP کی غیر موجودگی میں mitochondrial State 4 کے تنفس کی شرح کی پیمائش کی گئی، تو یہ شرح علاج نہ کیے جانے والے دلوں کے مقابلے میں Herba Cistanche- علاج شدہ دلوں سے تیار کردہ mitochondria میں زیادہ تھی۔ ریاست 4 تنفس کی شرح مائٹوکونڈریا کے ذریعہ آکسیجن کی کھپت کی عکاسی کرتی ہے جب پروٹون ایک میکانزم کے ذریعے مائٹوکونڈریل میٹرکس میں واپس آتے ہیں جس میں F1 F0 -ATPase شامل نہیں ہوتا ہے (گاروی، 2003)۔ ریاست 4 کے تنفس میں Herba Cistanche کی حوصلہ افزائی میں UCPs کی ممکنہ شمولیت کو اس بات کی تائید حاصل ہے کہ اس اضافہ کو GDP (Bento et al., 2007) نے دبایا تھا۔

آخر میں، Herba Cistanche کے ساتھ علاج mitochondrial glutathione کی حیثیت کو بڑھا سکتا ہے، mitochondrial Ca2+ کی سطح کو کم کر سکتا ہے، اور چوہے کے دلوں میں mitochondrial جھلی کی صلاحیت اور سانس کی شرح کو بڑھا سکتا ہے۔ mitochondrial glutathione کی حیثیت اور فعال صلاحیت میں اضافہ، اور UCPs کی پوٹیٹیو انڈکشن کا تعلق کارڈیو پروٹیکشن سے ہو سکتا ہے۔ہربا سیستانچ کا علاجI/R چوٹ کے بعد۔

نیچرل CISTANCHE TUBULOSA PLANT CISTANCHE EXTRA PHGS75% ECH 30% ACT 12%