فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈز، سیستانچ کا فعال جزو، نیورو پروٹیکٹو کردار کیسے ادا کرتے ہیں؟

Xue Gong†a , Yan Xu†b , Kai Renc , Xiaorong Baid , Chunhong Zhanga

خلاصہاس مطالعے میں، ہم نے آٹھ کو الگ تھلگ کیا۔phenylethanoidglycosidesParaboea martini سے پہلی بار اور ان کے بنیادی میکانزم کا جائزہ لیا۔neuroprotectiveاثراتPC12 خلیوں میں H2O2- حوصلہ افزائی کی چوٹ کے خلاف۔ ایم ٹی ایس طریقہ کو اسکرین کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔phenylethanoidglycosidesحفاظتی صلاحیت کے لیے۔ اس کے بعد، HO-1 اور GCLC کی ٹرانسکرپشن لیولز کا پتہ لگانے کے لیے qRT-PCR اور ویسٹرن بلاٹنگ تجزیہ کا استعمال کیا گیا، جو Nrf2 کے ذریعے ریگولیٹ ہوتے ہیں۔ HO-1 اظہار میں Nrf2 کی شمولیت کا تجزیہ کرنے کے لیے inhibitor ZnPP کا استعمال کیا گیا تھا۔ تجزیوں سے معلوم ہوا کہ caleolarioside B، paraboside B، اور paraboside II نے بھی HO-1 کے اظہار کو بڑھاوا دیا، لیکن GCLC پر کوئی واضح اثر نہیں دکھایا۔ ZnPP کے ساتھ پہلے سے علاج نے نمایاں طور پر کم کیا۔neuroprotectiveاثرات. اس طرح، P. martini سے الگ تھلگ phenylethanoid glycosides نے PC12 خلیات کو H2O2- سے HO-1 کو اپ گریڈ کرکے نقصان پہنچایا۔ نتائج نے اس بات کا ثبوت فراہم کیا کہ پی مارٹینی کے علاج کے لیے ممکنہ علاج کا ایجنٹ ہو سکتا ہے۔neurodegenerativeبیماریاں.

آرٹیکل ہسٹری8 اپریل 2019 کو موصول ہوا قبول 30 جولائی 2019

مطلوبہ الفاظپیرابویا مارٹینی؛phenylethanoid glycosides; neuroprotective اثرات؛ زنک protoporphyrin؛ HO-1

رابطہ:joanna.jia@wecistanche.com/ واٹس ایپ: 008618081934791

Cistanche deserticola کے نیورو پروٹیکٹو اثر کا طریقہ کار، مزید جاننے کے لیے یہاں کلک کریں۔

آکسیڈیٹیو تناؤ کئی بیماریوں کے روگجنن میں ایک اہم کردار ادا کرنے کے لیے جانا جاتا ہے۔ یہ ایٹولوجی سے منسلک ہےایک دماغی مرض کا نام ہے(AD)، پارکنسنز کی بیماری (PD)، مرگی، اور دیگر بیماریاں [1–3]۔ فی الحال، AD، PD، اور دیگر بیماریوں کے روگجنن کے مطالعہ میں مسلسل پیش رفت ہوئی ہے۔ تاہم، AD، PD، اور دیگر بیماریوں کے تحت مالیکیولر میکانزم کے محدود علم کی وجہ سے، ان بیماریوں کے لیے مؤثر روک تھام یا علاج کی حکمت عملیوں کا ادراک نہیں کیا گیا ہے [4]۔ H2O2 رد عمل آکسیجن پرجاتیوں (ROS) کا ایک اہم جزو ہے۔ اس کے مطابق، H2O2-حوصلہ افزائی PC12 سیل کی چوٹ آکسیڈیٹیو تناؤ کا سب سے عام استعمال شدہ ماڈل ہے اور نیورو پروٹیکٹو اثرات کے تجرباتی مطالعے میں بڑے پیمانے پر استعمال ہوتا ہے [5]۔ Heme oxygenase 1 (HO-1) اور glutamate-cysteine ​​ligase-catalytic subunit (GCLC) اہم سیلولر اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز ہیں، اور دونوں جینز نیوکلیئر فیکٹر erythroid 2 (Nrf2) کے بہاو کو منظم کیے جاتے ہیں، جو ایک امید افزا علاج کے طور پر ابھر رہا ہے۔ نیورو پروٹیکشن کا ہدف [6,7]۔فینی لیتھانائیڈglycosidesC-6-C-3 یونٹ سے ماخوذ، بہت سے فینولک ہائیڈروکسیل گروپس پر مشتمل ہے اور اس میں اہم اینٹی آکسیڈینٹ اور اینٹی ایجنگ سرگرمیاں ہیں۔ پچھلے کچھ سالوں میں، مطالعات نے اشارہ کیا ہے کہ بہت سے دواؤں کے پودوں میں فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈز ہوتے ہیں جو اہم اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی کو ظاہر کرتے ہیں۔ مثال کے طور پر، Herba cistanche سے حاصل کردہ phenylethanoid glycosides AD میں علمی خسارے پر حفاظتی اثرات مرتب کرنے کے لیے جانا جاتا ہے۔ اس مطالعہ نے AD سنسنی تیز رفتار ماؤس 8 (SAMP8) ماڈل کا استعمال کرتے ہوئے متعلقہ حفاظتی طریقہ کار کی تحقیقات کی۔ نتائج نے اشارہ کیا کہ SAMP8 چوہوں میں علمی خسارے کو کم کرنے کے لیے phenylethanoid glycosides کی صلاحیت کا تعلق Synaptic plasticity کے فروغ سے ہو سکتا ہے جس میں اینٹی آکسیڈینٹ عمل شامل ہیں [8]۔ اس مطالعہ میں، دو فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈز کو ٹیکٹونا گرینڈس (ساگوان) لکڑی کی گرہوں سے الگ اور پاک کیا گیا تھا۔ ان مرکبات نے قابل ذکر اینٹی آکسیڈینٹ اثرات ظاہر کیے جن کا تعین ایمپرومیٹرک طریقہ استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا [9]۔ مزید برآں، لنڈرنیا رولیلوائیڈز کے کیفیوائل فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈ مرکبات خوراک پر منحصر اینٹی آکسیڈینٹ اور سپر آکسائیڈ ایون فری ریڈیکل اسکیوینجنگ اثرات وٹرو میں ڈالتے ہیں [10]۔ phenylethanoid glycosides کے عمل کے طریقہ کار کا تعلق Nrf2/ARE سگنلنگ پاتھ وے کے ضابطے سے ہے، جو SOD، CAT، GSH-PX، اور دیگر اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز کی ترکیب کو متاثر کرتا ہے [11]۔ Gesneriaceae خاندان، جس میں 150 نسلیں اور تقریباً 3700 انواع شامل ہیں، بنیادی طور پر مشرقی اور جنوبی ایشیا، اوشیانا، جنوبی امریکہ، افریقہ، جنوبی یورپ اور میکسیکو کے اشنکٹبندیی اور معتدل علاقوں میں تقسیم کی جاتی ہیں [12]۔ چین میں Gesneriaceae سے تعلق رکھنے والی 54 نسلیں اور تقریباً 463 انواع ہیں۔ یہ اطلاع دی گئی کہ تقریباً 100 پرجاتیوں کی طبی افادیت ہے اور ان میں سے زیادہ تر بنیادی طور پر گوانگسی اور گوئژو صوبوں میں تقسیم کیے گئے ہیں [13]۔ حالیہ برسوں میں، دنیا کے مختلف علاقوں میں Gesneriaceae پودوں پر تحقیق میں بتدریج اضافہ ہوا ہے، اور جسمانی سرگرمیوں کے ساتھ کچھ نئے اجزاء پائے گئے ہیں [14]۔ Paraboea martinii (Levl.) Burtt کا تعلق Parabola (Gesneriaceae) سے ہے اور یہ ایک جڑی بوٹیوں والا پودا ہے۔ "چینی روایتی میڈیسن ریسورس ریکارڈز" کی بنیاد پر یہ ریکارڈ کیا گیا کہ پورا پودا بطور دوا استعمال ہوتا ہے۔ مزید برآں، یہ ہیمیٹمیسس، ورم، پیچش، تکلیف دہ چوٹ، اور فریکچر [15] جیسے حالات پر بہت سے فارماسولوجیکل سرگرمیاں انجام دے سکتا ہے۔ بائی نے ثابت کر دیا۔phenylethanoidglycosidesGesneriaceae پودوں کے اہم کیمیائی اجزاء میں سے ایک ہیں [16]۔ کچھ محققین نے یہ بھی پایا ہے۔phenylethanoidglycosideshave significant antioxidant activities [17]. Li demonstrated that phenylethanoid glycosides of Cistanche deserticola have significant antioxidant activity [18]. In addition, Ju systematically studied the neuroprotective activities of phenylethanoid glycosides using PC12 cell models. The results indicated that phenylethanoid glycosides significantly attenuate the damage induced by Aβ1-42 [19]. In our studies, we isolated eight phenylpropanoid glycosides (paraboside A, paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B, isonuomioside A) from P. martini [20]. All compounds were isolated from the genus Parabola for the first time, and the compounds paraboside A, paraboside B, p paraboside I, paraboside II, and paraboside III were new compounds [20]. In a continuing search for molecules with antioxidant properties, phenylpropanoid glycosides were examined. However, whether these phenylpropanoid glycosides from P. martini could protect against H2O2-induced PC12 cell injury was previously unclear. In this study, we examined the protective effects of phenylpropanoid glycosides on H2O2-induced damage to PC12 cells. We also examined the effects and preliminary mechanism underlying the activity of phenylpropanoid glycosides with respect to the activation of HO-1 and GCLC in vitro. Materials and methods Materials Paraboea martini (Level.) Burtt was collected from Daxin County, Guangxi Autonomous Region in August 2014 and verified by Dr. Minhui Li (Baotou Medical College). Voucher specimens were deposited at the Laboratory of Pharmacognosy and Phytochemistry. Eight phenylpropanoid glycosides (paraboside A, paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B, isonuomioside A) were extracted and separated from P. martinii (Levl.) Burtt by prof. Xiaoqin Wang [20]. The purity (>HPLC چوٹی ایریا نارملائزیشن کے طریقہ کار سے 98 فیصد ) آٹھ فینیلپروپینائڈ گلائکوسائیڈز کی پیمائش کی گئی۔ مثال کے طور پر، پیرابوسائیڈ بی اور پیرابوسائیڈ II کے کرومیٹوگرافی چارٹ کو شکل 1 میں دکھایا گیا ہے، اور ان کا متعلقہ مواد بالترتیب 98.23 فیصد اور 99.20 فیصد پایا گیا۔ چائنا اکیڈمی آف سائنس (شنگھائی، چین) کے سیل بینک سے ناقص تفریق شدہ چوہا ایڈرینل فیوکروموسیٹوما سیل لائن (PC12) خریدی گئی تھی۔ Dulbecco کی ترمیم شدہ Eagles میڈیم (DMEM) اور ہارس سیرم Gibco (Gaithersburg, MD, USA) سے خریدے گئے تھے۔ فیٹل بوائن سیرم (ایف بی ایس) تھرمو فشر سائنٹیفک (ہائیکلون، والتھم، ایم اے، یو ایس اے) سے خریدا گیا تھا۔ H2O2 Tianjin Fu Yu Reagent Co., Ltd. (Tianjin, China) سے حاصل کیا گیا تھا۔ Trizol Invitrogen (Carlsbad, CA, USA) سے خریدا گیا تھا۔ PrimeScriptTM RT ریجنٹ کٹ (پرفیکٹ ریئل ٹائم) TaKaRa بائیو ٹیکنالوجی کمپنی (Dalian, China) سے حاصل کی گئی تھی۔ HO-1، GCLC، اور GAPDH کے لیے پرائمر سنگون بائیوٹیک (شنگھائی، چین) کے ذریعے ترکیب کیے گئے تھے۔ CellTiter 96® Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay kit (MTS) Promega Corp. (Madison, USA) سے حاصل کی گئی تھی۔ HO-1 زنک پروٹوپورفرین (ZnPP) کے روکنے والے سگما کیمیکل کمپنی (سینٹ لوئس، MO، USA) سے خریدے گئے تھے۔ ایک Thermo311 CO2 انکیوبیٹر (تھرمو، USA)، StepOnePlusTM ریئل ٹائم پی سی آر انسٹرومنٹ تھرمل سائیکلنگ بلاک (تھرمو)، تھرمو سائنٹیفک ملٹیسکن ایف سی (تھرمو)، اور xCELLigence RTCA DPlus Analyzer اور E-Plate 16 (ACEA Bioscience) بھی استعمال کیے گئے تھے۔ .

سیل کلچر اور علاج

پی سی 12 سیل ڈی ایم ای ایم میں اگائے گئے تھے جن میں 5 فیصد ایف بی ایس اور 5 فیصد ہارس سیرم 37 ڈگری پر مرطوب 5 فیصد CO2 ماحول میں تھے۔ پی سی 12 خلیوں کو تین گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا: ایک کنٹرول گروپ، ایک ماڈل گروپ، اور ایک علاج گروپ۔ ڈی ایم ایس او (< 0.01%)="" and="" then="" diluted="" with="" a="" complete="" culture="" medium.="" to="" study="" the="" effects="" of="" the="" eight="" phenylpropanoid="" glycosides="" on="" h2="" o2-induced="" cell="" injury,="" pc12="" cells="" were="" cultured="" with="" the="" eight="" compounds="" at="" concentrations="" of="" 3.125,="" 6.25,="" 12.5,="" 25,="" and="" 50="" μm="" for="" 12="">

H2O2 کا تعین

ماڈل، ہم نے ریئل ٹائم سیلولر تجزیہ (RTCA) کا استعمال کرتے ہوئے H2 O2 کی مناسب حراستی کا تعین کیا۔ PC12 سیلز کو CIM-plate-16 مائکروپلیٹ میں 100 µL کے حجم پر سیڈ کیا گیا اور پھر 5 فیصد CO2 کے ماحول میں 37 ڈگری پر 12 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ PC12 سیلز کو کنٹرول اور ماڈل گروپس میں تقسیم کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، 10 μL H2O2 (50، 100، 200، اور 400 μM) کو ماڈل گروپس میں شامل کیا گیا، اور کنٹرول گروپس کا علاج 10 μL مکمل DMEM کے ساتھ کیا گیا، جو تین پیچیدہ کنوؤں میں قائم ہیں۔ E-Plate 16 کو xCELLigence RTCA میں رکھا گیا تھا، ہر 15 منٹ پر نگرانی کی جاتی تھی، اور نتائج 32 گھنٹے کے لیے ریکارڈ کیے گئے تھے۔ PC12 خلیوں پر H2O2 کے اثر کا تجزیہ xCELLigence RTCA ڈیٹا تجزیہ سافٹ ویئر کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا۔ سیل انڈیکس (CI) قدر کا استعمال H2O2 کی زیادہ سے زیادہ حراستی اور عمل کی مدت کا تعین کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔

کمپاؤنڈ نکالنا اور تنہائی

پہلے بیان کردہ طریقوں کا استعمال کرتے ہوئے ان کی قطبیت کی بنیاد پر حصوں کو الگ کیا گیا تھا۔ ہوا سے خشک، پاؤڈر P. martinii (4 کلوگرام) کو 75 فیصد آبی ایتھنول محلول [20] کے ساتھ لگاتار تین بار نکالا گیا۔ حاصل شدہ عرقوں کو پھر ایتھنول کو ہٹانے کے لیے روٹری ایوپوریٹر کا استعمال کرتے ہوئے مرتکز کیا گیا، اور خام عرق حاصل کیے گئے۔ نمونے ڈیونائزڈ پانی میں تحلیل کیے گئے اور پھر پیٹرولیم ایتھر، ایتھائل ایسیٹیٹ، این-بوتانول اور پانی کے ساتھ یکے بعد دیگرے نکالے گئے۔ n-butanol ایکسٹریکٹ (400 g) کو ایک AB-8 میکروپورس رال کالم اور ایک ایتھنول-H2O2 محلول (0, 1{{47}) کا استعمال کرتے ہوئے تقسیم کیا گیا تھا۔ }، 30، 50، 70، اور 95 فیصد)۔ آخر کار چھ حصے (فرکشن 1–6) حاصل کیے گئے۔ فرکشن 3 اور 4 کو MCI کالم کا استعمال کرتے ہوئے MeOH-H2O2 (10–100 فیصد) کے سٹیپ گریڈینٹ کے ساتھ علیحدگی کا نشانہ بنایا گیا۔ اس کے بعد، مصنوعات کو 50 فیصد MeOH کے ساتھ Sephadex LH-20 کا استعمال کرتے ہوئے الگ تھلگ کیا گیا۔ مرکبات 1 (41.0 ملی گرام) اور 6 (15.6 ملی گرام) فریکشن 3 سے الگ تھلگ تھے۔ ایل ایچ-20 کرومیٹوگرافی 50 فیصد MeOH کے ساتھ بطور ایلیونٹ۔ حتمی الگ تھلگیاں سیمی پریپ، ریورسڈ فیز HPLC (Merck LiChrosorb, RP-18, RP-18, 250 × 10 mm) کے ساتھ 50 فیصد MeOH اور UV کا پتہ لگانے کے ساتھ 280 nm پر مرکبات حاصل کرنے کے لیے انجام دی گئیں۔ (39.0 ملی گرام) اور 5 (9.0 ملی گرام) [20]۔

سیل وابستگی پرکھ

PC12 سیلز کو 2 × 1 کی کثافت پر 96-کنویں پلیٹوں میں سیڈ کیا گیا تھا{{10}4 سیل/کنویں 100 µL کے حتمی حجم پر . PC12 خلیات 12 گھنٹے کے لیے 5 فیصد CO2 کے ساتھ 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کیے گئے تھے۔ اس کے بعد، خلیات کو مختلف ارتکاز (0.025, 0.05, 0.1, 0.2, اور 0.4 mg/mL) اور مرکبات 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, اور کے ساتھ علاج کیا گیا۔ 8 پانچ ارتکاز پر (3.125، 6.25، 12.5، 25، اور 50 μM)۔ 24 گھنٹے پہلے سے علاج کرنے کے بعد، سیل کی عملداری کا تعین ایم ٹی ایس اسسیس کے ذریعہ کیا گیا تھا۔ PC12 خلیوں کو HO-1 inhibitor کے بغیر ZnPP (15 μM) کے بغیر 30 منٹ تک پہلے سے انکیوبیٹ کیا گیا تھا، پھر caleolarioside B، paraboside B، اور paraboside II (3.125 μM) کے ساتھ یا اس کے بغیر 12 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا تھا، اور آخر میں انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ مزید 6 گھنٹے کے لیے 400 μM H2O2 کے ساتھ۔ علاج کے بعد، زندہ بچ جانے والے خلیوں کی تعداد کا تعین ایم ٹی ایس پرکھ کے ذریعے کیا گیا تھا [6]۔

H2O2-علاج شدہ PC12 خلیوں پر خام عرق اور مونومیرک مرکبات کے حفاظتی اثرات

خلیوں کو 100 µL کے حتمی حجم پر ایک {{0}} ویل پلیٹ میں کلچر کیا گیا تھا۔ خام عرقوں کے سیریل ڈائیوشنز (0۔{10}}25, 0.05, 0.1, 0.2, اور 0.4 mg/mL) علاج شدہ گروپ میں شامل کیے گئے تھے۔ 12 گھنٹے پہلے سے علاج کے بعد، علاج شدہ گروپ میں 400 μM H2O2 محلول (زیادہ سے زیادہ ارتکاز) شامل کیا گیا اور ہر کنویں کے H2O2 گروپ کو 6 گھنٹے کے لیے شامل کیا گیا۔ اس کے بعد ہر کنویں میں ایم ٹی ایس محلول شامل کیا گیا، اور پلیٹوں کو 3 گھنٹے کے لیے 37 ڈگری سینٹی گریڈ پر انکیوبیٹ کیا گیا۔ پلیٹوں کو کم رفتار سے کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ کے لیے دوہرایا گیا جب تک کہ تمام کرسٹل مکمل طور پر تحلیل نہ ہو جائیں۔ سیل کے تحفظ کا تعین مینوفیکچرر کے 2204 X. GONG ET AL کے مطابق MTS پرکھ کے نتائج کی بنیاد پر کیا گیا تھا۔ 27 اگست 2021 کی ہدایات پر مہمان کے ذریعے https://academic.oup.com/bbb/article/83/12/2202/6044145 سے ڈاؤن لوڈ کیا گیا۔ آپٹیکل کثافت کا تعین 490 nm کی جاذب طول موج پر کیا گیا تھا۔ ہم نے مرکبات 1، 2، 3، 4، 5، 6، 7، اور 8 کی سرگرمی کو مزید 3 اور 4 سے الگ کیا ہے۔ مرکبات 1، 2، 3، 4، 5، 6، 7، اور 8 کے سیریل ڈائیوشن (3.125، 6.25، 12.5، 25، اور 50 μM) کو H2O2-حوصلہ افزائی PC12 خلیوں پر ان کے متعلقہ حفاظتی اثرات کا تعین کرنے کے لیے علاج شدہ گروپ میں شامل کیا گیا۔

مقداری ریئل ٹائم PCR (qRT-PCR)

3.125 μM caleolarioside B، paraboside B، اور paraboside II کے ساتھ علاج کے بعد PC12 خلیوں کی کٹائی 12 گھنٹے پر کی گئی۔ ٹوٹل آر این اے کو TRIzol-reagent کا استعمال کرتے ہوئے نکالا گیا تھا، اور کل RNA کے aliquots کو مینوفیکچرر کی ہدایات کے مطابق پرائم اسکرپٹ RT ماسٹر کٹ کا استعمال کرتے ہوئے ریورس ٹرانسکرائب کیا گیا تھا۔ پچھلی رپورٹ [21] کے مطابق تجربات کے لیے درج ذیل پرائمر استعمال کیے گئے تھے۔ HO-1: فارورڈ 5′ -GC CTGCTAGCCTGGTTCAAG-3′، ریورس 5′ -AGC GGTGTCTGGGGATGAACTA-3′; GCLC: فارورڈ 5′ - GTCCTCAGGTGACATTCCAAGC-3′، ریورس 5′ -TG TTCTTCAGGGGGCTCCAGTC-3′; GAPDH: آگے 5′-AAGCTGGTCATCAACGGGAAAC-3′، ریورس 5′- GAAGACGCCAGTAGACTCCACG-3′۔ حاصل کردہ سی ڈی این اے کے علی کوٹس کو پھر پی سی آر کے ذریعہ بڑھا دیا گیا۔ رد عمل کے حالات حسب ذیل تھے: 95 ڈگری (30 سیکنڈ) پر ابتدائی ڈینیچریشن، اس کے بعد 95 ڈگری (5 سیکنڈ)، 60 ڈگری (34 سیکنڈ) اور 72 ڈگری (35 سیکنڈ) کے 40 چکر۔ تمام پرائمرز کی جانچ کی گئی اور FL فلوروسینٹ سگنل کا پتہ چلا۔ پھر، △Ct قدر کا حساب لگایا گیا اور درج ذیل مساوات کا استعمال کرتے ہوئے متعلقہ اقدار کا موازنہ کنٹرول گروپ سے کیا گیا: △Ct=Ct (نمونہ) − Ct (انڈوجینس کنٹرول)، △△Ct {{36} } △Ct (نمونہ) −△Ct (غیر علاج)، اور فولڈ تبدیلی=2−△△Ct. Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) کو اندرونی کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔

پروٹین نکالنا

PC12 سیلز کو 100-mm ڈشوں پر 1 × 107 سیلز/ڈش پر سیڈ کیا گیا تھا۔ منسلک ہونے کے بعد، خلیوں کا بالترتیب caleolarioside B، paraboside B، اور paraboside II (3.125 µM) کے ساتھ 12 گھنٹے تک علاج کیا گیا۔ اس کے بعد گلائکوسائیڈز کو ہٹا دیا گیا، اور خلیات کو H2O2 کے ساتھ مزید 6 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا گیا۔ انکیوبیشن کے بعد ، خلیوں کو دو بار ٹھنڈے پی بی ایس سے دھویا گیا اور 1 ملی لیٹر پی بی ایس کے ساتھ برتنوں سے کھرچ دیا گیا۔ سیل ہوموجنیٹس کو 10 منٹ کے لئے 1500 rpm پر سینٹرفیوج کیا گیا تھا۔ علاج کے بعد، کارخانہ دار کی ہدایات کے مطابق 1 mM PMSF کے ساتھ Beyotime RIPA سیل lysis بفر کا استعمال کرتے ہوئے سیلولر پروٹینز نکالے گئے۔ اس کے علاوہ، سائٹوپلاسمک اور نیوکلیئر پروٹینز کو الگ تھلگ کیا گیا جیسا کہ بیو ٹائم نیوکلیئر اور سائٹوپلاسمک ایکسٹرکشن کٹ پروٹوکول میں بیان کیا گیا ہے۔ نمونوں کی پروٹین کی تعداد کا پتہ Beyotime BCA پروٹین پرکھ کٹ کا استعمال کرتے ہوئے پایا گیا، اور تمام نمونے مغربی بلوٹنگ تجزیہ [6] کے لیے −80 ڈگری پر محفوظ کیے گئے تھے۔

مغربی دھبے کا تجزیہ

SDS-PAGE الیکٹروفورسس نکالنے اور اس کے نتیجے میں مختلف گروپوں سے کل پروٹین کو ختم کرنے کے بعد انجام دیا گیا تھا۔ الیکٹروفورسس کے بعد، پروٹین کو PVDF جھلیوں میں منتقل کر دیا گیا، جسے پھر 5 فیصد سکم دودھ پاؤڈر کے ساتھ 4 گھنٹے کے لیے بلاک کر دیا گیا۔ دھونے کے بعد، بنیادی اینٹی باڈی (خرگوش پولی کلونل اینٹی باڈی GAPDH (1:10،000 dilution)، خرگوش پولی کلونل اینٹی باڈی HO-1 (1:1000 dilution)، یا خرگوش پولی کلونل اینٹی باڈی GCLC (1:1000 dilution) جھلیوں میں شامل کیا گیا تھا، جو 4 ڈگری پر راتوں رات انکیوبیٹ کیے گئے تھے۔ اگلے دن، پی وی ڈی ایف جھلیوں کو ٹی ٹی بی ایس میں تین بار دھویا گیا تھا۔ اس کے بعد، ثانوی اینٹی باڈی (کنجوگیٹڈ ایفینیٹی پیور گوٹ اینٹی خرگوش آئی جی جی (1:1000 ڈائلیشن) پر ہارسریڈش کا لیبل لگا ہوا تھا۔ پیرو آکسیڈیس کو جھلیوں میں شامل کیا گیا تھا، جنہیں پھر کمرے کے درجہ حرارت پر 2 گھنٹے کے لیے انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ PVDF جھلیوں کو دھویا گیا اور ایکس رے فلم پر سگنلنگ کی نمائش کے لیے ECL chemiluminescence ڈیٹیکشن ریجنٹ سے مشروط کیا گیا، جسے پھر طے کیا گیا اور اسکین کیا گیا [22]۔

شماریاتی تجزیہ

ڈیٹا کا تجزیہ SPSS 19 کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ p < 0.05="" کی="" قدروں="" کو="" شماریاتی="" لحاظ="" سے="" اہم="" فرق="" کی="" نشاندہی="" کرنے="" کے="" لیے="" سمجھا="" جاتا="">

نتائج H2O2 ماڈل کا قیام

جیسا کہ شکل 2 میں دکھایا گیا ہے، 50، 100، اور 200 μM پر H2O2 سیل کی موت کی مناسب سطح کا سبب نہیں بنتا ہے۔ تاہم، 400 μM H2O2 نے PC12 خلیوں پر 2–6 گھنٹے کے اندر کام کیا، اور خلیات کو آکسیڈیٹیو نقصان مستحکم رہا۔ لہذا، ہم نے غور کیا کہ H2O2 کے ساتھ 6 گھنٹے کے لیے 400 μM کی حراستی میں شامل کرنا PC12 خلیوں کو آکسیڈیٹیو تناؤ سے متاثرہ چوٹ کی نقل کرنے کے لیے مناسب تھا۔

H2O2 کے ساتھ علاج کیے گئے PC12 خلیوں پر خام عرق کے حفاظتی اثرات

H2O2 ماڈل گروپ (شکل 3) میں اس کے مقابلے میں، 0 کے ارتکاز پر n-butanol کا عرق۔{6}}5، 0.1، {{10} }.2، اور 0.4 mg/mL نے ارتکاز پر منحصر انداز میں H2O2 (p < 0۔{23}}5)="" کے="" ذریعہ="" پی="" سی="" 12="" خلیوں="" کو="" آکسیڈیٹیو="" نقصان="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" بہتر="" کیا۔="" ان="" اعداد="" و="" شمار="" نے="" تجویز="" کیا="" کہ="" n-butanol="" کے="" حصے="" میں="" زیادہ="" طاقتور="" حفاظتی="" سرگرمی="" ہوتی="" ہے۔="" تاہم،="" پیٹرولیم="" ایتھر="" اور="" ایتھائل="" ایسیٹیٹ="" کے="" نچوڑ="" نے="" حفاظتی="" سرگرمی="" صرف="" زیادہ="" ارتکاز="" پر="" دکھائی="" (پیٹرولیم="" ایتھر:="" 0.1="" اور="" 0.2="" ملی="" گرام/="" ایم="" ایل،="" پی="">< 0۔{31}="" }5؛="" ایتھائل="" ایسیٹیٹ:="" 0.2="" اور="" 0.4="" ملی="" گرام/ملی="" لیٹر،="" پی=""><0.05)۔ مزید="" یہ="" کہ،="" پانی="" کے="" مرحلے="" کے="" نچوڑوں="" کے="" مختلف="" ارتکاز="" نے="" کوئی="" حفاظتی="" اثرات="" نہیں="" دکھائے="" (p=""> 0.05)۔ مزید برآں، ہم نے ضمنی فائل میں SH-SY5Y ہیومن نیوروبلاسٹوما سیل لائنز (SH-SY5Y) کا استعمال کرتے ہوئے توثیق کے مطالعے سے ڈیٹا شامل کیا ہے۔ 250 μM H2O2 کے ساتھ علاج کے نتیجے میں خلیات کی عملداری میں کمی واقع ہوئی۔ تاہم، caleolarioside B، paraboside B، اور paraboside II (3.125، 6.25، 12.5، 25، اور 50 μM) کے علاج نے SH-SY5Y سیل کی موت کو نمایاں طور پر کم کیا۔ تجربے کے نتائج نے ثابت کیا کہ caleolarioside B، paraboside B، اور paraboside II نے SHSY5Y خلیوں کو H2O2-کی حوصلہ افزائی سیل کی چوٹ سے محفوظ رکھا۔

n-butanol فریکشن سے الگ تھلگ مرکبات کی ساخت

اس بات کی تصدیق کرنے کے لیے کہ n-butanol اقتباس میں فعال اجزاء شامل ہیں، ہم نے نکالنے سے آٹھ مرکبات کو مزید تقسیم کیا۔ مرکبات 1، 2، 3، 4، 5، 6، 7، اور 8 کے ڈھانچے کی شناخت مختلف اسپیکٹرل ڈیٹا (1 H-NMR، 13C-NMR، اور ESI-MS) کے ذریعے پیرابوسائیڈ اے کے شائع کردہ ڈیٹا کے موازنہ کی بنیاد پر کی گئی تھی۔ , paraboside B، paraboside I، paraboside II، paraboside III، nuomioside A، caleolarioside B، اور isonuomioside A، بالترتیب [20]۔ مثال کے طور پر، پیرابوسائیڈ بی کے اعداد و شمار اس طرح تھے: براؤن گم؛ ½ 20 D −55.7 (c 0.05, CH3OH) [20]; UVMeOH زیادہ سے زیادہ nm (logε): 220 (3.61)، 291 (3.54)، 330 (3.66) [20]؛ IRKBr زیادہ سے زیادہ cm−1 : 3392, 2943, 2885, 1699, 1683, 1606, 1521, 1361, 1282, 1163, 1114, 1039, 995, 817 cm [−1] حوالہ 20 میں دکھایا گیا 1 H اور 13C NMR سپیکٹروسکوپک تفصیلی ڈیٹا کے لیے؛ HR-ESI-MS (منفی) m/z 741.2231 [MH]− (calcd. for C33H41O19, 741.2242) [20]۔ پیرابوسائیڈ II کے اعداد و شمار اس طرح تھے: سفید امور فاس پاؤڈر؛ ½ 20 D −80.5 (c 0.05, CH3OH) [20]; UVMeOH زیادہ سے زیادہ nm (logε): 229 (3.74), 322 (3.73) [20]؛ IRKBr زیادہ سے زیادہ cm−1 : 3419, 1699, 1625, 1596, 1515, 1456, 1419, 1263, 1159, 1139, 1068, 1022, 808 cm−1 [20]; حوالہ 20 میں دکھایا گیا 1 H اور 13C NMR سپیکٹروسکوپک تفصیلی ڈیٹا کے لیے؛ ESI-MS (منفی) m/z 637

PC12 خلیوں میں H2 O2-کی حوصلہ افزائی زہریلا کے خلاف الگ تھلگ مرکبات کے حفاظتی اثرات

H2O2-حوصلہ افزائی زہریلا کے سامنے آنے والے PC12 خلیوں کی عملداری پر الگ تھلگ مرکبات کے اثر کی چھان بین کے لیے MTS اسیس کا استعمال کیا گیا۔ جیسا کہ شکل 5 میں دکھایا گیا ہے، کنٹرول گروپ کے مقابلے میں، PC12 خلیات کیلیولاریوسائیڈ بی، پیرابوسائیڈ بی، پیرابوسائیڈ II، یا پیرابوسائیڈ A (3.125، 6.25، 12.5، 25، اور 50 کے پانچ مختلف ارتکاز کے ساتھ پہلے سے علاج کیے گئے ہیں۔ μM) 24 گھنٹے کے لئے سیل کی عملداری میں کوئی خاص فرق نہیں دکھایا گیا (p > 0.05)۔ اس طرح، پی سی 12 خلیوں کی کیلیولاریوسائڈ بی، پیرابوسائیڈ بی، اور پیرابوسائیڈ II کے ساتھ پہلے سے علاج کرنے کے نتیجے میں کوئی سائٹوٹوکسیٹی نہیں ہوئی۔ جیسا کہ شکل 6 میں دکھایا گیا ہے، 400 µM H2O2 نے کنٹرول گروپ کے مقابلے میں سیل کی عملداری میں نمایاں کمی کی۔ مزید برآں، H2O2- کے علاج شدہ PC12 خلیوں کی سیل کی قابل عملیت میں واضح طور پر اضافہ ہوا PC12 خلیات کی پہلے سے علاج کے بعد کیلیولاریوسائیڈ بی، پیرابوسائیڈ بی، اور پیرابوسائیڈ II کے مختلف ارتکاز کے ساتھ؛ مزید برآں، 50 µM caleolarioside B، 50 µM paraboside B، اور 12.5 µM paraboside II کے ساتھ خلیے کی عملداری سب سے زیادہ درج ذیل علاج تھی۔ دیگر پانچ مرکبات نے H2O2-علاج شدہ PC12 خلیوں پر کوئی خاص حفاظتی اثرات نہیں دکھائے۔ اس تلاش کو واضح کرنے کے لیے، ہم ان میں سے ایک کو بطور مثال پیش کرتے ہیں، جب کہ دیگر کو مخطوطہ میں بیان نہیں کیا گیا ہے۔

HO-1 اور GCLC کی نقل کی سطح

اس کے بعد ہم نے پی سی 12 خلیوں میں HO-1 اور GCLC کی نقل کی سطحوں کا تجربہ کیا جن کا علاج caleolarioside B، paraboside B، اور paraboside II سے کیا گیا۔ کل ایم آر این اے علاج شدہ اور غیر علاج شدہ PC12 خلیوں سے 12 گھنٹے کے لئے جمع کیا گیا تھا، اور پھر QRT-PCR کے ذریعہ اظہار تجزیہ کا نشانہ بنایا گیا تھا۔ جیسا کہ شکل 7(a,c,e) میں دکھایا گیا ہے، HO-1 کی نقل کی سطح اس کے بعد نمایاں طور پر بڑھ گئی۔

پی سی 12 خلیوں کو 12 گھنٹے (p < 0="" {{10}}5)="" کے="" لئے="" caleolarioside="" b،="" paraboside="" b،="" اور="" paraboside="" ii="" کے="" اشارہ="" کردہ="" ارتکاز="" کے="" ساتھ="" پہلے="" سے="" علاج="" کیا="" گیا="" تھا۔="" جیسا="" کہ="" شکل="" 7(b)="" میں="" دکھایا="" گیا="" ہے،="" gclc="" کی="" نقل="" کی="" سطح="" میں="" بھی="" نمایاں="" طور="" پر="" اضافہ="" ہوا="" pc12="" خلیوں="" میں="" 12="" گھنٹے="" کے="" لیے="" caleolarioside="" b="" کے="" اشارے="" شدہ="" ارتکاز="" کے="" ساتھ="" پہلے="" سے="" علاج="" کیا="" گیا="" ہے۔="" تاہم،="" پی="" سی="" 12="" سیلز="" میں="" جی="" سی="" ایل="" سی="" کی="" سطح="" 12="" گھنٹے="" کے="" لیے="" پیرابوسائیڈ="" بی="" کے="" ساتھ="" پہلے="" سے="" علاج="" شدہ="" ماڈل="" گروپ="" (p=""><0.05؛ شکل="" 7(d))="" ​​کے="" مقابلے="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" ہوئی۔="" مزید="" برآں،="" پیرابوسائیڈ="" ii="" کے="" علاج="" کے="" ساتھ،="" pc12="" خلیوں="" میں="" gclc="" کی="" سطح="" ماڈل="" گروپ="" (p=""> 0.05؛ شکل 7(f)) کے مقابلے میں نمایاں طور پر مختلف نہیں تھی۔

HO-1 اور GCLC کا اظہار

HO{{0}} اور GCLC اہم سیلولر اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز ہیں، اور دونوں Nrf2-منظم بہاو والے جین ہیں۔ HO-1 اور GCLC کا پروٹین ایکسپریشن بھی علاج کے بعد دیکھا گیا [6]۔ شکل 8 400 μM H2O2 کے ساتھ علاج کے بعد PC12 خلیوں میں HO-1 اور GCLC کی پروٹین کی سطح کو ظاہر کرتی ہے۔ نتائج نے اشارہ کیا کہ caleolarioside B اور paraboside B گروپوں میں HO-1 کی FL فلوروسینٹ شدت H2O2-علاج شدہ گروپوں سے زیادہ تھی (شکل 8(a,c))۔ تاہم، GCLC کے اظہار کو مرکبات کے ذریعہ نمایاں طور پر تبدیل نہیں کیا گیا تھا، سوائے caleolarioside B (شکل 8 (b)) کے۔ اس کے بعد، H2O-1کی حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسٹی کے خلاف caleolarioside B، paraboside B، یا paraboside II کے ذریعے کیے گئے حفاظتی اثرات کو ریگولیٹ کرنے میں اینٹی آکسیڈینٹ انزائمز کے کرداروں کا مزید جائزہ لینے کے لیے HO-1 کے کیمیائی روکنے والے استعمال کیے گئے۔ Caleolarioside B، paraboside B، اور paraboside II (3.125 µM) نے H2O2-کی حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسٹی کو روکا، لیکن اس طرح کے حفاظتی اثرات HO-1 inhibitor ZnPP (p <0.01) کے="" ذریعے="" 15="" µm="" (شکل)="" پر="" الٹ="" گئے۔="">

بحث

آبادی کی عمر بڑھنا ایک سنگین عالمی مسئلہ ہے۔ بہت سی بیماریاں جوانی سے متعلق ہیں، جیسے کہ AD اور PD، جو صحت عامہ کے لیے سنگین خطرات ہیں۔ AD اور PD دل کی بیماری اور کینسر کے بعد عالمی سطح پر تیسری سب سے زیادہ مہلک بیماریوں کے طور پر ابھرے ہیں۔ لہذا، نیوروڈیجنریشن دنیا بھر میں ایک فوری تحقیقی موضوع بن گیا ہے۔ تاہم، AD اور PD کے روگجنن، مرکزی اعصابی نظام کی اعصابی بیماریاں، آج تک غیر واضح ہیں۔ مزید برآں، صرف چند دوائیں ہیں جو اپنے پیچیدہ روگجنک میکانزم کی وجہ سے AD یا PD کا مؤثر طریقے سے علاج کر سکتی ہیں [23]۔ پچھلے مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ ROS، جیسے سپر آکسائیڈ anion (O2−) اور H2O2، نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں میں حصہ ڈالنے والے اہم عوامل ہیں۔ PD کے دوران پیتھولوجیکل تبدیلیوں میں نیورونل انحطاط اور سبسٹینیا نگرا اور سٹرائٹل ڈوپامائن کی موت شامل ہیں [24,25]۔ اس کے مطابق، PD کے علاج کے لیے موثر اینٹی آکسیڈنٹ ادویات تیار کرنا ضروری ہے، اور اس طرح کی دوائیوں کی دریافت ایک اہم تحقیقی سمت بن گئی ہے [26]۔ فی الحال، Nrf2/ARE سگنلنگ پاتھ وے سب سے اہم اینڈوجینس اینٹی آکسیڈینٹ تناؤ کا راستہ معلوم ہوتا ہے [27]۔ AREs جینز کے 5′- فلانکنگ علاقوں میں واقع ہیں، جیسے HO-1 اور GCLC [28,29]۔ HO-1 اور GCLC Nrf2-متعلقہ جین ہیں جو اس پروٹین کے بہاو کو منظم کرتے ہیں [6]۔ AREs بعد میں اینٹی آکسیڈینٹس کی سطح کو متاثر کر سکتے ہیں اور HO-1 اور دیگر حفاظتی جینز کے بہاو اظہار کو چالو کر سکتے ہیں، جو سیل کے تحفظ کی سرگرمیوں کو بڑھا سکتے ہیں [30,31]۔ مزید برآں، نتائج نے تجویز کیا کہ PC12 خلیات میں A 1-42- حوصلہ افزائی زہریلا کے خلاف resveratrol کے حفاظتی اثرات Nrf2 انٹرا سیلولر سگنلنگ پاتھ وے [32] کے ایکٹیویشن کے ذریعے HO-1 اظہار کے اپ گریجولیشن کے ذریعے ہوتے ہیں۔

PC12 خلیات عصبی خلیوں کا ایک قبول شدہ ماڈل ہیں اور بڑے پیمانے پر نیورو پروٹیکٹو اثر مطالعہ [33] میں استعمال ہوتے ہیں۔ H2O2 آسانی سے خلیے کی جھلی سے گزر سکتا ہے اور آئرن کے ساتھ مل کر انتہائی فعال فری ریڈیکلز بناتا ہے، جو آکسیڈیٹیو تناؤ اور خلیے کو چوٹ پہنچاتا ہے [34]۔ H2O2 ایک اہم ROS ہے، اور آزاد ریڈیکلز آسانی سے پیدا ہوتے ہیں اور نسبتاً مستحکم ہوتے ہیں، اس طرح، وہ عام طور پر PC12 خلیات کا استعمال کرتے ہوئے ایک آکسیڈیٹیو سٹریس ماڈل قائم کرنے کے لیے استعمال ہوتے ہیں [5]۔ اس مطالعہ میں، پی سی 12 سیلز کا پہلے سے علاج پلانٹ کے غیر زہریلا ارتکاز کے ساتھ H2O سے محفوظ خلیات کو نکالتا ہے2- ROS کی نسل کو کم کر کے سائٹوٹوکسیٹی کی حوصلہ افزائی کرتا ہے۔ Phenylethanoid glycosides میں بہت سے phenolic hydroxyl گروپ ہوتے ہیں جن میں antioxidant اور antiaging سرگرمیاں ہوتی ہیں۔ اس مطالعہ میں، ہم نے پایا کہ n-butanol نکالنے سے دوسرے قطبی حصوں (شکل 3) سے بہتر تحفظ حاصل ہوا۔ اس طرح، ہم نے n-butanol فریکشن سے الگ تھلگ آٹھ مرکبات کی حفاظتی سرگرمیوں کی مزید جانچ کی۔ نتائج نے پہلی بار دکھایا کہ شکل 8. PC12 خلیوں پر HO-1 اور GCLC پروٹین کی سطح کا تجزیہ۔ (a) HO-1 اور GCLC اور GAPDH کے اظہار کے مغربی بلوٹنگ تجزیہ کو لوڈنگ کنٹرول کے طور پر استعمال کیا گیا تھا۔ (b) مغربی بلاٹ تجزیہ جی سی ایل سی پروٹین اظہار۔ (c) مغربی دھبے کا تجزیہ HO{{20}} پروٹین اظہار۔ (d) HO-1 inhibitor ZnPP نے نیورو پروٹیکٹو اثر کو کم کیا۔ ڈیٹا بطور ذریعہ پیش کیا جاتا ہے ± SD، n=3۔ ***p < 0۔{29}}01="" بمقابلہ="" کنٹرول="" گروپ؛="" #p="">< 0۔="" علاج="" کیا="" جاتا="" ہے؛="" اور="" p=""><0.01، بمقابلہ="" h2o2="" گروپ="" (znpp="" کے="" ساتھ="" علاج="" کیا="" گیا)،="" اور="" &p=""><0.001، بمقابلہ="" h2o2="" گروپ="" (znpp="" کے="" ساتھ="" علاج="" کیا="" گیا)۔="" (کنٹرول="" گروپ؛="" ماڈل="" گروپ:="" h2o2؛="" znpp="" منفی="" گروپ:="" caleolarioside="" b="" plus="" h2o2،="" paraboside="" b="" plus="" h2o2،="" paraboside="" ii="" پلس="" h2o2؛="" znpp="" مثبت="" گروپ:="" znpp="" پلس="" caleolarioside="" b="" پلس="" h2o2،="" znpp="" پلس="" paraboside="" b="" پلس="" h2o2،="" znpp="" پلس="" paraboside="" b="" پلس="" h2o2،="" znpp="" پلس="" پیرابوسائیڈ="" علاوہ="" h2o2)۔="" 2210="" x.="" gong="" et="" al.="" 27="" اگست="" 2021="" کو="" ایک="" مہمان="" کے="" ذریعے="" ڈاؤن="" لوڈ="" کیا="" گیا="" caleolarioside="" b،="" paraboside="" b،="" اور="" paraboside="" ii="" کے="" pc12="" خلیوں="" میں="" h2o2-="" حوصلہ="" افزائی="" آکسیڈیٹیو="" نقصان="" کے="" خلاف="" اہم="" حفاظتی="" اثرات="" ہیں۔="" نتائج="" نے="" یہ="" بھی="" اشارہ="" کیا="" کہ="" h2o2="" کے="" علاج="" نے="" اہم="" pc12="" سیل="" کی="" چوٹ="" کی="" حوصلہ="" افزائی="" کی="" اور="" سیل="" کی="" عملداری="" میں="" کمی="" واقع="" ہوئی،="" جبکہ="" caleolarioside="" b،="" paraboside="" b،="" اور="" paraboside="" ii="" کے="" علاج="" نے="" ان="" اثرات="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" کم="" کیا="" (شکل="" 6)۔="" پچھلے="" مطالعے="" میں="" بتایا="" گیا="" ہے="" کہ="" nrf2/are="" پاتھ="" وے="" سب="" سے="" اہم="" اینڈوجینس="" اینٹی="" آکسیڈینٹ="" راستوں="" میں="" سے="" ایک="" ہے،="" اور="" سیلز="" کی="" حفاظت="" کے="" لیے="" ho-1="" جیسے="" ڈاون="" اسٹریم="" مارکروں="" کے="" اظہار="" کو="" اپ="" گریڈ="" کر="" سکتا="" ہے="" [7]۔="" qrt-pcr="" اور="" ویسٹرن="" بلوٹنگ="" کے="" تجزیوں="" کے="" نتائج="" سے="" پتہ="" چلتا="" ہے="" کہ="" caleolarioside="" b،="" paraboside="" b،="" اور="" paraboside="" ii="" نے="" ho-1="" کی="" سطح="" کو="" نمایاں="" طور="" پر="" بڑھا="" دیا="" ہے۔="" تاہم،="" جی="" سی="" ایل="" سی="" کی="" نقل="" کی="" سطح="" میں="" نمایاں="" طور="" پر="" اضافہ="" ہوا="" pc12="" خلیوں="" میں="" جو="" کیلیولاریوسائڈ="" بی="" کے="" ساتھ="" پہلے="" سے="" علاج="" کیا="" گیا="" تھا="" لیکن="" ماڈل="" گروپ="" کے="" مقابلے="" میں="" پیرابوسائیڈ="" بی="" کے="" ساتھ="" پہلے="" سے="" علاج="" کیے="" جانے="" والوں="" میں="" کمی="" واقع="" ہوئی="" ہے۔="" مزید،="" ماڈل="" گروپ="" (اعداد="" و="" شمار="" 7="" اور="" 8="" (a–c))="" کے="" مقابلے="" عربینوسائیڈ="" ii="" نے="" اس="" مارکر="" کے="" اظہار="" کو="" تبدیل="" نہیں="" کیا۔="" اس="" کے="" علاوہ،="" h2o2-کی="" حوصلہ="" افزائی="" pc12="" سیل="" کی="" چوٹ="" کے="" خلاف="" caleolarioside="" b،="" paraboside="" b،="" اور="" paraboside="" ii="" کے="" حفاظتی="" اثرات="" ho-1="" inhibitor="" znpp="" (شکل="" 8(d))="" کے="" ذریعے="" الٹ="" گئے۔="" آخر="" میں،="" phenylethanoid="" glycosides="" caleo="" larioside="" b،="" arabinoside="" b،="" اور="" paraboside="" ii="" نے="" مؤثر="" طریقے="" سے="" pc12="" خلیوں="" کو="" h2o2-حوصلہ="" افزائی="" آکسیڈیٹیو="" نقصان="" سے="" محفوظ="" کیا۔="" اس="" کے="" مطابق،="" یہ="" مرکبات،="" p.="" martini="" سے="" الگ="" تھلگ،="" نیوروڈیجینریٹیو="" بیماریوں="" کے="" علاج="" کے="" لیے="" ممکنہ="" منشیات="" کے="" امیدواروں="" کی="" نمائندگی="" کر="" سکتے="">

مصنف کی شراکتیں۔LM، اور ZC نے تجربات کو تصور کیا اور ڈیزائن کیا۔ جی ایکس، آر کے، اور بی ایکس نے تجربات کئے۔ GX اور XY نے کاغذ لکھا۔ GX، XY، RK، BX، ZC، اور LM نے نتائج پر تبادلہ خیال کیا، مخطوطہ پر تبصرہ کیا۔ تمام مصنفین نے حتمی مخطوطہ کو پڑھا اور منظور کیا۔

انکشافی بیانمصنفین کے ذریعہ دلچسپی کے کسی ممکنہ تصادم کی اطلاع نہیں دی گئی۔ فنڈنگ ​​اس کام کو باؤتو میڈیکل کالج کے ریسرچ فنڈز [گرانٹ نمبر: BYJJ-YF 201727]، اور 2018 چینی طب پبلک ہیلتھ سروس سبسڈی خصوصی "چینی میٹریا میڈیکا ریسورس پر چوتھا سروے" [گرانٹ نمبر: فنانس سوسائٹی [2018 43]۔

حوالہ جات

[1] بٹر فیلڈ ڈی اے۔ الزائمر کی بیماری میں آکسیڈیٹیو تناؤ پر نقطہ نظر اور مستقبل کی تحقیق کی پیشین گوئیاں زور دیتی ہیں۔ J Alzheimers Dis. 2018؛ 64:1–11۔

[2] Chignon C، Tomas M، Bonnefontrousselot D، et al. الزائمر کی بیماری میں آکسیڈیٹیو تناؤ اور امیلائڈ بیٹا پیپٹائڈ۔ ریڈوکس بائیول۔ 2018؛ 14:450–464۔

[3] Guo JD، Zhao X، Li Y، et al. پارکنسنز کی بیماری میں آکسیڈیٹیو تناؤ سے ڈوپیمینرجک نیوران کو نقصان (جائزہ)۔ انٹ جے مول میڈ۔ 2018؛ 41:1817–1825۔

[4] بائی وائی، ڈونگ ایل ایچ، ہوانگ ایکس ایچ، وغیرہ۔ پارکنسنز کی بیماری کے کم خطرات کے ساتھ rs823128، rs1572931، اور rs823156 پولیمورفزم کی ایسوسی ایشن۔ نیورپورٹ۔ 2017؛ 27:936–941۔

[5] ہان XH، Zhu SL، Wang BX، et al. 7 کا اینٹی آکسیڈینٹ عمل،8-ڈائی ہائیڈروکسی فللاوون PC12 سیلوں کو 6-ہائیڈرو آکسیڈوپامین کی حوصلہ افزائی سائٹوٹوکسیٹی سے بچاتا ہے۔ Neurochem Int. 2014؛ 64:18-23۔

[6] لی MQ، Xu T، Zhou F، et al. Nrf2/ARE راستے کے ذریعے PC12 خلیوں پر H2O2-کی حوصلہ افزائی اپوپٹوسس پر چار فینی لیتھانائڈ گلائکوسائیڈز کے نیورو پروٹیکٹو اثرات۔ Int J Mol Sci. 2018؛ 19:1135۔

[7] Buendia I، Michalska P، Navarro E، et al. Nrf2-پاتھ وے ہیں: نیوروڈیجینریٹیو بیماریوں میں آکسیڈیٹیو تناؤ اور نیوروئنفلامیشن کے خلاف ایک ابھرتا ہوا ہدف۔ فارماکول تھراپی۔ 2016؛ 157:84–104۔

[8] جیا ایکس جے، یان ایکس ایس، کائی زیڈ پی، وغیرہ۔ مرد SAMP8 چوہوں میں علمی خسارے اور اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں پر، Herba cistanche سے اخذ کردہ phenylethanoid glycosides کے اثرات۔ J Toxicol Env Heal A. 2017؛ 80:1180–1186۔

[9] Tsvetkov DE، Dmitrenok AS، Tsvetkov YE، et al. ساگون کی لکڑی کی گرہوں اور ان کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی سے Phenylethanoid glycosides۔ جے بائیول ایکٹو پروڈ نیٹ۔ 2016؛ 6:272–281۔

[10] Zhang YQ، Gao EY، Liang CQ، et al. وٹرو میں Lindernia ruellioides سے caffeoyl phenylethanoid glycoside مرکبات کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی۔ سینٹ ساؤتھ فارم۔ 2017؛ 15:1687–1690۔

[11] وو ZH، Ma YF، Zhao L، et al. Nrf کا کردار2-آکسیڈیٹیو تناؤ کی چوٹ میں راستہ ہے اور اس کا دوسرے سگنلنگ راستوں کے ساتھ تعلق ہے۔ Anim Husbandry Feed Sci. 2016؛ 37:42–48۔

[12] زینگ ایکس کے، لی جے، فینگ ڈبلیو ایس، وغیرہ۔ Gesneriaceae کے مطالعہ میں پیشرفت۔ چن جے نیو ڈرگ۔ 2003؛ 12:261–263۔

[13] وین ایف، لی زیڈ ڈی۔ Gesneriaceae پلانٹ پر تحقیقی پیشرفت۔ چن وائلڈ پلانٹ ریسور۔ 2006؛ 25:1-6۔

[14] یان ڈبلیو وائی، چن ایل، وانگ جے ایم، وغیرہ۔ Gesneriaceae پودوں کے triterpenoids کی تحقیقی پیشرفت۔ نیٹ پروڈ ریس دیو۔ 2012؛ 24:698–701۔

[15] چینی ہربل میڈیسن کمپنی۔ چینی روایتی ادویات کے وسائل کا ریکارڈ۔ چین: سائنس پریس؛ 1994.

[16] بائی ZF، Wang XQ، Xiao PG، et al. Gesneriaceae کے دواؤں کے پودوں میں Phenylethanoid glycosides کی تقسیم۔ چن جے چن میٹر میڈ۔ 2013؛ 38:4267–4270۔

[17] وہ ZD، Lau KM، Xu HX، et al. Brandisia hancei سے phenylethanoid glycosides کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمی۔ جے ایتھنوفرماکول۔ 2000؛ 71:483–486۔

[18] Li L، Shi DF، Gui YG، et al. Cistanche deserticola سے phenylethanoid glycosides کی اینٹی آکسیڈینٹ سرگرمیوں پر مطالعہ۔ J Anhui Agri Sci. 2009؛ 32:15835–15836۔

[19] جو بی ڈبلیو، یانگ جے ایچ، یان وائی، وغیرہ۔ PC12 خلیوں کے نقصان پر cistanche کے glycosides کے حفاظتی اثرات PARABOLA MARTINI H2O2-InDUCED Injury 2211 سے PC12 سیلز کی حفاظت