عارضی فوربرین اسکیمیا کے بعد Oxcarbazepine کی طرف سے حوصلہ افزائی کی گئی ہائپوتھرمیا، Gerbils پارٹ 3 میں عارضی ریسیپٹر پوٹینشل وینیلوئڈ ٹائپ 1 اور 4 کے ذریعے علاج سے متعلق نیورو پروٹیکشن کا استعمال کرتا ہے
Jul 26, 2024
4. مواد اور طریقے
4.1 تجرباتی جانور
نر جرابلس (کل تعداد=252) 6 ماہ کی عمر میں استعمال کیے گئے تھے (جسمانی وزن، 63–78 گرام)۔ جربیلوں کو کانگون نیشنل یونیورسٹی (چنچون، کوریا) کے تجرباتی جانوروں کے مرکز میں پالا گیا تھا۔
Gerbils بہت پیارے چھوٹے جانور ہیں. وہ صحرائی علاقوں میں رہتے ہیں، غاروں کی کھدائی میں اچھے ہیں، اور خوراک کو ذخیرہ کرنے اور تلاش کرنے کی مضبوط جبلت رکھتے ہیں۔ ان چھوٹے لڑکوں میں، نر جربیلوں کی یادداشت خاصی اچھی ہوتی ہے، جس کی وجہ سے لوگ ان کے راز جاننا چاہتے ہیں۔
سب سے پہلے، جب نر جربیل خوراک کی تلاش کرتے ہیں، تو وہ سمت کا تعین کرنے کے لیے نشانات اور خطہ جیسے اشاروں کا ایک سلسلہ استعمال کرتے ہیں۔ طویل مدتی مشاہدے اور مشق کے ذریعے انہوں نے اپنا ’’جغرافیائی معلوماتی نظام‘‘ قائم کیا ہے۔ اس کے برعکس، مادہ جرابوں میں ان اشاروں کی یادداشت زیادہ خراب ہوتی ہے، خاص طور پر مسلسل بدلتے ہوئے ماحول میں۔
دوم، نر جربیل قدرتی دشمنوں سے لڑتے وقت بھی مضبوط یادداشت دکھاتے ہیں۔ سائنسدانوں کے مطابق جب جرابوں کو خطرہ لاحق ہوتا ہے تو وہ تیزی سے بل میں داخل ہوتے ہیں اور فرار ہونے کی کوشش کرتے ہیں۔ لیکن جب اسی خطرے کا سامنا کرنا پڑتا ہے تو، نر جربیل قدرتی دشمنوں کے حملے کے انداز کو یاد رکھیں گے اور ان سے بچیں گے، جس سے ان کے زندہ رہنے کے امکانات بڑھ جائیں گے۔
آخر میں، نر جرابوں کی یاد ایک دوسرے کے ساتھ ان کے سماجی رویے میں بھی مضمر ہے۔ ہر جربیل کی اپنی منفرد بو ہوتی ہے۔ جب وہ دوسرے جرابوں سے ملیں گے، تو وہ ایک دوسرے کی شناخت اور حیثیت کو پہچاننے کے لیے اپنی سونگھنے کی حس کا استعمال کریں گے۔ یادداشت کی یہ صلاحیت نہ صرف جرابوں کو نسبتاً مستحکم سماجی تعلق قائم کرنے کی اجازت دیتی ہے بلکہ ان کے تولید کی ایک اہم ضمانت بھی ہے۔
خلاصہ یہ کہ مرد جرابوں اور یادداشت کے درمیان تعلق لازم و ملزوم ہے۔ فطرت میں بقا اور پنروتپادن کی تلاش کے عمل میں، وہ مسلسل ماحول کے مطابق ڈھالنے اور خود کو بہتر بنانے کے لیے اپنی مضبوط یادداشت پر انحصار کرتے ہیں۔ بحیثیت انسان، ہمیں ان چھوٹے لڑکوں سے سیکھنا چاہیے اور اس بدلتی ہوئی دنیا کو بہتر طور پر ڈھالنے کے لیے اپنی یادداشت کو مسلسل بہتر کرنا چاہیے۔ یہ دیکھا جا سکتا ہے کہ ہمیں اپنی یادداشت کو بہتر بنانے کی ضرورت ہے، اور Cistanche یادداشت کو نمایاں طور پر بہتر کر سکتا ہے کیونکہ یہ نیورو ٹرانسمیٹر کے توازن کو بھی کنٹرول کر سکتا ہے، جیسے کہ acetylcholine کی سطح میں اضافہ اور ترقی کے عوامل، جو یادداشت اور سیکھنے کے لیے بہت اہم ہیں۔ اس کے علاوہ، Cistanche خون کے بہاؤ کو بھی بہتر بنا سکتا ہے اور آکسیجن کی ترسیل کو فروغ دے سکتا ہے، جو اس بات کو یقینی بنا سکتا ہے کہ دماغ کو مناسب غذائیت اور توانائی حاصل ہو، اس طرح دماغی توانائی اور برداشت کو بہتر بنایا جا سکتا ہے۔
میموری کی طاقت بڑھانے کے لیے Know پر کلک کریں۔
اس مطالعے کے لیے، تجرباتی پروٹوکول کی منظوری (منظوری نمبر KW-200113-1؛ منظوری کی تاریخ، 18 فروری 2020) ادارہ جاتی اینیمل کیئر اینڈ یوز کمیٹی نے دی تھی۔
تحقیقی پروٹوکول نیشنل اکیڈمیز پریس (8th Ed.، 2011) کے ذریعہ شائع کردہ لیبارٹری جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کے لئے رہنما کے "موجودہ بین الاقوامی قوانین اور پالیسیوں" میں تجویز کردہ رہنما خطوط پر عمل پیرا ہے۔
4.2 تجرباتی گروپس، tFI کی شمولیت، اور HyT اور OXC علاج
gerbils میں اسکیمک چوٹ کے بعد OXC کے حفاظتی اثرات کو ثابت کرنے کے لیے، جرابوں کو چھ گروپوں میں تقسیم کیا گیا تھا: (1) شام + گاڑیوں کا گروپ (n=24)؛ (2) tFI+ گاڑیوں کا گروپ (n {{5) }}); (3) sham+HyT گروپ (n=24)؛ (4) tFI+HyT گروپ (n=60)؛ (5) sham+OXC (200 mg/kg) گروپ (n=24)؛ اور (6) tFI+OXC گروپ (n=60)۔
تین ٹی ایف آئی گروپوں میں سات اور پانچ جربیلز کو مغربی دھبے کے تجزیہ اور ہسٹولوجیکل ایگزامینیشن کے لیے بالترتیب 30 منٹ، 12 گھنٹے، 1 دن، 2 دن اور TFI آپریشن کے 4 دن بعد استعمال کیا گیا تھا، اور تین شام گروپوں میں، سات اور پانچ۔ نمبروں کو کم سے کم کرنے کے لیے شمع آپریشن کے 30 منٹ اور 4 دن بعد gerbils استعمال کیے گئے۔ اس تجربے میں، TFI تیار کیا گیا جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے
مختصراً، تھیگربلز کو 2.5% isoflurane (32% آکسیجن اور 68% نائٹرس آکسائیڈ میں) کے ساتھ اینستھیزیا کیا گیا تھا۔ اینستھیزیا کے تحت، دونوں عام کیروٹڈ شریانوں کو کیروٹڈ شیتھ ہینڈ سے الگ کیا گیا تھا جو اینوریزم کلپس (Yasarculesgil, Germany FE7) ) پانچ منٹ کے لیے۔
دماغ کو خون کی سپلائی کے کامل بند ہونے کی تصدیق ہین اوپٹو ٹیکنیک (ہرشنگ، جرمنی) سے ایک چشمی کا استعمال کرتے ہوئے ریٹنا کی دونوں شریانوں (اندرونی کیروٹیڈیٹریز کی شاخوں) میں خون کے بہاؤ کے مشاہدے کے ذریعے ہوئی۔
تمام گروپوں میں سرجری سے پہلے اور اس کے دوران جسمانی درجہ حرارت کو تھرمامیٹرک کمبل کا استعمال کرتے ہوئے نارموتھرمیا (37 ± 0.2 ◦C) پر کنٹرول کیا گیا تھا۔ پانچ منٹ کی موجودگی کے بعد، کلپس کو ہٹا دیا گیا تھا.
اس تحقیق میں، عام کیروٹڈ شریانوں کو بند کیے بغیر انہیں ایک ہی ٹی ایف آئی سرجری کا نشانہ بنا کر ایک شیم آپریشن کیا گیا۔ OXC گروپ) چھ گھنٹے تک آئس پیک کے ساتھ پورے جسم کو ٹھنڈا کر کے۔
TFI آپریشن کے بعد 200 mg/kg OXC (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) کے فوری انٹراپریٹونیل انجیکشن کے بعد دو شام + OXC اور tFI + OXC گروپوں کے جسمانی درجہ حرارت کو چھ گھنٹے تک ریکارڈ کیا گیا۔
OXC کی خوراک کا انتخاب سابقہ مطالعہ کی رپورٹ کی بنیاد پر کیا گیا تھا کہ 200 mg/kg OXC نے دماغ میں خلیوں کی موت کے خلاف مؤثر طریقے سے حفاظت کی [36]۔ جسمانی درجہ حرارت میں تبدیلی کو ریکارڈ کرنے کے لیے، جسم کے درجہ حرارت کو ٹی ایف آئی کے ہر ایک گھنٹے بعد ملاشی میں ماپا گیا۔ 6 گھنٹے کی مدت، محیطی کمرے کے درجہ حرارت کے تحت (تقریباً 22 ◦C)۔
gerbils کو tFI کے بعد چار دن کی بحالی کا وقت ملا کیونکہ ہپپوکیمپل CA1 کے علاقے میں واقع اہرام کے خلیے tFI [30,34,62] کے چار دن بعد مرنا شروع ہو جاتے ہیں۔
4.3 ایس ایم اے ٹیسٹ
SMA ٹیسٹ تمام گروپوں میں ہائپر ایکٹیویٹی میں تبدیلیوں کی جانچ کرنے کے لیے کیا گیا تھا۔ مختصراً، جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [63]، SMA ٹیسٹ ٹی ایف آئی کے بعد 1 دن کو کیا گیا تھا کیونکہ لوکوموٹر ایکٹیویٹی ٹی ایف آئی کے بعد اسکیمک چوٹ کے بعد دن 1 کو بلند ترین مقام پر پہنچ جاتی ہے۔
تمام گروہوں کے جربیلوں نے دو گھنٹے کے لیے ماحولیاتی موافقت حاصل کی، اور انہیں کھلے میدان کے پنجرے میں رکھا گیا (چوڑائی، 44 سینٹی میٹر؛ لمبائی، 44 سینٹی میٹر؛ اونچائی، 30) Ugo Basile SRL (Gemonio، Italy) سے حاصل کی گئی، جس میں دو متوازی افقی فرش سے دور 4 × 8 انفراریڈ بیم ایک گھنٹے کے لیے نصب کیے گئے تھے۔ ایس ایم اے کو سان ڈیاگو آلات (سان ڈیاگو، CA، USA) سے فوٹوبیم ایکٹیویٹی سسٹم-ہوم کیج کا استعمال کرتے ہوئے ریکارڈ کیا گیا۔
فوٹو سیلز کے ذریعہ تیار کردہ انفراریڈ بیم کی صف میں رکاوٹ کے ذریعے حرکت (روشنی اور سفر کی کل دوری) کا پتہ چلا۔
SMA کی مسلسل ایک گھنٹے تک نگرانی کی گئی، اور IPC Electronics (Cumbria, UK) سے AMB تجزیہ کار کا استعمال کرتے ہوئے ڈیٹا اکٹھا کیا گیا۔
کھلے میدان کے پنجرے میں رہنے کے 15 منٹ بعد ڈیٹا اکٹھا کرنا شروع کیا گیا۔ آخر میں، حاصل کردہ نتائج کو ٹیسٹ کی مدت (ایک گھنٹہ) میں حرکت کے فاصلے (میٹر) کے طور پر جانچا گیا۔
4.4 علمی افعال کے ٹیسٹ
4.4.1 RAMT
تمام گروپوں میں مقامی میموری کا موازنہ کرنے کے لئے، RAMT کو سابقہ مطالعات کے مطابق انجام دیا گیا تھا [38,44]۔ اس ٹیسٹ کے لیے Stoelting Co (Wood Dale, IL, USA) کی جانب سے ایک ریڈیل 8-آرم میز استعمال کیا گیا تھا۔
بھولبلییا کا آلہ ایک مرکزی پلیٹ فارم اور آٹھ بازو (ہر بازو کی چوڑائی، 5 سینٹی میٹر؛ اونچائی، 9 سینٹی میٹر؛ لمبائی، 35 سینٹی میٹر) پر مشتمل تھا۔ گربلوں کو دن میں ایک بار تین دن پہلے تربیت دی جاتی تھی۔
یعنی، DBL Co (Chungbuk, Korea) سے حاصل کردہ پیلٹ فیڈ کو ہر بازو کے آخری حصے میں ڈالا گیا، اور ہر جربل کو مرکزی پلیٹ فارم پر رکھا گیا۔ اس کے بعد، gerbil نے فیڈ کی تلاش کی۔
شیم یا ٹی ایف آئی آپریشن کے بعد، آپریشن کے ایک دن سے شروع ہونے والے چار دنوں کے لیے اصلی ٹیسٹ دن میں ایک بار کیا جاتا تھا۔
تجزیہ کے لیے، غلطیوں کی تعداد کا اندازہ لگایا گیا، ہر بار جب جربیل بازو میں داخل ہوا جو پہلے ہی دیکھی جا چکی تھی، ایک غلطی ہوتی ہے۔ جب جربیل نے فیڈ کھا لیا تو ٹیسٹ ختم ہو گیا۔
4.4.2 PAT
تمام گروپوں میں قلیل مدتی میموری کا موازنہ کرنے کے لیے، PAT کو کچھ ترمیم کے ساتھ پہلے سے رپورٹ شدہ طریقوں [64,65] کے مطابق کیا گیا تھا۔ مختصراً، سان ڈیاگو انسٹرومینٹس (SanDiego, CA, USA) سے Gemini Avoidance System (GEM 392) کا استعمال کرتے ہوئے ضائع کیے گئے جرابلس، جو دو (تاریک اور روشنی) کمپارٹمنٹس پر مشتمل ہوتے ہیں جو عمودی طور پر سلائیڈنگ گیٹ کے ذریعے ایک دوسرے سے بات چیت کرتے ہیں۔
تجرباتی سیشن دو مراحل میں کئے گئے: ایک ٹریننگ سیشن اور ایک حقیقی ٹیسٹ سیشن TFI یا شیم آپریشن سے ایک دن پہلے اور چار دن بعد۔
اصل امتحان ٹریننگ سیشن کے 20 منٹ بعد اندھیرے کمرے میں قیام کے دوران لیٹنسی ٹائم (سیکنڈ) کی پیمائش کر کے کیا گیا تھا۔ .
اس کے بعد، جب گربل تاریک ڈبے میں چلا گیا، تو دروازہ بند کر دیا گیا اور گربل کو پانچ سیکنڈ کے لیے فرش پر اسٹیل گرڈ سے الیکٹرک فٹ شاک (0.5 mA) دیا گیا۔
حقیقی ٹیسٹ سیشن میں، tFI کے بعد 4 دن، گربل کو لائٹ کمپارٹمنٹ میں رکھا گیا تھا، اور تاریک ڈبے میں داخل ہونے سے پہلے لائٹ کمپارٹمنٹ میں تاخیر کا وقت ریکارڈ کیا گیا تھا۔
4.5 TRPV1 اور TRPV4 کے لیے ویسٹرن بلاٹ تجزیہ
Gerbil hippocampal CA1 میں TRPV1 اور TRPV4 کے اظہار کی سطحوں کی جانچ کرنے کے لیے، ویسٹرن بلاٹ تکنیک کو پہلے بیان کردہ طریقوں کے مطابق انجام دیا گیا تھا [66,67]۔
مختصراً، مقررہ نظام الاوقات کے مطابق (30 منٹ، 12 گھنٹے، 1 دن، 2 دن، اور شام یا ٹی ایف آئی آپریشن کے 4 دن بعد)، جربیلز (ہر گروپ کے لیے n=5) کو انٹرا پیریٹونیل انجیکشن کے ذریعے یوتھنیسیا کے لیے اینستھیزیا دیا گیا۔ 200 ملی گرام/کلو گرام پینٹوباربیٹل سوڈیم (JW Pharm.Co., Ltd., Seoul, Korea)۔
اس کے بعد، ان کے دماغوں کو 50 mM فاسفیٹ بفرڈ نمکین (PBS, pH 7.4) کے ساتھ کاٹا گیا جس میں 0.1 mM ethylene glycol-bis (aminoethyl ether)-N, N, N{{ پر مشتمل تھا۔ 11}}، N0-ٹیٹراسیٹک ایسڈ (EGTA) (pH 8۔{14}})، 10 mM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) (pH 8.0)، 0.2% Nonidet P{{17} }}، 15 mM سوڈیم پائروفاسفیٹ، 100 mM -glycerophosphate، 2 mM سوڈیم orthovanadate، 50 mM NaF، 150 mM NaCl، 1 mMphenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)، اور 1 mMolTTrethreth)۔
اس کے بعد، نمونوں کو سینٹری فیوج کیا گیا، اور سپرنٹنٹس کو تھرمو فشر سائنٹیفک انک (والتھم، ایم اے، یو ایس اے) سے پیئرس کیمیکل کمپنی (راک فورڈ، آئی ایل، یو ایس اے) کے بووینیسیرم البومین کے ساتھ مائیکرو بی سی اے پرکھ کٹ کا استعمال کرتے ہوئے پروٹین کی سطح کا تعین کرنے کے لیے لے جایا گیا۔
ایلی کوٹس بشمول 20 µg کل پروٹین لوڈنگ بفر میں ابالے گئے، 150 mM Tris (pH 6.8) جس میں 6% sodiumdodecyl سلفیٹ (SDS)، 3 mM DTT، 0.3% بروموفینول بلیو، اور 30% گلیسرول شامل ہیں۔
نمونوں کو 10٪ SDS-polyacrylamide جیل الیکٹروفورسس (PAGE) کے ذریعے الگ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، تھیجیلز کو پال کو (ایسٹ ہلز، NY، USA) سے 350 ایم اے اور 4 ◦C پر 90 منٹ کے لیے نائٹروسیلوز جھلیوں میں منتقل کیا گیا۔
غیر مخصوص داغ کو روکنے کے لیے، جھلیوں کو کمرے کے درجہ حرارت پر 60 منٹ کے لیے 5% ڈیفیٹڈ دودھ میں انکیوبیٹ کیا گیا تھا۔ اس کے بعد، ہر ایک بنیادی اینٹی باڈی کے ساتھ ان کا مدافعتی عمل کیا گیا: خرگوش اینٹی TRPV1 (1:1000 پتلا) (Abcam, Cambridge, UK)، خرگوش اینٹی TRPV4 (پتلا ہوا 1:1000) (Abcam)، اور خرگوش اینٹی- - ایکٹین (پتلا ہوا 1:2000) (سگما-الڈرچ، سینٹ لوئس، MO، USA) 4 ◦C پر 7 گھنٹے کے لیے۔
اس کے بعد، ان پر ہارسریڈش پیرو آکسیڈیز (HRP) کے ساتھ تعامل شدہ گدھا اینٹی خرگوش آئی جی جی (پتلا ہوا 1:4500) (سانٹا کروز بائیو ٹیکنالوجی، سانتا کروز، CA، USA) کے ساتھ کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹے کے لیے رد عمل ظاہر کیا گیا۔
آخر میں، تھرمو فشر سائنٹیفک انک (والتھم، ایم اے، یو ایس اے) کی ایلومینول پر مبنی کیمیلومینیسینس کٹ تصور کو بڑھانے کے لیے استعمال کی گئی۔
جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [68]، TRPV1 اور TRPV4 کے امیونو بلوٹس Scion Crop (Frederick, MD, USA) کے سکین امیج سافٹ ویئر کا تجزیہ کر رہے تھے۔ بینڈز کو اسکین کیا گیا، اور کثافت کا تجزیہ کیا گیا۔ ایکٹین کی اسی سطح کے مقابلے میں پروٹین کی سطح کو معمول بنایا گیا تھا۔
4.6 ہسٹولوجیکل سیکشن کی تیاری
امیونو ہسٹو کیمیکل اور ہسٹوپیتھولوجیکل امتحانات کے لیے، gerbils (ہر گروپ کے لیے n=7) کو مقررہ شیڈول کے مطابق قربان کیا گیا تھا (30 منٹ، 12 گھنٹے، 1 دن، 2 دن، اور TFI یا شمع آپریشن کے 4 دن بعد)۔
جیسا کہ پہلے بیان کیا گیا ہے [34]، جرابوں کو پینٹوباربیٹل سوڈیم (200 ملی گرام/کلوگرام) (JW فارماسیوٹیکل، سیول، کوریا) کے ساتھ گہری بے ہوشی کی گئی تھی۔ اینستھیزیا کے تحت، جرابوں کو ٹرانس کارڈی طور پر 0.1 M فاسفیٹ بفر نمکین (pH 7.4) کے ساتھ دھویا گیا اور 4% paraformaldehyde (0.1 M فاسفیٹ بفر میں، pH 7.4) کے ساتھ فکس کیا گیا۔
اس کے بعد، ان کے دماغوں کو حاصل کیا گیا اور چھ گھنٹے تک اسی فکسٹیو کا استعمال کرتے ہوئے پوسٹ فکس کیا گیا۔ اس کے بعد، دماغی بافتوں کو ایکریوسٹیٹ (لائیکا، ویٹزلر، جرمنی) میں کاٹا گیا (کورونل طیاروں کی 25 µm موٹائی)۔
4.7 سی وی کا استعمال کرتے ہوئے ہسٹو کیمیکل سٹیننگ
ہر گروپ کے ہپپوکیمپس میں مورفولوجیکل اور نیورونل نقصان کی جانچ کرنے کے لیے، کریسائل وائلٹ (سی وی) داغ لگایا گیا جیسا کہ ہم نے پہلے بیان کیا ہے [69]۔ انبریف، کریسائل وائلٹ ایسیٹیٹ (سگما-الڈرچ، سینٹ لوئس، MO، USA) 10% (w/v) پر آست پانی میں تحلیل کیا گیا تھا، اور گلیشیل ایسٹک ایسڈ (0.28) %) اس حل میں شامل کیا گیا تھا۔ حصوں کو داغ دیا گیا تھا اور کینیڈا کے بلسم (کینٹو، ٹوکیو، جاپان) کے ساتھ نصب کیا گیا تھا۔
4.8 ایف جے بی سٹیننگ
نیورونل انحطاط (موت یا نقصان) کی جانچ کرنے کے لئے ایف جے بی سٹیننگ کی گئی تھی۔ شائع شدہ طریقہ کار [34] کے مطابق، تیار شدہ دماغ کے حصوں کو 1% سوڈیم ہائیڈرو آکسائیڈ میں بھگو دیا گیا تھا، فوری طور پر 0 میں منتقل کیا گیا تھا۔ ، جیفرسن، اے آر، یو ایس اے)۔
حصوں کو مختصراً دھویا گیا اور FJ B کے ساتھ رد عمل کے لیے ایک سلائیڈ وارمر (تقریباً 50 ◦C) پر رکھا گیا۔ TFI کے خلاف OXC کے علاج کے اثر کا اندازہ لگانے کے لیے، FJ B+خلیوں کی تعداد کو CA1 خطے میں ایک طریقہ کے مطابق شمار کیا گیا۔ 70]۔
مختصراً، FJ B+ سیلز کی ڈیجیٹل تصاویر 450–490 nm طول موج پر ایپی فلوروسینٹ مائکروسکوپ (کارل زیس) (اوبرکوچن، جرمنی) کا استعمال کرتے ہوئے فی جربیل کے پانچ حصوں سے حاصل کی گئیں۔ خلیوں کو 250 µm2 میں شمار کیا گیا تھا، جس میں CA1 خطے کے مرکز میں ایک تصویری تجزیہ کرنے والا نظام (Optimas 6.5) (CyberMetrics, Scottsdale, AZ, USA) کا استعمال کرتے ہوئے SP شامل تھا۔
4.9 امیونو ہسٹو کیمسٹری
CA1 خطے میں NeuN، TRPV1، اور TRPV4 امیونو ایکٹیویٹی میں ہونے والی تبدیلیوں کی تحقیقات کے لیے، عمومی امیونو ہسٹو کیمسٹری کی گئی۔ مختصراً، ایک شائع شدہ طریقہ [34] کے مطابق، تیار شدہ دماغ کے حصوں کو پرائمری اینٹی باڈیز-ماؤس اینٹی نیو این (پتلا ہوا، 1:1100) (کیمیکون، ٹیمیکولا، CA، USA)، ماؤس اینٹی TRPV1 (پتلا، 1:500) (Abcam, Cambridge, UK)، اور خرگوش مخالف TRPV4 (پتلا ہوا، 1:500) (Abcam,Cambridge, UK)۔
اس کے بعد، ان انکیوبیٹڈ سیکشنز کو متعلقہ سیکنڈری اینٹی باڈیز (پتلا ہوا، 1:250) (ویکٹر لیبارٹریز انکارپوریشن، برلنگیم، CA، USA) میں انکیوبیٹ کیا گیا اور ویکٹاسٹین اے بی سی (پتلا ہوا، 1:250) (ویکٹر لیبارٹریز انکارپوریشن، برلنگیم، CA، USA) کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا۔ ، USA)۔ آخر میں، 3,3'-diaminobenzidine کے ساتھ تصور کے بعد ان امیونوریکٹڈ حصوں کا رنگ تھا۔
NeuN + خلیات کی تعداد درج ذیل شمار کی گئی۔ نیون + سیلز کی ڈیجیٹل تصاویر لائٹ مائکروسکوپ (AxioM1) (کارل زیس، جرمنی) کا استعمال کرتے ہوئے فی جربیل کے پانچ حصوں سے حاصل کی گئیں۔
خلیوں کی گنتی اسی طرح کی گئی تھی جس طرح FJ B+ سیل کی گنتی ہے۔ TRPV1+ اور TRPV4+ ڈھانچے کی کثافت کا اندازہ لگانے کے لیے، CA1علاقے میں متعلقہ علاقوں کو فی جانور پانچ حصوں میں استعمال کیا گیا تھا۔ AxioM1 لائٹ مائکروسکوپ (Carl Zeiss) (جرمنی) کا استعمال کرتے ہوئے TRPV1+ اور TRPV4+ ڈھانچے کی تصاویر کھینچی گئیں۔
TRPV{{0}} اور TRPV4+ ڈھانچے کی کثافتوں کو رشتہ دار آپٹیکل ڈینسٹی (ROD) کے طور پر جانچا گیا۔ اس اختتام تک، تصاویر کو اوسط گرے لیول میں تبدیل کر دیا گیا تھا۔ آر او ڈی کو ایڈوب فوٹوشاپ (ورژن 8.0) اور NIH امیج جے سافٹ ویئر (نیشنل انسٹی ٹیوٹ آف ہیلتھ، بیتھسڈا، MD، USA) کا استعمال کرتے ہوئے بطور فیصد پیش کیا گیا۔
4.10 شماریاتی تجزیہ
ہم نے اعداد و شمار کو ذرائع کے طور پر پیش کیا ± اسٹینڈرڈ ایرر آف اوسط (SEM)۔ تمام شماریاتی تجزیے گراف پیڈ پرزم (ورژن 5۔{1}}) (GraphPadSoftware، La Jolla, CA, USA) کی مدد سے کیے گئے تھے۔ تجرباتی گروپوں کے درمیان ذرائع میں فرق کا شماریاتی لحاظ سے تغیرات کے دو طرفہ تجزیہ (ANOVA) کے ذریعے تجزیہ کیا گیا تھا جس میں پوسٹ ہاک بونفرونی کے متعدد موازنہ ٹیسٹ کے ساتھ تمام گروپوں کے درمیان tFI سے متعلق اختلافات کو واضح کیا گیا تھا۔ شماریاتی اہمیت کو p < 0 پر غور کیا گیا تھا۔ 05۔
مصنف کی شراکتیں: تصورات: M.-HW اور T.-KL; طریقہ کار، J.-CL، اور DWK؛ سافٹ ویئر، H.-IK، اور MCS؛ توثیق، JHA، IJK، اور JHP؛ تحقیقات، J.-CL، H.-IK، اورM.CS؛ ڈیٹا کیوریشن، JHC، IJK، اور JHP؛ تحریری-اصل مسودہ کی تیاری، H.-IK، اور J.-CL؛ تحریری جائزہ اور ترمیم، M.-HW؛ نگرانی، S.-SL؛ پروجیکٹ ایڈمنسٹریشن، M.-HW؛ فنڈنگ ایکوزیشن، S.-SL، اور T.-KL تمام مصنفین نے مخطوطہ کے شائع شدہ ورژن کو پڑھا اور اس سے اتفاق کیا ہے۔
فنڈنگ: اس کام کو برین کوریا 21 (BK21) فوسٹرنگ آؤٹ اسٹینڈنگ یونیورسٹیز فار ریسرچ (فور، 4220200913807) کے ذریعے تعاون کیا گیا جس کی مالی اعانت کوریا کی نیشنل ریسرچ فاؤنڈیشن (NRF) اور بنیادی سائنس ریسرچ پروگرام نے نیشنل ریسرچ فاؤنڈیشن آف کوریا (NRF) کے ذریعے کی۔ وزارت تعلیم (NRF-2020R1I1A1A01070897) کے ذریعے مالی اعانت فراہم کی گئی۔
ادارہ جاتی جائزہ بورڈ کا بیان: کینگوون نیشنل یونیورسٹی (چنچون، کوریا) کے تجرباتی جانوروں کے مرکز میں جرابوں کی افزائش کی گئی۔ اس مطالعہ کے لیے، تجرباتی پروٹوکول (منظوری نمبر، KW-200113-1؛ منظوری کی تاریخ، 18 فروری 2020) ادارہ جاتی اینیمل کیئر اینڈ یوز کمیٹی کے ذریعے منظور کیا گیا تھا۔
تحقیقی پروٹوکول نیشنل اکیڈمی پریس (8th Ed., 2011) کے ذریعہ شائع کردہ لیبارٹری جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کے لئے رہنما کے "موجودہ بین الاقوامی قوانین اور پالیسیوں" میں تجویز کردہ رہنما خطوط پر عمل پیرا ہے۔
باخبر رضامندی کا بیان: قابل اطلاق نہیں ہے۔
ڈیٹا کی دستیابی کا بیان: اس مطالعے میں پیش کردہ ڈیٹا متعلقہ مصنف کی درخواست پر دستیاب ہے۔
اعترافات: مصنفین اس مطالعہ میں تکنیکی مدد کے لیے Hyun Sook Kim اور Seung Uk Lee کی تعریف کرتے ہیں۔
مفادات کا تصادم: مصنفین نے اعلان کیا ہے کہ مفادات کا کوئی مالی تصادم نہیں ہے۔
مخففات
CA1: ذیلی فیلڈ Cornu Ammonis 1; سی این ایس، مرکزی اعصابی نظام؛ CV، کریسائل وایلیٹ؛ ڈی جی، ڈینٹیٹ گائرس؛ ایف جے بی، فلورو جیڈ بی؛ HyT، ہائپوتھرمیا؛ NeuN، نیورونل نیوکللی؛ OXC، oxcarbazepine؛ PAT، غیر فعال ہونے کا ٹیسٹ؛ ROD، رشتہ دار آپٹیکل کثافت؛ SMA، اچانک موٹر سرگرمی؛ SO، سٹریٹم اورینز؛ SP، سٹریٹم اہرام؛ ایس آر، سٹریٹم ریڈیٹم؛ tFI، عارضی پیشانی اسکیمیا؛ TRPV1، ٹرانسینٹ ریسیپٹر ممکنہ وینیلائڈ قسم 1۔
حوالہ جات
1. بسٹو، آر. Dietrich, WD; گلوبس، MY؛ Valdes, I.; شینبرگ، پی. Ginsberg, MD انٹرا اسکیمک دماغی درجہ حرارت میں چھوٹے فرق اسکیمک نیورونل چوٹ کی حد کا تنقیدی طور پر تعین کرتے ہیں۔ جے سیریب خون کا بہاؤ میٹاب۔ 1987، 7، 729–738۔ [CrossRef][PubMed]
2. مہر، جے؛ Hachinski، V. ہائپوتھرمیا دماغی اسکیمیا کے ممکنہ علاج کے طور پر۔ Cerebrovasc. برین میٹاب۔ Rev. 1993، 5,277–300۔
3. نرس، S.؛ Corbett, D. نیورو پروٹیکشن کئی دنوں کے ہلکے، منشیات کی وجہ سے ہائپوتھرمیا کے بعد۔ جے سیریب خون کا بہاؤ میٹاب۔ 1996، 16,474–480۔ [کراس ریف]
4. فشر، ایم؛ فیورسٹین، جی؛ Howells, DW; ہورن، پی ڈی؛ کینٹ، ٹی اے؛ Savitz, SI; لو، ای ایچ؛ گروپ، S. اسٹروک تھراپی اکیڈمک انڈسٹری راؤنڈ ٹیبل پری کلینیکل سفارشات کی تازہ کاری۔ اسٹروک 2009، 40، 2244–2250۔ [کراس ریف]
5. لیو، ایل. یناری، ایم اے تھراپیٹک ہائپوتھرمیا: نیورو پروٹیکٹو میکانزم۔ سامنے والا۔ بائیوسی۔ 2007، 12، 816–825۔ [کراس ریف]
6. Lyden, PD; کریگر، ڈی۔ یناری، ایم. Dietrich، شدید فالج کے لیے WD علاج کا ہائپوتھرمیا۔ انٹر جے اسٹروک 2006، 1، 9-19۔ [CrossRef][PubMed]
7. کلاس مین، L. شدید اسٹروک میں علاج کا ہائپوتھرمیا۔ J. Neurosci. نرسیں 2011، 43، 94-103۔ [کراس ریف]
8. Groysman, LI; ایمانوئل، بی اے؛ کم ٹینسر، ایم اے؛ گایا، جی وائی؛ میک، ڈبلیو جے ایکیوٹ اسکیمک اسٹروک میں علاج کا ہائپوتھرمیا۔ نیوروسرگ۔ فوکس 2011، 30، E17۔ [کراس ریف] [پب میڈ]
9. شواب، ایس. Georgiadis, D.; Berrouschot، J.؛ شیلنگر، پی ڈی؛ Graffagnino، C.؛ مائر، SA بڑے پیمانے پر ہیمسفیرک انفکشن کے بعد اعتدال پسند ہائپوتھرمیا کی فزیبلٹی اور حفاظت۔ اسٹروک 2001، 32، 2033–2035۔ [کراس ریف]
10. Katz, LM; نوجوان، AS؛ فرینک، جے ای؛ وانگ، وائی؛ پارک، K. ریگولیٹڈ ہائپوتھرمیا ہائپوکسک اسکیمیا کے بعد دماغی آکسیڈیٹیو تناؤ کو کم کرتا ہے۔ دماغ ریس 2004، 1017، 85-91۔ [کراس ریف]
11. لیو، K.؛ خان، ایچ. گینگ، ایکس۔ ژانگ، جے؛ ڈنگ، وائی فارماکولوجیکل ہائپوتھرمیا: مستقبل میں فالج کے علاج کا امکان؟ نیورول. Res.2016, 38, 478–490۔ [کراس ریف]
12. ما، ج. وانگ، وائی؛ وانگ، زیڈ؛ لی، ایچ. وانگ، زیڈ؛ چن، جی. مرکزی اعصابی نظام کی بیماریوں میں منشیات کی حوصلہ افزائی کے علاج کے ہائپوتھرمیا کے نیورو پروٹیکٹو اثرات۔ کرر منشیات کے اہداف 2017، 18، 1392–1398۔ [کراس ریف]
13. Calabresi، P.؛ کپینی، ایل ایم؛ سینٹونز، ڈی. پسانی، ایف۔ برنارڈی، جی. ایک ممکنہ نیورو پروٹیکٹو حکمت عملی انبرین اسکیمیا کے طور پر اینٹی پیلیپٹک ادویات۔ این۔ نیورول. 2003، 53، 693–702۔ [کراس ریف]
14. تاناکا، ٹی. لیٹوفسکی، NS بچوں کی تکلیف دہ دماغی چوٹ میں مرگی کے خلاف ادویات۔ ماہر Rev. Neurother. 2016، 16، 1229–1234[کراس ریف]
For more information:1950477648nn@gmail.com
